Made available in DSpace on 2014-06-12T18:07:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6416_1.pdf: 472787 bytes, checksum: 2ac25948f3153ef1bc2889c6b54b2339 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / A Leishmaniose Visceral (LV) é uma enfermidade potencialmente fatal, sendo no Brasil causada pela Leishmania chagasi com cerca de 3.500 novos casos por ano. Está presente em quase todo o território brasileiro, mas o maior número de casos ocorre em áreas onde os serviços de saúde são pouco desenvolvidos, o que dificulta seu diagnóstico baseado principalmente nos sintomas clínicos, também comuns a outras doenças. Por esse motivo e pela falta de um tratamento não tóxico muitos trabalhos buscam estratégias que permitam um diagnóstico rápido e confiável ou a produção de uma vacina. Em um estudo anterior, foram selecionados genes codificantes para proteínas antigênicas de L. chagasi que se mostraram capazes de reagir com anticorpos de cães infectados por esse parasita e seres humanos portadores de calazar. No presente trabalho, esses genes foram seqüenciados e as seqüências analisadas para a caracterização das respectivas proteínas. Os resultados obtidos mostraram que 6 dos clones codificam 4 proteínas diferentes, compostas por regiões contendo múltiplos domínios repetitivos de tamanhos diferentes e não relacionados entre si. Essas repetições sugerem que, ao menos em L. chagasi, proteínas com regiões repetitivas podem ser melhor indutoras de imunidade humoral, podendo ser então candidatas a componentes de sistemas de diagnóstico contra a leishmaniose visceral.

O híbrido de Saccharomyces cerevisiae M606 é uma levedura de aplicação industrial que alia alta capacidade de produção de etanol a resistência ao antibiótico poliênico nistatina. Com o objetivo de isolar o gene que confere a esse organismo a capacidade de se multiplicar na presença dessa substância, tóxica a leveduras e à maioria dos fungos, foi construída uma biblioteca genômica com o DNA de uma linhagem segregante de M606, M606.1c. Um plasmídio epissomal de levedura contendo um fragmento genômico da biblioteca de 5900 pares de bases foi capaz de conferir resistência a linhagens sensíveis quando introduzido por transformação. A determinação da sequência de nucleotídeos desse fragmento de DNA, designado NYS1, permitiu a sua localização no braço longo do cromossomo XIV de Saccharomyces cerevisiae. A subclonagem do fragmento NYS1 revelou que o gene responsável pela resistência é o quadro de leitura aberta (ORF) conhecido como YNL231C, que passa a ser denominado NYS, gene de resistência a nistatina de Saccharomyces cerevisiae. O gene NYS foi subclonado em um fragmento de 1337 pares de bases, que foi nomeado NYS3. Esse plamídio foi utilizado para transformar linhagens sensíveis, conferindo-lhes resistência. Sua sequência de nucleotídeos foi integralmente determinada e comparada com o Banco de Dados de Genoma de Saccharomyces cerevisiae para a identificação das diferenças ao nível do DNA entre os mutantes NYS e o tipo selvagem sensível a nistatina. Não foram identificadas diferenças de sequência entre o tipo selvagem e o gene clonado. Esse dado sugere que o gene clonado não é o mesmo que é responsável pela resistência de M606.1c. M606.1c apresentou o derivado de ergosterol cholesta-5,7,22,24-tetraenol, que parece estar ligado à resistência. As leveduras transformadas com o gene NYS não apresentaram a formação desse composto, sendo este mais um dado que sugere a clonagem de um segundo gene de resistência. A provável explicação para a resistência conferida por um gene selvagem seria o alto número de cópias em que ele se apresenta nos transformantes. O desequilíbrio na dosagem do produto gênico de NYS, possivelmente teria tido como efeito alguma alteração na membrana plasmática que levou à resistência a nistatina / not available

Os cloroplastos são organelas exclusivas de plantas e algas fotossintetizantes, e desempenham funções essenciais na fisiologia e metabolismo vegetal, principalmente a fotossíntese e outras rotas biossintéticas. Além do núcleo e das mitocôndrias, os plastídios possuem seu próprio genoma (plastoma), envolvido na coordenação destes três distintos mas interdependentes sistemas genéticos das células vegetais. O DNA cloroplastidial existe como moléculas circulares fechadas de aproximadamente 150 kb (±30), geralmente apresentando sequências repetidas invertidas, separando duas regiões de cópia única. Através da construção de bibliotecas shot-gun a partir do DNA cloroplastidial e do sequenciamento