Orientador: Pedro Tadeu Galvão Vianna / Banca: Yara Marconde Machado Castiglia / Banca: Eneida Maria Vieira / Banca: Anita Leocárdia de Mattos / Banca: Oscar César Pires / Resumo: Justificativa e Objetivo: Hiperglicemia perioperatória é um preditor de morbimortalidade. A proposta desta pesquisa foi examinar o efeito da ciclosporina A (CsA) na lesão de isquemia/reperfusão renal durante hiperglicemia transitória. Material e Métodos: Após aprovação do Comitê de Ética e Pesquisa Animal da Instituição os ratos foram randomicamente distribuídos em seis grupos de seis animais cada: HISO (isoflurano =Iso + IRI); HP (Propofol =Prop + IRI); HISO CsA (Iso + IRI + CsA); HP CsA (Prop + IRI + CsA);SISO (Sham - Iso); S P (Sham -Prop );). Os animais receberam 1 mg.kg-1.min-1 (equivalente a 0.16 mg.kg-1.min-1 para humanos) ou propofol (HP, HP CsA and SP) ou isoflurano (HISO, HISO CsA and SISO). Hiperglicemia foi induzida por injeção intraperitoneal de 2.5 g.kg-1 de glicose em todos os grupos. Ciclosporina 5 mg.kg-1 foi injetada i.v. 5 min antes da reperfusão nos grupos HISOCsA and HPCsA. Os dois grupos sham foram submetidos à nefrectomia direita e hiperglicemia somente. Os demais grupos foram submetidos à isquemia renal esquerda por 25 minutos. Os níveis de creatinina sérica foram determinados antes (T1) e após 25 minutos de isquemia (T2). Vinte e quatro horas após (T3) foi colhida nova amostra de sangue e realizada a nefrectomia esquerda para análise histológica, usando a tabela de lesão tubular (0 -5=lesão máxima). As células do rim esquerdo foram avaliadas, por citometria de fluxo (CMF), para apoptose, como percentual de apoptose inicial (APTi), necrose e células viáveis (CV)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Background and Goal of Study: Perioperative hyperglycaemia is predictors of morbidity and mortality1. The purpose of this investigation was to examine the effect of cyclosporine A (CsA) on renal ischemia/reperfusion injury (IRI) during and transient hyperglycemia. Materials and Methods: After approved by the institution's Committee of Animal Research Ethics rats were randomly assigned into six groups of six animals each: HISO (isoflurane =Iso + IRI); HP (Propofol =Prop + IRI); HISO CsA (Iso + IRI + CsA); HP CsA (Prop + IRI + CsA);SISO (Sham - Iso); S P (Sham -Prop );). The animals received 1 mg.kg-1.min-1 (equivalent to 0.16 mg.kg-1.min-1 for humans) of either propofol (HP, HP CsA and SP) or isoflurane (HISO, HISO CsA and SISO). Hyperglycaemia was induced by injecting 2.5 g.kg-1 of glucose solution intraperitoneal for all groups. Cyclosporine 5 mg.kg-1 was injected i.v. 5 min before reperfusion in groups HISO CsA and HP CsA. Both sham groups underwent right nephrectomy and hyperglycaemia induction only. The other groups were submitted to left renal ischemia for 25 minutes. Serum creatinine levels were determined before (T1) and after 25 minutes of ischemia (T2). Twenty four hours after (T3) blood collection and left kidney removal were performed for histological analysis, using a tubular injury score system (0 -5= injury maximum). In addition, cells from the left kidney were evaluated for apoptosis by flow cytometry (FCM) as a % of initial apoptosis (APTi), necrosis and viable cells (VC). Results and Discussion: ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Norma Sueli Pinheiro Módolo / Banca: / Resumo: Lesão renal por isquemia e reperfusão estão envolvidas em muitas condições clínicas. A lesão de reperfusão leva a formação de espécies reativas de oxigênio e o alopurinol apresenta o potencial de diminuí-las. Os novos biomarcadores podem realizar o diagnóstico da lesão de maneira precoce. O objetivo desse estudo foi investigar se o alopurinol tem efeito protetor sobre os rins utilizando os novos biomarcadores de dano (NGALp, NGALu,KIM-1e IL-18), a função renal e a histologia renal durante lesão de isquemia e reperfusão (I/R) em ratos uninefrectomizados. Trinta e dois ratos Wistar foram randomizados em 4 grupos: Sham (S): laparotomia e nefrectomia direita. Controle (C): laparotomia e nefrectomia direita, I/R em rim esquerdo. Controle Alopurinol (CA): laparotomia e nefrectomia direita, alopurinol na dose de 100 mg.kg-1.d-1. Alopurinol (A): laparotomia e nefrectomia direita, I/R em rim esquerdo, alopurinol na dose de 100mg.kg-1.d-1. Foram analisados NGALp, NGALu, IL-18, KIM-1, creatinina e histologia. Nível de significância considerado quando p<0,05. Todos grupos aumentam a creatinina ao longo do experimento com A≈C>S≈CA. A NGALp e IL-18 aumentaram em todos os grupos, porém todos evoluem de forma semelhante. A NGALu aumentou no grupo C, porém todos os grupos evoluem de forma semelhante. KIM-1 foi maior no grupo A em relação ao C e intermediário nos grupos S e CA. Em relação aos achados histológicos, os grupos C e A apresentaram grau de lesão no lado esquerdo significativamente maior que os grupos S e CA. Não existiu diferença histológica entre C e A e nem entre S e CA. O alopurinol na dose de 100 mg.kg-1.dia-1 não exerceu efeito protetor ou danoso aos rins submetidos a lesão de I/R na avaliação da função, da histologia renal e dos biomarcadores novos / Abstract: Ischemic and reperfusion kidney injury are involved in many clinical conditions. The reperfusion injury leads to reactive oxygen species formation and allopurinol has the potential to inhibit this process. The novel biomarkers can perform early diagnosis of acute kidney injury. The purpose of this study was to investigate whether allopurinol had a renal protective