Orientador: Jane Megid / Banca: Hélio Langoni / Banca: Avelino Albas / Resumo: Morcegos vêm recebendo crescente importância em Saúde Pública, pois são os principais reservatórios para a raiva em diversas partes do mundo. Pouco se conhece a respeito da distribuição do vírus rábico em tecidos e órgãos não nervosos. O objetivo deste estudo foi avaliar a distribuição do vírus rábico em órgãos e tecidos de quirópteros naturalmente infectados de diferentes hábitos alimentares, e avaliar a existência de alguma possível correlação com a filogenia das amostras. Foram utilizados 26 morcegos previamente diagnosticados positivos para raiva pelos métodos padrão, sendo coletado cérebro, glândulas salivares, pulmão, coração, fígado, baço, estômago, intestinos, rins, bexiga, gordura interescapular e fezes. As amostras foram submetidas à extração do material genético e submetidas à reação de RT-PCR com iniciadores específicos para o gene N. As amostras que resultaram negativas na primeira reação foram submetidas a uma segunda amplificação (hemi-nested PCR). Os produtos amplificados foram submetidos ao sequenciamento genético e as sequências alinhadas com sequências homólogas obtidas do GenBank para construção da árvore filogenética. Os resultados demonstraram uma ampla distribuição do vírus em órgãos e tecidos dos morcegos, não sendo possível correlacionar com a espécie e tão pouco com a linhagem viral encontrada. O maior percentual de positividade foi encontrado em cérebro e glândula salivar e a técnica de heminested PCR demonstrou ter maior sensibilidade na detecção do vírus rábico nas amostras estudadas. Na análise filogenética observou-se o agrupamento das amostras de acordo com as espécies, confirmando a existência de linhagens gênero específicas / Abstract: Bats have been assigned an increasing importance in Public Health as these are the main rabies reservoirs in many parts of the world. Little is known about the distribution of rabies virus in non-nervous tissues and organs. The aim of this study was to evaluate the distribution of rabies virus in organs and tissues of naturally infected bats with different feeding habits, and evaluate the existence of any possible correlation with the phylogeny of the samples. 26 bats previously diagnosed as positive for rabies by standard methods were used; the brain, salivary glands, lung, heart, liver, spleen, stomach, intestine, kidneys, urinary bladder, interscapular fat and feces were collected. The genetic material were extracted and submited to RT-PCR reaction with specific primers for the N gene. The samples that were negative in the first reaction underwent a second amplification (hemi-nested PCR). The amplified products were subjected to genetic sequencing and the sequences aligned with homologous sequences obtained from GenBank for phylogenetic tree construction. The results showed a wide distribution of virus in organs and tissues of bats, it was not possible to correlate the viral distribuition with the species nor with the viral strain found. The highest percentage of positivity was found in brain and salivary glands and the technique of heminested PCR demonstrated to have a greater sensitivity for detection of rabies virus in the studied samples. The phylogenetic analysis showed the clustering of samples according to the species, confirming the existence of genus specific lineages / Mestre

Rabies management can be described as successful only if examined through a human health perspective. Negating companion animal health outcomes in rabies management creates systemic failures as cats and dogs are significant within our society and bridge humans and wildlife in rabies transmission. A shifting pet ownership culture has created opportunities for increased rabies risk. This thesis applied the One Health concept to the rabies management system in an Ontario municipality. The One Health concept considers that the health of humans is inherently connected to the health of companion animals and their shared environment. A mixed methods design informed a visual conceptualization of the rabies management system. Factors influencing human and companion animal health outcomes were identified through multivariable logistic regression models. The human outcome of interest was the recommendation of rabies post-exposure prophylaxis after a potential rabies exposure by a companion animal; the companion animal outcomes were receiving a post-incident rabies vaccine, being euthanized for rabies testing and being placed under observation. Semi-structured interviews were conducted with private veterinarians to understand their perceived role in rabies management. Rabies management is more complex than linear interactions and processes that occur to protect human health. An explicit link between the human and companion animal health outcomes was found. Companion animal species appeared as an influential factor and indicates that ownership practices differ between cats and dogs. This implies that veterinarians are not effectively leveraged as the link between public health and pet owners. Indeed, veterinarian’s approach their rabies management roles based on their prioritization of the seriousness of rabies compared to the risk. Through the application of One Health thinking to the municipal rabies management system, it is clear that there is a public-private divide where mitigating human rabies exposures conflicts with the prevention of rabies in companion animals.

