Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000424905-Texto+Completo-0.pdf: 1635393 bytes, checksum: 130e114aa7e9842c1d462f5f400791c9 (MD5) Previous issue date: 2010 / Introduction: Peritoneal membrane continuous exposition to conventional peritoneal dialysis solutions is an important risk factor related to structural and functional alterations. Objective: To compare in vitro cell viability in mice fibroblast NIH/3T3 after exposition to a neutral pH dialysis solution in comparison to cells exposed to a standard solution. Methods: Experimental study. In order to evaluate cellular viability, mice fibroblast NIH/3T3 cell culture were used in media containing conventional peritoneal dialysis solution or a neutral pH peritoneal dialysis fluid. Both solutions were tested in all the commercially available glucose concentrations. Results: Cell viability was evaluated with tetrazolium salt colorimetric assay. Fibroblast viability was significantly superior in the neutral pH solution in comparison to control, in all three glucose concentrations (Optical density - means ± SD: 1. 5%control 0. 295±0. 047 vs 1. 5%neutral pH 0. 372±0. 042 P<0. 001; 2. 3%control 0. 270±0. 036 vs 2. 3%neutral pH 0. 337±0. 051 P<0. 001; 4. 25%control 0. 284±0. 037 vs 4. 25%neutral pH 0,332 ± 0,032 P<0. 001; control vs neutral pH respectively, Student t Test). There was no significant difference in cell viability between the three concentrations of glucose when standard solution was used (ANOVA P=0. 218), although cell viability was higher after exposition to neutral pH peritoneal dialysis fluid at 1. 5% in comparison to 2. 3 and 4. 25% glucose concentrations (ANOVA P=0. 008: Bonferroni 1. 5%vs2. 3% P=0. 033, 1. 5%vs4. 25% P=0. 014, 2. 3%vs4. 25% P=1. 00). Conclusion: Cell viability was higher in the neutral pH dialysis solution, especially in the lower glucose concentration. A more physiological pH and lower glucose degradation products may be responsible for such results. / Introdução: A contínua exposição da membrana peritoneal às soluções de diálise peritoneal convencionais, consideradas não fisiológicas, é um dos fatores de risco para o desenvolvimento de alterações morfológicas e funcionais do peritônio. Objetivo: Comparar a viabilidade celular in vitro de fibroblastos de camundongos NIH/3T3 expostos a diferentes soluções de diálise peritoneal. Materiais e Métodos: Estudo experimental; onde foram realizadas culturas de fibroblastos empregando meios de cultura contendo diferentes soluções de diálise (padrão e pH-neutro) nas 3 concentrações de glicose disponíveis. A viabilidade celular foi avaliada pelo método do sal de tetrazólio. Resultados: A viabilidade celular foi significativamente superior na solução com pH neutro em comparação a solução controle, nas três concentrações de glicose (Densidade óptica-média ± dp: 1. 5%controle 0,295±0,047 vs 1,5%pH neutro 0,372±0,042 P<0,001; 2,3%controle 0,270±0,036 vs 2,3% pH neutro 0,337±0,051 P<0,001; 4,25%controle 0,284±0,037 vs 4,25%pH neutro 0,332 ± 0,032 P<0,001). Não ocorreu diferença significativa na viabilidade celular entre as três concentrações de glicose quando se usou a solução de diálise peritoneal padrão (ANOVA P=0,218), embora a viabilidade celular foi maior após a exposição à solução com pH neutro na concentração de glicose de 1,5% em comparação com 2,3 e 4,25% (ANOVA P=0,008: Bonferroni 1,5% vs 2,3% P=0,033, 1,5% vs 4,25% P=0,014, 2,3% vs 4,25% P=1,00). Conclusão: A viabilidade celular foi maior nos fibroblastos expostos a solução de diálise peritoneal com pH neutro, especialmente nas menores concentrações de glicose. É possível que o pH mais fisiológico e a menor quantidade de produtos de degradação da glicose possam ser responsáveis pelos resultados.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000419178-Texto+Completo-0.pdf: 2007989 bytes, checksum: be7bf028f4f59c8aac1c686ee0ecf9f8 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: Treatment of peripheral nerve loss is still a non-resolved problem. In the experimental research area, animal’s models have been used, with long nerve defects, in order to study the effect of different substances with capacity of promote nerve regeneration when incorporated inside of nerve conduits. As a measure of nerve regeneration, a functional effect it’s considered as the most important effect measurement, being the Sciatic Function Index (SFI) the most employed method after sciatic