O presente estudo objetivou avaliar o comportamento ingestivo de equinos em pastagem natural. O experimento foi realizado no município de Sant’Ana do Livramento/RS, na região fisiográfica do Bioma Pampa, realizado durante o período de março a abril de 2013 na CabanhaYvituhatã.Oexperimento foi realizado em três potreiros de campo nativo, com medições das variáveis do pasto no início, no meio e no fim do experimento, emárea habitada por ovinos, bovinos e equinos. Foi utilizado três potreiros, ondeobservou-se os animais agrupados por manadas, fora da temporada reprodutiva, durante 12 horas diárias, com duas repetições por animal por potreiro, sendo estes animais compostos portrês garanhões, três éguas com potro de um mês e outras três éguas com potro de três meses. Dois observadores fizeram as coletas de simulações de bocados dos animais por potreiro observado, com medições das medidas do pasto com stick realizandoregistros comportamentais a cada cinco minutos das suas respectivas atividades, analisou-seo tempo diário dos animais pastejando nos estratos baixo, médio e alto do pasto. Também se registrou o deslocamento dos animais,seu tempo em ócio, tempo no cocho de sal e noconsumo de água. Não houve diferenças significativas entre as distintas categorias no tempo dedicado ao pastejo. Os animais tiveram preferência por pasto de melhor qualidade nutricional. Os potros, de um mês e de três meses, mamavam com a mesma intensidade. Não foram observadas diferenças entre as categorias animais, com relação a taxa de bocados por minuto. / The present study aimed to evaluate the ingestive behavior of horses under native grassland. The experiment was conducted in Santana do Livramento/RS, in the physiography region of biome Pampa, conducted during the period of March-April 2013 in the Cabanha Yvituhatã. The experiment was conducted in three paddocks of native grassland, with measurement of the variables of the pasture at the beginning, middle and end of the experiment in area inhabited by sheep, cattle and horses. Three paddocks were utilized, where the animals were observed in herd, out of reproduction time, during 12 hours daily, with two replicates for each animal and each paddock, being these animals composed of three stallions, three mares with foal of a month and three other mares with foal of three months. Two observers did the collect that simulates the animals bite in each paddock observed, measuring the pasture with stick and making registers of the animal behavior every 5 minutes. The daily time of animal grazing in low, médium and high extract was analyzed. It was also observed the animals steps, idling time, time in the trough of salt and the water consumption. There were no significant differences in the grazing time between the distinct categories of animals. The animals had preference for pasture of better nutritional quality. The foals, of 1 month and 3 months, suckled with the same intensity. No differences between animal categories were observed when the rate of bites per minute was compared.

O objetivo deste trabalho foi verificar a presença e a localização de receptores para hormônios esteróides e gonadotróficos, através da técnica de imunohistoquímica, pelo método de peroxidase-antiperoxidase (PAP), nos diferentes tecidos que compõe o trato genital da égua e a variação de reatividade destes receptores durante o ciclo estral e no anestro fisiológico. Também se objetivou verificar se há diferença de reatividade em éguas com e sem endometrose. Foram coletadas amostras de útero, cérvice e oviduto, de 41 éguas sem raça definida e com histórico reprodutivo desconhecido, em um abatedouro. Quinze éguas se encontravam em estro, dezoito em diestro e oito éguas em anestro. Concluiu-se que a intensidade e a distribuição da coloração para os receptores de estrógeno (RE), progesterona (RP) e hormônio luteinizante (RLH) variaram de acordo com o tipo de célula e o estágio do ciclo estral. Nas amostras de endométrio observou-se imunorreatividade alta no epitélio luminal para RE e RP tanto no estro quanto no diestro; o epitélio glandular, estroma e miométrio mostraram reatividade moderada para os dois receptores durante as duas fases. Durante o anestro os resultados foram semelhantes aos encontrados durante a fase cíclica. Na avaliação da reatividade para RLH, durante o estro e diestro, o epitélio luminal mostrou reatividade de fraca a moderada, mas no diestro houve maior reatividade média. O epitélio glandular apresentou menor reatividade do que o luminal. No miométrio a coloração foi fraca durante todo o ciclo. Durante o anestro a reatividade foi fraca no epitélio luminal, ausente em quase todas as amostras no epitélio glandular e de fraca a ausente no miométrio. Neste experimento, não foi observada diferença significativa de reatividade entre os endométrios com e sem endometrose, mas as áreas afetadas mostraram coloração assíncrona para RE, RP e RLH. Na cérvice, foi observada imunorreatividade moderada a alta para RE e RP no epitélio luminal, no estroma e no músculo. A intensidade de coloração das células epiteliais e musculares variou pouco entre o estro e o diestro, mas durante o anestro houve maior reatividade no tecido muscular e no estroma. Foi observada reatividade para RLH no epitélio e camada muscular, sem variação significativa nas fases do ciclo. A intensidade de coloração foi de fraca a moderada no epitélio e fraca na camada muscular. No oviduto, observou-se imunorreatividade para RE e RP nos três tecidos, durante a fase cíclica e o anestro. No epitélio, os valores encontrados foram de moderados a altos, sem variação significativa nas três fases. A coloração das células epiteliais