Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Receptores adrenérgicos são amplamente expressos em diferentes tecidos, incluindo na pele. Recentemente foi descoberto que bloqueadores dos receptores β-adrenérgicos são capazes de modular o processo de reparo tecidual. O propranolol é um β-bloqueador não seletivo largamente utilizado na prática clínica para o tratamento de doenças cardiovasculares, parecendo apresentar propriedades antioxidantes. O objetivo desse estudo foi avaliar a resposta de diferentes doses de propranolol durante a lesão isquêmica cutânea em roedores. Ratos Wistar foram tratados com propranolol nas concentrações de 3 e 6 mg/kg. O grupo controle recebeu apenas o veículo e o grupo controle positivo recebeu vitamina E (50 mg/kg/dia). A administração do propranolol iniciou-se no dia da lesão, sendo realizada diariamente até o sacrifício. Incisões bilaterais foram feitas no dorso de cada animal. O flap foi suturado e foram realizadas lesões excisionais totais entre as lesões incisionais. A contração das lesões foi avaliada e os cortes histológicos foram corados com hematoxilina e eosina e vermelho de picrosirius. Foram utilizadas também as seguintes técnicas: Dopplerfluxometria, análises bioquímicas, análise estereológica e expressão de PECAM-1. O grupo tratado com 3 mg de propranolol apresentou uma maior redução na área total da lesão quando comparado ao grupo controle. Da mesma forma, este grupo apresentou um aumento na densidade de vasos sanguíneos, uma maior expressão de PECAM-1 e aumento na perfusão sanguínea na pele isquêmica e no sítio da lesão quando comparado ao grupo controle. Não observamos efeito antioxidante do propranolol neste modelo. Em resumo, nós sugerimos que o propranolol quando administrado na dose de 3 mg/kg/dia foi capaz de modular a angiogênese e melhorar o fechamento da lesão em modelo de roedores / Adrenoceptors are highly expressed in a wide variety of tissues, including skin. Recently, it was discovered that β-blockers agents are able to modulate the wound healing process. Propranolol is a nonselective β1 and β2-blocker widely used in clinical practice for treating diseases of cardiovascular system. Moreover, this drug has been shown to have antioxidant properties. The aim of this study was to evaluate the response of different propranolol doses during cutaneous ischemic wound in rodents. Wistar rats were treated with propranolol at concentrations of 3 and 6 mg/kg/day, control group received only vehicle and positive control group received vitamin E (50 mg/kg/day). Propranolol administration began on the day of injury, and was administered daily until euthanasia. Bilateral incisions were performed the dorsum of each animal. The flap was sutured and a full-thickness wound was made between the incisional lesions. Wound contraction was evaluated and sections were stained with H&E and Sirius red. Laser Doppler flowmetry, biochemical analysis, stereological analysis, and protein expression of PECAM-1 were also measured. Propranolol treated with 3 mg group showed a reduction in total wound area when compared to control group. Also, propranolol treated with 3 mg group showed an increased of density of blood vessels, highest PECAM-1 expression and highest blood perfusion in ischemic skin and in the wound bed when compared to control group. In summary, we suggest that propranolol administered at 3 mg/day was able to modulate angiogenesis and improved closure of the lesion in this rodent model

Cada vez mais a terapia fotobiomoduladora (PBMT) tem sido amplamente utilizada com o intuito de acelerar o processo de reparo tecidual, principalmente em algumas condições sistêmicas, como é o caso da Diabete Mellitus. Entretanto, ainda poucos trabalhos tem o objetivo de analisar os parâmetros dosimétricos que podem ser utilizados com o intuito de se estabelecer a melhor dose que possa ser entregue ao tecido.Com isso, o objetivo do presente trabalho foi avaliar, através de análises macroscópicas da lesão, histológicas e biomecânicas, o processo de reparo tecidual frente à terapia fotobiomoduladora, levando em consideração a dose, frequência e modo de entrega da energia.Para isso, foram utilizados 282 ratosWistar, divididos em 2 grandes grupos: diabéticos e não diabéticos. Para a indução do diabetes, foi injetado, intraperitonealmente, uma dose de 60 mg/kg de Estreptozotocina, diluída em tampão Citrato de Sódio 0,1 M, pH 4. Após 72 h da injeção, os animais permaneceram em jejum por 12 horas, e com auxílio de um glicosímetro (Accu-ChekPerforma®) a glicemia desses animais foi aferida a partir do sangue da veia caudal, para confirmar o quadro de diabetes. Os animais que apresentaram glicemia igual ou superior a 250 mg/dL de sangue foram considerados para o grupo dos animais diabéticos. No grupo não-diabético, foi injetado, da mesma maneira, apenas o veículo, na mesma dose. Após 15 dias da divisão dos animais em diabéticos e não diabéticos, os foi realizada de acordo com a dose, frequência e modo de entrega da energia, como segue:grupo controle e diabético (sem irradiação); grupos irradiados uma única vez: L1 e L1D (não diabético e diabético irradiados com 1 ponto de 10J/cm², respectivamente), L2 e L2D (não diabético e diabético irradiados com 5 pontos de 10J/cm², respectivamente), L3 e L3D (não diabético e diabético irradiados ponto central de 50J/cm², respectivamente); grupos irradiados nos dias 1, 2, 4, 6 do experimento: L4 e L4D (não diabético e diabético irradiados com1 ponto de 10J/cm², respectivamente), L5 e L5D (não diabético e diabético irradiados com 5 pontos de 10J/cm², respectivamente), L6 e L6D (não diabético e diabético irradiados com 1 ponto de 50J/cm², respectivamente). Foi utilizado o PhotonLase III-DMC®, ? 