A raiva é uma doença do sistema nervoso central que é quase invariavelmente fatal. Apesar de causar cerca de 60.000 mortes/ano, a raiva ainda permanece uma doença negligenciada na maioria dos países, principalmente naqueles em desenvolvimento. O objetivo do nosso estudo foi verificar nos microambientes meningeal, perivascular e intraparenquimatoso do sistema nervoso central, o processo inflamatório, a resposta imune do hospedeiro e a morte dos neurônios frente à infecção rábica transmitida por morcegos. Verificamos que a raiva humana transmitida por morcegos é uma meningoencefalomielite. Através de reação imuno-histoquímica caracterizamos e quantificamos in situ a distribuição do antígeno viral, o fenótipo de células inflamatórias, as células expressando citocinas pró inflamatórias, citocinas representativas de padrão Th1 e Th2 e células em apoptose. O antígeno viral foi encontrado difusamente no parênquima cerebral, em maior abundância em neurônios, não diferindo sua distribuição em relação as regiões cerebrais. As células da glia, em especial os astrócitos, estavam imunomarcadas com o antígeno da raiva, assim como as células endoteliais e células mononucleadas da luz vascular. Esses achados contribuíram para a hipótese da ocorrência de uma via hematogênica alternativa de disseminação viral, através da infecção de células endoteliais pelo vírus, posterior infecção de astrócitos e finalmente infecção de neurônios. A expressão significativa de IL-12 nos pacientes rábicos provavelmente traduz imunidade de base preservada. Identificamos, outrossim, falta de resposta efetiva das células NK e comprometimento da resposta imune adaptativa seqüencial, demonstrada pela depleção de linfócitos TCD4+ no parênquima cerebral, prejuízo da atividade citotóxica dos linfócitos TCD8+ com proporcionalmente baixa expressão de granzima e expressão rarefeita de IFN-g e IL-2r. Essa situação deve ser reflexo da manipulação do vírus sobre a resposta imune inata e adaptativa do hospedeiro tendo como conseqüência uma reposta ineficaz para clareamento do vírus. A expressão aumentada de citocinas pró-inflamatórias (IL-1b, IL-6 e TNF-a) contribuiu para o dano neuronal. O padrão citocínico predominante no sistema nervoso central na raiva foi o Th2, com alta expressão de IL-4 e IL-10. O TGF-b aumentado nos casos de raiva favorece um ambiente imunossupressor para manter intacta a rede neuronal, mas também contribui para permanência local do vírus. A verificação de grau pouco acentuado de neurônios apoptóticos em contraposição a apoptose expressiva de linfócitos TCD4+ e TCD8+, indicaria a utilização pelo vírus de mecanismos ora anti-apoptóticos para preservar neurônios e favorecer a disseminação viral, ora pró-apoptóticos, destruindo linfócitos e atenuando o processo inflamatório. Em síntese, o envolvimento do sistema nervoso central em decorrência da raiva se faz às custas de processo inflamatório com predomínio local de linfócitos TCD8+, um padrão Th2 de expressão de citocinas, acometendo os microambientes meningeal, perivascular e intraparenquimatoso, sendo o bulbo a região mais afetada pelo processo. / Viral disease of central nervous system almost invariable fatal, rabies causes about 60.000 deaths yearly, and still remain a neglected disease in most countries, specially in developing ones. We study the meningeal, perivascular and parenquimal environment in central nervous system from patients who dies after bat transmitted rabies, looking for the inflammatory process, host immune response and neuronal death. We show that human rabies transmitted by bats is a meningoencephalomyelitis. Immunohistochemistry allows the in situ quantification of viral antigen distribution, inflammatory cellular phenotype, expression of cytokines representing both Th1 and Th2 profile and pro-inflammatory and cell apoptosis. Viral antigen was found disseminatted in cerebral parenquima, more abundant in neurons, without cerebral area preference. Glial cells, specially astrocytes, were immunostained with rabies antigen, as well as endothelial and vascular mononuclear cells. These findings contributed for an alternative hypothesis of the occurrence of hematogenic viral dissemination, through viral infection or passage by endothelial cells, followed by astrocyte infection, and finally reaching neurons. IL-12 significant expression in central nervous system from rabies patients probably reflect preservation of immunity. The lack of effective NK cells could compromise adaptive immune response, demonstred by TCD4+ lymphocytes depletion in cerebral parenquima, ineffective TCD8+ cytotoxic activity with low granzyme expression and low expression of IFN-g and IL-2r. This situation reflects viral effect on host innate and adaptive immune response leading to an ineffective response for viral clearance. High pro-inflammatory cytokine expression, IL- 1b, IL-6 and TNF-a, contribute for neuronal damage, with predominant Th2 cytokine profile in central nervous system in rabies patients, with high expression of IL-4 and IL-10. Increased TGF-b expression also shows an immune suppressor environment, which maintains the neuronal network intact, but also contributes for viral permanence. The low degree of apoptotic neurons opposed with expressive apoptosis of TCD4+ and TCD8+ lymphocytes, could indicate viral mechanisms anti-apoptotic for neurons preservation and favour viral dissemination, or pro-apoptotic, destroying lymphocytes and attenuating the inflammatory process. In synthesis, the involvement of central nervous system in rabies is consequence of inflammatory process with TCD8+ lymphocytes predominance, Th2 profile cytokines expression, affecting all brain compartments and areas, especially the medulla oblongata.

