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Resistência de Rhipicephalus microplus a associações comerciais de organofosforados e piretroides sintéticos no estado do Rio Grande do Sul, Brasil / Resistance of Rhipicephalus microplus to commercial associations of organophosphors and synthetic pyretroides in the state of Rio Grande do Sul, Brazil

Reginato, Caroline Zamperete 19 December 2016 (has links)
Rhiphicephalus microplus is one of the main ectoparasites of cattle in regions of tropical and subtropical climate. The economic losses caused by this parasite are related to treatment costs, decreased productivity and disease transmission. Currently the use of chemical products is still the most common form of control of the cattle tick, however, its use in an inadequate and suppressive way, has been causing the development of resistance to different classes of commercially available acaricides. Thus, the control of this parasite has been characterized by presenting a great challenge for technicians and producers. An alternative to tick control is the association of two different pharmacological bases, and currently this form of presentation is widely found commercially. The objective of this work is to describe the evaluation of the effectiveness of organophosphates and synthetic pyrethroids based on different combinations of R. microplus in the state of Rio Grande do Sul, Brazil. For this, 54 samples of cattle farms were collected, located in different municipalities of the state of Rio Grande do Sul. The evaluation of the in vitro efficacy of the acaricides tested was performed through the adult immersion test (AIT). In order to carry out the tests, four commercially available products were chosen: Ectoparasiticide A - 15% cypermethrin + 25% chlorpyrifos + 1% citronellal - (Colosso®, Ouro Fino Animal Health), Ectoparasiticide B - 15% cypermethrin + 30% chlorpyrifos + 15% fenthion - (Colosso FC30®, Ouro Fino Animal Health), Ectoparasiticide C - 50% chlorpyriphos + 6% cypermethrin high-cis - (Flytion®, Clarion Biosciences Ltda.) and Ectoparasiticide D - 16% ethion + 8.5% chlorpyriphos + 5% alpha-cypermethrin - (Potenty®, MSD Animal Health). The cypermethrin/ chlorpyrifos/ fenthion combination showed the best results, with an average efficiency greater than 95%, being effective in 94.44% (51/54) of the tested farms. The product containing the cypermethrin / chlorpyrifos / citronellal combination had a lower mean efficacy (62.11%), being effective in only 29.62% (16/54) of the properties tested. R. microplus presents different degrees of resistance to the association of organophosphates and synthetic pyrethroids, and multiple resistance was observed in most of the populations studied. Only the cypermethrin/ chlorpyrifos/ fenthion combination showed acceptable mean levels of efficacy in the tick populations studied. In this way, it is essential to establish a frequent monitoring of the effectiveness of the carrapaticides used, in order to prolong their useful life, contributing to their rational use for tick control in cattle. / Rhiphicephalus microplus é um dos principais ectoparasitas de bovinos em regiões de clima tropical e subtropical. As perdas econômicas que este parasita causa, estão relacionadas aos custos com tratamento, diminuição da produtividade e transmissão de doenças. Atualmente o uso de produtos químicos ainda é a forma mais comum de controle do carrapato bovino, no entanto, seu uso de maneira inadequada e supressiva, vem causando o desenvolvimento de resistência às diferentes classes de acaricidas disponíveis comercialmente. Assim, o controle deste parasita tem se caraterizado por apresentar um grande desafio para técnicos e produtores. Uma alternativa ao controle do carrapato é a associação de duas bases farmacológicas diferentes, sendo que atualmente esta forma de apresentação é amplamente encontrada a nível comercial. O objetivo deste trabalho é descrever a avaliação da eficácia de associações carrapaticidas, a base de organofosforados e piretroides sintéticos, em diferentes populações de R. microplus no estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Para isto, foram