O sorgo é uma planta monocotiledônea diplóide com ciclo de vida de aproximadamente quatro meses. Apresenta grande relevância na agricultura pela sua utilização tanto para a alimentação humana e de animais quanto para a produção de biocombustíveis. Recentemente, o sorgo também surge como um forte candidato como planta modelo em estudos genômicos e fisiológicos relacionados com parede celular de gramíneas C4. Porém, para a análise da função de genes nesta espécie é essencial o estabelecimento da tecnologia de transformação genética que por sua vez depende de um eficiente método de regeneração de plantas. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivo estabelecer um protocolo de cultura de tecidos utilizando discos de folhas e embriões imaturos como explantes, de modo a avaliar a redução do nível de oxidação na cultura in vitro pelo uso de antioxidantes e determinar as concentrações de reguladores vegetais para indução de embriogênese somática e regeneração de plantas. Em discos de folhas, os antioxidantes, PVP, ácido ascórbico e ác. cítrico foram testados na manipulação dos explantes até a inoculação em meio de cultura, porém não houve redução no nível de oxidação. Foram testados diferentes concentrações de 2,4-D para indução de calos e o uso de 1 mg L-1 e 2 mg L-1 apresentaram melhores respostas em embriogênese somática. Diferentes meios de cultura foram testados para obtenção de regeneração de plantas, mas a eficiência chegou somente a 1% de plantas a partir de discos de folhas. Em embriões imaturos, além dos antioxidantes PVP e ácido ascórbico, foram testados também os aminoácidos asparagina e prolina em meio de indução de calos. O uso de 2 g L-1 de asparagina e 3 g L-1 de prolina no meio de indução de calos e 3 mg L-1 de TDZ no meio de regeneração de plantas aumentou a eficiência de obtenção de plantas para até 15%. Assim, o uso de embriões imaturos foi considerado o explante mais promissor para a cultura de tecidos de sorgo. Devido aos altos níveis de oxidação e a baixa eficiência de regeneração de plantas em cultura de tecidos, foi testado o método de transformação genética via Agrobacterium tumefaciens conhecido como \"Floral dip\". Esta técnica não necessita da etapa de regeneração de plantas in vitro. Inicialmente, resultados promissores foram obtidos, porém há a necessidade do aprimoramento da metodologia. / Sorghum is a diploid monocot plant with a short life cycle of about 4 months. This crop is important in agriculture because it can be used for animal and human feed, and as well as source of raw material for biofuel production. Recently, sorghum also emerges as a strong candidate being a model plant on genomic and physiological studies related to cell wall in C4 grasses. Nevertheless, an efficient plant regeneration method is required for the establishment of genetic transformation technique to conduct the characterization of functional genes. In this context, the objective of this work was to establish a tissue culture protocol to evaluate the oxidation level of in vitro culture using leaf discs and immature embryos as explants, and testing different antioxidants and hormones concentrations for somatic embryogenesis and plant regeneration. In leaf discs, PVP, ascorbic acid and citric acid antioxidants were tested when manipulating the explants until their inoculation in culture media, but these factors failed to show any reduction in oxidation. In order to obtain somatic embryogenesis different concentrations of 2,4-D were tested for callus induction, 1,0 and 2,0 mg L-1 showed the best results. Several plant regeneration medium were tested however, only up to 1% of regeneration was achieved using leaf discs. In immature embryos, besides PVP and ascorbic acid antioxidants also asparagine and proline amino acids were tested in the callus induction media. The use of 2 g L-1 asparagine and 3 g L-1 proline in callus induction media and 3 mg L-1 TDZ in the regeneration media improved shoot regeneration efficiency up to 15%. Thus, the use of immature embryos was considered as a better option as explant for tissue culture of sorghum. Due to high production of oxidation and low frequency of plant regeneration in tissue culture, the genetic transformation via Agrobacterium tumefaciens known as \"Floral Dip\" method was tested. This technique does not require in vitro plant regeneration. Preliminary results were obtained, but the methodology needs to be improved.