automático de 6266 clones, o plastoma de cana-de-açúcar (híbrido SP 80-3280) foi completamente sequenciado e as regiões codificadoras anotadas por homologia a outros sistemas vegetais. Por análises comparativas entre o plastoma de cana-de-açúcar e os de outras espécies, observou-se que todos os grupos funcionais de genes cloroplastidiais de milho foram localizados no plastoma de cana-de-açúcar, como também ycf's deste plastoma e de outras espécies, embora estas sequências não tenham função conhecida. Verificou-se, ainda, maior identidade entre os plastomas de cana-de-açúcar e milho do que entre cana- de-açúcar e arroz com base na organização estrutural e na regulação da expressão gênica (edição de mRNA). Os resultados sugerem uma evolução comum entre os plastomas das gramíneas C4, gerando novos elementos para a pesquisa deste tipo de fotossíntese e metabolismo dos plastídeos, assim como para a tecnologia de transformação de cloroplastos de cana-de-açúcar. / not available

Existem vários sistemas de classificação para Annonaceae. No entanto, estudos recentes sugerem que esse grande número de classificações pode ser reduzido a um. O sistema elaborado por Fries (1959), por exemplo, apresenta vários grupos apoiados por revisões modernas. Um deles é o Grupo Trigynaea, sinonimizado como tribo Bocageeae Endlicher (Johnson e Murray, 1995). A análise cladística com dados morfológicos sugeriu uma hipótese sobre as relações intergenéricas na tribo (Johnson e Murray, 1995). A confiabilidade dessas relações foi verificada com o uso de dados fitoquímicos e sequências de DNA. Em ((Bocagea, Hornschuchia) (Trigynaea)), o clado (Bocagea, Hornschuchia, Trigynaea) foi detectado na análise Bayesiana do RPB2 e apoiado pela presença de apigenia (exceto em Bocagea) e síntese de quercetina via dihidrocampferol. No clado (((Cardiopetalum, Cymbopetalum) (Porcelia)) (Froesiodendron)) a relação (Cardiopetalum, Cymbopetalum, Porcelia) foi detectado nas análises de Máxima Parcimônia das regiões coxI, RPB2 e trnK-matK e nas análises Bayesianas das regiões coxI, trnL-trnL-F e trnK-matK. Esse clado foi apoiado pela presença de luteolina (exceto em Cardiopetalum e Porcelia) e síntese de quercetina pelas vias di-hidrocampferol e eriodictiol (exceto em Cymbopetalum que produziu luteolina). A presença, até o momento exclusiva em Annonaceae, de alcaloides pirrolizidínicos em Bocageeae e Annona foi congruente com as informações sobre a estreita relação desses grupos. A distribuição dos componentes das ceras delimitou grupos químicos em Bocageeae que não foram congruentes com as relações estabelecidas com os dados morfológicos. / There are several classification systems for Annonaceae. However, recent studies have suggested this high number of classifications can be reduced to one. The system of Fries (1959), for example, presents many groups supported by modern revisions. One of them is Trigynaea-Gruppe, synonym of tribe Bocageeae Endlicher (Johnson and Murray, 1995). The morphological cladistic analysis suggested one hypothesis of intergeneric relationships among the Bocageeae (Johnson and Murray, 1995). The consistency of these relationships was evaluated by the use of phytochemical data and DNA sequences. Within ((Bocagea, Hornschuchia) (Trigynaea)), the (Bocagea, Hornschuchia, Trigynaea) was detected in the Bayesian analysis of RPB2 and supported by presence of apigenin (except in Bocagea) and synthesis of quercetin via dihydrokaempferol. In the clade (((Cardiopetalum, Cymbopetalum) (Porcelia)) (Froesiodendron)), the relationship (Cardiopetalum, Cymbopetalum, Porcelia) was detected in the Maximum Parsimony analyses of coxI, RPB2 and trnK-matK regions, and Bayesian analyses of coxI, trnL-trnL-F e trnK-matK regions. This clade was supported by occurrence of luteolin (except in Cardiopetalum and Porcelia) and synthesis of quercetin via both dihydrokaempferol and eriodictyol (except in Cymbopetalum that produced luteolin). The presence of pyrrolizidine alkaloids in Bocageeae and Annona, unique in Annonaceae until now, was in agreement with information about the closest relationship of these two groups. The distribution of cuticular waxes components circumscribed chemical groups in Bocageeae that were not congruent with the relationships based in morphological data

