O aumento da resistência do parasita da malária a maioria da drogas antimaláricas disponíveis, tornandose necessário pesquisar novos compostos com potencial atividade antimalárica. O objetivo desta tese foi inicialmente caracterizar a atividade do risedronato contra as formas intraeritrocitárias do parasita in vivo, além de identificar seu possível mecanismo de ação. A IC50 do risedronato foi de 20 <font face=\"Symbol\">mM em culturas de Plasmodium falciparum. Risedronato reduziu a biossíntese de FOH e GGOH e a isoprenilação de proteínas, inibindo a transferência do grupo FPP para as proteínas farnesiladas, entretanto, a transferência do GGPP para as proteínas geranilgeraniladas não foi inibida, isto também ocorreu quando proteínas ras e rab foram analisadas, sugerindo que a droga está inibindo a enzima FPPS. A enzima FPPS de P. falciparum foi expressa e obtivemos uma proteína recombinante fusionada a GST (rPfFPPS). Os substratos IPP, DMAPP, GPP e FPP foram utilizados para determinação da atividade catalítica da enzima, demonstrando FPP e GGPP como principais produtos. Os valores de Km para os diferentes substratos foi determinado. Demonstramos também que rPfFPPS é inibida por risedronato, podendo ser explorado como potencial alvo antimalárico. / The increased resistance of the malaria parasite most of antimalarial drugs are available, making it necessary to search for new compounds with potential antimalarial activity. The aim of this thesis was initially characterize the activity of risedronate against intraerythrocytic forms of the parasite in vivo, and identify its possible mechanism of action. The IC50 of risedronate was 20 <font face=\"Symbol\">mM in cultures of Plasmodium falciparum. Risedronate reduced biosynthesis and FOH, GGOH and protein isoprenylation, inhibiting the transfer of FPP group for farnesylated proteins, however, the transfer of GGPP to geranygeranylated proteins was not inhibited, this also occurred when ras and rab proteins were analyzed, suggesting that the drug is inhibiting the enzyme FPPS. The FPPS enzyme from P. falciparum was expressed and obtained a recombinant protein fused to GST (rPfFPPS). The substrates IPP, DMAPP, GPP and FPP were used to determine the catalytic activity of the enzyme, demonstrating FPP and GGPP as main products. The Km values for the various substrates were determined. We also demonstrate that rPfFPPS is inhibited by risedronate, which can be exploited as potential antimalarial target.

Orientador: Margarida Maria Barros / Coorientador: Filipe Giardini Pereira Bonfim / Resumo: Os Peixes foram alimentados com dietas contendo níveis de pó de gengibre (GgP) para verificar seus efeitos sobre o desempenho produtivo e resistência à infecção bacteriana. Um grupo de 540 tilápias-do-Nilo (8,2 g ± 0,34) foi distribuído aleatoriamente em 36 aquários de 250 L (15 peixes / tanque) e alimentadas com seis dietas práticas, uma sem a adição de gengibre (0 GgP, dieta basal, controle positivo) e níveis crescentes de suplementação de 0,25% (0,25 GgP), 0,5% (0,5 GgP), 0,75% (0,75 GgP), 1% (1 GgP) e 1,5% da dieta GgP (1,5 GgP). Estas dietas foram formuladas para conter 29% de proteína digestível e 18 MJ de energia digestível kg-1. Após 30 dias de alimentação, determinou-se o desempenho produtivo, os parâmetros hematológico e imunológico e a atividade das enzimas do sistema antioxidantes. Em seguida, os peixes foram submetidos a desafio com Aeromonas hydrophila e a mortalidade foi registrada por 15 dias. Os mesmos parâmetros e atividade de enzimas do sistema antioxidantes foram determinados após esse tempo. Peixes alimentados com dietas contendo níveis acima de 0,5 GgP apresentaram maior peso final e taxa de crescimento específica. Maior ingestão de ração foi determinada nos peixes alimentados com dietas contendo 1GgP e 1,5 GgP (P <0,05). Quanto aos parâmetros hematológicos e imunológicos, antes ou após o desafio bacteriano, peixes alimentados com 0 GgP e 1,5 GgP apresentaram os piores resultados para todos os parâmetros. Os peixes alimentados com 1 GgP mostraram a maior... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available / Mestre