A raiva é uma zoonose causada pelo vírus da raiva (VR), um membro do gênero Lyssavirus da família Rhabdoviridae. Apesar do VR ser considerado antigenicamente estável, amostras com variações antigênicas têm sido detectadas. Na busca de identificar possíveis variantes circulantes no Brasil, um dos objetivos do presente estudo foi identificar as características antigênicas de amostras de vírus rábico circulantes nas regiões Centro-Oeste e Norte do Brasil. Para tanto, amostras do VR coletadas naquelas regiões, isoladas de diferentes hospedeiros, tiveram seu perfil antigênico avaliado por imunofluorescência indireta frente a um painel de anticorpos monoclonais preparados contra antígenos de lissavírus. Foram identificados três perfís antigenicamente distintos: um característico de amostras de origem de cães domésticos, outro de amostras de morcegos hematófagos e outro de amostras de morcegos não hematófagos. O segundo objetivo deste estudo consistiu em avaliar a estabilidade antigênica e a patogenia de amostras com tais perfís antigênicos distintos. Para atingir este objetivo, três amostras de VR com diferentes perfís antigênicos foram submetidas a vinte inoculações sucessivas em camundongos. Á medida em que as passagens eram realizadas, o perfil antigênico das mesmas era monitorado. Os resultados obtidos revelaram que todas as amostras mantiveram-se relativamente estáveis e todas as amostras ao longo as 20 inoculações mantiveram altamente patogenicas. Duas delas (a amostra com perfil antigênico de cães e a amostra com perfil antigênico de morcegos hematófagos) mantiveram-se antigenicamente estáveis ao longo de todas as 20 inoculações. Por outro lado a amostra com perfil antigênico usualmente detectado em morcegos não hematófagos apresentou uma modificação antigênica após a sétima passagem sucessiva. Isto pode indicar diferenças no grau de adaptação do vírus à espécie hospedeira natural. Sumarizando os resultados desses estudos, conclui-se que as variantes do VR circulantes nas regiões Norte e Centro-Oeste do Brasil possuem características antigênicas comuns a amostras cujos hospedeiros naturais são cães domésticos, morcegos hematófagos e morcegos não hematófagos. As variantes detectadas apresentam um elevado grau de estabilidade antigênica; a variante cujo hospedeiro natural são morcegos não hematófagos parece menos estável antigenicamente. Essa menor estabilidade antigênica poderia ter relação com o grau de adaptação à espécie hospedeira natural, hipótese que será examinada mais profundamente em estudos futuros. / Rabies is caused by rabies virus (RV), a member of the genus Lyssavirus within the family Rhabdoviridae. Despite the acknowledged antigenic stability of RV, variants have been identified. In search for RV variants circulating in Brazil, one of the objectives of the present study was to identify the antigenic profile of RV isolates from different natural host species in North and Central West regions of Brazil. The isolates had its antigenic profiles determined by indirect immunofluorescence with a panel of monoclonal antibodies prepared to lyssavirus antigens. Three distinct antigenic profiles were detected: one characteristic of isolates from domestic dogs, another in isolates from vampire bats and another in non haematophagous bats. A second aim of the present study was to evaluate the degree of antigenic stability and patogeny of RV isolates with such distinct antigenic profiles. For that, three RV isolates were submitted to twenty successive inoculations in mice and periodically monitored in search for antigenic alterations. The results obtained revealed that in fact the three isolates were quite stable antigenically and all strains after 20 consecutive inoculations maintained higly patogenics. Two of the viruses (dog and vampire bat profiles) remained antigenically stable throughout the twenty successive passages in mice. On the other hand, the isolate with an antigenic profile commonly found in non haematophagous bat viruses revealed an antigenic modification after the seventh passage in mice. This could be indicative of differences in the degree of adaptation of the isolate to its natural host species. Summarizing the results of theses studies, it was concluded that RV variants circulating in the Centre-West and North regions of Brazil display antigenic profiles common to those usually detected in isolates whose natural hosts are domestic dogs, haematophagous and non hematophagous bats. Such variants display a relatively high degree of antigenic stability; however, the variant whose natural hosts are non haematophagous bats seem less antigenically stable. Such lesser degree of antigenic stability might be related to the degree of adaptation of the virus to its natural host species. Such hypothesis shall be examined more deeply in future studies.