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-06Bitstream added on 2014-06-13T20:21:24Z : No. of bitstreams: 1 arnoldi_fgc_dr_rcla.pdf: 2897071 bytes, checksum: fa1429945e5319eef834777ced11123a (MD5) / A partir dos coleópteros luminescentes, mais de 20 luciferases já foram clonadas e seqüenciadas. Dessas, a maioria é de lampirídeos das regiões Neártica e Paleártica, quatro de elaterídeos jamaicanos e uma de um fengodídeo asiático. Apenas outras cinco são oriundas da América do Sul, o continente mais rico em espécies de coleópteros luminescentes e o provável berço evolutivo de Lampyridae, a família com maior número de coleópteros luminescentes. Espécies desta região apresentam a maior variedade de cores de bioluminescência. No presente trabalho clonamos e seqüenciamos luciferases dos gêneros Brasilocerus sp., Phrixothrix sp. e Taximastinocerus sp., da família Phengodidae. Com base na análise filogenética dessas luciferases e outras já publicadas, concluímos que as luciferases das lanternas laterais e cefálicas são codificadas por genes parálogos, e propusemos um modelo para a evolução das cores da bioluminescência nessa família. Também determinamos o genoma mitocondrial de Pyrophorus divergens, membro da família Elateridae. A partir desse genoma e outros já publicados, analisamos a evolução da bioluminescência na superfamília Elateroidea sensu Lawrence e Newton (1995) e concluímos que essa pode ter surgido três vezes independentemente nesse grupo. / From luminescent Coleopteran's, more than 20 luciferases have already been cloned and sequenced. Among them, most part is from lampyrids of Neartic and Paleartic regions, four are from Jamaican elaterids and one is from Asiatic phengodids. Just five are from South American species, the richest continent in luminescent Coleopteran's and, probably, the evolutionary cradle of Lampyridae. Species from this region display the greatest range of bioluminescence colors. At the present work, we cloned and sequenced luciferases from the genera Brasilocerus sp., Phrixothrix sp. and Taximastinocerus sp., from Phengodidae family. Based on the phylogenetic analysis of these genes and other already published, we concluded that head and lateral lantern luciferases are coded by paralogous genes, and we also proposed a model for bioluminescence color evolution in this family. We also sequenced the mitochondrial genome of Pyrophorus divergens, an Elateridae member. Based on this genome and other already published, we analysed the evolutionary history of bioluminescence in Elateroidea superfamily sensu Lawrence e Newton (1995) and concluded that it could have appeared three times independently in this group.

Dissertação (Mestrado em Engenharia Mecânica) - Centro Universitário FEI, São Bernardo do Campo, 2016.

Submitted by HIGOR OLIVEIRA SILVA null (higorvet@yahoo.com.br) on 2018-01-23T13:29:57Z No. of bitstreams: 1 Tese_Higor_Oliveira_Silva.pdf: 2585609 bytes, checksum: f7380b9bd4a69998d296fdd0384e86ac (MD5) / Approved for entry into archive by Karina Gimenes Fernandes null (karinagi@fcav.unesp.br) on 2018-01-23T18:09:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_ho_dr_jabo.pdf: 2459664 bytes, checksum: 55461471311714a1bfac96d61b706281 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-23T18:09:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_ho_dr_jabo.pdf: 2459664 bytes, checksum: 55461471311714a1bfac96d61b706281 (MD5) Previous issue date: 2017-12-08 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As espécies do grupo do Bacillus cereus são comumente ocorrentes na cadeia produtiva de leite e derivados e frequentemente estão envolvidas em doenças transmitidas por alimentos. Constituem uma preocupação constante à indústria de lácteos, por conta de sua capacidade de formar biofilmes em superfícies sólidas, ocasionando a contaminação persistente dos produtos processados e representando risco à saúde pública. Objetivou-se neste estudo verificar a distribuição e ocorrência de linhagens e genes específicos relacionados à formação de biofilmes de Bacillus cereus isolados dos diversos estágios da cadeia produtiva de leite e produtos lácteos, classifica-los quanto à potencialcialidade em formar biofilmes, e ainda, avaliar a atuação e eficiência do ácido peracético e do hipoclorito de sódio junto ao sistema “clean in place”, simulado em escala piloto, sobre biofilmes formados em superfícies de aço inoxidável em contato com o leite. Para tanto, foram isolados microrganismos do grupo do Bacillus cereus de propriedades leiteiras, industrias e produtos lácteos, identificados genes específicos (sipW, tasA, Spo0A e PlcR) por sequenciamento genômico e avaliada a capacidade de formar biofilmes em microplacas de poliestireno. Selecionou-se um isolado sabidamente produtor de biofilmes, e por meio de