Dados da Organização Mundial da Saúde (OMS) mostram que a raiva é um problema de saúde pública podendo acarretar sérios prejuízos ambientais e econômicos, a despeito da existência de vacinas eficazes de uso humano e veterinário. Segundo seu último informe, estima-se que no mundo em torno de 55.000 pessoas por ano morrem de raiva. O cão permanece como principal transmissor da raiva para o homem e também como principal vítima da doença. Nos países que conseguiram controlar a raiva em animais domésticos, o vírus se mantém circulante na natureza por meio dos animais silvestres, sendo os morcegos apontados como a segunda espécie transmissora da raiva a humanos. Os Lyssavirus têm sido detectados em morcegos, em diversos continentes, sendo identificados como transmissor em dez das onze espécies de Lyssavirus. Fósseis de morcego mostram sua presença há 50 milhões de anos. Mas somente em 1911, Carini relacionou pela primeira vez a raiva aos morcegos, levantando a hipótese destes serem os transmissores da doença a outros animais. Há registros de que o vírus da raiva foi isolado em pelo menos 41 das 167 espécies de morcegos brasileiras, sendo que a maioria dessas espécies está relacionada a atividades humanas com a presença destes animais próximos ao local de trabalho e moradia das pessoas. Os morcegos hematófagos Desmodus rotundus são encontrados do norte do México até a costa norte do Chile, região central da Argentina e costa do Uruguai e com exceção do Chile. Esta espécie de morcego tem sido apontada como reservatório natural do vírus da raiva nesta região. Alguns pesquisadores observaram que a raiva em morcegos não hematófagos precede a raiva bovina e em animais de estimação, sugerindo que os morcegos não hematófagos podem ser o elo entre a raiva silvestre e a raiva urbana e o fato de se detectar a variante mantida por morcegos hematófagos Desmodus rotundus em cães e gatos mostra que o papel deste morcego no ciclo da raiva não está limitado à raiva silvestre. As características dos Lyssavirus adaptados a morcegos têm mostrado diferenças quando comparadas à raiva relacionada aos carnívoros, confirmando a necessidade do desenvolvimento de metodologias que permitam estudos complementares mais precisos a respeito da biologia e epidemiologia da raiva em quirópteros. A escassez de dados na literatura, até o momento, a respeito do genoma completo da variante do vírus da raiva mantida por populações de morcegos hematófagos Desmodus rotundus, deixa uma lacuna no entendimento da epidemiologia molecular deste vírus. A importância epidemiológica desta espécie na transmissão da raiva é inquestionável. Neste estudo foi sequenciado e analisado, o genoma da variante do vírus da raiva mantido por populações de morcego hematófago Desmodus rotundus isolado de um morcego hematófago Desmodus rotundus. A amostra, procedente de área endêmica no Estado de São Paulo, foi filogeneticamente comparada com o genoma da amostra padrão para a espécie viral 1 - Rabies virus e outras amostras pertencentes ao ciclo aéreo ou terrestre de transmissão, disponíveis no GenBank, identificando possíveis padrões de diferenciação, próprios do ciclo aéreo, e em alguns casos relacionados somente à variante estudada. / Data from the World Health Organization (WHO) show that rabies is a public health problem which can cause serious environmental and economic damage, despite the existence of effective vaccines for human and veterinary use. According to WHO latest report, estimated that worldwide around 55,000 people per year died of rabies. The dog remains the main transmitter of rabies to humans as well as the main victim of the disease. In countries that were successful in controlling rabies in domestic animals, the virus is still circulating in nature by wild animals and the bats are seen as the second species transmitting rabies to humans. The Lyssavirus have been detected in bats in several continents and is identified as a transmitter in ten of eleven species of Lyssavirus. Bat fossils show their presence for 50 million years. But only in 1911, in the first time Carini related to rabies at bats, raising the possibility of these being the transmitters of the disease to other animals. Reports show that the Rabies virus was isolated in at least 41 of the 167 species of bats in Brazil, with the