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2013-04-10T13:59:40Z No. of bitstreams: 2 Patricia_M_Lima_Dois.doc: 131072 bytes, checksum: 98e1ab34d602b80d18a06d92c6bc168a (MD5) Patricia_M_Lima_um.pdf: 1534203 bytes, checksum: e84c34b0ca61e948c1a489cec5fb02f9 (MD5) / Approved for entry into archive by Priscila Nascimento(pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2013-04-10T14:30:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Patricia_M_Lima_Dois.doc: 131072 bytes, checksum: 98e1ab34d602b80d18a06d92c6bc168a (MD5) Patricia_M_Lima_um.pdf: 1534203 bytes, checksum: e84c34b0ca61e948c1a489cec5fb02f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-10T14:30:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Patricia_M_Lima_Dois.doc: 131072 bytes, checksum: 98e1ab34d602b80d18a06d92c6bc168a (MD5) Patricia_M_Lima_um.pdf: 1534203 bytes, checksum: e84c34b0ca61e948c1a489cec5fb02f9 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Klebsiella sp. é uma bactéria ubíqua, responsável por infecções nosocomiais oportunistas. Linhagens multirresistentes a antibióticos têm se tornado um problema cada vez mais freqüente no mundo todo. Estudos objetivando a determinação do potencial patogênico dos isolados ambientais são escassos. K. pneumoniae de origem ambiental poderia estar atuando como reservatório de genes de resistência que eventualmente poderiam ser transferidos e levar ao aparecimento linhagens multirresistentes. Nosso objetivo é determinar o perfil de resistência aos antimicrobianos de isolados clínicos e ambientais de K. pneumoniae, determinar os genótipos circulantes e sua clonalidade e caracterizar a genética da resistência observada. A susceptibilidade a 9 classes de antibióticos foi determinada para os 76 isolados clínicos e ambientais. De modo geral, os isolados clínicos mostraram-se resistentes a maioria das classes de antibióticos testadas, enquanto os isolados ambientais mostraram-se suscetíveis às diferentes classes. A pesquisa por elementos genéticos associados a resistência a antibióticos mostrou a presença de integron de classe 1 entre os isolados clínicos e integron de classe 2 em isolados ambientais. Os principais cassetes identificados no integron de classe 1 foram acetilt- e adenil-transferases ou dihidrofolatoredutase, os cassetes mais frequentemente encontrados nessa classe. No integron de classe 2, foi caracterizado o arranjo sat-aadA. Essa é a primeira identificação de integron de classe 2 em isolado ambiental de K. pneumoniae. A caracterização da relação genética entre os isolados, utilizando MLST, mostrou a existência de 45 sequencias-tipo(STs), das quais 24 novas. A análise por MLST mostrou que existe uma linhagem principal, distribuída pelo Brasil. Identificamos STs pandêmicos: ST11, ST23, ST37, ST423 e ST437 e sua distribuição mostra a existência de complexos clonais distribuídos em diferentes regiões geográficas do Brasil. / Klebsiella sp. Are ubiquitous bacteria associated with opportunistic nosocomial infections. Multiresistant strains to antibiotics have become an increasingly common problem worldwide. Studies focused on determining the pathogenic potential of environmental isolates are scarce. K. pneumoniae environmental strains could be acting as reservoirs of resistance genes that could be transferred and eventually lead to the emergence of multiply antibiotic-resistant strains. Our aim is to determine the antimicrobial resistance profiles of clinical and environmental K. pneumoniae strains, characterize the circulating genotypes and their clonality, and investigate the presence of genetic elements associated with the resistance observed, in Brazil. The susceptibility to nine classes of antibiotics was determined for 76 clinical and environmental isolates. There is a prevalence of the multidrug resistant phenotype (MDR) within the clinical isolates, whilst the environmental isolates are susceptible to different classes of antibiotics. The search for genetic elements associated with antibiotic resistance revealed the presence of class 1 and class 2 integrons among clinical and environmental isolates, respectively. The main gene cassettes present in class 1 integrons were aac and aad (acetylt- and adenyl-transferases) or dfr (dihydrofolateredutase), the most commonly found in class 1 integrons. The class 2 integron harbored the sat-aadA arrangement. This is the first observation of class 2 integrons in environmental K. pneumoniae isolates. Using the MLST approach, the genetic relationship among the strains showed 45 sequence-types (STs), of which 24 have not been described yet. The MLST analysis revealed a major K. pneumoniae lineage distributed throughout Brazil. Pandemic STs were identified among the clinical strains: ST11, ST23, ST37, ST423 and ST437. Their distribution shows the existence of clonal complexes throughout geographic regions of Brazil.

