Orientador: Ana Lúcia Barretto Penna / Banca: Mirna Lúcia Giante / Banca: Mieko Kimura / Resumo: A busca por uma alimentação balanceada e por alimentos que possam trazer benefícios à saúde do consumidor fez aumentar a demanda de alimentos funcionais, incluindo os produtos lácteos probióticos. A combinação de um produto suplementado com proteínas e fermentado por microrganismos probióticos pode gerar um produto com propriedades tecnológicas, sensoriais e funcionais que atendam a demanda por esses produtos. A suplementação do leite para a fabricação de iogurtes com diferentes tipos de proteínas melhora o valor nutricional do produto e afeta principalmente a formação da estrutura do gel do iogurte, alterando propriedades como textura, firmeza, viscosidade, retenção de água e separação do soro. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito da suplementação do leite com proteínas de diferentes fontes (soro de leite, soja e colágeno) e do tipo de cultura láctica (culturas tradicionais e probióticas) sobre as características físico-químicas e microbiológicas de iogurtes. O aumento da concentração de suplemento protéico resultou em aumento da capacidade da retenção de água e em redução da sinérese dos iogurtes. A adição de fibra natural de colágeno aos iogurtes resultou em produtos com maior capacidade de retenção de água, sinérese e consistência, que são propriedades importantes para a qualidade do iogurte. Por outro lado, a suplementação com isolado protéico de soja resultou em produtos com propriedades tecnológicas inadequadas, embora tenha obtido os melhores resultados no estímulo do desenvolvimento das culturas durante a fermentação. Os iogurtes fermentados com a cultura tradicional (S. thermophilus e L. bulgaricus) apresentaram maior acidez titulável, maior capacidade de retenção de água e menor sinérese do que os iogurtes fermentados com a cultura probiótica (S. thermophilus, L. bulgaricus e L. acidophilus). A suplementação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available. / Mestre

Orientador: Paulo Roberto Bueno / Co-orientador: Fernanda Carvalho / Banca: Hideko Yamanaka / Banca: Ronaldo Censi Faria / Resumo: A dengue é uma doença infecciosa, não contagiosa, causada por um Flavivirus, transmitido pela picada do mosquito Aedes aegypti infectado. Sua evolução é rápida, o diagnóstico é baseado em sintomas clínicos imprecisos e laboratorial demorado e inespecífico, o tratamento é paliativo, trata-se os sintomas e não a infecção. Neste contexto, a proteína NS1, glicoproteína não estrutural do vírus da dengue, tem sido utilizada comercialmente como alvo para diagnóstico, pelo método ELISA. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um biossensor eletroquímico para diagnóstico da dengue baseado na detecção da proteína NS1, por técnica impedimétrica e capacitiva. Pela técnica impedimétrica, monocamadas auto-organizadas de alcanotióis, sobre os eletrodos de ouro, formadas pelo ácido 11-mercaptoundecanóico e 6-mercapto-1-hexanol foram usadas para ancorar o anticorpo anti-NS1 e minimizar o impedimento estérico entre as proteínas, respectivamente. Esta camada funcionalizada e sua interação com o analito, proteína NS1, geram um bloqueio para reações redox da espécie eletroativa [Fe+2(CN)6]4-/Fe+3(CN)6]3- contidas na solução de PBS, resultando em um aumento da resistência a transferência de carga em função da concentração do analito alvo. Para a abordagem capacitiva, foram utilizados os alcanotióis ácido 16-mercaptohexadecanoico e 11-ferrocenil-undecanotiol sobre o eletrodo de ouro para ancorar o anticorpo anti-NS1 e as medidas foram realizadas em TBAClO4 dissolvido em acetonitrila. Nesta técnica, esta camada funcionalizada e sua interação com o analito, proteína NS1, geram uma variação do sinal de capacitância redox ( ). Por Espectroscopia de impedância eletroquímica (EIE) e Voltametria Cíclica (CV), pôde-se verificar que a capacidade impedimétrica à transferência de carga foi gradativamente aumentada pela construção da monocamada, imobilização do anticorpo... / Abstract: Dengue is a non-contagious infectious disease caused by a Flavivirus transmitted by a bite of infected mosquito Aedes aegypti. The evolution is fast, the diagnosis is based on clinical symptoms inaccurate and prolonged and nonspecific laboratory, the treatment is palliative, is treated the symptoms and not the infection. In this context, NS1 protein, nonstructural glycoprotein of dengue virus has been used commercially as a diagnostic target by ELISA. The aim of this study was to develop an electrochemical biosensor for dengue diagnosis based on the detection of this protein, by impedimetric and capacitive technique. Through impedimetric technique, self-assembled monolayers of alkanethiols on gold electrodes formed by 11-mercaptoundecanoic acid and 6-mercapto-1-hexanol were used to anchor the anti-NS1 antibody and minimize steric hindrance between the proteins, respectively. This functionalized layer and its interaction with the analyte, the NS1 protein, generate a lock for redox reactions of electroactive species [Fe+2(CN)6]4-/Fe+3(CN)6]3- contained in the PBS solution, resulting in an increase in charge transfer resistance due to the concentration of the target analyte. For capacitive approach, alkanethiols acid 16-mercaptohexadecanoico and 11-ferrocenyl-undecanotiol on gold electrode were used to anchor the anti-NS1 antibody and measurements were performed in TBAClO4 dissolved in acetonitril. In this technique instead of a steric hindrance, this functionalized layer and its interaction with the analyte, the NS1 protein, generate a variation of signal redox capacitance ( ). Initially ELISA test was performed to verify and confirm the specificity of interaction anti-NS1 by NS1. Through Electrochemical impedance spectroscopy (EIS) and cyclic voltammetry (CV) can be verified that impedimetric ability to transfer load was gradually increased by the construction of the monolayer, immobilization of... / Mestre