majority of these species is related to human activities with the animals living near the local job and houses of people. The vampire bat Desmodus rotundus is found from northern Mexico to northern Chile coast, central coast of Argentina and Uruguay and with the exception of Chile. This bat species has been identified as a natural reservoir of the Rabies virus in this region. Some researchers observed that rabies into non-hematophagous bats precedes the bovine rabies and in pets, suggesting that the non-hematophagous bats may be the link between wildlife rabies and urban rabies and the fact that detect the variant maintained by vampire bats Desmodus rotundus in dogs and cats shows that the role of bat rabies in the cycle is not limited to wildlife rabies. The characteristics of Lyssavirus bat adapted have been shown differences when compared to rabies related to the carnivores, confirming the need to develop methods that enable more accurate follow-up studies about the biology and epidemiology of rabies in bats. The paucity of data in the literature to date about the complete genome of the Rabies virus variant maintained by populations of vampire bats Desmodus rotundus leaves a gap in understanding the molecular epidemiology of this virus and the epidemiological importance of this species in the transmission of Rabies virus is unquestionable. In this study we sequenced and analyzed the genome of the Rabies virus variant maintained by populations of bat Desmodus rotundus isolated from a bat Desmodus rotundus. The sample, coming from an endemic area in São Paulo, was phylogenetically compared with the genome of the standard sample for spcies 1 - Rabies virus and other samples belonging to the Terrestrial and Aerial cycles of transmission, available in GenBank, to identify possible patterns of differentiating themselves Aerial cycle and in some cases linked only to variant studied.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Sandro.pdf: 259492 bytes, checksum: 9e24465090764a22ac75d827ad8af255 (MD5) Previous issue date: 2008-08-27 / The effect of a probiotic on the immune response of cattle immunized with one dose of rabies vaccine was evaluated in this study. The Nelore bovines (N=75) were divided randomly into 5 groups: four groups fed with a diet supplemented with the 2, 3, 4 and 8 g the probiotic (Proenzime®)/bovine/day, groups G2, G3, G4 and G8, respectively, for 60 days. The 5th group was used as control. All the animals were immunized with a single dose of rabies vaccine on the first day of the experiment (day 0). The antibody titers were measured on days 0, 30 and 60 by RFFIT test. The results show the significant interaction was found between the probiotic level and vaccination time. There was also a significant difference among rabies titers in groups Gc, G2, G3, G4 and G8 on both days 30 and 60. In group G4, titers of rabies antibody in cattle decreased significantly on day 60. A significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals in the control group and the other treatments was found on both days 30 and 60. On day 60, the control group did not differ from G2. However, no significant difference (p<0.05) was found among the treatments which were supplemented with probiotic. In addition, no significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals on days 30 and 60 was found in control (Gc) or any other treatment (G2, G3, G4 or G8). In conclusion, the probiotic (Proenzime®) increase the humoral immune response of bovine immunized with rabies vaccine. / Foi avaliado o efeito do probiótico sobre a resposta imune de bovinos imunizados com uma dose de vacina anti-rábica. Utilizaram-se bovinos Nelore (N=75) divididos randomicamente em 5 grupos: quatro grupos foram suplementados com 2, 3, 4 e 8 g probiótico (Proenzime®)/bovino/dia, grupos G2, G3, G4 e G8, respectivamente, por 60 dias. O 5º grupo foi controle. Todos os animais foram imunizados com uma dose de vacina anti-rábica no dia zero do experimento. Os títulos de anticorpos anti-rábicos foram mensurados nos dias 0, 30, 60 por meio do teste de RFFIT. Os resultados mostraram interação significativa entre concentração de probiótico e tempo de vacinação. Também teve aumento significativo nos títulos de anticorpos anti-rábicos nos grupos Gc, G2, G3, G4 e G8 nos dias 30 e 60. No grupo G4 os títulos de anticorpos anti-rábicos reduziram significativamente no dia 60. Houve diferença significativa (p<0,05) entre a freqüência de animais imunizados entre os grupos controle e tratados nos dias 30 e 60. No dia 60, o grupo controle não diferiu do G2. Além disso, não houve diferença significativa (p<0,05) na freqüência de animais nos dias 30 e 60, no grupo controle ou nos grupos tratados (G2, G3, G4 e G8). Conclui-se que o probiótico (Proenzime®) aumentou a resposta imune humoral em bovinos imunizados com vacina anti-rábica.