660nm, potência de 40mW. Houve acompanhamento fotográfico das lesões durante o experimento, para posterior análise macroscópica da lesão. Após 7, 10 e 14 dias, da excisão tecidual, os animais foram anestesiados, eutanasiados, e o dorso removido para análises de re-epitelização e infiltrado inflamatório através de cortes histológicos corados com hematoxilina e eosina (HE); análise da área de formação de colágeno, através da colorações com Tricrômico de Mallory; análise da imuno-expressão da citoqueratina 10 no epitélio neo-formado por imunohistoquímica, e para análise da força de tensão suportada pelo tecido imediatamente antes da sua ruptura, através de ensaios biomecânicos.Os resultados sugerem que independente da condição sistêmica do animal, os fatores dosimétricos influenciaram no tempo de reparo tecidual dos animais, onde a maior frequência de irradiação, com doses menores e mais distribuídas na lesão, acarretou em um reparo clínico mais rápido, maior expressão de citoqueratina 10 e em uma maior resistência a ruptura desse tecido. Além disso, para os animais diabéticos, novamente a maior frequência de irradiação, com doses menores e mais distribuídas no tecido, resultou em uma diminuição do processo inflamatório, possibilitando uma maior produção e remodelação de colágeno, e também em um processo de re-epitelização e maturação mais rápida do epitélio, resultando, em um reparo tecidual mais acelerado.Sendo assim, podemos concluir que uma maior frequência de irradiação e uma melhor distribuição da energia no tecido resultam em um processo de reparo tecidual,de feridas excisionais realizadas no dorso de ratos diabéticos e não diabéticos, mais rápido. / Photobiomodulation therapy (PBMT) has been widely used in order to accelerate the process of tissue repair, especially in some systemic conditions, such as Diabetes Mellitus. However, just a few studies have the objective of analyzing the dosimetric parameters that can be used in order to establish the best laser protocol that can be delivered to the tissue.Therefore, this study aimed to evaluate, through clinical, histological and biomechanical analyzes, the process of tissue repair afterPBMT, considering the dose, frequency and mode of delivery of the energy.For this, 282 Wistar rats were used, divided into 2 groups: diabetic and non-diabetic. For the induction of diabetes, a dose of 60 mg / kg of Streptozotocin, diluted in 0.1 M Sodium Citrate buffer, pH 4, was injected intraperitoneally. After 72 h of the injection, the glycemia of the fasted animals was measured, using a glucometer (Accu-Chek Performa®). Those animals presenting a glycaemia of 250 mg / dL or higher were considered diabetic animals. After 15 days of theinduction of diabetes, the animals weresubdivided according to the dose, frequency and mode of energy delivery, as follows: control group and diabetic (without irradiation); L1 and L1D (non-diabetic and diabetic irradiated with 1 point of 10J/cm², respectively), L3 and L3D (non-diabetic and diabetic irradiated with 5 points of 10J/cm², respectively). non-diabetic and diabetic irradiated central point of 50J/cm², respectively); L4 and L4D (non-diabetic and diabetic irradiated with a point of 10J/cm2, respectively), L5 and L5D (non-diabetic and diabetic irradiated with 5 points of 10J/cm2, respectively), L6 and L6D (non-diabetic and diabetic irradiated with 1 point of 50J/cm2, respectively). Photon Lase III-DMC®, ? 660nm, power of 40mW was used. There was photographic follow-up of the lesions during the experiment, for later clinical analysis.After 7, 10 and 14 days of tissue excision, the animals were anesthetized, euthanized, and the samples removed for analyzes of re-epithelialization and inflammatory infiltrate;collagen formation, cytokeratin 10 immunoexpression and analysis of the tensile strength analysis. The results suggest that, regardless of the systemic condition of the animal, the dosimetric factors influenced the tissue repair time. Higher frequency of irradiationwith lower and more distributed doses in the lesion resulted in a faster clinical repair, higher expression of cytokeratin 10 and greater tissue resistance to rupture.Furthermore, for diabetic animals, higher frequency of irradiation with lower and more distributed doses in the tissue also resulted in a decrease of inflammatory process, greater production and remodeling of collagen, better process of re-epithelization and maturation of the epithelium, resulting in a fasterwound healing process. Thus, we can conclude that a higher frequency of irradiation and a better distribution of energy in the tissue result in a faster tissue repair process.

