Orientador: Telma Teresinha Berchielli / Coorientador: Roberta Carrilho Canesin / Banca: Márcia Helena Machado da Rocha Fernandes / Banca: Ricardo Andrade Reis / Banca: Otávio Rodrigues Machado Neto / Banca: Maria Fernanda Soares Queiroz / Resumo: Objetivou-se com este estudo caracterizar as alterações na microbiota ruminal, parâmetros ruminais, consumo, digestibilidade das dietas e a eficiência de síntese microbiana, em novilhos Nelore confinados alimentados com diferentes relações volumoso:concentrado, utilizando como fontes de volumoso o feno de Tifton 85 ou cana-de-açúcar. Foram realizados dois experimentos, no experimento 1 utilizou a cana-de-açúcar como fonte de volumoso e no experimento 2 utilizou-se o feno de tifton 85 como volumoso. Em ambos os experimentos foram testadas diferentes relações V:C (70:30; 60:40; 40:60 e 20:80). Em cada experimento, utilizaram-se oito novilhos Nelore (331±8 kg PV), cânulados no rumen, distribuídos em duplo quadrado latino 4x4 balanceados para o controle do efeito residual. No experimento 1 (cana-de-açúcar), o aumento da proporção de concentrado na dieta reduziu a população de Fibrobacter succinogenes e Ruminococus flavefaciens, e aumentou a população de Selenomonas ruminantium e Megasphaera elsdenii, porém o CDFDN não foi alterado. O aumento da participação de carboidratos não estruturais na dieta favoreceu a síntese de proteína microbiana e reduziu a população de bactérias fibrolíticas. A cana-de-açúcar como fonte de volumoso em dieta com proporções crescente de concentrado pode otimizar a síntese de proteína microbiana sem alterar digestibilidade da fibra. No experimento 2 (feno de Tifton 85), o aumento da proporção de concentrado na dieta reduziu a população de Fibrobacter succinogenes, Ruminococus flavefaciens e Ruminococcus albus e aumentou a população de Selenomonas ruminantium e Megasphaera elsdenii e Streptococcus bovis e o CDFDN diminuiu com o aumento da proporção de concentrado na dieta. Feno de Tifton 85 em dietas com altas proporções de concentrado pode minimizar o risco de distúrbios ruminais em novilhos confinados / Abstract: This trial aimed to characterize the changes in ruminal microbiota, ruminal fermentation, intake, diet digestibility and microbial efficiency in Nellore steers fed with different forage:concentrate proportions, using as sources of forage Tifton 85 hay or sugar cane. Two experiments were conducted: in experiment 1 the sugar cane was used as forage source and in Experiment 2 the Tifton 85 hay was used as forage source. In both experiments were tested different F:C proportions (70:30, 60:40, 40:60 and 20:80). On each experiment were usedeight Nellore steers ( 331 ± 8 kg BW) cannulated in the rumen, in a double latin square 4x4 balanced to control the residual effect. In experiment 1 (sugar cane), increasing the proportion of concentrate in the diet reduced the population of Fibrobacter succinogenes and Ruminococus flavefaciens, and increased the population of Selenomonas ruminantium and Megasphaera elsdenii, but the digestibility of NDF has not changed. The increased participation of non-structural carbohydrates in the diet favored microbial protein synthesis and reduced the population of fibrolytic bacteria. The use of sugar cane as forage source associated with the increases of concentrate proportions in the diet can optimize microbial protein synthesis without change the fiber digestibility. In experiment 2 (Tifton 85 hay), increasing the proportion of concentrate in the diet reduced the population of Fibrobacter succinogenes, Ruminococcus albus and Ruminococus flavefaciens and increased the population of Selenomonas ruminantium, Megasphaera elsdenii and Streptococcus bovis and the digestibility of NDF decreased when increases the proportion of concentrate in the diet. Tifton 85 hay in diets with high proportions of concentrate can minimize the risk of ruminal disorders in feedlot steers / Doutor