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ARTIGO FINAL_02_02_09.pdf: 347998 bytes, checksum: 56e6a67c83644f58e3352638f56c4d37 (MD5) Previous issue date: 2009-02-02 / The aim of this study was to evaluate the effect of levamisole on the antirabies humoral immune response in bovines primovaccinated against rabies. Forty-two bovines, about twelve months old, were randomly divided into three groups. Animals from VL group received one dose of levamisole and antirabies vaccine on day zero. Cattle from group V7L received one dose of antirabies vaccine on day zero and, on day seven, one dose of levamisole. Bovines from control group (GC) were immunized with just one dose of antirabies vaccine on day zero. A lyophilized, inactivated rabies vaccine, developed at Instituto Butantan was used. Blood samples were taken on days zero, 30 and 60. The neutralizing antibody titers were determined by serum neutralization in BHK21 cells, based on the Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT) and on the Fluorescent Inhibition Microtest (FMIT). The results obtained showed that there was not significant difference in neutralizing-antibody titers and neither in the frequency of immunized animals between groups treated and not treated with levamisole 30 and 60 days after antirabies vaccination. In conclusion, levamisole administration (6.0 mg/kg of body weight) in primovaccinated bovines against rabies did not influence the antirabies humoral immune response. / O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do levamisol na resposta imune humoral anti-rábica de bovinos primovacinados contra a raiva. Quarenta e dois bovinos, com idade média de 12 meses, foram divididos aleatoriamente em três grupos. Os animais do grupo VL receberam uma dose de levamisol e vacina anti-rábica no dia zero. Nos bovinos do grupo V7L foi aplicada uma dose de vacina no dia zero e, no dia 7, uma dose de levamisol. Nos bovinos do grupo controle (GC), somente uma dose de vacina no dia zero. Utilizou-se uma vacina anti-rábica inativada, liofilizada, desenvolvida pelo Instituto Butantan. Colheram-se amostras de sangue nos dias zero, 30 e 60. Os títulos de anticorpos neutralizantes anti-rábicos foram determinados por meio da técnica de soroneutralização em células BHK21, baseado no Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT) e no Fluorescent Inhibition Microtest (FIMT). Os resultados obtidos mostraram que não houve diferença significativa nos títulos de anticorpos anti-rábicos e nem na freqüência de animais imunizados entre os grupos tratados ou não com levamisol 30 e 60 dias após a vacinação anti-rábica. Conclui-se que a administração de levamisol (6,0 mg/Kg de peso vivo) em bovinos primovacinados contra a raiva, não influenciou a resposta imune humoral anti-rábica.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eliane_27_02_09.pdf: 219824 bytes, checksum: 2e65640d358829d6942ea96573f88e74 (MD5) Previous issue date: 2008-11-12 / This study evalueted the zinc (Zn) supplementation during 60 days on the humoral response against rabies in cattle. Forty eight calves aged about 12 months were randomly divided into 4 groups (12 calves / group). The groups received daily zinc supplementation at 0.0 (Gc); 140(G140); 294(G294) or 420(G420) mg/ animal. The forage the paddocks were Zn deficient (5.63 mg Zn/Kg/ dry matter). The titers of rabies antibodies were not affected by Zn supplementation in none of the treatments (Gc, G140, G294 and G420) and proportion of animals with protective titers of rabies antibodies (&#8805; 0.5 UI/mL ). In conclusion, Zn supplementation at the studied concentrations did not affect the titers of rabies antibodies and proportion of cattle with protective titers of rabies antibodies. / O