Orientador: Maria Cristina Cintra Gomes Marcondes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T10:44:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Yano_ClaudiaLumy_D.pdf: 4912629 bytes, checksum: 823824d694d0140eada41a1aa8e689a5 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Metais pesados como o cádmio são considerados agentes tóxicos devido sua extensiva utilização nas indústrias e agropecuária e, como conseqüência, são amplamente dispersados no meio ambiente. No entanto, o cádmio tem sido foco, também, de inúmeras pesquisas relacionadas a exposição humana e suas conseqüências patológicas como o câncer. Estudos, claramente, caracterizam as relações de tumor de pulmão com a inalação do cádmio e mostram a possível participação deste metal tanto na iniciação quanto na progressão tumoral. Por outro lado, são raros os relatos da literatura envolvendo o mecanismo de ação do cádmio em tecido muscular, uma vez que já foi observado acúmulo desse metal em musculatura esquelética de animais. A administração do cloreto de cádmio, metal pesado designado como carcinogênico, em linhagem de células musculares esqueléticas C2C12 promoveu lesões consistentes com estresse oxidativo, observado pela diminuição da viabilidade celular, aumento da peroxidação de lipídios (conteúdo de malondialdeído) e conseqüente diminuição da enzima antioxidante glutationa transferase (GST). O estresse oxidativo, possivelmente, alterou a adesão celular e, conseqüentemente, houve retração dos miotúbulos, observada através de microscopia de luz e microscopia eletrônica de varredura (Capítulo I- Trabalho publicado no periódico Free Radical Biology & Medicine, 2005). A atenuação das lesões promovidas pelo cloreto de cádmio em linhagem de células C2C12 foi verificada com o pré-tratamento com o sulfato de zinco antecedendo o tratamento com cloreto de cádmio. Os efeitos protetores foram observados através da preservação da viabilidade celular, da GST, e diminuição do conteúdo de malondialdeído. A ação protetora foi verificada, também, na maior preservação da adesão celular, principalmente, contra as maiores concentrações de cádmio (Capítulo II- Trabalho a ser submetido ao periódico Free Radical Biology & Medicine). Por outro lado, a exposição crônica de células tumorais, linhagem de adenocarcinoma de cólon MAC13, ao cloreto de cádmio promoveu alterações morfológicas associadas ao aumento da atividade mitocondrial, interferência quanto à atividade lisossomal e diminuição da viabilidade celular, principalmente, na maior concentração de cádmio, após 24hs de exposição (Capítulo III- Trabalho a ser submetido ao periódico International Journal of Cancer) / Abstract: The heavy metals as cadmium are a toxic agent since it is extensively utilized in industry and can be amply distributed in environment. The cadmium is research focused as its pathological consequences in human exposure as it has been classified as carcinogenic agent. This fact is evident since the cadmium inhalation can be related to lung tumour and many studies show the possible participation of the cadmium on tumoral cells initiation and progression. However, few studies observed that cadmium can be accumulated in animal skeletal muscle cells and its action mechanisms are not completed known. The cadmium chloride exposure promoted oxidative stress and morphologic changes in C2C12 myotubes cell, in vitro, associated to decrease on cellular viability, high lipid peroxidation (increase on malondialdehyde content, MDA) and decrease on glutathione-S-transferase (GST) activity. The cadmium chloride produced chances on the cellular adhesion, integrity and retraction in C2C12 myotubes cells. These effects could be attenuated by zinc sulphate pre-treatment, which maintained the cellular viability, GST activity, reducing the MDA content. The zinc sulphate pre-treatment preserved the cellular adhesion, especially in high cadmium chloride concentration. Additionally, the tumoral cells (colon adenocarcinoma MAC 13) chronically exposed to cadmium chloride showed increase on the mitochondrial activity, and reduction on lysosomal and cellular viability, especially at high cadmium chloride concentration after 24h of treatment, probably indicating the tumoral cell changes / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Objetivo: O objetivo do presente estudo foi comparar a relação torque-ângulo do grupo muscular dos flexores plantares e a arquitetura do músculo gastrocnêmio medial entre indivíduos submetidos à sutura do tendão de Aquiles (e reabilitados por meio de protocolo de reabilitação acelerado (ACE) ou tradicional (TRA)) e indivíduos de um grupo controle (CON). Materiais e Métodos: A amostra foi composta por 3 grupos: 2 grupos de pacientes submetidos a sutura tendão Aquiles (avaliados após 29 meses da realização da cirurgia), sendo que o grupo 1 foi composto por 10 sujeitos do grupo ACE (onde permaneciam 2 semanas imobilizados com órtese removível e após iniciaram a reabilitação por 6 semanas) e o grupo 2 foi composto por 10 sujeitos do grupo TRA (que permaneciam com bota gessada por 6 semanas e após recebiam ficha de orientação exercícios para realizar no domicílio). Já o grupo 3, CON foi composto por 10 sujeitos saudáveis sem lesão. O torque dos flexores plantares foi avaliado no dinamômetro isocinético a 30° flexão plantar (FP), 20° FP e 10° FP, a 0° e 10° flexão dorsal (FD) do tornozelo e a arquitetura do gastrocnêmico medial foi avaliada através de um ecógrafo durante o repouso e contração voluntária máxima (CVM) ambos no ângulo articular de 10° FD. Foram realizadas comparações entre os grupos (ACE, TRA, CON), entre os lados (saudável, lesão e dominante e não-dominante) e em diferentes condições (repouso e CVM). Os dados das variáveis antropométricas e questionário foram testados quanto à normalidade e homogeneidade pelos testes de shapiro-wilk e levene. Para comparações das variáveis antropométricas e questionários, além do torque no ângulo 10° FD foi realizado ANOVA Simples. ANOVA de três fatores foi utilizada para comparações da arquitetura do músculo gastrocnêmio medial. Para identificar os efeitos principais foi utilizado o teste post-hoc de Bonferroni. ANOVA para medidas repetidas com três fatores para comparações entre grupos (ACE e TRA), ângulos (30° FP, 20 FP°, 10° FP, 0° e 10° FD) e lados (lesão x saudável). No caso de interação entre fatores, foi utilizado um teste t de student independente para comparação entre os ângulos e entre os lados. Foi adotado nível de significância de 0,05 para todas as análises. Para análise dos dados foi utilizado o software SPSS 17.0 . Resultados: Após 29 meses da cirurgia de sutura do tendão Aquiles o torque dos flexores plantares a 10° FD foi semelhante quando comparado o lado lesão (grupo ACE e TRA) x lado contralateral saudável (p>0.05). Menor torque dos flexores plantares a 10° FD no lado saudável do grupo ACE (p=0.018) e TRA (p=0.009) comparado com lado dominante do grupo CON. Na relação torque ângulo foi encontrada redução de torque dos flexores plantares a 30° FP, 20° FP e 30° FP (p<0,01), na comparação entre lado lesão dos grupos (ACE e TRA) comparados com lado saudável, dos grupos (ACE e TRA). A arquitetura muscular, comprimento do fascículo (CF), ângulo de penação (AP) e espessura muscular (EM) foi semelhante entre o grupo