O uso concomitante da enzima hialuronidase (H) ao anestésico local (AL) é muito utilizado para melhorar a eficácia anestésica em oftalmologia; em odontologia, no entanto, não mostrou vantagens. Um novo protocolo foi testado com o objetivo de prolongar a anestesia local sem a realização de complementação anestésica. Esta possibilidade seria especialmente interessante para pacientes que apresentam restrição de dose máxima recomendada de AL ou vasoconstritor (ex. cardiopatas). Utilizou-se cloridrato de lidocaína 2% com epinefrina para bloqueio sensitivo, motor e proprioceptivo no nervo ciático em ratos (Truant,1958). Hialuronidase 75 UTR (unidade de turbidade reduzida) foi injetada no mesmo local 30 minutos após o início da analgesia (antes do término do efeito anestésico), utilizando-se a pata contralateral como controle (injeção de solução anestésica e veículo da hialuronidase solvente). A duração do bloqueio sensitivo foi avaliada através da ausência do reflexo de retirada da pata, utilizando-se um analgesímetro. O bloqueio motor foi avaliado pela duração da claudicação e da ausência do reflexo de estiramento da pata, enquanto o bloqueio proprioceptivo foi avaliado pela perda dos reflexos de salto e do reposicionamento da pata (Thalhammer et al., 1995). Foi também estudada a alteração tecidual induzida pela hialuronidase nos períodos de 1 h, 24 h, 48 h e 72 h pós-injeção. Foram avaliados os grupos: (1) falso operado (Sham); (2) AL +H; (3) AL+ solvente (Solv) e (4) Solv+Solv. Concluiu-se que a hialuronidase prolonga a duração de ação anestésica local quando injetada isoladamente antes da regressão do bloqueio de condução do nervo ciático de rato. Em todos os grupos analisados, exceto o grupo falso-operado, observou-se reação inflamatória após as injeções. Esta inflamação foi mais acentuada no grupo hialuronidase, que mostrava sinais de regressão após 72 horas. É possível que o mecanismo de ação da hialuronidase envolva a desorganização do tecido conjuntivo na região da injeção, facilitando a difusão da solução anestésica residual até o nervo. / The concomitant use of the enzyme hyaluronidase (H) and local anesthetics (LA) is widely employed in ophthalmology in order to improve the effectiveness of anesthesia; in dentistry, however, this association did not seem advantageous. A new protocol was tested with the aim of drawing out local anesthesia without supplementary anesthesia. This possibility is especially interesting for patients with restriction of maximum recommended dose of LA or vasoconstrictor due to pathological conditions (e.g. heart disease). We used 2% lidocaine hydrochloride with epinephrine for sensitive, motor and proprioceptive blockade of the sciatic nerve in rats (Truant, 1958). Hyaluronidase 75 UTR was injected 30 minutes after the beginning of the anesthesia (before the recovery of the sensory function), using the contralateral limb as control (injection of LA plus the H vehicle solvent). The duration of the sensitive blockade was evaluated through the absence of the paw withdrawal reflex, using an analgesymeter. The motor blockade was evaluated by the duration of claudication (complete absence of extensor postural thrust) and by the absence of the paw stretching reflex, while the proprioceptive blockade was evaluated by the absence of hopping and tactile placing response (Thalhammer et al., 1995). Histological changes induced by H were analyzed 1h, 24h, 48h, and 72 h after the injection in the following groups: (1) Sham; (2) LA + H; (3) LA + H solvent (solv) and (4) Solv + Solv. We concluded that H draws out local anesthesia when injected before the recovery of the sciatic nerve blockade in the rat. In all groups studied, with the exception of the Sham, there was an inflammatory reaction after the injections. Inflammation was more intense after H injection, showing signs of regression after 72 hours. It is possible that the mechanism of action of H involves disorganization of the connective tissue, thus facilitating the diffusion of the residual anesthetic solution to the nerve.