objetivo deste estudo foi avaliar a suplementação com zinco (Zn) por 60 dias na resposta humoral contra a raiva em bovinos. Quarenta e oito bezerros com aproximadamente 12 meses de idade foram divididos aleatoriamente em 4 grupos (12 bezerros/grupo). Os grupos receberam suplementação diária com zinco 0,0 (Gc); 140(G140); 294(G294) e 420(G420) mg/ animal. A concentração na forragem dos piquetes era deficiente (5,63 mg/kg de matéria seca). A suplementação com zinco não influenciou os títulos de anticorpos anti-rábicos em nenhum dos tratamentos (Gc, G140, G294, e G420) e também no número de animais que apresentaram títulos de anticorpos anti-rábicos protetores (&#8805; 0,5 UI/mL). Conclui-se que a suplementação com zinco nas concentrações estudadas não apresentaram diferenças significativas nos títulos de anticorpos anti-rábicos dos animais e na porcentagem deles com títulos de anticorpos protetores para a raiva, durante o período estudado.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Sandro.pdf: 259492 bytes, checksum: 9e24465090764a22ac75d827ad8af255 (MD5) Previous issue date: 2008-08-27 / The effect of a probiotic on the immune response of cattle immunized with one dose of rabies vaccine was evaluated in this study. The Nelore bovines (N=75) were divided randomly into 5 groups: four groups fed with a diet supplemented with the 2, 3, 4 and 8 g the probiotic (Proenzime®)/bovine/day, groups G2, G3, G4 and G8, respectively, for 60 days. The 5th group was used as control. All the animals were immunized with a single dose of rabies vaccine on the first day of the experiment (day 0). The antibody titers were measured on days 0, 30 and 60 by RFFIT test. The results show the significant interaction was found between the probiotic level and vaccination time. There was also a significant difference among rabies titers in groups Gc, G2, G3, G4 and G8 on both days 30 and 60. In group G4, titers of rabies antibody in cattle decreased significantly on day 60. A significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals in the control group and the other treatments was found on both days 30 and 60. On day 60, the control group did not differ from G2. However, no significant difference (p<0.05) was found among the treatments which were supplemented with probiotic. In addition, no significant difference (p<0.05) between the frequency of immunized animals on days 30 and 60 was found in control (Gc) or any other treatment (G2, G3, G4 or G8). In conclusion, the probiotic (Proenzime®) increase the humoral immune response of bovine immunized with rabies vaccine. / Foi avaliado o efeito do probiótico sobre a resposta imune de bovinos imunizados com uma dose de vacina anti-rábica. Utilizaram-se bovinos Nelore (N=75) divididos randomicamente em 5 grupos: quatro grupos foram suplementados com 2, 3, 4 e 8 g probiótico (Proenzime®)/bovino/dia, grupos G2, G3, G4 e G8, respectivamente, por 60 dias. O 5º grupo foi controle. Todos os animais foram imunizados com uma dose de vacina anti-rábica no dia zero do experimento. Os títulos de anticorpos anti-rábicos foram mensurados nos dias 0, 30, 60 por meio do teste de RFFIT. Os resultados mostraram interação significativa entre concentração de probiótico e tempo de vacinação. Também teve aumento significativo nos títulos de anticorpos anti-rábicos nos grupos Gc, G2, G3, G4 e G8 nos dias 30 e 60. No grupo G4 os títulos de anticorpos anti-rábicos reduziram significativamente no dia 60. Houve diferença significativa (p<0,05) entre a freqüência de animais imunizados entre os grupos controle e tratados nos dias 30 e 60. No dia 60, o grupo controle não diferiu do G2. Além disso, não houve diferença significativa (p<0,05) na freqüência de animais nos dias 30 e 60, no grupo controle ou nos grupos tratados (G2, G3, G4 e G8). Conclui-se que o probiótico (Proenzime®) aumentou a resposta imune humoral em bovinos imunizados com vacina anti-rábica.