nerve injury in rats; however, its use has been questioned in models of nerve transection (neurotmeses). The objective of the present study is to study SFI behavior in a transection model, with a long gap of 12 mm, in rat’s sciatic nerve with the aim of verify if the SFI is a reliable tool to differentiate recovery patterns of function and nerve regeneration after long sciatic nerve defects. Methods: Thirty young adult female Wistar rats were divided in 5 groups, in which a nerve gap was created, with a gap of 12 mm in right sciatic nerve, after that, the nerve gap was repaired using autograft, or using a silicone nerve conduit, filled with fibrin glue at which bone derived stromal cells, nerve growth factor or a combination of both was added. As a functional measure the SFI was recorded each week since the fifth until the sixteen. Results: Of 24 animals operated with tubes 21 failed to reconstitute a nerve inside the conduit (87, 5%). Of the three animals that showed nerve bridging inside the conduit, neither shown any difference in the SFI score compare with animals without nerve growth. All animals repaired with silicone tube showed absence of improvement in SFI score during all time of follow up. After 16 weeks, the average SFI±SD of the 4 groups with tube was -77,88±8,3, and this average score was statistically lower than the autograft group, that was -56,97±12,71, with a p value =0,003. Even when this difference was significant, the autograft group showed a recovery of only 43% of its normal value, after 16 weeks of follow up. Discussion: The difference after 16 weeks of SFI score founded between groups with null effect (tube) and the best effect actually possible (autograft), was statistically significant, however the low precision of the measure and the low amplitude of possible values founded between them, cause that its method has low power. Conclusions: The SFI is not a reliable method to measure nerve repair after long nerve gap (12mm) in a sciatic nerve injury model in rats, because its low power to detect true differences. / Introdução: O tratamento de lesões com perda dos nervos periféricos é ainda um problema não resolvido. Na área de pesquisa experimental, modelos animais com perdas nervosas de grande porte têm sido usados com o objetivo de estudar o efeito de sustâncias promotoras da regeneração axonal adicionadas dentro de sistemas de tubulização. Como medida de regeneração nervosa, o efeito funcional é considerado como o mais importante – o índice funcional da marcha, ou Sciatic Function Index (SFI), é o método mais utilizado nas lesões de nervo ciático em ratos; seu uso, porém, tem sido questionado em modelos de transecção nervosa (neurotmese). O objetivo do presente trabalho experimental é estudar o desempenho do SFI, em um modelo de transecção e perda de grande porte (12 mm) em nervo ciático de ratos, com o fim de verificar se a utilização do SFI é uma ferramenta confiável para diferenciar padrões de recuperação funcional e regeneração nervosa após perdas segmentares de grande porte em ratos. Métodos: Foram utilizadas 30 fêmeas de ratos Wistar, adultos, isogênicos, divididos em 5 grupos, nos quais se realizou uma perda de 12 mm do nervo ciático direito. Posteriormente, tal perda foi reparada com auto-enxerto ou com tubo de silicone preenchido com uma matriz de fibrina, onde se adicionaram células mononucleares de medula óssea (CMMO), fator de crescimento neural (NGF) ou uma combinação destes. O índice funcional da marcha (SFI) foi medido entre as 5° e 16° semanas após a cirurgia. Resultados: Do total de ratos tratados com tubo, 21 dos 24 animais falharam em reconstituir nervo no tubo (87,5%). Os três animais em que se evidenciou crescimento de nervo dentro do tubo não mostraram diferenças no SFI em relação aos outros em que não cresceu nervo. Todos os animais com tubulização mostraram ausência de recuperação funcional no SFI durante o seguimento. Depois de 16 semanas, a média do SFI± DP dos 4 grupos com tubo foi -77,88 ± 8,3, obtendo valores significativamente piores aos obtidos com auto-enxertos, com média SFI ±DP, -56,97±12,71, com valor p=0,003. Ainda que a diferença tenha sido significativa, o grupo com auto-enxerto apresentou uma melhoria limitada: 43% do valor considerado normal, após 16 semanas de observação. Discussão: As diferenças do SFI encontradas entre os grupos com ausência de efeito (tubo) e o melhor efeito possível (auto-enxerto) foi significativa (p=0,003); porém, a baixa precisão da estimativa e a baixa amplitude de valores encontrada entre eles determinam um método com baixo poder. Conclusões: O índice funcional da marcha (SFI) não é um método adequado para avaliar regeneração nervosa após lesões com perda segmentar de 12 mm em nervo ciático de rato, por ter um baixo poder para detectar verdadeiras diferenças.