Orientador: Karin Werther / Banca: Eliana Reiko Matushima / Banca: Eveline dos Santos Zanetti / Resumo: Os cervídeos têm sido acometidos por doenças hemorrágicas virais, tais como, doença epizoótica hemorrágica (DEH), língua azul (LA) e doença hemorrágica por adenovírus (DHA). Como as lesões macroscópicas, entre elas, enterite hemorrágica, edema pulmonar, petéquias e sufusões em diversos órgãos, são observadas nas três doenças, há necessidade de técnicas acuradas para realizar o diagnóstico definitivo. A partir do material de arquivo (blocos de parafina) existente no Departamento de Patologia Veterinária da FCAV - Unesp, 42 cervídeos brasileiros, tanto de vida livre como de cativeiro, foram selecionados, por apresentarem sinais clínicos e/ou lesões macroscópicas sugestivas de doenças virais hemorrágicas. Das amostras analisadas, utilizando técnica de imunoistoquímica, todas apresentaram resultado negativo para adenovírus. Utilizando técnica de RT-PCR em tempo real para vírus da doença epizoótica hemorrágica, os resultados foram também negativos. A mesma técnica aplicada para vírus da língua azul revelou sete animais positivos (16,66%) confirmados com eletroforese em gel de agarose 4% e sequenciamento. Todos os casos positivos foram de animais provenientes de cativeiro, sendo três fêmeas (duas jovens, uma adulta) e quatro machos jovens. As principais alterações macroscópicas observadas nesses animais foram conteúdo intestinal hemorrágico, mucosas avermelhadas do trato gastrointestinal, úlceras em língua e petéquias em diversos órgãos. Na histologia observou-se principalmente infiltrado inflamatório, hemorragia e congestão em diversos órgãos. Os vírus da DHA e DEH não estão envolvidos nos óbitos dos cervídeos estudados. A relevância deste trabalho está no fato de ser a primeira descrição de material genético do vírus da LA em cervídeos brasileiros / Abstract: Cervids have been affected by viral hemorrhagic diseases, such as Epizootic hemorrhagic disease (EHD), Bluetongue (BT), and Adenoviral hemorrhagic disease (AHD). Once that gross lesions, among them, hemorrhagic enteritis, pulmonary edema, petechiae and suffusions in several organs, are similar, it is necessary to use accurate techniques to the definitive diagnosis. From the archival material (paraffin blocks) available in the Department of Veterinary Pathology of FCAV - Unesp, 42 Brazilian deer, both free living and captive, were selected because they had lesions suggestive of hemorrhagic viral disease. The samples analyzed, using Immunohistochemistry, were all negative for adenovirus. Using real time RT-PCR for EHD, the results were also negative. The same technique applied to BT virus revealed seven positive animals (16,66%) confirmed after agarose 4% gel electrophoresis and gene sequencing. The main macroscopic changes observed in these animals were hemorrhagic intestinal contents, reddish mucous membrane of the gastrointestinal tract, ulcers on tongue and petechiae in various organs. Mostly histological changes observed were inflammatory infiltrate, hemorrhage, and congestion in various organs. All positive cases were from captive animals, three females (two young and one adult), and four young males. The AHD and EHD virus are not involved in the deaths of the deers studied in this research. The significance of this study is due to the fact that it was the first time the genome of BT virus was identified in Brazilian cervids / Mestre

Orientador: José Roberto Fioretto / Coorientador: João Vicente Braga de Souza / Banca: Mário Ferreira Carpi / Banca: Cilmery Suemi Kurokawa / Banca: Carlos Fernando Rochi / Banca: Leila Inês de Aguiar Raposo da Cãmara Coelho / Resumo: Os Enterococcus spp habitam normalmente o trato gastrointestinal de seres humanos e de animais. Desde 1980, foram identificados como importantes agente de infecções hospitalares. As espécies E. faecalis e E. faecium são agentes de diversas infecções, como bacteriemia, sepse, endocardite, infecção do trato urinário, infecções de feridas e meningite. A resistência adquirida, mais predominantemente a penicilina/ampicilina, aminoglicosídeos (alto nível de resistência) e glicopeptídeos são relatados em um número crescente de isolados e o espectro terapêutico nestes casos é limitado. A principal preocupação é que os genes que codificam a resistência para todos esses antibióticos poderiam ser transferidos para outros enterococos ou mesmo para muitos outros patógenos virulentos. A resistência adquirida aos glicopeptídeos é mediada por vários mecanismos (tipos VanA/B/D/E/G/L), sendo que os genótipos VanA e VanB são transferíveis. Fatores relacionados com o hospedeiro, com o hospital, procedimentos invasivos, meio ambiente, e o uso de antibióticos podem aumentar o risco de colonização ou infecção com VRE. Este estudo visa investigar a ocorrência destes microrganismos, em pacientes de hospitais de Manaus - Amazonas, identificando a distribuição das espécies e o perfil de resistência aos antimicrobianos e dos genes de resistência a vancomicina envolvidos. Foram analisados 38 isolados de Enterococcus