coletadas amostras de carrapatos de 54 propriedades, localizadas em diferentes municípios do estado do Rio Grande do Sul. A avaliação da eficácia in vitro dos acaricidas testados foi realizada através do teste de imersão de teleóginas (bicarrapaticidograma). Para a realização dos testes, foram escolhidos quatro produtos comercialmente disponíveis, sendo eles denominados: Produto A - 15% cipermetrina + 25% cloripirifós + 1% citronelol - (Colosso®, Ouro Fino Saúde Animal), Produto B - 15% cipermetrina + 30% cloripirifós + 15% fenthion - (Colosso FC30®, Ouro Fino Saúde Animal), Produto C - 50% cloripirifós + 6% cipermetrina high-cis - (Flytion®, Clarion Biosciences Ltda.), Produto D - 16% ethion + 8.5% cloripirifós + 5% alfa-cipermetrina - (Potenty®, MSD Saúde Animal). A associação de cipermetrina/clorpirifós/fenthion, apresentou os melhores resultados, com eficácia média superior a 95%, sendo eficaz em 94,44% (51/54) das propriedades testadas. O produto contendo a associação de cipermetrina/clorpirifós/citronelal, apresentou menor eficácia média (62,11%), sendo eficaz em apenas 29,62% (16/54) das propriedades testadas. R. microplus, apresenta diferentes graus de resistência à associação de organofosforados e piretroides sintéticos, sendo observado resistência múltipla em boa parte das populações estudadas. Apenas a combinação de cipermetrina/clorpirifos/fenthion apresentou níveis médios aceitáveis de eficácia nas populações de carrapato estudadas. Desta maneira, é fundamental estabelecer um monitoramento frequente da eficácia dos carrapaticidas utilizados, a fim de prolongar sua vida útil, contribuindo para o seu uso racional para o controle do carrapato em bovinos.
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Resistência a inseticidas em populações de percevejo-do-colmo do arroz Tibraca limbativentris (hemiptera: pentatomidae) / Resistance to insecticides in populations in rice stalk stink bug Tibraca limbativentris (Hemiptera: Pentatomidae)

Maciel, Diogo Nery 13 September 2016 (has links)
Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-10-17T19:20:47Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Diogo Nery Maciel - 2016.pdf: 6569625 bytes, checksum: 88b08e397d1fe85ad26417e8b0f2a08c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-10-18T17:16:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Diogo Nery Maciel - 2016.pdf: 6569625 bytes, checksum: 88b08e397d1fe85ad26417e8b0f2a08c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-18T17:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Diogo Nery Maciel - 2016.pdf: 6569625 bytes, checksum: 88b08e397d1fe85ad26417e8b0f2a08c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-09-13 / The increase in insecticide application for control the rice stalk stink bug Tibraca limbativentris Stal (Hemiptera: Pentatomidae) in irrigated rice in Brazil, has been reported by producers as responsible for loss of effectiveness of some insecticides commonly used to manage this insect and this is the base of this investigation. The insecticides used in this study were: bifenthrin, carbosulfan, etophenprox, λ-cyhalothrin, and thiametoxam. Six populations of insects were collected in producing areas of the states of Tocantins, Goiás and Santa Catarina, Brazil. Insect adults of each population were submitted to discriminant concentrations (LC95s) previously determined for the population collected in natural habitat in Santo Antônio de Goiás, and used as standard susceptible population. The frequency of individuals resistant in the population of Formoso do Araguaia was 76% for carbosulfan, 86% for bifenthrin, 72% for etofenprox, 80% for L-cyalothrin, and 80% for thyamethoxam. Although the frequencies of resistant individuals can be considered low to moderate, it is first report of resistance of T. limbativentris to insecticides. These results indicate the resistance development to other insecticides with different mode of actions, with emphasis to the stink bug populations of Formoso do Araguaia-TO. These results also indicates a possible occurrence of crossed a resistance or multiple in that population. / O aumento no uso de inseticidas ​​para o controle do percevejo-do- colmo Tibraca limbativentris Stal 1860 (Hemiptera: Pentatomidae) em lavouras de arroz irrigado no Brasil, associado a relatos de produtores sobre perda de eficácia dos produtos comumente usados, embasaram a condução desta investigação sobre a possível ocorrência de resistência aos inseticidas: bifentrina, carbosulfan, etofenproxi, lambda-cialotrina e tiametoxan. As populações de insetos foram coletadas em seis áreas de produção de arroz irrigado nos estados de Tocantins, Goiás e Santa Catarina, Brasil. Insetos adultos destas populações foram estabelecidos em gaiolas teladas de criação em casa de vegetação e em laboratório foram submetidos a concentrações discriminantes (LC 95 s) estimadas para a população de Santo Antônio de Goiás, coletada em ambiente natural e usada como população-padrão de susceptibilidade. As frequências de mortalidade de indivíduos para a população de Formoso do Araguaia foi de 76% para o inseticida carbosulfan, 86% para bifentrina, 72% para etofenproxi, 80% para L-cialotrina e de 80% para o inseticida tiametoxan. Embora as frequências de indivíduos resistentes encontradas sejam consideradas de baixas a moderadas, trata-se do primeiro registro de T. limbativentris resistentes a inseticidas e, já se percebe a extensão do problema com relação ao desenvolvimento de resistência a produtos de diferentes grupos e modos de ação, principalmente na região produtora de Formoso do Araguaia- TO. Os resultados desta pesquisa indicam uma possível ocorrência de resistência cruzada ou múltipla nessa população.
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Análises da resistência genética à tospovirus e potyvirus em acessos de Solanum (secção lycopersicon) / Genetic analysis of resistance to tospovirus and potyvirus in access of Solanum (section lycopersicon)

Oliveira, Renata Maria de 27 February 2014 (has links)
Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-04-23T12:26:22Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Renata Maria de Oliveira - 2014.pdf: 1638787 bytes, checksum: a5a8313e7628fbfc7f10155653ba0f08 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-04-23T12:29:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Renata Maria de Oliveira - 2014.pdf: 1638787 bytes, checksum: a5a8313e7628fbfc7f10155653ba0f08 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-23T12:29:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Renata Maria de Oliveira - 2014.pdf: 1638787 bytes, checksum: a5a8313e7628fbfc7f10155653ba0f08 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Tomato is one of the most cultivated vegetables worldwide, and this is an important factor in their vulnerability to attack by pests and diseases, which contribute to the decrease in production and affects the quality of the fruit. Among diseases affecting tomato production, the ones caused by viruses are of the utmost importance, which are more difficult to control, highlighting those caused by species of the genus Tospovirus, which can cause losses of up to 100 %. The tospoviruses are responsible for the disease known as 'tomato spotted wilt' and are transmitted by thrips. In Brazil, four species of tospoviruses occur in tomato: Tomato spotted wilt virus (TSWV), Tomato chlorotic spot virus (TCSV), Groundnut ringspot virus (GRSV) and Chrysanthemum stem necrosis virus (CSNV), with a greater incidence of GRSV. The first TSWV resistance gene identified was the Sw-5, which is effective against all species of tospoviruses infecting tomato and is widely used in breeding programs for this reason, because the resistance gene presents a dominant trait. Sources of resistance were found in other wild accessions of the species S. chilense, S. habrochaites, S. pimpinellifolium, S. corneliomuelleri and S. lycopersicum, showing promising results as sources of resistance for use in breeding programs. To identify a source of tospovirus resistance in wild accessions of the Germplasm Bank of Embrapa Hortaliças, and to perform the evolutionary analysis of the Sw-5 gene through the phylogeny of wild accessions, grouping them into evolutionary groups, this work was realized. The