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000430119-Texto+Completo-0.pdf: 2624494 bytes, checksum: c5eb7540491dc24cab0e9439ff72a802 (MD5) Previous issue date: 2011 / The histamine system of the brain has been implicated in both arousal and reinforcement. Previous evidence from our laboratory has shown that histamine receptors located into the hippocampus modulate learning and memory on the fear extinction and aversive processes. Therefore, to determine the role of hippocampal histaminergic receptors on recognition memory, adult male Wistar rats with infusion cannulae stereotaxically aimed to the CA1 region of dorsal hippocampus were trained in an object recognition learning task involving exposure to two different stimulus objects. Immediately, 30, 120 or 360 min after training, they received (1μl/side) agonist and antagonist from histamine receptors. Memory retention was assessed 24 hours after training. In the test session, one of the objects presented during training was replaced by a novel one. When infused in the CA1 region the ranitidine, H2 receptor antagonist, and imetit, H3 receptor agonist, blocked long-term memory retention in a time-,dose-dependent manner (30 to 120 min) without affecting exploratory behavior, anxiety state or the functionality of the hippocampus. Our data indicate that histaminergic system is involved in consolidation of object recognition memory. / A histamina cerebral tem sido relacionada ao estado de estímulo, excitação e reforço. Estudos prévios do nosso laboratório mostraram que os receptores de histamina localizados no hipocampo modulam o aprendizado e a memória da extinção do medo e de processos aversivos. Portanto, para determinar o papel dos receptores histaminérgicos na consolidação da memória, ratos Wistar machos adultos com cânulas posicionadas estereotaxicamente na região CA1 do hipocampo dorsal foram treinados na tarefa de reconhecimento de objetos que envolve a exposição do rato a dois diferentes objetos. Imediatamente, 30, 120 ou 360 min após o treino os animais foram infundidos (1 μl/lado) com agonistas ou antagonistas dos receptores histaminérgicos. 24 horas após o treino, os animais foram expostos a um objeto familiar e um objeto novo, para avaliar a consolidação das memórias. A ranitidina, antagonista do receptor H2 e o imetit, agonista do receptor H3, bloquearam a consolidação da memória quando infudidos na janela de tempo de 30 a 120 min. No entanto não afetaram o comportamento exploratório, estado de ansiedade ou funcionalidade do hipocampo. Nossos dados indicam que o sistema histaminérgico está envolvido na consolidação da memória de reconhecimento de objetos em ratos.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000433744-Texto+Completo-0.pdf: 2709153 bytes, checksum: ff7318acee1d49accb9162ce058c629e (MD5) Previous issue date: 2011 / Sodium bromide, first-generation antiepileptic drug, is still used to treat refractory epilepsy in children. Its mechanism is not fully elucidated. In this work, i-investigate its actions on the epileptiform activity (EA's) of non-synaptic region of the dentate gyrus in vitro, ii-compare his action with a solution containing high concentration of sodium chloride; blocker of chloride channels voltage dependent (SITS, DIDS), iii-investigate the possible involvement of gap junctions at the time of action of the drug. The study involved experimental measurements such as extracellular field records and computer simulations. AE'S returned inhibition induced model of zero calcium and high potassium with 9 mM NaBr (n=6). With the perfusion of calcium solution zero high concentration of NaCl in the records (n=6) obtained a field transient blockage. We compared the effect of NaBr with chloride channel blockers of voltage-dependent (DIDS 250 μM, n=8 and SITS 1 mM, n=3), we obtained a similarity in the records of extracellular field potential, suggesting a possible involvement of chloride channels voltage dependent. The blocker of gap junctions (N-octanol) at concentrations of 0,07 mM was used