spp. provenientes de pacientes internados ou de atendimento ambulatorial no período de outubro de 2011 a setembro de 2012. Foram confirmados 29 isolados de E. faecalis e 8 de E. faecium por testes bioquímicos convencionais, pela metodologia automatizada e por Reação da Polimerase em Cadeia (PCR). Um isolado de Enterococcus spp. foi identificado pelo equipamento automatizado como E. casseliflavus, identificação não confirmada pela PCR. A avaliação dos perfis de suscetibilidade aos ... / Abstract: The Enterococcus spp. normally inhabit the gastrointestinal tract of humans and animals. Since 1980, have been identified as a major cause of nosocomial infections. The species E. faecalis and E. faecium are agents of various infections, such as bacteremia, sepsis, endocarditis, urinary tract infections, wound infections and meningitis. Acquired resistance, most predominantly penicillin / ampicillin, aminoglycosides (high-level resistance) and glycopeptides are reported in an increasing number of isolates and therapeutic spectrum in these cases is limited. The main concern is that the genes which encode resistance to these antibiotics could all be transferred to other Enterococci or for many other virulent pathogens. Acquired resistance to glycopeptides is mediated by several mechanisms (types VanA/B/D/E/G/L), with VanA and VanB genotypes are transferable. Factors related to the host, with the hospital, invasive procedures, environment, and the use of antibiotics may increase the risk of colonization or infection with VRE. This study aims to investigate the occurrence of these microorganisms in hospital patients of Manaus - Amazonas, identifying species distribution and antimicrobial resistance profile and vancomycin resistance genes involved. We analyzed 38 Enterococcus spp. from inpatient or outpatient care from October 2011 to September 2012. 29 isolates E. faecalis and 8 E. faecium were confirmed by conventional biochemical tests, the automated methodology and Polymerase Chain Reaction (PCR). An isolate of Enterococcus spp. was identified by automated equipment as E. casseliflavus, identification was not confirmed by PCR. The evaluation of the antimicrobial susceptibility profiles commonly used in clinical practice were performed by disk diffusion methods and automated. There were differences in the results of sensitivity to penicillin and ampicillin between the two methods. There were no isolated ... / Doutor

Setenta e seis amostras intestinais de lotes de perus apresentando ou não sinais clínicos de enterite foram avaliadas quanto à presença de adenovírus grupo 1 (TAV), vírus da enterite hemorrágica dos perus (HEV), astrovírus tipo 1 e 2 (TAstV-1 e TAstV-2), coronavírus dos perus (TCoV), reovírus, rotavírus e vírus da nefrite aviária (ANV) através da reação em cadeia da polimerase. Os resultados obtidos foram analisados quanto à região geográfica de origem das amostras, idade das aves e presença de sinais clínicos nos lotes. Foi detectada elevada positividade das amostras para pelo menos um vírus (93,4%), e grande número de amostras com associações de mais de um vírus (69,7%). Santa Catarina foi o estado com maior média de número de vírus detectados em associação nas amostras (3,14) e Goiás o estado com menor média (1,73). As amostras provenientes de aves em fase inicial de criação (1 a 4 semanas de idade) tiveram média de 3,20 vírus detectados por amostra, e 85% de detecção de TAstV-1 e TCoV (os mais frequentes), enquanto que na fase de terminação (5 a 18 semanas) foi observada menor média de vírus associados nas amostras (2,41), e os agentes mais detectados foram TAstV-1 (57,1%) e rotavírus (51,8%), no entanto, todos os vírus apresentaram menor frequência na fase de terminação do que na inicial, com exceção do TAV e reovírus. Quando os sinais clínicos estavam presentes todos os vírus foram detectados em maior percentual (sendo TAstV-1, TAstV-2 e TCoV os mais frequentes) do que nos lotes sem sinais clínicos, onde TAstV-1 e rotavírus foram os mais frequentes. Estudos posteriores são necessários para a compreensão do papel de cada vírus no desenvolvimento de enterites. / Intestinal samples from seventy-six Brazilian turkey flocks affected or not with intestinal disorders were evaluated for the presence of Adenovirus group 1 (TAV), hemorrhagic enteritis virus (HEV), Astrovirus type 1 and 2 (TAstV-1 e TAstV-2), turkey Coronavirus (TCoV), Reovirus, Rotavirus and avian nephritis virus (ANV) using the polimerase chain reaction. Geographic location, age