A raiva dos bovinos permanece endêmica no Brasil e apesar dos esforços no controle, a doença ainda se espalha insidiosamente. O principal transmissor é o morcego hematófago Desmodus rotundus. O presente trabalho objetivou o desenvolvimento de um modelo preditivo qualitativo para a ocorrência da raiva de bovinos, por município, em 25 dos 27 Estados brasileiros. O risco de transmissão de raiva de morcegos hematófagos para bovinos foi estimado utilizando modelos baseados em árvores decisórias de receptividade e vulnerabilidade. Questionários abrangendo questões relacionadas à vigilância de possíveis fatores de risco, como focos em bovinos, presença de abrigos de morcegos, morcegos positivos para ao vírus da raiva e mudanças ambientais foram aplicados às unidades locais veterinárias de cada Estado. A densidade de bovinos e as características geomorfológicas foram obtidas através de bases de dados nacionais e sistemas de informação geográfica. Dos 433 municípios que apresentaram focos de raiva bovina em 2010, 178 (41.1%) foram classificados pelo modelo como de alto risco, 212 (49.0%) foram classificados como de risco moderado, 25 (5.8%) com baixo risco, enquanto o risco não pode ser determinado em 18 (4.1%) municípios. Uma curva ROC foi desenvolvida para determinar se o risco avaliado pelo modelo poderia discriminar adequadamente os municípios em relação à ocorrência de raiva nos anos seguintes. O estimador de risco para os anos de 2011 e 2012 foi classificado como moderadamente acurado. No futuro, estes modelos poderão permitir o direcionamento de esforços no controle da raiva, com a adoção de medidas de controle direcionadas para áreas de maior risco e a otimização do deslocamento das equipes veterinários de campo pelo território nacional. Adicionalmente, esforços deve ser realizados para encorajar uma vigilância contínua dos fatores de risco. / Bovine rabies remains endemic in Brazil and despite control efforts, the disease still spreads insidiously. The main vector is the hematophagous bat, Desmodus rotundus. The present work aimed to create a predictive qualitative model of the occurrence of bovine rabies in each municipality in 25 of the 27 Brazilian States. The risk of rabies transmission from bats to bovine was estimated using decision-tree models of receptivity and vulnerability. Questionnaires, which covered a number of questions related to the surveillance of possible risk factors, such as bovine rabies outbreaks in the previous year, presence of bat roosts, bat rabies positivity and environmental changes, were sent to the local veterinary units of each State. The bovine density and geomorphologic features were obtained from national databases and geographic information systems. Of the 433 municipalities presenting bovine rabies outbreaks in 2010, 178 (41.1%) were classified by the model as high risk, 212 (49.0%) were classified as moderate risk, 25 (5.8%) were classified as low risk, whereas the risk was undetermined in 18 municipalities (4.1%). An ROC curve was built to determine if the risk evaluated by the model could adequately discriminate between municipalities with and without rabies occurrence in future years. The risk estimator for the year 2011 was classified as moderately accurate. In the future, these models could allow the targeting of rabies control efforts, with the adoption of control measures directed to the higher risk locations and the optimization of the field veterinary staff deployment throughout the country. Additionally, efforts must be made to encourage continuous surveillance of risk factors.

