Introdução: A hipotermia tópica (HT) e o pré-condicionamento isquêmico (PCI) são métodos utilizados para diminuir a lesão de isquemia/reperfusão (I/R). A eficácia do uso concomitante da HT e PCI (HT+PCI) no fígado em relação à inflamação e à citoproteção antioxidante não está elucidada. Objetivo: Avaliar o processo inflamatório e os mecanismos de segunda linha de defesa antioxidante na lesão de I/R hepática em ratos em relação à utilização das técnicas de HT e PCI de forma isolada ou associada. Métodos: Ratos Wistar (n=32) foram submetidos à isquemia hepática parcial (70%) durante 90 minutos seguida por 120 minutos de reperfusão. Os animais foram alocados nos grupos sham (n=4), isquemia normotérmica (IN, n=7), PCI (n=7), HT (n=7) e HT+PCI (n=7). O PCI consistiu na aplicação consecutiva de 10 minutos de isquemia e reperfusão antes do insulto isquêmico. A HT foi induzida pela superfusão de solução salina a 26°C sobre os lobos isquêmicos. A eutanásia foi realizada ao término do experimento e as amostras foram coletadas para a realização das análises moleculares utilizando as técnicas de ELISA e Western Blot, com o objetivo de comparar os perfis pró-inflamatório, anti-inflamatório e antioxidante. Resultados: O grupo HT comparado ao grupo IN apresentou diminuição da concentração do fator de necrose tumoral (TNF)-α, interleucina (IL)-1β, IL-6 e IL-12 e um aumento dos níveis de IL-10. O grupo HT apresentou menor expressão da óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e um aumento da expressão da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS). A expressão da NAD(P)H quinone oxidoreductase-1 (NQO1) foi menor no grupo HT. O PCI não demonstrou diferença significativa em relação a esses marcadores quando comparado ao grupo IN. O grupo HT+PCI apresentou menor concentração de IL-12 e menor expressão da iNOS e NQO1, mas em relação a estas moléculas a utilização de HT isolada demonstrou um comportamento semelhante. O grupo HT+PCI apresentou maior expressão da Kelch-like ECH-associated protein (Keap)-1 e menor expressão do nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) nuclear e citoplasmático em relação ao grupo IN. Conclusão: O método de HT foi eficaz na proteção contra a lesão inicial de I/R. O uso de PCI isolado desencadeou a ativação da segunda linha de defesa antioxidante. A aplicação combinada de HT+PCI não confere benefício adicional em relação ao processo inflamatório quando comparado ao grupo HT, mas apresenta a vantagem de evitar a ativação da segunda linha de defesa antioxidante. / Background: Topical hypothermia (TH) and ischemic preconditioning (IPC) are used to decrease ischemia/reperfusion (I/R) injury. The effectiveness of using concomitantly TH and IPC (TH+IPC) in liver, regarding inflammation and antioxidant cytoprotection, is lacking. Aim: To evaluate the process inflammatory and second-line antioxidant defense mechanisms in hepatic I/R injury in rats in relation to the use of techniques TH and IPC isolate or associated. Methods: Wistar rats (n=32) subjected to partial (70%) hepatic ischemia during 90 minutes followed by 120 minutes of reperfusion. Livers from the animals allocated in sham (n=4), normothermic ischemia (NI, n=7), IPC (n=7), TH (n=7) and TH+IPC (n=7) groups. IPC consisted of consecutive 10-minute periods of ischemia and reperfusion before the ischemic insult. TH was induced by the superfusion of cooled saline at 26oC onto the ischemic lobes. Euthanasia was undertaken exactly at the end of the experiment and samples were collected for molecular analyses by ELISA and Western Blot assays, aiming to compare pro-inflammatory, anti-inflammatory and antioxidant profiles. Results: Compared with NI, TH presented decreased tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-1β, IL-6 and IL-12 concentrations and increased IL-10 levels. TH displayed lower inducible nitric oxide synthase (iNOS), higher endothelial nitric oxide synthase (eNOS) expressions. NAD(P)H-quinone oxidoreductase-1(NQO1) expression was also lower in TH. Isolate IPC showed no differences regarding all these markers compared to NI. TH+IPC showed decreased IL-12 concentration and reduced iNOS and NQO1 expressions, but regarding these molecules isolate TH behaved similarly. TH+IPC showed higher Kelch-like ECH-associated protein (Keap)-1 and diminished nuclear and cytosolic nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) expressions than NI. Conclusion: TH was the effective method of protection against early I/R injury. Isolated IPC entailed triggering of second-line antioxidant defense enzymes. Combined TH+IPC seemed to confer no additional advantage over isolated TH in relation to the inflammatory process, but had the advantage of avoid activation second-line antioxidant defense enzymes.

Orientador: Mario Mantovani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T08:05:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hirano_ElcioShiyoiti_D.pdf: 1576822 bytes, checksum: a84a83fa8cd17ee274ad522665f99470 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: No Brasil, o trauma é uma das principais causas de mortalidade do adulto jovem e o choque hemorrágico é uma das situações críticas que está presente na maioria dos traumatizados graves. Dependendo da duração e intensidade, o choque hemorrágico torna-se responsável pela instalação da síndrome da resposta inflamatória sistêmica , ativando os neutrófilos que aderem ao endotélio e, por diapedese, seqüestram-se no interstício dos órgãos, onde iniciam a produção de radicais livres (O2-) estabelecendo lesão tecidual local. O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar o seqüestro de neutrófilos no rim de rato, como efeito da isquemia e reperfusão hepática total após estado de choque hemorrágico controlado, com uso de diferentes soluções eletrolíticas. Utilizou-se 18 ratos Wistar, machos, adultos, divididos em três grupos conforme a solução utilizada para reanimação: Grupo SF: solução fisiológica; Grupo SH: solução hipertônica de NaCl a 7,5% seguido pela solução de Ringer com lactato; Grupo RL: solução de Ringer com lactato. Todos os animais foram submetidos à sangria controlada até a pressão arterial média (PAM) atingir 40 mmHg, permanecendo assim por 20 minutos. Realizou-se reanimação volêmica até PAM=80 mmHg com a solução conforme o grupo estudado. Em seguida realizou-se uma laparotomia e a manobra de Pringle por 15 minutos. Os animais foram acompanhados até duas horas. A eutanásia dos animais foi realizada com exsanguinação pelo cateter posicionado na artéria femoral