do oviduto foi nitidamente irregular, com o núcleo muito corado no que parecem ser células secretoras e pouco corado ou sem coloração nas células ciliadas, refletindo provavelmente as diferentes funções das células epiteliais neste órgão. No estroma a reatividade foi moderada durante a fase luteal, mostrando reatividade mais alta no estro e no anestro. A camada muscular apresentou reatividade máxima para RE no estro e no diestro. A reatividade para RLH no epitélio luminal foi de fraca a moderada durante todo o ciclo. No músculo também foi observada reatividade, porém bem mais fraca do que no epitélio. Durante o anestro somente três das oito amostras apresentaram reatividade no tecido muscular. No diestro foi observada maior reatividade do que no estro. Os resultados do presente estudo evidenciam, pela primeira vez, a presença de receptores para LH nos diferentes tecidos do trato reprodutor extragonadal da égua. Embora existam relatos da expressão e localização de RE e RP no endométrio equino, esta é a primeira vez que se utiliza a técnica de imunohistoquímica para localizar estes receptores na cérvice e no oviduto desta espécie. Foi observada variação individual bastante acentuada entre as amostras, em uma mesma fase cíclica. Provavelmente estes resultados sejam o reflexo da variação entre o dia do ciclo em que os animais se encontravam, bem como da complexidade dos mecanismos envolvidos na presença desses receptores. Os achados deste estudo indicam que tanto os hormônios gonadais quanto o LH atuam por meio de seus receptores nos diferentes tecidos do trato reprodutivo da égua, podendo servir para a elaboração de novas estratégias para melhorar a eficiência reprodutiva nesta espécie. / The aim of this study was to demonstrate the presence and localization of gonadotropic and steroid hormone receptors, in different tissues of the mare genital tract and the different reactivity to these receptors during the endometrial cycle and physiologic anestrus. Another objective was to compare the reactivity to theses receptors in mares with and without endometrosis. Immunohistochemistry was performed using the peroxidase anti-peroxidase technique (PAP). Uterus, cervix and oviduct of 41 criollo mares were collected in an abattoir. There was variation in the intensity of the staining and distribution for estrogen receptors (PR), progesterone receptors (PR) and luteinizing hormone receptors (LHR) with the endometrial cycle and different tissues. The endometrial surface epithelial cells were stained strongly for ER and PR in the estrous and dioestrus; glandular epithelial cells, stromal cells and smooth muscle cells of the myometrium had moderate staining for ER and PR during these two phases and in anestrus too. The immunoreactive score for LHR in the surface epithelial cells during endometrial cycle was weak to moderate but, in general, strong staining was observed in dioestrus. More weak staining intensity was observed in the glandular epithelial cells than luminal epithelial cells. Smooth muscle cells of the myometrium showed weak staining for LHR throughout the endometrial cycle. During the anestrus, the immunoreactivity score was weak in the surface epithelial cells. In general, the glandular epithelium was not stained. Myometrium cells were weak to not staining for LHR, in this phase. In this study there was no significant difference in immunoreactive score for ER, PR and LHR in endometrium with or without endometrosis but fibrotic glands showed different expression patterns of ER, PR and LHR, could evidence for functionally glandular maldifferentiation in endometrosis. The cervical epithelial surface, stromal cells and smooth muscle cells were moderate to strongly staining for ER and PR, with little variation throughout the endometrial cycle but the immunorectivity was strongest during the anestrus in muscular and stromal cells. Surface epithelial cells of cervix were weak to moderate stained for LHR; smooth muscle cells showed weak staining for these receptors. There was no variation during cycle. In the oviduct, epithelial, stromal and muscle cells showed reactivity for RE and RP, during cycle and anestrus. Epithelial cells were moderate to strongly staining for these receptors, with evident irregularity in different types of cells. Apparently ciliated epithelial cells were stained but the intensity was much less than that observed in nonciliated epithelial cells, probably reflecting different functions of these cells. Stromal cells showed moderate staining during dioestrus and strongest reactivity in estrous and anestrus; muscle cells showed strong reactivity for ER throughout the cycle. The reactivity for LHR was weak to moderate throughout the cycle in the epithelial cells and weak in the muscle cells. During anestrus only three strains of muscle cells showed reactivity for LHR. In dioestrus the intensity was strongest. These findings evidence for the firs time the presence for LHR in extra-gonadal reproductive organs of mare. Though there were reports of ER and PR expression in equine endometrium, this is the first report of localization of these receptors in cervix and oviduct of mare using immunohistochemistry. It was found marked individual variation among the strains. These results probably were caused by the variation among the day of cycle and the complexity of mechanisms involved in the presence of these receptors. The findings of the present study allow us to infer that the ovarian steroid hormones nad LH function through their receptors in different tissues of mare reproductive tract, can help us to elaborate new strategies to improve the reproductive efficiency in this specie.

