Orientador: Luís Guilherme de Oliveira / Coorientador: Andressa de Souza Pollo / Banca: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Hélio José Montassier / Resumo: O vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV), do gênero Pestivírus, pode ocasionar significativas perdas econômicas em bovinos. No entanto, este vírus também pode infectar os suínos, nos quais a infecção por BVDV poderá ocasionar sinais clínicos, afetar a diagnose da PSC (Peste Suína Clássica), além de torná-los fonte de disseminação viral. Tendo em vista esta problemática, este trabalho teve por objetivo verificar se leitões infectados experimentalmente por BVDV podem passar a excretar o vírus e se a disseminação viral pode ocorrer por via aerógena. Para tanto, foram realizados dois experimentos. Em cada experimento, seis leitões foram distribuídos em duplas em três câmaras de isolamento, ligadas por tubos com fluxo de ar contínuo, nas quais os animais introduzidos corresponderam ao controle, infectado e sentinela, respectivamente. Os animais da segunda câmara foram inoculados pela administração de inóculo de BVDV-1 estirpe Singer citopático por via nasal e oral. Foram avaliadas amostras de sangue, suabe nasal e retal, e no último dia foi realizada eutanásia e necropsia dos animais e coletada amostras de tecidos. No primeiro experimento, ambos os animais inoculados soroconverteram e apresentaram sinais clínicos da infecção, mas somente em um animal foi detectada excreção do vírus por via nasal e presença de RNA viral nos rins, baço e fígado, avaliadas por RT-PCR. Neste caso, a transmissão do vírus por via aerógena não foi comprovada, uma vez que o experimento foi finalizado um di... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The virus of Bovine Viral Diarrhea (BVDV), belonging to the Pestivirus genus, can cause significant economic losses in cattle. However, this virus can also infect swine, in which infection by BVDV may cause clinical signs, affect the diagnosis of CSF (Classical Swine Fever), and makes them a source of viral spread. Based on these issues, this study aimed to verify whether piglets experimentally infected by BVDV can shed the virus and whether viral airborne transmission is possible. For this, two experiments were carried out. In each experiment, six piglets were distributed in pairs in three isolation chambers, connected by continuous air flow tubes, in which the animals introduced corresponded to control, infected and sentinel, respectively. The animals present in the second chamber were inoculated with BVDV-1 strain Singer cytopathic inoculum by nasally and orally administration. Samples of blood, nasal and rectal swabs, and the last day was conducted euthanasia and necropsy of the animals and tissue samples were evaluated. In the first experiment, both inoculated animals seroconverted and showed clinical signs of infection, but only in one animal nasally virus shedding was detected, as well as, viral RNA presence in kidney, spleen and liver, both identified by RT-PCR. In this case, viral airborne transmission has not been confirmed, since the experiment was finalized one day after the viral shedding. In the second experiment, the two infected animals seroconverted with nine... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luís Guilherme de Oliveira / Banca: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Estevam Guilherme Lux Hoppe / Resumo: Os pestivírus possuem importância significativa na suinocultura, sendo que os suínos podem ser infectados pelo Vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV) em condições naturais. O presente estudo teve como objetivo induzir a infecção experimental do BVDV-1 em leitões desmamados e avaliar a excreção e possível transmissão do vírus pelas vias lâmina d'água e naso-nasal. Foram conduzidos dois experimentos e uma repetição para cada via de transmissão avaliada. No total foram selecionados 24 leitões, sendo utilizados seis por experimento, divididos em grupos controle (n=2), sentinela (n=2) e infectado (n=2), utilizando isoladores, projetados para estabelecer o contato entre os animais apenas pela via de transmissão em estudo. O grupo infectado recebeu um inóculo contendo BVDV-1, estirpe Singer, enquanto que os grupos controle e sentinela foram inoculados com meio E-MEM. Os animais permaneceram nos isoladores por 25 dias, período em que foram coletadas amostras de suabe nasal diariamente e sangue a cada sete dias. Ao final, os