As espécies Cattleya labiata Lindley e a Cattleya eldorado Linden, nativas da Mata Atlântica e Amazônia, respectivamente, encontram-se sob forte risco de desaparecimento na natureza, sendo, portanto, necessário o desenvolvimento de métodos eficientes de propagação de suas mudas, dentre os quais se destaca a micropropagação. A eficiência do cultivo in vitro de orquídeas está associada aos meios de cultura utilizados e, principalmente, aos reguladores de crescimento. O trabalho teve como objetivo avaliar a influência de paclobutrazol (PBZ) no desenvolvimento das microplântulas cultivadas in vitro. Plântulas provenientes de germinação in vitro, com 1,0 ± 0,2 cm de comprimento, foram utilizadas no estudo. No primeiro experimento, utilizou-se como controle o meio de cultura MS isento de reguladores de crescimento vegetal. Nos tratamentos, o meio MS foi suplementado com quatro concentrações de PBZ 1,0; 2,0; 4,0 e 6,0 mg.L-1; com ácido naftalenoacético (ANA) 1,0 mg.L-1 associado a 6-benzilaminopurina (BAP) 1,0 mg.L-1 e com a combinação de 4,0 mg.L-1 PBZ, com 1,0 mg.L-1 ANA e 1,0 mg.L-1 BAP. As avaliações morfológicas, número de brotos, comprimento da parte aérea (CPA), comprimento da maior raiz (CMR) e comprimento da lâmina foliar (CLF), foram realizadas no início do experimento e nos subcultivos a cada 40 dias, durante 160 dias. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em arranjo trifatorial com parcelas subdivididas no tempo, com seis repetições por tratamento. Um segundo experimento foi realizado utilizando a técnica de pulse. Como controle foi utilizado meio de cultura MS, e para os tratamentos foi utilizado o mesmo meio acrescido de concentrações crescentes de PBZ com diferentes tempos de exposição, sendo: T0= controle (MS); T1= 1,0 mg.L-1 PBZ por 40 dias; T2= 10,0 mg.L-1 PBZ por 4 dias e T3= 100,0 mg.L-1 PBZ por 4 horas. Foram feitas as avaliações de CPA, CLF, CMR, número de raízes, massa fresca e massa seca da parte aérea, massa fresca e massa seca de raiz, massa fresca e massa seca total, contagem e caracterização estomática e avaliação anatômica do tecido radicular. O experimento foi conduzido no delineamento inteiramente casualizado totalizando quatorze repetições por tratamento. O tratamento com 1,0 mg.L-1 de PBZ por 40 dias promoveu maior desenvolvimento e vigor do sistema radicular, aumentando a espessura das raízes, podendo contribuir para a fase de aclimatização das microplântulas. Os tratamentos com pulse reduziram significativamente a parte aérea das microplântulas, não sendo recomendado na micropropagação da C. labiata. / The Species Cattleya labiata Lindley and Cattleya eldorado Linden, native to the Atlantic Forest and Amazon, respectively, are under high risk of extinction in nature, therefore, necessary to develop efficient methods of spreading their seedlings, among which highlights micropropagation. The efficiency of in vitro cultivation of orchids is associated with culture media, and especially the growth regulators. The study aimed to evaluate the influence of paclobutrazol (PBZ) in the development of in vitro microplantlets. Seedlings from germination in vitro, with 1.0 ± 0.2 cm in length, were used in the study. In the first experiment, we used to control the MS culture medium free of plant growth regulators. In the treatments, MS medium was supplemented with four concentrations of PBZ 1.0, 2.0, 4.0 and 6.0 mg L-1, with naphthaleneacetic acid (NAA) 1.0 mg L-1 associated with 6-benzylaminopurine (BAP) 1.0 mg L-1 and with the combination of 4.0 mg L-1 PBZ with 1.0 mg.L-1 NAA and 1.0 mg L-1 BAP. The morphological evaluations, number of shoots, shoot length (CPA), longest root length (CMR) and leaf blade length (CLF) were performed at the beginning of the experiment and in subcultures every 40 days during 160 days. The experimental design was completely randomized in three-factor split-plot arrangement in time, with six replicates per treatment. A second experiment was performed using the technique of \"pulse\". It was used as control MS medium, and the treatments we used the same medium plus increasing concentrations of PBZ with different exposure times, as follows: T0 = control (MS), T1 = 1.0 mg L-1 PBZ for 40 days, T2 = 10.0 mg L-1 PBZ for 4 days and T3 = 100.0 mg L-1 PBZ for 4 hours. Assessments were made CPA, CLF, CMR, number of roots, fresh and dry mass of shoots, fresh weight and dry weight of root, fresh weight and total dry matter, stomatal counting and characterization and evaluation of the anatomic root tissue. The experiment was conducted in a completely randomized a total of fourteen replicates per treatment. Treatment with 1.0 mg L-1 of PBZ for 40 days promoted further development and vigor of the root system, increasing the thickness of the roots and may contribute to the acclimatization phase of microplantlets. Treatments with \"pulse\" significantly reduced the shoot microplantlets and Its not recommended to the micropropagation of C. labiata.