O objetivo deste trabalho foi avaliar as informações relativas á idade aspectos físicos, como condição corporal (CC), peso corporal (PC), peso do testículo esquerdo (PTE) e direito (PTD), volume testicular (VT), largura testicular esquerdo (LAR), comprimento testícular (COMP), altura testicular (ALT), assim como concentração plasmática de testosterona (TES), além da presença de espermatozóides nos túbulos seminíferos (ETS), para analisar possíveis correlações entre estas variáveis em garanhões da raça Crioula. Por outro lado, realizou-se uma avaliação histológica quanto a presença ou ausência de espermatozóides nos túbulos seminíferos em diferentes idades como também os níveis séricos de testosterona. Estas avaliações foram correlacionadas entre si e foi avaliadas as médias das variáveis por grupo de idades que variaram de 1 a 4 anos. Foram utilizados 70 animais de diferentes regiões do Rio Grande do Sul. A CC média no momento da orquiectomia foi de 3,37, enquanto o PC encontrado foi de 322,53+/-63,79 kg. Quanto ao testículo esquerdo com o epidídimo, o PT médio foi 122,83+/-72,88 g, após a remoção do epidídimo houve uma redução no peso para de 87,77+/-59,74g. O VT foi de 57,89+/-31,19 mL. A LAR encontrada 37,19+/-12,40 mm ao passo que o COMP foi de 67,81+-17,34 mm e a ALT foi de 37,29+/-11,50 mm. Em relação ao testículo direito, com a presença do epidídimo, foi verificado o seguinte peso médio:105,52g+-71,51g. Após a remoção do epidídimo, para o PT, encontrou-se 76,21+-64,99g, VT 51,42+-4,11mL, a LAR foi de 34,97+-13,25mm, COMP foi de 63,94+-19,45mm e a ALT 34,50+-12,21mm. A concentração média de TES dosada foi de 98,25 +/- 122,87 ng/ml de plasma. Em 77,14% dos 35 cortes histológicos realizados, foram encontrados espermatozóides na luz dos túbulos seminíferos. / The aim this study was to evaluate age and physical aspects, such body condition (CC), body weight (PC), left testicle weight (PTE), right testicle weight (PTD), testicular volume (VT), testicular width (LAR) testicular length (COMP), testicular height (ALT) and plasma testosterone levels (TES), and the presence of spermatozoa in the seminiferous tubules (ETS) related information, to analyze possible correlations between these variables in stallions from the Crioulo breed. Moreover, the histological evaluation was made for the presence of spermatozoa in the seminiferous tubules in ages different and plasma testosterone levels. These evaluations were correlated and variables means of the age group (age 1 to 4). Seventy animals were used from different regions of Rio Grande do Sul,in age ranging from 375 to 1579 days (average of 777.94 days). The CC average at the time of orchiectomy was 3.37, while the PC found was 322.53+/-63.79 kg. As regards the left testicle with the epididymis, the PTE average was 122.83+/-72.88 g and after the removal of the epididymis there was a reduction to 87.77+/-59.74 g. The VOL was 57,89+/-31,19 mL. The LAR found was 37.19+/-12.40 mm whereas the COMP was 67.81+/-17.34 mm and ALT was 37.29 +/-11.50 mm. In relation to the right testicle, with the presence of the epididymis, was observed the following average: 105.52+/-71.51 g. After the removal of epididymis, for the PTD, it was found 76.21+/-64.99 g, VOL 51,42+/-4,11mL, the LAR was 34.97+/-13.25 mm, COMP was 63, 94+/-19.45 mm and ALT 34.50+/-12.21 mm. The average concentration of TES assayed was 98.25+/-122.87 ng / ml of plasma. In 77.14% of the 35 histological slices done, spermatozoa were found in the lumen of the seminiferous tubules.