Orientador: Raul José Silva Girio / Coorientador: Fernanda Senter Magajevski / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Raimundo Souza Lopes / Banca: Ana Paula Massae Nakage Canesin / Banca: Maria Angélica Dias / Resumo: Atualmente, a citometria de fluxo está tornando-se uma ferramenta útil na Medicina Veterinária, particularmente na clínica de pequenos animais. O presente ensaio teve como objetivo imunomarcar as subpopulações linfocitárias CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD21+, com a utilização de marcadores de superfície (anticorpos monoclonais), em quatro diferentes raças de cães domésticos e correlacionar esses dados com o eletroforetograma de proteínas séricas desses animais. Foram utilizados 40 cães adultos, machos e fêmeas, das raças Beagle, Golden Retriever, Bulldog Inglês e sem raça definida, divididos em 4 grupos, sendo 10 cães por grupo experimental. Os cães foram submetidos à avaliação clínica, hematológica (hemograma) e à análise quantitativa, no sangue periférico, das subpopulações de linfócitos CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD21+. Paralelamente, foi realizada a análise qualiquantitativa das proteínas séricas totais e suas frações. As proteínas séricas foram separadas por eletroforese em matriz de gel de poliacrilamida, e suas concentrações determinadas por densitometria computadorizada. O número médio de células obtido para a subpopulação de linfócitos T citotóxicos foi significativamente maior (p<0,05) nos Bulldogs Ingleses e cães SRD, comparativamente aqueles encontrados nos grupos Beagles e Golden Retrievers. Ademais, observou-se que o número médio de células obtido para a subpopulação de linfócitos B foi significavamente maior (p<0,05) nos Bulldogs Ingleses, quando comparado àquele dos Beagles. No presente estudo, não foi possível estabelecer correlação entre as subpopulações linfocitárias analisadas e as proteínas totais e suas frações / Abstract: Flow cytometry is useful tool in veterinary medicine, particularly in small animal practice. The objective of this study was to determine lymphocyte subsets of CD5+CD4+, CD5+CD8+ and CD21+ in four different breeds of domestic dogs and correlate these data with the electrophoretogram of serum proteins in these animals. A total of 40 adult dogs, males and females of Beagles, Golden Retrievers, English Bulldogs and crossbreed dogs were divided in four groups, with 10 dogs per experimental group. The dogs were submitted to clinical, hematological and quantitative analysis, in peripheral blood, of lymphocyte subsets of CD5+CD4+, CD5+CD8+ and CD21+. Also we performed a qualitative and quantitative analysis of total serum protein and its fractions. The serum proteins were separated by electrophoresis in polyacrylamide gel matrix, and their concentrations were determined by computerized densitometry. The average number of cells obtained for the subsets of cytotoxic T lymphocytes was significantly higher (p<0,05) in the British Bulldogs and crossbreed dogs compared to those found in Beagles and Golden Retrievers. Furthermore, it was observed that the average number of cells obtained for the subsets of B lymphocytes was significavamente higher (p<0,05) in English Bulldogs compared to that of Beagles. In the present study, there was no correlation between lymphocyte subsets with total proteins and its fractions / Doutor

Orientadora: Mara Cristina Pessôa da Cruz / Banca: José Ricardo Mantovani / Banca: Manoel Evaristo Ferreira / Resumo: O pH é um dos fatores que interfere na mineralização do C e do N orgânico dos resíduos aplicados ao solo. Compreender o seu efeito pode resultar em manejo mais adequado dos resíduos e em melhor aproveitamento do N pelas plantas, o que, além de ganhos agronômicos, significa ganhos ambientais. O objetivo com este trabalho foi avaliar o efeito do pH do solo na mineralização do C e do N do soro ácido de leite. Foram conduzidos experimentos em condições de laboratório, em esquema fatorial combinando amostras de dois solos, um Argissolo Vermelho-Amarelo (PVA) e um Latossolo Vermelho (LV), cinco valores de pH (4,5; 5,0; 5,5; 6,0 e 6,5) e duas doses de soro ácido de leite (0 e a taxa de aplicação calculada para cada solo para fornecer 80 kg ha-1 de N), em delineamento inteiramente ao acaso com três repetições. Os dados obtidos em 180 dias de incubação foram ajustados ao modelo cinético de primeira ordem. Não houve influência do pH na mineralização do C do soro ácido de leite, que ocorreu em todos os valores