Este trabalho teve como objetivo avaliar a influência dos fertilizantes foliares a base de aminoácidos livres na utilização conjunta de práticas agrícolas como a aplicação de glifosato e a adubação no solo com P e K em soja BRS 255 RR. As avaliações foram realizadas nos parâmetros biométricos, nutricionais, metabólicos e produtivos através das variáveis: altura, valor SPAD (clorofilas), área foliar, biomassa aérea (massa fresca e seca de folhas e caules), macronutrientes e micronutrientes nas folhas, atividade da nitrato redutase (NR), glutamina sintetase (GS), concentração de proteínas totais solúveis (PTS), número de vagens, massa fresca e seca de vagens, massa média de 100 grãos, massa total de grãos, teores de lipídeos e proteínas acumulados nos grãos. Foram conduzidos dois experimentos em paralelo, com os produtos Ajifol e Flororgan, em ambiente natural utilizando vasos de polietileno com capacidade para 20 litros. O delineamento utilizado foi em blocos casualizados, onde cada unidade experimental foi constituída de três plantas de soja por vaso preenchido com 20 kg de substrato (Latossolo vermelho distrófico argiloso). A adubação no solo com P e K (1,00 e 0,24 g kg-1, respectivamente) foi realizada 30 dias antes da semeadura. As aplicações do Ajifol (1,0 L ha-1), Flororgan (2,5 L ha-1) e glifosato (0,3 L ha-1) foram realizadas via pulverização foliar no estádio fenológico V5, referente aos 35 dias após a germinação. As amostragens de altura e SPAD foram realizadas em três épocas diferentes durante o ciclo vegetativo da planta (7, 15 e 30 dias após a pulverização foliar). No estádio fenológico R1 (início do florescimento) coletou-se uma planta inteira de cada parcela para as análises morfológicas, nutricionais e metabólicas. As duas plantas restantes em cada parcela serviram para analisar os parâmetros de produção. Os principais resultados obtidos para os aminoácidos presentes nas formulações dos produtos, foram o aumento na altura das plantas aos 7 e 15 dias após suas aplicações, quando associados a adubação no solo. Além de atuarem como antiestressantes impedindo a diminuição nos teores de clorofilas através da aplicação de glifosato. Os resultados das análises nutricionais comprovaram a ação quelatizante desses aminoácidos, principalmente para o K, B, Fe e Cu. As melhores respostas através da aplicação dos aminoácidos foram para a atividade da NR, GS e concentração de PTS nas folhas. Tivemos uma redução de lipídeos acumulados nos grãos em função das aplicações com aminoácidos isolados ou em conjunto com adubação. Por outro lado, constatamos um aumento de lipídeos através da aplicação em conjunto com glifosato e adubação. Além dos aminoácidos influenciarem positivamente o armazenamento de proteínas nas sementes quando associados ao glifosato. / The objective of this work was to verify the influence of foliar fertilizer on basis of free amino acids combined with the application of glyphosate and fertilization of soil with P and K on soybean (BRS 255 RR). The evaluations were performed on biometric, nutritional, metabolic and productive parameters using the following variables: Height, SPAD values (chlorophylls), leaf area, biomass (fresh and dry weight of leaves and stems), macronutrients and micronutrients in leaves, activity of nitrate reductase (NR), glutamine synthetase (GS), concentration of total soluble protein (TSP), number of pods, fresh and dry weight of pods, 100 grains average weight, total weight of grains, concentration of lipids and proteins accumulated in the grains. Two experiments were conducted in parallel with the products Ajifol and Flororgan in natural environment using polyethylene pots (20 L). A randomized blocks design was used, where each experimental unit was cultivated with three soybean plants per pot filled with 20 kg of substrate (dystrophic clayey Red Latosol). The soil fertilization with P and K (1,00 and 0,24 g kg-1, respectively) was carried out 30 days before sowing. The applications of Ajifol (1,0 L ha-1), Flororgan (2,5 L ha-1) and glyphosate (0,3 L ha-1) were performed by foliar sprays at the V5 developmental stage, corresponding to 35 days after germination. Samples for height and SPAD were taken at three different times during the vegetative stage of plant (7, 15 and 30 days after foliar spraying). At the phenological stage R1 (early flowering) one entire plant of each plot was collected for morphological, nutritional and metabolic analysis. The remaining two plants were used for analyses of production parameters. The application of amino acids increased plant height after 7 and 15 days after foliar spraying, when associated with soil fertilization. They acted moreover as antistress substances preventing a decrease in the levels of chlorophyll caused by application of glyphosate. Nutritional analysis indicated the formation of chelates of these amino acids mainly with K, B, Fe and Cu. The main effects of amino acids applications were higher for NR, GS and TSP concentrations in leaves. A reduction in lipids accumulated in the seeds through sole application of amino acids, as well as in conjunction with fertilization was identified. On the other hand increasing values were found when the amino acids were associated with both glyphosate and fertilization. The amino acids increased the protein storage in seeds when applied in conjunction with glyphosate.