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:29:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 422015.pdf: 1602565 bytes, checksum: 324d0d02a035f3dd359f6b20951663de (MD5) Previous issue date: 2009-06-30 / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da administra??o di?ria de 7,5 mg/Kg de isotretino?na por via oral, para o tratamento de acne vulgar c?stica sobre o reparo alveolar ap?s exodontia de incisivos superiores, em ratos. Foram utilizados 32 ratos machos (Wistar), com idade m?dia de 60 dias que foram distribu?dos em grupo Controle (12 ratos) e grupo Experimental (20 ratos). Cada grupo foi dividido em quatro subgrupos de acordo com os per?odos de observa??o em 7, 21, 28 e 90 dias ap?s a extra??o. Os animais do grupo experimental receberam doses di?rias de isotretino?na por um per?odo de 30 dias antes da cirurgia. Ap?s este per?odo, foram realizadas as extra??es e os animais continuaram a receber a medica??o at? os respectivos dias das eutan?sias. Os animais do grupo experimental foram submetidos ? coleta de sangue perif?rico atrav?s do plexo venoso orbital para an?lise do n?vel s?rico de c?lcio antes de iniciarem uso da medica??o e no dia da eutan?sia. As pe?as operat?rias obtidas (hemimaxila direita) foram processadas, submetidas aos cortes histol?gicos de 6μm de espessura, e coradas em HE. As l?minas histol?gicas foram analisadas de forma descritiva sob microscopia de luz. Os resultados mostraram que houve uma acelera??o no processo de reparo alveolar no grupo experimental, em todos os per?odos (7, 21, 28 e 90 dias), quando comparados aos seus respectivos grupos controles. O n?vel s?rico de c?lcio teve uma diminui??o estatisticamente significativa entre a 1? e a 2? coleta de sangue nos grupos de 21, 28 e 90 dias. Com base nos resultados, foi poss?vel concluir que os animais do grupo experimental mostraram uma cicatriza??o alveolar mais acelerada do que os animais do grupo controle, indicando que a ingest?o di?ria de isotretino?na em dose correspondente para o tratamento de acne c?stica acelerou o reparo alveolar.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 439805.pdf: 542604 bytes, checksum: 5c5d56597cb3b5dc318352b30ee763e4 (MD5) Previous issue date: 2012-05-15 / Objectives: This study aims to verify whether the red and infrared lasers can interfere with the healing process of wounds located at the point of application and at distance. Matherials and methods: Three circular wounds were conducted, one in the cranial region, another one in the medial region and a third one in the caudal region on the dorsum of rats. For this experimental study 45 animals, divided into three groups, were investigated: in 15 animals any kind of laser was applied; in 15 animals infrared laser was used; and in 15 animals red laser was used. The observation period was three, five, and seven days. Thus, each group was divided into three subgroups (A, B, C) in accordance with the observation period. For groups II and III the amount of energy during the irradiation was 8J/cm2 after the surgery and every 48 hours, totalizing, depending on the time of death of the animal (three, five or seven days), two, three or four irradiations. Results: We found presence of edema in the early stages and We found no statistical significance when we compared the reduction percentual of the healed wounds. Conclusions: Phototherapy by low power infrared laser showed a positive biomodulatory effect in the early periods of healing and repair of wounds in the back of rats. The therapy by low power red laser presented, in the initial periods analyzed, higher acute inflammation process, which may be due to a shorter wavelength that affects the upper layers of the wound. / Objetivos: Este estudo tem por objetivo verificar o efeito biomodulat?rio pelos lasers vermelho e infravermelho interferem no processo cicatricial de ferimentos localizados no ponto de aplica??o e a dist?ncia deste. Materiais e M?todos:Foram realizados tr?s ferimentos circulares, sendo um na regi?o cranial, um na regi?o medial e um na regi?o caudal em dorso de ratos. Para este estudo experimental foram analisados 45 animais divididos em tr?s grupos, onde 15 animais n?o foram aplicados nenhum tipo de laser (GrupoI), 15 animais foram aplicados laser infravermelho (Grupo II) e 15 animais laser vermelho(Grupo III). O per?odo de observa??o foi de tr?s, cinco e sete dias. Assim, cada grupo foi subdividido em tr?s subgrupos (A; B; C), de acordo com per?odo de observa??o. Para os grupos II e III a dose de energia, durante as irradia??es foi de 8J/cm2 ap?s o t?rmino da cirurgia e a cada 48 horas, totalizando, na depend?ncia da ?poca da morte do animal (tr?s, cinco ou sete dias), duas, tr?s ou quatro irradia??es. Resultados: Houve maior presen?a de edema e processo inflamat?rio agudo nos primeiros dias avaliados e quantitativamente n?o houve diferen?a estatisticamente significante no percentual de redu??o das feridas intra e inter-grupos. Conclus?es: A fototerapia por laser de baixa pot?ncia infravermelha apresentou um efeito biomodulat?rio positivo nos per?odos iniciais de cicatriza??o e reparo em feridas no dorso de ratos. A fototerapia por laser de baixa pot?ncia vermelha apresentou, nos per?odos iniciais analisados, maior processo inflamat?rio agudo, o que pode ser devido ao menor comprimento de onda que atinge as camadas mais superficiais da ferida.