with 5 mM bromide. This reduced the high frequency elucidated in the transient period during drug application. The effect of Br- isn´t just in membrane potential, through its greater permeability compared to the Cl- inducing hyperpolarization, but also show a higher permeability to the chloride channels voltage-dependent. The increased frequency of discharges can be due to the competitive effect of Br- on chloride channels, reducing the permeability to Cl-. The NaBr has a little affinity for the cotransporter NKCC1 and partially replacing Cl- in cotransporter KCC2. The origin of high frequency in records with bromide, is probably related with the gaps junctions. / O brometo de sódio, fármaco antiepiléptico de primeira geração, ainda é utilizado para tratar epilepsia refratária em crianças. Seu mecanismo de ação não está totalmente elucidado. Neste trabalho propomos, i- investigar sua ação nas atividades epileptiformes (AE‟S) de natureza não-sináptica na região do giro dentado in vitro; ii- comparar sua ação com solução contendo alta concentração de cloreto de sódio; com bloqueadores de canais de cloreto dependente de voltagem (SITS, DIDS); iii-investigar o possível envolvimento das gap junctions no momento da atuação do fármaco. O estudo envolveu medidas experimentais tais como registros extracelulares de campo e medidas do sinal óptico intrínseco. Obtivemos inibição das AE‟S induzidas pelo modelo do zero cálcio e alto potássio com 9 mM de NaBr (n=6). Com a perfusão da solução de zero Ca++ + alta concentração de NaCl nos registros (n=7) de campo, obtivemos um bloqueio transitório. Comparou-se o efeito do NaBr com os bloqueadores de canais de cloreto dependente de voltagem o SITS 1mM (n=3) e DIDS 250 μM (n=8), obteve-se uma semelhança nos registros de potencial elétrico extracelular, mostrando possível envolvimento dos canais de cloreto dependente de voltagem. O bloqueador de gap junctions (N-octanol) em concentrações de 0,07mM foi utilizado juntamente com o brometo 5mM. Este reduziu à alta freqüência elucidada no período transiente durante a aplicação da droga.O efeito do Br- não é apenas no potencial de membrana, por meio de sua maior permeabilidade em relação ao Cl- induzindo hiperpolarização, mas apresenta também uma maior permeabilidade aos canais de cloreto dependente de voltagem. O aumento da frequência das descargas pode ser devido ao efeito competitivo do Br- sobre os canais de cloreto, reduzindo a permeabilidade ao Cl-. O NaBr tem pouca afinidade pelos cotransportadores NKCC1 e substitui parcialmente Cl- nos cotransportadores KCC2. A origem da alta freqüência nos registros com o brometo, provavelmente está relacionada com as gaps junctions.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000411460-Texto+Completo-0.pdf: 1742083 bytes, checksum: 3931f88773ce035b46bd7477e96796d2 (MD5) Previous issue date: 2009 / Evidence suggests that the NO/sGC/PKG pathway plays a key role in memory processing but the actual participation of this signaling cascade in the amygdala during memory consolidation remains unknown. Here we show that when infused in the amygdala immediately after inhibitory avoidance training, but not later, the NO synthase inhibitor L-NNA hindered long-term memory retention without affecting locomotion, exploratory behavior, anxiety state or retrieval of the avoidance response. The amnesic effect of L-NNA was not state dependent and was mimicked by the soluble guanylyl cyclase inhibitor LY83583 and the PKG inhibitor KT-5823. On the contrary, posttraining intra-amygdala infusion of the NOS substrate L-Arg, the NO-releasing compound SNAP or the non-hydrolysable analog of GMPc 8Br-GMPc increased memory retention in a dose-dependent manner. Co-infusion of 8Br-GMPc reversed the amnesic effect of L-NNA and LY83583 but not that of KT-5823. Our data indicate that the NO-induced activation of PKG in the amygdala is a necessary step for consolidation of inhibitory avoidance memory. / Evidências sugerem que a via de sinalização NO/sGC/PKG tem papel chave no processamento da memória, entretanto a atuação desta cascata de sinalização na amígdala durante a consolidação da memória permanece desconhecida. Neste trabalho se comprova que quando infundido na amígdala de ratos imediatamente após o treino na tarefa de esquiva inibitória, porém não em outros tempos de infusão, o inibidor da NO sintase, L-NNA, prejudica a retenção da memória de longa duração, sem