A Organização Mundial da Saúde recomenda o teste de Imunofluorescência Direta (IFD) para a realização do Diagnóstico Laboratorial e Avaliação Sorológica da raiva. Como reveladores deste teste, são utilizados conjugados fluorescentes antirribonucleoproteínas (RNPs) do vírus da raiva, produzidos a partir de anticorpos anti-RNPs obtidos da purificação de soros hiperimunes de animais imunizados com RNPs purificadas. Os objetivos deste estudo foram: avaliar os efeitos da radiação gama na imunogenicidade das RNPs e comparar dois métodos cromatográficos de purificação de imunoglobulinas anti-RNPs. Os soros de animais imunizados com RNPs irradiadas e não irradiadas foram avaliados nos testes de Imunfluorescência Indireta e Ensaio Imunoenzimático. A partir dos resultados obtidos pode-se concluir que os animais imunizados com RNPs irradiadas necessitam de um menor número de doses para uma resposta imunológica com alto título de anticorpos. Por meio da IFD verificou-se que o conjugado produzido com anticorpos anti-RNPs irradiadas apresentou especificidade semelhante a do conjugado produzido a partir de anticorpos anti-RNPs não irradiadas, mas com melhor definição das inclusões características do vírus. Os processos de purificação de anticorpos por cromatografia de troca iônica e cromatografia de afinidade foram avaliados utilizando-se os testes de Bradford e eletroforese (SDS-PAGE). Pelos resultados obtidos pode-se concluir que, neste estudo, o processo de purificação que utilizou a cromatografia de afinidade foi o método que apresentou melhor rendimento, menor tempo de execução e obtenção de anticorpos com maior grau de pureza. / The World Health Organization recommends the direct immunofluorescence test for laboratory diagnosis and serological evaluation of rabies. To achieve this test, fluorescent anti-ribonucleoproteins (RNPs) conjugates, produced from purified IgGs of RNP-immunized animals are employed. The aims of the present study were: investigate the effects of gamma radiation on the immunogenicity of RNPs, as well as to compare two chromatographic methodologies for the purification of anti-RNPs immunoglobulins. Sera from animals immunized with either native or irradiated RNPs were compared by direct immunofluorescence and immunoenzymatic assays. Our results indicate that the animals immunized with irradiated antigen requested a lower number of doses to reach high antibody titers. The immunofluorescence assays indicated that the conjugates produced with the anti-irradiated RNPs IgGs showed similar specificity to its anti-native counterpart, but with a higher definition of the virus inclusions. The purification methods were compared by Bradford and electrophoresis assays. According to the results, we concluded that the affinity-based process resulted in higher yields, lower execution time, and higher purity of the antibodies.

A purificação de subunidades do vírus da raiva pode ser realizada por diferentes metodologias, uma vez purificadas estas subunidades podem ter diversas aplicações em métodos altamente específicos para o diagnóstico laboratorial e pesquisa da raiva. A obtenção de ribonucleoproteínas (RNP) do vírus da raiva pode ser realizada por meio de ultracentrifugação em gradiente de Cloreto de Césio (CsCl), porém este método possibilita a obtenção de RNP semi purificadas. Neste estudo foi utilizado o método de cromatografia de imunoafinidade para obtenção das RNP, os resultados obtidos foram satisfatórios quanto a um maior grau de pureza dessas proteínas, além de propiciar a otimização do processo e redução do tempo operacional, quando comparado a ultracentrifugação em gradiente de CsCl. / Purification of subunits of the rabies virus can be accomplished by different methodologies, once purified these subunits can have several applications in highly specific methods for diagnostic and research laboratory for rabies. Obtaining ribonucleoprotein (RNP) of rabies virus can be performed by ultracentrifugation in a Cesium Chloride (CsCl) gradient, but this method allows to obtain semi purified RNP. This study used the method of immunoaffnity chromatography to obtain the RNP; the results were satisfactory for a higher degree of purity of these proteins in addition to providing process optimization and reduced operating time compared to ultracentrifugation in a cesium chloride gradient.