esquerda. Os parâmetros hemodinâmicos e metabólicos foram avaliados para caracterização do estado de choque controlado: pressão arterial média, freqüência cardíaca, índice cardíaco, índice de resistência vascular sistêmica, pH, bicarbonato, reserva de base, lactato e eletrólitos. Para comparações estatísticas entre as contagens de neutrófilos, no interstício do córtex renal, foram efetuados os testes ANOVA e a análise de covariância, ajustando-se para o tempo de sobrevida. O volume de reanimação utilizado no tratamento do choque hemorrágico foi menor no GSH em comparação ao GRL, entretanto sem diferença estatística com GSF. O GSH apresentou maior nível de lactato em 60 minutos de reperfusão em relação ao GSF, entretanto sem diferença estatística com GRL. Os valores médios de tempo de sobrevida, em minutos, por grupo foram: Grupo SF: 79,0±12,0; Grupo RL: 97,0±11,0; Grupo SH: 67,0±10. Os valores médios da contagem de neutrófilos/campo no córtex renal foram: Grupo SF: 0,55±0,68; Grupo RL: 1,68±0,53; Grupo SH: 1,33±0,43. E, quando são ajustados para o tempo de sobrevida, encontraram-se: Grupo SF: 0,55; Grupo RL: 1,62; Grupo SH: 1,39. O GSF apresentou diferença estatística na contagem de neutrófilos com os demais, usando-se ou não o ajuste pelo tempo de sobrevida (p=0,016 e p=0,0128) / Abstract: In Brazil, the trauma is the main cause of death in young adults and hemorrhagic shock is one of the critical situations present in the major traumatism. Depending on duration and intensity, the hemorrhagic shock becomes responsible for the beginning of the systemic inflammatory response syndrome, activating neutrophils, which adhere to endothelium and for diapedesis sequestration on interstitium of the organs, where they initiate the production of free radicals (O2-), and promoting local lesion. The goal in this present study was to evaluate and compare neutrophils sequestration in the renal cortex of rats resultanting from total hepatic ischemia and reperfusion after controlled hemorrhagic shock, with use of different electrolytic solutions. Eighteen male adult rats Wista were divided into three equal groups according to the solution used to reanimation: Group PSS: physiologic saline solution; Group HSS: hypertonic saline hypertonic (7,5%) followed by lactated ringer¿s solution; Group LRS: lactated Ringer¿s solution. All animals were submitted to controlled bleeding maintaining mean arterial pressure (MAP) around 40 mmHg for 20 minutes. Volume infusion was performed to obtain and maintain a MAP=80 mmHg with the specific solution according to the studied group, followed by laparotomy and Pringle's maneuver for 15 minutes. The animals were observed until for two hours. The euthanasia of animals was perfomed by exsanguination via left femoral artery. The hemodynamic parameters were: MAP, heat rate, cardiac index, systemic vascular resistance index. The analyzed serum metabolic variables were: pH, bicarbonate, base deficit, lactato and electrolytes. For statistical comparisons between mean of neutrophils sequestration in interstitium of the renal cortex, One-way ANOVA and covariance analysis were used, adjusting itself for time of supervened. The mean total volume replacement for hemorrhagic shock was lesser in Group HSS than in Group LRS, and these values were not statiscally significant different from Group PSS. The Group HSS demonstrated greather lactate mean values at 60 minutes of reperfusion compared with Group PSS (p=NS in relation to Group LRS. The mean values of supervened, in minutes, for group were: Group PSS 79.0±12.0; Group 97,0±11,0; Group HSS 67.0±10. The mean values of neutrophils/field in the renal cortex : Group PSS 0.55±0.68; Group LRS 1.68±0.53; Group HSS 1.33±0.43. When adjusted for time of supervened: Group PSS 0.55; Group LRS 1.62; Group HSS 1.39. There was significant difference in neutrophils sequestration between Group PSS regarding the other groups, using itself or not the adjustment by time of supervened (p=0,016 and p=0,0128) / Doutorado / Cirurgia / Doutor em Cirurgia

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Foram investigados os efeitos da L-alanil-glutamina (L-ALN-GLN) sobre as concentraÃÃes sanguÃneas e teciduais de metabÃlitos (lactato, piruvato, glicose e corpos cetÃnicos), substÃncias reagentes ao Ãcido tiobarbitÃrico (TBARS), glutationa (GSH), mieloperoxidase (MPO) e avaliaÃÃo histopatolÃgica em gerbils. Tratou-se de um estudo experimental, controlado. Utilizaram-se 54 gerbils, machos, com peso mÃdio de 150g, distribuÃdos aleatoriamente em 3 grupos: salina com isquemia e reperfusÃo (SIR), salina sem isquemia e reperfusÃo (SSI), L-alanil-glutamina com isquemia e reperfusÃo (GIR), redistribuÃdos em 3 subgrupos: T0 (tempo mÃximo de isquemia), T30 (30 min de reperfusÃo) e T60 (60 min de reperfusÃo), com 6 animais cada. Foram prÃ-tratados com soluÃÃo salina 2,0 mL 0,9% endovenoso (e.v.) ou L-ALNGLN 0,75g/Kg (e.v.), 30 min antes do inÃcio dos experimentos. A isquemia cerebral foi induzida pela oclusÃo bilateral das artÃrias carÃtidas comuns (ACCs), por um perÃodo de 15 minutos. ApÃs todos os procedimentos cirÃrgicos as amostras (sangue e tecido) foram coletadas ao final dos trÃs tempos. Nas comparaÃÃes entre os grupos (SSI) e (SIR) houve um aumento significante nas concentraÃÃes de lactato no sangue no grupo SIR em T0 (0,756Â0,091 versus 3,596Â1,546); p=0,0122, T30 (0,869Â0,254 versus 3,316Â1,356); p=0,0015 e em T60 (0,858Â0,460 versus 2,409Â0,801); p=0,0021. No tecido cerebral houve um aumento significante do lactato em T0 (1,374Â0,172 versus 2,530Â0,850); p=0,0085, T30 (0,891Â0,697 versus 1,840Â0,530); p=0,0243 e em T60 (1,182Â0,136 versus 1,744Â0,463); p=0,0173 no grupo SIR. Para as concentraÃÃes de piruvato no sangue observou-se um aumento significante em T0 (p=0,0424); T30 (p=0,0271) e em T60 (p=0,0175) e no tecido cerebral em T0 (p=0,0369) no grupo SIR. Para as concentraÃÃes de glicose no sangue houve um aumento significante em T0 (0,493Â0,393 versus 1,116Â0,364); p=0,0174, T30 (0,617Â0,356 versus 1,502Â0,314); p=0,0010 e em T60 (0,998Â0,411 versus 1,718 Â 0,477); p=0,0190 e no tecido cerebral em T0 (0,292Â0,081 versus 0,952Â0,7140); p=0,0484, T30 (0,264Â0,080 versus 1,038Â0,609); p=0,0116 e em T60 (0,234Â0,089 versus 0,985Â0,533); p=0,0067, no grupo SIR. Verificou-se um aumento significante nos nÃveis enzimÃticos de MPO em T0 (p<0,0001), T30 (p=0,0269) e em T60 (p=0,0005) no grupo SIR. Na avaliaÃÃo histopatolÃgica no grupo SIR nas camadas piramidal interna e granular interna foram observados aumento significante