effect measuring renal function, novel biomarkers levels (pNGAL, uNGAL and IL-18) and studying histopathologic features during renal ischemia-reperfusion (I/R) injury in uninephrectomized rats. 32 Wistar Rats were randomized in 4 groups: Sham (S): laparotomy and right nefrectomy. Control (C): laparotomy and right nefrectomy, I/R maneuvers in left kidney. Allopurinol Control (AC): laparotomy and right nefrectomy, pretreated with allopurinol 100mg.kg-1.d-1. Allopurinol (A): laparotomy and right nefrectomy, I/R maneuvers in left kidney, pretreated with allopurinol 100mg.kg-1.d-1. pNGAL, uNGAL, IL-18, KIM-1, serum creatinine and histopathologic features were analysed. Differences in the mean values were deemed significant at P<0.05. All groups showed a significant rise in serum creatinine throughout the experiment being A≈C>S≈AC. pNGAL and IL-18 showed a significant rise in all groups too, however all of them evolve in a similar way. uNGAL showed signifcantly rise in group C, but all of them evolve in a similar way. KIM-1 was higher in group A than C and had intermediate values in groups S and AC. With regard to histopathologic features, C and A groups showed left kidney injury signifcantly higher than S and AC groups. There were no difference in histopathologic features between groups C and A neither between S and AC. Allopurinol given 100mg.kg-1.d-1 did not seem to exert protective or harmful effects in kidneys that underwent I/R injury under functional, novel biomarkers levels and histopathologic features evaluation / Mestre

Orientador: Áureo Evangelista Santana / Banca: José Corrêa de Lacerda Neto / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: Com o objetivo de avaliar e comparar as alterações clínicas e hematológicas de equinos submetidos a modelo experimental de obstrução intestinal, 24 animais foram distribuídos em quatro grupos, controle instrumentado (GI), obstrução do duodeno (GII), íleo (GIII) e cólon maior (GIV). O exame clínico e a colheita das amostras de sangue e de líquido peritoneal foram realizados antes da cirurgia (T0), durante as obstruções (T30ob-T180ob) e após as desobstruções (T30des-T7º). Os equino do GII e do GIII apresentaram sinais de dor abdominal, diminuição da motilidade intestinal e aumento da freqüência cardíaca e respiratória. Nestes mesmos grupos houve diminuição na contagem de leucócitos a qual posteriormente, cedeu lugar a leucocitose por neutrofilia, com desvio à esquerda. Na análise hemogasométrica apenas os animais do GIV e os do GII, nos apresentaram aumento do pH(v), da cHCO- 3(vP) e da cBase(v) que, acrescidos do aumento da pCO2(v) e da ctCO2(v), caracterizou a alcalose metabólica com compensação respiratória. No líquido peritoneal os animais do GII e do GIII apresentaram aumento na contagem global celular, bem como na concentração de proteína total, fibrinogênio, lactato e de fósforo inorgânico. Os resultados clínico-laboratoriais obtidos foram associados à distensão intestinal, resultante do modelo de obstrução e, indicam que algumas alterações laboratoriais quando analisadas em conjunto com os dados obtidos no exame clínico, podem auxiliar na identificação do segmento intestinal obstruído, na elaboração do prognóstico e no acompanhamento da evolução do processo de cura. / Abstract: This study aimed to evaluate and compare clinical and hematological alterations in horses submitted to an experimental model of intestinal obstruction. Twenty-four animals were divided in four groups: instrumented control (GI), duodenum obstruction (GII), ileum obstruction (GIII) and large colon obstruction (GIV). Clinical examination was carried out and blood and peritoneal samples were collected before surgery (T0), during the obstruction (T30ob-T180ob) and after unblocking procedures (T30des-T7º). Animals from GII and from GIII presented signs of abdominal pain, reduced gastrointestinal sounds and increased heart and respiratory rates, as well as leukopenia and neutropenia which later developed to leukocytosis, neutrophilia and left shifts. Animals from GIV and from GII presented higher values for pH(v), cHCO- 3(vP) and cBase(v) which, added to the increase of pCO2(v) and ctCO2(v), characterized the metabolic alkalosis with respiratory compensation. After unblocking procedure animals from GII and GIII presented higher global cells counts, as well as in fibrinogen, total protein concentrations, lactate and inorganic phosphorus concentrations in peritoneal fluid were also increased. The results were associated to enteric injury from the obstruction model showing that some laboratorial alterations when analyzed, including clinical examination, can be helpful at the identification of which intestinal segment is blocked, for draw up a prognosis and can be used as support in the evolution of cure process. / Doutor