contaminação experimental, induziu-se a adesão em superfícies de cupóns de aço inoxidável, em três circunstâncias distintas, incluindo contaminação por esporos, células vegetativas, e contaminação seguida de pasteurização. Na sequencia, os cupons foram submetidos a ação do ácido peracético e do hipoclorito de sódio, aplicando-os no sistema “clean in place”, realizado em escala piloto. Dentre 69 isolados, 98,5% foram classificados como moderados produtores de biofilmes. Os isolados pertencem aos grupos filogenéticos II, III, IV, V e VI, e os genes em estudo apresentaram alta ocorrência entre os isolados, estando igualmente distribuídos ao longo de toda cadeia produtiva, inclusive nos produtos lácteos. A adesão dos microrganismos às superfícies dos cupons alcançou 6,3x105 a 3,1x107UFC/cm2, resultando entre 3,0x104 e 8,1x106UFC/cm2 ao final do processo de sanitização. Os resultados demonstraram que o controle de biofilmes é fundamental e igualmente importante nos diversos estágios da cadeia produtiva, mas especialmente nas operações de obtenção de leite, por possibilitar a redução da carga contaminante inicial e consequentemente promoção da segurança dos alimentos, já que uma vez instalados, estes microrganismos podem formar biofilmes e disserminar-se pela linha de processamento. A ação do ácido peracético e do hipoclorito de sódio demostraram desempenhos semelhantes nas 3 circunstâncias estudadas, mas não foram suficientemente eficazes nas condições do presente estudo, quando usados no sistema “Clean in place” para a remoção de B. cereus s.s. aderidos a superfícies de aço inoxidável do tipo AISI 304 submersas em leite. / Species included in B. cereus group are widely distributed in dairy environment and were frequently involved in foodborne diseases. They are considered as a concern for dairy industries despite they pose a risk for public health, also despite the able to biofilm formation on stainless steel surfaces, causing the persistent contamination of processed dairy products. This study aimed to investigate if specific strains and genes for biofilm formation are significantly distributed and overpresented in distinct stages of dairy production chain, classifies the potential for biofilm formation, and evaluate the performance and efficiency of peracetic acid and sodium hypochlorite, on a pilot scale simulated clean in place, on biofilms in the stainless steel surfaces in contact with milk. Bacillus cereus microorganisms from dairy farms, industries and dairy products were identified, specific genes (sipW, tasA, Spo0A and PlcR) were identified by genomic sequencing and to form biofilms was performed using polystyrene microplates. Was selected one isolate known to produce biofilms, and by means of experimental contamination, adhesion was induced on stainless steel coupon surfaces, in three different circumstances, including spore contamination, vegetative cells, and contamination followed by pasteurization. In the sequence, the coupons were subjected to the action of peracetic acid and sodium hypochlorite, applying them to the clean in place system, performed on a pilot scale. Among 69 isolates, 98.5% were classified as moderate biofilm producers. The isolates belong to phylogenetic groups II, III, IV, V and VI, and a high prevalence of genes was shown, which were well distributed to dairy production chain including dairy products. The adhesion of the microorganisms to the surfaces of the coupons reached 6.3x105 to 3.1x107CFU/cm2, resulting between 3.0x104 and 8.1x106CFU/cm2 at the end of the sanitization process. The results showed that the control of biofilms is fundamental and equally important in the various stages of the production chain, but especially in the operations of obtaining milk, by enabling the reduction of the initial contaminant load and consequently promotion of food safety, since once installed, these microorganisms can form biofilms and assay themselves through the processing line. The peracetic acid and sodium hypochlorite were similar performance, but were not sufficiently effective to control biofilms on conditions of this study, when used on a "clean in place" for the removal of B. cereus s.s. adhered to stainless steel surfaces of type AISI 304 submerged in milk. / Processo FAPESP: 2015/20874-0. Processo CNPq: 2014/166512-1