Lipoxina A4 (LXA4) é um eicosanoide derivado do metabolismo do ácido araquidônico pelas lipoxigenases (5, 12 e 15-LO), tendo propriedades antiinflamatórias e pró-resolução. A estratégia de uso de LXA4 encapsulada em micropartículas de PLGA como fármaco tem fundamento nas propriedades que tais polímeros têm de preservar as atividades biológicas de moléculas diversas, como dos lipídeos, e promover liberação prolongada e sustentada das mesmas. No presente estudo, tivemos como hipótese de trabalho que a encapsulação de LXA4 em micropartículas de PLGA (LXA4-MS) preserva suas atividades biológicas, e mais eficientemente, acelera o fechamento de úlceras induzidas na pele de ratos. Para tanto, um modelo de úlceras cutâneas na região dorsal de ratos foi utilizado. As LXA4-MS foram fixadas em pele com adesivo biológico de fibrina, e seus efeitos comparados com aqueles induzidos por micropartículas vazias (Un-MS), LXA4 solúvel ou veículo (PBS). Nossos resultados mostraram que LXA4-MS aceleram a cicatrização da ferida, pois no 7º dia após a lesão, reduziu em 80% o diâmetro da úlcera inicial, enquanto no mesmo período, nas úlceras tratadas com LXA4 solúvel, Un-MS ou veículo ocorreu diminuição de somente 60%, 45% e 39%, respectivamente. O aumento do índice de cicatrização induzido pelo tratamento das úlceras com LXA4-MS foi acompanhado pela diminuição das citocinas pró-inflamatórias IL- 1?, TNF-?, e aumento de TGF- ?, uma citocina antiinflamatória indutora da deposição de colágeno. Além disso, nas úlceras tratadas com LXA4-MS o infiltrado inflamatório foi reduzido no tecido de cicatrização, como demonstrado pela diminuição de infiltrado celular, de MPO e de mRNA da metaloproteinase MMP8. Por outro lado, LXA4-MS induziu aumento da deposição de colágeno e do número de vasos sanguíneos, de NAG e de IL-4, quando comparado com os demais tratamentos. Quando as úlceras foram tratadas concomitantemente com LXA4-MS e o antagonista do receptor de LXA4 (ciclosporina H), observamos reversão de cerca de 50% no índice de cicatrização promovido pelo mediador encapsulado, sugerindo que os efeitos tópicos do tratamento com LXA4 são devidos à sua interação com seu receptor específico. Nossos resultados sugerem que novas formulações farmacêuticas para tratamento de úlceras cutâneas poderão ser obtidas com LXA4-MS. / Lipoxin A4 (LXA4) is an eicosanoid derived from the metabolism of arachidonic acid by lipoxygenases (5, 12, and 15-LO), having anti-inflammatory and pro-resolution properties. The strategy of using LXA4 encapsulated in PLGA microparticles as drug is due to some properties that such polymers have to preserve the biological activity of several molecules such as lipids, and promote a prolonged and sustained release of these molecules. In the present study, we hypothesized that the encapsulation of LXA4 in PLGA microparticles (LXA4-MS) preserves its biological activities, and more efficiently accelerates the closing of ulcers induced in the skin of rats. Thus, a model for cutaneous ulcers in the dorsal region of rats was used. The LXA4-MS were fixed in skin using biological adhesive of fibrin, and their effects compared to those induced by empty microparticles (Un-MS), soluble LXA4 or vehicleOur results showed that LXA4-MS accelerate wound healing, once on day 7 after injury, reduced by 80% the diameter of the initial ulcer, while at the same time, the ulcers treated with soluble LXA4, Un-MS or vehicle was decreased of only 60%, 45% and 39%, respectively. The increased healing rate of ulcers induced by treatment with LXA4-MS was accompanied by the decrease of pro-inflammatory cytokines IL-1?, TNF-?, and a TGF-? increasing, an anti-inflammatory cytokine-inducing collagen deposition. In addition, the inflammatory infiltrate was reduced in scar tissue as demonstrated by the decrease of neutrophils, MPO and MMP8 metalloproteinase mRNA. Moreover, LXA4-MS induced increase in collagen deposition and the number of blood vessels when compared with the other controls. When the ulcers were treated concomitantly with LXA4-MS and the antagonist LXA4 receptor (ALX), cyclosporine H, we observed the reversal of about 50% in healing rates promoted by the encapsulated agent, suggesting that topical treatment effects of LXA4 are due to interaction with its own receptor. Our results suggest that new pharmaceutical formulations for the treatment of skin ulcers can be obtained with LXA4-MS.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A aplicação tópica do hidrogel Pluronic F-127 (poli(óxido de etileno)99-poli(óxido de propileno)65-poli(óxido de etileno)99, PEO99-PPO65-PEO99) contendo um doador de óxido nítrico, a S-nitrosoglutationa (GSNO) é conhecida por exercer efeitos benéficos no reparo tecidual cutâneo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da aplicação tópica do hidrogel Pulronic F-127 contendo um doador de óxido nítrico no reparo tecidual de lesões isquêmicas. Ratos Wistar machos foram submetidos a duas lesões incisionais paralelas no dorso, a pele foi separada do tecido subjacente, as incisões foram suturadas e uma lesão excisional foi feita entre elas para criar uma condição isquêmica ao redor da lesão. Os animais foram separados em grupo controle, que recebeu a aplicação apenas do hidrogel sem doador