Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-08-05T12:52:53Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Natália Ferrão Castelo Branco Melo.pdf: 2416494 bytes, checksum: 8516eb4a70660705f0986b4924b4a956 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-05T12:52:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Natália Ferrão Castelo Branco Melo.pdf: 2416494 bytes, checksum: 8516eb4a70660705f0986b4924b4a956 (MD5) Previous issue date: 2016-02-22 / FACEPE / As uvas são frutas economicamente importantes, perecíveis e susceptíveis a deterioração microbiana. O uso de coberturas comestíveis a base de gel de quitosana tem sido estudado na conservação de frutas, devido a sua ação antimicrobiana e baixa toxicidade. Essas propriedades podem ser potencializadas quando a quitosana apresenta-se no formato de nanopartículas. Portanto, o objetivo do trabalho foi avaliar a ação antimicrobiana e potencializadora de cobertura comestível formada da associação de gel e nanopartículas de quitosana na conservação de uvas. As quitosanas fúngicas foram cedidas pela empresa Kitozyme®, (Kiofine® e Kionutrime®) as quais foram obtidas da parede celular do Aspergillus niger. A caracterização das quitosanas foram realizadas para determinação do grau de desacetilação, características estruturais e peso molecular, respectivamente pelas técnicas de Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio, Espectroscopia de Infra-vermelho e viscosidade. As nanopartículas foram preparadas pelo método de gelatinização iônica e posteriormente passaram por um tratamento térmico (50ºC/900rpm/30min). Sua caracterização foi feita através das técnicas de Medidas de Espalhamento Dinâmico de Luz e Microscopia Eletrônica de Varredura e Transmissão. O teste de microdiluição foi utilizado para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) e bactericida mínima (CBM) das nanopartículas de quitosana, gel de quitosana e gel enriquecido com nanopartículas frente a bactérias patogênicas de origem alimentar. As nanopartículas em diferentes concentrações (CIM/2, CIM, 2CIM) foram misturadas ao gel de quitosana (20mg/ml) para formação das coberturas aplicadas nas uvas. Foram avaliados os aspectos físico-químicos, sensoriais e a bioatividade das uvas (com e sem coberturas) frente à Escherichia coli e Salmonella spp, durante o armazenamento em temperatura ambiente (25ºC – 12 dias) e refrigerada (12º - 24 dias). Foi analisado também a citotoxicidade das coberturas através do teste da Membrana Corioalantoide do ovo de galinha (HET-CAM) fecundado e incubado por um período de 9-10 dias. Para determinar o grau de irritabilidade pelo HET-CAM, foram observadas a presença de vasoconstricção, coagulação e hemorragia, até 5 minutos após a exposição às substâncias testes. As quitosanas Kiofine® e Kionutrime® apresentaram, respectivamente, grau de desacetilação de 89,5% e 86% e peso molecular de 4, 35 x 104g/mol e 4 x 103 g/mol, sendo consideradas de baixo peso molar. As nanopartículas produzidas apresentaram formato esférico e tamanho médio de 101,7nm. As coberturas testes se apresentaram atóxica pelo método do HET-CAM, preservaram a qualidade físico-química e sensorial das frutas e inibiram o crescimento de Salmonella spp. e E. coli em uvas artificialmente infectadas. Os resultados obtidos no estudo demonstraram a efetividade do gel enriquecido com nanopartículas em diferentes concentrações (CIM/2, CIM, 2CIM) em inibir o crescimento de bactérias patogênicas de origem alimentar e prolongar a vida de prateleira de uvas durante o período estudado, tornando-se um alternativa promissora para conservação pós-colheita desse fruto. / The grapes stand out as an economically important fruit, perishable and susceptible to microbial spoilage. The use of edible coatings chitosan gel has been studied in the preservation of fruits, due to its antimicrobial activity and low toxicity. These properties can be potentiated when the chitosan are presented in the format of nanoparticles. Therefore, the objective of this study was to evaluate the antimicrobial action and potentiated of edible coatings formed by the association of chitosan gel and chitosan nanoparticles to the conservation of grapes. The fungal chitosan, Kiofine® and Kionutrime®, were obtained from the cell wall of Aspergillus niger, and were provided by Kitozyme®. The characterizations of chitosan were performed to determine the degree of deacetylation, structural characteristics and molecular weight, respectively by the techniques, Hydrogen Nuclear Magnetic Resonance, Infra-red spectroscopy and viscosity. The nanoparticles were prepared by ionic gelation method and thereafter underwent a thermal treatment (50 °C / 900rpm / 30min). Its characterization was carried out by Dynamic Light Scattering (DLS) and scanning electron microscopy (SEM) and transmission (TEM). The microdilution test was used to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal (MBC) of nanoparticles of chitosan, chitosan-gel and gel enriched with nanoparticles against food-borne pathogenic bacteria. Nanoparticles at different concentrations (MIC/2, MIC, 2MIC) were mixed with chitosan gel (20 mg/ml) for the formation of the edible coating applied to grapes. We evaluated the physical and chemical aspects, sensory and grapes (with or without covers) bioactivity against Escherichia coli and Salmonella, during storage at room temperature (25 °C - 12 days) and refrigerated (12ºC - 24 days). It was also examined the cytotoxicity of the edibles by Hen's Egg Test – Chorioallantoic Membrane (HET-CAM) fertilized and incubated for a period of 9-10 days. To determine the degree of irritability by the HET-CAM were observed the presence of lysis, coagulation and bleeding, up to 5 minutes after exposure to the test substances. Chitosan, Kiofine® e Kionutrime® presented, respectively, deacetylation degree of 89.5% and 86% and a molecular weight of 4.35 x 104g/mol and 4 x 103 g/mol, being considered of low molecular weight. The produced nanoparticles have spherical shape and medium size of 101,7nm. The edibles coatings tests are non-toxic by the HET-CAM method, preserved the physicochemical and sensory quality of fruits and inhibited the growth of Salmonella spp. and E. coli in artificially infected grapes. The results obtained in this study demonstrated the effectiveness of the gel enriched with nanoparticles at different concentrations (MIC/2, MIC, 2MIC) to inhibit the growth of pathogenic food-borne bacteria and extend shelf life of grapes, becoming a promising alternative for post-harvest conservation of this fruit.

