No description available.

Recently, we demonstrated the beneficial effects of engineered heart tissues for the treatment of dilated cardiomyopathy in rats. For further development of this technique we started to produce engineered tissue (ET) from mesenchymal stem cells. Interestingly, we observed a malignant tumor invading the heart with an inverse relationship between proliferation markers and connexin expression.

No / Objective: To investigate the use of the National Cancer Institute's hollow fiber assay (HFA) to evaluate and prioritize novel treatment strategies for clinical trials in the Ewing's sarcoma family of tumors (ESFT). Study design: The growth and morphology of ESFT cell lines in hollow fibers (HFs) was characterized in vitro and in vivo. Reliability and reproducibility were evaluated using doxorubicin. Results: The numbers of viable cells in all 6 ESFT cell lines increased with time in vitro (0 to 96 hours). The SKES-1 and A673 cell lines grew exponentially after implantation of HFs in nude mice at subcutaneous and intraperitoneal sites. ESFT cells formed highly organized distinctive morphology within the HFs in vitro and in vivo. The number of viable ESFT cells within the HFs decreased in a time-dependent (24 to 96 hours) and dose-dependent (1 to 10 mg/kg) manner after treatment with doxorubicin in vivo. Conclusions: The HFA is a versatile short-term in vivo model that may be exploited to predict efficacy of potential anticancer agents in ESFT cells. Tumor markers and pharmacodynamic endpoints may be quantified in the pure population of ESFT cells from within the HFs.

Solid State Nuclear Magnetic Resonance (ssNMR) spectroscopy can be a powerful tool for investigating the atomic-level structures and dynamics of biological macromolecules, including proteins. In this dissertation, I present an ssNMR study of three diverse proteins, revealing insights into their respective secondary structures, conformational variations, and intermolecular interactions. Additionally, I introduce novel computational methods to facilitate the assignment of chemical shifts of ssNMR spectra. The first of the proteins is the capsid protein of the Rous Sarcoma Virus. In previous research, the structure of the hexameric lattice of the in-vitro tubular assembly of the capsid protein was determined. In this study, chemical shift assignments were completed and the structure of the T=1 capsid assembly (comprising entirely of a pentameric lattice) of the I190V mutant variant of the capsid was determined, providing the missing component of the in-vivo capsid structure. The second protein studied was amyloid-beta 42, a particularly cytotoxic variant of the main component of amyloid plaques in the brains of Alzheimer's disease patients. Chemical shift assignments were made on ssNMR data from samples aggregated in cholesterol-containing phosphatidylcholine (POPC) lipid vesicles, and secondary structure and molecular distance information was obtained. Lastly, preliminary chemical shift assignments, statistics, and structural analysis was done on the polypeptide Ref-2Cx4, derived from the conserved domain of the Hawaiian bobtail squid reflectin protein. The reflectin protein, used in the squid's camouflage mechanism, possesses optically reflective and proton-conductive properties. The final part of the dissertation addresses a major bottleneck in ssNMR studies—the assignment of chemical shifts. I introduce Visual Assist, a suite of computational tools designed to streamline and expedite the assignment process. The developed computational methods are validated on the diverse set of proteins above, demonstrating their general applicability and efficiency.