Torção testicular (TT) é uma síndrome urológica comumente encontrada em recém nascidos, crianças e adolescentes. Neste trabalho foi estudada as lesões morfológicas e a função reprodutiva em ratos adultos que sofreram TT, em diferentes idades de maturidade sexual e o efeito protetor da L-arginina, contra os danos causados pela isquemia/reperfusão na torção testicular. Dezoito ratos pré-púberes (4 semanas de vida) dezessete púberes (6 semanas de vida) e dezessete adultos (9 semanas de vida) foram submetidos à TT. Sob anestesia o testículo direito foi rotacionado em 720 e fixado, sendo então destorcido após 4 horas. Vinte e quatro ratos (ARG4, n=8, ARG6, n=8 e ARG9 n=8) foram submetidos ao tratamento com 650mg/kg de L-arginina, por via oral, durante 7 dias. Outros trinta ratos de mesma idade sofreram cirurgia simulada (SH4, n=10, SH6, n=10 e SH9, n=10). Com 12 semanas de idade, foram submetidos ao acasalamento controlado com 3 fêmeas e ao vigésimo dia de gestação o número de fetos, corpos lúteos, absorções e implatações foram contados. Na 14 semana, os ratos foram mortos e os espermatozóides coletados da cauda dos epidídimos, foi anotado o peso corporal, o peso e volume testicular. O soro foi usado para dosagem de testosterona. Foram avaliadas a concentração, motilidade e a viabilidade espermática. Os testículos coletados foram fixados em Bouin, pós-fixados em formalina e processados em parafina. Utilizando o programa de imagem Image J, lâminas coradas com HE, mensuramos a altura do epitélio, densidade volumétrica e diâmetro do túbulo seminífero. Para avaliar a integridade do epitélio seminífero foi utilizado a frequência dos estágios do ciclo do epitélio e o escorre de Johnsen. Também foi avaliado a proliferação do compartimento tubular e intertubular, através da imunomarcação com PCNA. Os dados foram tabulados e as médias dos grupos comparadas pelo teste de ANOVA com pós-teste de Bonferroni ou teste de Kruskal-Wallis com pós teste de Dunns (programa Graphpad Prism, com p < 0,05). Os resultados revelaram grandes danos produzidos pela injuria testicular, no testículo ipsilateral, com diminuição da capacidade reprodutiva, da concentração, viabilidade e mobilidade, do peso e volume testicular. Animais TT9 não apresentaram espermatozoides nas amostras coletas. Houve diminuição do diâmetro dos túbulos seminíferos e da altura do epitélio, aumento do compartimento intertubular, com ênfase dos vasos sanguíneos, aumento da proliferação celular estromal e diminuição da proliferação epitelial. Houve diminuição da concentração sérica de testosterona no grupo TT4, quando comparado como grupo TT9. Em geral, os animais submetidos à torção na fase adulta foram os mais acometidos. Não foram encontradas alterações dignas de nota, nos testículo contralaterais. Animais tratados com L-arginina obtiveram melhora dos índices reprodutivos, com aumento da potência em todas as idades. Houve aumento da concentração espermática no testículo contralateral de ARG4 e ARG6, mostrando que a L-arginina atuou como antioxidante. Não houve proteção para as lesões causadas pela torção na maioria dos grupos, mas os animais tratados ARG9 apresentaram concentração espermática mensuravel, quando comparados aos ratos TT9, que tinham azospermia. / Testicular torsion (TT) is a urologic syndrome commonly found in infants, children and adolescents. In this work, the morphological damage and reproductive function in adult rats that underwent TT in different ages of sexual maturity and the protective effect of L-arginine against damage caused by ischemia / reperfusion in testicular torsion. Eighteen prepubertal rats (4 weeks old) seventeen pubertal (6 weeks old) and seventeen adults (9 weeks old) underwent TT. Under anesthesia, the right testis was rotated 720 and fixed, and then distorted after 4 hours. Twenty four rats (ARG4, n = 8, Arg6 n = 8, and Arg9 n = 8) were treated with 650mg/kg of L-arginine orally for 7 days. Other thirty rats of the same age underwent sham surgery (SH4, n = 10, SH6 n = 10, and SH9 n = 10). At 12 weeks of age, were subjected to controlled breeding 3 females and twentieth day of gestation and number of fetuses, corpora lutea, implantations, and absorptions were counted. At 14 weeks, the rats were killed and sperm collected from the epididymis tail was also noted body weight, testicular weight and volume. The serum was used for measurement of testosterone. We evaluated the concentration, motility and sperm viability. The testes were collected and fixed in Bouin, post-fixed in formalin and processed in paraffin. Using imaging program Image J, HE-stained slides, we measured the height of the epithelium, volume density and diameter of the seminiferous tubule. To evaluate the integrity of the seminiferous epithelium was used the frequency of the cycle stages of the epithelium and Johnsens scorre. Also evaluated was the proliferation of the tubular and intertubular compartment by immunostaining with PCNA. Data were tabulated and the means of groups were compared by ANOVA with Bonferroni post-test or Kruskal-Wallis with Dunns post test (Graphpad Prism, p <.05). The results revealed major damage produced by testicular injury in the ipsilateral testis, with decreased reproductive capacity, concentration, viability and motility, weight and testicular volume. TT9 animals showed no sperm in the samples collected. A decrease of the seminiferous tubule diameter and height of the epithelium, increased intertubular compartment, with emphasis on blood vessels, increased proliferation and reduced stromal cell epithelial proliferation. There was a decrease in serum testosterone group TT4, when compared as a group TT9. In general, animals subjected to torsion at 9 weeks were the most affected. There were no notable changes in the contralateral testis. Animals treated with L-arginine showed improvement of reproductive rates, with increased potency at all ages. There was increased sperm concentration in the contralateral testicular ARG4 and ARG6, showing that L-arginine acted as an antioxidant. There was no protection for injuries caused by twisting in most groups, but animals treated ARG9 showed measurable sperm concentration compared to TT9 mice that had azoospermia.