Avaliou-se a correlação entre alteração ambiental e ocorrência de focos de raiva em herbívoros na região do vale do rio Paraíba do Sul paulista e alto Tiete no período de 1996 a 2006, por meio da aplicação de técnica de sensoriamento remoto e sistemas de informação geográfica. Foram utilizadas imagens do satélite Landsat-5, sensor TM, órbitas 218 e 219, ponto 76, bandas 3 e 4 na obtenção do índice de vegetação com diferença normalizada (NDVI). Foi feita a subtração de NDVI para obtenção da alteração de cobertura vegetal ou vigor de biomassa em intervalos de um ano, e dados de ocorrência de focos de raiva agregados por município corrigidos pelo efetivo herbívoro no respectivo ano. Diferenças significativas foram obtidas na comparação das médias de alteração de NDVI para ganho, perda e alteração geral em todo período pelo teste de Wilcoxon, exceto de 1996 a 1997 e seqüência de somatória de rankings negativos de 1998 a 2002. A análise de correlação entre diminuição de NDVI e focos de raiva corrigidos foi significativa em 2002 e 2003. Para ganho de NDVI, foi significativo em 1998 e 2003. Para alteração geral foi significativa em 2002. Houve correlação significativa de aumento de NDVI e focos de raiva corrigidos em 2000, 2002 e 2004, com r > 0 em todo período, exceto 2002 e observadas correlações entre alteração, geral e de perda, e tamanho de rebanho significativas em 2000, 2002, 2004 e 2006. A correlação positiva entre alteração de NDVI e rebanho herbívoro sugere a alteração do tamanho do rebanho como um fator de alteração da cobertura vegetal e conseqüente aumento da ocorrência de raiva pela alteração do habitat do morcego hematófago, principal hospedeiro do vírus rábico na América do Sul. A implantação da Coordenadoria de Defesa Agropecuária (CDA) da Secretaria de Agricultura e Abastecimento de São Paulo, em 1999 e a obrigatoriedade da vacinação contra a raiva, a partir de 2002, podem ter encoberto a correlação positiva encontrada no período anterior, de 1996 a 1999. Após o controle da raiva ter se consolidado, a alteração de NDVI voltou a apresentar correlação positiva, devendo ser considerada de fato fator de risco para a ocorrência de raiva nos herbívoros. A metodologia proposta no estudo pode ser uma alternativa no estudo de alteração ambiental como fator de risco na epidemiologia de doenças infecciosas, porém refinamento da técnica pode ser considerado a fim de controlar influências de condições atmosféricas e época do ano nas imagens utilizadas / The present work evaluated the correlation between environmental changes and herbivore rabies in eastern São Paulo State, from 1996 to 2006, using remote sensing and geographic information systems techniques. Images from Landsat-5 satellite, sensor TM, orbits 281 and 219, point 76, bands 3 and 4 were used to obtain the normalized difference vegetation index (NDVI). For each year, the subtraction of NDVI was calculated in order to evaluate the changes in vegetation coverage or biomass robustness. Also, the occurrence of rabies was obtained, for each local administrative division, called municipality, later corrected by the number of herbivores. Significative differences were obtained when comparing mean NDVI changes, being gain, loss or both using Wilcoxon test, except between 1996 and 1997. Differences were also obtained in negative rank sums from 1998 and 2002. The correlation analysis between NDVI loss and rabies occurrence was significative in 2002 and 2003. The correlation between NDVI gain and rabies occurrence was significative in 1998 and 2003. For both gain and loss of NDVI, there was significant correlation with rabies occurrence only in 2002. For corrected rabies outbreaks, there was significative correlation in 2000, 2002, 2004 and 2006. Positive correlation between NDVI changes and herbivores herds suggests that rise in number of herds impacts vegetation coverage, consequently the increase of rabies occurrence, caused by changes in vampire bat habitats. The implantation of an animal health service in São Paulo, in 1999, imposing vaccination against rabies in cattle in 2002, may have covered positive correlation from 1996 to 1999. After the consolidation of control measures, NDVI changes turned to be correlated, allowing its classification as risk factor for rabies occurrence. The proposed method can be an alternative to study environmental changes as risk factor of infectious diseases epidemiology. The improvement of the method is necessary to control atmospheric conditions and the period of images acquirement