afetar a locomoção, o comportamento exploratório, o estado de ansiedade ou a expressão da resposta aversiva dos animais. O efeito amnésico do L-NNA não demonstra ser dependente de estado e foi mimetizado pelo inibidor da guanilil-ciclase solúvel, LY83583, e pelo inibidor da PKG, KT5823. Pelo contrário, a infusão pós-treino do substrado da NOS, L-Arg, do composto doador de NO, SNAP, e do análogo não-hidrolizável do GMPc, 8-Br-GMPc, aumentaram a retenção da memória de forma dose-dependente. A co-infusão de 8-Br-GMPc reverteu o efeito amnésico do L-NNA e do LY83583, porém não a do KT5823. Os dados indicam que a ativação da PKG induzida pelo NO na amígdala é um passo necessário à consolidação de memórias aversivas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000423333-Texto+Completo-0.pdf: 1058400 bytes, checksum: 190a7d318f751aa812d5db628604c8e0 (MD5) Previous issue date: 2010 / Objetivos: Avaliar a influência de dois paradigmas distintos de desnutrição (intra-uterina x extra-uterina) no peso corporal e cerebral, no limiar para crises convulsivas e na morfometria do hipocampo de ratos em desenvolvimento. Metodologia: O modelo de desnutrição intra-uterina constou em reduzir pela metade a ração oferecida à fêmea durante todo o período gestacional; a desnutrição extra-uterina constou da limitação progressiva da lactação através do afastamento da fêmea nutriz de seus filhotes, de P2 a P15. A indução de crise convulsiva foi realizada através da exposição ao flurotil, em P15. No mesmo dia, os animais foram submetidos à perfusão transcardíaca e seus cérebros foram processados histologicamente. A análise morfométrica baseou-se na estimativa do número total de neurônios das regiões CA1, CA2, CA3, CA4 e giro denteado do hipocampo, através do cálculo do volume e da densidade celular. Resultados: A desnutrição extra-uterina reduziu de forma significativa o peso corporal dos animais, tanto em P7 como em P15; e cerebral, somente no grupo sem crise, em relação aos controles nutridos. O limiar para crise convulsiva também foi significativamente reduzido nos animais desnutridos extra-uterinos em relação aos nutridos e desnutridos intra-uterinos. A desnutrição intra-uterina per se reduziu significativamente o número de células das regiões CA2 e CA3 do hipocampo, em relação aos animais nutridos.Não encontramos diferença significativa entre os dois tipos de desnutrição em relação ao número de células nas cinco regiões hipocampais. No giro denteado encontramos um aumento significativo (p=0,03) de células no grupo nutrido submetido à crise convulsiva, em relação ao nutrido sem crise. Conclusões: O paradigma de desnutrição extra-uterina foi mais eficaz que o intra-uterino na redução no peso corporal e cerebral dos animais em estudo, assim como na redução do limiar para crises convulsivas. A morfometria do hipocampo não evidenciou diferença significativa quando comparados os paradigmas de desnutrição entre si. Entretanto, a desnutrição intra-uterina trouxe redução celular em CA2 e CA3 em comparação aos controles nutridos. Os animais nutridos submetidos à crise convulsiva apresentaram maior celularidade no giro denteado.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000429460-Texto+Completo-0.pdf: 854298 bytes, checksum: 0d76bb40742d75ad97c97bf135494e05 (MD5) Previous issue date: 2010 / Neonatal handling is considered an intervention that causes lasting effects on emotional behavior and reactivity to stress in adult animals. The period immediately after birth is a critical period when the immature brain is permanently altered by gonadal steroid hormones and adrenal. Previous studies have shown that neonatal handling can influence mechanisms regulating hydroelectrolytic balance and renal function. The components of the renin-angiostensina (RAS) are highly expressed in the kidney during renal development and are linked to specific stages of nephrogenesis and vascularization is higher in newborn rats. This system has a fundamental role in the mechanisms of inflammation and protection of cells and tissues. Angiotensin II is the main effector hormone in this cascade, and binds to two types of receptors: AT1 and AT2, which have opposite functions. The aim of this study was to evaluate the effect of neonatal handling on the renal RAS and oxidative balance in rats. Handled animals presented an increase in AT2 receptor expression and a decrease in AT1 receptor expression. An increase in