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ARTIGO FINAL_02_02_09.pdf: 347998 bytes, checksum: 56e6a67c83644f58e3352638f56c4d37 (MD5) Previous issue date: 2009-02-02 / The aim of this study was to evaluate the effect of levamisole on the antirabies humoral immune response in bovines primovaccinated against rabies. Forty-two bovines, about twelve months old, were randomly divided into three groups. Animals from VL group received one dose of levamisole and antirabies vaccine on day zero. Cattle from group V7L received one dose of antirabies vaccine on day zero and, on day seven, one dose of levamisole. Bovines from control group (GC) were immunized with just one dose of antirabies vaccine on day zero. A lyophilized, inactivated rabies vaccine, developed at Instituto Butantan was used. Blood samples were taken on days zero, 30 and 60. The neutralizing antibody titers were determined by serum neutralization in BHK21 cells, based on the Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT) and on the Fluorescent Inhibition Microtest (FMIT). The results obtained showed that there was not significant difference in neutralizing-antibody titers and neither in the frequency of immunized animals between groups treated and not treated with levamisole 30 and 60 days after antirabies vaccination. In conclusion, levamisole administration (6.0 mg/kg of body weight) in primovaccinated bovines against rabies did not influence the antirabies humoral immune response. / O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do levamisol na resposta imune humoral anti-rábica de bovinos primovacinados contra a raiva. Quarenta e dois bovinos, com idade média de 12 meses, foram divididos aleatoriamente em três grupos. Os animais do grupo VL receberam uma dose de levamisol e vacina anti-rábica no dia zero. Nos bovinos do grupo V7L foi aplicada uma dose de vacina no dia zero e, no dia 7, uma dose de levamisol. Nos bovinos do grupo controle (GC), somente uma dose de vacina no dia zero. Utilizou-se uma vacina anti-rábica inativada, liofilizada, desenvolvida pelo Instituto Butantan. Colheram-se amostras de sangue nos dias zero, 30 e 60. Os títulos de anticorpos neutralizantes anti-rábicos foram determinados por meio da técnica de soroneutralização em células BHK21, baseado no Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT) e no Fluorescent Inhibition Microtest (FIMT). Os resultados obtidos mostraram que não houve diferença significativa nos títulos de anticorpos anti-rábicos e nem na freqüência de animais imunizados entre os grupos tratados ou não com levamisol 30 e 60 dias após a vacinação anti-rábica. Conclui-se que a administração de levamisol (6,0 mg/Kg de peso vivo) em bovinos primovacinados contra a raiva, não influenciou a resposta imune humoral anti-rábica.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eliane_27_02_09.pdf: 219824 bytes, checksum: 2e65640d358829d6942ea96573f88e74 (MD5) Previous issue date: 2008-11-12 / This study evalueted the zinc (Zn) supplementation during 60 days on the humoral response against rabies in cattle. Forty eight calves aged about 12 months were randomly divided into 4 groups (12 calves / group). The groups received daily zinc supplementation at 0.0 (Gc); 140(G140); 294(G294) or 420(G420) mg/ animal. The forage the paddocks were Zn deficient (5.63 mg Zn/Kg/ dry matter). The titers of rabies antibodies were not affected by Zn supplementation in none of the treatments (Gc, G140, G294 and G420) and proportion of animals with protective titers of rabies antibodies (&#8805; 0.5 UI/mL ). In conclusion, Zn supplementation at the studied concentrations did not affect the titers of rabies antibodies and proportion of cattle with protective titers of rabies antibodies. / O objetivo deste estudo foi avaliar a suplementação com zinco (Zn) por 60 dias na resposta humoral contra a raiva em bovinos. Quarenta e oito bezerros com aproximadamente 12 meses de idade foram divididos aleatoriamente em 4 grupos (12 bezerros/grupo). Os grupos receberam suplementação diária com zinco 0,0 (Gc); 140(G140); 294(G294) e 420(G420) mg/ animal. A concentração na forragem dos piquetes era deficiente (5,63 mg/kg de matéria seca). A suplementação com zinco não influenciou os títulos de anticorpos anti-rábicos em nenhum dos tratamentos (Gc, G140, G294, e G420) e também no número de animais que apresentaram títulos de anticorpos anti-rábicos protetores (&#8805; 0,5 UI/mL). Conclui-se que a suplementação com zinco nas concentrações estudadas não apresentaram diferenças significativas nos títulos de anticorpos anti-rábicos dos animais e na porcentagem deles com títulos de anticorpos protetores para a raiva, durante o período estudado.