de picnose, neurÃnios vermelhos, congestÃo e edema, em T0, T30 e T60. Nas comparaÃÃes entre grupos (SIR) e (GIR) houve diminuiÃÃo significante no grupo GIR no sangue de lactato em T0 (3,596Â1,546 versus 1,960Â0,450); p=0,0321, T30 (3,316Â1,356 versus 1,971Â 0,568); p=0,0490 e em T60 (2,409Â0,801 versus 1,516Â0,307); p=0,0290 e no tecido cerebral em T0 (2,530Â0,850 versus 1,540Â0,302); p=0,0228. No tecido cerebral no grupo GIR houve diminuiÃÃo significante de TBARS em T30 (0,110Â0,006 versus 0,057Â0,040); p=0,0102 e um aumento significante de GSH em T0 (3,454Â1,584 versus 10,054Â2,880); p=0,0006, T30 (10,949Â1,579 versus 81,767Â9,060); p<0,0001 e em T60 (101,83Â2,631versus 114,924Â6,311); p=0,0011. Na avaliaÃÃo histopatolÃgica no grupo GIR na camada piramidal interna foram observados diminuiÃÃo significante de picnose nos tempos T30 (3,00 (2,75 a 4,25) versus 1,50 (0,75 a 2,00); p=0,0086 e em T60 (4,00 (3,75 a 5,55) versus 2,00 (1,75 a 4,00); p=0,0379 e nos neurÃnios vermelhos em T30 (3,00 (2,00 a 4,25) versus 1,50 (0,75 a 2,00); p=0,0159 e em T60 (4,00 (3,75 a 4,75) versus 2,00 (1,75 a 4,00); p=0,0493. Na camada granular interna no grupo GIR houve diminuiÃÃo significante de picnose em T30 (2,00 (1,00 a 3,25) versus 1,00 (0,00 a 1,00); p=0,0208 e em T60 1,50 (0,00 a 1,00) versus 0,00 (1,00 a 3,50); p= 0,0412, neurÃnios vermelhos em T30 (2,00 (1,00 a 3,25) versus 1,00 (0,00 a 1,00); p=0,0208 e em T60 1,50 (0,00 a 1,00) versus 0,00 (1,00 a 3,50); p=0,0412 e no grau de edema em T30 (2,00 (1,00 a 2,00) versus 1,00 (0,75 a 1,00); p=0,0225. Portanto, o prÃ-condicionamento com L-ALN-GLN foi capaz de induzir glicÃlise cerebral e de promover um efeito protetor na lesÃo de isquÃmia e reperfusÃo em gerbils, uma vez que elevou a sÃntese de glutationa tanto na isquemia quanto na reperfusÃo, reduziu a peroxidaÃÃo lipÃdica durante a fase de reperfusÃo e diminuiu o grau de edema intracerebral, a quantidade de picnose e neurÃnios vermelhos no tecido cerebral. / We investigated the metabolic effects of L-alanyl-Glutamine (L-ALN-GLN) on blood and tissue concentrations of metabolites (lactate, pyruvate, glucose and ketone bodies), thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), glutathione (GSH), myeloperoxidase (MPO) and histopathologic evaluation of gerbils. This was an experimental and controlled study. Fifty-four male gerbils with a mean weight of 150gwere used, and were divided randomly and equally into 3 groups: saline with ischemia and reperfusion (SIR), saline without ischemia and reperfusion (SSI), L-alanyl-glutamine ischemia and reperfusion (GIR). They were then redistributed into three subgroups: T0 (maximum time of ischemia), T30 (30 min of reperfusion) and T60 (60 min of reperfusion), containing 6 animals each. They were pretreated with saline 2.0 mL 0.9% intra-venous (iv) or ALN-L-GLN 0.75 g / kg (iv) 30 min before the start of the experiments. Cerebral ischemia was induced by bilateral occlusion of the common carotid arteries (CCAs) for a period of 15 minutes. After all surgical procedures, the samples (blood and tissue) were collected at the end of the three periods. When comparing SSI and SIR groups, a significant increase of lactate was found in SIR group in T0 (0.756Â0.091 versus 3.596Â1.546; p=0.0122, T30 (0.869Â0.254 versus 3.316Â1.356); p=0.0015, and T60 (0.858Â0.460 versus 2.409Â0.801); (p=0.0122). In brain tissue there was significant lactate increase in TO (1.374Â0.172 versus 2.530Â0.850); p=0.0085, T30 (0.891Â0.697 versus 1.840Â0.530); p=0.0243 and T60 (1.182Â0.136 versus 1.744Â0.463); p=0.0173, in SIR group. In blood and tissue concentrations of pyruvate was found a significant increase in T0 (p=0.424), T30 (p=0.0271) and T60 (p=0.0175), and in brain tissue in T0 (p=0.0369) in the SIR group. In glucose blood concentrations there was a significant increase in T0 (0.493Â0.393 versus 1.116Â0.364); p=0.0174, T30 (0.617Â0.356 versus 1.502Â0.314); p=0.0010 and T60 (0.998Â0.411 versus 1.718Â0.477); p=0.0190, and in brain tissue in T0 (0.292Â0.081 versus 0.952Â0.7140); p=0.0484, T30 (0.264Â0.080 versus 1.038Â0.609); p=0.0116 and T60 (0.234Â0.089 versus 0.985Â0.533); p=0.0067, in the SIR group. On blood ketone bodies there was a significant increase in T0 (p=0.0006) and T60 (p=0.0455), and in brain tissue in T0 (p=0.0428) in SIR group. There was a significant increase in MPO enzyme levels at T0 (p<0.0001), T30 (p=0.0269) and T60 (p=0.0005). In the histopathological evaluation in the internal pyramidal and granular layers in group CRS observed a significant increase of pyknosis, red neurons, congestion and edema, at T0, T30 and T60. In the comparison between the (SIR) and (GIR) groups, there was a significant decrease in T0 (3.596Â1.546 versus 1.960Â0.450); p=0.0321, T30 (3.316Â1.356 versus 1.971Â0.568); p=0.0490 and T60 (2.409Â0.801 versus 1.516Â0.307); p=0.0290, and in brain tissue there was significant decrease in T0 (2,530Â0,850 versus 1.540Â0,302); p=0.0228. In brain tissue was found significant decrease in TBARS concentrations in T30 (0.110Â0.006 versus 0.057Â0.040); p=0.0102, and a significant increase of GSH in T0 (3.454Â1.584 versus 10.054Â2.880), p=0.0006, T30 (10.949Â1.579 versus 81.767Â9.060); p<0.0001 and T60 (101.83Â2.631 versus 114.924Â6.311); p=0.0011 in GIR group. Regarding the histological examination, a significant decrease of pyknosis was found at T30 (3.00 (2.75 to 4.25) versus 1.50 (0.75 to 2.00); p= 0.0086 and T60 (4.00 (3.75 to 5.55) versus 2.00 (1.75 to 4.00); p=0.0379 and red neurons at T30 (3,00 (2,00 to 4.25) versus 1.50 (0.75 to 2.00); p=0.0159 and T60 (4.00 (3.75 to 4.75) versus 2,00 (1.75 to 4.00); p= 0.0493. in the internal pyramidal layer. In the Internal granular layer in GIR group there was a significant reduction of pyknosis at T30 (2.00 (1.00 to 3.25) versus 1.00 (0.00 to 1.00); p=0.0208 and T60 1.50 (0.00 to 1.00) versus 0.00 (1.00 to 3.50); p=0.0412, red neurons in T30 (2.00 (1.00 to 3.25) versus 1.00 (0.00 to 1.00); p=0.0208 and T60 1.50 (0.00 to 1.00) versus 0.00 (1.00 to 3.50); p=0.0412 and on the intracerebral edema level at T30 (2.00 (1.00 to 2.00) versus 1.00 (0.75 to 1.00); p=0.0225. Therefore, the preconditioning with L-GLN-ALN is able to induce brain glicolise and promote a protective effect on ischemic brain injury and reperfusion in gerbils, since it increased the glutathione synthesis both on ischemia and reperfusion, as well as decreasing lipid peroxidation during the reperfusion phase and decreased the intercerebral edema level, and the number of pyknosys and red neurons in brain tissue.