Orientador: Marcelo Brocchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T15:02:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendes_GuilhermeMartinesTeixeira_M.pdf: 1976901 bytes, checksum: 9e7c5547a60ab82c824934c40b10ce27 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O gênero Salmonella spp é formado por bacilos gram-negativos, que podem ser divididos em 3 espécies: S. enterica, S. bongori e S. subterranea. A maioria das sorovariedades patogênicas para o homem está incluída no subgrupo I da espécie S. enterica. A infecção por S. enterica inicia-se com a ingestão de água ou alimentos contaminados. Estes microrganismos são patógenos intracelulares facultativos e, uma vez ingeridos, apresentam a capacidade de aderir e invadir células da mucosa intestinal, preferencialmente células M. Uma vez ultrapassada a mucosa intestinal, S. enterica invade, persiste e prolifera no interior de vacúolos de células do sistema retículo endotelial podendo assim, alcançar diferentes órgãos e tecidos do hospedeiro, causando infecção sistêmica. Sendo assim, linhagens mutantes avirulentas, mas ainda capazes de causar infecção transitória, são boas candidatas a potenciais vacinas vivas orais. Tais mutantes são potenciais carreadores de proteínas heterólogas, compondo, assim, as chamadas vacinas multi-valentes. Que seja de nosso conhecimento, não existem mutantes atenuados de S. enterica desenvolvidos inteiramente no Brasil, havendo necessidade de pagamento de patentes a grupos estrangeiros para sua utilização. Em eucariotos, o DNA cromossômico bacteriano está associado a proteínas (histonas) formando o núcleo, enquanto em procariotos, estas proteínas são denominadas histona-like, formando um nucleóide. Dentre essas proteínas podemos citar a IHF (integration host factor), um heterodímero que controla ou influencia vários processos celulares, como a duplicação e recombinação do DNA, além de regular positiva ou negativamente a expressão de vários genes. Neste estudo, mutantes nulos para os genes himA e himD de IHF foram criados pela técnica de recombinação homóloga mediada pelo sistema ? Red (Datsenko e Wanner, 2000) e testados quanto a atenuação da virulência e capacidade de desencadear resposta imune efetiva e protetora contra a salmonelose murina. Os mutantes também foram caracterizados quanto a diversas características biológicas, como a capacidade de invasão e sobrevivência intracelular, resistência a radicais reativos de oxigênio e nitrogênio, ente outras, sendo os resultados comparados com as respectivas linhagens selvagens. Os mutantes himA e himD de S. enterica foram atenuados e capazes de induzir resposta imune protetora quando desafiados com doses elevadas da linhagem selvagem, indicando que estas linhagens recombinantes são potenciais candidatas a vacinais vivas orais / Abstract: The genus Salmonella sp is formed by gram-negative bacilli, which can be divided into 3 species: S. enterica, S. bongori and S. subterranea. The majority of the serovars pathogenic to humans is included in the subgroup I of the S. enterica species. The infection with S. enterica starts either the ingestion of contaminated water or food. These microorganisms are facultative intracellular pathogens and, once ingested, they have the capacity to adhere and invade cells of the intestinal mucosa, with preference for M cells. Then, S. enterica can invade and proliferate within vacuoles of immune cells, particularly macrophages, achieving different organs and tissues of the host, causing systemic infection. Mutant strains of S. enterica with attenuation of the virulence but that are still able to cause a transient infection, are good candidates for potential live oral vaccines. These mutants are also good carriers of heterologous antigens to cells of the immunological system, been able to induce an effective immunological response. To the best of our knowledge, no mutants of this type were developed in Brazil leading to the needed to pay royalties to foreign groups for their use. In prokaryotes the genomic DNA are associated with a number of proteins, the so called histone-like proteins, with structural and regulatory properties, forming the nucleoid. The IHF (Integration Host Factor) is one of the more abundant histone-like in prokaryotes. IHF is a heterodimeric DNA-binding protein that controls a number of cellular processes, such as DNA duplication and DNA recombination and also modulates the expression of different genes. In this work we constructed recombinant strains of S. enterica mutants for the himA and himD genes that encode for the IHF subunits using the ? Red system (Datsenko and Wanner, 2000) and tested for attenuation and immunogenicity. The mutant strains were also characterized and compared to the parental strains for other biological characteristics such as the capacity to invade and proliferate into eukaryotic cells and to survive to different stress conditions. The S. enterica himA and himD mutant strains were attenuated for virulence and able to induce a protective immunity against the wild type strain of S. enterica indicating that these recombinant