A cana-de-açúcar é uma monocotiledônea poliplóide, alógama que possui baixa taxa reprodutiva devido a dificuldade de florescimento. Devido estas características genéticas e fisiológicas os programas de melhoramento são longos e laboriosos. Alternativamente, modernas aplicações da biotecnologia visam contribuir com o desenvolvimento de novos cultivares. Neste trabalho estudou-se a metodologia de cultura de tecidos a partir de discos de folhas imaturas para o estabelecimento da cultura de calos embriogênicos e regeneração de plantas a partir dos calos embriogênicos e diretamente, a partir de folhas imaturas. O objetivo principal foi contribuir para o desenvolvimento de métodos eficientes para produção de plantas transgênicas a partir de calos e folhas imaturas, considerando-se a crescente necessidade de produção de novos cultivares com características agronômicas específicas. Diversas concentrações de 2,4-D e cinetina em meio MS foram testadas para o estabelecimento de calos altamente embriogênicos e para a indução da desdiferenciação celular nos discos foliares antecedendo a regeneração de plantas. Meios de cultura sem reguladores de crescimento (MS) e com a adição de BAP e ANA foram testados para a regeneração de plantas a partir de discos foliares. Calos embriogênicos com 12 a 20 semanas de cultivo produziram em média 3 a 5 plantas, em meio de regeneração MS. Folhas imaturas apresentaram elevado potencial de regeneração de plantas quando se utilizou 2,4-D em concentrações de 5 e 8 mg/L nos períodos de 5 e 8 dias no escuro. Houve indução a formação de embriões somáticos que resultaram em média 12 a 16 plantas por explante no período total de 7 a 10 semanas. Além disso, foi testado o pré-tratamento dos discos foliares em meio MS3K, contendo 2,4-D (3mg/L) e cinetina (0,1 mg/L), antes da transferência do discos para meio de regeneração MS. Os discos submetidos a este pré-tratamento durante 14, 21 e 28 dias apresentaram aumento significativo na eficiência de regeneração de plantas, variando em média de 41 a 50 plantas por disco foliar nas variedades RB835089 e RB855156. A redução no tempo para obtenção de plantas aliado ao aumento na média de plantas obtidas é a base para aumentar a eficiência de transformação genética de plantas. Experimentos de cotransformação dos genes neo e comt(AS), foram realizados por biolística. Em plantas regeneradas a partir de folhas imaturas da variedade RB835486, as análises de PCR confirmaram a incorporação do gene marcador neo em 57 e 90% das plantas em meio seletivo com geneticina (30 mg/L), sendo que a maior eficiência de regeneração de transgênicos (90%) foi obtida no pré-tratamento com o meio MS3K. Das plantas transgênicas para o gene neo, 7 e 38% também foram confirmadas para a incorporação do gene comt(AS). Nas plantas regeneradas a partir de calos embriogênicos em meio seletivo, as análises de PCR detectaram somente a incorporação do gene neo, o que ocorreu em 52% das plantas analisadas. Os resultados obtidos mostram que a cultura de discos de folhas imaturas para o processo de transformação genética por biolística é uma metodologia viável, rápida e menos onerosa, quando comparada com a cultura de calos embriogênicos. / Sugarcane is a polyploidy monocot and allogamous species that has low reproductive rate due to the difficulty of flowering. Because of these genetic and physiological characteristics breeding program takes long time and demand hard labor. Alternatively, modern biotechnology approaches contribute to the development of new cultivars. In this work we studied the methodology of plant tissue culture from immature leaf discs to establish callus culture and plant regeneration from those calli and from immature leaves, directly. The main objective was to contribute to the development of efficient methods to produce transgenic plants from callus and immature leaves, due to the growing need to produce new cultivars with specific agronomics traits. MS medium with different concentrations of 2,4-D and kinetin were tested to obtain highly embryogenic calli and to induce cellular dedifferentiation in the immature leaf discs prior to plant regeneration. Culture media without growth regulators (MS) and with the addition of BAP and NAA were tested for plant regeneration from leaf discs. Callus culture with 12 to 20 weeks resulted on average 3 to 5 plants on regeneration medium designed as MS. Immature leaves showed a high potential for plant regeneration when 2,4-D at concentrations of 5 and 8 mg/L in periods of 5 and 8 days in the dark. There were inducing of somatic embryos that resulted in average 12 to 16 plants per explant in the total period of 7 to 10 weeks. In addition, we tested the pre-treatment of leaf discs in MS3K medium which contain 2,4-D (3 mg/L) and kinetin (0.1 mg/L) before transfering to plant regeneration MS medium . The discs submitted to this pretreatment for 14, 21 and 28 days showed significant increase in the efficiency of plant regeneration, with on average of 41 to 50 plants per leaf disc in varieties RB835089 and RB855156. The reduction of time to obtain plants coupled with the increase of plants obtained is the basis for increasing the efficiency of plant genetic transformation. Co-transformation with genes neo and comt(AS), were performed by biolistics. Plants regenerated from immature leaves of the variety RB835486, PCR analysis confirmed the incorporation of the neo selection marker gene in 57 and 90% of the plants on selective medium with geneticin (30 mg/L), the higher efficiency of transgenic plants (90%) was obtained on pre-treatment in MS3K medium. Transgenic plants for the neo gene, 7 and 38% were also confirmed for the incorporation of comt (AS). PCR analysis of candidates transgenic plants from callus growing on selective medium, revelled only the insertion of the neo gene, which occurred in 52% of the analyzed plants. The results of this work showed that the approach of using immature leaf discs to obtain plant genetic transformation by biolistics methodology is a viable, cheaper and faster than using embryogenic callus.