Esta tese compreende estudos sobre diagnóstico, caracterização antigênica e molecular de amostras do vírus da raiva e sobre o desenvolvimento de testes sorológicos para detecção de anticorpos contra o vírus rábico. O primeiro capítulo descreve dois casos de raiva no Estado do Rio Grande do Sul (RS). O primeiro trabalho do primeiro capítulo descreve a ocorrência de raiva em um canino no município de Tapes, leste do RS. Após a confirmação do diagnóstico, a amostra de vírus isolada foi submetida à caracterização antigênica e molecular. Tal amostra apresentava características compatíveis com amostras de vírus rábico isoladas de morcegos insetívoros Tadarida brasiliensis. Portanto, o primeiro caso de raiva canina no RS após 19 anos, ocorreu devido a um contato incidental entre um morcego não hematófago e o canino infectado. Assim, o status de região livre de raiva urbana pode ser mantido no Estado. O segundo trabalho do primeiro capítulo descreve a primeira ocorrência no RS de raiva em morcegos frugívoros da espécie Artibeus lituratus. Neste caso, a amostra isolada apresentou características de amostras isoladas de morcegos hematófagos Desmodus rotundus. A identificação de vírus rábico em um morcego frugívoro, com tal perfil, não representa fato novo na história recente da raiva, mas a descrição deste caso ilustra que a raiva em morcegos frugívoros no RS apresenta características semelhantes à raiva em morcegos frugívoros de outras regiões do Brasil e sugere que o mesmo foi contaminado devido ao contato com morcegos hematófagos. Com o objetivo de permitir o monitoramento sorológico da raiva em morcegos e a identificar novos potenciais reservatórios do vírus, no segundo capítulo desta tese é reportado o desenvolvimento de dois testes sorológicos para a detecção de anticorpos contra raiva. O primeiro teste desenvolvido é a inibição da imunoperoxidase (“immunoperoxidase inhibition assay”; IIA), que foi testada frente a 422 amostras de soros humanos. A IIA foi muito eficiente, tendo demonstrado uma acurácia de 97.63%. Esta técnica provavelmente poderá ser utilizada para detecção de anticorpos contra raiva em outras espécies, embora no presente estudo tenha sido avaliada apenas com soros humanos. Com o objetivo de pesquisar anticorpos contra raiva em diferentes espécies animais utilizando pequenos volumes de soro foi desenvolvido um ensaio imunoenzimático do tipo “sandwich” (“sandwich enzyme linked immunosorbent assay”; S-ELISA). O S-ELISA foi inicialmente comparado com um teste padrão FAVN (Fluorescent Antibody Vírus Neutralization test) e a seguir empregado na pesquisa de anticorpos em soros de diferentes espécies, incluindo morcegos, sagüis, raposas, felinos silvestres, guaxinis, quatis, bovinos, camundongos e humanos. Os resultados mostraram que o S-ELISA foi eficiente na detecção de anticorpos contra o vírus da raiva em diferentes espécies, com uma acurácia de 87,5%. A caracterização de amostras de vírus rábico em situações epidemiológicas específicas, assim como o desenvolvimento de testes sorológicos a fim de identificar anticorpos em distintas espécies e identificar novos possíveis reservatórios para raiva, contribuirão para o maior conhecimento da biologia da raiva na natureza, particularmente em nosso Estado, possibilitando assim a tomada de medidas de controle mais adequadas. / This thesis describes studies about diagnosis, antigenic and molecular characterization of rabies vírus strains and about serological assays development for antibodies against rabies virus detection. The first chapter describes two cases of rabies in State of Rio Grande do Sul (RS). This first work of the first chapter on this thesis, describes the canine rabies in Municipality of Tapes, east of RS. After the diagnosis confirmation, the rabies virus strain was submitted to antigenic and molecular characterization. The sample shown similar characteritics with rabies vírus isolates from insectivorous bats Tadarida brasiliensis. Thus, the first canine rabies in RS after 19 years occurred by an incidental contact between the contamined canine and a non-haematophagous bat. In view of that, the status of urban rabies free of the area should not be compromised. The second work of first chapter describes the first occurrence in RS of rabies in frugivorous bats Artibeus lituratus. In this case, the isolated sample shown characteristics similar to characteristics from haematophagous bats Desmodus rotundus. The rabies virus identification in a frugivorous bat with this profile, does not represent a new fact in the recent history of rabies, but the description of this case illustrates that the rabies in frugivorous bats in RS has similar characteristics to rabies in frugivorous bats in other regions of Brazil and suggests that it was contamined due to contact with haematophagous bats. With the purpose to allow the serological monitoring of rabies in bats and identify new potential reservoirs of the virus, in the second chapter of this thesis is reported the development of two serological tests for detection of antibodies against rabies. The first developed assay is the immunoperoxidase inhibition assay (IIA), that was tested with 422 sera from humans. The IIA was very efficient, with 97.63% of accuracy. This assay probably can be used to antibodies detection against rabies in other species, in despite of the present study, it was tested only with sera from humans. With the aim to research rabies antibodies in different animal species with small volume of serum, was developed the sandwich enzyme linked immunosorbent assay (S-ELISA). The S-ELISA was initially compared with the gold standard test Fluorescent Antibody Vírus Neutralization test and after used to search antibodies in sera from different species including bats, marmosets, foxes, wild felines, raccoons, coatis, bovines, mices and humans. The S-ELISA was efficient to detect antibodies in different species with 87.5% of accuracy. The characterization of rabies virus strains in specific epidemiological situations as well as the serological assays development to identify antibodies in distinct species and identify new potential rabies reservoirs for rabies, contribute to greater understanding of the biology of rabies in nature, particularly in our State, allowing the taking of appropriate control measures.