ACE e o TRA e entre os lados lesão x saudável (p>0.05). O lado lesão do grupo TRA apresentou menor CF comparado com lado saudável do grupo TRA (p=0.034) durante CVM a 10° FD. O CF apresentou redução no lado lesão do grupo TRA ao repouso (p<0.01) e na CVM (p=0.011) comparado com lado dominante grupo CON. O lado lesão do grupo ACE apresentou redução CF somente ao repouso (p<0.01) comparado com lado dominante grupo CON. O AP e EM foram semelhantes (p>0.05) entre grupos ACE, TRA e CON. Conclusão: (1) O torque dos flexores plantares a 10° FD é semelhante entre grupo ACE e TRA e entre lado lesão e saudável; já na comparação do Torque lado saudável dos grupos ACE e TRA apresentam redução do torque comparado com o lado saudável do grupo CON; (2) na relação torque-ângulo os lados lesionados dos grupos ACE e TRA apresentam redução do torque dos flexores plantares a 30° FP, 20° FP e 10° FP comparado com lado saudável; (3) na CVM o comprimento de fascículo estava diminuído no lado lesão do grupo TRA comparado com o lado saudável, e redução no comprimento do fascículo comparado com lado dominante do grupo CON. Nas comparações repouso x CVM, foi encontrado maior comprimento de fascículo ao repouso e maior ângulo de penação durante a CVM nos grupos ACE, TRA e CON. A espessura muscular foi semelhante (repouso x CVM) no grupo ACE, TRA e CON. (4) o grupo TRA apresentou redução de flexão plantar ativa e passiva (lado saudável e lesão) comparado com grupo ACE; (5) os grupos ACE e TRA apresentaram menor escore no questionário Thermann comparado com grupo CON. Na comparação do questionário FAOS, o grupo TRA apresentou menor escore comparado com grupo CON nos seguintes parâmetros: outros sintomas, atividade de vida diária, atividades esportivas e recreacionais e qualidade de vida em relação ao pé e tornozelo. / Objective: The objective of the present study was to compare the torque-angle relation of the plantar flexor muscle group and the architecture of medial gastrocnemius muscle between patients who underwent suture of the Achilles tendon (and rehabilitated through accelerated rehabilitation protocol (ACE) or traditional (TRA)) and individuals in a control group (CON). Materials and Methods: The sample was composed of three groups: two groups of patients undergoing Achilles tendon suture (evaluated after 29 months of surgery), whereas the group 1 consisted of 10 individuals in the ACE group (who remained two weeks with removable brace and after beginning rehabilitation for 6 weeks) and group 2 consisted of 10 individuals in the TRA group (who remained with plaster cast for 6 weeks and after received a form of guidance to perform exercises at home). Group 3, CON, was composed of 10 healthy individuals without injury. The torque of the plantar flexors was measured using the isokinetic dynamometer at 30 ° plantar flexion ( FP ), 20 ° FP and 10 ° FP, at 0 ° and 10 ° dorsal flexion ( FD ) ankle and architecture of the medial gastrocnemius was assessed by ultrasound scans during a rest period and maximum voluntary contraction (CVM), both in a joint angle of 10 ° FD. Comparisons between the groups (ACE, TRA, CON), between the sides (healthy, injury and dominant and nondominant) and in different conditions (rest and CVM) were made. Data from anthropometric variables and from the questionnaire were tested for normality and homogeneity testing by the Shapiro-Wilk and Levene. For comparisons of anthropometric variables and questionnaires, as well as the torque angle 10 ° FD, simple ANOVA was performed. Three-factor ANOVA was used to compare the architecture of the medial gastrocnemius muscle. To identify the main effects was used Bonferroni post-hoc test. Repeated measures ANOVA with three factors for comparisons between groups (ACE, and TAR), angles (30 ° FP, 20 ° FP, 10 ° FP, 0 ° and 10 ° FD) and side (lesion versus healthy). In the case of interaction between factors, was used an independent student's t test for comparison between angles and sides. The significance level was set at 0.05 for all analysis. For data analysis was used the SPSS 17.0 software. Results: After 29 months of surgical suture of the Achilles tendon, plantar flexor torque at 10 ° FD was similar when comparing to the lesion side (group ACE, and TRA) versus healthy contralateral side (p> 0.05). Smaller torque of the plantar flexors at 10 ° FD on the healthy side of the ACE group (p = 0.018) and TRA (p = 0.009) compared with the dominant side of the CON group. In the torque angle relation was found reduced plantar flexor torque at 30 ° FP, 20 ° FP and 30 ° FP (p <0.01), comparing injury sides of groups (ACE and TRA) compared with the healthy side of the groups (ACE, and TRA). The muscle architecture (fascicle length (CF), penation angle (AP) and muscle thickness (EM)) was similar between the TRA and the ACE group and among the healthy versus injury (p> 0.05). The injury side of the TRA group had lower CF compared with healthy side of the TRA group (p = 0.034) during CVM at 10 ° FD. The CF was reduced in the injury side of TRA group at rest (p <0.01) and CVM (p = 0.011) compared with dominant side of CON group. The injury side of the ACE group showed a decreased in CF only at rest (p <0.01) compared with CON group dominant side. The AP and EM were similar (p> 0.05) between groups ACE, TRA and CON. Conclusion: (1) The torque of the plantar flexors at 10 ° FD is similar between groups ACE and TRA, and between injury and healthy sides; already, when compared torque of the healthy side of ACE and TRA group, is noted a torque reduction compared with the healthy side of the CON group, (2) the torque-angle relation of the injured side of groups ACE and TRA have shown reduced plantar flexor torque at 30 ° FP, 20 ° FP and 10° FP compared with the healthy side, (3) at CVM, the fascicle length was reduced in the injury side of TRA group compared to the healthy side, and fascicle length was reduced compared to the dominant side of the CON group. In comparison of rest versus CVM, was found an increased fascicle length at rest and an increased penation angle during CVM in groups ACE, TRA and CON. The muscle thickness was similar (rest versus CVM) in ACE, TRA and CON groups. (4) The TRA group showed a reduction of active and passive plantar flexion (healthy and injury side) compared to ACE group, (5) ACE and TRA groups had lower scores on the Thermann questionnaire compared to CON group. Comparing FAOS questionnaire, the TRA group had lower scores compared to CON group at the following parameters: other symptoms, activities of daily living, sports and recreational activities and quality of life in relation to foot and ankle.