Com o objetivo de estudar o comportamento fenológico, morfológico e produtivo de cultivares de algodoeiro com diferentes arquiteturas de plantas em diferentes espaçamentos, através do manejo com regulador de crescimento, foi realizado o presente trabalho, na área experimental da ESALQ/USP, no município de Piracicaba, Estado de São Paulo, no ano agrícola de 2000/01. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso com parcelas sub-subdivididas e 4 repetições. As parcelas constituíram-se dos espaçamentos de 0,76 e 1,01 m, as subparcelas das três cultivares (IAC 23, DeltaOpal e CD 401) e as sub-subparcelas em presença ou ausência de regulador de crescimento. Em seis plantas marcadas de cada parcela foram analisados os seguintes parâmetros: acompanhamento das fases fenológicas (emergência, aparecimento do primeiro botão floral, antese da primeira flor e abertura do primeiro capulho) e caracteres agronômicos de campo (altura de planta, diâmetro do caule, número de ramos vegetativos e frutíferos, conformação da planta, número de capulhos por planta e altura de inserção do primeiro ramo frutífero). Na área útil de cada parcela foi determinada, a produção de algodão em caroço por hectare e a precocidade de colheita. Em amostras de 20 capulhos tomadas aleatoriamente em cada parcela foram realizadas as análises dos caracteres agronômicos de laboratório (massa de 100 sementes, porcentagem de fibras e massa média de um capulho) e das características tecnológicas da fibra (comprimento, uniformidade de comprimento, maturidade, tenacidade e índice micronaire). Os resultados obtidos permitem concluir que não houve interações significativas para as cultivares x espaçamentos x regulador de crescimento, para a produção de algodão em caroço, precocidade de colheita, caracteres agronômicos de laboratório e características tecnológicas das fibras, com exceção da tenacidade. Desta forma, as cultivares avaliadas, independente da arquitetura da planta, apresentaram capacidade de ajustar-se às variações dos espaçamentos testados e aplicação de regulador de crescimento com relação a estas características. Os caracteres agronômicos de campo como: a altura das plantas e o diâmetro de caule, de modo geral, apresentaram médias reduzidas com a redução do espaçamento e aplicação do regulador de crescimento, para as cultivares de desenvolvimento mais vigoroso (IAC 23 e DeltaOpal), não influenciando, porém, a cultivar de plantas morfologicamente mais compactas (CD 401). / The purpose of this work was to study the phenological, morphological and productive behavior of cotton cultivars presenting different plant shapes under different spacing layouts managed with the use of plant growth regulator. The experiment was established in the experimental field of ESALQ/USP, Piracicaba, Sao Paulo, during the 2000/01 growing season and was arranged in a randomized block experimental design with subdivided plots and 4 replications. The plots represented spacing layouts of 0.76 and 1.01 m, subplots consisted of the IAC 23, DeltaOpal and CD 401 cultivars, while the sub-subplots were characterized by the use or absence of growth regulator. Six plants per plot were labeled and analyzed for the phenological phases (emergence, appearance of the first flower bud, anthesis of the first flower, opening of the first cotton boll) and field agronomical characteristics (plant height, stem diameter, number of vegetative and fruit branches, plant shape, number of cotton boll per plant and insertion height of the first fruit branch). The harvest early and raw cotton yield per hectare were determined considering the effective plot area. The agronomical lab characteristics (mass of 100 seeds, fiber percentage and cotton boll mass), as well as the fiber technological characteristics (length, length uniformity, maturity, strength, and micronaire) were analyzed using a sample of 20 bolls taken at random. Based on the results obtained, it can be concluded that there were no significant interactions among cultivars x spacing x growth regulator, as to cotton yield, harvest early, agronomical lab characteristics and fiber technological characteristics, except for stremgth. The analyzed cultivars, regardless of the plant shape, showed good adaptation to the variation in spacing layouts, as well as to the application of growth regulator, considering the analyzed characteristics. The field agronomical characteristics, such as plant height and stem diameter, generally decreased with the reduction in spacing and with the application of growth regulator, considering the most vigorous cultivars (IAC 23 and DeltaOpal). On the other hand, the cultivar presenting a more compact plant (CD 401) pattern was not influenced by spacing or use of growth regulator.