Este estudo teve como objetivo avaliar a campanha de vacinação da Prefeitura de São Paulo na área da SUVIS Lapa/Pinheiros, em 2012. Obteve-se o perfil dos animais e proprietários atendidos e analisou-se a distribuição espacial e áreas de influência dos postos de vacinação, baseando-se na distância euclidiana percorrida pelos proprietários. Realizou-se amostragem não probabilística dos proprietários através da aplicação de um questionário. Os endereços dos animais e postos de vacinação foram plotados em mapas georreferenciados. As distâncias percorridas pelos proprietários foram significantemente maiores ao posto fixo (média de 2.911 metros [2.479-3.343]) do que aos postos volantes (média de 712 metros [657-767]). O meio de transporte mais utilizado até o posto fixo foi o automóvel (76% [69,9-82,1%]), enquanto que, nos postos volantes, a maioria dos proprietários levou seus animais a pé (76% [74,2-77,8%]). Em apenas 19% dos postos de vacinação todos os proprietários residiam no território da SUVIS Lapa/Pinheiros, sendo comum a vacinação de animais provenientes de outras regiões. A idade média dos cães foi de 5,8 anos [5,7-6,0] e 51% eram machos. Quanto à participação, 17% dos proprietários afirmaram ser a primeira vacinação de seus cães na campanha. A idade média dos gatos foi de 4,1 anos [3,9-4,4] e 57% eram fêmeas. Quanto à participação, 35% dos proprietários afirmaram ser a primeira vacinação de seus gatos na campanha. A idade média dos proprietários de cães foi de 40,38 anos, sendo 54% mulheres. Quanto ao transporte, 73% [71,6-74,9%] dos proprietários levaram os cães a pé, e 26% [24,7-28%] utilizaram automóvel. A idade média dos proprietários de gatos foi de 39,85 anos, sendo 62% mulheres. Quanto ao transporte, 63% [58,9-66,5%] dos proprietários levaram os gatos a pé, e 35% [31,4-38,9%] utilizaram automóvel. O número de animais vacinados na SUVIS Lapa/Pinheiros em 2012 foi o menor das últimas quatro campanhas, havendo decréscimo de 34,1% no número total de vacinados em relação a 2009, com diminuição de 35,8% para cães e 25,6% para gatos. Torna-se necessário aprimorar e adequar a estratégia de vacinação, principalmente em função das diferenças socioeconômicas desta área. / The purpose of this study was to evaluate the anti-rabies vaccination campaign in the region of SUVIS (Health Surveillance Supervision) Lapa/Pinheiros in 2012. The profile of the animals immunized and their respective owners was obtained and an analysis of the geographical distribution and the areas under the influence of the vaccination stations was made, based on the euclidean distance travelled by the animal owners. A non-probability sampling of the owners was carried out via questionnaire. The home addresses of the animals and of the vaccination stations were plotted on georeferenced maps. The distances travelled by the animal owners were significantly longer to the stationary station (average of 2.911 meters [2.479-3.343]) than to the mobile units (average of 712 meters [657-767]). The most frequently used mean of transportation to the stationary station was the car (76% [69,9-82,1%]), while most owners walked their animals to the mobile units (76% [74,2-77,8%]). In only 19% of the vaccination stations, all animal owners resided in the region under the supervision of SUVIS Lapa/Pinheiros, and the immunization of animals coming from other regions was a usual practice. The average age of the dogs was 5,8 years [5,7-6,0] and 51% of them were male. Regarding the participation in the vaccination campaign, 17% of the owners claimed to be the first vaccination of their dogs in the campaign. The average age of the cats was 4,1 years [3,9-4,4] and 57% of them were female. As for the participation, 35% of the owners claimed to be the first vaccination of their cats in the campaign. The average age of the dog owners was 40,38 years and 54% of them were women. Regarding the transportation, 73% [71,6-74,9%] of the owners walked their dogs to the vaccination station and 26% [24,7-28%] used cars. The average age of the cat owners was 39,85 years and 62% of them were women. As for their transportation, 63% [58,9-66,5%] of the owners walked and 35% [31,4-38,9%] used cars. The number of animals vaccinated in the region of SUVIS Lapa/Pinheiros in 2012 was the lowest of the last four campaigns, and there was a decrease of 34,1% in the total number of vaccinated animals in comparison with 2009, with a decrease of 35,8% for dogs and 25,6% for cats. Therefore, it is necessary to improve and adjust the vaccination strategy, mainly due to the socioeconomic differences in this area.