Tem se questionado se a saúde bucal poderia influenciar a aptidão física através do desafio sistêmico provocado por mediadores pró-inflamatórios e endotoxemia. O processo inflamatório resultante de um dano muscular pode ser prolongado por substâncias pró inflamatórias circulantes, com consequente aumento da relutância do indivíduo em contrair a musculatura esquelética. Além disso, citocinas inflamatórias podem agir sobre o mecanismo de fadiga central, diminuindo o limiar de fadiga dos indivíduos. O objetivo deste estudo observacional transversal foi avaliar a associação entre condição de saúde bucal e aptidão física, testando a hipótese de que pior saúde bucal é um indicador de risco para menor aptidão física. Foi utilizada uma amostra de 96 militares estaduais da Brigada Militar da cidade de Porto Alegre. Um questionário estruturado foi aplicado aos militares, medidas antropométricas, exames clínicos da condição periodontal e experiência de cárie através do índice CPO-D foram obtidos. O Teste de Aptidão Física (TAF) rotineiramente realizado pelos militares foi utilizado como desfecho. Modelos de regressão logística multivariados foram aplicados e odds ratios (OR) e intervalos de confiança de 95% foram reportados. Foi observada associação positiva entre maior frequência de higiene proximal e melhor aptidão física (OR= 3,14; IC 95%= 1,04-9,50; p= 0,04). Maior número de dentes com profundidade de sondagem (PS) ≥ 4mm esteve associado com menor chance de obtenção do escore máximo no teste TAF (OR= 0,33; IC 95%= 0,11-0,96; p= 0,04). Perda dentária e experiência de cárie não estiveram associados com aptidão física. Pode-se sugerir a partir desta análise preliminar que piores hábitos de higiene bucal e inflamação periodontal podem vir a ser indicadores de risco para menor aptidão física. Outros estudos com modelos animais e em humanos ainda são necessários para elucidar por completo a associação entre saúde bucal e aptidão física. / It has been questioned if oral health could influence physical fitness through the systemic challenge caused by pro-inflammatory mediators and endotoxemy. The resulting inflammatory process of muscle damage could be lengthening, with consequent increased reluctance to contract skeletal muscle. Furthermore, inflammatory cytokines could act on the central fatigue mechanism and decrease fatigue thresholds. The aim of this cross-sectional observational study was to evaluate the association between oral health status and physical fitness, testing the hypothesis that worst oral health is a risk indicator for lower physical fitness. The sample comprised 96 military police officers from Porto Alegre city. A structured questionnaire was applied to the police officers; anthropometric measurements, clinical examination of periodontal status and the DMF-T index were performed. The Physical Fitness Test (PFT) routinely performed by military police officers was considered as the outcome variable. Multivariate logistic regression models were fitted and odds ratios (OR) and 95% confidence intervals (95% CI) were reported. A positive association between increased frequency of proximal hygiene and higher standards of physical fitness was observed (OR= 3.14; 95% CI= 1.04-9.50; p= 0.04). Higher number of teeth with probing depth (PS) ≥ 4mm was associated with lower chance of obtaining the highest score of the PFT (OR= 0.33; 95% CI= 0.11-0.96; p= 0.04). Tooth loss and caries experience were not associated with physical fitness. It may be suggested from these preliminary findings that worst oral hygiene habits and periodontal inflammation could be risk indicators for lower physical fitness. Other animal and human studies are still needed to completely elucidate this relationship.

Orientador: Denise Vaz de Macedo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T10:10:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gandra_PauloGuimaraes_D.pdf: 3901290 bytes, checksum: ee5d5ae8b4367d8ada3a77f8e845aec2 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A presente tese apresenta os resultados de dois estudos utilizando análise proteômica, sobre os efeitos agudos e crônicos do exercício de endurance no músculo de ratos. No primeiro estudo foram coletadas amostras de gastrocnemio de animais controle não exercitados, e exercitados em teste incremental de media duração em esteira ate a exaustão. Os ratos foram sacrificados 3h e 24h após o exercício. Utilizamos a abordagem clássica da análise proteômica quantitativa, que utiliza a eletroforese bidimensional (2DE) para separação das proteínas, e a espectrometria de massas para identificação destas proteínas. Seis spots apresentaram alterações significativas no volume relativo. Os spots identificados como gliceraldeido-3-fosfato desidrogenase, triose fosfato isomerase 1, subunidade beta da piruvato desidrogenase E1, carnitina palmitoil transferase 2 e HSC70 mostraram-se mais abundantes apos o exercício. Já o spot identificado como ?-actina mostrou-se menos abundante apos o exercício. Estes resultados sugerem que um único estímulo de endurance em animais destreinados não estimula a síntese de proteínas miofibrilares, mas sim de proteínas sarcoplasmáticas e mitocondriais. Essas alterações no músculo destreinado serviriam para precondicionar o músculo para realização de um exercício subsequente. No segundo estudo apresentamos a análise proteômica da porção vermelha (GV) e branca (GB) do gastrocnemio de ratos controle não treinados (C), de ratos bem adaptados ao exercício de endurance (T1), e de ratos treinados e submetidos a um período de overtraining (T2). Os ratos do grupo T2 foram subdivididos ainda em grupo overreaching funcional (FOR), que exibiram aumento ou manutenção do desempenho após o overtraining, e grupo overreaching não funcional (NFOR), cujo nível de desempenho estava diminuído apos o overtraining. Na comparação entre C, T1 e T2, 32 spots demonstraram alterações no GV e 22 no GB. No GV as maiores alterações ocorreram no grupo T2. As proteínas com aumento na abundancia indicam aumento da biogênese mitocondrial, da capacidade de captar lipídeos, maior capacidade antioxidante, maiores abundancia de chaperonas e transformação das fibras no sentido de rápidas para lentas, sugerindo que um período de overtraining e eficiente em adaptar o músculo esquelético. Já no GB as adaptações esperadas com o treinamento de endurance não foram aparentes. A diminuição da abundância de spots da aconitase sugere um maior ataque oxidativo no GB do que no GV. Após o estímulo crônico proteínas do miofilamento e de interação com o miofilamento e citoesqueleto demonstraram abundância alterada. No seu conjunto, nossos resultados sugerem que a resposta inicial do músculo a um único estimulo de endurance envolve um aumento inespecífico da capacidade de produção de ATP, enquanto a estimulação crônica aumenta somente a capacidade oxidativa, com uma concomitante diminuição da abundancia de proteínas glicoliticas. Além disso, chamam a atenção para um papel chave das mitocôndrias e proteínas dos miofilamentos e citoesqueleto no processo adaptativo e maldaptativo ao exercício. / Abstract: In the present work the acute and chronic changes in rat skeletal muscle in response to endurance exercise were investigated by proteomic analysis. The results are presented in two separated studies. In the first study gastrocnemius muscle were sampled from control non exercised animals and from animals exercised to exhaustion in an incremental manner in a treadmill. Exercised rats were sacrificed 3 and 24h after exercise cessation. We used the classic proteomic approach which utilizes two dimensional electrophoresis (2DE) to separate the proteins and mass spectrometry to identify these proteins. Six spots presented significant alterations in their relative volume. Spots identified as GAPDH, triose phosphate isomerase 1, beta subunit of pyruvate dehydrogenase E1, carnitine palmitoil transferase 2 and HSC70 were up-regulated after exercise. The spot identified as ?