strains are candidates to formulate a new live oral vaccine / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Esse estudo comparou diferentes métodos fenotípicos e biomoleculares para avaliação da resistência antimicrobiana de 107 cepas de Salmonella spp. Isoladas de carcaças e couro de bovinos e de produtos cárneos. Os antimicrobianos testados foram ampicilina, cefotaxima, cloranfenicol, ciprofloxacina, gentamicina, imipenem, tetraciclina e trimetoprima. Os testes fenotípicos empregados foram: difusão do disco em ágar, utilizando discos produzidos por duas empresas diferentes e determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), realizada em placas de microtitulação e empregando tiras comerciais de antibióticos. O método biomolecular (PCR) objetivou a pesquisa de genes de resistência a antimicrobianos (blaTEM, blaOXA-1, blaPSE-1, cat1, cat2, floR, cmlA, cmlB, aac(3)IVa, aadB, aadD, aphA1, tetA, tetB, tetC, tetD, tetE, tetG e dhfrI) , localizados no cromossomo, plasmídeos e integrons classe 1, e foi aplicado para as cepas que apresentaram resistência a pelo menos um dos antibióticos testados por algum dos testes fenotípicos e para as cepas que apresentaram resultados contraditórios nos testes fenotípicos. Todos os métodos foram executados de acordo com as normas do ClinicaI and Laboratory Standards Institute. Foi detectada resistência a pelo menos um antibiótico em 26 cepas (24%), sendo que 20 (77%) dessas foram multirresistentes. A correlação de resultados obtidos pelo método de difusão de discos empregando os discos de duas marcas diferentes foi de 99,7%, enquanto a correlação dos resultados obtidos pelos dois métodos de determinação da CIM foi de 98,6%. Para os resultados obtidos pelos métodos de difusão de discos e determinação da CIM a correlação foi de 98,4%. Não foi observada uma boa correlação entre a presença dos genes detectados e o resultado apresentado pelos métodos fenotípicos. / This study compared different phenotypic and molecular methods for the evaluation of antimicrobial resistance of 107 strains of Salmonella spp. isolated from hides and carcasses of cattle and meat products. The antimicrobials tested were ampicillin, cefotaxime, chloramphenicol, ciprofloxacin, gentamicin, imipenem, tetracycline and trimethoprim. Phenotypic tests included agar disk diffusion, using disks produced by two different companies and determination of the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) conducted in microtiter plates and commercial antibiotic strips. The biomolecular method (PCR) focused antimicrobial resistance genes (blaTEM, blaOXA-1, blaPSE-1, cat1, cat2, floR, cmlA, cmlB, aac(3)IVa, aadB, aadD, aphA1, tetA, tetB, tetC, tetD, tetE, tetG e dhfrI) located on chromosomes, plasmids and class 1 integrons, and was applied to the strains that were resistant to at least one of the antibiotics tested as detected by the phenotypic tests and to strains that showed contradictory results in the phenotypic tests. All methods were performed according to the standards of the Clinical and Laboratory Standards Institute. Resistance to at least one antibiotic was detected in 26 strains (24%), and 20 (77%) of these were multidrug-resistant. The correlation between results obtained by disk diffusion method using discs of two different brands was 99.7%, while the correlation of the results obtained by the two methods of determining the MIC was 98.6 %. For the results of the methods of disc diffusion and MIC determination the correlation was 98.4%. There was no good correlation between the presence of genes detected and the result presented by phenotypic methods.

O cultivo do Litopenaeus vannamei representa destaque comercial na aqÃicultura do Nordeste do Brasil. Devido o elevado crescimento deste setor, tem-se observado, nos Ãltimos anos grandes perdas ocasionadas por doenÃas causadas por bactÃrias, uma vez que muitas doenÃas sÃo veiculadas atravÃs de Ãguas e alimentos contaminados. O objetivo desse trabalho foi avaliar as condiÃÃes higiÃnico-sanitÃrias da Ãgua utilizada nos tanques de cultivo e dos camarÃes neles cultivados de duas fazendas de cultivo de mÃdio e pequeno portes no Estado do Cearà e comparar as condiÃÃes higiÃnicas entre elas. Para isso foi feita uma estimativa do NÃmero Mais ProvÃvel (NMP) de coliformes toais (CT) e fecais (CF), quantificaÃÃo de Escherichia coli e pesquisa de Samonella. Foram analisados dois viveiros em cada fazenda e feitas 41 coletas de Ãgua e 37 de camarÃo em ambas fazendas, durante os meses de marÃo a outubro de 2004. Os resultados mostram que a contaminaÃÃo por CT e CF na Ãgua dos viveiros foi igual nas duas fazendas de mÃdio e pequeno portes, e que a contaminaÃÃo por CT e CF no camarÃo foi maior na Fazenda de Pequeno Porte. Das 80 cepas isoladas de Ãgua de todos os viveiros 65% foram de Escherichia coli e das 124 cepas isoladas de camarÃo E. coli representou 58,1%. A pesquisa de Salmonella foi confirmada em duas amostras de Ãgua e em uma de camarÃo dos quatro viveiros analisados. A detecÃÃo de cepas do sorogrupo de Salmonella e a presenÃa de E. coli nas amostras de Ãgua e camarÃo à preocupante, uma