Submitted by Fabiana Gonçalves Pinto (benf@ndc.uff.br) on 2016-10-14T16:58:18Z No. of bitstreams: 1 Bruna Maiara Ferreira Barreto.pdf: 2112648 bytes, checksum: 4c761e7719f7c47c46f78b5978ed12be (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-14T16:58:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruna Maiara Ferreira Barreto.pdf: 2112648 bytes, checksum: 4c761e7719f7c47c46f78b5978ed12be (MD5) Previous issue date: 2015 / Mestrado Acadêmico em Ciências do Cuidado em Saúde / Este estudo teve como objetivo analisar a presença de cepas de Staphylococcus aureus nas lesões cutâneas crônicas tratadas com hidrogel a 2% e placa de poliuretano. Para tal, foi realizada pesquisa descritiva, com abordagem quantitativa, tendo como campo de pesquisa o Ambulatório de Reparo de Feridas do Hospital Universitário Antônio Pedro (HUAP/UFF) e a Policlínica Comunitária da Engenhoca (PCE), ambos localizados na cidade de Niterói, RJ. A análise microbiológica foi realizada no Laboratório de Controle Microbiológico da Faculdade de Farmácia da Universidade Federal Fluminense (UFF) e no Instituto de Microbiologia Paulo de Góes da Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ). A coleta de dados foi realizada em duas etapas, a primeira relacionada ao exame clínico com a identificação do paciente e descrição clínica das lesões e a segunda relacionada à coleta do espécime clínico utilizando-se como instrumento de coleta o swab. Todas as cepas de S. aureus analisadas foram identificadas por MALDI-TOF e a suscetibilidade a antimicrobianos foi determinada pelo teste de disco-difusão em meio sólido, seguindo as normas recomendadas do CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi empregada na detecção do gene mecA e genes lukF-PV e lukS-PV. A diversidade clonal foi verificada pelo PFGE (pulsed-field gel electrophoresis). O S. aureus foi detectado em 82,9% (29/35) dos pacientes em uso de hidrogel e em 100% (8/8) dos pacientes em uso de placa de poliuretano. Os pacientes em uso de placa de poliuretano com prata apresentaram mais sinais clínicos de infecção quando comparados aos pacientes em uso de hidrogel a 2%, principalmente pela presença do exsudato purulento. A razão de prevalência demonstrou que os pacientes que usaram a placa de poliuretano com prata tiveram pelo menos 3,6 vezes maior chance de apresentarem infecção nas feridas quando comparados com os pacientes em uso de hidrogel. A maioria dos S. aureus identificados, em ambos os campos de pesquisa, apresentou resistência à penicilina, meticilina, eritromicina e clindamicina. Em cinco pacientes (10 cepas- 20%) foi observada amplificação para o gene mecA, demonstrando a colonização por MRSA. Não foi observada amplificação para os genes lukF-PV e lukS-PV. Embora tenha sido detectada grande diversidade genética entre as cepas analisadas, o mesmo padrão se repetiu entre os S. aureus coletados em dois momentos diferentes nos mesmos pacientes. No entanto, as amostras 1 e 32/32* apresentaram o mesmo padrão de fragmentação de DNA pelo PFGE. Através da razão de prevalência, determinou-se que os pacientes com MSSA têm 16 vezes mais chance de ter infecção em feridas quando comparados aos pacientes com MRSA. Assim, o tratamento com hidrogel a 2% ou placa de poliuretano não interferiu na colonização por S. aureus. Além disso, verificamos que o uso de placa de poliuretano com prata não é indicado para feridas infectadas quando o paciente possuir como comorbidades hipertensão arterial e insuficiência venosa crônica. / This study aimed to analyze the presence of Staphylococcus aureus in chronic wounds treated with hydrogel 2% and polyurethane plate. To do this, was done a descriptive study with a quantitative approach. The field research was the Wound Repair Clinic at the University Hospital Antônio Pedro (HUAP / UFF) and the Community Polyclinic of the Engenhoca, both located in the city of Niterói, RJ. The microbiological analysis was conducted at the Laboratory of Microbiological Control of the Faculty of Pharmacy of the University Federal Fluminense (UFF) and the Institute of Microbiology Paulo de Góes of the University Federal of the Rio de Janeiro (UFRJ). Data