A morfologia e a fisiologia ovariana nos equinos têm sido motivo de estudo devido a seu córtex e medula invertidos em comparação às das outras espécies mamíferas e seu ciclo reprodutivo fotoperíodo-dependente e à existência de uma fossa de ovulação. Estes aspectos levam ao profissional do campo da reprodução equina a se interessar em aprofundar cada vez mais no desenvolvimento de pesquisas que possam auxiliar oferecendo métodos e técnicas que ajudem no trabalho de campo. Uma das melhores técnicas utilizadas para o estudo da atividade ovariana têm sido as imagens ultrassonográficas nos seus diferentes modos de operação. Uma das estruturas ovarianas que se pode avaliar e acompanhar com o ultrassom é o Corpo Lúteo (CL), sendo ele vital pela produção de Progesterona (P4), hormônio encarregado da preparação do endométrio para oferecer um ambiente ao embrião. É relatada uma relação positiva entre quantidade de células lúteas e produção de P4. O objetivo deste estudo foi testar uma metodologia que permitisse avaliar a densidade celular por meio da histologia e determinar se existe relação com o numero de pixéis lúteos numa imagem de ultrassom e assim ter um dado confiável para tomar decisões. Foram coletados 29 ovários de éguas crioulas em diferentes fases do diestro, analisados todos dentro de um único grupo. As amostras foram passadas pelo ultrassom para obter a imagem ultrasonográfica salva diretamente do ultrassom. Posteriormente, os CLs foram dessecados para fazer laminas corada pela Hematoxilina Eosina. Os resultados mostraram que entre as variáveis existe correlação inversa de R=-0.61. O coeficiente de determinação achado foi de aproximadamente R2=40% com uma probabilidade P=0.04%. Os resultados indicam que, existem variações no numero de pixéis lúteos que podem explicar em grande percentagem os valores totais do numero de células presentes no tecido lúteo. / The ovarian morphology and physiology in horses has been the subject of study due to its reversed cortex and medulla in comparison to other mammalian species, the existance of an ovulation fossa and for its photoperiod-dependent reproductive cycle. These aspects lead to the field practitioner specialist on equine to develop research that may help at fieldwork. One of the best techniques for the study of ovarian activity has been the ultrassonographic images in its different modes of operation. The corpus luteum (CL) is one of the ovarian structures that can be assessed and followed by ultrasound, being vital for the production of progesterone (P4), hormone which prepares the endometrium to provide a good environment for embryo development. A positive relationship between amount of luteal cells and P4 production has been reported before. The aim of this study was to test a methodology that would assess cell density by histology and determine whether there is a correlation between the number of ultrasound image pixels and the luteal cells concentration and thus have a really trusted ultrasound data which might help veterinarians to make decisions. Twenty nine ovaries from criollo mares were collected at different stages of diestrus, and all analyzed within a unique group. Samples were assessed by ultrasound to obtain the ultrasonographic image. After that, the CLs were dried to make microscopy slides stained with hematoxylin-eosin. The results showed that an inverse correlation (r = -0.61) exists between the variables studied. The determination coefficient found was approximately R2 = 40% with a probability of P = 0.04%. The results indicate that there are variations in the number of pixels that can explain differences in the numbers of luteal cells in the corpus luteum tissue.

Proteínas presentes no plasma seminal (PS) vêm sendo estudadas em relação a níveis reprodutivos de fertilidade ou infertilidade, em várias espécies de mamíferos, particularmente em animais domésticos. As proteínas do plasma seminal equino 1 (HSP-1) e 2 (HSP-2) são as proteínas mais abundantes nesta espécie. O objetivo deste estudo foi investigar a concentração das proteínas HSP-1/2 presentes no plasma seminal bem como o conteúdo de proteína total, em garanhões adultos durante a estação reprodutiva e fora dela, para determinar se essas concentrações estão relacionadas com a fertilidade. O PS foi obtido a partir de 42 ejaculados de 11 garanhões adultos (3-25 anos). Os animais foram alocados em dois grupos (alta e baixa fertilidade) de acordo com as taxas de prenhez de éguas e dos dados de viabilidade do sêmen avaliados no primeiro dia de coleta. As concentrações das HSP-1/2 (mg/mL) foram medidas e analisadas por um sistema de Cromatografia Líquida de Ultra Eficiência utilizando uma coluna UHPLC. Houve diferença significativa (P<0,05) na concentração de proteínas totais e das proteínas HSP-1/2 (mg/mL, média ± DP) entre os ejaculados de animais de alta e baixa fertilidade. Não houve diferença na concentração das HSP-1/2 no primeiro e segundo ejaculados de garanhões de alta fertilidade, tanto dentro ou fora da estação reprodutiva. O PS de animais classificados no grupo de baixa fertilidade apresentou diferença significativa (P<0,05) na concentração das HSP-1/2 entre o primeiro e segundo ejaculado, tanto no período da estação reprodutiva quanto fora dele. Em conclusão, a concentração das principais proteínas do plasma seminal em garanhões, as HSP-1/2, foi maior em ejaculados de garanhões de baixa fertilidade, o que não parece ser influenciado pelo período de coleta, podendo assim, ser indicada como biomarcador da baixa fertilidade em garanhões. / Seminal plasma (SP) proteins have been assessed in relation to reproductive fertility levels or infertility, in several species of mammals, particularly domestic animals. Horse seminal plasma proteins 1 (HSP-1) and 2 (HSP-2) are the most abundant proteins in equine seminal plasma. The aim of this study was to investigate in adult stallions the concentrations of seminal plasma HSP-1/2 and total protein in the breeding season and non-breeding season and to determine if these concentrations were related with fertility. SP was obtained from 42 ejaculates of 11 adult stallions (3-25 yrs). Stallions were allocated into two groups (good and poor fertility) according to pregnancy rates of mares, and to their semen viability data in the first collection day. Seminal plasma HSP- 1/2 concentrations (mg/mL) were measured and analyzed by an Ultra High Performance Liquid Chromatography using a UHPLC column. There were significant differences (P<0.05) in total protein and HSP-1/2 concentration (mg/mL, mean ± SD) in the ejaculates from good and poor fertility stallions. The HSP-1/2 concentration did not show differences in the first and second ejaculates of good fertility stallions in both the non-breeding and breeding season. SP of stallions classified as poor fertility showed significant difference (P<0.05) in HSP-1/2 concentration between the first and second ejaculate in both the non-breeding and breeding season. In conclusion, the concentration of the major proteins of stallion seminal plasma HSP-1/2 was higher in ejaculates from stallions with poor fertility, is not influenced by the season and could serve as biomarker for poor fertility in stallions.