[pt] Esta dissertação apresenta um estudo de caso em seqüenciamento da produção de bobinas de aço em um laminador de tiras a quente com enfornamento a frio das placas de aço. O laminador em questão é o da Companhia Siderúrgica de Tubarão, uma grande usina siderúrgica integrada localizada no estado do Espírito Santo, Brasil. Seu start up está previsto para o segundo semestre de 2002. Num primeiro momento, o problema parece ser de tratamento complexo, comportando-se como um grande problema combinatorial com restrições difíceis de serem representadas. Algumas considerações para um bom seqüenciamento são comuns tanto no forno de reaquecimento quanto no laminador desbastador. Isto permite que as placas possam ser seqüenciadas como se esses dois equipamentos fossem um único estágio (equipamento) para alguns agrupamentos de produtos. Assim, o foco pode ser deslocado para o seqüenciamento no estágio final do laminador, isto é no trem acabador. Inicialmente, a idéia era resolver um modelo da mochila compartimentada para a seleção das placas de aço a serem processadas entre duas trocas consecutivas de cilindros de trabalho do trem acabador e usar algumas heurísticas para seqüenciá-las dentro de cada compartimento (faixa de largura). Um estudo do mix de produção planejado mostrou que, devido à grande variedade e quantidade de ordens, a fase de seleção não era crítica e o seqüenciamento poderia ser feito semimanualmente com ajuda do computador. Para aumentar a vida útil dos cilindros de trabalho, assim como atender a qualidade desejada e a data de entrega prometida, no decorrer de uma boa seqüência de laminação deve ocorrer decréscimo nas larguras e na qualidade superficial, trocas suaves de espessuras e de dureza. O sistema computacional proposto implementa um algoritmo simples que seqüencia lexicograficamente o grupo de produtos a ser laminado de acordo com as prioridades dadas a cada critério de seqüenciamento pelo próprio programador da produção, que pode interagir e trocá-las de acordo com as condições prevalecentes. / [en] This thesis reports a case study on scheduling the cold charged production of coils in a hot strip mill with start- up planned for the second semester of 2002 at Companhia Siderúrgica de Tubarão, a large integrated steel plant in Espírito Santo, Brazil. At first glance, the problem seems intractably complex, being essentially a very large-scale combinatorial problem with ill-defined and difficult to represent constraints. Considerations on the requirements for good sequencing at the reheating and roughing stages showed that they could be scheduled as a single stage for some groups of products, and in doing so, the focus could be on sequencing the finishing stage. Initially, the idea was to solve a compartmented knapsack model for selecting the slabs to be processed between two consecutive changes of working rolls, and using some heuristics for sequencing within each compartment (width range). Examination of the projected product mix showed that, due to the large number and variety of orders, the selection phase was not critical, and the scheduling could be performed semi-manually with a simple computer aid. For extending the life of the working rolls, as well as attaining the desirable quality and promised dates, a good sequence must present decreasing width and surface quality, increasing promised dates, and smooth changes of thickness and hardness. The proposed computer system implements a simple algorithm that lexicographically sorts the set of products to be rolled according to priorities given to these criteria by the scheduler who can interactively change them according to the prevailing conditions.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T00:45:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Daiana Perce.pdf: 3555490 bytes, checksum: 2638dddd9374d377120b0e33dfb8169b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T00:45:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Daiana Perce.pdf: 3555490 bytes, checksum: 2638dddd9374d377120b0e33dfb8169b (MD5) Previous issue date: 2011-04-19 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O Antígeno de Ligação ao Eritrócito de 175kDa (EBA-175) é o ligante preferencial do P. falciparum no processo de penetração em eritrócitos sendo considerado, portanto, um importante antígeno candidato à vacina, O EBA-175 apresenta duas regiões bem caracterizadas: a região II - conservada, imunogênica e com 2 segmentos ricos em cisteína (F1 e F2) que estão envolvidos na ligação do parasito à glicoforina-A da superfície dos eritrócitos e, a região III – apresentando fragmentos C (cepa CAMP) e F (cepa FCR3), que são mutuamente exclusivos, que definem as famílias alélicas do EBA-175. Estudos realizados em áreas hiperendêmicas de malária na