collection was carried out in stages, the first related to the clinical examination with the patient identification and clinical description of the wounds and the other step related to the collection of the clinical specimen using the swab. All strains of S. aureus analyzed were identified by MALDI-TOF and susceptibility to antibiotics was determined by disk diffusion test on solid medium following the standards recommended by CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). The polymerase chain reaction (PCR) was used in the detection of the mecA gene and lukF-PV and luks-PV genes. The clonal diversity was verified by PFGE (pulsed-field gel electrophoresis). The S. aureus was detected in 82.9% (29/35) of patients using hydrogel and in 100% (8/8) the patients using polyurethane plate. Patients using polyurethane plate with silver presented more clinical signs of infection when compared to patients using hydrogel 2%, mainly by the presence of purulent exudate. The prevalence ratio showed that patients who used polyurethane plate with silver had at least 3.6 times more chance to have infection in the wound when compared to patients using hydrogel. Most S. aureus identified in both research fields presented resistance to penicillin, methicillin, erythromycin and clindamycin. Five patients (10 strains - 20%) were observed amplification for the gen mecA demonstranting colonization by MRSA. There was no amplification for lukF-PV and lukS-PV genes. Although was detected a big genetic diversity among the strains analyzed, the same pattern repeated among the S. aureus collected at two different times from the same patients. However, samples 1 and 32/32* showed the same fragmentation pattern by PFGE. Through the prevalence ratio identified that patients with MSSA had 16 times more likely to have infection in wounds when compared to patients with MRSA. Thus, the treatment with hydrogel 2% or polyurethane board did not interfered in the colonization by S. aureus. In addition, we perceived that the use of polyurethane plate with silver is not indicated for infected wounds when patients had comorbidities such as hypertension and chronic venous insufficiency.

Rhipicephalus (Boophilus) microplus é o parasito de maior importância econômica para a produção bovina. Há suspeita de resistência disseminada a ivermectina (IVM), droga amplamente utilizada para seu controle e seu diagnóstico preciso se faz necessário. Neste trabalho foram padronizados testes diagnósticos in vitro que, ao serem aplicados a campo no Brasil, diagnosticaram a resistência em 18 de 30 populações testadas. A resistência in vitro foi confirmada por teste in vivo. Testes com sinergistas sobre cepa resistente isolada indicaram que a destoxificação enzimática tem papel secundário na resistência. Não foram encontradas mutações associadas à resistência no trecho analisado do gene GluCl. Informações obtidas sobre evolução da resistência a campo e em laboratório poderão ser úteis para o uso de IVM no controle de R. (B.) microplus. Os estudos conduzidos sobre mecanismos de resistência podem servir para o desenvolvimento de marcadores moleculares diagnósticos de resistência a IVM. / Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the most economically important parasite for cattle production. There is suspicion of widespread resistance to ivermectin (IVM), a drug widely used for their control and being necessary its accurate diagnosis. In this study were standardized in vitro diagnostic tests that, when applied to the field in Brazil, diagnosed resistance in 18 of 30 populations tested. The in vitro resistance was confirmed by a field trial. Tests with synergists on an isolated resistant strain indicated that enzyme detoxification has a secondary role in resistance. There were no mutations associated with resistance in the analyzed fragment of the gene GluCl. Information obtained about the evolution of resistance in field and laboratory may be useful for the use of IVM in the control of R. (B.) microplus. The conducted studies on resistance mechanisms may serve for the development of diagnostic molecular markers of resistance to IVM.