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-16T16:34:37Z No. of bitstreams: 1 wildeberg-cal-moreira.pdf: 1128821 bytes, checksum: 05dce2fa3886736bf15fae4e553ccc25 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-16T16:34:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 wildeberg-cal-moreira.pdf: 1128821 bytes, checksum: 05dce2fa3886736bf15fae4e553ccc25 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A Raiva é uma zoonose transmitida ao homem pela inoculação do vírus da Raiva principalmente pela mordedura de animais infectadose, mais raramente, pela arranhadura e lambedura de mucosas e/ou pele lesada. Apresenta letalidade de 100% e alto custo na prevenção de pessoas expostas ao risco de adoecer e morrer. No Brasil, os transmissores mais importantes são o cão e o gato, em áreas urbanas, e os morcegos que mantêm o ciclo silvestre da doença. Estimativas revelam que uma pessoa morre de Raiva a cada 15 minutos, mais de 300 outras são expostas e 4 milhões recebem tratamento em todo mundo.Em 2005, o Ministério da Saúde gastou cerca de R$ 66,4 milhões com as ações de vigilância epidemiológica contra a Raiva. Tais recursos foram empregados para medidas como a realização de campanhas de vacinação e a aquisição de imunobiológicos. No período entre 2000 e 2006, 4.918 indivíduos vacinados tiveram amostras de soro examinadas pela Contraimunoeletroforese (CIE). De 5.502 soros analisados, 2.099 (38 %) apresentaram resposta insatisfatória à profilaxia realizada. Noventa e um soros, obtidos de 34 indivíduos que haviam recebido mais de um esquema profilático contra a Raiva foram selecionados para a titulação pela Rápida Inibição de Focos Fluorescentes (RIFF), utilizando dois conjugados: um produzido in housee outro comercial (padrão ouro). Setenta e quatro soros (82,22%) apresentaram título protetor (≥0,5UI/mL) e 12 soros (13,33%) título não-protetor (<0,5UI/mL) quando testados pela técnica de RIFF. Os títulos de anticorpos, com o conjugado comercial e o conjugado in house, foram altamente correlacionados (r= 0,94). Assim,não houve diferença significativa entre os resultados obtidos com a titulação dos soros analisados para ambos os conjugados. O tipo de vacina, o número de doses de vacina e o intervalo entre o início do tratamento eo momento da coleta do sangue foram significativos sobre o título de anticorpos. A RIFF, usando o conjugado produzido in house, apresentou sensibilidade de 96% e especificidade de 92%, ao ser comparada com a RIFF usando o conjugado comercial. A sensibilidade da CIE foi 24 %, com 93% de especificidade em relação a RIFF, usando o conjugado in house. Com o conjugado comercial, a relação entre a CIE e a RIFF foi 25% para a sensibilidade e 100% para a especificidade. As diferenças entre os dois conjugados não foram significativas. / Rabies is a zoonotic disease transmitted to man through rabies virus inoculation, mainly via animal bite and, most rarely, through scratches or licks on mucous membrane and/or broken skin. The disease is 100% lethal and leads to high expenditure with preventive treatment of people exposed to the risk of becoming sick and dieing of rabies. In Brazil, the main responsibles for rabies transmition are dogs and cats in urban areas, and bats, which are responsable for the wild cicle of the disease. Published data indicate that one person dies from rabies each 15 minutes, more than 300 others are exposed and 4 million people are treated in the whole world. In 2005, Ministry of Health spent about R$ 66.4 million with epidemiologic surveillance of rabies. Such amount was invested insteps like vaccination campaigns and purchase of immunobiological products. From 2000 to 2006, 4,918 people had their serum samples examined by counterimmunoelectrophoresis (CIE) test. Of the 5,502 sera tested, 2,099 (38%) showed unsatisfactory response to the antirabies prophylactic treatment. Of these, 91 serum samples from 34 people treated with more than one antirabies prophylactic treatment were selected and examined by the Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT) using an in house produced antirabies conjugate (IHC) and a commercial antirabies conjugate (CAC) as the gold standard. Seventy four sera (82.22%) exhibited protective titers (≥0.5 UI/mL) and 12 (13.33%) had no protective titers (< 0.5 UI/mL) when tested by RFFIT. Antibody titers obtained using CAC and IHC were in strong correlation (r=0.94), with no significant difference between the results of the sera examinedwith both conjugates. The type of vaccine, the number of doses of vaccine and the interval between the beginning of the vaccination and blood sample collection significantly influenced the antibody titers. RFFIT using the IHC presented sensitivity and specificity equal to 96% and 92%, respectively, when compared to RFFIT using theCAC. CIE sensitivity was 24% while its specificity was equal to 93% when compared to RFFIT using the IHC; when compared to RFFIT using the CAC, CIE sensitivity was 25% and specificity