Orientador: Cristina Maria Garcia de Lima Parada / Resumo: Introdução: A raiva é uma antropozoonose e sua transmissão se dá pela inoculação do vírus presente na saliva de animais mamíferos raivosos, principalmente por mordidas ou, mais raramente, arranhões e lambedura de mucosa ou em lesões na pele. A profilaxia pós-exposição está indicada para pessoas após mordedura, arranhadura e/ou lambedura por mamífero com potencial rábico. O uso da vacina antirrábica e do soro homólogo ou soro heterólogo é parte do programa de profilaxia da raiva e a indicação depende das características da lesão e do animal agressor. Objetivo Geral: Analisar a adequação das condutas indicadas e desenvolver tecnologia de apoio à tomada de decisão para profilaxia da raiva humana pós-exposição na Rede de Atenção à Saúde. Método: Trata-se de estudo transversal e retrospectivo, baseado na análise dos dados secundários das fichas de notificação de atendimento antirrábico humano inseridas no Sistema de Informação de Agravos de Notificação do município de Bauru-SP, no ano de 2017. A análise da adequabilidade do tratamento foi guiada pelos protocolos do Ministério da Saúde e Instituto Pasteur. Para cálculo do número de inadequações, considerou-se o tratamento realizado e o tratamento adequado, sendo a proporção de inadequação obtida a partir da subtração do total de tratamento adequado do total de tratamento indicado, dividido pelo total de tratamento adequado e multiplicado por 100. O desenvolvimento do aplicativo móvel foi realizado em parceria com a equipe do Núcleo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Rabies is an anthropozoonosis which is transmitted by inoculation of the virus that is present in the saliva of rabid mammals, mainly through biting or less often by scratching and licking of mucosa or skin lesions. Post-exposure prophylaxis is indicated for patients after being bitten, scratched or licked by potentially rabid mammals. The use of antirabic vaccine and homologous or heterologous serum is part of the rabies prophylaxis program and their indication depends on the characteristics of the lesion and the kind of attacker animal. General goal: To analyze the adequacy of the measures taken and to develop a technological tool for supporting decision making on post-exposure prophylaxis at the healthcare network. Methods: This study is a crosssectional study and retrospective, based on data analysis of notification files on antirabic treatment on humans within the Notification of Injury Information System in the city of Bauru-SP in 2017. The analysis of the suitability of the treatment was guided by the protocols of the Ministry of Health and Instituto Pasteur. For the calculation of the number of inadequacies, the treatment performed and the appropriate treatment were considered, with the proportion of inadequacy obtained by subtracting the appropriate total treatment from the indicated total treatment, divided by the appropriate total treatment and multiplied by 100. The development of a mobile application was carried out in partnership with the team of t... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luzia Helena Queiroz / Banca:Cáris Maroni Nunes / Banca:Vera Claudia Lorenzetti Magalaes Curci / Resumo: As agressões provocadas por animais domésticos, em especial por cães e gatos, constituem-se em um sério problema de saúde pública no Brasil, particularmente por sua relação com o controle da raiva em humanos. O objetivo deste estudo foi verificar a ocorrência de casos de agressão de pessoas por cães e gatos em municípios da região Noroeste do Estado de São Paulo no período de 2008 a 2013, observando a variação da frequência ao longo dos anos e o perfil das mesmas entre os municípios, de acordo com suas características específicas. Para tanto, realizou-se um levantamento em arquivos de dados oficiais da Secretaria de Saúde do Estado de São Paulo, tendo como base o período entre os anos de 2008 a 2013. Foram notificados 9.411 casos de acidentes por animais domésticos, sendo as agressões por cães as mais frequentes. A grande maioria dos municípios avaliados tiveram aumentos dos casos de agressões durante o período de estudo, entretanto a relação entre agressões por cães domiciliados e não domiciliados permaneceu constante. A maior frequência de agressões ocorreu na faixa etária entre 0 - 14, em todos os municípios analisados e nesta faixa etária houve predominância de ferimentos em membros inferiores, enquanto que em maiores de 14 anos, a maior ocorrência foi em mãos/pés. Houve predomínio de mordeduras, seguidas de arranhaduras. Foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre os municípios da região estudada em relação à incidência das agressões e à sua distribu... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aggressions caused by domestic animals, especially by cats and dogs, is a serious public health issue in Brazil, particularly in its relation to the control of human rabies. The purpose of this study was to investigate the incidents involving aggression by dogs and cats to people in the municipalities of São Paulo State Northwest region from 2008 to 2013, noting the frequency variation over the years and the profile of them between municipalities in accordance with their specific characteristics. A survey on the State official data center was performed having as basis the period between 2008 and 2013, when 9,411 cases of aggressions by pets were reported. The aggressions caused by dogs were the most frequently reported. The large majority of the assessed municipalities had an increases in cases of aggression during the study period, however the relationship between aggressions from domestic and free roaming dogs remained constant. The highest frequency of attacks occurred in the group aging from 0 to14, in all analyzed municipalities and in this age range there was a predominance of injuries in the lower limbs, while in those over 14 years, the highest occurrence was in hands/feet. A large majority of reported aggressions corresponded to bites, followed by scratching. Statistically significant differences were observed between the municipalities in the study area in the incidence of attacks and their distribution between the genders, but not differing in other characteristics... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A raiva é uma zoonose que afeta todos os mamíferos e causa cerca de 55.000 mortes humanas por ano, causada pelo vírus da raiva. O vírus da raiva pertence à Ordem Mononegavirales, Família Rhabdoviridae e o Gênero Lissavirus. Atualmente, o tratamento humano se baseia no uso do Protocolo de Milwaukee composto de indução do paciente ao coma e uso de massiva terapia antiviral. O protocolo, apesar de ter sido utilizado duas vezes com sucesso, inclusive em um caso brasileiro, ainda requer aprimoramentos. Neste sentido, a interferência por RNA (RNAi) é uma nova abordagem para terapia de doenças virais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a inibição da replicação do vírus da raiva in vitro e in vivo utilizando RNAi. Para tanto, foram utilizados três siRNAs (siRNA 124, siRNA 750, siRNA B) com a fita antisenso complementar ao mRNA da nucleoproteína (N) do vírus da raiva. Para o ensaio in vitro foram utilizadas a cepa PV do vírus da raiva e as células de BHK-21 (Baby hamster kidney). As monocamadas celulares foram infectadas com a cepa PV e depois de 2 horas de incubação transfectadas com cada um dos siRNAs em combinação com Lipofectamine 2000®. Depois de 22 horas as placas teste e controle foram submetidas à imunofluorescência direta (IFD) com conjugado globulina de coelho anti-nucleocapsídeo do vírus da raiva/isotiocianato de fluoresceína (BIO-RADTM). Os resultados revelaram títulos de 5,71logTCID50/ml, 5,56logTCID50/ml e 5,65logTCID50/ml para os siRNAs 124, B e 750, respectivamente, enquanto que, para a placa controle, o título foi 6,43logTCID50/ml. Para o ensaio in vivo, foram usados camundongos albino suíços de 21 dias com peso entre 11 e 14g, infectados com a cepa PV via intracerebral. Duas horas depois da infecção foi inoculada por via intracerebral uma solução do \"pool\" dos três siRNAs com Lipofectamine 2000® . Os animais com paralisia foram sacrificados e aqueles sobreviventes foram observados até completar 30 dias de observação quando foram, então, sacrificados. O sistema nervoso central de todos os animas foi recolhido e submetido a IFD. O título viral do grupo teste foi 7.03logLD50%/ml e do grupo controle 7.13logLD50%/ml. O resultado do ensaio in vitro demonstra que os siRNAs utilizados são efetivos em inibir a replicação do vírus da raiva, com eficiências equivalentes. A utilização do \"pool\" dos três siRNA em camundongos resultou em 30% de animais sobreviventes frente a 100 DL50% do vírus PV, enquanto que a mesma dose levou a 100% de mortalidade nos animais não tratados. Pode-se atribuir a menor eficiência em inibir a replicação do vírus da raiva in vivo quando se compara com os resultados in vitro possivelmente às elevadas doses virais utilizadas. Estes resultados, ainda que indiquem a necessidade de mais estudos, permitem concluir que a RNAi é uma tecnologia promissora como antiviral contra a raiva. / Rabies is a zoonotic disease that affects all mammals and causes more than 55.000 human deaths every year, caused by rabies virus (RABV) a virus of the Mononegavirales order, Family Rhabdoviridae and the Lissavirus genus. After the onset of the symptoms, the illness has a fast progression and the patients feel intense physical suffering. Currently, human rabies treatment has been based on the Milwaukee Protocol which consists on the induction of coma and massive antiviral therapy. Despite this protocol has been successful in two cases, including a Brazilian case (Recife State), more studies on antiviral for human rabies treatment are required. RNA interference is a new antiviral approach, which gives hope to the possibility of rabies antiviral treatment. The aim of this study was to assess the decrease in the titer of rabies virus in vitro and in vivo using short-interfering RNAs. For this purpose, three siRNAs (siRNA 124, siRNA B, siRNA 750) were used with antisense strands complementary to rabies virus nucleoprotein (N) mRNA. Pasteur virus strain (PV) of rabies virus and BHK-21 cells were used, and the monolayers were transfected with each of tree RNAs with Lipofectamine-2000. After 22 hours, the siRNA-treated and the control plates were tested by direct fluorescent antibody test (DFAT) with anti-rabies virus nucleocapsid antibody conjugate with fluorescein isothiocianate. Virus titers were calculated by the Spearman-Karber method. The results revealed that all three siRNAs reduced the titer of PV strain and a more intense effect was obtained with siRNA B. The titer of the PV strain in the control plate was 6.43lg TCID50%/ml and 5.56lg TCID50%/ml in the plate treated with siRNA B, respectively. The similar result was obtained in plates treated with siRNAs 124 and 750. The title of PV strain of these plates was 5.71lg TCID50%/ml of siRNA 124 and 5.65lg TCID50%/ml of siRNA750, respectively. No cytopathic or cytotoxic effect was observed in the monolayers treated with Lipofectamine-2000®. Swiss albino mice with 21 days weighing between 11 and 14g infected with strain PV by the intracerebral route used in this in vivo essay. After two hours of infection, a pool solution of 3 siRNAs with lipofectamine was also inoculated by the intracerebral route. The animals with paralysis were euthanized and those which survived were observed until the 30th day when they were also euthanized. The central nervous system of all animals were collected and induced to IFD. The title viral test group was 7.03logLD50%/ml and the control group was 7.13logLD50%/ml. The in vitro test results indicate that siRNAS are effective in inhibiting the replication of rabies virus with similar efficiencies. The use of the pool of three siRNA in mice resulted in 30% of survivors for 100 LD50% of PV virus, while the same dose led to 100% mortality in untreated animals. A lower efficiency in inhibiting the replication of rabies virus in vivo when compared with results in vitro could be possibly due to the high viral doses used. These results, although indicative of the need for further studies, show that RNAi is a promising technology as antiviral against rabies.