vez que estes patÃgenos sÃo de origem fecal e seu hÃbitat à o trato intestinal dos animais de sangue quente. à necessÃrio um monitoramento permanente das Ãguas utilizadas para o cultivo de camarÃo, uma vez que estes patÃgenos sÃo causadores de enfermidades para o homem. / The shrimp species Litopanaeus vannamei is the single most important aquiculture resource in Northeastern Brazil. However, the rapid expansion of the activity has brought with it a number of water and food-borne bacterial diseases. The objective of the present study was to evaluate and compare the sanitary conditions of shrimp and pond water sampled at one small and one medium-sized shrimp farm in Cearà State. Thus, Escherichia coli was quantified by determining the most probable number (MPN) of fecal coliforms (FC) and total coliforms (TC) in a total of 41 water and 37 shrimp samples collected from two ponds at each farm between March and October 2004 and tested for Salmonella. FC and TC levels were roughly the same in water from the two farms, but shrimp collected from the smaller farm were more severely contaminated. Considering all four ponds investigated, 65% of the 80 strains isolated from water samples and 58.1% of the 124 strains isolated from shrimp samples could be identified as E. coli, while Salmonella was detected in two water samples and one shrimp sample. Since these pathogens are of fecal origin and inhabit the intestines of warm-blooded animals, their presence in local shrimp culture is of great relevance to public health and should be carefully monitored by the authorities to prevent contamination through human consumption.

Em um matadouro-frigorífico de suínos, no Estado de São Paulo sob Serviço de Inspeção Federal, avaliou-se as condições higiênico-sanitárias de 240 meias-carcaças realizando a contagem de coliformes totais, de Escherichia coli e a pesquisa da presença de Salmonella spp em três regiões pré-definidas (face lateral externa do pernil, do peito e da papada), após o abate e depois do resfriamento; e analisou-se as dificuldades e facilidades na aplicação de uma Lista de Verificação de procedimentos de abate, adaptada a partir daquela utilizada pelo Serviço de Inspeção Federal, propondo-se uma nova. Vinte e uma Listas de Verificação foram preenchidas ao longo de 12 meses de estudo. Obteve-se coliformes totais em 98,7% (711/720) e Escherichia coli em 90,7% (653/720) das meias-carcaças analisadas e houve aumento do número de coliformes e Escherichia coli após o resfriamento das meias-carcaças. Salmonella spp esteve presente nas carcaças após o abate e depois do resfriamento numa freqüência de ocorrência de 5,4% (13/240). Concluiu-se que para se alcançar qualidade higiênica e higiênico-sanitária aceitável em carcaças de suínos faz-se necessário padronizar os procedimentos que envolvem o abate desde o recebimento dos animais até o resfriamento das meias-carcaças, incluindo-se o funcionamento e uso da câmara frigorífica, e para tanto implementar boas práticas formalizadas é o primeiro passo. A aplicação de uma Lista de Verificação mostrou-se um instrumento útil para se avaliar procedimentos de abate e permite identificar, de forma organizada, não-conformidades, implementar medidas corretivas e criar o histórico do controle da qualidade higiênico-sanitária do estabelecimento. / In one swine slaughterhouse in the State of São Paulo under the Federal Inspection Service the hygienic and the sanitary conditions of 240 swine half-carcasses have been evaluated by the counting of total coliforms and Escherichia coli and the research of presence of Salmonella spp in three predetermined regions (external lateral face of the ham, the belly and the neck), after the slaughter and after the cooling; and analyzed the facilities and the difficulties on the application of a Check-list of procedures in slaughter, based on that one used by the Service of Federal Inspection in the State of São Paulo, purposing a new Check-list. Twenty one Check-lists of good manufacturing practices (GMP) have been filled throughout 12 months of study. In the present work, it has been achieved coliforms in 98,7% (711/720) e Escherichia coli in 90,7% (653/720) of the half-carcasses assessed and the number of coliforms and Escherichia coli have increased after the cooling process. The Salmonella spp was present in the carcasses after the slaughter and after the cooling and the frequency of occurrence was of 5,4% (13/240). In conclusion, to acquire acceptable hygienic and sanitary quality in swine carcasses in a slaughterhouse it becomes necessary to standardize the procedures that involve the slaughter since the receiving of the animals until the cooling of the half-carcasses, including the working and the use of the frigorific room; in this way the implementation of GMP in the plant is the first step to be adopted. The resource of GMP Check-list shows itself as a useful instrument to verify the procedures of swine slaughter; it allows the organized identification of non-conformities, to implement corrective actions and creates a description registered on the performance of the establishment.