Orientadora: Profª Drª Helena Beatriz de Carvalho Ruthner Batista / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2017. / Apesar de ser uma das doenças mais antigas que se tem registro a raiva ainda é um desafio para a Saúde Pública. Esta zoonose acomete o sistema nervoso central (SNC) de todos os mamíferos sendo considerada fatal, porém foram registrados casos de cura no mundo que impulsionaram pesquisas na busca por potenciais mecanismos antivirais que atuem contra o vírus da raiva (RABV). O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito antiviral do extrato vegetal hidroetanólico derivado de Dalbergia variabilis contra diferentes linhagens do RABV. Inicialmente, foi determinada a concentração máxima tolerada (CMT) do extrato vegetal em células de neuroblastoma de murino (N2a), sendo 1,56 mg/ml identificada como CMT. A atividade antiviral do extrato vegetal derivado da Dalbergia variabilis foi avaliada pela diferença no título viral infeccioso expresso em doses infectantes em 50% do cultivo celular (DICC50), na presença e na ausência do extrato frente a quatro amostras de RABV (IP4005 - amostra de RABV com linhagem genética característica de morcego hematófago Desmodus rotundus, IP964 - amostra de RABV com linhagem genética característica de morcego insetívoro Eptesicus furinalis, IP4871 - amostra de RABV com linhagem genética característica de cachorro do mato Cerdocyon thous e amostra padrão do vírus da raiva "Pasteur vírus" - PV). Uma vez que houve diferença no título viral infeccioso entre as amostras de RABV analisadas na presença e na ausência do extrato vegetal, foram realizados experimentos subsequentes a fim de compreender melhor a forma de atuação deste extrato vegetal frente ao RABV. Foi possível identificar ação antiviral do extrato vegetal derivado de Dalbergia variabilis frente a amostras de RABV analisadas, através dos resultados obtidos, sendo que a interferência na replicação viral foi mais significativa frente a amostras de RABV com linhagem genética de morcegos. / Despite its status as one of the oldest registered diseases, rabies remains a public health challenge. This zoonosis affects the central nervous system (CNS) of all mammals and is usually considered fatal. However, some cases in which the disease was reportedly cured have been registered worldwide, leading to renewed interest in researching potential antiviral mechanisms against the rabies virus (RABV). The aim of this work was to evaluate the antiviral activity of the hydroethanolic plant extract Dalbergia variabilis against different genetic lineages of RABV. In the first step, the maximum tolerated concentration (MTC) of plant extract in murine neuroblastoma cells (N2a) was determined to be 1.56 mg/ml. The antiviral activity of plant extract Dalbergia variabilis was evaluated to determine the difference presence and absence of the plant extract in four samples of RABV (IP4005- sample of RABV with the genetic lineage characteristic of haematophagous bat, Desmodus rotundus; IP964- sample of RABV with the genetic lineage characteristic of insectivorous bat, Eptesicus furinalis; IP4871- sample of RABV with the genetic lineage characteristic of wild dog, Cerdocyon thous; and a standard sample of RABV, "Pasteur vírus" - PV). Since there was a difference in the infectious viral titer between the RABV samples analysed in the presence of the plant extract, subsequent experiments were carried out to better understand the performance of this plant extract against RABV. The antiviral activity of plant extract Dalbergia variabilis against samples of RABV was analysed, and the interference in viral replication was more significant against samples of RABV with genetic lineage characteristic of bats.