INTRODUÇÃO: A cirurgia associada à radioterapia proporciona altas taxas de preservação de membros e de controle local em sarcomas de partes moles de extremidade de adultos, mas ainda apresenta elevadas taxas de complicações locais e de metástases à distância. O valor da quimioterapia adjuvante ou neoadjuvante ainda é controverso e objeto de investigações clínicas. A identificação de fatores moleculares preditivos de resposta à quimioterapia pode selecionar pacientes que se beneficiem ou não da sua aplicação. OBJETIVOS: identificar perfis de expressão gênica capazes de diferenciar tumores respondedores e não respondedores a quimioterapia neoadjuvante em sarcomas de partes moles. Analisar os resultados preliminares relativos à efetividade de um esquema de quimioterapia neoadjuvante em sarcomas de partes moles. MÉTODOS: amostras foram coletadas a partir de um ensaio clínico fase II não controlado que testa um esquema de quimioterapia neoadjuvante com doxorrubicina e ifosfamida em sarcomas de alto grau histológico, localizados em extremidades de pacientes adultos. O perfil de expressão gênica foi determinado pela análise de cDNA microarrays. RESULTADOS: 14 pacientes foram incluídos no estudo clínico e 6 amostras foram utilizadas para análise molecular. 222 seqüências diferentemente expressas entre respondedores e não respondedores foram identificadas. Entre os genes com maior diferença de expressão, foram observados genes envolvidos com via de sinalização de TGF, genes envolvidos com angiogênese, com degradação de matriz extracelular e com desenvolvimento. A taxa de resposta objetiva à quimioterapia neoadjuvante foi de 28,6%, a taxa de amputação foi de 7,1% e taxa de complicações relacionadas à ferida operatória foi de 23%. Complicações graus 3 e 4 ocorreram em 50% dos pacientes e nenhum deles faleceu ou teve a proposta cirúrgica suspensa em decorrência de complicações da quimioterapia. CONCLUSÕES: tumores respondedores a quimioterapia neoadjuvante com doxorrubicina e ifosfamida apresentaram um perfil de expressão gênica diferente dos não respondedores, particularmente em genes envolvidos na via de sinalização de TGF. O esquema terapêutico testado mostrou-se efetivo e seguro para ser investigado em um estudo fase III / INTRODUCTION: Surgery combined with adjuvant radiotherapy provides high rates of limb sparing and local control for adult extremity soft tissue sarcomas, but is still associated with high rates of local morbidity and distant recurrences. The role of adjuvant or neoadjuvant chemotherapy is still controversy and target of clinical investigations. The identification of molecular predictive factors of response to chemotherapy could select patients who have benefits or not with its use. OBJECTIVES: to identify gene expression profiles that discriminate tumors with respect to response to neoadjuvant chemotherapy. Analyze the preliminary results of a protocol of neoadjuvant chemotherapy in soft tissue sarcomas. METHODS: samples were collected from subjects of a single-arm prospective clinical trial that investigates the effectiveness of a neoadjuvant doxorubicin and ifosphamide-based chemotherapy regimen in high grade extremity soft tissue sarcomas in adults. Gene expression profiles were determined by the analysis of cDNA microarrays. RESULTS: 14 patients were included in the clinical trial and six samples were used in the molecular study. 222 sequences differentially expressed between responders and non responders were identified. Among the genes with higher differences in expression, we have identified genes involved with TGF signaling pathway, angiogenesis, extracelular matrix degradation and development. The objective response rate to neoadjuvant chemotherapy was 28,6%, the amputation rate was 7,1%, and the wound complication rate was 23%. Grades 3 and 4 complications have occurred in 50 % of the cases, but no deaths or modifications on surgical intent related to chemotherapy complications have occurred. CONCLUSIONS: tumors considered responders to neoadjuvant chemotherapy showed a gene expression profile significantly different from non responders, especially with respect to the TGF signaling pathway. The neoadjuvant regimen tested has showed to be effective and safe to be considering for a phase III clinical trial

Sarcoma de Kaposi (SK) é um tumor de origem vascular associado ao herpesvírus 8 humano (HHV-8). A incidência do SK-AIDS tem diminuído após o advento da terapia anti-retroviral combinada (HAART), sem estudos relacionando a resposta inflamatória cutânea e a expressão de HHV-8 na era pré e pós HAART. Utilizamos a immuno-histoquímica para caracterizar e quantificar in situ as células inflamatórias, o padrão de citocinas e a expressão de HHV-8 em lesões cutâneas de sarcoma de Kaposi clássico (SKC), sarcoma de Kaposi associado à AIDS (com ou sem HAART). O número diminuído de linfócitos TCD4+ em lesões de SK-AIDS quando comparado com SKC, reflete a imunodeficiência severa causada pelo HIV. O número de linfócitos TCD8+ foi similar nos três grupos de SK, o qual parece não se correlacionar