Os herbicidas são destinados ao controle das ervas daninhas e seu uso torna o fornecimento de alimentos abundante e livre de pragas, porém a exposição ocupacional e ambiental a esses compostos pode trazer riscos à saúde. O Brasil é o maior consumidor de praguicidas desde 2008, e os herbicidas correspondem por 45% do volume dessas substâncias. O tebutiurom e a trifluralina são herbicidas muito utilizados em culturas de cana-de-açúcar, e apesar de serem descritos como seletivos em seu mecanismo de ação, seus efeitos em organismos não alvo, como células humanas, são pouco conhecidos. O objetivo do trabalho foi avaliar os efeitos dos herbicidas tebutiuron e trifluralina em organismos não alvo. Para isso, utilizou-se a linhagem celular HepG2, e as concentrações testadas dos herbicidas foram de 1 a 100 ?mol/L e o tempo de exposição variou de 4 h à 14 dias de acordo com o ensaio. Utilizou-se também as linhagens TA98 TA100, TA97a e TA1535 da bactéria S typhimurium. Neste caso, as concentrações testadas dos herbicidas variaram de 0,1 à 5000 ?g/placa e o tempo de exposição foi de 66 h. As análises indicaram que o tebutiurom não apresenta potencial citotóxico, genotóxico, ou mutagênico nas condições testadas, evidenciando sua seletividade. Testes com a trifluralina, no entanto, mostraram que HepG2 apresentaram uma diminuição da capacidade em formar clones quando expostas à 100 ?mol/L por 14 dias, e uma redução na densidade celular quando expostas à 50 e 100 ?mol/L por 24, 48 e 72h. Tais efeitos ocorreram devido a uma diminuição da viabilidade celular, observada em 50 e 100 ?mol/L pelo ensaio MTT, e devido a um bloqueio no ciclo celular na fase S, evidenciado em 100 ?mol/L, ambos nos tempos de 24, 48 e 72h. O tipo de morte celular inicialmente observada foi a apoptose, através da marcação por anexina V em 100 ?mol/L após 48 e 72 h de exposição, e através da condensação e fragmentação nuclear em 100 ?mol/L após 24 e 48 h de exposição. Em 72 h, observou-se também necrose em 100 ?mol/L, por meio dos testes anexina V/PI e liberação de LDH. A morte celular pode estar relacionada à diminuição do potencial de membrana mitocondrial, observada em 50 e 100 ?mol/L após 24, 48 e 72h, e a um aumento na produção de espécies reativas, efeito observado em células expostas à 100 ?mol/L de trifluralina por 24 e 48 h. No entanto, observou-se que a via de resposta ao estresse oxidativo Keap1/Nrf2-ARE não foi ativada no tempo analisado de 24 h. Além disso, os testes de cometa e micronúcleo não indicaram potencial da trifluralina em provocar danos no material genético de HepG2. Complementarmente, o teste de Ames em linhagens de S typhimurium também não evidenciaram potencial mutagênico do herbicida. As análises com a trifluralina mostraram que o herbicida, apesar de não induzir genotoxicidade e mutagenicidade, possui potencial citotóxico em HepG2, indicando que pode afetar organismos não alvo, como células humanas / Herbicides are used to control weeds in agriculture. The use of these chemicals makes possible an abundant and pest free supply of food. However, occupational and environmental exposure to these compounds can lead to health risks. Brazil is the largest consumer of pesticides since 2008, and herbicides match for 45% of the volume of these substances. The tebutiurom and trifluralin herbicides are widely used in sugarcane crops, and although they are described as selective in its mechanism of action, effects on non-target organisms, such as human cells, are are poorly known. The aim of this work was to evaluate the effects of tebuthiuron and trifluralin herbicides on non-target organisms. To this end, we used the cell line HepG2, and herbicides were tested at concentrations of 1 to 100 ?M and the exposure time ranged from 4 h to 14 days in accordance with the assay. We also used the strains TA100 TA98, TA97a and TA1535 of the bacterium S. typhimurium. In this case, the herbicide concentrations tested ranged from 0.1 to 5000 ?g / plate and the exposure time was 66 h. Analyzes indicated that the tebutiurom has no cytotoxic, genotoxic or mutagenic potential at tested conditions, highlighting its selectivity. Tests with the Trifluralin, however, showed that HepG2 had a decreased ability in forming clones when exposed to 100 ?M for 14 days, and a reduction in cell density when exposed to 50 and 100 ?M of the herbicide for 24, 48 and 72h. These effects occurred due a decrease in cell viability observed at 50 and 100 ?M by MTT assay, and due to a block in the cell cycle into S phase, as evidenced in 100 ?M, both at 24, 48 and 72h. The type of cell death detected first was apoptosis. It was observed by staining with annexin V in cells exposed to 100 ?M of trifluralin during 48 and 72 h, and through the nuclear condensation and fragmentation in exposure with 100 ?M during 24 and 48 h of exposure. At 72 h, necrosis was also observed in 100 ?M through the annexin V / PI and LDH assays. Cell death occurrence may be associated with decreased mitochondrial membrane potential observed in 50 and 100 ?M after 24, 48 and 72h of exposure, and also may be associated with incresed production of reactive species, observed in cells exposed to 100 ?M of trifluralin for 24 and 48 h. However, it was observed that the oxidative stress response pathway Keap1 / Nrf2-ARE was not activated within 24 hours. Furthermore, comet assay and micronucleus test indicated no potential of trifluralin in causing DNA damage of HepG2. In addition, the Ames test using S. typhimurium strains also showed no mutagenic potential of the herbicide. The analyzes showed that the trifluralin, despite not induce genotoxicity and mutagenicity, have cytotoxic potential in HepG2, indicating that can affect non-target organisms, such as human cells.