A técnica de isquemia-reperfusão tem sido utilizada em cirurgias conservadoras do rim como a nefrectomia parcial e em transplantes renais. Para se realizar a isquemia pode-se fazer o bloqueio do fluxo sanguíneo da artéria renal ou o bloqueio simultâneo da artéria e da veia renal. O evento isquêmico acarreta em dano celular ao rim principalmente pelo estresse oxidativo local e a liberação de radicais livres assim como o aumento da resposta inflamatória. Diversos autores verificaram lesão renal após a isquemia-reperfusão, porém, apenas testes funcionais foram realizados até o momento. Os autores que tentaram avaliar a lesão morfológica do rim apenas fizeram a quantificação de escores subjetivos. O nosso objetivo é avaliar por quantificação estereológica o dano causado pela isquemia-reperfusão comparando o clampeamento somente arterial com o clampeamento arteriovenoso. Utilizamos 24 ratos wistar, machos, de quatro meses de idade. Os animais foram divididos em três grupos: o grupo Sham (n=8), o grupo de clampeamento somente da artéria renal (n=8) e o grupo de clampeamento simultâneo da artéria e da veia renal (n=8). Os animais foram submetidos a laparotomia mediana. Os animais do grupo Sham permaneceram os 60 minutos anestesiados mas sem obstrução do fluxo sanguíneo de seus vasos renais. Os animais do grupo de clampeamento arterial foram submetidos à clampeamento de sua arterial renal esquerda por 60 minutos e os animais do grupo de clampeamento arterial e venoso tiveram seus vasos renais esquerdos clampeados simultaneamente e em bloco pelo mesmo tempo. Após os 60 minutos os animais foram suturados e mantidos por 30 dias em caixas próprias sendo mortos por sobredose anestésica após decorrido esse tempo. Os rins foram coletados e mantidos em solução de formalina tamponada e posteriormente processados para análise histológica e estereológica. Foram analisados a densidade volumétrica (Vv) dos glomérulos, o número de glomérulos/mm3(Nv) e o volume glomerular médio (VGM). A Vv e Nv se encontrou reduzida nos rins esquerdos submetidos à isquemia mas foi somente significativa nos animais do grupo de clampeamento arterial e venoso. Mesmo usando o rato como modelo animal experimental, a partir de nossos resultados recomendamos o uso do clampeamento somente arterial nos casos em que mínina lesão ao rim é imperiosa. / The ischemia-reperfusion has been used in renal surgery such as conservative partial nephrectomy and kidney transplantation. To perform ischemia we can block the blood flow of renal artery or simultaneous blockade of the renal artery and vein. The ischemia leads to cellular damage to the kidney mainly by local oxidative stress and releasing free radicals as well as increased inflammatory response. Several authors related renal injury after ischemia-reperfusion, however; only functional tests were carried out to date. The authors attempted to evaluate the morphological lesion of the kidney using subjective scores. Our goal is assess by stereological quantification of the renal parenchyma after ischemia-reperfusion injury comparing arterial only clamping and arteriovenous clamping. We used 24 Wistar rats, males, four months old. The animals were divided into three groups: Sham group (n = 8), the group of clamping of the renal artery (n = 8) and the group of simultaneous clamping of renal artery and vein (n = 8). The animals underwent laparotomy. Sham group animals remained anesthetized for 60 minutes without blood flow obstruction of their renal vessels. The group animals underwent arterial clamping have had his left renal artery clamped for 60 minutes and the animals in the group of arterial and venous clamping had their left renal vessels clamped simultaneously for the same time. After 60 minutes the animals were sutured and kept for 30 days in their own boxes being killed by anesthetic overdose after that. The kidneys were collected and kept in formaldehyde solution and subsequently processed for histological and stereological analysis. We analyzed the volume density (Vv) of the glomeruli, the number of glomeruli/mm3 (Nv) and mean glomerular volume (MGV). The Vv and Nv was reduced in the ischemic left kidney but was only significant in animals of the group of arterial and venous clamping. Even using the rat as experimental animal model, from our results we recommend the use of arterial clamping only in cases where minimum injury to the kidney is imperative.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O desequilíbrio nutricional no início da vida leva ao desenvolvimento da obesidade, diabetes e doenças cardiovasculares na idade adulta. Este estudo teve como objetivo analisar os efeitos a longo prazo da hiperalimentação na lactação por meio do modelo de redução da ninhada na hemodinâmica e bioenergética cardíaca. Vinte e quatro camundongos machos Swiss adultos foram divididos em dois grupos (controle e hiperalimentado) submetidos a duas condições (linha de base e isquemia/reperfusão) formando quatro grupos no total: grupo controle linha de base (GCLB), grupo controle isquemia/reperfusão (GCIR), grupo hiperalimentado linha de base (GHLB) e o grupo hiperalimentado isquemia/reperfusão (GHIR), todos com seis camundongos/grupo. As alterações cardíacas foram analisadas por meio da hemodinâmica cardíaca, da respiração mitocondrial e da biologia molecular. Os parâmetros hemodinâmicos analisados foram a velocidade de contração (Max dP/dt), a velocidade de relaxamento (Min dP/dt), o tempo de relaxamento cardíaco isovolumétrico (Tau) e os batimentos por minuto (BPM). A respiração mitocondrial foi avaliada por meio da razão do controle respiratório (RCR) na oxidação de carboidratos e ácidos gordos, e finalmente, a biologia molecular, através de proteínas-chave como a proteína quinase B (AKT), a proteína quinase ativada por adenosina monofosfato (AMPK), a carnitina palmitoil transferase 1 (CPT-1), a proteína desacopladora 2 (UCP2), o 4-hidroxinonenal (4-HNE) e a gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH). Os camundongos do GH desenvolveram maior peso corporal (30,95%, P<0,001), gordura epididimal (68,64%, P<0,001), gordura retroperitoneal (109,38%, P<0,01) e glicemia de jejum (19,52%, P<0,05) comparados aos do GC. Os parâmetros Max dP/dt e BPM apresentaram diminuição no GHIR quando comparado ao GHLB (P<0,001 e P<0,05). O parâmetro Min dP/dt apresentou-se reduzido no GCIR e GHIR quando comparado aos grupos GCLB e GCLB (P<0,05; P<0,0001 respectivamente). Camundongos do GHIR apresentaram redução do Tau quando comparado aos grupos GCIR e GHLB (P<0,0001). Estes desequilíbrios