A gravidade da síndrome isquemia/reperfusão determina o prognóstico da lesão renal aguda (LRA). Agentes como o citrato de sildenafil (Sil) e a N-acetilcisteína (NAC) tem demonstrado efeito renoprotetor na LRA isquêmica com resultados ainda inconclusivos. Esse estudo investigou o efeito do Sil e da NAC na LRA com diferentes tempos de isquemia. Foram utilizados grupos de ratos Wistar, adultos e machos: SHAM; Isquemia 30 min (clampeamento dos pedículos renais por 30 min); Isquemia 30 + Sil (Sil 0,25 mg/kg 60 min antes da isquemia renal); Isquemia 30 + NAC (NAC 150 mg/kg antes e após a isquemia renal); Isquemia 45 (clampeamento dos pedículos renais por 45 min); Isquemia 45 + Sil e Isquemia 45 + NAC. Foram avaliadas a função renal (clearance de creatinina e fração de excreção de sódio-FENa); a lesão oxidativa (peróxidos urinários; substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico - TBARS; óxido nítrico - NO e tióis no tecido renal); a síntese protéica da óxido nítrico sintase induzível iNOS e da heme oxigenase-1 HO-1 (western blotting) e análise histológica renal (área intersticial relativa - AIR e lesão tubulointersticial). Os grupos 30 min tratados com Sil e NAC demonstraram melhora da função renal, redução dos índices oxidantes e NO, ausência de iNOS e presença de HO-1. Nos grupos 45 min, o Sil manteve a função renal, porém demonstrou proteção tubular e oxidante; a NAC não demonstrou efeito protetor em nenhum dos parâmetros avaliados. Quanto à histologia, apenas o Sil induziu redução da AIR e da lesão tubulointersticial nos tempos 30 e 45 min. O estudo confirmou que as características funcionais e histológicas induzidas pelo tempo de isquemia na LRA determinam as respostas às manobras farmacológicas de prevenção. A expressão HO-1 pode ser considerada um mediador de proteção renal. / Severity of ischemic/reperfusion injury syndrome determines the prognosis of acute kidney injury (AKI). Agents such as sildenafil citrate (Sil) and N-acetylcysteine (NAC) have demonstrated renoprotective effect on ischemic AKI which data is still inconclusive. This study investigated the protective action of Sil and NAC in the AKI with different time of ischemia. Adult, male, Wistar rats were divided: SHAM, Ischemia 30 min (renal pedicles clamping for 30 min), Ischemia 30 + Sil (Sil 0,25 mg/kg 60 min before renal ischemia), Ischemia 30 + NAC (NAC 150 mg/kg before and after renal ischemia), Ischemia 45 min (renal pedicles clamping for 45 min), Ischemia 45 + Sil, Ischemia 45 + NAC. Renal function (creatinine clearance and urine sodium fractional excretion - FENa); oxidative injury (urinary peroxides, thiobarbituric acid reactive substances - TBARS, nitric oxide - NO and thiols in renal tissue); expression of inducible nitric oxide synthase - iNOS and heme oxygenase-1 HO-1 (western blotting) and kidney histological analysis (fractional interstitial area - FIA and tubuleinterstitial injury) were evaluated. Sil and NAC treatment in 30 min renal ischemia induced increase in renal function, decrease in the rate of oxidation and NO levels, iNOS absence and HO-1 expression. In the Ischemia 45 groups, Sil it maintained renal function, however demonstrated tubular and oxidative protection; NAC produced no renoprotective effect on any of the parameters evaluated. Histology studies showed that, only Sil induced reduction in FIA and tubuleinterstitial injury at 30 and 45 min ischemic time. The study confirmed that the functional and histological characteristics induced by time of ischemia determine the renoprotective pharmacological agent action in the AKI. HO-1 expression can be a renal protection mediator.

Isquemia e reperfusão (I/R) de vasos mesentéricos que acarretam insuficiência vascular aguda são acompanhadas de insuficiência em múltiplos órgãos e estão associados a altas morbidade e mortalidade. Os benefícios da solução hipertônica e da pentoxifilina foram testados isoladamente e em conjunto para melhorar o fluxo sanguíneo e o estado de oxigenação dos tecidos com redução da reação inflamatória e de apoptose, tanto no intestino quanto no pulmão enquanto órgão alvo. Foram utilizados 24 ratos Wistar machos pesando entre 200 e 250g distribuídos em 4 grupos (n=6). Foram submetidos à laparotomia e período de isquemia por clampeamento dos vasos mesentéricos por 40 minutos. O período de reperfusão foi de 80 minutos. A cada 40 minutos foram realizadas coletas de sangue arterial para gasometria. Os animais foram alocados nos grupos: grupo I/R (IR) onde I/R foi realizada e os animais receberam 4ml/kg de solução salina isotônica. O grupo solução salina hipertônica (SH) recebeu 4ml/kg de solução hipertônica a 7,5% e o grupo pentoxifilina (PTX) recebeu 30mg/kg de pentoxifilina diluída em NaCl 0,9% em um volume total de 4ml/kg ao final da isquemia intestinal. O grupo solução salina hipertônica+pentoxifilina (SH+PTX) recebeu ambas as soluções com volume total de 4m/kg no mesmo momento. As biopsias de intestino e pulmão foram colhidas ao final do experimento e foram submetidas à coloração em HE e à imuno-histoquímica para COX 2, caspase-3 clivada e Bcl-2. Os valores de sO2 revelaram diferença estatisticamente significante aos 40 (p=0,0099) e 80 (p=0,0074) minutos de reperfusão na comparação do grupo IR com os grupos SH e SH+PTX. Os valores de lactato foram estatisticamente significantes aos 40 minutos (p=0,0069) e 80 minutos (p=0,0098) de reperfusão, entre os grupos IR e os grupos SH e SH+PTX. A avaliação histológica em HE no tecido intestinal evidenciou diferença estatisticamente significantes na comparação dos grupos SH (p=0,0200), PTX (p=0,0200) e HS+PTX (p=0,0412) com o grupo IR, assim como no tecido pulmonar, que evidenciou diferenças estatisticamente significantes na comparação de IR com SH (p=0,006), PTX (p=0,0433) e SH+PTX (p=0,0040). A marcação citoplasmática de COX 2 revelou diferença estatisticamente significante ao comparar o grupo IR com o grupo SH+PTX (p=0,0015), Na avaliação do tecido pulmonar foi observado o grupo IR estabelecendo diferenças estatisticamente significantes na comparação com os grupos SH (p=0,0455), PTX (0,0143) e SH+PTX (p=0,0455). A avaliação de apoptose por imunohistoquímica para caspase 3 clivada evidenciou diferença com significância estatística ente os grupos IR e SH (p=0,0085) e os grupos PTX e SH (p=0,0120) em tecido intestinal. Em tecido pulmonar, entre IR e PTX (p=0,0090) e SH e PTX (p=0.0412). A marcação citoplasmática de Bcl-2 evidenciou que somente entres os grupos IR e SH+PTX (p=0,0012) se estabeleceu significância estatística em tecido intestinal No pulmão a diferença foi evidenciada em relação ao grupo IR e os grupos SH (p=0,0128), PTX (p=0,0085) e SH+PTX (p=0,0066). Conclui-se que o uso associado de pentoxifilina e solução salina hipertônica oferece os melhores resultados dos pontos de vista metabólico, inflamatório e da inibição da apoptose / Ischemia-reperfusion (I/R) of the mesenteric vessels cause acute vascular insufficiency and is followed by multiple organs failure and high morbidity and mortality. The benefits of hypertonic saline (NaCl 7,5%) and pentoxifylline were tested to improve metabolic and oxygen status of tissues with reduced inflammatory reaction and apoptosis, both in the gut as in the lung as target organ. 