de óxido nítrico e grupo tratado, que recebeu a aplicação do hidrogel contendo o doador de óxido nítrico. Os animais foram tratados por 7 dias consecutivos com uma aplicação diária dos hidrogéis. O grupo tratado apresentou taxas mais altas de contração e re-epitelização, menor quantidade de células inflamatórias, um aumento na densidade e organização de fibras colágenas e uma diminuição na neovascularização 14 dias após a lesão, comparado ao grupo controle. Esses resultados indicam que a aplicação tópica do gel doador de óxido nítrico é eficaz no tratamento de lesões isquêmicas em ratos, levando a uma melhora significativa na cicatrização. Consequentemente, a aplicação tópica de um hidrogel contendo doador de óxido nítrico poderá ter, futuramente, potencial para o tratamento terapêutico de úlceras venosas e decorrentes de diabetes. / Topical application of Pluronic F-127 hydrogel (poly(ethylene oxide)99-poly(propylene oxide)65-poly(ethylene oxide)99, PEO99-PPO65-PEO99) containing the NO donor S-nitrosoglutathione (GSNO) is known to exert beneficial effects on cutaneous wound healing. The aim of this study was to evaluate the effect of topical application of GSNO on the healing of ischemic wounds. Wistar rats were submitted to two parallels incisions on their back, the skin was separated from the underlying tissue, the incisions were sutured and an excisional wound was done between the parallel incisions to create an ischemic condition surrounding the wound. The animals were separated into a control group, which received a hydrogel vehicle without GSNO and a GSNO-treated group, which received a GSNO-containing hydrogel. The animals were treated for 7 days consecutively with daily application. The GSNO-treated group displayed higher rates of wound contraction and re-epithelization, lower amount of inflammatory cells, an increase in collagen fiber density and organization and a decrease in the neovascularization 14 days after wounding, compared to control. These results show that topical application of GSNO is effective in the treatment of ischemic wounds, leading to a significant improvement in the wound healing. Therefore, in the future, topical GSNO-containing hydrogel will have potential for the therapeutic treatment of ischemic diabetic and venous ulcers.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-05-22T15:50:32Z No. of bitstreams: 1 Carine Machado Azevedo. Células derivadas...2013.pdf: 3773108 bytes, checksum: 06792c88bd29e905b54c5a3d77de8db6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-22T15:50:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carine Machado Azevedo. Células derivadas...2013.pdf: 3773108 bytes, checksum: 06792c88bd29e905b54c5a3d77de8db6 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A contribuição das células de medula óssea na regeneração de tecidos não hematopoiéticos tem sido intensamente investigada desde a descoberta de células-tronco multipotentes neste órgão. Estudos prévios tem demonstrado que células derivadas da medula óssea podem contribuir para a formação de novos hepatócitos e cardiomiócitos. No presente estudo avaliamos a participação endógena das células-tronco de medula óssea no processo de reparo de lesões teciduais na fase crônica da doença de Chagas e esquistossomose experimentalmente induzidas. Para isso, camundongos quiméricos de medula óssea foram gerados após irradiação com dose letal e posterior reconstituição com células de medula óssea provenientes de camundongos transgênicos para a proteína fluorescente verde (GFP). Um mês após a reconstituição, as quimeras foram infectadas pelo T. cruzi ou S. mansoni. Animais quiméricos saudáveis foram mantidos como controles. Camundongos foram eutanasiados em diferentes períodos para análise morfológica, morfométrica e de marcadores específicos através de imunofluorescência do coração e músculo esquelético ou fígado de acordo com o grupo. As infecções por S. mansoni e T. cruzi causaram a mobilização de diferentes populações celulares para o sangue periférico, tais como monócitos, células-tronco hematopoiéticas e mesenquimais e progenitores endoteliais. Nos dois modelos estudados, observamos um aumento no número de células GFP+ após estímulo lesivo nos tecidos analisados. No modelo de doença de Chagas, há um aumento da expressão de MCP-1, 2 e 3 e SDF-1 no coração e músculo esquelético em comparação com animais não infectados, o que pode contribuir para o recrutamento destas células. As células GFP+ contribuem tanto para a formação da lesão, compondo o infiltrado inflamatório, como para a regeneração tecidual através da formação de miofibras, cardiomiócitos, hepatócitos e vasos sanguíneos. As poucas células GFP+ encontradas nos tecidos de camundongos quimeras normais não possuíam morfologia de células parenquimatosas. Concluímos que a medula óssea pode contribuir para a regeneração dos tecidos lesados através de células-tronco ou progenitores que originam células dos músculos cardíaco e esquelético, hepatócitos e vasos sangüíneos. / The contribution of bone marrow cells in non-hematopoietic tissue regeneration has been intensely investigated since the discovery of multipotent stem cells in this organ. Previous studies have shown that bone marrow derived cells may contribute to