of the flocks and the presence of clinical signs were analyzed in order to find a relationship with the viral detection. A high frequency of positive samples for at least one virus was observed (93,4%) and 69,7% of the samples showed an association of more than one agent. The highest average number of viruses detected in association (3,14) was found in the state of Santa Catarina and Goias showed the lowest average (1,73). An average of 3,20 viruses per sample was detected in poults in initial phase of the production cycle (1 to 4 weeks of age), and TAstV-1 and TCoV were detected in 85% of the samples (the most frequent viruses), while the terminanting phase (5 to 18 weeks) showed lower average number of viruses in association (2,41), and the most frequent viruses were TAstV-1 (57,1%) and rotavírus (51,8%). However, all the viruses were detected more frequently in the initial phase rather than in the terminating phase, in exception of TAV and reoviruses. A higher detection of the viruses was observed in poults with clinical signs (as TAstV-1, TAstV-2 and TCoV were the most frequent) compared to normal birds (as TAstV-1 and rotavirus were the most frequent). Furher researches should focus on the description and comprehension of the role of each virus, and the different combinations of viruses, in the development of enteric disease.

Orientador: Kellen Cristine Tjioe / Resumo: Objetivo: Avaliar a expressão do p16Ink4a por imunohistoquímica e a presença do HPV16 pela Real time PCR em tecido fresco, plasma e saliva de pacientes com leucoplasia bucal (LB) e hiperplasia fibrosa inflamatória (HFI). Material e métodos: Foram incluídos 67 pacientes com o diagnóstico de LB e 44 pacientes com diagnóstico de HFI no estudo. Foram coletados dados sociodemográficos, clinicopatológicos, amostras de tecido fresco, sangue e saliva, que foram armazenados em um freezer a -80o C para realização de análise molecular. Também foi utilizado o tecido parafinizado para realização da imunohistoquímica para a p16Ink4a. As amostras de materiais biológicos obtidos dos pacientes foram submetidas à detecção do DNA do HPV-16 pela Real time PCR. O tecido parafinizado dos mesmos pacientes foram utilizados para avaliar a expressão da p16Ink4a pela imunohistoquímica. Resultados: Dos 67 pacientes incluídos de LB no estudo, 55,2% eram do sexo masculino com uma média de idade de 57,1 anos. Os pacientes idosos (>45 anos) compuseram 86,6% da amostra. As localizações anatômicas mais acometidas por LB foram a mucosa jugal (35,8%) e língua (20,9%). Sobre o tabagismo, 71,8% dos pacientes eram fumantes, onde a maioria (47,8%) foi classificada como tabagista leve. Em relação ao consumo de álcool, 47,4% eram alcoolistas, sendo a sua maioria classificada como alcoolista leve (59,3%). O grupo HFI foi composto por 54,5% pacientes do sexo masculino com uma média de idade de 57,3 anos. 90,9% dos paci... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011Bitstream added on 2014-08-13T18:01:18Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_es_me_araca.pdf: 554726 bytes, checksum: 120b6f528464317c0d52e748f3f81855 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A importância da leishmaniose visceral no contexto da saúde pública tem aumentado na ultima década. A manifestação da leishmaniose visceral nos cães é variável e estudos sobre a genética e a sua relação com a leishmaniose visceral têm indicado alguns genes envolvidos na susceptibilidade e resistência a esta doença. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre as variantes alélicas dos gene Slc11a1 (solute carrier family 11 member 1) e DLA-DRB1 (dog leukocyte antigen) com a positividade para leishmaniose, determinada por meio da amplificação de DNA de cinetoplasto de Leishmania sp., por PCR, e pela presença de anticorpos anti-Leishmania sp. ao teste ELISA indireto. Foram observadas associações estatisticamente significantes entre a positividade para leishmaniose e: i. a presença do alelo (141, 145 ou 149) da região microssatélite (TAAA)n localizada no íntron 1 do gene Slc11a1 (P< 0,0001) ii. a variação do número de guaninas (8 ou 9 G) da região promotora (P=0,0280) (em ambos os casos quando analisados separadamente) e iii. a presença de qualquer dos alelos da região microssatélite associado a 8 ou 9 G da região promotora (P= 0,0025). A presença do alelo 141 foi estatisticamente associada à negatividade em cães (P<0,0001). Não foi observada associação estatisticamente significante entre a positividade à leishmaniose