wild accessions of S. chilense and S. habrochaites species that showed compatible type of bands with resistance, can provide differentiated alleles of the resistance source based in S. peruvianum, since they grouped in other branches of the phylogenetic tree, with the potential to contribute with maintenance of resistance conferred by SW-5. The species of Potyvirus, Potato virus Y (PVY) and Pepper yellow mosaic virus (PepYMV), have been reported causing severe damage (qualitative and quantitative) to the production of tomatoes for their various purposes. Symptomatic plants have whitening ribs, mottling and leaf distortion when infected by PVY, and necrotic spots that may progress to death of the plant when infected by PepYMV. Because of the recessive characteristic of the typical resistance to potyvirus, the search for new species that confer genetic resistance to this genus occurring in tomato is important. The pot-1 gene, which confers resistance to potyviroses in tomato is governed by a restriction mechanism of cell-to-cell movement of the capsid protein, which prevents viral accumulation in tissues. Sources of resistance have been reported in wild Solanum species in S. peruavianum, S. chilense, S. pimpinellifolium and S. habrochaites, but it is necessary to evaluate the inheritance of this resistance, since the reported resistance is conferred by a monogenic recessive gene. This study aimed to identify in wild species accessions of the Germplasm Bank of Embrapa Hortaliças conferring multiple resistance to PVY and PepYMV, making them candidates for potential sources of resistance for use in breeding programs. Species wild the Germplasm Bank of Embrapa Hortaliças were evaluated for resistance to PVY and PepYMV and identified in accessions of the species S. peruavianum and S. habrochaites via serological analysis (DOT-BLOT) possible sources of resistance. / O tomateiro é uma das hortaliças mais cultivadas em todo o mundo, e isso constitui um fator importante para a sua vulnerabilidade ao ataque de pragas e doenças, que contribuem para a diminuição da produção na cultura e afeta a qualidade do fruto. Dentre as doenças na cultura do tomateiro, destacam-se as de etiologia viral, que apresentam maior dificuldade de controle, sobressaindo àquelas causadas por espécies do gênero Tospovirus e Potyvirus, que podem causar perdas de até 100% na cultura. Os tospovírus são responsáveis pela doença conhecida como ‘vira-cabeça do tomateiro’, e são transmitidos por espécies de tripes. No Brasil há a ocorrência de quatro espécies de tospovírus afetando tomateiros: Tomato spotted wilt virus (TSWV), Tomato chlorotic spot virus (TCSV), Groundnut ringspot virus (GRSV) e Chrysanthemum stem necrosis virus (CSNV), sendo a GRSV a espécie de maior incidência. O primeiro gene de resistência a TSWV identificado foi o Sw-5, que é eficiente contra todas as espécies de tospovírus que infectam o tomateiro, sendo amplamente utilizado em programas de melhoramento por este motivo e por ser um gene de resistência com característica dominante. Fontes de resistência foram encontradas em outros acessos selvagens de S. chilense, S. habrochaites, S. pimpinellifolium, S. corneliomuelleri e S. lycopersicum, sendo estas espécies fontes promissoras de resistência para serem utilizados em programas de melhoramento. Visando identificar em acessos selvagens do Banco de Germoplasma da Embrapa Hortaliças fontes potenciais de resistência a tospoviroses, e a partir da análise evolutiva do gene Sw-5 através da filogenia de acessos selvagens, agrupando-os em grupos evolucionários, executou-se o presente trabalho. A análise evolucionária apresentou espécies de tomateiros diferentes que conferem resistência ampla às espécies de tospovírus e possuem o gene Sw-5, se enquadrando em grupos evolucionários distintos. Os acessos selvagens das espécies S. chilense e S. habrochaites que apresentaram padrão de bandas compatível com a resistência podem fornecer alelos diferenciados da fonte de resistência baseada em S. peruvianum, já que se agruparam em outros ramos da árvore filogenética, com potencial para contribuir com a manutenção da resistência conferida