com a forma clínico-epidemiológica do SK. As células S100+ e DD FXIIIa+ estiveram aumentadas em todas as lesões de SK comparadas com a pele normal. Nós também encontramos uma população celular dérmica S100+CD1a- peculiar nas lesões de SK. Os macrófagos CD68+ estiveram aumentados nas lesões de SKC quando comparados com as lesões de SK-AIDS, mas similares com aqueles encontrados em lesões de SK-AIDS/HAART. Dados semelhantes foram encontrados nas células de Langerhans epidérmicas nesses grupos, sugerindo uma recuperação immune parcial através da HAART. O número aumentado de células expressando IFN- em lesões de SKC e SK-AIDS/HAART quando comparado com SK-AIDS sugere essa citocina como um indicador de resposta imune mais eficaz. A expressão aumentada de IL-1 nas lesões de SKC e SK-AIDS/HAART poderia estar relacionada ao seu efeito anti-tumoral. A expressão de TNF-, IL-4 e IL-6 foram similares entre as lesões de SK avaliadas. Através de dupla marcação, a identificação nuclear de HHV-8 em DD FXIIIa+ sugere esse tipo celular como alvo para infecção por HHV-8. As lesões de SKC apresentaram número aumentado de células com expressão de HHV-8 quando comparado com os grupos de SK-AIDS, independente da HAART. Nosso estudo mostra que existiu uma recuperação da resposta immune local nas lesões de SK-AIDS/HAART e que a severidade clínica do SK não pode estar diretamente associada com a densidade aumentada de células infectadas pelo HHV-8 no tecido / Kaposis sarcoma (KS) is a vascular-originated tumor associated to human herpesvirus 8 (HHV-8). The incidence of AIDS-KS has decreased after the advent of highly active antiretroviral therapy (HAART), without studies regarding cutaneous inflammatory response and HHV-8 expression in pre- and post-HAART era. We used immunohistochemistry to characterize and to quantify in situ inflammatory cells, its cytokines pattern and the expression of HHV-8 in cutaneous lesions of classic Kaposis sarcoma (CKS), AIDS associated Kaposis sarcoma (with or without HAART). The decreased number of T CD4+ lymphocytes in lesions of AIDS-KS as compared with CKS, reflect the severe immunodeficiency caused by HIV. T CD8+ lymphocytes numbers were similar in three KS groups, which appeared unrelated to the clinical or epidemiological type of KS. S100+ cells and FXIIIa+ DD were increased in all KS lesions as compared with normal skin. We also found a peculiar dermal cellular population in KS lesions. CD68+ macrophages were higher in CKS lesions as compared with AIDS-KS lesions, but similar to those found in lesions of HAART/AIDS-KS. Similar data were found in epidermal Langerhans cells in these groups, suggesting a partial immune recovery by HAART. The high number of cells expressing IFN- in CKS lesions and HAART/AIDS-KS as compared with AIDS-KS suggests that this cytokine may be a marker of effective immune response. The increased expression of IL-1 in CKS lesions and HAART/AIDS-KS could be related with its anti-tumor effect. Expression of TNF-, IL-4 e IL-6 were similar between KS lesions. Demonstrated by double-immunostaining, nuclear identification of HHV-8 in FXIIIa+ DD suggests this cell type as target for HHV-8 infection. CKS lesions showed increased number of cells with HHV-8 expression as compared with another groups of AIDS-KS, independent of HAART. Our data shown that there was a partial recovery of local immune response in HAART/AIDS-KS lesions and that the KS clinical severity cannot be directly associated with the increased density of HHV-8 infected cells in tissue

A infecção pelo herpesvírus humano tipo 8 (HHV-8) tem sido associada ao sarcoma de Kaposi (SK) iatrogênico, que acomete pacientes imunossuprimidos e/ou transplantados renais. Em populações consideradas saudáveis, a soroprevalência para o HHV-8 varia de 1% a 8%. O presente trabalho buscou: determinar a prevalência e os títulos de anticorpos anti-HHV-8 em pacientes com insuficiência renal crônica (IRC), submetidos ou não à terapia renal substitutiva (TRS) do Hospital do Rim e Hipertensão e Casa da Diálise da UNIFESP e da Santa Casa de Misericórdia de São Paulo e, comparar os resultados obtidos com outras populações da mesma região geográfica, porém de outras categorias de risco para adquirir doenças infecciosas. Soros de 805 pacientes: 295 em hemodiálise, 54 em diálise peritoneal e 456 em acompanhamento ambulatorial, sem TRS, foram testados quanto à presença de anticorpos anti-HHV-8, de fase latente e lítica da replicação viral, por meio de técnicas de imunofluorescência indireta (IFI) LANA e Lítico, padronizadas na Seção de Imunologia do Instituto Adolfo Lutz. Os resultados obtidos foram analisados em relação a dados clínicos, epidemiológicos e laboratoriais usando o teste do qui-quadrado ou exato de Fisher para as variáveis categóricas e os testes de Mann Whitney ou Kruskal Wallis para as variáveis contínuas. Foi encontrada soropositividade ao HHV-8 em 18,0% dos pacientes com IRC, dos quais 18,3% nos pacientes em TRS e 17,7% nos pacientes sem TRS, não havendo diferença significante entre os grupos. As variáveis que estiveram