e a freqüência dos alelos do exon 2 do gene DLA- DRB1, embora tenha sido observada associação significante entre a freqüência dos alelos DRB1-W, DRB1*00101 ou DRB1-T e o resultado negativo para leishmaniose, podendo ser estes potenciais marcadores para resistência à leishmaniose em cães / The importance of visceral leishmaniasis in the context of public health has increased in the last decade. The manifestation of visceral leishmaniasis in dogs is variable and genetic studies and its relationship with visceral leishmaniasis have shown some candidate genes involved in susceptibility and resistance to this disease. This study aimed at evaluating the relationship between polymorphism of the genes Slc11a (solute carrier family 11 member 1), and DLA-DRB1 (dog leukocyte antigen) and the positivity to leishmaniasis determined by the amplification of Leishmania sp. kinetoplast DNA by PCR and the presence of anti-Leishmania sp. the indirect ELISA. We observed statistically significant associations between the leishmaniasis positive diagnosis and i. the presence of intron 1 microsatellite region alleles (141, 145 or 149) (P<0.0001), ii. the variation on the guanine number (8 or 9) in the promoter region (P=0.0280) (in both cases when analyzed separately), iii. the presence any of the microsatellite alleles associated to 8 or 9 G in the promoter region (P=0.0025). Microsatellite allele 141 was associated to negativity to leishmaniasis (P<0.0001). There was no association between the presence of any of the exon 2 DLA-DRB1 alleles and the leishmaniasis positive animals, although significant association between the frequency of the alleles DRB1-W, DRB1*00101 or DRB1-T and negative results to leishmaniasis were observed. These might be potential markers for dog’s resistance to visceral leishmaniasis

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-09-09Bitstream added on 2014-08-13T18:01:37Z : No. of bitstreams: 1 000741182_20140930.pdf: 395072 bytes, checksum: 127ce5ee4bdf12a8f76953cc23531f21 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:24:44Z: 000741182_20140930.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:27:41Z : No. of bitstreams: 2 000741182_20140930.pdf.txt: 31713 bytes, checksum: a6a381f0975530bddc3e0a62f9b75201 (MD5) 000741182.pdf: 2756696 bytes, checksum: cd9eae9b4fd91fd67273e14a72e3bad3 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:33:18Z: 000741182.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:43:32Z : No. of bitstreams: 2 000741182_20140930.pdf.txt: 31713 bytes, checksum: a6a381f0975530bddc3e0a62f9b75201 (MD5) 000741182.pdf: 2756696 bytes, checksum: cd9eae9b4fd91fd67273e14a72e3bad3 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:48:58Z: 000741182.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:49:49Z : No. of bitstreams: 1 000741182.pdf: 2756696 bytes, checksum: cd9eae9b4fd91fd67273e14a72e3bad3 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-27T11:47:13Z: 000741182.pdf,Bitstream added on 2014-10-27T11:48:06Z : No. of bitstreams: 1 000741182.pdf: 2756696 bytes, checksum: cd9eae9b4fd91fd67273e14a72e3bad3 (MD5) / Os Enterococcus spp habitam normalmente o trato gastrointestinal de seres humanos e de animais. Desde 1980, foram identificados como importantes agente de infecções hospitalares. As espécies E. faecalis e E. faecium são agentes de diversas infecções, como bacteriemia, sepse, endocardite, infecção do trato urinário, infecções de feridas e meningite. A resistência adquirida, mais predominantemente a penicilina/ampicilina, aminoglicosídeos (alto nível de resistência) e glicopeptídeos são relatados em um número crescente de isolados e o espectro terapêutico nestes casos é limitado. A principal preocupação é que os genes que codificam a resistência para todos esses antibióticos poderiam ser transferidos para outros enterococos ou mesmo para muitos outros patógenos virulentos. A resistência adquirida aos glicopeptídeos é mediada por vários mecanismos (tipos VanA/B/D/E/G/L), sendo que os genótipos VanA e VanB são transferíveis. Fatores relacionados com o hospedeiro, com o hospital, procedimentos invasivos, meio ambiente, e o uso de antibióticos podem aumentar o risco de colonização ou infecção com VRE. Este estudo visa investigar a ocorrência destes microrganismos, em pacientes de hospitais de Manaus - Amazonas, identificando a distribuição das espécies e o perfil de resistência aos antimicrobianos e dos genes de resistência a vancomicina envolvidos. Foram analisados 38 isolados de