animais foram eutanasiados e necropsiados, sendo realizada coleta de fragmentos de órgãos para histopatologia, imunohistoquímica e RT-PCR. Quando avaliada a via de transmissão lâmina d'água, apenas um animal infectado apresentou excreção de material genômico a partir do 6o dia pós-infecção (dpi), e um animal sentinela apresentou excreção no 20o dpi. Nestes animais, a soroconversão ocorreu no 25o dia apresentando título de anticorpos igual a 20. Um animal infectado ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Pestiviruses have significant importance in swine breeding, and pigs can be infected by Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV) under natural conditions. The present study aimed to induce the experimental infection of BVDV-1 in weaned piglets and to evaluate the excretion and possible transmission of the virus through the water and naso-nasal routes. Two experiments and one replicate were conducted for each evaluated route of transmission. In total, 24 piglets were selected, and six were used per experiment, divided into control (n = 2), sentinel (n = 2) and infected (n = 2) groups using isolators, designed to establish contact between animals only by Route of study. The infected group received an inoculum containing BVDV-1, Singer strain, while the control and sentinel groups were inoculated with E-MEM medium. The animals remained in the isolators for 25 days, during which samples of nasal swab and blood were collected every seven days. At the end, the animals were euthanized and necropsied, and organ fragments were collected for histopathology, immunohistochemistry and RT-PCR. When the water-borne transmission pathway was evaluated, only one infected animal showed excretion of genomic material from day 6 post-infection (dpi), and one sentinel animal showed excretion at the 20th dpi. In these animals, seroconversion occurred on day 25 with an antibody titer equal to 20. An infected animal did not present seroconversion during the sampled period, but there was excretion from the 5th dpi. In the repeat of the experiment, only one infected animal was seroconverted at day 25, with antibody titer of 20, whose excretion of the genomic material was detected at 21o dpi. In sentinel animals, only one had excretion at the 13th dpi. In relation to the naso-nasal experiment, the infected animals presented excretion of genetic material from the 17th dpi, but seroconversi... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria cecilia Rui Luvizotto / Banca: Gisele Fabrino Machado / Banca: Sandra Helena Penha de Oliveira / Resumo: Os tumores mamários são as mais freqüentes neoplasias em cadelas, representando cerca de 50% dos tumores diagnosticadas nesta espécie e tem maior incidência em fêmeas de meia idade a idosas. Têm sido utilizadas como modelo de estudo para neoplasias mamárias de mulher devido às várias características comuns como as similaridades histológicas e imuno- histoquímicas. Na última década, estudos baseados nos perfis moleculares das neoplasias mamárias, tornaram possível a identificação de algumas células neoplásicas com características de células tronco - as células tronco tumorais (CTT). Uma das moléculas putativas para marcação das CTTs é o CD44. A telomerase, que vem sendo relatada como marcador tumoral, é potencialmente expressa também em CTTs. Estudos recentes estabeleceram um elo crucial entre a transição epitelial-mesenquimal (EMT) e a aquisição de propriedades moleculares e funcionais de células-tronco. Por este motivo analisamos a expressão das proteínas CD44, Citoqueratinas AE1/AE3 e Vimentina, e da enzima telomerase, em tumores mamários de cadelas a fim de investigar o potencial de marcação de CTTs e sua relação com a EMT. Para tal foram utilizados métodos de imuno-histoquímica em tecidos parafinizados tanto in vivo quanto in vitro, fazendo-se uso de técnicas como Tissue MicroArrays (TMA), citoinclusão de tecidos tumorais e cultivos celulares. A expressão da telomerase nas células de tumores mamários cultivadas foi analizada por PCR em tempo real. Nas amostras de tecido parafinizado in vivo, a imunomarcação da citoqueratina demonstrou diferença significativa entre tumores benignos e malignos (p˂0,05), mostrando-se mais intensa em tumores malignos. Já a vimentina apresentou maior intensidade de marcação em tumores benignos, porém não apresentando diferença significativa (p˂0,05)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:Mammary tumors