-actin was down-regulated after exercise. This results suggests that one bout of endurance exercise in untrained muscle may stimulate sarcoplasmic and mitochondrial proteins synthesis but not myofibril proteins. Proteins presenting increased abundance after one single bout of endurance exercise may be important for the preconditioning of skeletal muscle for a subsequent exercise bout. In the second study we present the proteomic analysis of the red (RG) and white portion (WG) of gastrocnemius muscle sampled from rats well adapted to endurance exercise (T1), well trained and submitted to an overtraining period (T2) and from control non exercised rats (C). Rats from group T2 were also subdivided in a functional overreaching group (FOR) which is composed by rats demonstrating an enhanced or unchanged performance after the overtraining period or a non functional overreaching group (NFOR) which is composed by rats demonstrating decreased performance levels after the overtraining period. When comparing C, T1 and T2, 32 spots demonstrated altered abundance in RG and 22 in the WG. The main alterations in RG were observed in the T2 group and indicated increased mitochondrial biogenesis, increased capacity of lipid uptake, antioxidant capacity, chaperone function, and a shift of fiber type from a fast-glycolytic to a slow-oxidative pattern. All these changes demonstrated the efficiency of an intensified training period to adapt skeletal muscle. The expected adaptations to endurance training were not evident in WG and the results such as decreased aconitase spots volume suggest higher oxidative stress levels in WG than in RG during overtraining. Myofilament and myofilament interacting proteins abundance were altered after chronic endurance stimuli. The results presented here suggests that the initial response of skeletal muscle to one single bout of endurance exercise encompasses an nonspecific increase of ATP production capacity while chronic stimulation increases only the oxidative capacity with a concomitant decrease in glycolytic proteins abundance. Also the results draw attention to the roles of mitochondria and myofilament proteins in adaptation and maladaptation to endurance exercise. / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Maeli Dal Pai Silva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T02:52:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_FernandaLosiAlvesde_D.pdf: 2894265 bytes, checksum: 520fa8f4b513d918c8eeeaeef4851198 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Nos peixes, o crescimento muscular ocorre por hipertrofia e hiperplasia a partir da proliferação e diferenciação das células satélites, processos regulados pela expressão de fatores de transcrição e de crescimento. Os objetivos desse trabalho foram: (1) avaliar a morfologia, morfometria e expressão gênica da MyoD, miogenina e IGF-I na musculatura branca do pacu (Piaractus mesopotamicus) com 45, 90, 180, 400 dias pós-eclosão (dpe) e adultos (n=8) e (2) avaliar a expressão gênica da MyoD, miogenina e miostatina na musculatura branca e vermelha de pacus adultos (n=8). Em todos os grupos, fragmentos da musculatura branca foram dissecados e congelados em nitrogênio líquido. Nos adultos, também foram coletados fragmentos de músculo vermelho. Cortes histológicos (10 ?m) da musculatura branca, obtidos em criostato, foram corados com hematoxilina-eosina para avaliação da morfologia e morfometria. Em cada animal, foi determinado o menor diâmetro de 100 fibras musculares brancas que foram distribuídas em classes, na dependência do seu diâmetro (<20 ?m, 20-50 ?m, >50 ?m), para avaliar a hiperplasia e hipertrofia. A expressão gênica foi analisada por reação em cadeia da polimerase após transcrição reversa em tempo real. A morfologia da musculatura branca foi semelhante em todos os grupos. No grupo 45 dpe, a alta freqüência de fibras brancas com diâmetro <20 ?m indica intensa hiperplasia; nos adultos, a alta freqüência de fibras com diâmetro > 50 ?m indica intensa hipertrofia. Nos grupos 90, 180 e 400 dpe, a alta freqüência de fibras com diâmetro entre 20 e 50 ?m indica a ocorrência de hiperplasia e hipertrofia. A expressão gênica da MyoD e miogenina foi semelhante nos grupos 45, 90, 400 dpe e adultos, aumentando significativamente nos animais com 180 dpe; nos grupos 180 dpe e adultos, essa expressão foi similar. Nossos resultados sugerem que a alta expressão de MyoD e miogenina no grupo 180 dpe está relacionada com a proliferação e diferenciação de células satélites, respectivamente, contribuindo para a hiperplasia e hipertrofia. Nos adultos, essa expressão está controlando a hipertrofia. A expressão gênica de IGF-I foi semelhante nos grupos 45 e 90 dpe, diminuindo nos animais com 180 dpe e adultos; os grupos 45, 90 e 400 dpe apresentaram expressão similar. Nos grupos 45 dpe e adultos, a expressão de IGF-I está relacionada com a proliferação de células satélites durante a hiperplasia e hipertrofia, respectivamente; nos animais com 90, 180 e 400 dpe, essa expressão está controlando ambos os mecanismos de crescimento. Entre os músculos branco e vermelho dos animais adultos, a expressão de MyoD, miogenina e miostatina foi semelhante. No músculo branco, a expressão de MyoD e miogenina está relacionada com a proliferação e diferenciação das células satélites, respectivamente, durante a hipertrofia. Na musculatura vermelha, essa expressão é responsável pela manutenção do fenótipo das fibras musculares. A expressão de miostatina, nas fibras brancas e vermelhas, está relacionada com a regulação do crescimento e manutenção da massa muscular constante nesses compartimentos / Abstract: In fish, skeletal muscle growth occurs by hypertrophy and hyperplasia and is dependent of the proliferation and differentiation of satellite cells, events regulated by the expression of transcription and growth factors. The purposes of this study were: (1) to evaluate the morphology, morphometry and MyoD, myogenin and IGF-I gene expression in white skeletal muscle from pacu (Piaractus mesopotamicus) at 45, 90, 180, 400 days post- hatching (dph) and adult (n=8) and (2) to analyze the MyoD, myogenin and myostatin gene expression in white and red muscles of adult pacu (n=8). In all groups, white skeletal muscle fragments were dissected out and frozen in liquid nitrogen. In adults, red muscle fragments were also collected. Transverse sections (10 ?m) from white muscle fragments, obtained in a cryostat, were stained with haematoxilin-eosin to evaluate muscle morphology and morphometry. In each animal fiber cross-section diameter (?m) was determined by measuring 100 white muscle fibers which were grouped into three diameter classes (<20?m, 20-50?m, and >50?m) to evaluate the hyperplasia and hypertrophy. Gene expression was analyzed by reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction. White muscle morphology was similar at all groups. The high frequency of <20?m diameter white fiber in 45 dph indicates intense hyperplasia; the high frequency of >50?m diameter fiber in adults shows intense hypertrophy. In 90, 180, and 400 dph groups the high frequency of 20-50?m diameter fibers indicates the occurrence of hyperplasia and hypertrophy. MyoD and myogenin gene expression was similar in 45, 90, and 400 dph and adult fish, peaking at 180 