24 male Wistar rats weighing 200 to 250g. They underwent laparotomy and ischemia by clamping the mesenteric vessels for 40 minutes. The reperfusion period was 80-minute long. Every 40 minutes, blood was collected for arterial gas analysis. The animals were set into 4 groups (n=6): I/R (IR) received isotonic saline just before reperfusion (4ml/kg). Hypertonic saline group (HS) received 7.5% hypertonic saline solution (4ml/kg) and Pentoxifylline group (PTX) received pentoxifylline (30mg/kg)diluted in NaCl 0.9% at the end of the mesenteric ischemia. Hypertonic saline+pentoxifylline group (SH-PTX) received both solutions at the same doses. Biopsies of intestine and lung were collected at the end of the experiment and were subjected to HE staining and immunohistochemistry staining to COX 2, cleaved caspase-3 and Bcl-2. About the values of sO2, a statistically significant difference was established when groups were compared at 40 (p=0.0099) minutes and 80 (p=0.0074) of reperfusion. The lactate values were statistically significant after 40 (p=0.0069) and 80 (p=0.098) minutes of reperfusion as well. Histological evaluation with HE revealed a statistically significant difference in the comparison of SH (p=0.0200), PTX (p=0.0200) and HS + PTX (p=0.0412) groups compared to IR group in intestine tissue and SH (p=0.0006), PTX (p=0.0433) and HS + PTX (p=0.040) in lung tissue. Cytoplasmic staining of COX 2 revealed a statistically significant difference when comparing IR (p=0.0015) to HS+PTX in intestinal tissue. The evaluation of the lung tissue for COX 2 showed IR group setting statistically significance when compared to HS 9p=0,045), PTX (0.0143) and HS+PTX (p=0.0455) groups. The evaluation of apoptosis by immunohistochemistry for cleaved caspase 3 revealed that there was a significant difference between IR versus SH (p=0.0085) and PTX versus HS (p= 0.0120) in intestinal tissue and IR versus PTX (p=0,0090) and PTX versus SH (p=0.0412) in lung tissue. The cytoplasmic Bcl-2 expression shows that only between groups IR versus HS+PTX (p = 0.0012) statistical significance was established in intestinal tissue. Lung tissue showed the difference was evidenced in relation to IR versus SH (p=0.0128), PTX (p=0.0085) and HS+PTX (p=0.0066). It may be concluded that the combined use of pentoxifylline and hypertonic saline offers best results on metabolic, inflammatory and apoptosis inhibitory aspects

A obstrução intestinal mecânica representa uma condição de urgência, necessitando diagnóstico precoce e terapêutica adequada, em virtude do seu elevado grau de morbidade e de mortalidade. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da N-acetilcisteína associada ao Ringer lactato ou à solução salina hipertônica na resposta inflamatória, histologia e translocação bacteriana em modelo experimental de obstrução e isquemia intestinal. Para tanto, Foram constituídos quatro grupos experimentais, com 10 ratos Wistar em cada, além do grupo de referência: OI - Submetidos a obstrução e isquemia intestinal e enterectomia com anastomose intestinal, sem reanimação volêmica; RL - Submetidos a obstrução e isquemia intestinal, reanimação volêmica com Ringer lactato (32ml/kg, i.v., em 10 minutos) e enterectomia com anastomose intestinal; RLNAC - Submetidos a obstrução e isquemia intestinal, reanimação volêmica com Ringer lactato associado a NAC (32ml/kg + 150 mg/kg i.v. em 10 minutos) e enterectomia com anastomose intestinal; SHNAC - Submetidos a obstrução e isquemia intestinal, reanimação volêmica com solução salina hipertônica a 7,5% associado com NAC (4ml/kg + 150 mg/kg i.v., em 10 minutos) e enterectomia com anastomose intestinal. Grupo Referência (n=5): Animais anestesiados, submetidos a coleta de materiais para cultura e histologia e sacrificados por exsanguinação. Os animais receberam uma associação anestésica de cetamina e xilazina intramuscular em membro posterior direito, na dose de 60mg/kg e 10mg/kg, respectivamente. Decorridas 24 h do tratamento, a eutanásia foi realizada por exanguinação, sob anestesia, após a coleta dos tecidos / Mechanical intestinal obstruction represents a condition of urgency, necessary early diagnosis and appropriate therapy, due to their high degree of morbidity and mortality. In this way, the objective of this study was to evaluate the effect of N-acetylcysteine associated with lactated Ringer\'s or hypertonic saline solution in the inflammatory response, histology and translocation in an experimental model of intestinal obstruction and ischemia. For Four experimental groups were constituted with 10 Wistar rats each, in addition to the reference group: OI - submitted to obstruction and ischemia intestinal and enterectomy with intestinal anastomosis, without volume resuscitation; RL - Undergoing intestinal obstruction and ischemia, volume resuscitation with Ringer\'s lactate (32ml / kg, i.v., within 10 minutes) and anastomosis enterectomy intestinal; RLNAC - Undergoing obstruction and intestinal ischemia, resuscitation with lactated Ringer\'s lactating NAC (32 ml / kg + 150 mg / kg i.v. in 10 minutes) and enterectomy with intestinal anastomosis; SHNAC - Submitted to obstruction and intestinal ischemia, volume resuscitation with saline solution hypertension at 7.5% associated with CAP (4 ml / kg + 150 mg / kg i.v., in 10 minutes) and enterectomy with intestinal anastomosis. Reference Group (n = 5): Anesthetized animals, submitted to collection of materials for culture and histology and sacrificed by exsanguination. The animals received a anesthetic association of ketamine and intramuscular xylazine in limb posterior right, at the dose of 60mg / kg and 10mg / kg, respectively. After 24 h of treatment, euthanasia was performed by exsanguination, under anesthesia, after collection of tissues

Orientador: Ivan Felizardo Contrera Toro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T09:33:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mussi_RicardoKalaf_D.pdf: 7974637 bytes, checksum: 40bf555137ac51738964d4e90337bddf (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Objetivos: A proposta deste estudo foi avaliar os efeitos do treinamento físico na resposta inflamatória (permeabilidade vascular e influxo neutrofílico) após isquemia-reperfusão pulmonar (IRP) em ratos. Considerando que o treinamento físico tem propriedades protetoras em determinadas doenças cardiovasculares, hipotetizamos que animais submetidos a treinamento com exercício físico podem ficar protegidos contra a lesão causada pela isquemia e reperfusão pulmonar. Métodos: ratos Wistar machos (pesando entre 350g e 450g) foram divididos em três grupos: sham operados (SHAM); animais sedentários submetidos à isquemia-reperfusão (IR/SD) e animais treinados submetidos à isquemia-reperfusão (IR/TR). Animais treinados foram submetidos a um programa de oito semanas de treinamento em corrida, com sessões de 60min por dia, cinco dias por semana. Os ratos foram anestesiados e ventilados artificialmente. Após a toracotomia, a artéria pulmonar esquerda, o brônquio principal esquerdo e a veia pulmonar esquerda foram clampeados, mantendo o pulmão inflado parcialmente por 90 minutos. O clampe foi então removido e os pulmões voltaram a ventilar, e foram reperfundidos por duas horas. A circulação pulmonar foi perfundida através do tronco arterial pulmonar com solução salina. O extravasamento de proteína plasmática foi medido através do acúmulo de albumina sérica marcada com I. em ambos os pulmões, enquanto que a infiltração neutrofílica foi medida através da atividade de mieloperoxidase (MPO). 