are the most frequent cancers in dogs, representing about 50% of tumors, and have a higher incidence in females of middle aged and elderly. These tumors have been used as a model for breast cancer in women due to several common characteristics such as histological and immunohistochemical similarities. In the last decade, studies based on molecular profiles of breast cancer, made possible the identification of some neoplastic cells with characteristics of stem cells - cancer stem cells (CSC). One of the putative molecules of CSCs is CD44. Telomerase, which has been reported as a tumor marker, is potentially also expressed in CSCs. Recent studies have established a crucial link between the epithelial- mesenchymal transition (EMT) and the acquisition of molecular and functional properties of stem cells. For that reason we analyzed the expression of proteins CD44, Cytokeratins AE1/AE3 and Vimentin, and the telomerase enzyme, in dogs mammary tumors, to investigate the potencial for CSC markers, and its relation with the EMT using immunohistochemistry in paraffin embedded tissues in both in vivo and in vitro, making use of techniques such as Tissue MicroArrays (TMA), cell blocks from tumors and cell cultures. Besides that, we analyzed the telomerase expression in mammary tumor cultivated cells by quantitative real time PCR. Immunostaining of cytokeratin had no significant difference between benign and malignant tumors (p ˂ 0,05), being more intense in malignant tumors. However vimentina showed higher staining intensity in benign tumors, but with no significant difference (p ˂ 0,05). The expression of CD44 was higher in malignant tumors that have greater proliferative and metastatic potencial, however its relation with EMT was not detected in the analyzed tumors. Telomerase expression was positive in the neoplastic cultivated cells, however without significant difference... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Resumo:Nós investigamos a presença de formas promastigotas de Leishmania spp. pelo método de imuno-histoquímica em intestinos, ovários e glândulas salivares de carrapatos Rhipicephalus sanguineus em cães. Neste estudo, foram utilizados, 66 cães positivos e 33 negativos para Leishmania spp. pelo teste Imunoenzimático (ELISA), por exame citológico direto e por meio do método da Reação em cadeia da polimerase (PCR). Um total de 990 carrapatos foram colhidos desses 99 cães, sendo 10 por animal e estes foram dissecados, com posterior separação dos intestinos, ovários e glândulas salivares. Lâminas contendo os órgãos supramencionados foram confeccionadas para a execução da imuno-histoquímica (IHQ). Também foi efetuada a PCR em tempo real desses órgãos, bem como a quantificação da sua carga parasitária. Pela PCR em tempo real dos intestinos, ovários e glândulas salivares dos carrapatos, foram detectadas positividades de 93,94%, 46,97% e 27,27%, respectivamente. As cargas parasitárias médias no intestino foram de 9027,90 Leishmania/μL, nos ovários 411,66 Leishmania/μL e nas glândulas salivares 305,56 Leishmania/μL. Com relação as leituras das lâminas de IHQ, em 98,48% dos intestinos, 13,64% dos ovários e 7,58% das glândulas salivares houve imunomarcação positiva para Leishmania spp. Em virtude destes resultados evidenciados pela técnica de IHQ, com utilização do anticorpo primário lipofosfoglicano (LPG), nós consideramos a possibilidade da presença de formas promastigotas de Leishmania spp. em órgãos de R. sanguineus / Abstract:We investigated the presence of promastigotes of Leishmania spp. by immunohistochemical method in intestines, ovaries and salivary glands of Rhipicephalus sanguineus ticks in dogs. In this study, was used, 66 dogs positive and 33 negative for Leishmania spp. by immunoenzymatic test (ELISA), direct cytological examination and by polymerase chain reaction (PCR). A total of 990 ticks were collected from these 99 dogs, 10 per animal and these were dissected, with further separation of the intestines, ovaries and salivary glands. Slides of these organs were made for the implementation of immunohistochemistry (IHC). Also the real-time PCR was performed in these organs as well as the quantification of that parasite load. For real-time PCR of the guts, ovaries and salivary glands of ticks were detected positivities 93.94%, 46.97% and 27.27%, respectively. The average parasitic loads in the intestine were 9027.90 Leishmania/μL, the ovaries 411.66 Leishmania/μL and salivary glands 305.56 Leishmania/μL. Regarding the readings of IHC slides in 98.48% of the intestines, 13.64% of the ovaries and 7.58% of the salivary glands were positive for Leishmania spp. In view of these results shown by IHC technique, using the lipofosfoglicano primary antibody (LPG), we consider the possibility of the presence of promastigotes of Leishmania spp. in R. sanguineus organs / Orientador:Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca:Jancarlo Ferreira Gomes / Banca:Suely Regina Mogami Bomfim / Banca:Gisele Fabrino Machado / Banca:Mônica Regina Vendrame Amarante / Doutor