na hemodinâmica cardíaca foram associados a função mitocondrial, uma vez que, o GHLB apresenta a RCR reduzida para oxidação de ácidos graxos e carboidratos (P<0,05 e P<0,01, respectivamente) e o GHIR apenas na oxidação dos ácidos graxos (P<0,01). Além disso, o GHIR apresentou diversas alterações nas proteínas-chave do metabolismo energético cardíaco, como diminuição do conteúdo de AKT (P<0,05) e aumento do conteúdo de CPT-1 (P<0,05), 4-HNE (P<0,05) e GAPDH (P<0,05) quando comparado ao CGIR. Finalmente, a expressão do mRNA para CPT1, GAPDH e UCP2 foi aumentada no GHIR quando comparado aos GCIR (P<0,05) e GHLB (P<0,05). A expressão de mRNA para UCP2 e CPT-1 foi reduzida no GCIR quando comparado ao GCLB (P<0,01 e P<0,05, respectivamente). O estudo apresenta resultados consistentes, demonstrando efeitos deletérios sobre o metabolismo cardíaco adulto resultante de alterações nutricionais durante a lactação. / Early life nutritional imbalance induces obesity, diabetes and cardiovascular diseases when animals become adults. This study aimed to study the long-term effects of postnatal overfeeding by litter size reduction on animal weight and heart energy homeostasis. Twenty-four adult male mice were divided into two groups (control and overfed) and studied under two conditions (baseline and ischemia/reperfusion) forming four groups in total: control group baseline (CGBL), control group ischemia/reperfusion (CGIR), obese group baseline (OGBL) and obese group ischemia/reperfusion (OGIR) all with 6 mice/group. Changes in heart were analyzed by cardiac hemodynamic, mitochondrial respiration and molecular biology. Hemodynamic parameters analyzed were speed of contraction (Max dP/dt), speed of relaxation (Min dP/dt), isovolumetric relaxation time (Tau) and beats per minute (BPM), mitochondrial respiration by respiratory control ratio (RCR) in carbohydrate and fatty acid oxidation and molecular biology by key proteins like protein kinase B (AKT), adenosine monophosphate-activated protein kinase (AMPK), carnitine palmitoil palmitoyltransferase 1 (CPT1), uncoupling protein 2 (UCP2), 4-hydroxynonenal (4-HNE) and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH). The OG developed higher body weight (30.95%, P<0.001), epididymal fat (68.64%, P<0.001), retroperitoneal fat (109.38%, P<0.01) and fasting glucose (19.52%, P<0.05) compared to the CG. The parameters Max dP/dt and BPM were significantly decreased in OGIR compared to OGBL (P<0.001 and P<0.05). Min dP/dt was significantly decreased in CGIR and OGIR compared to CGBL (P<0.05) and OGBL (P<0,0001) respectively . Tau was significantly decreased in OGIR compared to CGIR and OGBL (P<0.0001). Theses impairments of cardiac hemodynamic were associated to mitochondrial uncoupling since OGBL presented decreased of RCR, in both carbohydrate and fatty acid oxidation (P<0.05 and P<0.01, respectively) and OGIR only in fatty acid oxidation (P<0.01). Moreover, OGIR showed higher alterations in key proteins of cardiac energetic metabolism with decreasing AKT content (P<0.05) and increasing CPT1 (p<0.05), 4-HNE (P<0.05) and GAPDH contents (P<0.05) when compared to CGIR. Finally, the expression of mRNA for CPT1, GAPDH and UCP2 was increased in OGIR compared to CGIR (P<0.05) and OGBL (P<0.05). The expression of mRNA for UCP2 and CPT1 was decreased in CGIR compared to CGBL (P<0.01 and P<0.05, respectively). Finally, the study presents consistent results demonstrating deleterious effects on adult heart metabolism resulting from nutritional changes during lactation.

O presente estudo objetivou avaliar a distribuição miocârdica de 99mTc-sestamibi utilizando os modelos de fracionanlento celular em coração de rato isolado e perfundido, e de angioplastia coronariana em humanos. Com o objetivo de abordar a aparente discrepância existente en tre dados obtidos em células em cultura e preparações de corações íntegros, foram utilizados corações de rato perfundidos através da preparação de Langendorff e perfundidos com hexakis (2-nlctoxi isobutil isonitrila) tccnécio(I) (99mTcMIBI). Os corações foram fracionados através de técnica pàdronizada de centrify gação e as frações contendo 99mTc-MIBI foram correlacionadas ao marcador mitocondrial malato desidrogenase (MDH) e a substratos mitocondriais. A fração "citosólica" continha 88% (84-96) do total de 99mTc-MIBI, mas também continha 91%(89-94) de toda a atividade de MDH determinada através desta nletodologia. A análise cromatográfica da atividade na fração citosólica demonstrou que> 95% deste agente estava presente como complexo catiônico original livre; sua localização, portanto, não estava relacionada à ligação a moléculas com baixo pêso molecular. A adição do desacoplador mitocondrial CCCP (5 JlM) aos sedimentos "mitocondrial" e de "fragmentos celulares" liberou até 84% do conteúdo de 99mTc-MIBI e a adição do substrato mitocondrial succinato (10 JlM) na presen ça de rotenona (1 JlM) aumentou em 139% o conteúdo de 99mTc-MIBI em relação ao controle. Estes dados indicam que aproximadamente 90% da atividade "in vivo" de 99mTc-MIBI está associada à mitocôndria de forma dependente de energia como um complexo catiônico livre que migra durante o fracionamento e centrifugação. Para avaliar o benefício precoce da angioplastia coronanana transluminal percutânea (ACTP) bem sucedida, foi utilizada a tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT) da perfusão miocárdica com 99mTc-MIBI em nove pacientes consecutivos. O SPECT de estresse miocárdico foi obtido através do estímulo com marca-passo artificial imediatamente antes da ACTP e 16 a 20 horas após, sendo que as imagens perfusionais foram obtidas 2 a 3 horas após o estímulo com marca-passo e injeção de 99mTc-MIBI. Re-estenose foi demonstrada angiograficamente em 3 pacientes, os quais não apresentaram m~ lhora da perfusão após ACTP. Quatro pacientes assintomáticos até 7 meses após ACTP apresentaram melhora média de 15% da perfusão segmentar após o procedimento. Dois pacientes apresentaram dor torácica após ACTP, sendo que um d~ tes demonstrou patência do vaso tratato e melhora> 15% da perfusão deste território. O segundo paciente não apresentou melhora da perfusão (não foi obtida cor. relação angiográfica). Estas observações preliminares sugerem que o 99mTc-sestamibi é importante complemento à angiografia na estimativa da extensão de miOcárdio "sob risco" antes e após a ACTP. / The present study evaluated the myocardial distribution of 99mTc-sestamibi using models of coronary angioplasty in humans and of celular fractionation in isolated perfused rat hearts. To