O veneno da subespécie de cascavel Crotalus durissus terrificus (C.d.terrificus) altera a coagulação, tem ação neurotóxica, miotóxica e efeito imunossupressivo. O veneno de C.d.terrificus e a sua fração majoritária, crotoxina (CTX), inibem a resposta celular e humoral, sendo esse efeito independente da indução de morte celular. O objetivo foi investigar os mecanismos envolvidos na imunossupressão exercida pela CTX. A CTX induz a produção de IL-10, TGF-<font face=\"Symbol\">&#946 e prostaglandina E2 (PGE2) pelas células dos camundongos que a receberam. Menor secreção de IFN-<font face=\"Symbol\">&#947 e IL-12 foi observada nas culturas de células de camundongos imunizados e que receberam CTX. A CTX aumenta a expressão da enzima indoleamina 2,3 dioxigenase e a geração de células T reguladoras em camundongos imunizados com OVA e que receberam CTX. A CTX foi capaz de inibir a expressão de CD40, CD80, CD86 e de MHC de classe II em células de camundongos imunizados e nas células dendríticas (DCs) purificadas destes animais. Em culturas de DCs, a CTX induz alta secreção de IL-10, TGF-<font face=\"Symbol\">&#946 e PGE2 e menor de IL-12. / The venom of the rattlesnake Crotalus durissus terrificus (C.d.terrificus) changes the coagulation system and presents neurotoxic, myotoxic and immunosuppressive effect. The venom and its main fraction, crotoxin (CTX) inhibited both the cellular and humoral response. This effect is not due to induction of cell death. The objective was to investigate the immunosuppressive mechanisms of CTX. CTX induces production of IL-10, TGF-<font face=\"Symbol\">&#946 and prostaglandin E2 (PGE2) by cells of mice that received it. Lower secretion of IFN-<font face=\"Symbol\">&#947 and IL-12 was observed in the cultured cells from mice immunized that received CTX. CTX promotes increased expression of the enzyme indoleamine 2,3 dioxygenase and generation of regulatory T cells in mice immunized with OVA and receiving the toxin. CTX was able to inhibit the expression of CD40, CD80, CD86 and MHC II in mice immunized and in dendritic cells (DCs) purified from these animals. In cultures of DCs, CTX increased secretion of IL-10, TGF-<font face=\"Symbol\">&#946 and PGE 2 and lower IL-12.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_mirian_de_farias_ribeiro.pdf: 2449435 bytes, checksum: 6695d40137c267cf6058be71ba7803e7 (MD5) Previous issue date: 2013-03-28 / Pear orchards with high density planting were possible due to the use of rootstock quince (Cydonia oblonga Mill.), thus obtaining small plants and rapid fruiting, and provide uniformity to these orchards. Techniques that may improve the ability to propagation this rootstock are of great interest. The aim of this study was to adjust protocols for in vitro multiplication and regeneration of quince cultivars MC and Adams. The results of this word are presented in chapter. Material used in the experiments was obtained from in vitro propagation in culture medium consisting of MS salts and vitamins supplemented with myo-inositol (100 mg L-1), 6 - benzylaminopurine (BA) (0.3 mg L-1), sucrose (30 g L-1) and agar (8 g L-1). Chapter 1 we used MS medium added agar (8 g L-1) on solidified medium and vermiculite (3 g flask-1) in the liquid medium and the flasks were sealed with aluminum foil, PVC film and polypropylene cap. In Chapter 2 how carbon source in culture medium was added sucrose, fructose or sorbitol at concentrations 0, 15, 30, 45 and 60 g L-1. For in vitro regeneration the Chapter 3 was divided in two experiments. In experiment 1 the culture medium consisted of salts and vitamins MS and SH supplemented with myoinositol (100 mg L-1), sucrose (30 g L-1), agar (8 g L-1), NAA (2 mM) and TDZ at concentrations 0, 1.5, 3, 4.5 and 6 μM. In experiment 2 the culture medium consisted of SH salts and vitamins supplemented with myo-inositol (100 mg L-1), sucrose (30 g L-1), agar (8 g L-1), TDZ (0 , 1.5, 3, 4.5 and 6 μM) combined with NAA or IBA at concentrations of 0, 1.0, 1.5 and 2 μM. All experiments were evaluated after 60 days. Considering the results presented in Chapter 1 is possible to conclude that the use of culture medium solidified with agar and the flasks sealed with aluminum foil or polypropylene cap favored the in vitro multiplication of quince 'MC' and 'Adams'. In the second chapter it was found that the sucrose concentration of 45 g L-1 to cultivar MC and 30 g L-1 to cultivar Adams are the best concentrations and carbon source for in vitro multiplication quince. In the Chapter 3 first verified in experiment 1 that the in vitro regeneration of adventitious shoots quince cultivars MC and Adams was favored by the use of SH culture medium and addition of 4.5 μM TDZ to cultivar MC and 6 μM TDZ for cultivar Adams. And in experiment 2 it was concluded that multiple shoots were formed from the combination of 4.5 μM TDZ and 2 μM NAA for cultivar MC and 6 μM TDZ and 2 μM NAA to cultivar Adams. / Pomares de pereira com plantio em alta densidade foram possíveis devido a utilização de portaenxerto de marmeleiro (Cydonia oblonga Mill.), obtendo-se assim plantas de pequeno porte e rápida frutificação, além de proporcionar uniformidade a esses pomares. Técnicas que venham melhorar a capacidade de propagação deste portaenxerto são de grande interesse. O objetivo desse trabalho foi ajustar protocolos de multiplicação e regeneração in vitro de marmeleiro cultivares MC e Adams. Os resultados do trabalho estão apresentados na forma de capítulos. O material vegetal utilizado nos experimentos foi obtido a partir da multiplicação in vitro em meio de cultura básico composto dos sais e vitaminas MS, suplementados com mio-inositol (100 mg L-1), 6- benzilaminopurina (BAP) (0,3 mg L-1), sacarose (30 g L- 1) e ágar (8 g L-1). No capítulo 1, utilizou-se meio básico acrescentado de ágar (8 g L- 1) no meio solidificado e vermiculita (3 g frasco-1) no meio líquido e os frascos foram vedados com papel alumínio, filme PVC e tampa de polipropileno. No capítulo 2, como fonte de carbono no meio de cultura foi utilizado sacarose, frutose ou sorbitol nas concentrações de 0, 15, 30, 45 e 60 g L-1. Para regeneração in vitro o capítulo 3 foi dividido em dois experimentos. No experimento 1 os meios de cultura constituíram-se dos sais e vitaminas MS e SH, suplementados com mio-inositol (100 mg L-1), sacarose (30 g L-1), ágar (8 g L-1), ANA (2 μM) e TDZ nas concentrações de 0, 1,5, 3, 4,5 e 6 μM. No experimento 2 o meio de cultura constituiu-se dos sais e vitaminas SH, suplementado com mio-inositol (100 mg L-1), sacarose (30 g L-1), ágar (8 g L-1), TDZ (0, 1,5, 3, 4,5 e 6 μM) combinado com ANA ou AIB nas concentrações de 0; 1,0; 1,5 e 2 μM. Todos os experimentos foram avaliados após 60 dias. Diante dos resultados apresentados no capítulo 1 é possível concluir que a utilização de meio de cultura solidificado com ágar e os frascos vedados com papel alumínio ou tampa de polipropileno favorecem a multiplicação in vitro de marmeleiro 'MC' e 'Adams'. No capítulo 2 constatou-se que a sacarose na concentração de 45 g L-1 para cultivar MC e 30 g L-1 para cultivar Adams são as melhores concentrações e fonte de carbono para multiplicação in vitro dos portaenxertos de marmeleiro testados. No capítulo 3, primeiro verificou-se no experimento 1 que a regeneração in vitro de brotos adventícios de marmeleiro das cultivares MC e Adams foi favorecida pelo uso do meio de cultura SH e pela adição de 4,5 μM de TDZ para cultivar MC e 6 μM de TDZ para a cultivar Adams. No experimento 2 concluiu-se que houve maior taxa de regeneração a partir da combinação de 4,5 μM de TDZ e 2 μM de ANA para cultivar MC e 6 μM de TDZ e 2 μM de ANA para cultivar Adams.