O fluido folicular (FF) é um líquido extracelular complexo que se acumula no antro dos folículos ovarianos durante o seu desenvolvimento. É o meio essencial para o crescimento e a maturação das células ovarianas somáticas e germinativas e contém substâncias envolvidas na diferenciação celular, maturação do oócito, qualidade do gameta, ruptura da parede folicular e luteinização. O estudo de seus componentes é fundamental para um melhor entendimento dos mecanismos que envolvem a dinâmica folicular na espécie equina. O objetivo deste trabalho foi comparar o perfil proteico do maior folículo, e entre o maior e o segundo maior folículo, em diferentes momentos do desenvolvimento folicular. Para este estudo, quarenta ovários, oriundos de vinte éguas Crioulas, não gestantes e cíclicas, foram coletados durante a estação reprodutiva, em um abatedouro. Antes do abate, as éguas foram divididas em quarto grupos de acordo com o diâmetro folicular, ecotextura uterina (EU) e presença de corpo lúteo (CL): G 15 (emergência) (n = 3) folículos até 15 mm, EU ≥ 1, CL ≥ 20 mm; G 20 (divergência) (n = 9) folículos entre 20 e 25 mm, EU 1-2, CL 15-20 mm; G 30 (dominância) (n = 4) folículos entre 30 e 35 mm, EU ≥ 2, CL ≤ 15 mm; G 40 (pré-ovulatória) (n = 4) folículos ≥ 40 mm, EU 2-3, CL ≤ 15 mm. Após o abate, os ovários foram coletados e o FF dos dois maiores folículos foi aspirado. A técnica de 2D-PAGE foi realizada, em duplicata, utilizando gel de acrilamida a 12%. Os géis foram corados com Comassie Brilliant Blue R-250, escaneados e analisados, utilizando o PDQuest software, para determinar a densidade óptica dos spots. A identificação proteica foi realizada através de espectometria de massa (MS). Um total de 43 spots foi observado. Sete spots, representando cinco proteínas (albumina, apolipoproteína A-1, gelsolina, transferrina e α-1-antiproteinase 2), apresentaram diferenças (P˂0,05) na expressão, no FF do maior folículo, nos diferentes grupos. Um spot, representado pela proteína POMZP3, demonstrou diferença (P=0,018) em sua expressão, entre o maior e o segundo maior folículo, nos diferentes grupos. E, por fim, um spot, identificado como a proteína α-1-antiproteinase 2, apresentou interação (P=0,047) entre o maior e o segundo maior folículo e as diferentes fases da foliculogênese. Os resultados deste trabalho demonstram que o perfil proteico do FF difere durante o desenvolvimento folicular e que, as maiores alterações, são observadas a partir da dominância. Além disso, provavelmente, algumas destas proteínas, bem como suas correlações, tenham grande importância nos eventos que ocorrem durante a foliculogênese. / The follicular fluid (FF) is a complex extracellular fluid that accumulates in the antrum follicles during the follicular development. It is the essential medium for the growth and maturation of somatic and germ ovarian cells and contains substances involved in cell differentiation, oocyte maturation, gamete quality, rupture of the follicle wall and luteinization. The study of its components is crucial for a better understanding of the mechanisms involved in follicular dynamics in mares. The objective of this study was to determine the protein profile of the largest follicle and among the largest and the second largest follicle at different stages of follicular development. In this study, 40 ovaries from 20 non pregnant Criollo cycling mares were collected during the breeding season in an abattoir. Before slaughter, the mares were divided into four groups according to follicular diameter, uterine ecotexture (UE) and the presence of corpus luteum (CL): G 15 (emergence) (n = 3), follicles up to 15mm, EU ≥ 1, CL ≥ 20 mm; G 20 (deviation) (n = 9), follicles between 20 and 25 mm, EU 1-2, CL 15-20 mm; G 30 (dominance) (n = 4), follicles between 30 e 35 mm, EU ≥ 2, CL ≥15 mm; G 40 (ovulation) (n = 4), follicles ≥ 40 mm, EU 2-3, CL ≥ 15 mm. After slaughter, the ovaries were collected and the FF of the two largest follicles was aspirated. The technique of 2D-PAGE was performed in duplicate using 12% acrylamide gel. Gels were stained with Comassie Brilliant Blue R-250, scanned