Orientadora: Profa. Dra. Helena Beatriz de Carvalho Ruthner Batista / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2016. / A raiva é uma zoonose que atinge todos os mamíferos e ocasiona encefalite fatal. O agente etiológico da infecção é o vírus da raiva (RABV), um vírus RNA membro da família Rhabdoviridae, gênero Lyssavirus. Morcegos e cães são os principais reservatórios do vírus na América Latina e são responsáveis pela manutenção de diferentes ciclos da infecção, denominados ciclos "aéreo, silvestre e rural", onde os morcegos são os maiores protagonistas, e o ciclo urbano, onde os cães domésticos são os principais reservatórios. Nos estados do Rio Grande do Sul (RS) e Santa Catarina (SC), sul do Brasil, a raiva em cães domésticos tem sido controlada por mais de 20 anos. A raiva rural, porém, ainda é endêmica e os bovinos têm sido acometidos de forma frequente com oscilações periódicas em ambos estados. Apesar do aumento nos estudos sobre análises genéticas de isolados brasileiros do RABV, vírus do sul do Brasil têm sido pouco estudados. Este trabalho foi realizado para identificar linhagens genéticas de RABV que circulam nos estados do RS e SC, a fim de contribuir no entendimento das razões para perpetuação da raiva rural na região. Foram selecionadas 50 amostras isoladas de bovinos no RS e 9 em SC e submetidas a Transcrição Reversa seguida da Reação em Cadeia pela Polimerase (RT-PCR) e sequenciamento genético da nucleoproteína do RABV. Foi possível identificar, no RS, a circulação de duas sublinhagens (1A e 1B) de RABV, ambas com características semelhantes a linhagem genética de morcegos hematófagos Desmodus rotundus. Em SC foi identificada apenas uma sublinhagem de RABV (1B). Não foram identificados marcadores genéticos específicos que possam ser relacionados com a distribuição geográfica dos vírus. / Rabies is a zoonosis that affects all mammals and causes fatal encephalitis. The etiological agent of the infection is rabies vírus (RABV), a RNA virus member of the family Rhabdoviridae, genus Lyssavirus. Bats and dogs are the main reservoirs of the virus in Latin America and are responsible for the maintenance of the different cycles of infection, namely the "aerial, sylvatic and rural" cycles, where bats are major protagonists, and the urban cycle, where domestic dogs are main reservoirs. In the states of Rio Grande do Sul (RS), and Santa Catarina (SC), Southern Brazil, rabies in domestic dogs has been successfully controlled for more than 20 years. However, rural rabies is still endemic; in cattle has been prone to periodic oscillations in frequency in both states. Despite the plethora of studies on genetic analyses of Brazilian RABV isolates, viruses from Southern Brazil have only scarcely been investigated. This work was performed to identify genetic lineages of RABV circulating in states of RS and SC, in attempting to contribute to the understanding of the reasons for perpetuation of rabies in the region. Fifty RABV cattle isolates from RS and 9 from SC were selected and submitted to Reverse Transcriptase and Polimerase Chain Reaction (RT-PCR) and genetic sequencing of nucleoprotein of RABV. In RS, the circulation of two sublineages (1A and 1B) of RABV could be identified, both with characteristics of genetic lineages of viruses usually detected in haematophagous bats of the species Desmodus rotundus. In SC, only one sublineages of RABV (1B) was identified. No specific genetic markers that could be related to the viruses¿ geographical distribution were identified.

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-05Bitstream added on 2014-11-10T11:58:47Z : No. of bitstreams: 1 000790335.pdf: 823197 bytes, checksum: 0a61fc4013025a91cf7b4b1a5eb4a447 (MD5) / A raiva é uma zoonose, que se caracteriza como uma encefalite aguda e letal. Atualmente, sabe-se que o vírus da raiva possui vários ciclos epidemiológicos e diversos animais podem servir como seus reservatórios, perpetuando-o no ciclo silvestre e urbano. Esse estudo teve como objetivo avaliar a prevalência de anticorpos neutralizantes (AN) contra a raiva no soro de gambás das espécies Didelphis albiventris e Didelphis aurita por meio da técnica de soroneutralização (Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test - RFFIT). A pesquisa foi conduzida nas cidades de Anhembi, Torre de Pedra e Bofete, localizadas no centro oeste de São Paulo. Soro de 67 animais, a maioria do sexo masculino e na idade adulta, foram avaliados. A positividade para anticorpos neutralizantes antirábicos foi de 17,9%. Esse resultado evidencia a circulação do vírus da raiva em gambás e serve de alerta tanto à comunidade científica quanto às autoridades governamentais envolvidas nas pesquisas e controle da raiva / Rabies is a zoonotic disease, which is characterized as an acute and lethal encephalitis. Currently, it is known that rabies virus has several cycles and several epidemiological animals may serve as reservoirs of the virus perpetuating it in wild and urban cycle. This study aimed to evaluate the presence of antirabies neutralizing antibodies (NA) in the serum of the opossum Didelphis albiventris e Didelphis aurita by means of a virus neutralizing (Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test - RFFIT). The survey was conducted in the cities of Anhembi, Torre de Pedra and Bofete, located in the center west of São Paulo. Sera from 67 animals were examined, most males in adulthood. The percentage of animals that presented neutralizing antibodies was 17.9%. This result shows the circulation of the rabies virus in skunks and serves to alert both the scientific community and government authorities involved in the research and rabies control