Mimosa scabrella Benth. is a tree from Brazil, growing from Minas Gerais to Rio Grande do Sul. Its wood is used for energy like firewood and coal. The round wood is also very sought for props in civil architecture. Furthermore, since it is an aggressive pioneering species, its plantation is recommended for protection and recovering of weak and erosive soil. The Brazilian plantations of Mimosa scabrella Benth. present reduced productivity, which can be improved by the introduction of trees with larger diameter. The increase of the diameter can be obtained by the manipulation of the levels of vegetable hormones in the cells during the micropropagation. Aiming at contributing for this purpose, the overall goal of this work was to study the Mimosa scabrella Benth. in vitro regeneration considering isolated explants from germinated seeds. The surpassing of the seeds' quiescence was tested by mechanical scarification, immersion in water at environment temperature during 24 h, immersion in hot water (80ºC) during 5 minutes. The disinfestation consisted of the immersion of sodium hypochlorite to 2% during 5, 10 or 15 minutes and inoculation of the seeds in ½ MS or MS agent (Murashige & Skoog). Nodal segments cultivated in MS agent added of benzylaminopurine - BAP (0; 2,5; 5; 7,5 and 10 μM) and of alpha-aceticnaphtalene acid - ANA (0 and 2,2 μM), in the absence or in the presence of estreptomicine, were evaluated according to their multiplication in vitro. The mechanical scarification was the quiescence surpassing method which provided the largest germination percentage. The disinfestation with sodium hypochlorite at 2% during 10 minutes resulted in more than 60% of germinated seeds. The biggest in vitro germination of Mimosa scabrella Benth. s seeds was observed at ¼ MS dilution. In the absence of BAP, there was more formation of buds (1,39) and of leaves (1,62) per explant. There was not any contamination by bacteria in the absence of BAP, independently of the presence of estreptomicine. Calli were not formed in the absence of estreptomicine and of BAP. With the increase of BAP concentrations at the medium of culture, there was a reduction in the fenolic oxidation. For the in vitro multiplication of nodal segments of Mimosa scabrella Benth., it is not necessary to add either ANA or BAP. / A bracatinga (Mimosa scabrella Benth.) é uma árvore nativa do Brasil, ocorrendo desde Minas Gerais até o Rio Grande do Sul. A madeira é usada para energia como lenha e carvão. A madeira roliça é também muito procurada para escoras na construção civil. Além disso, como é uma espécie pioneira agressiva, seu plantio é recomendado para proteger e recuperar solos fracos e erodidos. Os bracatingais brasileiros apresentam reduzida produtividade, que pode ser melhorada pela introdução de árvores com maior diâmetro. O aumento do diâmetro pode ser obtido pela manipulação dos níveis de hormônios vegetais nas células durante a micropropagação. Com a finalidade de contribuir para esse propósito, neste trabalho, o objetivo geral foi estudar a regeneração in vitro da bracatinga por meio de explantes isolados a partir de sementes germinadas. A superação de dormência das sementes foi testada por escarificação mecânica, imersão em água à temperatura ambiente por 24 h, imersão em água quente (80ºC) por 5 minutos. A desinfestação consistiu da imersão em hipoclorito de sódio a 2% por 5, 10 ou 15 minutos e inoculação das sementes em meio ½ MS ou MS (Murashige & Skoog). Foi avaliada também a germinação sob diferentes concentrações do meio MS (1/8, ¼, ½ e integral). Segmentos nodais cultivados em meio MS acrescido de benzilaminopurina - BAP (0; 2,5; 5; 7,5 e 10 μM) e de ácido alfa naftalenoacético - ANA (0 e 2,2 μM), na ausência ou presença de estreptomicina, foram avaliados quanto à multiplicação in vitro. A escarificação mecânica foi o método de superação de dormência que proporcionou a maior porcentagem de germinação. A desinfestação com hipoclorito de sódio a 2% durante 10 minutos resultou em mais de 60% de sementes germinadas. A máxima germinação in vitro de sementes de bracatinga foi observada na diluição ¼ MS. Na ausência de BAP, houve maior formação de gemas (1,39) e de folhas (1,62) por explante. Não houve contaminação por bactérias na ausência de BAP, independente da presença de estreptomicina. Não foram formados calos na ausência de estreptomicina e de BAP. Com o aumento das concentrações de BAP no meio de cultura, houve uma redução na oxidação fenólica. Para a multiplicação in vitro de segmentos nodais de bracatinga, não é necessário adicionar ANA e BAP.

O adenocarcinoma de ducto pancreático é reconhecido mundialmente como uma doença extremamente agressiva a qual apresenta um prognóstico desfavorável para pacientes sem cirurgia de ressecção. Portanto, é fundamental ampliar o conhecimento sobre os mecanismos biológicos envolvidos no câncer pancreático a fim de permitir a identificação de marcadores moleculares e alvos terapêuticos com o intuito de melhorar o diagnóstico precoce e tratamento. Os fatores de transcrição, reconhecidos por serem os efetores finais de vias de sinalização, regulam diversas funções celulares e, alterações na expressão transcricional destes podem contribuir para a transformação celular bem como para a progressão tumoral. Assim, o objetivo do presente estudo foi identificar os reguladores mestres da transcrição, possivelmente envolvidos no câncer pancreático. Para tanto, utilizamos dados de microarranjos para associar os reguladores mestres com o fenótipo tumoral. As análises foram realizadas no ambiente estatístico R utilizando os pacotes RTN, Limma e Survival. O gene TULP3 foi identificado como um regulador mestre da transcrição em amostras de câncer pancreático. O valor prognóstico de TULP3 foi verificado através de análises de sobrevivência em três coortes independentes. Estas análises revelaram que pacientes com adenocarcinoma pancreático, exibindo altos níveis de expressão do gene TULP3, apresentam uma sobrevida global desfavorável. Os altos níveis transcricionais de TULP3 podem desempenhar um papel fundamental na progressão do adenocarcinoma pancreático e conduzir a um resultado clínico desfavorável. Contudo, este estudo destaca a potencial aplicação de TULP3 como um biomarcador de prognóstico clínico para pacientes com adenocarcinoma pancreático. / Pancreatic ductal adenocarcinoma is world-wide recognized as an aggressive disease with poor prognosis in patients who did not undergo resection. Efforts to better comprehend the biological mechanisms of pancreatic cancer are needed to enable the identification of novel molecular markers and therapeutic targets for improving early diagnosis and treatment. Transcription factors are the final effectors of signaling pathways and regulate a number of cellular functions. Changes in expression of transcription factors may contribute to cellular transformation and tumor progression. Thus, the aim of the present study was to identify transcriptional master regulators potentially involved in pancreatic cancer disease. To achieve this goal, we utilized microarray data to associate master regulators with tumor phenotype. Analyses were performed with RTN, Limma, and Survival packages at R environment. We identified TULP3 as a master regulator of transcription in pancreatic cancer samples. TULP3 prognostic value was accessed in three independent cohort analyses. Our data demonstrate that patients with pancreatic cancer, exhibiting high TULP3 transcriptional levels, show a poor overall survival. High levels of TULP3 expression may play an essential role in pancreatic cancer progression and lead to poor clinical outcome. Our results highlight the potential use of TULP3 as a clinical prognostic biomarker for pancreatic adenocarcinoma.