Enterococcus spp. provenientes de pacientes internados ou de atendimento ambulatorial no período de outubro de 2011 a setembro de 2012. Foram confirmados 29 isolados de E. faecalis e 8 de E. faecium por testes bioquímicos convencionais, pela metodologia automatizada e por Reação da Polimerase em Cadeia (PCR). Um isolado de Enterococcus spp. foi identificado pelo equipamento automatizado como E. casseliflavus, identificação não confirmada pela PCR. A avaliação dos perfis de suscetibilidade aos ... / The Enterococcus spp. normally inhabit the gastrointestinal tract of humans and animals. Since 1980, have been identified as a major cause of nosocomial infections. The species E. faecalis and E. faecium are agents of various infections, such as bacteremia, sepsis, endocarditis, urinary tract infections, wound infections and meningitis. Acquired resistance, most predominantly penicillin / ampicillin, aminoglycosides (high-level resistance) and glycopeptides are reported in an increasing number of isolates and therapeutic spectrum in these cases is limited. The main concern is that the genes which encode resistance to these antibiotics could all be transferred to other Enterococci or for many other virulent pathogens. Acquired resistance to glycopeptides is mediated by several mechanisms (types VanA/B/D/E/G/L), with VanA and VanB genotypes are transferable. Factors related to the host, with the hospital, invasive procedures, environment, and the use of antibiotics may increase the risk of colonization or infection with VRE. This study aims to investigate the occurrence of these microorganisms in hospital patients of Manaus - Amazonas, identifying species distribution and antimicrobial resistance profile and vancomycin resistance genes involved. We analyzed 38 Enterococcus spp. from inpatient or outpatient care from October 2011 to September 2012. 29 isolates E. faecalis and 8 E. faecium were confirmed by conventional biochemical tests, the automated methodology and Polymerase Chain Reaction (PCR). An isolate of Enterococcus spp. was identified by automated equipment as E. casseliflavus, identification was not confirmed by PCR. The evaluation of the antimicrobial susceptibility profiles commonly used in clinical practice were performed by disk diffusion methods and automated. There were differences in the results of sensitivity to penicillin and ampicillin between the two methods. There were no isolated ...

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-19Bitstream added on 2014-08-13T18:01:35Z : No. of bitstreams: 1 000742882.pdf: 1109001 bytes, checksum: 8541a66a007dafecd4081452f2930cc6 (MD5) / O câncer gástrico é mundialmente a segunda causa de morte por câncer. No Brasil está entre os cinco neoplasias mais incidentes, mostrando-se como um grave problema de saúde pública. O conhecimento do padrão de expressão gênica de genes supressores tumorais e protooncogenes é fundamental para o esclarecimento dos mecanismos desta carcinogênese. O gene FOXE1 (forkhead box E1) pertence a uma grande família de fatores de transcrição envolvidos em processos de crescimento e diferenciação celular. Pesquisas recentes têm demonstrado o papel determinante de FOXE1 na gênese de certos tipos de neoplasias. Assim, a análise da expressão gênica de FOXE1 em amostras de tumores gástricos faz-se necessária para esclarecer seu possível envolvimento neste carcinogênese. O DNA foi extraído de 89 amostras de tumores gástricos, com seus respectivos tecidos normais adjacentes. Após o tratamento com bissulfito de sódio, o padrão de metilação foi determinado por PCR específica para metilação (MSP-PCR) com a visualização dos resultados em poliacrilamida 6% corado com nitrato de prata. 86,5% das amostras apresentaram metilação em FOXE1, sendo o mesmo padrão encontrado em tecidos normais adjacentes 74,2%. Não houve significância estatística quando os resultados foram agrupados de acordo com o sexo, tipo histológico e estadiamento. A expressão gênica foi avaliada através de qPCR para 13 dos 89 pacientes incluídos no estudo. Obteve-se para cada paciente a razão (T/N) comparando a expressão gênica da amostra de tecido tumoral (T) em relação à expressão do tecido normal adjacente ao tumor (N). 8 amostras (61,5%) apresentaram um aumento da expressão do FOXE1, com uma média de 1,6. Dentre as 5 (38,5%) amostras com QR abaixo de 1, isto é, com expressão do FOXE1 abaixo do tecido normal, a média foi de 0,7. Quanto à concordância entre o estado de metilação em FOXE1 e a sua expressão ...