Pseudomonas aeruginosa é um dos principais agentes de infecção hospitalar que tem adquirido um caráter endêmico decorrente a sua resistência intrínseca e/ou adquirida aos antibacterianos comercialmente disponíveis. O objetivo do estudo foi avaliar, in vitro, opções terapêuticas baseadas na atividade sinérgica. Dez cepas de P. aeruginosa clonalmente não relacionadas, previamente caracterizadas como produtoras de metalo-beta-lactamase (M<font face=\"Symbol\">bL) do tipo SPM-1, VIM-1 e PA GIM-1, foram avaliadas. O efeito sinérgico foi investigado por Checkerboard e Time-Kill. As combinações [Piperacilina/Tazobactam x Aztreonam] e [Tigeciclina x nanofragmentos de bicamada de brometo de dioctadecildimetilamônio (DDA)] mostraram atividade sinérgica para 90 e 100% das cepas, respectivamente. Os resultados respaldam o uso terapêutico combinado de [Piperacilina/Tazobactam x Aztreonam], contra infecções produzidas por cepas de P. aeruginosa multirresistentes produtoras de M<font face=\"Symbol\">bLs, além disso, [DDA/Tigeciclina] pode constituir a base para consolidar uma nova forma farmacêutica de uso clínico. / Pseudomonas aeruginosa is a leading cause of nosocomial infections, which it has acquired an endemic status due to their intrinsic or acquired resistance to antibacterial agents commercially available. The aim of the study was to evaluate in vitro therapeutic options based on the synergistic activity. Ten clonally unrelated strains of P. aeruginosa, previously characterized as metallo-beta-lactamase (M<font face=\"Symbol\">bL) producers (i.e., SPM-1, VIM-1 and PA GIM-1) were evaluated. The synergistic effect was investigated by checkerboard and Time-Kill assays. The combinations [Piperacillin/Tazobactam x Aztreonam] and [Tigecycline x bilayer fragments of dioctadecyldimethylammonium bromide (DDA)] showed synergistic activity for 90 and 100% of the strains, respectively. The results support the use of combined therapy by using [Piperacillin/Tazobactam x Aztreonam] against infections produced by strains of P. aeruginosa producing M<font face=\"Symbol\">bLs, moreover, [DDA / Tigecycline] may be the basis for build a new pharmaceutical form for clinical use.

Acinetobacter baumannii é um importante agente de infecções relacionadas à assistência à saúde, principalmente nas unidades de terapia intensiva no Brasil, sua resistência a antimicrobianos vem aumentando nas últimas décadas e as opções para o tratamento são restritas. Em 2011, no HC-FMUSP, ocorreu um surto de infecção por A. baumannii resistente a todos os antibióticos e desde então isolados resistentes a todas as classes de antibióticos vêm sendo identificados no hospital. O estudo investigou o efeito de combinações antimicrobianas contra 20 isolados clínicos de A. baumannii, sendo sete isolados resistentes (2011 a 2012) e treze sensíveis a colistina (2002 a 2004), obtidas do banco de cepas do LIM-54 com diferentes mecanismos de resistência. Foram realizados, concentração inibitória mínima dos antibióticos, avaliação da clonalidade por Pulsedfield gel electrophoresis, detecção de mecanismos de resistência por reação de amplificação em cadeia da polimerase, análise de proteínas da membrana externa e baseado na clonalidade e o sequenciamento total do genoma de quinze isolados. Sinergismo foi investigado usando os métodos de checkerboard e time-kill. Para monitorização da expressão do sistema regulatório PmrCAB e dos genes responsáveis pela biossíntese do lipopolissacarídeo, foi realizada reação em cadeia da polimerase quantitativa. Todos os isolados foram resistentes ao meropenem e a rifampicina. OXA- 23 e OXA-143 foram as carbapenemases mais frequentes. Quatro isolados mostraram perda de uma proteína de membrana externa denominada OMP 43kDa. Os isolados sensíveis a colistina pertenciam a diferentes clones e Multilocus Sequence Types, também apresentaram o maior efeito sinérgico com fosfomicina-amicacina. A resistência a colistina foi associada com a superexpressão do gene pmrA. Seis isolados resistentes a colistina, pertenciam ao Complexo Clonal 113 e o maior efeito sinérgico foi observado com combinações de colistina-rifampicina seguido de colistina-vancomicina. Foram encontrados diferentes genes de virulência envolvidos com formação de biofilme, aderência, produção