dph; in 180 dpe and adult groups this expression was similar. Our results suggest that the high MyoD and myogenin expression at 180 dph is related to the satellite cells proliferation and differentiation, respectively, during hyperplasia and hypertrophy. In adult fish, this expression is controlling the hypertrophy. The IGF-I gene expression was similar in 45 and 90 dpe stages, decreasing in 180 dpe and adult fish; the 45, 90 and 400 dpe groups have showed similar expression. In 45 dpe and adult groups, IGF-I expression is related to satellite cells proliferation during hyperplasia and hypertrophy, respectively; in 90, 180 and 400 dpe fish, this expression is controlling the both muscle growth mechanims. In red and white muscles from adults the the MyoD, myogenin and myostatin gene expression was similar. In white muscle, the MyoD and myogenin expression is related to the satellite cells proliferation and differentiation, respectively, during hypertrophy. In red muscle, this expression is responsible to the maintenance of fiber-type phenotype. Myostatin expression in white and red muscles is related to the growth regulation and maintenance of constant muscle mass in these compartments / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Maeli Dal Pai Silva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T16:06:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_RobsonFrancisco_D.pdf: 1253559 bytes, checksum: e244961263e728fe00882d5f5d14b262 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Introdução: A Insuficiência Cardíaca (IC) está associada a uma miopatia do músculo esquelético com aumento da expressão das isoformas rápidas da cadeia pesada de miosina (MHC) e alterações na matriz extracelular (MEC). Os mecanismos moleculares que controlam a expressão de MHC durante a IC ainda não foram descritos. Os fatores de regulação miogênica (MRF), uma família de fatores transcricionais que controlam vários genes músculo-específicos, podem estar relacionados com essa miopatia. As alterações da MEC podem estar associadas a um aumento na expressão de RNA mensageiro e na atividade das metaloproteinases da MEC (MMP), uma família de endopeptidases dependentes de zinco que degradam a maioria dos componentes da MEC e que são indispensáveis para a remodelação do tecido conjuntivo ao redor das fibras musculares. Objetivos: Analisar no músculo esquelético de ratos Wistar com IC induzida pela monocrotalina: 1) a expressão de RNA mensageiro para os MRF, as isoformas proteicas de MHC e a atrofia nos músculos Sóleo (SOL) e Extensor Longo dos Dedos (EDL); 2) a expressão de RNA mensageiro e a atividade das MMP nos músculos SOL, EDL e diafragma (DIA). Métodos: A expressão do RNA mensageiro para MyoD, miogenina, MRF4, MMP2 e MMP9 foi determinada por RT-PCR; as isoformas de MHC foram separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida e a atividade das MMP, por eletroforese em gel de poliacrilaminda contendo gelatina na presença de SDS em condições não redutoras. Resultados: 1) Embora a composição de MHC do músculo esquelético de ratos com IC não tenha sido alterada, a expressão relativa do RNA mensageiro para a MyoD nos músculos SOL e EDL, e a de MRF4 no músculo SOL foi significativamente diminuída, enquanto que a expressão relativa de RNA mensageiro para a miogenina não se alterou em ambos os músculos. A diminuição na expressão relativa de RNA mensageiro para o MRF4 está associada à atrofia do SOL em resposta à IC. 2) A IC aumentou a expressão de RNA mensageiro e a atividade da MMP9 nos músculos SOL, EDL e DIA, e aumentou a expressão de RNA mensageiro da MMP2 no músculo DIA. Conclusão: Nossos resultados sugerem um potencial papel para os MRF e para as MMP na miopatia do músculo esquelético na IC / Abstract: Background: Heart failure (HF) is associated with a skeletal muscle myopathy with increased expression of fast myosin heavy chains (MHC) and extracellular matrix (ECM) alterations. The skeletal muscle-specific molecular regulatory mechanisms controlling MHC expression during HF have not been described. Myogenic regulatory factors (MRF), a family of transcriptional factors that control the expression of several skeletal muscle-specific genes, may be related to these alterations. The ECM alterations may be associated with enhanced mRNA expression and activity of matrix metalloproteinases (MMP), a family of zinc-dependent endopeptidases that degrade most ECM components and appear indispensable for the breakdown of the connective tissue surrounding muscle fibers. Objectives: This investigation was undertaken in order to examine in Wistar rat skeletal muscle with monocrotaline-induced HF: 1) potential relationships between MRF mRNA expression and MHC protein isoforms and atrophy in Soleus (SOL) and extensor digitorum longus (EDL) muscles; 2) MMP mRNA expression and their potential relationships with changes in MMP activity in SOL, EDL, and diaphragm (DIA) muscles. Methods: MyoD, myogenin, MRF4, MMP2, and MMP9 were determined by using RTPCR; MHC isoforms were separated by using polyacrylamide gel electrophoresis, and MMP activity by electrophoresis in gelatin-containing polyacrylamide gel in the presence of SDS under nonreducing conditions. Results: 1) Despite no change in MHC composition of Wistar rat skeletal muscles with HF, the mRNA relative expression of MyoD in SOL and EDL muscles and that of MRF4 in SOL muscle were significantly reduced, whereas myogenin was not changed in both muscles. This down-regulation in the mRNA relative expression of MRF4 in SOL was associated with atrophy in response to HF. 2) HF increased MMP9 mRNA expression and activity in SOL, EDL, and DIA and MMP2 mRNA expression in DIA. Conclusion: Taken together; our results show a potential role for MRF and MMP in skeletal muscle myopathy during HF / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Maeli Dal Pai Silva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T01:50:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barretto_JeaneMarleneFogacadeAssis_D.pdf: 16620509 bytes, checksum: f55fbc50c521ec1697bb9e56f7c70d08 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: o desenvolvimento da musculatura em animais utilizados como alimento tem importância na qualidade e no aumento da massa muscular. Esse estudo teve por objetivo avaliar as características morfológicas e o crescimento da musculatura miotomal em tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) submetida à dieta com suplementação de vitamina C. O experimento foi realizado a partir da primeira alimentação exógena até 60 dias. As larvas foram distribuídas em cinco tratamentos, numa densidade de 10 indivíduos/L onde foram administrados os seguintes níveis de suplementação de vitamina C/ kg de ração balanceada: T1 = sem suplementação, T2 = 250 mg, T3 = 500 mg, T4 =1000 mg, T5 = sem suplementação até o vigésimo dia do tratamento, e com suplementação de 500 mg do vigésimo primeiro ao sexagésimo dia de experimento. Foram realizadas cinco repetições por tratamento com distribuição randômica. Cinco peixes de cada tratamento foram anestesiados com Ms-222 - SIGMA, sacrificados e a biometria foi efetuada após 20, 40 e 60 dias de experimento. Após isso, amostras de músculo foram congeladas em n-hexana resfriada em nitrogênio líquido e cortes histológicos foram submetidos