relacionadas à sorologia positiva ao HHV-8 foram: transplante prévio (p<0,001) e doenças sexualmente transmissíveis (p=0,003), com destaque para a sífilis (p=0,021). As demais variáveis não mostraram associação estatística embora tenha havido maior número de amostras HHV-8 soropositivas com o avançar da idade. Em relação ao tipo e ao título de anticorpos detectados, houve mais amostras com sorologia positiva para anticorpos Lítico e maiores títulos de anticorpos LANA. A comparação dos resultados dos pacientes com IRC e outras populações de São Paulo revelou taxa semelhante de prevalência de anticorpos anti-HHV-8 na população com HIV/Aids (20,4%), considerada de alto risco para esta infecção viral. Por outro lado, a prevalência detectada na população com IRC (18,0%) foi inferior às obtidas em pacientes com SK epidêmico (89,3%), SK clássico (100,0%) e SK endêmico (87,5%), e superior a outras populações sem SK: pacientes com deficiência mental e/ou física (1,6%) e profissionais da área da saúde (1,1%). Em todos os grupos analisados houve maior número de amostras com sorologia positiva para HHV-8 de fase lítica, e maiores títulos de anticorpos LANA, exceção feita aos profissionais da área da saúde. Maiores títulos de anticorpos LANA foram detectados nos pacientes com SK. Não foram encontradas outras associações significantes. Os resultados obtidos permitem concluir que os pacientes com IRC têm alta prevalência de anticorpos anti-HHV-8, comparável aos indivíduos com HIV/Aids dessa região geográfica. Ainda, sugerem que se devam acompanhar os pacientes HHV-8 soropositivos com vistas a monitorar os títulos de anticorpos LANA e verificar se estes têm valor prognóstico. Caso isto venha a ser confirmado, sugere-se a introdução da sorologia para o HHV-8 na bateria de exames do pré-transplante renal. / Human herpesvirus 8 (HHV-8) infection is frequently associated with Kaposi\'s sarcoma (KS) in immunodeficient and renal transplanted patients. The HHV-8 seroprevalence in healthy populations varies from 1% to 8%. The present study aimed to determine the HHV-8 seroprevalence and antibodies titers in chronic kidney disease (CKD) patients with or without substitutive kidney therapy (SKT) attended at Hospital do Rim e Hipertensão and Casa da Diálise of UNIFESP, and at Santa Casa de Misericórdia de São Paulo. Secondarly, to compare the serological results with those obtained from populations of the same geographic region, presenting other risk factors for acquiring infectious diseases. Serum samples were collected from 805 CKD patients: 295 under hemodialysis, 54 under peritoneal dialysis, and 456 in ambulatorial assistance without SKT. Latent and Lytic HHV-8 antibodies were searched using indirect immunofluorescence assays that were standardized at Immunology Department of Instituto Adolfo Lutz. Chi-Square test and/or Fisher\'s exact test were performed for comparing categorical variables including epidemiological, clinical and laboratorial data, and HHV-8 serum status. Continuos variables associated with HHV-8 antibodies titers were compared using Mann Whitney or Kruskal Wallis tests. An overall HHV-8-seropositivity of 18.0% was detected in CKD patients: 18.3% in patients under SKT and 17.7% in patients without SKT. Since no difference was detected in HHV-8-seropositivity among patients, they were considered as a unique group for subsequent analysis. A strong association between HHV-8-seropositivity and previous transplant was detected (p<0.001), along with an association with others sexually transmitted diseases (p=0.003), with emphasis for syphilis (p=0.021). In addition, no other data was associated with HHV-8-seropositivity, although higher proportions of HHV-8-seropositivity were detected in samples from elderly persons. In addition, more HHV-8 Lytic antibodies positive samples, and higher titers of LANA antibodies were detected. HHV-8 seroprevalence obtained from CKD patients was similar to the HHV-8 prevalence detected among HIV/Aids patients (20.4%), who were considered a high-risk group for this viral infection. On the other hand, the HHV-8 seroprevalence of CKD patients (18.0%) was lower than the prevalence of patients with epidemic KS (89.3%), classic KS (100.0%) and endemic KS (87.5%), and higher than the patients with mental and/or physical deficiency (1.6%) and health professionals (1.1%). All analyzed groups had more HHV-8-seropositive samples for Lytic antibodies and higher titers of LANA antibodies, with exception for the health professionals. The highest LANA antibodies titers were found among KS patients groups. No other association was found. In conclusion, the obtained results points out CKD patients as a high prevalent population for HHV-8 infection, similar to HIV/Aids patients from the same geographic area. As far, it suggests that HHV-8 seropositive CKD patients should be followed up in order to verify whether LANA antibodies titers have prognostic value. In confirming this hypothesis, it may propose to include the use of HHV-8 serology in the screening testing in kidney pre-transplant.