and analyzed using the PDQuest software to determine the optical density of the spots. Protein identification was performed by mass spectrometry (MS). A total of 43 spots was observed. Seven spots representing five proteins (albumin, apolipoprotein A-1, gelsolin, transferrin e α-1-Antitrypsin 2) showed differences (P˂0.05) in expression, the FF of the largest follicle in the different groups. One spot, represented by POMZP3 protein showed a difference (P=0.018) in expression between the largest and second largest follicle in the different groups. Finally, one spot, identified as the protein α-1-antitrypsin 2, showed interaction (P=0.047) between the largest and second largest follicle. The results of this study demonstrated that the protein profile of FF differs during follicular development and that the largest changes are observed from the dominance. Also probably some of these proteins, as well as their correlations, have great importance in the events that occur during folliculogenesis.

As biotécnicas da reprodução na espécie equina avançaram na última década, tanto em conhecimento agregado por pesquisas como também pela demanda do mercado. No entanto, na espécie equina machos com subfertilidade são diagnosticados frequentemente com elevado número de espermatozoides com alterações morfológica e/ou imóveis. A utilização apenas de células viáveis para realizar o processo de resfriamento busca evitar perda de material (diluente) e produção de metabólitos tóxicos aos espermatozoides viáveis. O objetivo deste estudo foi utilizar a separação espermática (lã de vidro e centrifugação com Androcoll®) pré-resfriamento para incrementar a viabilidade do sêmen de garanhões pôneis refrigerados a 5ºC durante 48h. Os parâmetros motilidade, funcionalidade de membrana (HOST), viabilidade espermática (CFDA/PI), atividade mitocondrial e morfologia espermática foram avaliados no sêmen fresco e refrigerado (24 e 48h). A utilização da filtração por lã de vidro ou Androcoll® pré-resfriamento do sêmen equino selecionou espermatozoides com maior motilidade, funcionalidade de membrana, viabilidade espermática e atividade mitocondrial. Adicionalmente, a filtração por lã de vidro proporcionou refrigerar sêmen com elevado número de células morfologicamente normais sem perdas significativas de espermatozoides pelo processo de filtração. Tanto a técnica de lã de vidro como a centrifugação com Androcoll® mostraram-se eficientes em separar ejaculados com maior viabilidade para o resfriamento. Já a técnica de lã de vidro apresenta-se como uma técnica de baixo custo e de fácil execução para ser aplicada tanto para pequenos, ou grandes volumes de sêmen. / The reproduction biotechnologies in equine species have advanced in the last decade both in aggregate knowledge by research as well as the market demand. However, it in the equine species often with male subfertility where the ejaculate has a high number of sperm with morphological and / or property changes. The use of only viable cells to perform the cooling process seeks to avoid loss of material (diluent) and production of toxic metabolites to viable sperm. The aim of this study was to use the sperm separation (glass and spin wool with Androcoll®) pre-cooling to increase the viability of semen chilled ponies stallions at 5 ° C for 48 hours. We evaluated the motility parameters, membrane functionality (HOST), sperm viability (CFDA / PI), mitochondrial activity and morphology in fresh and chilled semen (24 and 48h). The use of filtration glass wool or Androcoll® pre-cooling of equine semen selected sperm with higher motility, functionality membrane, sperm viability and mitochondrial activity. In addition to filtration through glass wool afforded cooling semen with a high number of morphologically normal cells without significant losses of spermatozoids the filtration process. Both glass wool technique as centrifugation with Androcoll® were efficient in separating ejaculated more viability for cooling. Already glass wool technique presents itself as a low cost and simple technique to be applied to both small or large volumes of semen.

Existe uma complexa cascata envolvendo proteínas durante o desenvolvimento embrionário inicial e reconhecimento materno, o que é muito importante para a manutenção do concepto. O objetivo deste estudo foi comparar o perfil proteômico do líquido uterino após ovulação em éguas prenhes e cíclicas. No primeiro ciclo, amostras de líquido uterino de 30 éguas cíclicas foram coletadas nos dias 7 (n=10), 10 (n=10) e 13 (n=10), constituíram o grupo Cíclica. No segundo ciclo as mesmas éguas foram cobertas por um garanhão fértil. Nos dias 7, 10 e 13 foram coletadas amostras do líquido intrauterino. Imediatamente após a coleta das amostras, o útero das éguas foi lavado, e aquelas que tiveram o embrião recuperado constituíram o grupo Prenhe. Dos 30 lavados uterinos realizados foram recuperados 6 embriões no dia 7, 6 embriões no dia 10 e 6 embriões no dia 13. Amostras das éguas que não tiveram recuperação embrionária foram descartadas de ambos os grupos. As amostras de líquido uterino foram processadas por eletroforese bidimensional seguida de matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight (MALDI-TOF/TOF) espectrometria de massa para a identificação de relevantes spots proteicos. De um total de 677 spots detectados, 19 foram identificados, sendo 13 mais abundantes no grupo Prenhe e 6 no grupo Cíclica. Em conclusão éguas prenhes e cíclicas demonstraram diferenças na abundancia de proteínas. Foram identificadas proteínas relacionadas com os eventos essenciais para manutenção embrionária como: transporte de lipídios através da cápsula embrionária, mobilidade uterina, formação de ATP, angiogênese, tolerância imunológica materna, proliferação celular, processos celulares e metabolismo. As mudanças no perfil de proteínas do fluido uterino durante o desenvolvimento inicial em éguas foram relacionadas com a presença embrionária, sugerindo que estas alterações podem ser importantes para o desenvolvimento embrionário e reconhecimento materno da prenhez. / There is a complex cascade involving proteins during early embryo development and maternal recognition, which is very important for maintenance of a concept. The aim of this study was to compare proteomic profile of uterine fluid after ovulation in pregnant and cyclic mares. In the first cycle, samples of uterine fluid of 30 cyclic mares were collected on days 7 (n = 10), 10 (n = 10) and 13 (n = 10) and constituted the Cyclic group. In the second cycle, the same mares were bred to a fertile stallion. At days 7, 10 and 13 intrauterine samples were collected. Immediately after sample collection, the mares uterus were flushed, and those with embryo recovery were assigned to the Pregnant group. Of the 30 mares flushed, embryos were recovered in 6 mares from the 7th day, 6 from the 10th day and 6 from the 13th day. Samples from the mares without embryo recovery were excluded from both groups. The uterine fluid samples were processed by two-dimensional electrophoresis technique followed by matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight (MALDI-TOF/TOF) mass spectrometry for the identification of relevant protein spots. From a total of 677 detected spots 19 were identified, 13 more abundant in Pregnant group and 6 in Cyclic group. In summary, pregnant and cyclic mares showed proteins with different abundance. Identified proteins were related to the transport of lipids through the embryo capsule, uterine motility, ATP generation, maternal immunological tolerance, cell proliferation, differentiation, metabolism and angiogenesis. Changes in the proteomic profile of uterine fluid during early embryo development in mares were related with the embryonic presence, suggesting that these alterations may be important for embryonic development and maternal recognition of pregnancy.

Existe uma complexa cascata envolvendo proteínas durante o desenvolvimento embrionário inicial e reconhecimento materno, o que é muito importante para a manutenção do concepto. O objetivo deste estudo foi comparar o perfil proteômico do líquido uterino após ovulação em éguas prenhes e cíclicas. No primeiro ciclo, amostras de líquido uterino de 30 éguas cíclicas foram coletadas nos dias 7 (n=10), 10 (n=10) e 13 (n=10), constituíram o grupo Cíclica. No segundo ciclo as mesmas éguas foram cobertas por um garanhão fértil. Nos dias 7, 10 e 13 foram coletadas amostras do líquido intrauterino. Imediatamente após a coleta das amostras, o útero das éguas foi lavado, e aquelas que tiveram o embrião recuperado constituíram o grupo Prenhe. Dos 30 lavados uterinos realizados foram recuperados 6 embriões no dia 7, 6 embriões no dia 10 e 6 embriões no dia 13. Amostras das éguas que não tiveram recuperação embrionária foram descartadas de ambos os grupos. As amostras de líquido uterino foram processadas por eletroforese bidimensional seguida de matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight (MALDI-TOF/TOF) espectrometria de massa para a identificação de relevantes spots proteicos. De um total de 677 spots detectados, 19 foram identificados, sendo 13 mais abundantes no grupo Prenhe e 6 no grupo Cíclica. Em conclusão éguas prenhes e cíclicas demonstraram diferenças na abundancia de proteínas. Foram identificadas proteínas relacionadas com os eventos essenciais para manutenção embrionária como: transporte de lipídios através da cápsula