Esta tese compreende estudos sobre diagnóstico, caracterização antigênica e molecular de amostras do vírus da raiva e sobre o desenvolvimento de testes sorológicos para detecção de anticorpos contra o vírus rábico. O primeiro capítulo descreve dois casos de raiva no Estado do Rio Grande do Sul (RS). O primeiro trabalho do primeiro capítulo descreve a ocorrência de raiva em um canino no município de Tapes, leste do RS. Após a confirmação do diagnóstico, a amostra de vírus isolada foi submetida à caracterização antigênica e molecular. Tal amostra apresentava características compatíveis com amostras de vírus rábico isoladas de morcegos insetívoros Tadarida brasiliensis. Portanto, o primeiro caso de raiva canina no RS após 19 anos, ocorreu devido a um contato incidental entre um morcego não hematófago e o canino infectado. Assim, o status de região livre de raiva urbana pode ser mantido no Estado. O segundo trabalho do primeiro capítulo descreve a primeira ocorrência no RS de raiva em morcegos frugívoros da espécie Artibeus lituratus. Neste caso, a amostra isolada apresentou características de amostras isoladas de morcegos hematófagos Desmodus rotundus. A identificação de vírus rábico em um morcego frugívoro, com tal perfil, não representa fato novo na história recente da raiva, mas a descrição deste caso ilustra que a raiva em morcegos frugívoros no RS apresenta características semelhantes à raiva em morcegos frugívoros de outras regiões do Brasil e sugere que o mesmo foi contaminado devido ao contato com morcegos hematófagos. Com o objetivo de permitir o monitoramento sorológico da raiva em morcegos e a identificar novos potenciais reservatórios do vírus, no segundo capítulo desta tese é reportado o desenvolvimento de dois testes sorológicos para a detecção de anticorpos contra raiva. O primeiro teste desenvolvido é a inibição da imunoperoxidase (“immunoperoxidase inhibition assay”; IIA), que foi testada frente a 422 amostras de soros humanos. A IIA foi muito eficiente, tendo demonstrado uma acurácia de 97.63%. Esta técnica provavelmente poderá ser utilizada para detecção de anticorpos contra raiva em outras espécies, embora no presente estudo tenha sido avaliada apenas com soros humanos. Com o objetivo de pesquisar anticorpos contra raiva em diferentes espécies animais utilizando pequenos volumes de soro foi desenvolvido um ensaio imunoenzimático do tipo “sandwich” (“sandwich enzyme linked immunosorbent assay”; S-ELISA). O S-ELISA foi inicialmente comparado com um teste padrão FAVN (Fluorescent Antibody Vírus Neutralization test) e a seguir empregado na pesquisa de anticorpos em soros de diferentes espécies, incluindo morcegos, sagüis, raposas, felinos silvestres, guaxinis, quatis, bovinos, camundongos e humanos. Os resultados mostraram que o S-ELISA foi eficiente na detecção de anticorpos contra o vírus da raiva em diferentes espécies, com uma acurácia de 87,5%. A caracterização de amostras de vírus rábico em situações epidemiológicas específicas, assim como o desenvolvimento de testes sorológicos a fim de identificar anticorpos em distintas espécies e identificar novos possíveis reservatórios para raiva, contribuirão para o maior conhecimento da biologia da raiva na natureza, particularmente em nosso Estado, possibilitando assim a tomada de medidas de controle mais adequadas. / This thesis describes studies about diagnosis, antigenic and molecular characterization of rabies vírus strains and about serological assays development for antibodies against rabies virus detection. The first chapter describes two cases of rabies in State of Rio Grande do Sul (RS). This first work of the first chapter on this thesis, describes the canine rabies in Municipality of Tapes, east of RS. After the diagnosis confirmation, the rabies virus strain was submitted to antigenic and molecular characterization. The sample shown similar characteritics with rabies vírus isolates from insectivorous bats Tadarida brasiliensis. Thus, the first canine rabies in RS after 19 years occurred by an incidental contact between the contamined canine and a non-haematophagous bat. In view of that, the status of urban rabies free of the area should not be compromised. The second work of first chapter describes the first occurrence in RS of rabies in frugivorous bats Artibeus lituratus. In this case, the isolated sample shown characteristics similar to characteristics from haematophagous bats Desmodus rotundus. The rabies virus identification in a frugivorous bat with this profile, does not represent a new fact in the recent history of rabies, but the description of this case