plasmatic ANG II and in kidney TBARS was also found. These results indicate that neonatal handling changes the renin-angiotensin system, justifying the renal alterations described. / A manipulação neonatal é considerada uma intervenção que ocasiona efeitos duradouros no comportamento emocional e na reatividade ao estresse em animais adultos. O período imediatamente após o nascimento é um período crítico quando o cérebro imaturo é permanentemente alterado por hormônios esteróides gonadais e da supra-renal. Estudos prévios demonstraram que a manipulação neonatal pode influenciar mecanismos de regulação do equilíbrio hidroeletrolítico e na função renal. Os componentes do sistema renina-angiostensina (SRA) no rim são altamente expressos durante o desenvolvimento renal e estão ligados a estágios específicos da nefrogênese e vascularização, tendo maior expressão em ratos recém-nascidos. Esse sistema tem papel fundamental nos mecanismos de inflamação e defesa de células e tecidos do organismo. A angiotensina II é o principal hormônio efetor nessa cascata e é também considerada um hormônio pró-oxidante, e liga-se a dois tipos de receptores: AT1 e AT2, que têm funções opostas. O estresse oxidativo (EO) é definido como um desequilíbrio entre a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO) e mecanismos de defesa antioxidante. Essas EROs quando em excesso causam dano a vários componentes celulares. O objetivo dessa pesquisa foi avaliar o efeito da manipulação neonatal sobre o SRA e o balanço oxidativo renal de ratos. Verificou-se que os animais manipulados apresentaram aumento na expressão de renina e do receptor AT2 e uma diminuição do receptor AT1. Foi encontrado um aumento de ANG II plasmática e também de TBARS no rim. Estes resultados indicam que a manipulação neonatal altera o sistema renina-angiotensina e justificam as alterações renais já descritas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000411533-Texto+Completo-0.pdf: 10784164 bytes, checksum: 73554a4ce1f4dd536f8f451c4ea37d2c (MD5) Previous issue date: 2009 / Evidence suggests that the NO/cGMP/PKG pathway plays a key role in memory processing but the actual participation of this signaling cascade in the consolidation of declarative memory, such as object recognition (OR), remains unknown. Here we show that consolidation of long-term object recognition memory enhances the nitric oxide synthase neuronal activity (nNOS) in the CA1 region of the dorsal hippocampus of rats. Indeed, when infused immediately after but not 180 and 360 min after training in the OR task, the nNOS inhibitor, L-NN, hindered long-term memory retention without affecting locomotion, exploratory behavior, anxiety state or hippocampal functionality. The amnesic effect of L-NN was not due to statedependency and was equally produced by the hippocampal infusion of soluble guanylyl cyclase (sGC) inhibitor, LY83583, and by the protein kinase G (PKG) inhibitor, KT5823.Furthermore, post-training infusion of the non-hydrolysable analog of cGMP, 8Br-cGMP, reversed the L-NN and LY83583 effect but not that induced by KT5823. The noradrenaline (NA) regulate NO/sGC/PKG pathway activation in distinct preparations. In accordance with this fact, the amnesia induced by intrahippocampal administration of antagonist -adrenergic receptor, timolol, immediately after training in the OR task is not reversed by co-infusion of 8-Br-cGMP or of NO donator, SNAP. When administrated in the CA1 region of the dorsal hippocampus together with LY-83583, KT-5823 or L-NN, NA reversed the amnesic effect of these compounds. Our results indicate that the activation of NO/cGMP/PKG pathway in the CA1 region of the dorsal hippocampus is essential for consolidation of OR memory and suggests that the ß-adrenergic receptors, has a fundamental participation on regulation of these events. / Evidências sugerem que a via de sinalização NO/GMPc/PKG tem papel chave no processamento da memória, entretanto a atuação desta cascata de sinalização no hipocampo durante a consolidação de memórias declarativas, tais como a de reconhecimento de objetos (RO), permanece desconhecida. Aqui será mostrado que a aquisição da memória associada ao treino na tarefa de reconhecimento de objetos aumenta a atividade da óxido nítrico sintase neuronal (NOSn) na região CA1 do hipocampo dorsal de ratos. Ainda mais, quando infundido nesta região do cérebro imediatamente, mas não 180 ou 360 min após o treino na