embrionária, mobilidade uterina, formação de ATP, angiogênese, tolerância imunológica materna, proliferação celular, processos celulares e metabolismo. As mudanças no perfil de proteínas do fluido uterino durante o desenvolvimento inicial em éguas foram relacionadas com a presença embrionária, sugerindo que estas alterações podem ser importantes para o desenvolvimento embrionário e reconhecimento materno da prenhez. / There is a complex cascade involving proteins during early embryo development and maternal recognition, which is very important for maintenance of a concept. The aim of this study was to compare proteomic profile of uterine fluid after ovulation in pregnant and cyclic mares. In the first cycle, samples of uterine fluid of 30 cyclic mares were collected on days 7 (n = 10), 10 (n = 10) and 13 (n = 10) and constituted the Cyclic group. In the second cycle, the same mares were bred to a fertile stallion. At days 7, 10 and 13 intrauterine samples were collected. Immediately after sample collection, the mares uterus were flushed, and those with embryo recovery were assigned to the Pregnant group. Of the 30 mares flushed, embryos were recovered in 6 mares from the 7th day, 6 from the 10th day and 6 from the 13th day. Samples from the mares without embryo recovery were excluded from both groups. The uterine fluid samples were processed by two-dimensional electrophoresis technique followed by matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight (MALDI-TOF/TOF) mass spectrometry for the identification of relevant protein spots. From a total of 677 detected spots 19 were identified, 13 more abundant in Pregnant group and 6 in Cyclic group. In summary, pregnant and cyclic mares showed proteins with different abundance. Identified proteins were related to the transport of lipids through the embryo capsule, uterine motility, ATP generation, maternal immunological tolerance, cell proliferation, differentiation, metabolism and angiogenesis. Changes in the proteomic profile of uterine fluid during early embryo development in mares were related with the embryonic presence, suggesting that these alterations may be important for embryonic development and maternal recognition of pregnancy.

As biotécnicas da reprodução na espécie equina avançaram na última década, tanto em conhecimento agregado por pesquisas como também pela demanda do mercado. No entanto, na espécie equina machos com subfertilidade são diagnosticados frequentemente com elevado número de espermatozoides com alterações morfológica e/ou imóveis. A utilização apenas de células viáveis para realizar o processo de resfriamento busca evitar perda de material (diluente) e produção de metabólitos tóxicos aos espermatozoides viáveis. O objetivo deste estudo foi utilizar a separação espermática (lã de vidro e centrifugação com Androcoll®) pré-resfriamento para incrementar a viabilidade do sêmen de garanhões pôneis refrigerados a 5ºC durante 48h. Os parâmetros motilidade, funcionalidade de membrana (HOST), viabilidade espermática (CFDA/PI), atividade mitocondrial e morfologia espermática foram avaliados no sêmen fresco e refrigerado (24 e 48h). A utilização da filtração por lã de vidro ou Androcoll® pré-resfriamento do sêmen equino selecionou espermatozoides com maior motilidade, funcionalidade de membrana, viabilidade espermática e atividade mitocondrial. Adicionalmente, a filtração por lã de vidro proporcionou refrigerar sêmen com elevado número de células morfologicamente normais sem perdas significativas de espermatozoides pelo processo de filtração. Tanto a técnica de lã de vidro como a centrifugação com Androcoll® mostraram-se eficientes em separar ejaculados com maior viabilidade para o resfriamento. Já a técnica de lã de vidro apresenta-se como uma técnica de baixo custo e de fácil execução para ser aplicada tanto para pequenos, ou grandes volumes de sêmen. / The reproduction biotechnologies in equine species have advanced in the last decade both in aggregate knowledge by research as well as the market demand. However, it in the equine species often with male subfertility where the ejaculate has a high number of sperm with morphological and / or property changes. The use of only viable cells to perform the cooling process seeks to avoid loss of material (diluent) and production of toxic metabolites to viable sperm. The aim of this study was to use the sperm separation (glass and spin wool with Androcoll®) pre-cooling to increase the viability of semen chilled ponies stallions at 5 ° C for 48 hours. We evaluated the motility parameters, membrane functionality (HOST), sperm viability (CFDA / PI), mitochondrial activity and morphology in fresh and chilled semen (24 and 48h). The use of filtration glass wool or Androcoll® pre-cooling of equine semen selected sperm with higher motility, functionality membrane, sperm viability and mitochondrial activity. In addition to filtration through glass wool afforded cooling semen with a high number of morphologically normal cells without significant losses of spermatozoids the filtration process. Both glass wool technique as centrifugation with Androcoll® were efficient in separating ejaculated more viability for cooling. Already glass wool technique presents itself as a low cost and simple technique to be applied to both small or large volumes of semen.