Orientador: Luís Guilherme de Oliveira / Banca: Rejane Schaefer / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Danielle Gava / Banca: Hélio José Montassier / Resumo: O gênero Pestivirus é composto por agentes geneticamente distintos, responsáveis por infecções em suínos, bovinos, ovinos, caprinos e outros animais domésticos e silvestres. O atypical porcine pestivirus (APPV), é um pestivirus geneticamente atípico recentemente identificado e associado a casos de tremor congênito (CT) em leitões recém-nascidos em quatro continentes, sugerindo uma distribuição mundial do APPV. Assim, os objetivos deste estudo foram: 1) detectar a presença do APPV em sêmen, líquidos prepuciais e swabs prepuciais de cachaços adultos por reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR), 2) caracterizar geneticamente um subgrupo de amostras positivas de sêmen para melhor entender a ecologia do APPV em cachaços comerciais e o risco potencial de transmissão do APPV via sêmen, 3) investigar a presença do APPV em leitões com CT no Brasil e (4) caracterizar geneticamente um subconjunto de amostras do APPV oriundas de leitões. Um total de 597 amostras de sêmen, fluido prepucial e swabs prepuciais cada amostra representando um cachaço diferente foram obtidas de quatro granjas comerciais (sêmen) localizadas em três estados diferentes nos Estados Unidos e 13 leitões com CT de quatro granjas em dois estados do Brasil foram amostrados. RNA viral foi detectado por qRT-PCR em 15,08% das amostras (90/597), sendo o maior percentual 23,81% de positivo em swabs prepuciais (5/21) seguido de 22,81% no fluído prepucial (26/114) e de 12,91% no sêmen (59... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The genus Pestivirus is composed of genetically distinct viruses, responsible for infections in swine, cattle, sheep, goats and other domestic and wild animals. The atypical porcine pestivirus (APPV) is a genetically atypical pestivirus recently identified and associated with cases of congenital tremor (CT) in newborn piglets from four continents, suggesting a worldwide distribution of the APPV. Accordingly, the objectives of this study were to 1) detect the presence of APPV in semen, preputial fluids and preputial swabs from adult boars by quantitative reverse transcription PCR (qRT-PCR), 2) genetically characterize a subset of positive semen samples to better understand the ecology of APPV in commercial boar studs and the potential risk of transmission of APPV via semen, 3) investigate the presence of APPV in piglets with CT in Brazil and (4) genetically characterize a subset of APPV samples from CT-piglets. A total of 597 samples of semen, preputial fluid and preputial swabs each samples representing a different boar were obtained from four commercial boar studs located in three different states in the United States and 13 CT-piglets from four farms in two different states in Brazil were sampled. Viral RNA was detected by qRT-PCR in 90 samples (15.08%; 90/597), with the greatest per cent positive from preputial swabs (23.81%; 5/21) followed by preputial fluid (22.81%; 26/114) and semen (12.91%; 59/457). Based on phylogenetic analysis of the APPV Npro gene, different viral strains can be on the same farm at the same and different times. Viral RNA was detected by qRT-PCR in the cerebellum or cerebellum and spinal cord in the 100% of the piglets with CT, and APPV was not detected in any tissue sample from clinically non-affected piglets. A subset of positive samples was selected for sequencing of part of the NS3 gene. Phylogenetic analysis rev... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A Brucella abortus causa diminuição da eficiência reprodutiva em bovinos e é também o agente de uma das zoonoses mais difundidas no mundo. A doença é alvo de programas de controle em muitos países e, no Brasil, seu combate foi melhor organizado a partir de 2001, com o lançamento de programa nacional pelo MAPA. O objetivo do presente estudo foi aperfeiçoar a detecção de B. abortus em homogeneizados de órgãos de fetos abortados por vacas infectadas. Assim, foram comparados diferentes protocolos de extração de DNA, visando à detecção de B. abortus pela PCR em amostras clínicas colhidas de fetos abortados ou bezerros oriundos de vacas experimentalmente desafiadas com B. abortus cepa 2308. Para tanto, foram construídos dois grupos padrão ouro com base na bacteriologia clássica, constituídos por: 32 pulmões (17 positivos ao isolamento), 26 baços (11 positivos ao isolamento), 23 fígados (8 positivos ao isolamento) e 22 linfonodos bronquiais (7 positivos ao isolamento). Todas essas amostras foram submetidas a três distintos protocolos de extração de DNA, seguidos do mesmo processo de amplificação com os primers B4 e B5. A análise dos resultados consolidados mostrou uma sensibilidade de 95% para o protocolo da proteinase K (PK), 86% para o do isotiocianato de guanidina (GT) e de 88% para o de Boom. Os valores encontrados de Sensibilidade para pulmão, baço, fígado e linfonodo foram, respectivamente, 100%, 100%, 100% e 71% (PK), 82%, 100%, 88% e 71% (GT) e 94%, 100%, 63% e 86% (Boom). No grupo dos animais dos quais não foi possível isolar brucellas (gold standard negativo), a PCR resultou positiva em 8 amostras para o protocolo de extração PK (4 pulmões, 1 fígado e 3 linfonodos), em 6 amostras para o protocolo de extração GT (1 pulmão, 3 fígados e 2 linfonodos) e em 37 amostras para o protocolo de extração Boom (10 pulmões, 10 baços, 10 fígados e 7 linfonodos). Esses resultados permitem afirmar que o protocolo de extração PK apresentou a melhor sensibilidade diagnóstica e que o protocolo de extração de Boom apresentou o melhor desempenho nas amostras onde o isolamento foi negativo. Dentre os órgãos estudados, o baço apresentou a maior probabilidade de detecção de B. abortus. Assim, a melhor estratégia para detecção de B. abortus em homogeneizados de órgãos de fetos abortados é a utilização do isolamento e da PCR em paralelo. / Infection by Brucella abortus diminishes the reproductive efficiency in bovines and it is also the agent of one of the most spread zoonosis in the world. In many countries control programs aim this disease, and in Brazil its combat was better organized since 2001 with the creation of the national program by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supplies (MAPA). The objective of the present study was to improve the detection of B. abortus in aborted fetus homogenates from infected cows. For that reason, different DNA extraction protocols were compared, focusing the PCR detection of B. abortus in clinical samples collected from aborted fetus or calves obtained from cows experimentally defied with the 2308 B. abortus strain. Therefore, two gold standard groups were built based on classical bacteriology, formed by: 32 lungs (17 isolation positives samples), 26 spleens (11 isolation positives samples), 23 livers (8 isolation positives samples) and 22 bronchial lymph nodes (7 isolation positives samples). All samples were submitted to three distinct DNA extraction protocols, followed by the same amplification process with the primers B4 and B5. The analysis of the consolidated results showed a 95% sensibility for the proteinase K protocol (PK), 86 % for the guanidine isotiocianate (GT) and 88% for the Boom. The sensibility values obtained for lungs, spleen, liver and lymph node were, respectively, 100%, 100%, 100% and 71% (PK), 82%, 100%, 88% and 71% (GT) and 94%, 100%, 63% and 86% (Boom). In the group of animals in which it was not possible to isolate brucellas (negative gold standard), the PCR resulted positively in 8 samples for the PK extraction protocol (4 lungs, 1 liver and 3 lymph nodes), in 6 samples for the GT extraction protocol (1 lung, 3 livers and 2 lymph nodes) and in 37 samples for the Boom extraction protocol (10 lungs, 10 spleens, 10 livers and 7 lymph nodes). These results permit affirming that the PK extraction protocol showed the best diagnostic sensibility and that the Boom extraction protocol showed the best performance in negative isolation samples. Within the studied organs, the spleen showed the highest probability of B. abortus detection. Therefore, the best strategy for B. abortus detection in organs homogenates from aborted fetus is the utilization of isolation and in parallel, the PCR.