Desde a descoberta do herpes vírus humano tipo 8 (HHV-8) como o agente etiológico do sarcoma de Kaposi (SK) nas suas diferentes formas clínico-epidemiológicas, vários estudos vêm sendo conduzidos com o intuito de determinar as vias de transmissão desse vírus em populações endêmicas e de risco epidemiológico. Em regiões endêmicas, a transmissão viral foi relacionada à transmissão horizontal de mães para filhos e entre irmãos e a sexual principalmente, nos casos de SK/aids. Com o objetivo de determinar segmentos do genoma viral em fluídos biológicos e consequentemente seu potencial infectante foi conduzido o presente trabalho. Foram avaliados quanto à presença de segmentos localizados em posições estratégicas do genoma do HHV-8 em sangue, saliva e urina de 76 pacientes com SK/aids, 19 pacientes com HIV/aids, 4 casos de SK clássico e 11 indivíduos sadios (HIV-soronegativos, sem SK). Foram utilizadas as técnicas de PCR "nested" para as ORF K1, ORF 25, ORF 26, ORF K8.1 e ORF 73 em DNA extraído de material de biópsia de lesão de SK (controle positivo), células do sangue periférico, saliva e urina. Os resultados de PCR positivo para o HHV-8 foram analisados quanto a variáveis epidemiológicas, clínicas e laboratoriais. Foram consideradas como variáveis: sexo, cor, origem étnica, tempo de infecção por HIV e de acompanhamento do SK, terapia ARV e para SK, contagem de células CD4+ e sorologia para o HHV-8 (IFI-LANA e IFI-Lítico). Os testes estatísticos de regressão logística e de razão de chances foram usados para detectar as associações estatisticamente significantes entre as PCRs positivas e as variáveis estudadas nos grupos SK/aids e HIV/aids. Os subtipos do HHV-8 foram também determinados pela técnica de PCR-RFLP da ORF K1 (VR1). Os resultados obtidos mostraram a detecção de DNA/HHV-8 em 80,2% do material de biópsia, 69,7% no sangue, 59,2% na saliva e 21,0% na urina de pacientes com SK/aids. No grupo HIV/aids, a PCR para o HHV-8 resultou positiva em 47,4% dos casos no sangue e em 26,3% na saliva e urina. Já no grupo SK clássico 100% das biópsias e salivas resultaram PCR positiva, 67% do sangue e 33% das urinas. A avaliação sorológica revelou 73,3% de reatividade para IFI-LANA e 85,3% para a IFI-Lítico no grupo SK/aids, enquanto o grupo HIV/aids mostrou reatividade de 15,8% para IFI-LANA e 47,4% para IFI-Lítico; todos os pacientes apresentaram resultados reagentes nas duas sorologias para o HHV-8 no grupo de SK clássico. No grupo controle sadio não houve reatividade na sorologia para o HHV-8, com exceção de um caso, que mostrou ser reagente na IFI-LANA. Foi possível realizar a subtipagem do HHV-8 em amostras de 69 pacientes, sendo detectadas 27 cepas do subtipo A, 13 do subtipo B, 28 do subtipo C e 1 do subtipo E. Após as análises estatísticas foi verificado que as PCRs que identificam as regiões ORF 26, ORF K8.1 e ORF 73 foram as que apresentaram melhor desempenho na identificação de DNA/HHV-8. Houve associação entre a reatividade de IFI-Lítico e a presença do vírus no sangue periférico, assim como a reatividade para IFI-LANA e a detecção de DNA/HHV-8 na saliva. Houve uma tendência dos subtipos B e C de HHV-8 serem detectados em pacientes com infecção profunda ou disseminada de SK. Estes resultados sugerem que a boca pode ser um sítio de latência da infecção por HHV-8 e confirmam a atuação de sangue, saliva e urina como fluídos potencialmente infectantes. / Since the discovery of the human herpesvirus 8 (HHV-8) as the etiological agent of Kaposi’s sarcoma (KS), several studies have been conducted in order to determine routes of virus transmission, mostly in endemic and at risk populations. The main of the present study was to determine target segments of the HHV-8 genoma and consequently infected bodily fluids. DNA sequences of ORF K1, ORF 25, ORF 26, ORF K8.1 and ORF 73 strategically localized in viral genoma were searched using nested PCR techniques in KS lesions (positive control), blood, saliva, and urine from 76 KS/aids patients, 19 HIV/aids patients, 4 classic KS patients, and among 11 healthy individuals (HIV-1 seronegative, without