Entre os microrganismos relevantes para a segurança alimentar, bactérias do gênero Salmonella tem se destacado como causadoras de toxinfecções, sendo motivo de preocupação constante para a cadeia de produção de aves e suínos. Os objetivos deste trabalho foram estudar a ocorrência de Salmonella spp. em suínos sadios ao abate e em animais apresentando sinais clínicos de salmonelose, tipificação dos isolados através da sorotipagem, polimorfismo do comprimento de fragmentos amplificados (AFLP) e eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Foram examinados 50 animais com sintomatologia sugestiva de salmonelose de 12 granjas dos Estados de São Paulo, Paraná e Rio Grande do Sul e analisadas amostras de fezes, linfonodos e suabes de carcaças de 124 animais de quatro frigoríficos do Estado de São Paulo. Dos suínos com sintomatologia clínica, 38% dos animais foram positivos para o isolamento de Salmonella spp., sendo selecionadas 45 cepas, classificadas como S.Typhimurium (29/45), S. Choleraesuis (9/45), S. Infantis (3/45) e S. enterica subsp. enterica (4/45). Dos 124 suínos sadios, 16,12% foram positivos para o agente, sendo isoladas 39 cepas que foram classificadas como S. London (11/39), S. Anatum (11/39), S. Typhimurium (8/39), S. Agona (2/39), S. Enteritidis (2/39) e S. enterica subsp. enterica (5/39). Através do AFLP, a caracterização genética dos isolados revelou índice discriminatório igual a 0,85 e gerou 12 perfis distintos. O índice discriminatório do PFGE foi 0,96 apresentando 31 padrões distintos. Ambas as técnicas possibilitaram uma boa correlação entre isolados, seus sorotipos e locais de isolamento, sugerindo grande potencial para sua aplicação na genotipagem de Salmonella spp. / Among relevant microorganisms to food security, Salmonella has been highlighted as a major cause of food borne diseases, being a constant concern for poultry and pig production chain. The goal of this study was to investigate the Salmonella spp incidence in healthy pigs at slaughter, as well as in pigs showing salmonellosis clinical signs, characterize strains by serotyping, Amplified fragment length polymorphism (AFLP) and Pulsed field gel electrophoresis (PFGE). Fifty animals, presenting salmonelosis suggestive clinical symptoms, from 12 swine herds from Sao Paulo, Parana and Rio Grande do Sul states were examined and clinical materials such as stool samples, lymph nodes and carcass swab from 124 animals from four Slaughterhouses in Sao Paulo state were analyzed. Among the pigs with clinical symptoms, 38% of the animals were positive for the Salmonella spp. isolation. Forty five strains were selected and classified as S.Typhimurium (29/45), S. Choleraesuis (9/45), S. Infantis (3/45) and S. enterica subsp. enterica (4/45). From the 124 healthy pigs studied, 16.12% were positive for the agent. Thirty nine strains were isolated and classified, by serotyping, as S. London (11/39), S. Anatum (11/39), S. Typhimurium (8/39), S. Agona (2/39), S. Enteritidis (2/39) and S. enterica subsp. enterica (5/39). Through AFLP, genetic characterization of isolates showed discriminatory index of 0.85 and generated 12 distinct profiles. The PFGE discriminatory index was 0.96, showing 31 distinct patterns. Both techniques allowed a good correlation between the isolates, its serotypes and isolation locations, suggesting great potential of its application in genotyping of Salmonella spp.

O presente estudo teve por objetivos estudar a ocorrência de Salmonella spp em amostras de carcaças e miúdos de frango obtidas em uma feira e um mercado municipal da zona oeste da cidade de São Paulo e fazer uma análise crítica entre a técnica convencional em meios de cultivo e reação em cadeia pela polimerase PCR. Foram utilizadas 63 carcaças de frangos e 63 conjuntos de miúdos, obtidos no período de novembro de 2006 a maio de 2007. Pesquisou-se salmonela nas amostras pela técnica convencional em meios de cultivo e pela PCR. Pela técnica convencional identificou-se Salmonella em (6/63) das amostras de carcaça e (5/63) das amostras de miúdos e, pela PCR obteve-se (20/63) das amostras de miúdos e (28/63) das amostras de carcaça. As estirpes sorotipificadas como Salmonella oriundas das amostras de carcaças foram identificadas, como S. Senftenberg; S. Kentucky; S. Enteritidis; S. Montevideo; S. Infantis, S. enterica subsp enterica (0: 6.7). S. Enteritidis; S. enterica subsp enterica; S. Infantis. As estirpes provenientes das amostras de miúdos foram identificadas como S. Enteritidis; S. enterica subsp enterica; S. Infantis. As (18/21) estirpes identificadas como Salmonella pelo estudo apresentaram resistência aos antimicrobianos testados. O método convencional é indispensável quando se necessita a obtenção da estirpe para estudos de outras naturezas, para se cumprir a legislação brasileira que se vale de padrões microbiológicos estabelecidos pelos métodos convencionais. A técnica da PCR é válida e útil desde que seja padronizada de acordo com as necessidades e condições de cada laboratório; é bastante útil na implementação de sistema APPCC; no monitoramento de agentes específicos dentro de produções de alimentos; para estudos epidemiológicos da ocorrência, dinâmica de distribuição do agente. / The aim of this study was to evaluate the presence of Salmonella spp in whole broiler carcasses and multiple-organ samples collected at a commercial retail point in the western area of the city of São Paulo and to conduct a critical analysis of the traditional culture media growth technique and polymerase chain reaction PCR. A total of 63 whole broiler carcasses and a 63 multiple-organ samples were collected between November 2006 and May 2007. The conventional technique revealed the presence of Salmonella in 6/63 whole carcasses and in 5/63 multiple-organ samples, PCR detected Salmonella in 28/63 whole carcasses and in 20/63 multiple-organ samples The following strains were identified in the whole carcasses S. Senftenberg; S. Kentucky; S. Enteritidis; S. Montevideo; S. Infantis, S. enterica subsp enterica (0: 6.7). S. Enteritidis; S. enterica subsp enterica; S. Infantis were identified in multiple organ samples. The (18/21) Salmonella strains identified in this study were resistant to the antimicrobial agents tested in this study. In conclusion, the traditional method is essential for the collection of strains for different study purposes; for the observance of the Brazilian legislation, which is based on microbiological standards that were established using traditional methods. Polymerase chain reacton is a valid and useful technique, as long as it is standardized according to the needs and conditions of each laboratory. Polymerase chain reacton is remarkably useful in the implementation of the APPCC system; in the monitorization of specific agents within the food production chain; and for epidemiological studies that evaluate the occurrence, dynamic and distribution of a specific agent.