por Sw-5. As espécies de Potyvirus, Potato virus Y (PVY) e Pepper yellow mosaic virus (PepYMV), tem sido relatadas causando danos severos (qualitativos e quantitativos) à produção de tomate para seus diversos fins. Plantas sintomáticas apresentam clareamento de nervuras, mosqueado e deformação foliar quando infectadas por PVY; e pontos necróticos que podem evoluir até a morte da planta quando infectada por PepYMV. Devido a característica de resistência recessiva a Potyvirus, a busca por novas espécies que confiram resistência genética a potyviroses de ocorrência na cultura do tomateiro é importante. O gene pot-1, que confere um padrão de resistência recessiva a potyviroses no tomateiro, tem seu mecanismo regido pela restrição do movimento célula-a-célula da proteína do capsídeo, que impede o acúmulo viral nos tecidos. Fontes de resistência tem sido relatadas em espécies silvestres de Solanum, em S. peruavianum, S. chilense, S. pimpinellifolium e S. habrochaites, mas se faz necessário avaliar a herança da resistência, já que a resistência relatada é conferida por um gene recessivo monogênico. O presente trabalho teve por objetivo confirmar am acessos selvagens do Banco de Germoplasma da Embrapa Hortaliças espécies que confiram resistência múltipla a PVY e PepYMV, tornando-as pontenciais candidatas a fontes de resistência para serem utilizadas em programas de melhoramento. Espécies selvagens do Banco de Germoplasma da Embrapa Hortaliças foram avaliadas para resistência a PVY e PepYMV e identificou-se em acessos das espécies S. habrochaites e S. peruavianum via análise sorológica (DOT-BLOT) possíveis fontes de resistência.
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Associação entre polimorfismos no gene da glicoproteína-P (PgP) e resistência múltipla a anti-helmínticos em Haemonchus contortus e identificação de fatores de risco relacionados

Mello, Suelen Scarpa de 28 February 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6279.pdf: 1318446 bytes, checksum: 3ea93c315d61578a7b50605db41ae915 (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / Financiadora de Estudos e Projetos / Among the sheep parasites, Haemonchus contortus is the most prevalent and pathogenic nematode in tropical areas, causing huge economic losses. Alterations in the gene encoding the membrane P-glycoprotein (PgP) have been associated with multidrug resistance. The goal of this study was to identify single nucleotide polymorphisms (SNPs) on the PgP gene in H. contortus by comparing two isolates with different status of anthelmintic resistance. For this purpose, two ewes were experimentally infected, one with a susceptible H. contortus isolate (McMaster, Australia) and the other with a multidrug-resistant isolate (Embrapa2010, Brazil). Feces from infected animals were submitted to coproculture in order to obtain larvae and, after the slaughter of the ewes, adults H. contortus were collected from abomasum and individually submitted to DNA extraction. For the evaluation of potential molecular markers of geographic isolation, larvae originating from coprocultures of two other Brazilian isolates (Bahia and Pernambuco), with no determined resistance status, were also submitted to DNA extraction. After PCR amplification of DNA extracted from adults H. contortus, a fragment of the PgP gene was sequenced and six SNPs (position described in relation to the sequence of contig 004690 from the Wellcome Trust Sanger Institute) were identified : 508 (A> G in exon), 580 (G> A), 601 (G> C), 800 (G> A), 845 (G> T), and 878 (G> T), the last five in introns. The Fisher's exact test, applying the Bonferroni correction, revealed a significant association (P<0.01) between 508, 580, 601, 845 and 878 SNPs and the state of resistance to anthelmintics. Among these SNPs, 601 and 878 are in linkage disequilibrium and form the CC haplotype associated (P < 0.05) to resistance and the GG haplotype associated to susceptibility. Considering that there is considerable genetic differentiation between different continental areas in H. contortus, the frequencies of the SNPs were compared between the Brazilian isolates and the susceptible Australian one. It was found that the SNPs 580 and 845 may be associated with geographic isolation. We conclude that the 508, 601 and 878 SNPs in the P-glycoprotein gene can be molecular markers for multiple resistance to anthelmintics, and that the 580 and 845 SNPs can be candidate markers of geographical isolation in H. contortus. We developed software for Risk Analysis Development of Parasitic Resistance to Anthelmintics in Sheep (SARA) which will provide information that may guide the rational use of anthelmintics. / Among the sheep parasites, Haemonchus contortus is the most prevalent and pathogenic nematode in tropical areas, causing huge economic losses. Alterations in the gene encoding the membrane P-glycoprotein (PgP) have been associated with multidrug resistance. The goal of this study was to identify single nucleotide polymorphisms (SNPs) on the PgP gene in H. contortus by comparing two isolates with different status of anthelmintic resistance. For this purpose, two ewes were experimentally infected, one with a susceptible H. contortus isolate (McMaster, Australia) and the other with a multidrug-resistant isolate (Embrapa2010, Brazil). Feces from infected animals were submitted to coproculture in order to obtain larvae and, after the slaughter of the ewes, adults H. contortus were collected from abomasum and individually submitted to DNA extraction. For the evaluation of potential molecular markers of geographic isolation, larvae originating from coprocultures of two other Brazilian isolates (Bahia and Pernambuco), with no determined resistance status, were also submitted to DNA extraction. After PCR amplification of DNA extracted from adults H. contortus, a fragment of the PgP gene was sequenced and six SNPs (position described in relation to the sequence of contig 004690 from the Wellcome Trust Sanger Institute) were identified : 508 (A> G in exon), 580 (G> A), 601 (G> C), 800 (G> A), 845 (G> T), and 878 (G> T), the last five in introns. The Fisher's exact test, applying the Bonferroni correction, revealed a significant association (P<0.01) between 508, 580, 601, 845 and 878 SNPs and the state of resistance to anthelmintics. Among these SNPs, 601 and 878 are in linkage disequilibrium and form the CC haplotype associated (P < 0.05) to resistance and the GG haplotype associated to susceptibility. Considering that there is considerable genetic differentiation between different continental areas in H. contortus, the frequencies of the SNPs were compared between the Brazilian isolates and the susceptible Australian one. It was found that the SNPs 580 and 845 may be associated with geographic isolation. We conclude that the 508, 601 and 878 SNPs in the P-glycoprotein gene can be molecular markers for multiple resistance to anthelmintics, and that the 580 and 845 SNPs can be candidate markers of geographical isolation in H. contortus. We developed software for Risk Analysis Development of Parasitic Resistance to Anthelmintics in Sheep (SARA) which will provide information that may guide the rational use of anthelmintics. / Entre os parasitas de ovinos, Haemonchus contortus é o nematoide mais prevalente e patogênico em áreas tropicais, causando grandes perdas econômicas. As alterações no gene que codifica a glicoproteína-P de membrana (PgP) foram associadas com a resistência a múltiplas drogas. Assim, o objetivo deste estudo foi identificar polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) no gene PgP em H. contortus por comparação de dois isolados com diferentes status de resistência a anti-helmínticos. Para esse fim, uma ovelha foi infectada experimentalmente com o isolado suscetível (McMaster, Austrália) e outra ovelha com o isolado multirresistente (Embrapa2010, Brasil) de H. contortus. Fezes dos animais infectados foram submetidas à coprocultura para a obtenção de larvas e, após o abate das ovelhas, H. contortus adultos foram colhidos do abomaso e individualmente submetidos à extração de DNA. Para a avaliação de possíveis marcadores moleculares de isolamento geográfico, larvas oriundas de coprocultura de dois outros isolados brasileiros (Bahia e Pernambuco), com status de resistência não