illustrates that the rabies in frugivorous bats in RS has similar characteristics to rabies in frugivorous bats in other regions of Brazil and suggests that it was contamined due to contact with haematophagous bats. With the purpose to allow the serological monitoring of rabies in bats and identify new potential reservoirs of the virus, in the second chapter of this thesis is reported the development of two serological tests for detection of antibodies against rabies. The first developed assay is the immunoperoxidase inhibition assay (IIA), that was tested with 422 sera from humans. The IIA was very efficient, with 97.63% of accuracy. This assay probably can be used to antibodies detection against rabies in other species, in despite of the present study, it was tested only with sera from humans. With the aim to research rabies antibodies in different animal species with small volume of serum, was developed the sandwich enzyme linked immunosorbent assay (S-ELISA). The S-ELISA was initially compared with the gold standard test Fluorescent Antibody Vírus Neutralization test and after used to search antibodies in sera from different species including bats, marmosets, foxes, wild felines, raccoons, coatis, bovines, mices and humans. The S-ELISA was efficient to detect antibodies in different species with 87.5% of accuracy. The characterization of rabies virus strains in specific epidemiological situations as well as the serological assays development to identify antibodies in distinct species and identify new potential rabies reservoirs for rabies, contribute to greater understanding of the biology of rabies in nature, particularly in our State, allowing the taking of appropriate control measures.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-18Bitstream added on 2014-06-13T18:07:09Z : No. of bitstreams: 1 lages_sls_me_jabo.pdf: 1020291 bytes, checksum: 6d5302e47c3470389d0765423667f9f1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A intensa convivência entre o ser humano e os animais de estimação não tem sido acompanhada pela adoção de posturas de posse responsável. Dentre os animais de estimação, cães e gatos são geralmente os de eleição, estando presentes em grande contingente dos lares. Ações educativas que alertem e conscientizem sobre zoonoses e sobre a responsabilidade de possuir animais são fundamentais na mitigação dos problemas de saúde pública; porém, antes da realização de qualquer programa, é imprescindível o conhecimento da realidade local. O presente estudo foi idealizado com o propósito de avaliar a população de cães e gatos, e o nível de conhecimento e comportamento sobre a raiva e posse responsável de animais de estimação, em bairros de níveis socioeconômicos contrastantes da cidade de Jaboticabal, Estado de São Paulo. De setembro a novembro de 2007 foram entrevistados 185 moradores dos bairros Jardim Patriarca, Jardim Paulista e Jardim Santa Rosa, e 197 moradores do bairro Nova Jaboticabal, totalizando 382 entrevistas. Para análise dos dados foram empregados o teste Qui-quadrado e a Análise de Correspondência Múltipla. Apesar do contraste socioeconômico, o nível de conhecimento dos entrevistados sobre posse responsável e raiva animal foi semelhante em todos os bairros estudados; entretanto, o melhor poder aquisitivo favoreceu maiores gastos com serviços veterinários, como atendimento médico e vacinações, e maior número de animais por residência. As informações obtidas respaldam a necessidade de realizar trabalhos educativos constantes sobre posse responsável e prevenção de agravos em toda a cidade, além do estabelecimento de um canal de comunicação entre veterinários e o governo municipal. / The intense interactions between people and pets have not been accompanied by responsible ownership practices over the years. Dogs and cats are the pets of choice, and they are found in great amount of homes. It is crucial to put into practice educative actions on zoonoses and on responsibility of owning animals to mitigate public health-related problems. However, before their effectuation, it is necessary to assess the local reality. The present study aimed to assess owned-dogs and cats populations and to evaluate the level of knowledge of responsible pet ownership and rabies among residents of socially and economically contradictory neighborhoods of the city of Jaboticabal, State of São Paulo. From September to November, 2007, 185 residents of Jardim Patriarca, Jardim Paulista and Jardim Santa Rosa neighborhoods and 197 residents of Nova Jaboticabal were interviewed, giving a total of 382 interviews. Chi-square test and Multiple Correspondence Analysis were used for data analysis. Despite socioeconomic contradiction, the level of knowledge was similar. However, better levels of income favored greater expenses with veterinary care services, including vaccinations, and a greater amount of pets per household. Results recommend the need for constant educational actions on responsible pet ownership and injury prevention for all social classes of Jaboticabal, besides the establishment of a communication channel between private veterinarians and local government.