address the apparent discrepancy between cultured cells and whole heart preparations, Langendorff-perfused rat healts loaded with hexakis (2-methoxyisobutyl isonitrile) technetium (I) (99mTc...MIBI) were fractionated by a standard differential centrifugation lnethod and fractional contents of 99mTcMIBI were correlated with the mitochondrial marker, malate dehydrogenase (MDH), and mitochondrial substrates. The "cytosolic" fraction nominally contained 88% (84-96) of total 99mTc-MIBI,but also contained 91%(89-94) of total MDH activity by this method. Chromatographic analysis of activity in the "cytosº lic" fraction demonstrated that > 95%of the agent was present as the original free cationic complex; binding to a small molecular weight cytosolic protein was not involved in localization. Addition of the mitochondrial uncoupler CCCP (5 JlM) to both "mitochondrial" and "cell fragment" peUets released up to 84% of 99mTc-MIBI content and addition of the mitochondrial substrate succinate (lQJM) in the presence of rotenone (lIJM) enhanced 99mTc-MIBI content by up to 139% over the controI. These correlative data from rat hearts indicate that approximately 90% of 99mTc-MIBI activity in vivo is associated with mitochondria in an energy-dependent manner as a free cationic complex, but migrates during fractionation/ centrifugation. To assess the early benefits of successful percutaneous translunlinal coronary angioplasty (PTCA), 99mTc-MIBI Single Photon Emission Comrn ted Tomography (SPECT) was used in nine consecutive patients. SPECT stress studies were done by artificial cardiac pacing just prior to PTCA and 16-20 hours later, with perfusion imagens obtained 2-3 hours after pacing stress and 99mTcMIBI injection. Angiographic restenosis was delnonstrated in three patients at a later date, and alI of these showed no significant improvement on the perfusion study after PTCA. AlI four patients asymptomatic at 7 months following PTCA had an avarege 15% ·improvement in segmentaI perfusion .afier the procedure. In two patiens symptomatic afier PTCA, one showed angiographic patency and had > 15%improvement in perfusion, while the second showed no scintigraphic lmprovement (no angiographic data obtained). These preliminary observations suggest that 99mTc-sestamibi is an iUlportant adjunct to angiography in estimating the amount of myocardium "at risk" before and after PTCA.

Introdução: A lesão de isquemia e reperfusão (I/R) intestinal pode causar danos celular e tecidual local e em órgãos a distância. Alguns fatores podem estar envolvidos nesses processos, tais como: a geração de espécies reativas de oxigênio, mediadores inflamatórios, óxido nítrico (NO) e estresse do retículo endoplasmático (RE). Devido ao envolvimento do estresse oxidativo nas lesões de I/R intestinal, algumas opções terapêuticas com antioxidantes estão sendo estudadas e testadas nas lesões de I/R intestinal. Objetivo: Avaliar o efeito local e sistêmico da glutamina no intestino e fígado de animais submetidos à I/R intestinal. Métodos: Foram utilizados 20 ratos wistar machos divididos em quatro grupos: Sham operated (SO), Glutamina+Sham operated (G+SO), Isquemia e reperfusão intestinal (I/R); Glutamina+Isquemia e reperfusão intestinal (G+I/R). Os animais foram anestesiados e, após, realizada a laparotomia mediana e identificação da artéria mesentérica superior. A artéria foi clampeada por 30 e após esse tempo, os animais foram mantidos por mais 15 minutos em reperfusão intestinal. A glutamina foi administrada por via intraperitoneal, na dose de 25 mg/Kg diluída em 1 mL de solução fisiológica. O tratamento foi realizado uma vez ao dia, durante 48 horas antes da indução da isquemia. Foram realizadas análises séricas para a função de integridade hepática através das enzimas aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA) e danos ao DNA pelo ensaio cometa. Realizamos a análise histológica dos tecidos através da coloração de Hematoxilina-Eosina e imunohistoquímica para avaliar a quantidade de células marcadas com os anticorpos monoclonais IL-1β, IL-6, TNF-α e NF-B no intestino e fígado. O homogeneizado do intestino e fígado foram utilizados para a avaliação dos níveis de lipoperoxidação (LPO) através das substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), avaliação da atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx), determinação dos níveis de glutationa (GSH), avaliação dos metabólitos do óxido nítrico (nitritos/nitratos) e para as análises moleculares das proteínas iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 e ATF-6 por Western Blot. Resultados: O pré-tratamento com glutamina reduziu os níveis de LPO, óxido nítrico, danos ao DNA, bem como as enzimas de integridade hepática. Observamos que a glutamina foi eficaz na preservação da arquitetura tecidual do intestino e fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, reduzindo parâmetros como infiltrado inflamatório, perda das vilosidades intestinais e necrose. Constatou-se que a glutamina ativou a via do Nrf2 e as enzimas antioxidantes, reduziu o dano celular, e inibiu o estresse do RE, além de reduzir os mediadores do processo inflamatório. Conclusão: Neste estudo, sugerimos que o pré-tratamento com a glutamina desempenhou um papel protetor tanto no intestino como no fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, demonstrado pelas análises estudadas, possivelmente pela sua ação antioxidante e anti-inflamatória. / Background: Injury by intestinal ischemia and reperfusion (I/R) can cause local and cellular damage to tissues and organs at distance. Some factors may be involved in those processes, such as the generation of reactive oxygen species, inflammatory mediators, nitric oxide (NO) and endoplasmic reticulum stress. Due to the involvement of oxidative stress in intestinal I/R lesions, some therapeutic options with antioxidants are being studied and tested in order to reduce these damages. Objective: To evaluate the local and systemic effect of glutamine in the intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R. Methods: Twenty male Wistar rats were divided into four groups: Sham operated (SO), Glutamine+Sham operated (G+SO), Intestinal Ischemia and reperfusion (I/R); Glutamine+intestinal ischemia and reperfusion (G+I/R). The animals were anesthetized and after we performed the median laparotomy and identification of the superior mesenteric artery. The artery was clamped for 30 minutes and after that the animals were maintained for another 15 minutes in intestinal reperfusion. Glutamine was administered intraperitoneally at a dose of 25 mg/kg diluted in 1 ml of saline solution. Treatment was performed once daily for 48 hours prior to induction of ischemia. Serum samples for hepatic integrity were collected, and the enzymes aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase (FA) were accessed. DNA damage was evaluated by the comet assay. We performed the histological analysis of the tissues through the staining of Hematoxylin-Eosin and immunohistochemistry, in order to evaluate the amount of cells labeled with the monoclonal antibodies IL-1β, IL-6, TNF-α and NF-B in the intestine and liver. The intestinal and liver homogenates were used to evaluate the levels of lipoperoxidation (LPO) through thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), evaluation of the activity of antioxidant enzymes catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx), determination of glutathione levels (GSH) and nitric oxide (nitrites/nitrates), and for the molecular analyzes of the iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 and ATF-6 proteins we performed Western blot analysis. Results: Pretreatment with glutamine reduced levels of LPO, nitric oxide, DNA damage, as well as liver integrity enzymes. We observed that glutamine was effective in preserving the intestinal and liver tissue architecture of animals submitted to intestinal I/R, reducing parameters such as inflammatory infiltrate, loss of intestinal villi and necrosis. It was found that glutamine activated the Nrf2 pathway and antioxidant enzymes, reduced cell damage, and inhibited endoplasmic reticulum stress in addition to reducing mediators of the inflammatory process. Conclusion: In this study, we suggest that pretreatment with glutamine played a protective role in both intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R, demonstrated by the present analyzes, possibly for its antioxidant and anti-inflammatory action.

Introdução: O transplante renal (TR) é o tratamento de escolha para uma significativa porção de pacientes com perda crônica terminal da função renal. Apesar dos progressos obtidos, a disfunção inicial do enxerto (DIE) permanece como uma importante complicação precoce muitas vezes levando à necessidade da biópsia renal. Essa, apesar de suas limitações, riscos e custos, é considerada padrão ouro para a avaliação das disfunções dos enxertos renais. Assim sendo é imprescindível estudar e buscar biomarcadores não invasivos capazes de diagnosticar as agressões aos transplantes renais, em especial na fase de DIE, quando os parâmetros funcionais não estão disponíveis. Objetivo: Analisar e quantificar a expressão do micro Ácido Ribonucleico (miRNA) mi RNA-146a-5p em amostras de sangue periférico e tecido renal de pacientes que desenvolveram disfunção do enxerto associados a lesões de isquemia e reperfusão após transplante renal. Métodos: Trata-se de um estudo transversal. Os pacientes submetidos a transplante renal que necessitarem de biópsia devido à presença de DIE foram convidados a participar da pesquisa e a assinarem o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. As amostras foram armazenadas no período de março de 2013 a abril de 2017. Posteriormente foi avaliada a expressão do micro RNA (miR-146 a-5p) em tecido renal e em sangue periférico. Resultados: Em amostras de biópsia renal, encontramos um aumento estatisticamente significativo na expressão de miR-146a-5p no grupo de disfunção inicial do enxerto (DIE, n=33) versus grupo de pacientes estáveis (STA, n=13), P= 0,019 no grupo de pacientes com rejeição aguda (RA, n=9) versus grupo de DIE não observamos diferença significativa, P=0,106, assim como o grupo de pacientes estáveis versus RA não observamos diferença significativa, P= 1,000. Diferença na análise global P = 0,008. No entanto, em amostras de sangue periférico encontramos aumento na expressão gênica de miR-146a-5p no grupo de DIE versus pacientes STA , porém, não foi estatisticamente significativo, P= 0,083. Não houve correlação entre a expressão miR-146a-5p nos diferentes grupos de biópsia e sangue periférico, P=0,541. Conclusão: A expressão do miR 146a-5p apresentou expressão gênica distinta na disfunção inicial do enxerto em amostras de biópsias, podendo vir a ser considerado potencial biomarcador de lesão de isquemia e reperfusão renal. / Introduction: Kidney transplantation is the treatment of choice for a significant portion of patients with chronic terminal loss of renal function. Despite the progress achieved, delayed graft function DGF remains an important early complication. Graft biopsy, despite its limitations, risks and costs, is considered a gold standard for the diagnosis of graft dysfunction. Therefore, it is imperative to study and search for noninvasive biomarkers capable of diagnosing injuries to kidney transplants, especially in the DGF period when functional parameters are not available. The objective of the present study was to analyze and quantify the expression of miRNA-146a -5p ribonucleic micro-acids (miRNAs) in peripheral blood and renal tissue samples obtained from patients who underwent renal transplantation and developed DGF which is associated with lesions of ischemia and reperfusion injuries, after renal transplantation. Methods: This is controlled cross-sectional study involving transplant recipients, between March 2013 and April 2017, that underwent DGF and received a graft biopsy. Patients had their tissue and peripheral blood samples stored and latter analyzed for the expression of the micro-RNA: miR-146a-5p in renal tissue and blood. (Continuatiation) Results: In graft tissue samples a statistically significant increase in miR-146a-5p expression in the initial graft dysfunction group (DIE, n=33) was observed in the comparison with the group of stable patients (STA, n=13) group, P=0,019. The difference wasn’t significant in the comparison with the acute rejection (AR, n=9) group versus group DIE, P=0,106, as well stable patients group versus AR we didn’t observe a significant difference, P=1,000 . Overall group significance P=0.008. However, in peripheral blood samples we found an increase in miR-146a-5p gene expression in the DIE group versus STA patients, however, it was not statistically significant, P = 0.083. There was no correlation between expression miR-146a-5p in the renal tissue and peripheral blood samples, P=0,541. Conclusion: We concluded that miR-146a-5p expression has a distinct pattern of expression in the setting of DGF and has the potential of becoming a biomarker for ischemia and reperfusion injury in kidney transplant recipients.