determinado, também foram submetidas à extração de DNA. Após amplificação por PCR do DNA extraído de H. contortus adultos, um fragmento do gene PgP foi sequenciado e foram identificados seis SNPs (posição descrita em relação à sequência do contig 004690 do Wellcome Trust Sanger Institute): 508 (A>G, em éxon), 580 (G>A), 601 (G>C), 800 (G>A), 845 (G>T) e 878 (G>T), os cinco últimos em íntrons. O teste exato de Fisher, por meio da correção de Bonferroni, revelou associação significativa (P<0,01) entre os SNPs 508, 580, 601, 845 e 878 e o estado de resistência a anti-helmínticos. Desses SNPs, o 601 e o 878 estão em desequilíbrio de ligação e formam os haplótipos CC, que está associado (P<0,05) à resistência, e GG, à suscetibilidade. Levando em consideração que em H. contortus há considerável diferenciação genética entre áreas continentais distintas, as frequências dos SNPs foram comparadas entre os isolados brasileiros e o isolado suscetível australiano e foi verificado que os SNPs 580 e 845 podem estar associados ao isolamento geográfico. Conclui-se que os SNPs 508, 601 e 878 no gene de glicoproteína-P podem ser marcadores moleculares para a resistência múltipla a anti-helmínticos, e os SNPs 580 e 845 candidatos a marcadores de isolamento geográfico em H. contortus. Nós desenvolvemos um software para Análise de Risco de Desenvolvimento de Resistência Parasitária a Anti- Helmínticos em Ovinos (SARA) que fornecerá informações que poderão orientar a utilização racional de anti-helmínticos. / Entre os parasitas de ovinos, Haemonchus contortus é o nematoide mais prevalente e patogênico em áreas tropicais, causando grandes perdas econômicas. As alterações no gene que codifica a glicoproteína-P de membrana (PgP) foram associadas com a resistência a múltiplas drogas. Assim, o objetivo deste estudo foi identificar polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) no gene PgP em H. contortus por comparação de dois isolados com diferentes status de resistência a anti-helmínticos. Para esse fim, uma ovelha foi infectada experimentalmente com o isolado suscetível (McMaster, Austrália) e outra ovelha com o isolado multirresistente (Embrapa2010, Brasil) de H. contortus. Fezes dos animais infectados foram submetidas à coprocultura para a obtenção de larvas e, após o abate das ovelhas, H. contortus adultos foram colhidos do abomaso e individualmente submetidos à extração de DNA. Para a avaliação de possíveis marcadores moleculares de isolamento geográfico, larvas oriundas de coprocultura de dois outros isolados brasileiros (Bahia e Pernambuco), com status de resistência não determinado, também foram submetidas à extração de DNA. Após amplificação por PCR do DNA extraído de H. contortus adultos, um fragmento do gene PgP foi sequenciado e foram identificados seis SNPs (posição descrita em relação à sequência do contig 004690 do Wellcome Trust Sanger Institute): 508 (A>G, em éxon), 580 (G>A), 601 (G>C), 800 (G>A), 845 (G>T) e 878 (G>T), os cinco últimos em íntrons. O teste exato de Fisher, por meio da correção de Bonferroni, revelou associação significativa (P<0,01) entre os SNPs 508, 580, 601, 845 e 878 e o estado de resistência a anti-helmínticos. Desses SNPs, o 601 e o 878 estão em desequilíbrio de ligação e formam os haplótipos CC, que está associado (P<0,05) à resistência, e GG, à suscetibilidade. Levando em consideração que em H. contortus há considerável diferenciação genética entre áreas continentais distintas, as frequências dos SNPs foram comparadas entre os isolados brasileiros e o isolado suscetível australiano e foi verificado que os SNPs 580 e 845 podem estar associados ao isolamento geográfico. Conclui-se que os SNPs 508, 601 e 878 no gene de glicoproteína-P podem ser marcadores moleculares para a resistência múltipla a anti-helmínticos, e os SNPs 580 e 845 candidatos a marcadores de isolamento geográfico em H. contortus. Nós desenvolvemos um software para Análise de Risco de Desenvolvimento de Resistência Parasitária a Anti- Helmínticos em Ovinos (SARA) que fornecerá informações que poderão orientar a utilização racional de anti-helmínticos.

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