the formation of new hepatocytes and cardiomyocytes. In the present study, we evaluated the participation of endogenous bone marrow stem cells in the repair of tissue injury in experimentally induced chronic phases of Chagas disease and schistosomiasis. For this purpose, chimeric mice were generated from bone marrow after a lethal irradiation dose and subsequent reconstitution with bone marrow cells from green fluorescent protein (GFP) transgenic mice. A month after reconstitution, chimeras were either infected with Trypanosoma cruzi or Schistosoma mansoni, or kept healthy as controls. Mice were euthanized at different time points for histological, morphometric and specific markers by immunofluorescence analysis in heart and skeletal muscle or in the liver, according to the group. Infections caused by S. mansoni and T. cruzi resulted in the mobilization of different cell populations to the peripheral blood, including monocytes, hematopoietic and mesenchymal stem cells, and endothelial progenitors. In the two models studied, we observed an increase in the number of GFP+ cells after injury stimulus in the tissues analyzed. In the model of Chagas disease, there is an increased expression of MCP-1, 2, 3 and SDF-1 in heart and skeletal muscle compared to uninfected animals, which can contribute to the recruitment of these cells. The GFP+ cells both contribute to lesion formation, comprised of inflammatory infiltrate, as well as tissue regeneration by forming myofibers, cardiomyocytes, hepatocytes and blood vessels. The few GFP+ cells found in control chimera mice tissue lacked parenchymal cell morphology. We concluded that bone marrow may contribute to the regeneration of injured tissues through stem or progenitor cells, which gives rise cardiac and skeletal muscle cells, hepatocytes and blood vessels.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A aplicação tópica de doadores de óxido nítrico é conhecida pelos seus efeitos benéficos no reparo tecidual cutâneo. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da associação de biomateriais com doadores de óxido nítrico no reparo tecidual cutâneo de camundongos. Camundongos swiss machos foram submetidos a lesões excisionais por punch de biópsia de 8 mm no dorso. Os animais foram separados em 4 grupos (n=6 em cada grupo) de acordo com a aplicação do curativo de polivinil álcool e hidrogel sobre a lesão de punch: a) grupo polivinil álcool com grupos tiol e Pluronic F-127 (PVA-SH/F127) - tratado com hidrogel sem S- nitrosoglutationa (GSNO) e filme sem óxido nítrico; b) grupo polivinil álcool S-nitrosado (PVA-SNO/F127-GSNO) - tratado com hidrogel contendo GSNO e filme com óxido nítrico; c) grupo PVA-SNO - tratado apenas com filme óxido nítrico e d) grupo PVA-SNO/ F127 - tratado com hidrogel sem GSNO e filme com óxido nítrico. Os animais foram tratados por 7 dias consecutivos com aplicação diária de curativos com seus respectivos biomateriais. Após 7 dias de tratamento, foram retirados os curativos e as lesões foram deixadas cicatrizar por segunda intenção. O grupo tratado com filme de PVA-SNO (d) associado ao hidrogel F127, comparado com os demais grupos descritos acima, apresentou melhora no reparo tecidual, melhora da contração da lesão, diminuição do gap epitelial e densidade celular, aceleração da fase inflamatória, aumento da diferenciação miofibroblástica e aumento da expressão de colágeno do tipo III (p<0,05, ao menos). Com base nesses dados, a combinação de filmes PVA liberadores de óxido nítrico com F-127 pode representar uma nova abordagem para o tratamento de lesões cutâneas. / Topical application of nitric oxide donors is known for its beneficial effects on skin tissue repair. The objective of this study was to evaluate the effects of biomaterials association with nitric oxide donors in skin tissue repair in mice. Males swiss mice underwent excisional lesion 8 mm biopsy punch on the back. The animals were separated in 4 groups (n=6 in each group) in according with dressing application of polyvinyl alcohol and hydrogel on punch lesion: a) poly (vynil alcohol) with thiol groups and Pluronic F-127 hydrogels (PVA-SH/F127) group - treated with hydrogel without S- nitrosoglutathione (GSNO) and film without nitric oxide; b) poly(vinyl alcohol) S-nitrosated (PVA-SNO/F127-GSNO) group - treated with hydrogel with GSNO and film with nitric oxide; c) PVA-SNO group - treated only with film containing nitric oxide and d) PVA-SNO/ F127 group - treated with hydrogel without GSNO and film with nitric oxide. The animals were treated for 7 consecutive days with daily application of dressings to the respective biomaterial. After 7 days of treatment, the dressings were removed and the lesions were allowed to heal by second intention. The group treated with PVA-SNO film associated with the hydrogel F127 (d), compared with the other groups described above, showed improvement in tissue repair, enhancing wound contraction, decreased wound gap and cellular density, acceleration of the inflammatory phase, increased myofibroblast differentiation and increased expression of collagen type III (p<0,05, at least). Based on these data, the combination of PVA films releasing nitric oxide with F-127 may represent a new approach treatment of cutaneous lesions.