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-27Bitstream added on 2014-08-13T18:01:34Z : No. of bitstreams: 1 000744257.pdf: 1345587 bytes, checksum: 884d34a74775bc0bdd270eedb4458762 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Cryptosporidium serpentis infection is common in reptiles, especially snakes, and is characterized by chronic infection with severe hypertrophic gastritis, which can be lethal. This research aimed to use the real- time polymerase chain reaction (PCR) targeting the heat shock protein gene (Hsp70) for detection of C. serpentis in fecal samples of 503 snakes, and to determine its analytical and epidemiological specificity and sensitivity using, as a gold standard, the nested PCR targeting the 18S rRNA (18S rRNA) gene followed by sequencing of the amplified fragments (nPCR/S). The real-time PCR was positive for C. serpentis in 17 samples (3.37%), and nPCR/S resulted in positive results for C. serpentis in 15 samples (2.98%). It was also observed that the nPCR/S was positive for Cryptosporidium spp. in 60 samples (11.98%). Sequencing of the fragments amplified by nPCR was possible in 38 samples, and resulted in the identification of Cryptosporidium tyzzeri, Cryptosporidium muris, Cryptosporidium varanii and C. serpentis in several species of snakes. The sensitivity and specificity of real-time PCR were, respectively, 93.8% and 99.5%. Although three samples were positive for C. serpentis only by real-time PCR, and were considered as false positive results in the estimation of the epidemiological specificity and sensitivity, the melting curve analysis indicated that these samples had the same melting temperature of the C. serpentis samples. Thus, we conclude that real-time PCR targeting the gene Hsp70 is a sensitive and specific method for the detection of C. serpentis in fecal samples from snakes / FAPESP: 07/54312-2

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000438174-Texto+Completo-0.pdf: 7206240 bytes, checksum: f165d17261aed0c4f2179085d14a7f93 (MD5) Previous issue date: 2012 / Considering the high incidence of epilepsy (2-3% of world population) and the high rate of resistance to treatment with available antiepileptic drugs (20-30%) it is essential to be considered and made available new therapeutic options. In epilepsy, like other central nervous system disorders, there is loss of neuronal subpopulations, which represents an important consequence in the pathogenesis of the disease. Therapeutic strategies involving the transplantation of stem cells and gene therapy have been studied in experimental models of epilepsy. The genetic model of EL/Suz epilepsy mouse highlights among the experimental models. In this model, seizures originate close to the parietal lobe and spread to other brain regions such as the hippocampus. Some of the behavioral manifestations that they show are the manipulations of seizures associated with handling and vestibular stimulation, and this behavior is exacerbated by the increase with age of the animal. In order to exploit this potential, our study was to evaluate the effect of administration of bone marrow mononuclear cells in the treatment of genetics epilepsy by peripheral injection of these C57BL/6-EGFP cells in EL/Suz mice. The study was distributed in four groups: I) EL+Control (C), II) EL+Saline (S); III) EL+Bone Marrow Mononuclear Cells Inactivated (BMMCI), IV) EL+Bone Marrow Mononuclear Cells (BMMC). The animals were stimulated from birth with direct observation of behavioral manifestations from 30 days of life. Observation and stimulation of the animals were held once a week with the movement up and down the animal and commuting (goaround) in the four directions. To verify the presence of BMMC transplanted in the hippocampus and other brain structures, other agencies use the technique of polymerase chain reaction (PCR). The observation of the pro-and post-transplant groups was used as a parameter to infer that the transplanted mononuclear cells were able to migrate to the nerve tissue and reduce the number of seizures. Counting the number of seizures was evaluated in the pre and post-transplant record electroencephalographic (EEG) in groups EL+Saline and EL+BMMC for intensity control of seizures. Electrophysiological recordings in brain slices were done to evaluate the synaptic response using