tarefa de RO, o inibidor da NOSn, L-NN, prejudica a retenção da memória em questão, sem afetar a locomoção, o comportamento exploratório, nem o estado de ansiedade dos animais ou causar lesão ao hipocampo. O efeito amnésico do L-NN não se deve a indução de dependência de estado e é mimetizado pela infusão intra-hipocampal do inibidor da guanilil-ciclase solúvel (GCs), LY83583 ou do inibidor da proteína cinase G (PKG), KT5823.Ainda, a infusão pós-treino do análogo não-hidrolizável do GMPc, 8- Br-GMPc, reverte o efeito de L-NN e LY5823, mas não o de KT5823. A noradrenalina (NA) regula a ativação da via NO/GMPc/PKG em distintas preparações. Em concordância com este fato a amnésia induzida pela administração intra-hipocampal do antagonista -adrenérgico, timolol, imediatamente após o treino na tarefa de RO não é revertida pela co-infusão de 8-Br-GMPc e do doador de NO, SNAP. Quando administrada na região CA1 do hipocampo dorsal juntamente com LY-83583, KT-5823 ou L-NN, a NA reverte o efeito amnésico destes agentes. Nossos dados indicam que a ativação da cascata de sinalização NO/GMPc/PKG na região CA1 do hipocampo dorsal é fundamental para a normal consolidação da memória de reconhecimento de objetos e sugerem que os receptores ß-adrenérgicos desempenham um papel fundamental na regulação destes eventos.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000393516-Texto+Completo-0.pdf: 10259147 bytes, checksum: 763119f3451fafb413c3fb6cda86f10f (MD5) Previous issue date: 2007 / Introduction: Hypoxic-ischemic injury is an important cause of mortality and morbidity in infants, often leading to mental retardation, epilepsy and cerebral palsy. Human umbilical cord blood (HUCB), which is rich in adult stem cells, is a potential source of cellular therapy in perinatology. Objective: In this study, we investigated the effects of HUCB cells on motor, spatial orientation memory and histological outcome in neonate rats subjected to hypoxicischemic (HI) injury. Methods: Seven-days-old rats underwent right carotid artery occlusion followed by exposure to 8% O2 inhalation for 2 h. Twenty-four hours after HI injury, rats received either saline solution or HUCB cells intravenously. We also added a group of shamoperated animals. After three weeks, spatial orientation memory was assessed using Morris Water Maze and motor evaluations were conducted by open-field activity, cylinder, grid walking and ledged beam walking tests. Subsequently, rats were sacrificed for histological analyses. Results: HI rats showed a significant spatial orientation memory impairment and a volumetric decrease of the ipsilateral hemisphere to arterial occlusion. In motor tests, animal subjected to HI injury showed only a tendency to deficits in cylinder and grid walking tests. However, animals that received HUCB cells did not show statistical difference in behavioral tests and cerebral atrophy when compared to saline group. Conclusion: The present study suggests that intravenous injection of HUCB cells does not improve functional and histological outcomes in HI rats with severe brain damage. Additional investigations, considering aspects as dose, time to transplantation, delivery methods, immunosuppression and associated therapies are necessary to assessment the clinical relevance of cellular therapy in neonatal brain damage. / Introdução: A lesão hipóxico-isquêmica neonatal é uma causa importante de mortalidade e morbidade na infância, levando, freqüentemente, a retardo mental, epilepsia e paralisia cerebral. O sangue do cordão umbilical humano, rico em células-tronco adultas, é uma fonte potencial para a terapia celular em perinatologia. Objetivo: Investigar os efeitos das células-tronco de cordão umbilical humano na memória de orientação espacial, no desempenho motor e nos desfechos histológicos em ratos neonatos submetidos à hipóxia-isquemia neonatal (HI). Métodos: Ratos de 7 dias de vida foram submetidos à oclusão da artéria carótida direita seguida por exposição a ambiente hipóxico (8% O2) por 2 h. Após vinte e quatro horas, os ratos receberam solução salina ou células-tronco de cordão umbilical humano por via intravenosa. Um grupo de animais cirurgia-simulada também foi adicionado. Após três semanas, a memória espacial foi avaliada através do labirinto aquático de Morris e as avaliações motoras aplicadas foram o campo aberto, os testes do cilindro, da grade e da trave. Subseqüentemente, os ratos foram