Analisou-se 54 amostras de vírus da raiva isoladas de diferentes espécies animais e de seres humanos do Estado do Maranhão, inicialmente pelas técnicas tradicionais de imunofluorescência direta (IFD) e de inoculação intracerebral em camundongos (ICC), com o objetivo de realizar um estudo de epidemiologia da doença. No reteste, todas as amostras foram positivas na IFD e 19 resultaram negativas à ICC. O comportamento biológico dos isolados foi estudado em camundongos, revelando um período de incubação entre 7 e 17 dias, com sinais clínicos variados e duração média de 4 dias. Para a avaliação da patogenicidade, foram selecionadas cinco amostras do estudo, oriundas de diferentes espécies, como vírus de desafio nos camundongos imunizados com uma vacina comercial de vírus inativado. Os resultados do desafio indicaram que a proteção conferida pela vacina foi baixa para todas as amostras. A presença de anticorpos no soro dos camundongos vacinados foi demonstrada em diferentes períodos de vacinação. A tipificação antigênica de quatro amostras de vírus foi realizada pela imunofluorescência indireta (IFI) utilizando um painel de anticorpos monoclonais (MAbs) procedentes do Canadian Food and Inspection Agency, Ottawa, Canadá, identificando o perfil correspondente à variante de morcego hematófago Desmodus rotundus. Na caracterização genética com base nos genes que codificam a glicoproteína G e nucleoproteína N, observou-se que os isolados foram divididos em dois grupos genéticos independentes associados a ciclos endêmicos distintos. Esses resultados permitem concluir que no Estado do Maranhão circulam pelo menos duas variantes do vírus da raiva, mantidas por carnívoros terrestres e morcegos hematófagos. Destaca-se que houve variação regional entre as amostras isoladas em diferentes áreas geográficas. Além disso, foram constatados hospedeiros inesperados nos clados formados. Também, não houve variação temporal nas amostras pesquisadas. / Fifty four rabies virus samples isolated from different animal species and humans, diagnosed positive by means of the direct fluorescent antibody test (dFA) and mouse inoculation test (MIT) in the State of Maranhão were selected for an epidemiologic study. In the retest, all these samples were dFA-positive, but 19 were negative by the MIT. The biologic behavior of these samples was assessed in mice by intracerebral inoculation and the incubation period was between 7 and 17 days, showing varied clinical signs with an average duration of 4 days. For the evaluation of the pathogenicity, five rabies viruses isolated from different species were selected, and used as the challenge viruses to be inoculated into mice been vaccinated previously with an inactivated commercial rabies vaccine. The results of the challenge experiments indicated low protection of the vaccine against the challenge viruses. The presence of rabies antibody was demonstrated in the sera of vaccinated mice taken at different intervals after vaccination. The antigenic typing was performed in four samples by using the indirect fluorescent antibody test (IFI) with a panel of monoclonal antibodies (MAbs) provided by the Canadian Food and Inspection Agency, Ottawa, Canada, and the profile identified was closely related to that of the Desmodus rotundus vampire bat. The genetic characterization based on genes coding the glycoprotein G and nucleoprotein N genes indicated that isolates were divided into two independent genetic groups associated to distinct endemic cycles. With the results obtained, we conclude that in the State of Maranhão there are circulating at least two distinct variants of rabies viruses, maintained by terrestrial carnivores and vampire bats. Regional variation among the isolates taken from different geographic areas has been found. And the rabies virus isolates grouped into clades were associated with unusual host species and no temporal variation was observed among the isolates.

La rage entraîne plus de 60,000 décès par an dans le Monde, dont 800 au Cambodge, pays fortement endémique pour la rage canine.La mort survient dans près de 100% des cas de rage, maladie évitable dans presque 100% des cas par l’accès à une prophylaxie post-exposition (PPE) antirabique adéquate et en temps utile. L’amélioration de l’accès à une PPE dans les zones rurales des pays endémiques permettra d’épargner des vies humaines à court terme. Cette thèse en épidémiologie a tiré parti des données collectées auprès des patients consultant au centre antirabique et les chiens testés à l’Institut Pasteur du Cambodge (IPC), Phnom Penh. Suite à un bilan épidémiologique de la situation et des obstacles auxquels sont confrontés les patients cherchant à accéder à la PPE adéquate et en temps utile, elle vise à contribuer à améliorer 1/ l’accès géographique et 2/ l’accès financier à une PPE pour les populations rurales du Cambodge. Nous avons développé une stratégie originale d’identification des poches de populations à haut risque d’incomplétude vaccinale après une exposition potentielle à la rage. Ceci devrait permettre d’améliorer l’accès géographique à la PPE et se concrétiser par l’ouverture en Juillet 2018 d’un centre périphérique de prévention de la rage dans l’Ouest du Cambodge. Cette stratégie d’identification de