Resumo: Para verificar os fatores de risco e a viabilidade de métodos diagnósticos para a campilobacteriose genital bovina (CGB), amostras prepuciais de touros de 102 rebanhos leiteiros de Presidente Prudente, São Paulo, foram avaliadas por testes bacteriológicos, reação da polimerase em cadeia (PCR) e imunofluorescência direta (IFD). Durante a colheita de lavados prepuciais, um questionário sobre desordens reprodutivas nas fêmeas e condições sanitárias foi aplicado aos proprietários das fazendas. As amostras foram plaqueadas em ágar seletivo de Skirrow, ágar Brucella verde brilhante e ágar tioglicolato com 20% do sangue. As características seletivas dos três sistemas da cultura foram comparadas pela avaliação de escores de densidade de contaminantes bacterianos nas placas e a capacidade de suportar diferentes fontes de contaminantes. A PCR foi conduzida usando seqüências dos nucleotídeos que amplificam um fragmento com 835 pares das bases do DNA ribossomal bacteriano. A IFD foi executada usando o conjugado anti-C. fetus subesp. venerealis marcado com isotiocianato de fluoresceína. Resultados positivos foram obtidos para culturas microbianas, PCR e IFD de 7,8% , 5,8% e 1,9% das fazendas, respectivamente. Detectou-se associação significativa entre touros positivos e rebanhos cujas vacas apresentavam taxas de concepção abaixo de 85% (OR=7,6). A concordância entre a PCR e as culturas bacteriológicas foi considerada ótima (Kappa = 0,847), mas foi pobre entre a IFD e os outros testes. Apenas o ágar seletivo de Skirrow não foi influenciado por contaminantes do lavado prepucial. Conclui-se que a CGB está presente em rebanhos leiteiros de Presidente Prudente, onde é associada com os distúrbios reprodutivos. / Abstract: To verify the risk factors and viability of diagnostic methods for genital bovine campylobacteriosis (GBC), preputial samples from bulls from 102 dairy herds from Presidente Prudente, São Paulo State, were evaluated using bacteriological tests, polymerase chain reation (PCR) and direct immunofluorescence (DFA). During the preputial sampling, some questions were made about female reproductive disorders and sanitary conditions of the farms. The preputial samples were plated in Skirrowþs agar, Brucella Brilliant green agar and Thioglycolate agar with 20% of blood. The selective characteristic of the three systems of culture was compared by the evaluation of bacterial density scores in the plates and for the capacity to support bacterial contaminants of different sources. The PCR was conducted using sequences of nucleotides that amplify a fragment with 835 pairs of bases of the ribossomal DNA. Direct immunofluorescence was performed using anti-C. fetus subesp. venerealis conjugated with fluorescein isothiocyanate. Positive results were obtained by microbial cultures, PCR and DFA results of 7,8%, 5,8% and 1,9% of the farms, respectively. Statistical association between positive bulls and low fertility of the herd cows was detected (OR= 7,6). The overall agreement between the PCR and bacteriological cultures was excellent (Kappa = 0,847), but poor between DFA and the other tests. The Skirrowþs media was the only that was not influenced by contaminant characteristics of preputial fluid samples. It is concluded that GBC is present in dairy herds from Presidente Prudente, where was associated with reproductive disturbances. / Orientador: José Rafael Modolo / Coorientador: Andrey Pereira Lage / Banca: Marcelo George Mungai Chacur / Banca: Antônio Carlos Paes / Banca: Ary Fernandes Junior / Banca: Luis Carlos de Souza / Doutor

Orientadora: Maria da Glória Buzinaro / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Ricardo Luiz Moro de Sousa / Resumo: O presente estudo teve como objetivo determinar a ocorrência de rotavírus do grupo A e a genotipagem G e P de estirpes detectadas em bezerros de rebanhos leiteiros e gado de corte, durante o período de julho de 2006 a setembro de 2008, em propriedades rurais do Estado de São Paulo, Brasil. Foram amostrados 395 bezerros, na faixa etária entre 1 e 60 dias, independentemente da manifestação clínica de diarréia, de 18 rebanhos bovinos, sendo nove de exploração leiteira e nove de gado de corte. Por meio da técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA), determinou-se a ocorrência de rotavírus em 33,3% (06/18) entre os rebanhos e de 8,6% (34/395) na população amostrada. A maior freqüência de infecção foi detectada em animais com idade entre 16 e 30 dias (p < 0,01). Foram diagnosticados bezerros infectados por rotavírus tanto em animais com sinais clínicos de diarréia (22%;29/133) quanto naqueles clinicamente normais (1,9%;05/262), existindo, porém, uma