de enzimas e captação de ferro / Acinetobacter baumannii is an important agent of infections related to health care, especially in intensive care units in Brazil, its antimicrobial resistance has increased in recent decades and the options for treatment are restricted. In 2011, in the HC-FMUSP, there was an outbreak of A. baumannii infection resistant to all antibiotics and since then isolates resistant to all classes of antibiotics have been identified in the hospital. The study investigated the effect of antimicrobial combinations against 20 clinical isolates of A. baumannii, seven isolates colistin resistant (2011-2012) and thirteen colistin sensitive (2002-2004) from LIM-54 strains bench with different resistance mechanisms. Minimum inhibitory concentration of antibiotics, clonality evaluation by pulsed-field gel electrophoresis and detection of resistance mechanisms by polymerase chain reaction, outer membrane protein analysis and based on clonality, the whole genome sequencing of fifteen isolates were performed. Synergism was determined using checkerboard and time-kill methods. For expression monitoring of the regulatory system PmrCAB and the genes responsible for the biosynthesis of lipopolysaccharide, it was performed quantitative polymerase chain reaction. All isolates were resistant to meropenem and rifampicin. OXA-23 and OXA-143 were the most frequent carbapenems. Four isolates showed loss of one outer membrane protein called OMP 43kDa. Colistin susceptible isolates belonged to different clones and Multilocus Sequence Types; it also showed the greatest synergistic effect with fosfomycin-amikacin. The colistin resistance was involved in overexpression of the pmrA gene. Six colistin-resistant isolates belonged to Clonal Complex 113 and higher synergistic effect were observed with colistin-rifampicin followed by colistin-vancomycin combinations for these isolates. We found different virulence genes involved in biofilm formation, adhesion, enzyme production and iron uptake

As populações de aves antárticas têm sido estudadas e consideradas indicadoras da qualidade do ecossistema marinho, especialmente dos oceanos do sul, ao longo dos últimos 50 anos. Existem cerca de 40 espécies de aves marinhas que se reproduzem em áreas descobertas de gelo. Dentre as aves marinhas antárticas, os pinguins são os que têm a maior representatividade ecológica e são considerados espécies sentinelas para o estudo das mudanças ambientais nesse continente. Esses animais representam 90% da biomassa de aves nos oceanos do sul, e suas colônias estão distribuídas nas ilhas antárticas e subantárticas bem como sobre o Continente Antártico. Há três espécies de pigoscelídeos mais representativos desta biomassa, são eles: Pygoscelis papua (Pinguim gentoo), Pygoscelis adeliae (Pinguim-de-adélia) e Pygoscelis antarcticus (Pinguim-de-barbicha). Os pinguins antárticos estão entre as aves de menor contato com humanos, o que os torna possíveis indicadores da presença natural de genes de resistência a antimicrobianos na microbiota intestinal de aves e no ambiente. O objetivo desta dissertação foi avaliar a presença de resistência a antimicrobianos na microbiota intestinal de P. antarcticus e de P. papua, e compará-las à microbiota de Spheniscus magellanicus (pinguins-de-magalhães). Os S. magellanicus habitam a Argentina, Chile e Ilhas Malvinas, locais em que há variadas atividades humanas. Foram coletadas amostras de fezes aparentemente frescas de 46 pinguins P.antarcticus e de 12 pinguins P. papua, nas suas respectivas colônias na Ilha Elefante, em dezembro de 2014. De S. magellanicus foram coletadas, com auxílio de suabes cloacais, amostras de 19 indivíduos, encontrados na costa norte do Rio Grande do Sul, de Quintão a Torres, durante os meses de inverno de 2015 e de 2016. As amostras de microbiota dos pinguins foram cultivadas em ágar LB e os isolados bacterianos foram triados para os seguintes antimicrobianos: eritromicina (≥ 8μg/mL), estreptomicina (≥ 2.000 μg/mL), tetraciclina (≥ 16 μg/mL) e vancomicina (≥ 32 μg/mL). Em 10 amostras de P. antarcticus e em 15 amostras de S. magellanicus foram identificadas bactérias resistentes a pelo menos um dos antimicrobianos testados. Todas as amostras de P. papua foram sensíveis a esses antimicrobianos. As espécies dos isolados resistentes foram identificadas pelo sequenciamento do rRNA 16S, que revelou sete gêneros, sendo os mais recorrentes Enterococcus sp. e Staphylococcus sp. Esses isolados resistentes também foram triados para a presença de genes de resistência aos antimicrobianos. O tet(M) foi mais abundante em S. magellanicus (5) do que em P. antarcticus (3), ao passo que o int e van(B) foram identificados somente em P. antarcticus (três e um, respectivamente). O gene erm(B) não foi encontrado em nenhum dos isolados. Uma vez que a fração não cultivável das fezes também pode apresentar genes de resistência, foi realizada a extração do DNA das fezes de pinguins antárticos para obtermos DNA de todos os micro-organismos presentes. Os genes mais recorrentes nas amostras de DNA total das fezes de P. antarcticus e P. papua foram, respectivamente, int (5 e 7), seguido de tet(M) (1 e 5). O van(B) foi encontrado em amostras das duas espécies de pinguins, enquanto que o erm(B) foi encontrado somente nas amostras de P. papua. De acordo com esses resultados, houve mais resistência a antimicrobianos na fração cultivável da microbiota de pinguins-de-magalhães do que em pinguins antárticos. Na fração não-cultivável, foram encontrados mais genes de resistência nas amostras de P. papua do que de P. antarcticus. / Antarctic seabird populations have been studied as bioindicators of the nature variability in the Southern Ocean marine ecosystems over the last 50 years. Among the Antarctic seabirds, the most representative species are penguins; they represent 90% of total biomass of birds in the Southern Ocean, and are considered sentinels for environmental changes in the Antarctic region. Pygoscelis antarcticus and P. papua are the most prevalent species in Antarctida. Because they remain among the wild birds with least contact with humans, their microbiota may serve as indicators of antimicrobial resistance in the environment. The aim of this work was to evaluate the antimicrobial resistance present in the microbiota of P. antarcticus and P. papua, and compare it with the microbiota of Spheniscus magellanicus (Magellanicus penguins). Magellanicus penguins inhabit Argentina, Chile and Falkland Islands, and therefore have more contact with humans. We have collected samples of apparently fresh feces from P. antarcticus (n = 46) and from P. papua (n = 12) in their respective colonies located in the Elephant Island in December 2014. From S. magellanicus, we have collected cloacal swabs (n = 19) from specimens found in the northern coast of Rio Grande do Sul, from Quintão to Torres, during the winter months of 2015 and 2016. All samples were evaluated for the presence of resistant bacteria to the following antimicrobials: erythromycin (≥ 8μg/mL), streptomycin (≥ 2.000 μg/mL), tetracycline ( ≥ 16 μg/mL) and vancomycin (32 μg/mL). We have isolated resistant bacteria from 10 samples of P. antarcticus and from 15 samples of S. magellanicus; there was no bacterial growth in the presence of any of these antimicrobials from samples of P. papua feces. The species of resistant bacteria were identified by 16S rRNA sequencing: among the 7 genera identified, the most frequent were Enterococcus sp. and Staphylococcus sp. Resistant bacteria were screened for the resistance genes ermB, tet(M), int and van(B). tet(M) was more frequent in S. magellanicus (5) than in P. antarcticus (3), while int and van(B) were identified only in P. antarcticus (3 and 1, respectively). The erm(B) gene was not identified in any isolate. Considering that the non-cultivable fraction from feces can also harbor resistance genes, we extracted DNA from feces of the Antarctic penguins in a attempt to obtain DNA from all micro-organisms of their microbiota. The most abundant genes present in the microbiota of P. antarcticus and P. papua were, respectively: int (5 and 7) and tet (M) (1 and 5). The van(B) gene was found in one sample of each species, while erm(B) was found in only one sample of P. papua. According to our results, antimicrobial resistance is more frequent in the cultivable microbiota of S. magellanicus than of P. antarcticus. In the non-cultivable fraction, resistance genes were more frequent in samples from P. papua than from P. antarcticus.