sacrificados para as avaliações histológicas. Resultados: Ratos com HI mostraram um significativo prejuízo na memória espacial e uma redução volumétrica do hemisfério ipsilateral à oclusão arterial. Nos testes motores, os animais submetidos à HI mostraram apenas uma tendência a déficits nos testes do cilindro e da grade. No entanto, os animais tratados com células-tronco de cordão umbilical humano não mostraram diferenças estatísticas nos testes comportamentais e na atrofia cerebral quando comparados ao grupo que recebeu solução salina. Conclusão: Este estudo sugere que a injeção intravenosa de células-tronco de cordão umbilical humano não melhora os desfechos comportamentais e histológicos em ratos após HI severa. Investigações adicionais, considerando aspectos como dose, tempo para o transplante, métodos de injeção, uso de imunossupressão e de terapias associadas são necessárias para avaliar a relevância clínica da terapia celular na lesão cerebral neonatal.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:07:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000423252-Texto+Completo-0.pdf: 3176835 bytes, checksum: f047be27c11502eb5aa36cd715f80816 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: Studies on novel therapies for atopic asthma should focus on modulating the immune response before diseases expression, with drugs or products capable of modifying T-cell phenotypes in early life. The best moment for therapeutical interventions with this objective is not clear and well established. Aims: To analyze the effect of exposition to Angiostrongylus cantonensis extract in different moments on a murine model of allergic pulmonary response to ovalbumin. Methods: Angiostrongylus cantonensis extract was injected intraperitoneally in adult BALB/c mice, in 3 different moments of ovalbumin (OVA) protocol: 3 weeks prior (early intervention; neonatal period), 1 week prior (pre-sensitization) and 3 weeks after OVA protocol (post-sensitization). Total and differential cell counts were measured in bronchoalveolar lavage (BAL). Eosinophil peroxidase (EPO) and histological analisys from lung tissue were perfomed. Results: In the early intervention group, total cell counts (p=0. 01), neutrophils (p=0. 015), lymphocytes (p=0. 01) from BAL and EPO (p=0. 008) in lung tissue were reduced, when compared to the control group. Histological analysis showed a marked reduction in eosinophil infiltration in the airways of animals with early intervention. Conclusions: Neonatal period was the moment when parasite extract was more efficacious to inhibit eosinophilic pulmonary inflammation in mice. The first months of life seem to be the best period to test novel immunomodulatory therapies in atopic asthma. / Introdução: Pesquisas sobre novas terapias em asma deveriam ter como alvo a mudança na resposta imune antes da expressão da doença, com fármacos ou substâncias capazes de modificar os fenótipos das células T no início da vida. O melhor momento para intervenções terapêuticas em asma, com este objetivo, ainda não está claro e estabelecido. Objetivos: analisar o efeito da exposição de extrato parasitário de Angiostrongylus cantonensis em diferentes momentos do modelo murino de resposta pulmonar alérgica a ovalbumina. Métodos: Extrato de Angiostrongylus cantonensis foi injetado por via intraperitoneal (i. p) em camundongos BALB/c adultos, em 3 diferentes momentos do protocolo de resposta pulmonar alérgica a ovalbumina (OVA): 3 semanas antes (intervenção precoce; período neonatal), 1 semana antes (pré-sensibilização), e 3 semanas depois do início do protocolo de OVA (pós-sensibilização). Foram mensuradas a contagem total e diferencial de células no lavado broncoalveolar (LBA), os níveis de peroxidase eosinofílica (EPO) e alterações histológicas no tecido pulmonar. Resultados: No grupo com intervenção neonatal houve redução significativa da contagem total de células (p=0,01), de neutrófilos (p=0,015) e linfócitos (p=0,01) no LBA e de EPO no tecido pulmonar (p=0,008). A análise histológica demonstrou uma redução do infiltrado pulmonar eosinofílico peribrônquico e perivascular mais acentuada no grupo com intervenção precoce. Conclusões: O período neonatal foi o momento onde o extrato parasitário foi mais eficaz em inibir a resposta pulmonar alérgica em camundongos. O melhor momento para testar novas terapias imunomoduladoras em asma de origem atópica parece ser os primeiros meses de vida.