correlação entre a presença da infecção e a manifestação clínica da diarréia (p<0,01). Em relação ao tipo de exploração, nos rebanhos leiteiros 0 percentual de ocorrência foi de 5,3% (14/264), enquanto que nos rebanhos de gado de corte o rotavírus teve maior ocorrência (15,3%; 20/131). A análise do perfil do genoma de rotavírus por EGPA identificou dois eletroferótipos distintos, cujas diferenças estavam localizadas na posição de migração dos segmentos 2, 3, 7, 8 e 9. A genotipagem pela reação em cadeia pela polimerase (RT-SNMPCR) das amostras de rotavírus revelou a que as estirpes circulantes nos rebanhos eram G6P[5], G10P[5], não foi possível fazer associação com o genotipo P[1]. / Abstract: The present study aimed to determine the Group A rotavirus and G/P genotyping in detected virus strains in dairy and beef cattle calves from July 2006 to September 2008 in São Paulo State-Brazil farms. 395 calves in 18 flocks (9 dairy cattle and 9 beef cattle) from 1 to 60-day-old were sampled, independently whether manifesting clinically diarrhea or not. By using Poliacrylamide Gel Electrophoresis Technique (PAGE), the rotavirus occurrence of 33.3% (06/18) among flocks and 8.6% (34/395) among the population sampled were determined. The higher infection frequency was detected in 16-to-30-day-old calves (P<0.01). Rotavirus-infected flocks rotavirus-infected were diagnosticated as much the ones having clinical symptoms of diarrhea (22%, 29/133) as the ones clinically normal (1.9%, 05/262), shawing a correlation between the presence of infection and the diarrhea manifestation (p<0.01). Related to the kind of exploration, the occurrence in dairy cattle was 5.3% (14/264) while in the beef cattle the occurrence was higher (15.3%, 20/131). The rotavirus genome profile analysis by PAGE identified two distinct electroferotypes, in which differences were located in the following segment migration positions: 2, 3, 7, 8 and 9. The genotyping of the Rotavirus sample by polymerase chain reaction (RT-snmPCR) revealed that the circulating strains among the flocks were G6P[5], G10P[5] e G?P[1]. / Mestre

Orientador: Maria da Gloria Buzinaro / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Ricardo Luiz Moro de Sousa / Resumo: Os rotavírus são os principais agentes causadores de diarreias em várias espécies animais e nos seres humanos, causando grandes prejuízos econômicos e de saúde pública. Uma característica marcante desse vírus é a grande diversidade genotípica das estirpes circulantes. Informações sobre genotipagem são imprescindíveis para estabelecer mecanismos de vigilância epidemiológica da infecção por rotavírus. O presente trabalho teve como objetivo discutir a epidemiologia de rotavírus na espécie bovina por meio de estudos desenvolvidos entre os anos 2006 e 2010, no Laboratório de Rotavirose da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias da Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" (FCAV/Unesp). Foram obtidas 803 amostras de fezes de bezerros, na faixa etária de 1 a 90 dias, com e sem diarreia, de 48 rebanhos de gado bovino leiteiro e de corte localizados no Estado de São Paulo. As amostras foram caracterizadas com base nos testes de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) e transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase (RT-PCR). O teste de PAGE indicou animais positivos em 33,3% (16/48) dos rebanhos e 6,1% (49/803) das amostras analisadas. Nos rebanhos leiteiros foram detectados animais infectados por rotavírus nas diferentes faixas etárias de até 90 dias de idade, enquanto nos rebanhos de corte alta frequência (22,8%) de amostras positivas foi verificada em bezerros entre 1 e 15 dias (P<0,05). A análise do perfil do genoma no PAGE identificou sete eletroferótipos, característicos de rotavírus do grupo A, indicando grande diversidade genômica do rotavírus nos rebanhos estudados. A caracterização molecular dos genótipos G (VP7) e P (VP4) pela RT-PCR identificou o genótipo G6P[5] como o mais comum. Foram construídos mapas que analisaram a distribuição espacial dos rotavírus detectados. O trabalho de identificação do rotavírus é de grande valia, uma vez que... / Abstract: Rotavirus is the major causative agent of diarrhea in several animal species and humans, causing large economic and public health damage. A striking feature of this virus is the great genotypic diversity of circulating strains. Genotyping information is essential to establish surveillance mechanisms of rotavirus infection. This study aimed to discuss the epidemiology of rotavirus in cattle through studies conducted between 2006 and 2010, the Rotavirus Disease Laboratory