125Resultados: Após oito semanas de treinamento em corrida, o peso corpóreo foi significativamente menor em 15% no grupo treinado comparado com o do grupo sedentário (p<0,05). A contagem de células mononucleares e polimorfonucleares em ratos treinados não se altera significativamente quando comparada à dos ratos sedentários. A IRP causou acentuado aumento (p< 0,05) na permeabilidade vascular e na atividade da mieloperoxidase do pulmão direito dos animais sedentários. O precondicionamento físico dos animais atenuou significativamente (p< 0,05) a elevação da permeabilidade vascular, sem afetar o influxo neutrofílico. O protocolo de isquemia e reperfusão também resultou em níveis elevados de IL-1 ß e TNF-a no grupo sedentário, e foram revertidos pelo programa de treinamento em corrida. Os níveis séricos de IL-10 não foram alterados nos três grupos. Conclusões: Os dados deste estudo mostram que o precondicionamento físico atenua a elevação da permeabilidade vascular, mas não o influxo neutrofílico induzido pela isquemia-reperfusão em ratos. Estes dados sugerem que o treinamento físico age no componente vascular mas não no celular da resposta inflamatória, deste modelo, protegendo contra a lesão pulmonar causada pela isquemia-reperfusão / Abstract: Objective: The purpose of this study was to evaluate the effects of exercise training on the inflammatory response (vascular permeability and neutrophil influx) after lung ischemia-reperfusion in rats. Considering that exercise training have protective properties in certain cardiovascular disease, we hypothesized that animals undergoing exercise physical training would be protective against direct lung ischemia-reperfusion injury. Methods: Male Wistar rats (weighing 350g and 450g) were divided into tree groups: Sham operated (SHAM); sedentary animals submitted to ischemia-reperfusion (IR/SD) and trained animals submitted to ischemia-reperfusion (IR/TR). Trained animals underwent 8 weeks of run training program in sessions of 60 min/day, 5 days/week. Rats were anesthetized and artificially ventilated. After thoracotomy, the left pulmonary artery, bronchus and pulmonary vein were occluded, maintaining the lung in a partially inflated state for 90min. The clamp was then removed, and lungs were allowed to ventilate and reperfuse for 2h. The pulmonary circulation was flushed through the main pulmonary artery with salin solution. Protein plasma extravasation was measured as accumulation of human serum albumin labeled with I in the botht lung tissues, whereas neutrophil infiltration was measured as the myeloperoxidase (MPO) activity.125 Results: After 8 weeks of run training, the body weight was significantly 15% lower in trained groups compared with the sedentary group (p<0.05). Counts of mononuclear and polymorphonuclear cells in trained rats did not significantly changed compared with sedentary rats. The lung ischemia-reperfusion caused a marked increase (p<0.05) in vascular permeability and MPO activity in the right lung of sedentary animals. The physical preconditioning of the animals significantly attenuated (p<0.05) the increased vascular permeability, without affecting the neutrophil influx. The ischemia-reperfusion protocols also resulted in increased levels of serum IL-1ß and TNF-a in sedentary group, and that was reversed by run training program. The serum levels IL-10 were not altered in all groups. Conclusions: Our data show that physical preconditioning attenuate the increased vascular permeability but not the neutrophil influx induced by rat lung ischemia-reperfusion. This data suggests that physical training act in the vascular (but not in the cellular) component of the inflammatory response to protect against the injury caused by lung ischemia-reperfusion / Doutorado / Cirurgia / Doutor em Cirurgia

Orientadores: Ilka de Fátima Santana Ferreira Boin, Artur Udelsmann / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T00:05:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jorge_GracindadeLourdes_D.pdf: 6636878 bytes, checksum: 9167ec95670521d52d8c88a19fc3ceb9 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A oclusão vascular temporária do fluxo hepático é um dos procedimentos essenciais nas cirurgias hepáticas. Muitas pesquisas relacionadas à isquemia e reperfusão (I/R) em ratos Wistar, seja através de interrupção por pouco tempo, ou período maior, têm demonstrado sérias complicações causadas por lesões de I/R. Pesquisas demonstram grandes alterações metabólicas e fisiológicas quando analisadas durante, ou nas primeiras horas após o experimento. O objetivo deste trabalho foi avaliar as alterações hepáticas morfológicas e bioquímicas tardias, ocorridas após pinçamento total ou parcial do hilo hepático em ratos Wistar. Um total de 26 ratos Wistar, machos, peso médio 315,5 ± 61,5g foram utilizados em dois estudos. No primeiro estudo, 12 ratos foram divididos em dois grupos: Grupo Pinçamento do Ducto Biliar Comum (PDBC; n=6) foram submetidos à anestesia com tiopental sódico iv, à incisão abdominal até 2cm, tendo o ducto biliar isolado, dissecado e pinçado por 10 minutos. Após este tempo, a pinça foi retirada e a incisão fechada. Grupo Operação Simulada I (OSI; n=6) em condições de normalidade, os animais foram submetidos unicamente à anestesia e laparotomia e, posteriormente, a exames de controle. Nos dois grupos após o 28ºdia foram realizadas biópsias hepáticas e exames bioquímicos seguidos de eutanásia dos animais. Observamos que 83% dos animas do grupo PDBC apresentaram dilatação do colédoco, com alterações histológicas hepáticas: proliferação ductular, formação de septos, focos de necrose do parênquima, com formação de micro abcessos e alterações dos exames bioquímicos, quando comparados aos animais do grupo OSI (p < 0,05). No segundo estudo, 14 animais foram anestesiados com ketamina 5% (30mg/Kg) e xylazina 2% (30mg/Kg) via intraperitoneal. No grupo clampeamento intermitente do pedículo hepático (CIPH; n=7) os animais foram submetidos à incisão em U no abdome; o pedículo hepático foi isolado, dissecado e submetido a pinçamento, com micro pinça, intermitente por 4 ciclos de 5 minutos de isquemia, seguidos de 5 minutos de reperfusão, e a incisão foi fechada. No Grupo Operação Simulada II (OSII; n=7) os animais foram submetidos à anestesia, laparotomia e manipulação do pedículo hepático