Salmonella é uma bactéria Gram-negativa, que compreende cerca de 2.500 sorotipos, muitos dos quais relevantes para humanos e animais; contamina alimentos e água, apresentando-se como um grande problema de saúde pública em todo o mundo. Causa infecção acompanhada de diferentes manifestações clínicas, mais comumente gastroenterite, e pode progredir, embora menos frequentemente, para septicemia e morte, especialmente em indivíduos jovens. Também é responsável pela febre entérica, caracterizada pela disseminação da bactéria pelo sistema reticuloendotelial via macrófagos para linfonodos, fígado e baço. O presente trabalho realizou um levantamento bibliográfico com vistas a averiguar os principais aspectos relativos à Salmonella discutidos na última década. Constatou-se que, no geral, os sorotipos mais prevalentes são S. Enteritidis, seguida de S. Typhimurium e, em regiões em desenvolvimento, há alta prevalência de S. Typhi e ,em menor proporção, de S. Paratyphi A. Em publicações que relatam surtos provocados por salmonelas, S. Typhimurium é o sorotipo mais prevalente, seguido de S. Enteritidis. Os fatores de virulência mais referidos são hil, spv, sop, sif, sse e inv. A resistência a antimicrobianos utilizados no tratamento de salmonelose é bastante discutida e são apontadas altas taxas de resistência e, inclusive, multirresistência principalmente à ampicilina, cloranfenicol e tetraciclina. Os antimicrobianos mais indicados atualmente para tratamento de salmonelose são ciprofloxacina e ceftriaxona, ainda que estudos apontem para o desenvolvimento de resistência a estes fármacos. Outros antimicrobianos indicados são cefixima, ceftazidima e imipenem, embora recomendados apenas em casos de falha no tratamento com fluoroquinonas e cefalosporinas de terceira geração, devido a fatores como alto custo e maior propensão ao desenvolvimento de efeitos colaterais. Os genes que intermediam a resistência a antimicrobianos estão normalmente contidos em plasmídios ou integrons, especialmente integron classe 1, os quais podem também estar abrigados em plasmídios ou no cromossomo da bactéria, especialmente em uma região chamada de ilha genômica 1 de Salmonella (SGI1). Os principais genes que conferem resistência a antimicrobianos mencionados são: drf, aad, tet, str, sul e flo. A resistência a antimicrobianos também é conferida por enzimas beta-lactamases de amplo espectro, cujos principais genes responsáveis por sua codificação são blaCTM-X, blaTEM e blaPSE. Na epidemiologia da salmonelose, os vetores mais relevantes para a contaminação pela bactéria são ovos, principalmente, além de carne bovina e leite, frutas, vegetais especialmente o tomate , carne aviária e suína. Como medidas profiláticas, são indicadas práticas de higienização de alimentos e utensílios utilizados em seu preparo e a lavagem das mãos após a manipulação de comida, assim como boas práticas de fabricação na cadeia de produção de alimentos. Em regiões em que a febre entérica é prevalente, recomenda-se o consumo de água engarrafada ou após fervimento e cuidado com a água utilizada para lavagem de frutas e verduras a serem ingeridas. Com relação à salmonelose em cães, há poucas publicações a respeito; dentre estas, há dois temas preferencialmente discutidos: a associação da contaminação de Salmonella pelo homem via cão de estimação ou contato com ração ou guloseimas caninas; e a resistência a antimicrobianos de salmonelas isoladas em cães. / Salmonella is a Gram-negative bacteria comprising around 2.500 serotypes, many of these relevant to human and animals; the pathogen contaminates food and water, posing as a major public health concern worldwide. It causes an infection with variable clinical manifestations, most commonly gastroenteritis. Although less frequently, the disease can progress, to septicemia and death, especially in young individuals. It is also responsible for enteric fever, characterized by the spread of the bacteria by the reticuloendothelial system via macrophages to lymph nodes, liver and spleen. The present work constitutes a literature review and intent to inquire the main aspects related to Salmonella discussed in the last decade. It was verified that, generally, the most prevalent serotypes are S. Enteritidis, followed by S. Typhimurium; in developing regions, S. Typhi and, in a lesser proportion, S. Paratyphi A are highly prevalent. In Salmonella´s outbreaks reports, S. Typhimurium is the most prevalent serotype mentioned, followed by S. Enteritidis. The virulence factors most pointed are hil, spv, sop, sif, sse and inv. Salmonellosis treatment failures caused by antimicrobial resistance are very discussed and high rates of resistance are pointed, including multidrug resistance, mainly to ampicillin, chloramphenicol and tetracycline. Currently, the drugs most indicated to treat salmonellosis are ciprofloxacin and ceftriaxone, even though studies point to the development of resistance