África mostraram uma forte associação entre a forma clínica da doença e o dimorfismo da região III do EBA-175. As diferenças observadas entre áreas endêmicas em relação aos parasitos circulantes são fatores importantes em termos de estratégias de desenvolvimento de uma vacina visto que sua eficácia pode variar em diferentes cenários epidemiológicos. Neste estudo avaliou-se a diversidade genética das regiões II e III do EBA-175 apresentada pelos isolados naturais de P. falciparum provenientes de Porto Velho (RO), área de transmissão instável como são as áreas brasileiras, associando-a as variáveis de morbidade e exposição à malaria. Os isolados, obtidos ao longo de 13 anos, foram divididos em grupos de acordo com o ano da coleta: PV94/1994 (n= 101), PV02/2002 (n= 57) e PV07/2007 (n=30). Após a extração do DNA o polimorfismo genético foi analisado por PCR e seqüenciamento. Observamos na região II apenas um tipo de fragmento, com 926 pb. Na região III, observamos o clássico dimorfismo com uma freqüência maior do fragmento-C (84.3%). A infecção mista foi observada em 1,6% dos isolados. O fragmento-C foi amplificado em maior freqüência nos isolados das três coletas realizadas. Não observamos diferenças nas frequências dos fragmentos C e F entre os 3 grupos estudados. A análise do seqüenciamento da região II revelou 5 alterações nucleotídicas em 3 dos 15 isolados. Essas alterações levaram a 2 trocas de aminoácidos. A análise do seqüenciamento da região III evidenciou: no fragmento-C, 8 trocas de nucleotídeos em 3 das 45 amostras. Essas alterações levaram a 7 mudanças de aminoácidos; no fragmento-F, 2 alterações nucleotídicas foram reveladas em 2 das 11 amostras. Estas alterações levaram a 4 trocas de aminoácidos. Esses dados sugerem que não há diferenças significantes nas porções gênicas que codificam as regiões II e III do EBA-175 entre os isolados de P. falciparum circulantes em Porto Velho. Além disso, observamos que a frequência do dimorfismo alélico do EBA-175 é temporalmente estável e ausência de associação entre o polimorfismo encontrado e as variáveis de morbidade e exposição à malária. / P. falciparum Erythrocyte Binding Antigen 175 (EBA-175) plays a central role in erythrocytes invasion being considered, therefore, a target for malaria vaccine development.This antigen present to well characterized regions: the region II - conserved and immunogenic, that contains two cysteine-rich segments (F1 and F2), which are involved in binding to glycophorin-A on the surface of erythrocytes and, the region III – that contains mutually exclusive C (strain CAMP) and F (strain FCR3) fragments, which defines the two allelic families of EBA-175. Several studies performed in high endemicity malaria area in Africa have shown the influence of this dimorphism on clinical disease and outcome. The differences observed between different endemic areas in relation to exposed individuals and the circulating parasites are important factors in terms of vaccine strategies since the efficacy of a potential vaccine may vary in different epidemiological scenarios. The goal of this study was to evaluate the genetic diversity of regions II and III of EBA-175 in P. falciparum isolates from Porto Velho (RO), a region of malaria unstable transmission, and the influence of this diversity on malaria morbidity and exposure variables. The blood samples were collected in three time points between 1994, 2002 and 2007 (PV94 group, n=101; PV02 group, n=57; PV07 group, n=30, respectively). The genetic polymorphism was analyzed by PCR and sequencing. We observed in the region II only one type of fragment with 926 bp. In the region III we observed the classic dimorphism with a higher frequency of the C-fragment (84.3%). The mixed infection was observed in 1.6% of isolates. There were no differences in the frequency of fragments C and F among the 3 groups. Sequencing of region II revealed 5 nucleotide changes in 3 of 15 isolates, leading to 2 amino acids replacements. Sequencing of region III revealed that: in the C-fragment there were 8 nucleotide changes in 3 of 45 samples, leading to 7 amino acids replacements; in the fragment-F there were 2 nucleotide changes , in 2 of 11 samples, leading to 2 amino acids replacements. Our results showed: reduced genetic diversity in P. falciparum EBA-175 isolates circulating in Porto Velho; predominance of C-fragment and temporal stability of allelic dimorphism of the EBA-175. Moreover, no association was observed between the EBA-175 dimorphism and malaria morbidity and exposure variables.

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:39:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 mariela_gomez_ioc_mest_2009.pdf: 2281409 bytes, checksum: f9b9a1b11805beacdb9238a9bda6a0ef (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Segundo a OMS, as gastrenterites são, após as infecções respiratorias agudas, os mais importantes agravos à saúde em crianças ≤ anos. Devido à complexidade da epidemiologia dos rotativos do grupo A (RV-A), particularmente em países em desenvolvimento, torna-se fundamental o conhecimento dos genótipos das amostras circulantes, principalmente a partir da introdução da vacina monovalente Rotarix® (G1P[8] pela Programa Nacional de Imunizações no Brasil em março de 2006. Nos estudos de Fase III realizados com a Rotarix® a prevalência do RV-A genótipo G2P[4] foi extremamente baixa e a avaliação de imunização heterotípica contra este genótipo foi realizada através de estudos de metanálises estatísticas. Este genótipo, em geral, está associado às manifestações clínicas mais graves. Diferentes estudos evidenciaram a re-emergência do genótipo G2P[4] no Brasil a partir de 2005, e em outros países, sugerindo que seria um fenômeno continental relacionado à variabilidade temporal da distribuição de genótipos qu ocorre naturalmente. Porém, uma mudança na epidemiologia e distribuição deste genótipo relacionada à introdução da vacina Rotarix® no Brasil não pode ser descartada e necessita ser investigada. Deve-se considerar que o genótipo G2P[4] não compartilha antígenos VP4 ou VP7 com a amostra vacinal Rotarix®. Os dados obtidos neste estudo revelaram a circulação de diferentes variantes de RV-A genótipo G2P[4] no período de 1996 a 2009 no Brasil. Além das variantes genotípicas, também foi possível identificar variantes genéticas do genes VP7, VP4, VP6 e NSP4, mostrando a segregação independente dos mesmos. As análises filogenéticas baseadas nos genes que codificam para as proteínas VP7 e VP4, permitiram inferir a ocorrência de múltiplas introduções do genótipo G2P[4] no Brasil. Evidenciando o fluxo de variantes genéticas que ocorre em nível global para este genótipo. Também foi possível evidenciar a ocorrência de mutações pontuais e reassortment entre amostras humanas, para os quatro genes analisado; e entre amostras humanas e amostra bovinas para o gene que codifica para a proteína NSP4. Os resultados do presente estudo são fundamentais na tentativa de se ter uma melhor entendimento da epidemiologia e a evolução dos RV-A genótipo G2P[4] e demonstra a importância do monitoramento contínuo e a caracterização molecular das amostras de RV-A circulantes, tanto em humanos quanto em animais / According to the World Health Organization (WHO), a cute gastroenteritis are the major cause of gastroenteritis in children ≤ 5 years old, after acute respiratory infections. Due to the epidemiology complexity of rotavirus-A (RV-A), especially in developing countries, it is important to determinate which are the genotypes of the circulating strains, principally after the introduction of the monovalent vaccine Rotarix ® (G1P[8]) in Brazil by the National Immunization Program. In Phase III trials with Rotarix®, the prevalence of genotype G2P[4] was extremely low, and therefore, evaluation of heterotypic immunization against this genotype was performed by meta-analysis statistics tests. This genotype, in general, is associated with more severe clinical manifestations. Different studies have showed the re-emergence of genotype G2P[4] in Brazil, since 2005, and in other countries, suggesting that it would be a continental phenomenon related to the temporal variability in the genotypes distribution that occur naturally. However, changes in the epidemiology and distribution of this genotype related to the introduction of the vaccine Rotarix® in Brazil can not be excluded and needs to be investigated. Should be considered that genotype G2P[4] does not share VP4 or VP7 antigens with the Rotarix® vaccine strain. Data obtained in this study revealed the circulation of different variants of RV-A genotype G2P [4] in the period of 1996 to 2009 in Brazil. In addition to genotypic variants, was also possible to identify genetics variants of the genes: VP7, VP4, VP6 and NSP4, showing independent segregation. The phylogenetic analysis based on the genes that code proteins VP7 and VP4, allowed to infer the ccurrence of multiple introductions of genotype G2P[4] in Brazil. It was possible to identify the occurrence of point mutations and reassortment events between human strains for the four genes studied, and between human and bovine strains for NSP4 gen. The results obtained in this study are fundamental in our attempt to gain a better understanding of epidemiology and evolution of RV-A genotype G2P[4] and demonstrates the importance of continuous monitoring and molecular characterization of RV-A strains circulating in human and animal populations.