Resumo não disponível.

Orientador: Adriano Sakai Okamoto / Banca: Raphael Lucio Andreatti filho / Banca: Guilherme Augusto Marietto Gonçalves / Resumo: O presente trabalho teve como proposta realizar a caracterização probiótica in vitro de amostras de Lactobacillus spp., provenientes de conteúdo intestinal de perus adultos e saudáveis, através do isolamento e identificação por características morfológicas, moleculares e fisiológicas. Inicialmente foram isoladas 170 amostras, as quais foram avaliadas pelo método de coloração de gram, testes de produção de catalase, hidróxido de potássio, produção de gás através da fermentação da glicose e produção de gás sulfídrico em Triple Sugar Iron (TSI). Após foram pré-selecionadas 74 amostras, que passaram por identificação molecular com a Polymerase Chain Reaction (PCR) e submetidas ao PCR-ARDRA com uso das enzimas Sph I, Nco I, Nhe I, Ssp I, Sfu I, Dra I, Vsp I, Eco RI, Hinc II, Hind III e Avr II. A avaliação da resistência bacteriana ocorreu através dos testes de suco gástrico artificial e sua tolerância a sais biliares, capacidade de adesão à mucosa intestinal, potencial de multiplicação, provas de antagonismo contra Salmonella Heidelberg, produção de peróxido de hidrogênio, antibiograma e avaliação dos genes de resistência antimicrobianos integrons C e submetidas ao sequenciamento genético. Concluiu-se que 11 amostras foram selecionadas, sendo uma de Lactobacillus frumenti, 9 de Lactobacillus reuteri e uma de Lactobacillus johnsonii, todas com resultados nos testes de antagonismo, resistência ao suco gástrico, resistência a sais biliares, hidrofobicidade, potencial de multiplicação, produção de peróxido de hidrogênio e com resistência a mais de 50% dos antimicrobianos testados, porém não apresentaram genes de resistência antimicrobianos na técnica que avalia genes integrons C, baseado nos resultados de todas as análises as amostras selecionadas podem vir a ser administradas in vivo. / Abstract: The aim of the present work was to characterize the in vitro probiotic characterization of Lactobacillus spp. Samples from intestinal contents of adult and healthy turkeys through isolation and identification by morphological, molecular and physiological characteristics. Initially, 170 samples were isolated, which were evaluated by gram staining method, catalase production tests, potassium hydroxide, gas production through glucose fermentation and the production of sulphide gas in Triple Sugar Iron (TSI). After being pre-selected 74 samples, which were submitted to PCR-ARDRA using the enzymes Sph I, Nco I, Nhe I, Ssp I, Sfu I, Dra I, Vsp I, Eco RI, Hinc II, Hind III and Avr II. The evaluation of bacterial resistance occurred through the tests of artificial gastric juice and its tolerance to bile salts, intestinal mucosal adhesion capacity, multiplication potential, Salmonella Heidelberg antagonism tests, hydrogen peroxide production, antibiogram and evaluation of the genes of Antimicrobial resistance and submitted to genetic sequencing. It was concluded that 11 samples were selected, one of Lactobacillus frumenti, 9 of Lactobacillus reuteri and one of Lactobacillus johnsonii, all with results in the tests of antagonism, resistance to gastric juice, resistance to bile salts, hydrophobicity, multiplication potential, Hydrogen peroxide production and resistance to more than 50% of the antimicrobials tested, but did not present antimicrobial resistance genes in the technique that evaluates integron C genes, based on the results of all the analyzes the selected samples can be administered in vivo. / Mestre