of the Faculty of Agriculture and Veterinary Sciences of the Universidade Estadual Paulista "Julio de Mesquita Filho" (FCAV / UNESP), 803 samples of feces of calves were obtained, ranging in age from 1 to 90 days, with and without diarrhea, 48 herds of dairy and beef cattle in the State of São Paulo. The samples were characterized on the basis of electrophoresis tests on polyacrylamide gel (PAGE) and then reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). The PAGE test indicated positive animals in 33.3% (16/48) of the herds and 6.1% (49/803) of the samples. In dairy herds infected animals were detected rotavirus in different age groups (P> 0.05), while in the high frequency cut herds (22.8%) of positive samples was observed in calves between 1 to 15 days (P <0,05). The genome profile analysis in PAGE identified seven eletropherotypes characteristic of rotavirus group A, indicating a high genomic diversity of rotavirus in the herds. The molecular characterization of genotype G (VP7) and P (VP4) by RT-PCR identified the genotype G6P [5] as the most common. Maps were constructed to analyze the spatial distribution of detected rotavirus. Rotavirus identification work is of great value, since it is evident that different genotypes agent is spread in São Paulo presenting different forms of production / Mestre

Orientador: Henrique Nunes Oliveira / Coorientador: Márcia Cristina de Sena Oliveira / Banca: Marcos Rogério André / Banca: Janete Aparecida Desidério / Banca: Wilson Malago Junior / Banca: Fernanda de Freitas Anibal / Resumo: Entre as principais causas de perdas produtivas em bovinos criados nos trópicos está a infestação pelo carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus e, consequentemente, dos hemoparasitas transmitidos por ele. A resistência dos zebuínos e de animais cruzados com raças taurinas à infestação por esse ácaro é amplamente conhecida. Entretanto, no que se refere à suscetibilidade às babesioses bovinas, existem evidências de que o grupo genético também pode interferir na resistência, seguindo o mesmo padrão observado para o carrapato vetor, com os taurinos apresentando maior sensibilidade. Assim, este estudo teve por objetivo avaliar a parasitemia porBabesia bovis e Babesia bigemina em 50 novilhas da raça Canchim ( Charolês + Zebu) naturalmente infestadas pelo R. (B.) microplus nas quatro estações do ano durante 24 meses, além de caracterizar o perfil de citocinas que podem estar associados ao fenótipo de resistência e suscetibilidade aos hemoparasitas do gênero Babesia spp. Foram realizadas contagens de fêmeas adultas de carrapatos com tamanho igual ou superior a 4,5 mm de diâmetro, presentes no lado esquerdo de cada bovino. As amostras de DNA extraídas foram submetidas à amplificação por meio da Reação em Cadeia daPolimerase Quantitativa em Tempo Real (qPCR), utilizando iniciadores que flanqueiam fragmentos dos genes mitocondriais do citocromo b (mt-cyt B), específicos para B. bovis e B. bigemina. O RNA extraído do sangue, foi usado para sintetizar o DNA complementar (cDNA) ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Among the main causes of production losses in cattle is in the tropics infestation by Rhipicephalus (Boophilus) microplus, and consequently the hemoparasites transmitted by it. The resistance of zebu and crossbred with European breeds to infestation by this mite is widely known. However, as regards susceptibility to bovine babesiosis, there is evidence that genetic group can also interfere in resistance following the same pattern observed in the tick vector, with the taurine presenting greater sensitivity. This study aimed to evaluate parasitaemia by Babesia bovis and Babesia bigemina in 50 heifers Canchim (⅝ Charolais + ⅜ Zebu) naturally infested by R. (B.) microplus in four seasons for 24 months, and characterize the profile of cytokines that may be associated with phenotype resistance and susceptibility by gender hemoparasites Babesia spp. Adult female ticks counts with size equal to or greater than 4.5 mm in diameter, present in the left side of each calf were performed. The extracted DNA samples were subjected to amplification by Reaction Polymerase Chain Quantitative Real Time (qPCR), using primers flanking fragments of mitochondrial gene cytochrome B (mt-cyt B) specific for B. bovis and B. bigemina. The RNA extracted from the blood was used to synthesize complementary DNA (cDNA) for expression analysis of genes IFN-γ, TNF-α, IL-10 and IL-12B by relative quantification (RT-qPCR). Significant differences were observed (P <0.05) between the months of reviews for the tick ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor