No Rio Grande do Sul (RS), uma cepa de Salmonella (S.) Enteritidis (SE86) foi identificada como o principal microrganismo causador de Doenças Transmitidas por Alimentos (DTA), nos últimos anos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a multiplicação e a recuperação da S. Enteritidis SE86 em diluentes, meios de cultura e métodos de semeadura, após a exposição ao Dicloroisocianurato de sódio (NaDCC). Em um primeiro momento, o microrganismo foi ativado em caldo BHI e exposto a 200ppm de NaDCC, por cinco minutos. Em seguida, ele foi diluído em diferentes soluções, as quais foram armazenadas a 7º C e 30º C, separadamente, sendo amostradas e analisadas microbiologicamente, a cada hora, durante seis horas. Em um segundo momento, foi avaliada a recuperação do microrganismo, antes e após exposição ao NaDCC, através de semeadura em superfície e pelo método da Camada Fina de Ágar (Thin Agar Layer - TAL), em cinco diferentes meios de cultura [Agar Triptona de Soja (TSA), Agar Verde Brilhante Manitol Lisina Cristal de Violeta (MLCB), Agar Verde Brilhante (BGA), Agar Salmonella Shigella (SS) e Agar Xilose Lisina Desoxicolato (XLD)]. Na terceira fase do estudo, foram avaliadas a multiplicação e a recuperação de dois outros sorovares de Salmonella, além da S. Enteritidis SE86, utilizando o diluente, o meio de cultura e o método de semeadura que demonstraram os melhores resultados nas fases antecedentes. Os resultados demonstraram que houve multiplicação significativa (P < 0,05) da S. Enteritidis SE86 não exposta ao NaDCC, armazenada a 30º C, nos diluentes Água peptonada (P), Água peptonada + Tween 80, Lecitina e Tiossulfato de sódio (P + N), Solução salina + Tween 80, Lecitina e Tiossulfato de sódio (SaS + N) e Água peptonada + Solução salina (P + SaS). O diluente Solução salina (SaS) não propiciou multiplicação durante as seis horas de incubação, mas manteve as células viáveis, sendo, portanto, escolhido para os demais experimentos. Células expostas e não expostas ao NaDCC não foram capazes de se multiplicar em nenhum dos diluentes testados, a 7º C. Da mesma forma, após exposição ao NaDCC, nenhuma multiplicação significativa foi observada nos diluentes armazenados a 30º C. Não houve diferença significativa (P < 0,05) nas contagens de S. Enteritidis SE86 exposta ao NaDCC quando semeada em TSA, meios seletivos ou meios seletivos adicionados de sobre camada de TSA (TAL). O meio XLD foi escolhido para os demais experimentos, uma vez que permitiu praticamente a mesma multiplicação que o meio TSA. Quando foram avaliadas a multiplicação e a recuperação de S. Enteritidis SE86, S. Typhimurium e S. Bredeney, expostas e não expostas ao NaDCC, diluídas em SaS e semeadas em TSA, XLD e XLD + sobre camada de TSA (TAL), não houve diferença significativa entre as contagens de células obtidas nos meios e no TAL, sugerindo que a semeadura direta em XLD pode ser um método adequado para a quantificação de Salmonella exposta ao NaDCC, em condições laboratoriais. / In Rio Grande do Sul State (RS), a strain of Salmonella (S.) Enteritidis (SE86) was identified as the main causative microorganism of foodborne diseases, in recent years. The aim of this study was to evaluate diluents, media and plating methods for growth and recovery of this pathogen, after exposure to Sodium dichloroisocyanurate (NaDCC). At first, the microorganism was exposed to 200 mg kg-1 NaDCC by five minutes. Then it was diluted in different diluent solutions, which were stored at 7º C and 30° C, separately, being sampled and microbiologically analyzed for six hours. In a second step, the recovery of the microorganism before and after exposed by NaDCC was evaluated, through surface plating method and Thin Layer Agar (TAL) method, in five different culture media [Tryptic Soy Agar (TSA), Mannitol Lysine Crystal Violet Brilliant Green Agar (MLCB); Brilliant Green Agar (BGA), Salmonella Shigella Agar (SS) and Xylose Lysine Desoxychole Agar (XLD)]. In the third phase of this study, the growth and recovery of S. Enteritidis SE86 and two other serovars of Salmonella were evaluated, using the diluent, the culture medium and plating method that showed the best results in previous phases. The results showed significant multiplication (P < 0.05) of S. Enteritidis SE86 not exposed to NaDCC, stored at 30 °C, in diluents Peptone water (P), Peptone water + Tween 80, Lecithin and Sodium thiosulfate (P + N), Saline solution + Tween 80, Lecithin and Sodium thiosulfate (SaS + N) and Peptone water + Saline solution (P + SaS). Saline solution (SaS) did not sustain bacterial multiplication, but maintained viable cells, being chosen for the next experiments. Exposed and not exposed cells were not able to multiply in any of the diluents at 7º C during six hours of storage. After NaDCC exposure, no significant multiplication was observed in any of the diluents stored at 30º C. No significant difference (P < 0,05) in growth of S. Enteritidis SE86 exposed to NaDCC was observed on TSA, selective medium or on selective media overlayed with TSA (TAL). The XLD medium was chosen for the next experiments, since it allowed the same multiplication that TSA. When the multiplication and recovery of exposed and not exposed S. Enteritidis SE86, S. Typhimurium, and S. Bredeney were evaluated after dilution in SaS and plating on TSA, XLD, and XLD overlayed with TSA, there was no significant difference in counts obtained on media and TAL, suggesting that direct plating on XLD could be an adequate method for the quantification of Salmonella exposed to NaDCC, under laboratory conditions.

Com a expansão da avicultura, ocorreu um aumento no número de aves alojadas, concentrando as produções e, consequentemente, facilitando a disseminação de doenças. Entre as doenças transmitidas pelo consumo dos produtos avícolas, a salmonelose tem especial importância. Nos últimos anos tem ocorrido um aumento na prevalência do sorovar Salmonella Enteritidis em todo o mundo, sendo o mais isolado. A patogenia da Salmonella e a forma como ela interage com seu hospedeiro são fenômenos multifatoriais e complexos. Entre os principais fatores de virulência da Salmonella estão os genes de virulência. O objetivo deste trabalho foi a pesquisa de genes associados à virulência em cepas de S. Enteritidis oriundas de diferentes origens avícolas. Realizou-se a pesquisa de nove genes de virulência (lpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH, spvC) em 84 amostras de S. Enteritidis. Os genes invA, hilA, sivH, sefA e avrA estiveram presentes em 100% das amostras (84/84); lpfA e sopE em 99% (83/84); agfA em 96% (81/84); e o gene spvC em 92% (77/84). Foi possível caracterizar as amostras em quatro diferentes perfis genéticos, sendo P1 positivo para todos os genes, P2 negativo apenas para spvC, P3 negativo apenas para agfA e P4 negativo para lpfA, spvC e sopE, sendo o grupo P1 o mais prevalente. Apesar de todas as cepas pertencerem a um mesmo sorovar, observou-se uma variação na presença dos genes de virulência. Os perfis estabelecidos e as frequências obtidas podem servir para a escolha de cepas a serem utilizadas para realização da PFGE e em futuros estudos in vivo. / The poultry industry has been characterized by an increase in the number of housed animals in recent years, concentrating the production and facilitating the spread of many diseases. Among all illness transmitted by food, including meat and eggs, salmonellosis is of particular importance. Currently, there has been an increase in prevalence of islament of Salmonella Enteritidis all around the world. The pathogenesis of Salmonella and how it interacts with the host are a complex and multifactorial phenomenon. Among virulence factors of Salmonella, the virulence genes are the most important. The aim of this survey was to search for genes associated with virulence in strains of S. Enteritidis isolated from different origins, all from poultry. We conducted a search of nine virulence genes (lpfA, agfA, sefA, invA, hilA, avrA, sopE, sivH, spvC) in 84 samples of S. Enteritidis. The genes invA, hilA, sivH, sefA e avrA were present in 100% of samples (84/84); lpfA and sopE in 99% (83/84); agfA in 96% (81/84); and spvC in 92% (77/84) of them. It was possible to characterize the samples in four different genetic profiles, P1 being positive for all genes, P2 negative only for spvC, P3 negative only for agfA and P4 negative for lpfA, sopE and spvC. The P1 was the most prevalent. Despite all the strains belong to the same serovar, it is possible to observe a variation in the presence of virulence genes. These established profiles and gene frequencies obtained are useful to select strains to be used in PFGE and in future in vivo studies.

Nos últimos anos observaram-se mudanças nos métodos empregados para a produção agropecuária. Dentre eles, o sistema orgânico de produção vem ganhando espaço no mercado, devido ao desenvolvimento de novos hábitos gerados a partir da preocupação com a segurança alimentar. Entretanto, os processos produtivos em sistemas de produção não convencional também estão sujeitos a contaminações, dentre elas, contaminação por Salmonella spp. Devido a estas preocupações, observou-se a necessidade de estudar novos segmentos produtivos, os quais podem ser possíveis fontes de contaminação. Nesse estudo foram acompanhadas 5 granjas que estão em processo de certificação para a produção de ovos em sistema orgânico. Avaliou-se a ocorrência de Salmonella spp. no alojamento de pintos de um dia através de swab de cloaca e fundo de caixa. No decorrer do ciclo produtivo, também foi avaliado a presença de Salmonella spp. na cama dos aviários, acesso a área externa, ninhos e ovos (casca e conteúdo interno), quantificando este agente através da técnica do número mais provável – NMP. Dos 7 lotes avaliados, 3 foram positivos para Salmonella spp. em algum momento da produção. Na granja A, houve isolamento de Salmonella Agona a partir de um ninho do lote A1 (3,0 NMP/mL). Na mesma propriedade, houve isolamento de Salmonella Gallinarum em um segundo lote (A2), proveniente de um surto de salmonelose que ocorreu logo após o alojamento das aves, ocasionando aumento da mortalidade (33,7% acumulado até o 9° dia de alojamento). Salmonella Agona também foi isolada partir de dois pools de swabs de cloaca de aves de um dia e swab de cama de aviário, sendo que este último apresentou 60,03 NMP/mL, ambas oriundas da granja B. As granjas C, D e E avaliadas e seus respectivos lotes, apresentaram resultados negativos em todas as avaliações realizadas. Os isolados de S. Agona oriundas do swabs de cloaca apresentaram o mesmo perfil genético. No mesmo sentido, as amostras isoladas do ambiente também apresentaram o mesmo perfil entre elas, diferenciando-as dos isolados de swab de cloaca. A presença de S. Agona no ambiente avícola representa um possível meio de contaminação para os ovos produzidos. Tratando-se de um sorotipo que pode infectar seres humanos, medidas sanitárias devem ser empregadas para evitar infecções alimentares causada por esse agente. / Changes have been observed in the methods used in agricultural production over the last few years. Among them, organic production system has been gaining presence on the market due to development of new habits from the concern with food safety. Nonetheless, the productive processes of unconventional production systems are also subject to contamination, including by Salmonella spp. Due to such concerns, it is necessary to study other productive sectors which could be subject to potential sources of contamination. This study monitored 5 poultry farms undergoing the certification process in order to produce organic eggs. The following items were assessed: occurrence of Salmonella spp. in chicks through cloaca swab and transport boxes and presence and quantity of Salmonella spp. through the assay Most Probably Number - MPN/g in soiled poultry litter, access of the birds to external areas, their nests and eggs (eggshell and internal contents). Of the 7 flock evaluated, 3 were Salmonella spp. positive at some point of the production. In farm A, Salmonella Agona was isolated from the nest of A1 flock (3.0 MPN). In the same property, Salmonella Gallinarum was isolated from a second flock (A2), with signs and lesions consistent with Salmonella observed just after the birds were housed, causing an increase in the mortality rate (33.7% until the 9th housing day). Salmonella Agona was also isolated from two pools of cloaca swabs from one-day-old birds and swab from the poultry litter, which showed 60.03 NMP, originated from farm B. Farms C, D and E and their respective flocks showed negative results in all tests. The isolation of S. Agona isolated from two pool of cloaca, show the same genetic profile. Similarly, the isolated from birds’ environment also showed the same genetic profile between them, differencing the isolated cloaca swabs. The isolation of S. Agona in the birds’ environment can be a source of infection for eggs. Since this is a serotype that may infect humans, control measures must be employed to avoid food-borne diseases caused by this agent.

Elevadas prevalências de Salmonella têm sido identificadas na cadeia de produção de suínos brasileira. Dessa forma, pode haver um maior risco de contaminação dos produtos e, portanto, maior risco ao consumidor. Diferentes estudos têm sido conduzidos abordando os efeitos dos estágios do abate sobre a contaminação por patógenos em carcaças. O presente estudo objetivou verificar a presença de Salmonella na superfície da carcaça avaliando-se a influência de diferentes etapas do processo de abate de suínos, do recebimento dos animais à lavagem final das carcaças, caracterizando os isolados por técnicas fenotípicas e genotípicas para detectar grupos clonais de Salmonella no processo de abate, em três frigoríficos (A, B, C) sob inspeção federal no sul do Brasil. Foi estudada a soroprevalência de cada lote abatido no turno de amostragem, não havendo correlação entre a sorologia dos lotes e a contaminação das carcaças após o chuveiro final (P= 0.42941). A análise dos dados permitiu verificar que houve mais chance de isolar Salmonella a partir do conteúdo intestinal dos animais no Frigorífico C (Odds Ratio, OR=6,5, P<0,001), demonstrando que nesse matadouro são abatidos lotes com maior prevalência de portadores. Considerando todas as etapas analisadas, a análise de Qui-quadrado da independência indicou que houve uma frequência estatisticamente significativa maior (P=0,004) de isolamento de Salmonella após a depilação. Não houve isolamento de Salmonella das amostras de água da escalda, que manteve a temperatura sempre acima dos 61ºC durante o abate. Em comparação com o Frigorífico A, no Frigorífico B observou-se maior chance de isolamento de Salmonella após a depilação (OR=4,18), após flambagem (OR=11,17) e após o chuveiro final (OR=14,66). Na comparação do Frigorífico C com A não houve diferença estatística significativa. Somente no Frigorífico B o número de animais com conteúdo intestinal positivo foi preditivo da contaminação das carcaças após o chuveiro final (Coeficiente= 0,57), demonstrando que as práticas adotadas na linha de abate não foram capazes de contribuir para o controle de Salmonella. A sorotipificação revelou oito diferentes sorovares, dentre os quais os sorovares Derby (n= 47; 35,6%), Typhimurium (n=46; 34,8%) e Panama (n=21; 15,9%) foram os mais frequentes e apresentaram, respectivamente, seis, oito e três pulsotipos após a digestão de DNA com as enzimas XBaI e BlnI. A análise dos pulsotipos identificados nas carcaças após o chuveiro final demonstrou a sua relação com isolados das baias de espera, do conteúdo intestinal e de outras carcaças. As etapas até a depilação demonstraram ser as mais críticas para a disseminação de grupos clonais de Salmonella e a flambagem para o seu controle. Os resultados demonstraram a influência das práticas de higiene e processos de abate executados pelos matadouros no controle da contaminação da carcaça, mesmo quando lotes com elevado número de portadores de Salmonella são recebidos. / High prevalence of Salmonella have been identified in the Brazilian swine production chain. In this way, there may be a greater hazard of product contamination and higher risk to consumers. Different studies have been conducted addressing the effects of the stages of slaughter on the contamination by pathogens on carcasses. This study aimed to evaluate the presence of Salmonella on the surface of the carcass after different stages of slaughtering process of pigs, from the animals receiving to the final wash of the carcasses, characterizing the isolates by phenotypic and genotypic techniques in order to detect clonal groups of Salmonella in the process of slaughter in three abattoirs (A, B, C) under federal inspection in southern Brazil. The prevalence of each batch slaughtered on the sampled shift was studied, there was no correlation between serology of batch and the contamination of carcasses after the Final Wash (P = 0.42941). Data analysis showed that there was a higher chance of Salmonella isolation from the intestinal content of animals in Abattoir C (odds ratio, OR = 6.5, P< 0.001), demonstrating that in this abattoir batches are slaughtered with higher prevalence of carriers. Considering all the stages analyzed, the chi-square analysis of independence indicated that there was a significant statistically higher frequency (P=0.004) of Salmonella isolation after dehairing. There was no Salmonella isolation from the scalding water samples, which always kept the temperature above 61 ºC during slaughter. Compared to Abattoir A, Abattoir B had a higher chance of Salmonella isolation after dehairing (OR = 4.18), after singeing (OR = 11.17) and after the final wash (OR = 14.66 ). Comparing Abattoir C to Abattoir A there was no significant statistically difference. Only in the Abattoir B the number of animals with positive intestinal contents was predictive for contamination of carcasses final wash (coefficient = 0.57), demonstrating that the practices adopted in the slaughter line were not able to control contamination by Salmonella. The serotyping revealed eight different serovars, of which the serovars Derby (n = 47, 35.6%), Typhimurium (n = 46, 34.8%) and Panama (n = 21, 15.9%) were the most frequent and showed, respectively, six, eight and tree pulsotypes of DNA after digestion with enzynes XbaI and BlnI. The analysis of pulsotypes identified in the carcasses after the Final Wash demonstrated their relationship with the isolates from lairage, intestinal contents and other cacasses. The stages up to dehairing were the most critical to the spread of clonal groups of Salmonella, while the flamming is crucial for their control. The results showed the influence of hygiene practices and slaughter processes implemented by abattoirs on the control of carcass contamination, even when batches of high numbers of Salmonella carriers are slaughtered.

O isolamento de Salmonella enterica em suínos abatidos tem sido reportado no sul do Brasil, o que torna a carne suína uma fonte potencial de contaminação para os consumidores. Nesse contexto, o trabalho propôs estimar o risco da ocorrência de infecção alimentar pelo consumo de lingüiça frescal suína, através da análise de dados de prevalência, quantificação, cinética de crescimento e destruição e de surtos alimentares que envolveram Salmonella no Rio Grande do Sul. Das 336 amostras de lingüiça frescal de carne suína adquiridas no comércio, 24,4% apresentaram Salmonella sp. com contagens variando entre 0,03 e 460 Número mais Provável (NMP).g-1, com mediana de 0,23 NMP.g-1. Os sorovares mais prevalentes foram Brandenburg, Derby, Panama e Typhimurium. Em simulações de crescimento e destruição realizadas em caldo nutriente, isolados dos 12 sorovares encontrados no produto, apresentaram cinética de crescimento semelhante em temperatura ambiente. Até duas horas todos os sorotipos permaneceram em fase lag e, após, iniciou-se a fase exponencial. Em temperatura de refrigeração, todos os isolados mantiveram a contagem inicial até 30 dias. A destruição térmica em 60°C ocorreu após 20 minutos em todos os ensaios. As mesmas simulações foram conduzidas em amostras do produto contaminadas artificialmente com Salmonella sp. não havendo alterações significativas nas quantidades de Salmonella em temperatura ambiente e de refrigeração durante todo o período de observação. Após a preparação em forno (200°C), por 15 minutos, a população total inoculada foi destruída. Nos surtos ocorridos por Salmonella, os alimentos a base de ovos, maionese e frango predominaram. Os resultados obtidos na quantificação variaram de <3 NMP até 4,6x109.g-1desses alimentos, com mediana de 4,6x106.g-1. S. Enteritidis foi o sorovar identificado em todos os surtos, apresentando um único perfil de macro-restrição. Os dados obtidos foram utilizados para simular diferentes cenários no programa @Risk. Considerando-se o costume da população estudada de ingerir este produto após tratamento térmico, o risco encontrado foi muito baixo (6,12 x 10-7). Para uma pequena parte da população que costuma ingerir o produto sem qualquer tratamento térmico, em uma simulação realizada com 10.000 refeições, poderá haver 8,78 casos da doença, considerando a ingestão de uma única unidade. Em um perfil típico de preparação e consumo de lingüiça frescal de carne suína pela população de Porto Alegre, ou seja, como acompanhamento de churrasco, após tratamento térmico mínimo de 15 minutos, calculou-se a probabilidade de ocorrência de doença.Dentre os 3.354.716,98 churrascos estimados consumidos mensalmente em Porto Alegre, o resultado do modelo indicou um mínimo de 0,01, média de 2,05 e máximo de 11,08 casos de doença por mês. Esse cenário infere que a lingüiça frescal de carne suína pode estar causando um baixo número de casos isolados em Porto Alegre, os quais podem estar sendo subnotificados. / In Southern Brazil, a high prevalence of Salmonella isolation has been reported in slaughter pigs, indicating that pork may represent a hazard to the consumers. In this sense, this study aimed to conduct a risk analysis of the consumption of pork sausage in Southern Brazil. For this purpose, Salmonella prevalence on pork sausages collected at retail level was estimated, growth and death curves for representative porcine Salmonella strains were constructed, the consumption patterns of pork sausages by the population were investigated, and foods involved in salmonellosis outbreaks were analysed. From a total of 336 samples of fresh pork sausage examined, Salmonella enterica was detected in 82 (24.4%) of the samples, with a Most Probable Number count ranging from 0.03 (MPN).g-1 to 460 MPN.g-1, and a median of 0.23 MPN .g-1. Strains belonging to serovars Brandenburg, Panama, Derby and Typhimurium were the most prevalent. Growth and death curves of 12 strains representing Salmonella serovars isolated in this study were similar in assays conducted in nutrient broth. At room temperature, all Salmonella serovars started the exponential phase after a two hours period of lag phase. Under refrigeration, all isolates mantained the initial population counts up to 30 days. The heat destruction was observed after 20 minutes in all assays. Similar assays conducted in fresh pork sausages inoculated with Salmonella demonstrated that no growth of Salmonella sp. could be detected at room temperature and under refrigeration troughout the observation period. After cooking in the oven (200°C) for 15 minutes the inoculated Salmonella population was completely destroyed. Foods containing eggs, mayonnaise or chicken were the most implicated in outbreaks investigated in Rio Grande do Sul. Salmonella counts variaded from <3 MPN to 4.6x109.g-1 of foods involved in these outbreaks, with a median value of 4.6x106.g-1. All strains were identified as S. Enteritidis, and presented a unique macrorestriction profile, demonstrating the predominance of one clonal group in foods involved in the salmonellosis outbreaks. Data obtained in the conducted assays were used to simulate different cenarios, using the @Risk software. Considering that the population usually consums pork sausage after termic treatment (roasting), the estimated risk was very low (6.12 x 10-7). Another simulation, conducted for the low percentage of the population (3%) that declared to consum raw pork sausage, indicated that for 10,000 meal consumption events of one sausage, the probability is 8.78 disease cases. Finally, considering the typical consumption pattern of pork sausage by the population of Porto Alegre city (roasted for at least 15 minutes during a barbecue called “churrasco”) the number of disease cases was simulated. Among 3,354,716.98 “churrascos” prepared monthly in Porto Alegre city, the model indicated a probability of a minimum of 0.01 cases, a media of 2.05 and a maximum of 11.08 disease cases occurring each month. Results of risk assessment show that fresh pork sausage may have been a cause of few undernotificated individual salmonellosis cases in Porto Alegre city.

Os procedimentos de limpeza e desinfecção são pontos chave na prevenção da contaminação por Salmonella sp. No entanto, pouco se conhece a respeito da eficácia de protocolos de limpeza e desinfecção adotados em granjas de terminação de suínos. Desta forma, este estudo teve como objetivo avaliar o nível de contaminação residual de Coliformes Totais e Salmonella sp. em granjas de terminação de suínos, e fazer um levantamento dos protocolos de manejo, instalações e práticas de desinfecção mais utilizados durante o período de vazio dessas granjas. Foram amostradas 71 granjas de terminação integradas a cinco agroindústrias, localizadas no Rio Grande do Sul. Em cada granja, foi aplicado um questionário contendo itens relativos à estrutura e manejo das instalações. Para a análise microbiológica, suabes do piso das baias foram colhidos e submetidos à quantificação de Coliformes Totais e pesquisa de Salmonella. A contagem de Coliformes Totais encontrada nas granjas variou de 6 x102 ufc/cm2 até 4,33 x109 ufc/cm2 Mesmo em granjas integradas a uma mesma empresa houve grande variabilidade na presença de coliformes residuais após a limpeza e desinfecção. Salmonella sp. esteve presente em 26,7% do total de granjas amostradas, com variação de freqüência entre as agoindústrias (0 até 100% das granjas). Observou-se também grande diferença em termos de instalações e práticas de manejo adotadas, o que poderá servir para explicar a contaminação residual numa análise de risco futura. A partir disso, é possível concluir que os protocolos de limpeza e desinfecção adotados nas granjas são pouco eficazes, pois a contagem residual de Coliformes Totais é muito elevada e permitem a presença residual de Salmonella sp. / Cleaning and disinfection practices are the basis of Salmonella control on swine farms. In spite of that, little is known about the effectiveness of the cleaning and disinfection methods used on finishing pig farms. The aim of this study was to evaluate the level of coliform and Salmonella residual contamination on finishing farms, and to assess the practices and disinfection protocols adopted in the all in/all out management. Samplings were conducted in 71 farms associated to five swine companies located in Rio Grande do Sul. On each farm a questionnaire, including issues about building facilities and management, was conducted. Pen floor swabs were taken and submitted to coliform enumeration and Salmonella isolation. Coliform counts ranging from 6 x102 ufc/cm2 to 4.33 x109 ufc/cm2 were found on the sampled farms. Even farms associated to a same company presented a high variation on the coliform counts after cleaning and disinfection. Salmonella sp. was isolated in 26.7% of sampled farms, with a variation on the frequency (0 to 100%) according to the company. A high variability was also detected on the building facilities and management practices adopted. These data can be used in the future to conduct a risk factors analysis. In conclusion, the cleaning and disinfection practices adopted in the sampled farms are little effective, since a high residual coliform counts, and the persistence of Salmonella were detected on the pen floor.

O aumento da produção suinícola trouxe consigo uma grande quantidade de dejetos que, muitas vezes, são destinados à agricultura ou piscicultura. Sendo os suínos, na maioria das vezes, portadores assintomáticos de Salmonella sp., excretam a bactéria nas fezes. Desta forma, no meio ambiente torna-se uma importante fonte de transmissão e, consequentemente, fonte de risco à produção animal e à saúde pública. A contaminação das bacias hidrográficas e do ambiente, de maneira geral, tem provocado cada vez mais preocupação nas comunidades rurais e urbanas. Neste experimento, compararam-se três metodologias para a quantificação de Salmonella sp. a fim de determinar a melhor técnica da estimativa do Número Mais Provável (NMP) a ser aplicado em efluentes de sistemas de tratamento de dejetos. Na primeira fase deste estudo, utilizaram-se quatro amostras de água de um tanque de piscicultura da Faculdade de Agronomia da UFRGS e uma de água peptonada tamponada, todas artificialmente contaminadas. Também foram realizadas análises físico-químicas (pH, condutividade, fósforo total, fosfato, DQO, alcalinidade total, amônio, nitratos, nitrito, sólidos totais e temperatura) das amostras do tanque de piscicultura. Na segunda fase, utilizaram-se as três metodologias de NMP em três amostras de intestino de suínos coletadas em um frigorífico do Estado do Rio Grande do Sul. Comparado às contagens bacterianas do inoculo de Salmonella Typhimurium (105 a 106 UFC), verificou-se que o NMP médio (4,441 UFC) no método A é bastante próximo a estas (P>0,05). Por outro lado, o NMP médio observado nos métodos B (1,380 UFC) e C (3,204 UFC) diferem estatisticamente daquelas (P<0,001 e P<0,01, respectivamente). Na segunda fase do experimento não houve crescimento de Salmonella sp. nas três amostras analisadas. Como o método A foi aquele que demonstrou valores mais próximos de NMP das quantidades inoculadas, sugere-se a utilização desta metodologia para análise de efluentes. / The increase in swine production has increased the amount of effluents destined, most of times, to agriculture or aquaculture. Given the fact swine are very often asymptomatic hosts of Salmonella sp., they excrete this bacterium in their faeces, which, once in the environment, become an important source of transmission and, consequently, a risk to animal production and public health. The contamination of hydrographic basins and the environment has become an increasing cause for concern in rural and urban communities. In this experiment, three methodologies for quantifying Salmonella sp. were compared, so as to determine the best estimation technique of the Most Probable Number (MPN) to be applied in liquid waste from effluent treatment systems. In the first stage of this study, four water samples from an aquaculture tank from the Faculty of Agronomy of UFRGS and one sample of buffered peptone water were used, all of them artificially contaminated. Physical-chemical analyses of samples from the aquaculture tank were also performed (pH, conductivity, total phosphorus, phosphate, COD, total alkalinity, ammonia, nitrates, nitrites, total solids and temperature). In the second stage, three MPN methodologies were used in samples from three swine intestines, collected from a slaughterhouse in the Rio Grande do Sul State. Compared to the bacterial count of the Salmonella Typhimurium’s inoculum (105 a 106 CFU), it was verified that the average MPN (4.441 CFU) in method A is very similar to those counts (P>0.05). On the other hand, the average MNP observed in method B (1.380 CFU) and C (3.204 CFU) are statistically different from them (P<0.001 and P<0,01, respectively). In the second stage of the experiment, no Salmonella sp. growth was observed in the three analysed samples. Considering that method A was the one to present MNP values closest to the inoculated amounts, the employment of this methodology is suggested for the analysis of effluents.

As emissões veiculares e as atividades industriais, além de outras relacionadas ao crescimento da população humana, têm gerado uma grande variedade de compostos genotóxicos e/ou carcinogênicos, que podem ser liberados no ar e causar danos à saúde. Os níveis e os tipos de poluentes podem variar de acordo com a região. Entre os indicadores de poluição, as partículas finas inaláveis (MP2,5) podem atingir os alvéolos pulmonares e causar problemas respiratórios, especialmente em crianças, grupo mais sensível a substâncias tóxicas do que adultos. Nesse sentido, o objetivo deste estudo foi caracterizar área de referência para material particulado inalável (MP2,5), através de biomarcadores genéticos e dosagens de hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs), associados ao biomonitoramento genético de crianças. O trabalho foi realizado no município de Santo Antônio da Patrulha, RS, Brasil, área livre da pluma de dispersão de contaminantes industriais, classificada em estudos anteriores como área de referência. Os extratos orgânicos obtidos em nove pools de amostras foram avaliados quanto à mutagenicidade através do ensaio Salmonella/microssoma, método de microssuspensão, com as linhagens TA98, TA100, YG1024 (em presença e ausência de metabolização) e YG1021 (sem metabolização). Os pools de amostras de ar foram quantificados quanto aos HPAs considerados poluentes prioritários. Para o biomonitoramento