the paradigm of paired pulse stimulation. Our results show a gradual reduction in seizure frequency over a period of 240 days reaching 50%. To compare our findings to reduce crises we study the brain electrical activity by recording EEG in which we observed a higher intensity of ictal phase in EL+Saline group compared with the group EL+BMMC. We observed that the animals in the EL+Saline showed a significantly higher neuronal excitability compared to the control group and EL+BMMC proving the therapeutic effect of BMC. In the study of stimulus condition we saw that the three groups were facilitated induction of longterm potentiation (LTP) with a greater amplitude of excitatory postsynaptic potential in the group EL+Saline. Based on data obtained in this study, we conclude that the mononuclear bone marrow may have therapeutic effect on epilepsy genetics in the mouse model of EL/Suz. / Considerando-se a elevada incidência da epilepsia (2-3% da população mundial) e o alto índice de refratariedade ao tratamento com fármacos antiepilépticos disponíveis (20-30%) torna-se fundamental que sejam estudadas e disponibilizadas novas alternativas terapêuticas. Na epilepsia, a exemplo de outros distúrbios do sistema nervoso central, há perda de sub-populações neuronais, o que representa uma consequência importante na patogenia da doença. Estratégias terapêuticas envolvendo o transplante de células-tronco e terapia gênica começam a ser estudadas em modelos experimentais de epilepsia. Entre os modelos experimentais destaca-se o modelo de epilepsia genética do camundongo EL/Suz. Neste modelo, as crises se originam próximos ao lobo parietal e se propagam para as outras regiões do cérebro como o hipocampo. Algumas das manifestações comportamentais que os animais apresentam são as manipulações de crises associadas à estimulação vestibular, sendo que este comportamento é exacerbado com o aumento com a idade do animal. Visando explorar este potencial, nosso estudo se propôs a verificar o efeito da administração de células mononucleares da medula óssea no tratamento da epilepsia genética através da injeção periférica destas células (C57BL/6-EGFP) em camundongos EL/Suz. O estudo foi distribuído em 4 grupos: I) EL+Controle (C); II) EL+Salina (S); III) EL+Células-Inativadas (CI); IV) EL+Células Mononucleares (CMMO). Os animais foram estimulados desde o nascimento com observação direta das manifestações comportamentais a partir de 30 dias de vida. A observação e a estimulação dos animais foram realizadas uma vez por semana com o movimento de subida e descida do animal e movimentos pendulares (ir-vir) nas quatro direções. Para verificar a presença de CMMO transplantadas no hipocampo bem como em outras estruturas encefálicas e outros órgãos utilizamos a técnica da polymerase chain reaction (PCR). A observação dos grupos pré e pós-transplante foi usada como parâmetro para que se infira que as células mononucleares transplantadas foram capazes de migrar para o tecido nervoso e diminuir o número de crises convulsivas. A contagem do número de crises foi avaliada no período pré e pós-transplante com registro eletroencefalográfico (EEG) nos grupos EL+Salina e EL+CMMO para controle de intensidade das crises. Os registros eletrofisiológicos in vitro avaliaram a resposta sináptica utilizando o paradigma de estimulação por pulso pareado em fatias de cérebro. Nossos resultados mostram uma redução gradual da frequência de crises num período de 240 dias chegando a 50%. Para comparar nossos achados de redução de crises fizemos estudo da atividade elétrica cerebral através do registro EEG onde observamos nos traçados eletroencefalográficos uma intensidade maior da fase ictal no grupo EL+Salina comparado com o grupo EL+CMMO. Observamos que os animais do grupo EL+Salina apresentaram uma excitabilidade neuronal significamente maior comparado ao grupo controle e o grupo EL+CMMO comprovando o efeito terapêutico das CMMO. No estudo de estímulo condicionante podemos observar que os três grupos apresentaram indução facilitada de potenciação de longa duração (LTP) com uma maior amplitude do potencial póssináptico excitatório no grupo EL+Salina. Com base nos dados obtidos no presente estudo, concluímos que as células mononucleares da medula óssea podem ter efeito terapêutico na epilepsia genética no modelo do camundongo EL/Suz.