à coloração HE (para análise da morfologia geral da musculatura), à reação mATPase, após pré incubação ácida (para a análise das características da ATPase miofibrilar) e à reação NADH-TR (para análise do metabolismo oxidativo das fibras). Aos 20 e 60 dias do experimento, cinco amostras de cada tratamento foram submetidos às reações imunohistoquímicas MyoD e miogenina (fatores de transcrição miogênica - para avaliar o grau de proliferação e diferenciação das celulas precursoras miogênicas). Também foram coletadas amostras de músculo para fixação em formalina neutra tamponada, processadas para serem embebidos em paraplast e os cortes histológicos foram submetidos à reação imunohistoquímica PCNA (Antígeno Nuclear de Proliferação Celular). A suplementação com os maiores níveis de vitamina C e após o período de restrição promoveu maior ganho de massa corpórea. O crescimento muscular em todos os tratamentos ocorreu principalmente por hiperplasia. Durante o experimento não foram observadas alterações morfológicas e histoquímicas nas fibras musculares. A suplementação de 500mg vit C kg-1da ração após a restrição por 20 dias promoveu a proliferação e a diferenciação das células precursoras miogênicas 500mg vit C kg-1 da ração foi o nível de suplementação apropriado para a miogênese e o desenvolvimento da Tilápia / Abstract: Muscle development in animais utilized for food has importance to muscle quality and mass increase. The aim of this study was evaluate the morphologic and the growth characteristics of the miotomal muscle in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) submitted to a vitamin C supplemented diet. The experiment was carried through from the first exogenous feeding up to 60 days. The larvae were distributed into five treatments, in aquaria at 10/L density. The levels of vitamin C supplement/kg of ration were: T1=no supplement, T2=250mg vit C kg-1 of diet, T3=500mg vit C kg-1of diet, T4= 1000mg vit C kg-1 of diet, T5= no supplement until 20 days and 500mg vit C kg-1 of diet on days 20 to 60. There were 5 repetitions for each treatment. After 20, 40 and 60 days, 5 fish from each treatment were anaesthetized with MS-222 - SIGMA, sacrificed and weighed. Muscle fragments were cooled in liquid nitrogen. Histological sections were submitted to the following reactions: Haematoxilin-Eosin (for analysis of the muscle morphology and to determine muscle fibers diameters); Nicotinamide Adenine Dinucleotide Tetrazolium Reductase (NADH-TR), for muscle fibre metabolic evaluation (oxidative and glycolitic); and miofibrillar ATPase (mATPase), in pH 9.4, after acid preincubation to study myosin ATPase characteristics. After 20 and 60 days, muscle samples from five fish of each treatment were immersed in n-Hexane cooled in liquid nitrogen and histological sections were submitted to the MyoD and myogenin immunohistochemical reaction to evaluate cell proliferation and differentiation. Another five fish per treatment were embedded in Paraplast and histological sections were submitted to PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) immunohistochemical reaction to evaluate the degree of cell proliferation per treatment. During the experiment, ali treatments increased in weight and length. Weight differences were significant only on day 60. Supplementation with high vitamin C levels and after a period of restriction promoted an increase in body mass. Muscle fiber morphology, metabolic and myosin ATPase characteristics were normal and similar in all treatments. Muscle growth in all treatments was predominantly by hyperplasia. Proliferation and differentiation of myogenic precursor cells was higher with 500mg vit C kg-1 of supplemented diets throughout the experiment. Restriction of this supplementation for 20 days did not harm differentiation and still promoted myogenic precursor cell proliferation. The appropriate levei of vitamina C to myogenesis and the development of the Tilapia was 500mg vit C kg-1 of the ration / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Maeli Dal Pai Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T13:18:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_FernandaLosiAlvesde_M.pdf: 1065788 bytes, checksum: 0b390cd2e5f289613db5ad2ca384e439 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Nos peixes, o crescimento do tecido muscular ocorre por hipertrofia e/ou hiperplasia a partir da proliferação e diferenciação de mioblastos adultos ou células miossatélites, processos regulados pela expressão diferencial dos fatores de regulação miogênica (MRFs). O objetivo desse trabalho foi avaliar os mecanismos de crescimento muscular hiperplasico e hipertrofico e a expressão do MRF MyoD, na musculatura branca do pacu (Piaractus mesopotamicus), durante o crescimento. Exemplares juvenis (n=5) e adultos (n=5) de pacu foram anestesiados, sacrificados e determinados o peso corporal (g) e o comprimento total (cm). Fragmentos musculares brancos da região dorsal de cada exemplar, em cada fase estudada, foram congelados e imersos em nhexano congelado em nitrogenio liquido. Cortes histológicos (10 µm), obtidos em criostato, foram submetidos à  coloração hematoxilina-eosina para avaliação da morfologia e morfometria das fibras musculares brancas. Foi calculado o menor diametro de 100 fibras musculares brancas em cada animal de cada fase estudada. As fibras musculares foram distribuídas em classes, na dependência do seu diametro (<20, 20-50, >50 µm), para avaliar o grau de crescimento hipertrófico e hiperplá¡sico da musculatura. A expressão do MRF MyoD na musculatura branca foi analisada por Reação em Cadeia da Polimerase apos Transcrição Reversa (RT - PCR). Todos os produtos visualizados em gel de agarose a 1% foram clonados e sequenciados. A morfologia da musculatura dos exemplares juvenis e adultos foi semelhante, apresentando um padrão em mosaico caracterizado por fibras de diferentes diâmetros. Nos exemplares juvenis, foi observado um predomínio de fibras com diametro menor que 20 µm, caracterizando intensa hiperplasia. Nos exemplares adultos, houve o predomínio de fibras musculares com diâmetro maior que 50 µm, caracterizando intensa hipertrofia da musculatura. A expressão do RNAm para o gene MyoD foi significativamente maior na fase juvenil, se comparada com a fase adulta. Foi obtida a sequencia consenso parcial do gene MyoD (338 pares de bases) expresso na musculatura branca do pacu. Essa sequencia apresentou similaridade com as sequencias de MyoD de varias especies de vertebrados, incluindo peixes teleósteos. A expressão diferencial do MRF MyoD, observada nas fases de crescimento juvenil e adulta do pacu, possivelmente seja responsavel pelas diferenças observadas no padrão de crescimento, com a hiperplasia predominando nos juvenis e a hipertrofia, nos adultos / Abstract: Skeletal muscle growth in fish occurs by hypertrophy and hyperplasia and is dependent of the proliferation and differentiation of myogenic progenitor cells, events regulated by the diferential expression of the myogenic regulatory factors (MRFs). The aim of this study was to analyze the hyperplasia and hypertrophy processes and the MRF MyoD expression in the white muscle in pacu (Piaractus mesopotamicus) during growth. Juvenile (n=5) and adult (n=5) fishes were anaesthetized, sacrificed and the weight (g) and the total length (cm) were determined. White muscle samples from dorsal region of each sample, in each growth phase, were collected and and immersed in n- Hexane cooled in liquid nitrogen. Transverse sections (10 µm thick), obtained in a cryostat, were stained with Haematoxilin-Eosin to morphological and morphometric analysis. We calculated the smallest diameter from 100 white muscle fibres per animal in each group. White muscle fibers were grouped in three classes: <20, 20-50 and >50 µm to evaluate hypertrophy and hyperplasia in pacu white skeletal muscle. MyoD gene expression was determined by using RT-PCR. All PCR products visualized in 1% agarose gels were cloned and sequenced. Juvenile and adult pacu fish skeletal muscle showed similar morphology, with mosaic pattern characterized by fibers with different diameters. The great number of muscle fibers with diameter inferior 20 µm observed in juvenile fish confirms the active hyperplasic process. In adult fish, most fibers were over 50 µm diameter and denote the more intense muscle fiber hypertrophy. MyoD mRNA level in the juvenile fish was higher compared to adult fish. A consensus partial sequence for MyoD gene (338 bases pairs) was obtained. This sequence showed similarity with various vertebrate species, including teleost fishes. Differential expression of MyoD gene observed in white muscle of pacu possibly is related to differences in growth patterns during the phases analysed, with predominance of hyperplasia in juveniles and hypertrophy in adult fish / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Denise Vaz de Macedo, Dagmar Ruth Stach-Machado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T21:15:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferrucci_DaniloLopes_M.pdf: 1810214 bytes, checksum: 4728c1ea4c33f76583148c1588199a23 (MD5) Previous issue date: 2018-08-15T18:15:37Z / Resumo: Os músculos esqueléticos são constituídos por fibras musculares e pela matriz extracelular. Em resposta ao exercício, o músculo apresenta a habilidade de transformar o estresse mecânico da contração muscular em adaptações de cunho biológico, a esse processo deu-se o nome de mecanotransdução. Embora pouco se saiba sobre a importância da matriz extracelular como mecanoreceptor, trabalhos anteriores mostram que o exercício pode causar alterações na expressão e atividade das metaloproteinases, que podem resultar em modificações na matriz extracelular. Nesse contexto, as MMPs são vistas como pivôs centrais e, através da degradação da matriz extracelular podem gerar fragmentos protéicos com funções distintas das proteínas integras, liberando ainda citocinas e fatores de crescimento associados à matriz, que em interação com receptores celulares fornecem informações à célula sobre o microambiente extracelular, regulando o comportamento e adaptação do tecido. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito de três sessões diárias de exercício exaustivo, realizados com diferentes pausas recuperativas entre as sessões, grupo E1(1h) e grupo E2 (3h), durante 6 dias consecutivos, na expressão das MMPs 2 e 9 e dos TIMPs 1 e 2; e nas concentrações e atividade biológica das MMPs nas porções vermelha (GV) e branca (GB) do músculo Gastrocnêmio de ratos Wistar. Os animais foram sacrificados após 1°, 3° e 6° dias de exercício e os fragmentos coletados do músculo gastrocnêmio foram analisados via ELISA, zimografia e qRT-PCR. Como controle (C) do protocolo experimental utilizou-se ratos sedentários. Os animais exercitados (E) mostraram aumento de desempenho a partir do 4° dia. Não houve diferença significativa na perfomance dos grupos E1 e E2. Os genes analisados mostraram-se igualmente expressos em resposta ao exercício em ambas as porções do músculo gastrocnêmio, contudo, o grupo E1 apresentou alterações mais acentuadas do que E2 para todos os biomarcadores analisados. O grupo E1 mostrou aumento na expressão das MMPs 2 e 9 no 3° dia de exercício, em ambas as regiões do músculo gastrocnêmio. Com relação aos TIMPs 1 e 2, os dados obtidos demonstram o aumento na expressão no GV e GB em resposta ao exercício (E1 e E2), em todos os tempos experimentais analisados. Todavia esse aumento foi mais acentuado para o grupo E1. A concentração total de MMP-2 nos grupos e E1 e E2 mostrou-se diminuída em todos os períodos analisados, para GV e GB. A atividade das isoformas latente e intermediária da MMP-2 apresentou-se diminuída em ambos os grupos exercitados no GB e apenas no grupo E1 para o GV. A atividade e concentração da MMP-9 não foram detectadas neste estudo. O protocolo agudo utilizado nesse estudo induziu um aumento significativo no desempenho dos animais, independente do tempo de pausa entre as sessões. O efeito adaptativo observado nas MMPs 2 e 9 em GV e GB foi de diminuição quantitativa e qualitativa. Possivelmente o aumento significativo na expressão gênica tanto das MMPs quanto TIMPs no grupo E1, permitiu um remodelamento acelerado na matriz extracelular do tecido, que possibilitou a melhora significativa no desempenho a partir do 3° dia. Considerando que ambos os tempo de pausa foram igualmente eficientes para aumentar a performance, seria melhor utilizar uma pausa de 3h entre as sessões, pois o processo de sinalização de síntese protéica demanda grande quantidade de energia, e depende da oferta de nutrientes em quantidade e qualidade adequada para a resposta / Abstract: Skeletal muscles are composed by muscle fibers and extracellular matrix. In response to exercise, muscles have the ability to transform mechanical stress from their contraction in biological adaptations, and, this process was called echanotransduction. Although little is known about the importance of the extracellular matrix acting as mechanoreceptors in this process, previous studies have shown that exercise can cause changes in the MMPs genetic expression and activity on the extracellular matrix. In this context, MMPs play the central role, once that the extracellular matrix degradation can generate fragments that are bioactive compounds and can interact with cell receptors to provide information regarding to extracellular microenvironment to the cells. Therefore, MMPs can regulate the behavior and adaptation of the muscle. The aims of this study were to evaluate the effect of three daily sessions of exhaustive exercise (performed with different recuperative breaks between sessions for six consecutive days) on the MMP-2, MMP-9 and tissue inhibitors of metalloproteinases 1 and 2 (TIMPs) gene expression, as well as, MMP's concentration and biological activities on the rat gastrocnemius muscle red (RG) and white (WG) portions. The animals were sacrificed on exercise-days 1, 3 and 6 and muscle fragments were collected and stored for later analysis through zymography, ELISA and qRT-PCR. Sedentary rats were used as controls. The exercised animals (E) showed an increased performance from the 4th day (p <0.05). There was no statistical difference between the performance of E1 and E2 groups. The genes examined were similarly expressed in response to exercise on the analyzed muscle regions, however, the group E1 have more pronounced changes than E2 when these biomarkers was analyzed. The E1 showed an increased expression of MMP-2 and -9 on the 3rd day of exercise comparing to the control group for RG e WG. Regarding TIMPs 1 and 2, our data showed an increase on their expression in RG and WG responsive to exercise (E1 and E2) during all time experimental points, but this increase was more pronounced in group E1. Furthermore, total concentration of MMP-2 in both groups was significantly reduced when compared to sedentary animals for all time points and muscle regions. The activity of latent and intermediate MMP-2 isoforms were significantly reduced in both exercised groups in the WG and, only, in the E1 to the RG. MMP-9 concentration and activities were not detected in this study. The acute protocol designed for this study induced an increase in the animal performances, regardless of the pauses employed between sessions. The adaptive effect observed in MMP-2 and 9 in the RG and WG was reduced quantitatively and qualitatively, due to the increased expression of both MMPs and TIMPs in group E1 leading to an accelerated remodeling the gastrocnemius extracellular matrix, allowing a significant improvement on performance since the third day onwards. Considering that both rest periods were equally effective to improve physical performance, rest periods of 3 hours between sessions are more adequate due to processes of protein synthesis, once that demands a great amount of energy and depends on the supply of nutrients in quantity and quality suitable for the positive response / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:38:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thiago Mattos de Araujo Lima.pdf: 914896 bytes, checksum: be7fe7f16d2a312578b3d1011a681a23 (MD5) Previous issue date: 2010-03-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Virola surinamensis (Myristicaceae), popularly known as ucuuba, ucuuba branca and sucuuba, is widely distributed in flooded areas of the Amazonian Forest. The bark resin is used in the folk medicine to treat erysipela and the tea of the leaves, to treat colics, dyspepsia, inflammations and malaria. The main constituents described for V. surinamensis are arylpropanoids, neolignans, lignans, lignoids, flavonoids, diarylpropanes, -butirolactones, alkaloids and acid benzoic derivatives. Among them, lignans and neolignans showed anti-parasitic and anti-fungal activities. Previous pharmacological studies described anti-parasitic effect of the essential oils and anti-leishmania, anti-inflammatory, anti-fungal, insecticide and gastroprotective actions. The aim of this work was to study the pharmacological activity of the standardized buthanolic fraction of Virola surinamensis and the mechanisms of the hypotensive effect and the potentiation of the skeletal muscle contraction. The chemical standardization was obtained after partition of the leaves aqueous extract (AE) in n-buthanol originating the buthanolic fraction (BuF). The BuF purification by high performance liquid chromatography (HPLC) originated 10 high purity fractions (F1 to F10) that are still in identification process. The pharmacological screening of AE and BuF showed low action in the CNS. In the arterial blood pressure of anesthetized rats, the intravenous injection of both AE and BuF produced hypotension apparently associated with the α1-adrenoceptors blockade. The BuF was effective to reduce the arterial blood pressure in the chronic treatment also. The absorbed substances did not modify the animal behavior in the Irwin Test, but produced reversible hypotension initiating in 30 min, time necessary to the gastric emptiness. The treatment during 7 days did not modify the animal behavior, but there was a residual accumulated effect of the BuF reducing the basal arterial blood pressure of the rats. In the isolated aortic rings without endothelium, the BuF relaxed the tonus induced by noradrenalin in a concentration-dependent manner, showing that BuF did not interfere with the NO system. This effect was indicative of a competitive antagonism and reinforced the evidences obtained in the arterial blood pressure that the mechanism of the hypotension produced by BuF was the α1 adrenoceptors blockade. The BuF potentiated the direct elicited twitches of the rat diaphragm. In microssomes isolated from the rabbit skeletal muscle, BuF inhibited the Ca2+-ATPase activity similarly to thapsigargin, indicating that the potentiation of the diaphragm contraction may be related to the decrease in the Ca2+ uptake by the sarcoplasmic reticulum. / A Virola surinamensis, conhecida popularmente como ucuúba, ucuúba branca, ucuúba de igapó, sucuba, é uma árvore que cresce em várzeas e em bancos de areia em rios na Floresta Amazônica. A resina da casca é utilizada na medicina popular para o tratamento de erisipelas e o chá das folhas é indicado em cólicas, dispepsia, processos inflamatórios e para o tratamento da malária. Dentre os constituintes de Virola surinamensis foram descritos arilpropanoides, neolignanas, lignanas, sesquilignóides, lignóides diméricos, flavonóides, diarilpropanos, -butirolactonas, alcalóides e derivados do ácido benzóico. Desses, destacam-se as lignanas e neolignanas por suas atividades anti-parasitária e anti-fúngica. Estudos farmacológicos anteriores descrevem atividade anti-parasitária dos óleos essenciais, atividade anti-leishmania, anti-inflamatória, antifúngica, inseticida e gastroprotetora. Este trabalho teve como objetivo o estudo das ações farmacológicas da fração butanólica padronizada de Virola surinamensis e a análise dos mecanismos do efeito hipotensor e da potenciação da contração do músculo esquelético. A padronização química foi obtida após partição do extrato aquoso das folhas (EA) em butanol dando origem à fração butanólica (FBut). A purificação da Fbut por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) originou 10 frações de elevado grau de pureza (F1 a F10) que se encontra em processo de identificação. A triagem farmacológica do EA e da Fbut mostrou baixa ação no SNC. Na pressão arterial de ratos anestesiados a injeção endovenosa tanto do extrato aquoso como da fração butanólica produziu hipotensão aparentemente associada à uma ação bloqueadora de receptores α1-adrenérgicos. A Fbut mostrou-se eficaz na redução da pressão arterial durante o tratamento crônico. As substâncias absorvidas não modificaram o comportamento animal no teste de Irwin, mas produziram hipotensão reversível com início em torno de 30 minutos, tempo necessário para o esvaziamento gástrico. O tratamento repetido durante 7 dias também não modificou o comportamento animal, mas houve um efeito residual cumulativo da FBut que a cada dia reduziu o valor basal da pressão arterial dos ratos. Em anéis de aorta sem endotélio, a Fbut relaxou o tônus induzido pela noradrenalina de maneira concentração-dependente, mostrando que Fbut não interfere no sistema NOS. Este efeito foi indicativo de antagonismo competitivo e reforça as evidências obtidas na pressão arterial de que o mecanismo da hipotensão produzida pela Fbut é o bloqueio de adrenoceptores do tipo α1. A Fbut potenciou a contração obtida por estímulo direto da fibra muscular do diaframa de rato. Em microssomas isolados da musculatura esquelética do coelho, a Fbut inibiu a atividade da Ca2+-ATPase à semelhança da tapsigargina, indicando que a potenciação da contração do diafragma parece estar relacionada à diminuição da recaptação de Ca2+ pelo retículo sarcoplasmático.