KS). HHV-8 subtypes were determined by PCR-RFLP of the ORF K1 (VR1), and HHV-8 antibodies by IFA-LANA and IFA-Lytic assays. The results obtained were analyzed according to epidemiological, clinical and laboratorial data, and the c2 test, logistic regression and odds ratio were applied to identify statistical association among variables in KS/aids and HIV/aids groups. The results obtained showed HHV-8 DNA in 80.2% of biopsies, 69.7% of blood, 59.2% of saliva, and 21% of urines from KS/aids group. Among HIV/aids patients, 47.4% resulted PCR positive in blood, 26.3% in saliva and urine. In classic KS cases, all biopsies and saliva resulted PCR positive, 67% in blood, and 33% in urine. The serology in KS/aids group showed 73.3% frequency of anti-latent antibodies, and 85.3% frequency of anti-lytic antibodies, while in HIV/aids group the frequencies were 15.8% and 47.4%, respectively. All classic KS cases resulted HHV-8 seroposite, while all individuals from control group resulted HHV-8 seronegative. Molecular characterization of 69 HHV-8 strains disclosed: 27 of subtype A, 13 of subtype B, 28 of subtype C, and 1 of subtype E. The ORF 26, ORF K8.1 and ORF 73 were the best segments for identifying HHV-8 DNA in bodily fluids. It was observed an association between antibodies to lytic antigens and the presence of HHV-8 in blood, and antibodies to latent antigens and the detection of HHV8 DNA in saliva of KS/aids patients. Indeed, HHV-8 subtypes B and C were detected mostly in disseminated KS cases. Taken together, the results obtained suggest that the mouth could be one site of HHV-8 latency, and confirm that blood, saliva and urine were potentially infectious bodily fluids.

INTRODUÇÃO: O Sarcoma de Kaposi (SK) é a neoplasia mais frequente dos doentes com Aids. É causada pelo herpes-vírus 8 (HHV-8). As células dendríticas plasmocitóides (CDp) são especializadas na produção de interferon tipo 1 e participam da resposta imune aos vírus. Os receptores \"toll-like\" são os principais receptores de reconhecimento de padrão, sendo que os receptores toll-like (TLR) 3 e 9 têm função no reconhecimento de vírus. O D2-40 é o anticorpo que reconhece a podoplanina, uma proteína transmembrana, presente no endotélio linfático e que tem função na imunidade. OBJETIVO: Demonstrar e comparar os componentes da imunidade inata: CDp e TLR 3 e 9, nas lesões cutâneas de SK associado a Aids e esporádico. Identificar a presença do HHV-8 nas CDp. Verificar o componente endotelial linfático na progressão das lesões de SK e comparar a expressão dos elementos da imunidade inata estudados, nas lesões com menor e maior componente endotelial linfático. MÉTODOS: Estudo retrospectivo de 50 biopsias de pacientes com diagnóstico de SK, todos com comprovação pelo exame histopatológico e demonstração do antígeno nuclear associado à latência (LANA) do HHV-8. Foram avaliados 11 biopsias de SK da forma clássica (SKc), 22 lesões de doentes com Aids (SK-Aids) e de 17 de doentes com Aids submetidos a tratamento com terapia antirretroviral altamente eficaz (SK-Aids/HAART). Os espécimes foram submetidos a exame por técnica imuno-histoquímica para evidenciar a presença de CDp (anticorpo CD303/BDCA-2), a expressão de TLR 3 e 9, bem como de podoplanina (anticorpo D2-40). Foi realizada também técnica de dupla marcação com CD303 e LANA, objetivando a identificação de CDp infectadas pelo HHV-8.Vinte e três espécimes de granuloma piogênico constituíram o grupo controle. A população de CDp e expressão de TLR 3 e TLR 9 também foi comparada nas lesões cutâneas de SK de doentes com e sem comprometimento visceral pela neoplasia; lesões não tumorais (máculo-papulares/placas) foram comparadas às lesões tumorais (nodulares) e de acordo com níveis sanguíneos de linfócitos T CD4+ (menor e igual ou maior que 350 células/mm3). RESULTADOS: As CDp foram mais numerosas nos espécimes de SK-Aids quando comparado com o granuloma piogênico. Foram identificadas CDp infectadas pelo HHV-8. A expressão de TLR 3 foi menor nas lesões de SK, independente da forma epidemiológica, do que no granuloma piogênico. Para