Orientadores: Wirla Maria da Silva Cunha Tamashiro. Patrícia Ucelli Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T17:08:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thome_Rodolfo_M.pdf: 2705250 bytes, checksum: 05d8c21f84c00f9da679ff148b082292 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O camundongo BALB/c, linhagem geneticamente resistente à artrite induzida por colágeno (CIA), pode desenvolver um quadro similar ao de camundongos susceptíveis quando uma proteína não relacionada ao próprio, como a ovalbumina (OVA), é associada a colágeno tipo II (CII). Utilizando esse modelo, avaliamos se a tolerância oral a OVA poderia interferir nas respostas imunes contra CII, bem como o efeito da transferência adotiva de células dendríticas (DCs) tolerogênicas para camundongos artríticos. Para avaliação dos efeitos da tolerância oral sobre o desenvolvimento de artrite em BALB/c, os camundongos foram alimentados com OVA misturada à água de beber na concentração de 4mg/mL, por sete dias consecutivos, antes ou depois do desafio com CII+OVA (100?g/mL de cada antígeno). Para avaliar a participação de células dendríticas (DCs) tolerogênicas na modulação da artrite em BALB/c, células CD11c+ foram isoladas de baços de animais tolerantes à OVA e transferidas adotivamente para camundongos naïve, que foram subsequentemente imunizados com CII+OVA (100?g de cada antígeno). Para acompanhamento da evolução dos quadros de artrite, foram avaliados: o edema de patas, tomando-se regularmente as medidas de espessura de patas; realizadas análises histológicas dos tecidos articulares de joelhos e; conduzidas avaliações ex-vivo dos níveis séricos de anticorpos anti-CII e de respostas proliferativas e produção de citocinas de linfócitos T esplênicos. O tratamento com OVA antes da indução de CIA preveniu o desenvolvimento da artrite em todos os parâmetros analisados, enquanto que o tratamento com OVA após o estabelecimento da doença reduziu significativamente a inflamação e a produção de anticorpos anti-CII. Observamos ainda que a transferência de DCs tolerogênicas preveniu o aparecimento dos sinais clínicos da doença e o aumento dos níveis de anticorpos específicos no soro e reduziu significativamente a proliferação de linfócitos T CII-específicos. Enquanto a frequência de células CD4+CD25+Foxp3+ foi maior nas culturas de células de animais recipientes de DCs tolerogênicas, houve redução significativa na frequência de células produtoras de IFN? e IL-17. Os níveis de TGF-?, IL-4 e IL-10 foram significativamente mais elevados nas culturas de células esplênicas de animais recipientes de DCs tolerogênicas, enquanto que os de IFN-?, IL-6 e TNF-? foram mais reduzidos. Tomados em conjunto, nossos resultados indicam que a tolerância oral a um antígeno não relacionado ao próprio modifica o curso da artrite experimental em resposta ao colágeno, e que células dendríticas com perfil tolerogênico estão envolvidas nos fenômenos observados / Abstract: BALB/c mice, genetically resistant to collagen-induced arthritis (CIA), can develop a inflammatory condition resembling what is observed in susceptible strains when a non-related protein, such as ovalbumin (OVA), is associated with type II collagen (CII). Using this model, we evaluated whether oral tolerance to OVA could interfere in the immune response against CII, as well as the effect of adoptive transfer of tolerogenic dendritic cells (DCs) to arthritic mice. In order to evaluate the effect of oral tolerance over arthritis development in BALB/c mice, animals were fed with OVA in the drinking water at a 4mg/mL concentration, for seven consecutive days, before or after challenge with CII+OVA (100?g of each antigen). In order to evaluate the participation of tolerogenic DCs in the modulation of arthritis, splenic CD11c+ cells were isolated from OVA tolerant mice and adoptively transferred to naïve mice, which were subsequently immunized with CII+OVA. In order to monitor the evolution of the severity of arthritis, we evaluated paw edema, taking paw thickness regularly measured; performed histological analyses of articular knee tissues and, conducted ex-vivo evaluation of serum specific antibody levels and proliferation and cytokine secretion of splenic T lymphocytes. The treatment with OVA before CIA induction prevented the development of arthritis in all analyzed parameters, while the treatment after disease onset significantly reduced inflammation and CII-specific antibody production. We also observed that tolerogenic DC transfer prevented the appearance of clinical signs of arthritis, the increase of serum specific antibody levels and significantly reduced CII-specific T lymphocytes proliferation. While the frequency of CD4+CD25+Foxp3+ cells were higher in cell culture from tolerogenic DC recipient mice, frequency of IFN?- and IL-17- producing cells were significantly reduced. We observed that levels of TGF-?, IL-4 and IL-10 were significantly higher in cultures of splenic cells from mice recipient of tolerogenic DC, while levels of IFN-?, IL-6 and TNF-? were reduced. Taken together, our results indicate that oral tolerance to a non-related antigen modifies the course of experimental arthritis in response to collagen, and that dendritic cells with a tolerogenic profile are involved in the observed phenomena / Mestrado / Mestre em Genética e Biologia Molecular