difficultés d’accès aux soins est applicable à d’autres thématiques de santé, sous certaines conditions. Notre rappel des patients et l’analyse des décès par rage parmi les patients n’ayant pas complété de leur propre chef le protocole PPE de 4 sessions intradermales sur 1 mois ne permettent pas de mettre en évidence une différence de mortalité par rage parmi les patients n’ayant reçu que 3 sessions sur 1 semaine, par rapport à au moins 4 sessions/1mois. Le raccourcissement du protocole à 1 semaine permet de réduire les coûts directs et indirects et l’absence de revenus pendant la durée du traitement en capitale. La mise en place de ce protocole doit s’accompagner d’un suivi d’au moins 6 mois des patients après leur prise en charge initiale. L’ensemble de ces travaux a des implications qui dépassent le cadre du Cambodge: Dans ses recommandations d’Avril 2018, l’OMS recommande désormais ce nouveau protocole IPC– le premier protocole PPE antirabique abrégé à 1 semaine. / Rabies causes more than 60,000 deaths worldwide each year, including 800 in Cambodia, where canine-mediated rabies virus circulates. Death occurs in nearly 100% of rabies cases, a disease which is nearly 100% avoidable by timely and adequate rabies post-exposure prophylaxis (PEP). Improving access to PEP in rural areas of endemic countries will spare human lives in the short term. This epidemiology PhD used the data collected in patients referred to the rabies prevention clinic and tested dogs at Institut Pasteur du Cambodge (IPC), Phnom Penh. After a baseline assessment of access to and obstacles to access timely and adequate PEP in Cambodia, this PhD aims to contribute to improving: 1/ geographical access and 2/ financial access to PEP for rural populations in Cambodia. We developed an original strategy to identify populations with a high risk of PEP noncompletion after a bite by a potentially rabid dog. This should help improve geographical access to PEP following the implementation in July 2018 of a peripheral rabies prevention center in Western Cambodia. This strategy can be applied to identify difficulties in accessing health services relevant to other health issues, under certain conditions. After patient callback and analysis of rabies deaths among those who did and did not complete the 4-sessions/1-month intradermal PEP regimen of their own accord, we were unable to demonstrate a difference in rabies mortality among patients who only received 3 vaccine sessions over the first week compared to those receiving at least 4 sessions/one month. Abridging the protocol to one week would reduce direct and indirect costs and the loss of income during PEP in the Capital. The adoption of this abridged regimen must be associated with a strengthened clinical monitoring system for at least 6 months following patients’ initial PEP.The work presented in this PhD has implications which reach beyond Cambodia: WHO recommends this new IPC regimen – the first approved one-week, abridged rabies PEP regimen – in its April 2018 guidelines.

Células HEK293T e Huh7 foram adaptadas em meios livres de soro fetal bovino (SFM). Parâmetros metabólicos e de crescimento foram avaliados, além da expressão gênica heteróloga, utilizando um sistema de expressão que produz pseudo-partículas (ppHCV), derivadas do vírus da Leucemia Murina (MLV) e da Hepatite C (HCV). A adaptação foi realizada através de diluição sequencial para SFM. A linhagem HEK293T foi adaptada em dois SFM: Hybridoma-SFM e CHO-S-SFMII, a linhagem Huh7 foi adaptada nos quatro SFM escolhidos. O consumo de substratos para cada linhagem foi diferente entre os SFM, apesar de o crescimento celular ter sido semelhante. Para a análise da expressão gênica, três vetores foram co-transfectados em células HEK293T. Foi observado que para a produção de ppHCV, o tempo de coleta foi de 48 horas. O método de co-transfecção por lipofectamina produziu mais cópias de vírus, sendo que quantificações de 5,30x103 cópias RNA/&#956;L foram encontradas para vírus produzidos em células adaptadas no meio Hybridoma-SFM através de qRT-PCR. Estas ppHCV foram usadas para infectar células Huh7, células infectadas produziram cerca de 10 ng de proteína recombinante/106 células. / HEK 293-T and Huh7 cells were adapted in serum free mediu (SFM). Metabolic and growth parameters were assessed, as well as heterologous gene expression, using an expression system that produces pseudo-particles (ppHCV), derived from the murine leukemia virus (MLV), and Hepatitis C (HCV). The adaptation was performed by sequential dilution in SFM. The HEK- 293T line was adapted in two SFM: Hybridoma-SFM and CHO-S-SFMII, the Huh7 line was adapted in four chosen SFM. The consumption of substrates were different for each line in SFM, while cell growth was similar. For the analysis of gene expression, three vectors were co-transfected into HEK-293T cells. It was observed that for the production of ppHCV, the collection time was 48 hours. The method of co-transfection with lipofectamine produced more copies of the virus into the cells, 5,30 x103 RNA copies/&#956;L were found to virus produced in the cells adapted in Hybridoma- SFM, by qRT-PCR. These ppHCV were used to infect Huh 7, infected cells produced around 10 ng recombinant protein /106 cells.