to these drugs. Others antimicrobials indicated are cefixime, ceftazidime and imipenem, although they are recommended only in cases of fluoroquinonas and thirdgeneration cephalosporins treatment failure, due to cost and greater propensity to the development of side effects, etc. Antimicrobial resistance genes are normally harbored in plasmids and integrons, especially class 1 integron, which can also be housed in plasmids or within the chromosome, particularly in a region called Salmonella genomic island 1 (SGI1). The main antimicrobial resistance genes mencioned are: drf, aad, tet, str, sul and flo. The antimicrobial resistance is also conferred by extended-spectrum beta-lactamase enzymes, and the major genes involved in their prodution are blaCTM-XN, blaTEM and blaPSE. According to salmonellosis epidemiology, the most relevant vectors for the bacteria´s contamination are eggs, mainly, and also beef and milk, fruits, vegetables especially tomatoes , chicken and swine meat. As prophylaxis measures, it is recommended efficient hygiene practices in the preparation of food and washing hands and utensils properly after handling food, as well as good manufacturing practices in food production chain. In regions where enteric fever is prevalent, it is recommended the ingestion of bottled or boiling water and attention to the water used to clean fruits and vegetables. There are few studies about the subject. Among these, there were two mainly discussed themes: the association between man´s contamination by Salmonella through direct contact with dogs or dry dog food and dog treats; and the investigation of antimicrobial resistance among Salmonella isolated in dogs.

Submitted by Edineia Teixeira (edineia.teixeira@unioeste.br) on 2018-03-05T14:57:33Z No. of bitstreams: 2 Camila_Santana2017.pdf: 541138 bytes, checksum: 853f9769c196d162cfb57486117ffe0d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-05T14:57:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Camila_Santana2017.pdf: 541138 bytes, checksum: 853f9769c196d162cfb57486117ffe0d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-05-29 / The products of secondary plant metabolism have aroused great economic interest in their chemical diversity and biological activities. The objective of this work was to determine the chemical composition of Myrcia oblongata extracts, to evaluate the antioxidant potential of these extracts, to test the antimicrobial activity against eleven standard microorganisms and ten serotypes of Salmonella spp. Of poultry origin, as well as to evaluate the potential mortality of extracts and essential oil on Alphitobius diaperinus. Saponins, steroids, triterpenoids, tannins and flavonoids have been identified. The extracts presented activity for all microorganisms tested, except for the methanolic extract that did not show activity for P. mirabilis and S. Enteritidis. The hexane extract, ethyl acetate and acetone have antioxidant activity. The essential oil and extracts of hexane, ethanolic, methanolic and ethyl acetate showed high mortality rates on A. diaperinus larvae. For adults, the best results were obtained for essential oil, with a mortality greater than 80%. The results point to the importance of studies to understand the potential and action of plant extracts and essential oils, aiming at reducing the impacts caused by the extensive use of antimicrobials and synthetic antioxidants and by the undue use of chemical substances for pest control. / Os produtos do metabolismo secundário das plantas têm despertado grande interesse econômico pela sua diversidade química e atividades biológicas. Diante disto, o objetivo deste trabalho foi determinar a composição química dos extratos vegetais de Myrcia oblongata, avaliar o potencial antioxidante destes extratos, testar a atividade antimicrobiana frente a onze microrganismos padrões e dez sorotipos de Salmonella spp. de origem avícola, bem como avaliar o potencial de mortalidade dos extratos e óleo essencial sobre Alphitobius diaperinus. Foram identificados saponinas, esteróides, triterpenóides, taninos e flavonóides. Os extratos apresentaram atividade para todos os microrganismos testados, com exceção do extrato metanólico que não demonstrou atividade para P. mirabilis e S. Enteritidis. O extrato hexânico, acetato de etila e acetona possuem atividade antioxidante. O óleo essencial e os extratos de hexano, etanólico, metanólico e de acetato de etila apresentaram elevados índices de mortalidade sobre a larva de A. diaperinus. Para os adultos os melhores resultados foram obtidos para o óleo essencial, com mortalidade superior a 80%. Os resultados direcionam a importância de estudos para compreender o potencial e a ação de extratos vegetais e óleos essenciais, visando à diminuição de impactos causados pelo uso extensivo de antimicrobianos e antioxidantes sintéticos e pelo uso indevido de substâncias químicas para o controle de pragas.