Orientador: Jane Megid / Banca: Paulo Eduardo Brandão / Banca: Hélio Langoni / Resumo: O tratamento pós-expositivo da raiva é a principal medida para evitar o desenvolvimento da doença, e baseia-se na aplicação da vacina anti-rábica associada ou não ao soro anti-rábico, em número de doses variáveis de acordo com o tipo de exposição. Protocolos terapêuticos utilizando drogas antivirais vêm sendo aplicados em seres humanos, com resultados positivos e negativos, gerando dúvidas quanto à eficácia. A possibilidade de utilização de RNA de interferência (siRNA) e da ribavirina, associado ou não ao Dimetilsulfóxido (DMSO) no tratamento pós expositivo da raiva experimental em camundongos, representa uma nova perspectiva. Camundongos C57BL6 foram inoculados com uma amostra de rua de vírus rábico proveniente de cão, separados em diferentes grupos e diferentes protocolos terapêuticos, sendo estes administrados 24 horas após a inoculação viral. De cada grupo, oito animais foram separados para observação durante um período de 30 dias sendo os demais sacrificados cinco e dez dias após a inoculação. O cérebro dos animais sacrificados foi coletado e RT-PCR em Tempo Real foi realizada para a detecção e quantificação do gene N do vírus rábico e avaliação da expressão de genes relacionados a resposta imune. Tanto a ribavirina como o siRNA, isoladamente ou associados ao DMSO não demonstraram diferença estatística significante relacionada à letalidade, no entanto, os grupos tratados com ribavirina demonstraram maior percentagem de letalidade e sintomatologia clínica mais severa. Nos animais não inoculados e tratados com a ribavirina, houve um estímulo transitório da resposta imune inata, no entanto, quando associado ao virus rábico este aumento da resposta imune não foi observado. No grupo tratado com siRNA o período de evolução da doença foi mais prolongado quando comparado ao dos demais grupos, sugerindo uma atividade antiviral parcial... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Rabies post-exposition treatment is the main measure to prevent disease development, and is based on the use of anti-rabies vaccine with or without anti-rabies serum, in a number of doses varying according to the exposure type. Therapeutic protocols using antiviral drugs have been applied in humans, with positive and negative results, raising doubts about effectiveness. The possibility of using RNA interference (siRNA) and ribavirin, with or without Dimethyl sulfoxide (DMSO) in post exposure treatment of experimental rabies in mice represents in rabies treatment. C57BL6 mice were inoculated with street dog rabies virus, and then separated into different groups and received different post-exposure treatment, wich were administered 24 hours after the inoculation. In each group, eight animals were separated for 30 days of observation and the ramaining sacrificied five and ten days after inoculation. Brains of the sacrificed animals were collected and RT-Real-Time PCR was performed for detection and quantification of the N gene of rabies virus, and for evaluation of the expression of immune response related genes. Both ribavirin and siRNA, alone or associated with DMSO showed no statistically significant differences related to mortality, however, the groups treated with ribavirin showed a greater percentage of mortality and more severe clinical symptoms. In animals not inoculated and treated with ribavirin, there was a transient stimulation of the innate immune response, however, when associated to rabies virus such increase in immune response was not observed. In the group treated with siRNA the period of the disease was more prolonged when compared to the other groups, suggesting a partial antiviral activity with this therapy. The results of ribavirin "in vivo" were evaluated "in vitro in fibroblasts and neuroblastoma cells demonstrating a cell type-dependent efficacy / Mestre