das 45 crianças avaliadas, foram utilizados os ensaios cometa em sangue periférico e micronúcleo (MN) em mucosa oral para medir lesões genômicas precoces. A concentração de MP2,5 no período, apresentou 9% (entre 25,89 e 64,71 μg/m3) de eventos acima do recomendado pela Organização Mundial de Saúde (25 μg/m3). Foram obtidos resultados, em revertentes/m3, para a mutagênese, de negativos no período da primavera a 8,3±0,69 no outono (-S9) e de negativos na primavera a 5,4±0,36 no inverno (+S9) para a linhagem TA98. Os resultados com as linhagens YG mostraram a presença de compostos nitrogenados com prevalência de mononitroarenos e aminas aromáticas. Entre os HPAs, o benzo(g,h,i)perileno apresentou a maior concentração em todas as amostras na área de estudo, seguido do indeno(1,2,3-cd)pireno (1,73 ng/m³ e 1,17 ng/m³, respectivamente). Em relação ao biomonitoramento das 45 crianças avaliadas, não houve correlação entre os parâmetros do ensaio cometa (momento, intensidade e comprimento da cauda) e os do teste do micronúcleo. Os valores observados para crianças em relação a estes biomarcadores foram: 0,27±0,407 para indução de MN em células bucais e 0,56±0,727 para brotos nucleares, 0,51±0,694 para células binucleadas, 46,37±16,330 para cromatina condensada, 6,97±5,746 para picnose, 6,60±5,540 para cariólise e 57,55±24,920 para cariorréxe, suas variantes celulares (‰); para respostas ao ensaio cometa em relação ao comprimento da cauda (23,07±12,442), intensidade da cauda (7,28±11,657) e momento da cauda (0,95±2,30). A análise tanto para o teste do MN quanto para o ensaio cometa relacionada ao sexo e à idade não foi significativa. Entre os fatores de confusão, foram observadas diferenças significativas entre o fumo passivo e indução de MN. A presença de HPAs e a resposta mutagênica podem estar relacionadas às emissões veiculares locais. Estes resultados evidenciam a importância de se estudar áreas de referência para poluição atmosférica, estabelecendo níveis basais, principalmente em populações de crianças. / Vehicular emissions and industrial activities and others involving the growth of the human population have caused a great variety of genotoxic and/or carcinogenic compounds, which may be released into the air and be harmful to health. The levels and types of pollutants may vary according to the region. Among the indicators of pollution fine inhalable particles (PM2.5) can reach the pulmonary alveoli and cause respiratory problems, especially in children, a group that is more sensitive to toxic substances than adults. In this sense, the purpose of this study was to characterize an area of reference for inhalable particulate material (PM2.5), through genetic biomarkers and polycyclic aromatic hydrocarbon (PAHs) dosages, associated with the genetic biomonitoring of children. It was performed in the city of Santo Antônio da Patrulha, RS, Brazil, an area that is free from the industrial pollutant contamination plume, classified in previous studies as an area of reference. The organic extracts obtained in nine pools of samples were evaluated for mutagenicity through the Salmonella/microsome assay, microsuspension method, with TA98, TA100, YG1024 (in the presence and absence of metabolization) and YG1021 (without metabolization). The pools of air samples were quantified as to the PAHs considered priority pollutants. In order to bio monitor the 45 children evaluated, the Comet assays in peripheral blood and mincronucleus (MN) in oral mucosa were used to measure early genomic lesions. The concentration of PM2.5 during the period, obtained 9% (between 25.89 and 64.71 μg/m3) of the values above that recommended by the World Health Organization (25 μg/m3). Results were obtained in revertants/m3, for the mutagenesis, of negatives during the spring to 8.3±0.69 in autumn (-S9) and of negative in spring to 5.4±0.36 in winter (+S9) for strain TA98. The results with strains YG showed the presence of nitrogenated compounds with a prevalence of mononitroarenes and aromatic amines. Among the PAHs , benzo(g,h,i)perylene presented the highest concentration in all samples in the area of study followed by indeno(1,2,3-cd) pyrene (1.73 ng/m³ and 1.17 ng/m³, respectively). As to the biomonitoring of the 45 children evaluated there was no correlation between the parameters of the comet assay (moment, intensity and tail length) and the micronucleus test. The values reported for children concerning these biomarkers were: 0.27±0.407 for induction of MN in buccal cells and 0.56±0.727 for nuclear buds, 0.51±0.697 for binucleated cells, 46.37±16.330 for condensed chromatin, 6.97±5.746 for picnosis, 6.60±5.540 for caryolysis and 57.55±24.920 for caryorrhexis, its cellular variants (‰), and for responses to the Comet assay in relation to the tail length (23.07±12.442), intensity of the tail (7.28±11.657) and moment of the tail (0.95±2,30). The analysis both for the MN test and for the Comet assay regarding sex and age was not significant. Among the counfounding factors, significant differences were observed for the passive smoking and induction of MN. The presence of PAHs and the mutagen response may be related to the local vehicular emissions. These results show the importance of studying areas of reference for atmospheric pollution, establishing baseline levels, especially in populations of children.

Com o aumento, a cada ano, dos alojamentos na cadeia de produção avícola, a disseminação de doenças ficou facilitada. Nos lotes de aves, a fase inicial tem principal importância no que tange à contaminação por Salmonella Enteritidis, devido a maior sensibilidade às infecções pela ausência de uma flora intestinal completa e a imaturidade do sistema imune. Avaliaram-se, neste estudo, os benefícios na progênie do uso de uma vacina inativada em adjuvante oleoso para Salmonella Enteritidis, em matrizes pesadas, através de coleta de ovos bicados e pintos natimortos no incubatório, bem como suabes de arrasto nos aviários de frangos de corte. Observou-se que a imunização das matrizes conferiu uma proteção para suas progênies, tanto em ovos bicados, pintos natimortos coletados no incubatório no dia do nascimento, bem como em granjas de frango de corte, onde foram coletados suabes de arrasto entre 21 e 30 dias. Em ovos bicados foram analisadas 850 amostras, sendo que nos lotes vacinados tiveram 10 amostras (1,18%) positivas, e, nos lotes não vacinados tiveram 288 amostras (33,88%) positivas. Em pintos natimortos foram analisados 850 amostras, sendo os lotes vacinados tiveram 16 amostras (1,88%) positivas e nos lotes não vacinados tiveram 210 amostras positivas (24,70%). Em suabe de arrasto, nas granjas de frangos de corte, foram analisadas 502 amostras para lotes não vacinados; sendo 22 amostras positivas (4,38%). Nos lotes vacinados foram analisados 475 amostras, sendo 6 amostras positivas (1,26%). Os resultados obtidos nos levam a concluir que a vacina de Salmonella Enteritidis inativada em adjuvante oleoso, propicia uma imunidade passiva para as progênies das matrizes de corte que foram vacinadas, proporcionando uma redução significativa a infecções precoces pela bactéria. / With the increase of households in the poultry production chain each year, the spread of diseases was facilitated. In lots of birds, the initial phase has primary importance regarding to contamination by Salmonella Enteritidis, due to a bigger sensitivity to the infections by the absence of a complete gut and the immaturity of the immune system. In this study it was evaluated, the benefits of using the progeny of an inactivated vaccine in oil adjuvant for Salmonella Enteritidis in the main weighted broilers, through collection of eggs pecked and hatchery stillbirth chicks, as well as drag swabs on poultry broiler. It was observed that immunization of matrices gave a protection to their progeny, both egg pecked, hatchery stillborn chicks collected on the day of birth, and in broiler farms, where the drag swabs were collected between 21 and 30 days. In pecked eggs were analyzed 850 samples, being that in the vaccinated lots 10 samples (1.18%) were positive and in non-vaccinated lots 288 samples (33.88%) were positive. In stillbirths chicks were analyzed 850 samples, and in the vaccinated lots were 16 samples (1.88%) positive and in the unvaccinated lots, 210 were positives samples (24.70%). In the drag swab in broiler farms, 502 samples were analyzed for non-vaccinated lots, with 22 positive samples (4.38%). In the vaccinated lots were analyzed 475 samples and six positive samples (1.26%). The results lead us to conclude that the Salmonella Enteritidis inactivated vaccine in oil adjuvant, provides passive immunity to the progeny of broiler breeder flocks were vaccinated, providing a significant reduction in early infections by bacteria.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Salmonella infection is a relevant problem in the public health, being one of the most important causes of the world´s enteric pathologies, with 1,3 million ill people, resulting in 600 deaths/year. The Salmonella spp. transmission occurs especially through water consumption and contaminated food. The diagnosis is realized using biochemical, serologic, and molecular tests. The RAPD (Randomly Amplified Polymorphic DNA) test is able to detect the genetic variation present in the isolated Salmonella spp. samples, allowing a molecular typing. This research aimed at achieving molecular typing from Salmonella spp. samples isolated from various resources (oyster, chicken, potable water, blood, and human feces) utilizing the RAPD technique. 33 Salmonella spp. samples, that came from bacteria located at the Laboratório de Virologia Comparada-DMO/CCBS/UFS, and two standard samples were utilized. Six randomized primers were used from the Ready-To-Go System RAPD; the products amplified were submitted to an electrophoretic run in a 5% polyacrilamid gel, and silver dyed. The band standard observed was analyzed by the NTSYS program. After a computational analysis it was possible to discriminate the 35 Salmonella spp. samples, resulting in 35 RAPD individual and distinct patterns, showing that the samples are genetically diversed and that there is an ample genetic biodiversity in the circulating samples in Aracaju-SE. To the grouping the Salmonella spp. samples was observed the epidemiological relationship between human samples and chicken. / A infecção por Salmonella é um relevante problema de saúde pública, sendo uma das mais importantes causas de patologias entéricas do mundo, com 1,3 milhões de doentes, resultando em aproximadamente 16000 hospitalizações e 600 mortes/ano. A transmissão da Salmonella spp. ocorre principalmente através do consumo de água e alimentos contaminados. O diagnóstico é realizado através de testes bioquímicos, sorológicos e moleculares. A técnica de RAPD (Randomly Amplified Polymorfhic DNA) é capaz de detectar as variações genéticas presente nos isolados, permitindo a tipagem molecular. Este estudo teve como objetivo realizar a tipagem molecular das amostras de Salmonella spp. isoladas de diversas fontes (ostra, frango, água residual, sangue e fezes humanas) utilizando a técnica de RAPD. Foram utilizadas 33 amostras de Salmonella spp. da bacterioteca do Laboratório de Virologia Comparada DMO/CCBS/UFS e duas amostras padrões. Foram utilizados seis primers randômicos do Sistema Read-To-Go RAPD, os produtos amplificados foram submetidos à corrida eletroforética em gel de poliacrilamida 5% e corado pela prata. O padrão de bandas observadas foi analisado pelo programa NTSYS. Após análise computacional foi possível discriminar as 35 amostras de Salmonella spp., resultando em 35 padrões de RAPD individuais e distintos, mostrando que as amostras são geneticamente diversas e que existe uma ampla biodiversidade genética nas amostras circulantes em Aracaju-SE. Ao grupar as amostras de Salmonella spp. observou-se o relacionamento epidemiológico entre as amostras humanas e de frango.