Orientador: Prof. Dr. Jean Jacques Bonvent / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2015. / Arcaboucos polimericos sao de interesse crescente no campo da engenharia de tecidos. Alguns biopolimeros tais como PLLA -poli (acido latico) e PCL . poli(¿Ã- caprolactona) tem sido amplamente utilizados na composicao destes arcaboucos devido a sua biocompatibilidade, biodegradabilidade e baixa toxicidade. Alem disso, estes biomateriais precisam ter uma boa adesao celular e proliferacao para serem eficazes na reparacao de tecidos. A fim de evitar a invasao de microorganismos, durante o processo de cicatrizacao, e importante a incorporacao de um agente antimicrobiano, para servir como uma barreira protetora e prevenir a infeccao no local da lesao. Tres tipos de arcaboucos foram desenvolvidos a base de PLLA e PCL, e da blenda PCL/PLA - 50/50. A porosidade das membranas de biopolimero foi controlada pela incorporacao de particulas de cloreto de sodio com determinada faixa de tamanho, como agente porogenico, na solucao polimerica, a qual foi, em seguida, removido apos a evaporacao do solvente, por imersao da membrana para a agua para dissolver o sal. A tetraciclina tem sido incorporados a membrana como um agente antibiotico. A morfologia da membrana, estrutura molecular e incorporacao da tetraciclina foram analisados por microscopia eletronica de varredura (MEV), FTIR e microscopia de fluorescencia. A cinetica de libertacao do farmaco foi investigadam atraves da monitorizacao da concentracao de tetraciclina difundida em solucao de PBS (pH 7,4), por meio de espectroscopia de UV-VIS. Os dados experimentais mostraram que a uma porosidade de cerca de 69% foi obtida. A incorporacao de tetraciclina mostrou ser bastante eficaz e uniforme nos arcaboucos, contudo observa-se melhores resultados no caso de PCL puro. A cinetica de libertacao do farmaco e de primeira ordem para arcaboucos com PLA e PCL, puros. No entanto, no caso da blenda, o processo de libertacao do farmaco nao segue nenhum modelo cinetico estabelecido. Tais resultados sugerem que estes suportes de biopolimero podem ser eficazmente produzida com caracteristicas porosas e com a incorporacao de antibioticos, a fim de promover uma libertacao controlada da droga para o processo de reparo tecidual. / Polymeric scaffolds are of growing interest in the field of tissue engineering . Some biopolymers such as PLA - poly lactic acid and PCL - polycaprolactone have been widely used in the composition of these scaffolds due to their biocompatibility, biodegradability and low toxicity. In addition, these biomaterials need to have a good cell adhesion and proliferation to be effective in tissue repair. Furthermore, the formation of pores in the scaffolds is directly related to a better adhesion of material to the cells. In order to avoid microorganism invasion that during the healing process it is important to incorporate an antimicrobial such as tetracycline, to serve as a protective barrier and prevents infection at the site of the injury. Three types of scaffolds were develop, based on PCL, and their blend 50/50, by means of casting process. The porosity of the biopolymer membranes was controlled achieved by the incorporation of sodium chloride particles of given size, as a porogene agent, into the polymer solution, which was then removed after the solvent evaporation by immersion of the membrane into water to dissolve the salt. Tetracycline has been incorporated into to the membrane as an antibiotic agent. The membrane morphology, molecular structure e incorporation of the tetracycline were analyzed by Scanning Electron Microscopy (SEM), FTIR and Fluorescence Microscopy. The drug release kinetic was investigated by monitoring the concentration of tetracycline that diffused to a PBS solution (pH 7.4), by means of uv-vis spectroscopy. The experimental data showed that a medium porosity, of about 69%, could be reached. The incorporation of tetracycline was found to be quite effective and uniform into the scaffolds, tending to lead to better results in the case of pure PCL. The drug release kinetic is of first order for the pure PLA and PCL scaffold. Nevertheless, in the case of the blend, any of the usual kinetic model could describe the drug release process.Such results suggested these biopolymer scaffolds could be effectively produced with porous characteristics and with incorporation of antibiotics in order to promote a controlled drug liberation for wound healing process.