todas as outras comparações da densidade de CDp e expressão de TLR 3 e de TLR 9 não houve diferença entre os grupos. Não houve diferença no componente endotelial linfático das lesões máculo-papulares/placas e tumorais do SK, assim como na expressão dos elementos da imunidade inata estudados entre as lesões com maior e menor componente endotelial linfático. CONCLUSÕES: Demonstrou-se pela primeira vez a presença de CDp e a expressão de TLR 3 e 9 em lesões cutâneas do Sarcoma de Kaposi, bem como a infecção de CDp pelo HHV-8 \"in situ\" nos tumores. Os resultados obtidos sugerem a participação das células CDp e do TLR 3 na patogênese das lesões cutâneas do Sarcoma de Kaposi, independente da presença do vírus da imunodeficiência humana. A imunomarcação de SK com o anticorpo D2-40, tanto nas fases precoce como tardia das lesões, confirma a natureza endotelial linfática das células neoplásicas. Esta parece não ter relação com a expressão dos elementos da imunidade inata estudados / Introduction: Kaposi\'s sarcoma (KS) is the most common Aids-associated malignancy. It is caused by human herpesvirus-8. Plasmacytoid dendritic cells (pDC) are professional interferon producing cells, and participate in the immune response against viruses. Toll-like receptors (TLR) are the main pattern recognition receptors, and TLR 3 and TLR 9 participate in the recognition of viruses. Podoplanin, recognized by antibody D2-40, is a transmembrane protein identified on lymphatic endothelial cells with functions inimmunity. Objective: Demonstrate and compare some innate immunity components: pDC, TLR 3 and TLR 9, in cutaneous lesions of Aids-associated Kaposi\'s sarcoma and classic Kaposi\'s sarcoma. Identify the infection of pDC by HHV-8. Compare the lymphatic endothelial component in the course of tumor progression and compare the expression of innate immunity elements in lesions with a predominance of lymphatic endothelial components or not. Methods: Retrospective study of 50 biopsies diagnosed as Kaposi\'s sarcoma withpositive staining for latency-associated nuclear antigen (LANA) of HHV-8. Eleven classic KS, 22 Aids-associated KS and 17 Aids-associated KS from patients undergoing highly active antiretroviral therapy (HAART) were assessed. Paraffinembedded tissue was submitted to immunohistochemistry technique in order to demonstrate pDC (CD303/BDCA-2 antibody), expression of TLR 3, TLR 9 and podoplanin (D2-40 antibody). We performed double staining with CD303 and LANA in order to identify pDC infection with HHV-8. Twenty-three pyogenic granuloma(PG) specimens were analyzed as a control group. Plasmacytoid dendritic cells population, TLR 3 and TLR 9 expressions were compared between patients with and without visceral disease, nodular stageandpatch/plaque stage and according to bloodlymphocytes T CD4 count(=350 cells/mm3). Results: Plasmacytoid dendritic cells density in Aids-associated SK was higher than in PG. We could identify pDC infection by HHV-8. The expression of TLR 3 in all forms of KS was less extensive than PG. All others comparisons about pDC density, TLR 3 and 9expressions were similar. We found no difference in D2-40 expression between nodular and patch/plaque stages. When comparing tumors with extensive expression of D2-40 (>= 50% of cells) and tumors with less expression (<50% of cells), we found no differences in density of pDC and expression of TLR 3 and TLR 9. Conclusion: This is the first time that pDC, TLR 3 and TLR 9 have been demonstrated in skin lesions of KS, as well as the infection of pDC in the lesions. Our results suggest that pDC and TLR 3 participate in the pathogenesis of KS, independently of HIV presence. The positive staining with D2-40 antibody, in all the stages of KS, confirmsthe lymphatic nature of neoplastic cells. It seems that podoplanin is not related to the innate immunity elements studied here

Sarcoma de Kaposi (SK) é um tumor de origem vascular associado ao herpesvírus 8 humano (HHV-8). A incidência do SK-AIDS tem diminuído após o advento da terapia anti-retroviral combinada (HAART), sem estudos relacionando a resposta inflamatória cutânea e a expressão de HHV-8 na era pré e pós HAART. Utilizamos a immuno-histoquímica para caracterizar e quantificar in situ as células inflamatórias, o padrão de citocinas e a expressão de HHV-8 em lesões cutâneas de sarcoma de Kaposi clássico (SKC), sarcoma de Kaposi associado à AIDS (com ou sem HAART). O número diminuído de linfócitos TCD4+ em lesões de SK-AIDS quando comparado com SKC, reflete a imunodeficiência severa causada pelo HIV. O número de linfócitos TCD8+ foi similar nos três grupos de SK, o qual parece não se correlacionar com a forma clínico-epidemiológica do SK. As células S100+ e DD FXIIIa+ estiveram aumentadas em todas as lesões de SK comparadas com a pele normal. Nós também encontramos uma população celular dérmica S100+CD1a- peculiar nas lesões de SK. Os macrófagos CD68+ estiveram aumentados nas lesões de SKC quando comparados com as lesões de SK-AIDS, mas similares com aqueles encontrados em lesões de SK-AIDS/HAART. Dados semelhantes foram encontrados nas células de Langerhans epidérmicas nesses grupos, sugerindo uma recuperação immune parcial através da HAART. O número aumentado de células expressando IFN- em lesões de SKC e SK-AIDS/HAART quando comparado com SK-AIDS sugere essa citocina como um indicador de resposta imune mais eficaz. A expressão aumentada de IL-1 nas lesões de SKC e SK-AIDS/HAART poderia estar relacionada ao seu efeito anti-tumoral. A expressão de TNF-, IL-4 e IL-6 foram similares entre as lesões de SK avaliadas. Através de dupla marcação, a identificação nuclear de HHV-8 em DD FXIIIa+ sugere esse tipo celular como alvo para infecção por HHV-8. As lesões de SKC apresentaram número aumentado de células com expressão de HHV-8 quando comparado com os grupos de SK-AIDS, independente da HAART. Nosso estudo mostra que existiu uma recuperação da resposta immune local nas lesões de SK-AIDS/HAART e que a severidade clínica do SK não pode estar diretamente associada com a densidade aumentada de células infectadas pelo HHV-8 no tecido / Kaposis sarcoma (KS) is a vascular-originated tumor associated to human herpesvirus 8 (HHV-8). The incidence of AIDS-KS has decreased after the advent of highly active antiretroviral therapy (HAART), without studies regarding cutaneous inflammatory response and HHV-8 expression in pre- and post-HAART era. We used immunohistochemistry to characterize and to quantify in situ inflammatory cells, its cytokines pattern and the expression of HHV-8 in cutaneous lesions of classic Kaposis sarcoma (CKS), AIDS associated Kaposis sarcoma (with or without HAART). The decreased number of T CD4+ lymphocytes in lesions of AIDS-KS as compared with CKS, reflect the severe immunodeficiency caused by HIV. T CD8+ lymphocytes numbers were similar in three KS groups, which appeared unrelated to the clinical or epidemiological type of KS. S100+ cells and FXIIIa+ DD were increased in all KS lesions as compared with normal skin. We also found a peculiar dermal cellular population in KS lesions. CD68+ macrophages were higher in CKS lesions as compared with AIDS-KS lesions, but similar to those found in lesions of HAART/AIDS-KS. Similar data were found in epidermal Langerhans cells in these groups, suggesting a partial immune recovery by HAART. The high number of cells expressing IFN- in CKS lesions and HAART/AIDS-KS as compared with AIDS-KS suggests that this cytokine may be a marker of effective immune response. The increased expression of IL-1 in CKS lesions and HAART/AIDS-KS could be related with its anti-tumor effect. Expression of TNF-, IL-4 e IL-6 were similar between KS lesions. Demonstrated by double-immunostaining, nuclear identification of HHV-8 in FXIIIa+ DD suggests this cell type as target for HHV-8 infection. CKS lesions showed increased number of cells with HHV-8 expression as compared with another groups of AIDS-KS, independent of HAART. Our data shown that there was a partial recovery of local immune response in HAART/AIDS-KS lesions and that the KS clinical severity cannot be directly associated with the increased density of HHV-8 infected cells in tissue