e,posteriormente, ao controle dos exames. Em todos os animais no 35o dia, após jejum de 12 horas, foi realizada nova anestesia para coleta da biópsia hepática e sangue para dosagem de alanina amino transferase (ALT) e de aspartato amino transferase (AST). A análise estatística foi realizada pelo teste Mann-Whitney para comparação de médias com significância de 5%. Observamos que todos os animais do grupo CIPH apresentaram dilatação do colédoco e aumento significativo nas enzimas hepáticas (p<0,05). Na avaliação histológica constatamos proliferação ductular (100% dos casos), septos porta-porta (42,8%), formação de nódulos (42,8%), focos de necrose (14,2%) e rolhas de bile (14,2%). No grupo OSII estas alterações não foram encontradas. Concluímos que o pinçamento do ducto biliar (10 minutos) foi suficiente para gerar importantes alterações morfológicas hepáticas e do colédoco, confirmadas através de análise enzimática e histológica, podendo, portanto, ser utilizado como modelo de obstrução biliar, visando estudos semelhantes. Constatamos, também, que o pinçamento intermitente do pedículo hepático provocou lesões semelhantes na árvore biliar e no parênquima hepático / Abstract: The temporary vascular occlusion of the hepatic blood flow is one of the essential procedures in hepatic surgery. Many researches are related to ischemia and reperfusion (I/R) in rats, either through interruption for a short time period or higher and all has shown serious complications caused by I/R injury. Researches have demonstrated, in the early analysis severe metabolic and physiological disorders but there are not reports about hepatic injuries after late analysis. The objective was to assess the morphological and biochemical hepatic late alterations occurring after total or partial hepatic pedicle clamping, in Wistar rats. A total of 26 male Wistar rats, weighting 315.6 ±61.9g were used in two studies. In the first, 12 rats were distributed into two groups: bile duct clamping group (BDCG; n = 6); anesthetized with thiopental sodium; with bile duct dissection, isolation and clamped for 10 minutes. After this time, the clamp was removed and the incision was closed. In simulated operation group I (SOGI; n = 6) the animals were submitted solely to anesthesia and laparotomy and subsequently control exams.On the 28th day, liver biopsies and biochemical exams were performed. All animals were sacrificed while still under anesthesia. We observed that 83% of the animals of BDCG group showed dilation of the common bile duct with hepatic histological changes such as ductular proliferation, septa formation, parenchymal foci of necrosis with formation of micro abscesses and changes of biochemical tests when compared to SOGI (p<0.05).In the second study, 14 animals were anesthetized with ketamine 5% (30mg/kg) and xylazine 2% (30mg/kg)intraperitoneally. In intermittent Hepatic Pedicle Group (IHPC; n = 7) the animals had the hepatic pedicle isolated, dissected and submitted to clamping applying 4 cycles of 5 minutes of ischemia followed by 5 minutes of reperfusion, and the incision was closed.In group operation simulated II (SOGII; n = 7), the animals were anesthetized, laparotomy and manipulation of the hepatic pedicle were performed. On the 35th day, after 12 hours fasting, anesthesia wasinduced for liver biopsy and serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) collection. The Mann-Whitney test for comparison of means with significance of 5% was used. In result all the animals of IHPC group had a dilated common bile duct and the significant increase in hepatic enzymes (p <0.05). In histological evaluation we found ductular proliferation (100% of cases), septa port-portal (42.8%), nodules formation (42.8%), foci of necrosis (14.2%) and bile plugs (14.2%). In the group SOGII these changes were not found. We conclude that the short clamping time of the bile duct (for 10 minutes) was enough to cause major hepatic and bile duct morphological changes confirmed by enzymatic and histological analysis, and may therefore be used as biliary obstruction model in order to similar studies. We also noted that the intermittent clamping of the hepatic pedicle caused similar injuries in the biliary tree and in the hepatic parenchyma / Doutorado / Fisiopatologia Cirúrgica / Doutora em Ciências

Orientador: Ilka de Fátima Santana Ferreira Boin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T03:46:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tartaro_RodolfodosReis_M.pdf: 2680765 bytes, checksum: 530c329a55099813e5274c8bd548a734 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Introdução: A manobra de Pringle intermitente é utilizada para a grande cirurgia de transplante, traumas e proteção hepática, mas o longo tempo de isquemia e reperfusão podem limitar a proteção em ratos Wistar. Objetivo: Comparar as alterações mitocondriais hepáticas, após clampeamento total intermitente versus o clampeamento contínuo do pedículo hepático por período de 40 minutos em ratos Wistar. Método: Quarenta e dois ratos Wistar machos, peso de 327,7 ± 51,75g, foram anestesiados com tiopental sódico (iv), com incisão em U no abdome. O pedículo hepático foi isolado e clampeado. Os animais foram distribuídos em três grupos: Grupo Contínuo (GC, n=14, submetidos a 40 minutos isquemia/40 minutos reperfusão). Grupo Intermitente (GI, n=14, submetidos a quatro ciclos de 10 minutos isquemia/10 minutos reperfusão). Grupo Controle (GCL, n=14, submetido a laparotomia por 80 minutos). No final do experimento, realizou-se coleta de sangue para dosagens das transaminases (AST/ALT) e biopsias hepáticas para avaliação da respiração mitocondrial e avaliação histológica. Resultados: GC e GI apresentaram AST/ALT elevadas (p<0,008) quando comparados ao GCL; as mitocôndrias estimuladas por ADP ou FCCP tiveram redução da respiração (p<0,05) e redução na razão do controle respiratório nos grupos (GC e GI) isquêmicos (p<0,03), quando comparados ao GCL, embora a comparação entre GI e GC não tenha apresentado diferença em relação à respiração mitocondrial. Na avaliação histológica: GC apresentou 33% necrose hemorrágica focal, 17% congestão sinusoidal e/ou vacuolização e 50% congestão venosa; GI teve 43% congestão sinusoidal e/ou vacuolização e 57% congestão venosa. Conclusão: As lesões hepáticas e alterações da respiração mitocondrial, após longo tempo de isquemia e reperfusão, aconteceram, independente do tipo de clampeamento utilizado, sendo que o grupo intermitente não se mostrou efetivo em evitar estas alterações. Palavra chave: Constrição, Isquemia, Reperfusão, Ratos Wistar, Mitocôndrias / Abstract: Introduction: The intermittent Pringle maneuver is utilized for major transplant surgery, traumas and hepatic protection, but long ischemia time and reperfusion may limit some protection in Wistar rats. Aim: Evaluate the protection effects of intermittent clamping in the total hepatic pedicle, after a long period of ischemia and reperfusion in Wistar rats. Method: Forty-two male Wistar rats, weighing ± 327,7g, anesthetized with