Introdução: A hipotermia tópica (HT) e o pré-condicionamento isquêmico (PCI) são métodos utilizados para diminuir a lesão de isquemia/reperfusão (I/R). A eficácia do uso concomitante da HT e PCI (HT+PCI) no fígado em relação à inflamação e à citoproteção antioxidante não está elucidada. Objetivo: Avaliar o processo inflamatório e os mecanismos de segunda linha de defesa antioxidante na lesão de I/R hepática em ratos em relação à utilização das técnicas de HT e PCI de forma isolada ou associada. Métodos: Ratos Wistar (n=32) foram submetidos à isquemia hepática parcial (70%) durante 90 minutos seguida por 120 minutos de reperfusão. Os animais foram alocados nos grupos sham (n=4), isquemia normotérmica (IN, n=7), PCI (n=7), HT (n=7) e HT+PCI (n=7). O PCI consistiu na aplicação consecutiva de 10 minutos de isquemia e reperfusão antes do insulto isquêmico. A HT foi induzida pela superfusão de solução salina a 26°C sobre os lobos isquêmicos. A eutanásia foi realizada ao término do experimento e as amostras foram coletadas para a realização das análises moleculares utilizando as técnicas de ELISA e Western Blot, com o objetivo de comparar os perfis pró-inflamatório, anti-inflamatório e antioxidante. Resultados: O grupo HT comparado ao grupo IN apresentou diminuição da concentração do fator de necrose tumoral (TNF)-α, interleucina (IL)-1β, IL-6 e IL-12 e um aumento dos níveis de IL-10. O grupo HT apresentou menor expressão da óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e um aumento da expressão da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS). A expressão da NAD(P)H quinone oxidoreductase-1 (NQO1) foi menor no grupo HT. O PCI não demonstrou diferença significativa em relação a esses marcadores quando comparado ao grupo IN. O grupo HT+PCI apresentou menor concentração de IL-12 e menor expressão da iNOS e NQO1, mas em relação a estas moléculas a utilização de HT isolada demonstrou um comportamento semelhante. O grupo HT+PCI apresentou maior expressão da Kelch-like ECH-associated protein (Keap)-1 e menor expressão do nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) nuclear e citoplasmático em relação ao grupo IN. Conclusão: O método de HT foi eficaz na proteção contra a lesão inicial de I/R. O uso de PCI isolado desencadeou a ativação da segunda linha de defesa antioxidante. A aplicação combinada de HT+PCI não confere benefício adicional em relação ao processo inflamatório quando comparado ao grupo HT, mas apresenta a vantagem de evitar a ativação da segunda linha de defesa antioxidante. / Background: Topical hypothermia (TH) and ischemic preconditioning (IPC) are used to decrease ischemia/reperfusion (I/R) injury. The effectiveness of using concomitantly TH and IPC (TH+IPC) in liver, regarding inflammation and antioxidant cytoprotection, is lacking. Aim: To evaluate the process inflammatory and second-line antioxidant defense mechanisms in hepatic I/R injury in rats in relation to the use of techniques TH and IPC isolate or associated. Methods: Wistar rats (n=32) subjected to partial (70%) hepatic ischemia during 90 minutes followed by 120 minutes of reperfusion. Livers from the animals allocated in sham (n=4), normothermic ischemia (NI, n=7), IPC (n=7), TH (n=7) and TH+IPC (n=7) groups. IPC consisted of consecutive 10-minute periods of ischemia and reperfusion before the ischemic insult. TH was induced by the superfusion of cooled saline at 26oC onto the ischemic lobes. Euthanasia was undertaken exactly at the end of the experiment and samples were collected for molecular analyses by ELISA and Western Blot assays, aiming to compare pro-inflammatory, anti-inflammatory and antioxidant profiles. Results: Compared with NI, TH presented decreased tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-1β, IL-6 and IL-12 concentrations and increased IL-10 levels. TH displayed lower inducible nitric oxide synthase (iNOS), higher endothelial nitric oxide synthase (eNOS) expressions. NAD(P)H-quinone oxidoreductase-1(NQO1) expression was also lower in TH. Isolate IPC showed no differences regarding all these markers compared to NI. TH+IPC showed decreased IL-12 concentration and reduced iNOS and NQO1 expressions, but regarding these molecules isolate TH behaved similarly. TH+IPC showed higher Kelch-like ECH-associated protein (Keap)-1 and diminished nuclear and cytosolic nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) expressions than NI. Conclusion: TH was the effective method of protection against early I/R injury. Isolated IPC entailed triggering of second-line antioxidant defense enzymes. Combined TH+IPC seemed to confer no additional advantage over isolated TH in relation to the inflammatory process, but had the advantage of avoid activation second-line antioxidant defense enzymes.