sodium thiopental (iv) and subjected to a U-shaped incision in the abdomen. The total hepatic pedicle was isolated and subjected to a clamping with a microvascular clamp. Continuous Group (CG, n=14, 40 minutes of ischemia/40 minutes of reperfusion). Intermittent Group (IG, n=14, 4 cycles a 10 minute ischemia/reperfusion 10 minutes). Sham Group (SG, n=14, 80 minute observation time). Blood collection the dosage of transaminases and hepatic biopsies for evaluation of mitochondrial respiration and histological evaluation. Results: In groups CG and IG, AST and ALT enzymes were elevated in comparison to group SG (p<0,008); mitochondrias when stimulated by ADP or FCCP had a significant decrease in breathing (p<0.05), and the respiratory control ratio (RCR) in the ischemic groups was lower (p<0.03) when compared to the GS. In histology GC 100% had lesions: 33% focal hemorrhagic necrosis, 17% sinuzoidal congestion and/or vacuolization and 50% venous congestion, in GI 100% had lesions: 43% sinuzoidal congestion and/or vacuolization, 57% venous congestion. Conclusion: The intermittent total hepatic pedicle clamping for a long time in the Wistar rats was not effective in the protection of liver injury. Keywords: Constriction, Ischemia, Reperfusion, Rats ¿ Wistar, Mitochondria / Mestrado / Fisiopatologia Cirúrgica / Mestre em Ciências

INTRODUÇÃO: A falência intestinal constitui uma grave entidade patológica. Uma das opções para estes casos complexos, como a síndrome de Gardner e a dismotilidade intestinal, é o transplante multivisceral modificado (TxMvm). A literatura científica ainda carece de um modelo experimental animal para o TxMvm, além do estudo de seus efeitos hemodinâmico e metabólico. A análise foi feita em dois dos três tipos de TxMvm: na evisceração maior e no modelo de preservação esplênica. Essas técnicas levam a grandes modificações anatômicas e hemodinâmicas que, somadas ao processo de evisceração esplâncnica, contribuem para redução da pré-carga e consequentemente do débito cardíaco (DC). O objetivo geral é descrever um modelo de evisceração das duas técnicas utilizadas no TxMvm em porco. O específico é descrever e comparar as alterações hemodinâmicas e metabólicas sistêmicas e regionais da evisceração abdominal nestas duas técnicas. MÉTODO: Foram utilizados 14 suínos (Landrace), pesando de 28 a 30 kg, que foram anestesiados, submetidos à ventilação mecânica e monitorizados hemodinamicamente. Os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos: grupo 1 (n=8), submetido à evisceração completa dos órgãos intra-abdominais, com exceção do fígado, e grupo 2 (n=6), submetidos à mesma evisceração com preservação esplênica. As variáveis hemodinâmicas foram obtidas através de cateter na aorta torácica e um cateter de Swan-Ganz. A avaliação da perfusão esplâncnica foi realizada com cateteres posicionados nas veias porta e hepática, e através de fluxômetro ultra-sônico. A oferta, o consumo e as taxas de extração sistêmica, hepática e esplâncnica de oxigênio foram calculados por meio de fórmulas padrão. Amostras de histologia hepática para avaliação mitocondrial, de apoptose e de imunohistoquímica foram colhidas durante todo o protocolo experimental, assim como sangue para análises gasométrica e bioquímica. RESULTADOS: Embora não tenha havido diferença significativa entre os grupos na análise transversal, na longitudinal a DO2 apresentou diferença significativa no grupo 1 a partir do T120, e no grupo 2, a partir do T60. Houve queda sustentada do consumo de oxigênio (VO2) em ambos os grupos. A extração de oxigênio hepático (TEO2 hep) também decaiu, mas com recuperação em T180 no grupo 2, enquanto no grupo 1, o VO2 hepático apresenta queda significativa. A variável S4 apresenta alteração significativa ao fim do estudo. Não houve diferença quanto às análises histológicas e imunohistoquímica. CONCLUSÃO: O modelo descrito nesta tese foi efetivo em observar as alterações hemodinâmicas, metabólicas e histopatológicas da evisceração em ambas as técnicas do TxMvm. A evisceracão abdominal foi associada a alterações hemodinâmicas sistêmicas e regionais significativas. Apesar da redução do DC, os marcadores metabólicos e bioquímicos de lesão hepática permaneceram inalterados ao final do estudo / INTRODUCTION: Intestinal failure is a very severe pathology consequence of some diseases such as Gardner\'s syndrome and intestinal motility disorder. There are some treatment options, one of them is the modified multivisceral transplantation (TxMvm). There is no description in scientific literature about an experimental animal model for TxMvm and the study of its hemodynamic and metabolic effects. This assignment was done in two of the three types of TxMvm: in major evisceration and in splenic preservation model. These techniques lead to major anatomical and hemodynamic modifications that, together with the splanchnic evisceration process, contribute to reduction in preload and consequently cardiac output (CO). The general objective is to describe a model of evisceration of two techniques used in TxMvm in pork. The specific objective is to describe and compare the hemodynamic and systemic and regional metabolic changes of abdominal evisceration in these two techniques. METHOD: Fourteen pigs (Landrace) weighing 28 to 30 kg were used, which were anesthetized, submitted to mechanical ventilation and monitored hemodynamically. The animals were randomly assigned to two groups: group 1 (n = 8), submitted to complete evisceration of intra-abdominal organs, with the exception of liver, and group 2 (n = 6), submitted to the same evisceration with splenic preservation. Systemic and regional hemodynamics were evaluated using Swan-Ganz, ultrasonic flowprobes, and arterial catheters. Serial blood samples were collected for blood gas, electrolyte and serum chemistry analysis. Systemic, hepatic and splanchnic O2-derived variables were also calculated. Liver histological samples for mitochondrial evaluation, apoptosis and immunohistochemistry were collected throughout the experimental protocol. RESULTS: Although there was no significant difference between the groups in the transversal analysis, in the longitudinal one, DO2 (oxygen delivery) presented a significant difference in group 1 from T120, and in group 2, from T60. There was a sustained decrease in oxygen consumption (VO2) in both groups. Hepatic oxygen extraction (TEO2 hep) also declined, but recovered in T180 in group 2, whereas in group 1, hepatic VO2 presented a significant decrease. Variable S4 presented a significant change at the end of the study. There was no difference regarding histological and immunohistochemical analyzes. CONCLUSION: The model described in this thesis was effective in observing the hemodynamic, metabolic and histopathological changes of evisceration in both TxMvm techniques. Abdominal evisceration was associated with significant systemic and regional hemodynamic changes. Despite the reduction in CO, the metabolic and biochemical markers of liver injury remained unchanged at the end of the study