de pH. A mineralização do N do soro também ocorreu em todos os valores de pH e tendeu a aumentar entre pH 4,5 e 6,5. A nitrificação ocorreu em pH 4,5 e aumentou com o aumento de pH até 6,5 / Abstract: The pH is one of the factors that interfere in the processes of mineralization of organic C and N in wastes applied to soil. Understanding your effect can result in more appropriate management of waste and better utilization of N by plants which in addition to agronomic gains, means environmental gains. The aim of this study was to evaluate the effect of soil pH on the mineralization of C and N of acid whey. Were conducted two experiments in laboratory conditions in factorial scheme with the combination of two soil samples, one Ultisol and the other, Oxisol, five pH values (4,5; 5,0; 5,5; 6,0 e 6,5) and two rates of acid whey (0 and the rate of application for supply 80 kg ha-1 N), in a completely randomized design with three repetitions. The data obtained in 180 days of incubation were adjusted in a first-order kinetic model. There was no influence of pH in the C mineralization of acid whey at all pH values. The N mineralization also occurred at all pH values and tended to increase between 4.5 and 6.5. Nitrification occurred at pH 4.5 and increased with increasing pH to 6.5 / Mestre

Orientador: José Jurandir Fagliari / Coorientador: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Daniela Gomes da Silva / Banca: Luiz Paulo Martins Filho / Resumo: O presente estudo objetivou realizar o exame microbiológico, a contagem de células somáticas (CCS) e o perfil bioquímico do soro lácteo de amostras de leite de 30 búfalas da raça Murrah, primíparas (G1), com duas a três lactações (G2) e com mais de três lactações (G3) que foram acompanhadas mensalmente durante uma lactação completa (270 dias). Antes da colheita das amostras de leite foi realizado o exame físico da glândula mamária, teste da caneca de fundo escuro e California Mastitis Test (CMT). Após a assepsia dos tetos, foram colhidas, amostras de 20 mL de leite de cada quarto mamário, em frascos esterilizados e sem conservante, para o isolamento microbiológico, perfil bioquímico e o fracionamento proteico em SDS-PAGE, e amostras de 30 mL de leite de cada quarto mamário em frascos plásticos esterilizados contendo conservante bronopol para realização da contagem de células somáticas (CCS), em contador automático. Adicionalmente, foi avaliado o perfil da sensibilidade antimicrobiana dos microorganismos isolados e a influência da pluviosidade sobre a ocorrência de mastite nos animais avaliados. Durante a lactação foi observado aumento da CCS, aumento das atividades das enzimas gamaglutamiltransferase (GGT) e fosfatase alcalina (ALP), aumento das concentrações de proteína total, albumina, fósforo (P), magnésio (Mg), cloretos (Cl), sódio (Na), imunoglobulina A (IgA), lactoferrina, albumina sérica, imunoglobulina G (IgG), α-lactoalbumina e redução das concentrações de cálcio total (Ca), ferro (Fe), cálcio ionizado (Cai), potássio (K) e b- lactoglobulina. As fêmeas primíparas (G1) apresentaram maior atividade das enzimas GGT e ALP e maiores concentrações de P, K e α-lactoalbumina. As fêmeas com duas a três lactações (G2) apresentaram maiores concentrações de proteína total... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aims of the study were to perform the microbiological examination, somatic cell count (SCC), the biochemical profile, and protein fractionation of milk samples from 30 primiparous Murrah buffaloes (G1), with two or three lactations (G2) and over three lactations (G3). The animals were accompanied monthly during a complete lactation (270 days). Physical examination of the mammary gland, stip cup test, and California Mastitis Test (CMT) were performed for the diagnosis of clinical and subclinical mastitis before sampling. After quarters asepsis, 50 mL of milk samples were collected, each month, from each quarter in sterilized bottles without preservative for the microbiological isolation, biochemical profile, and protein fractionation in sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and 30 mL of milk samples from each quarter in plastic bottles sterilized containing bronopol for performing the somatic cell count (SCC) in electronic counter. In addition, were evaluated the antimicrobial sensitivity profile of the microorganisms isolated from milk samples, and the influence of dry or rainy weather on the incidence of mastitis in the animals. During lactation were observed increase in SCC, gammaglutamyltranferase (GGT) and alkaline phosphatase (ALP) activities, increase in total protein, albumin, phosphorus (P), magnesium (Mg), chlorides (Cl), sodium (Na), immunoglobulin A (IgA), lactoferrin, serum albumin, immunoglobulin (G), α-lactalbumin concentrations and decrease in total calcium (Ca), iron (Fe), ionized calcium (Cai), potassium (K) and b-lactoglobulin concentrations. The females of G1 showed higher GGT and ALP activity and higher concentration of P, K and α-lactalbumin. The females of G2 showed higher total protein, albumin,Mg, Cl, Fe, Na and lactoferrin concentrations The females of G3 showed... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-26T19:16:12Z No. of bitstreams: 1 EvellynCamaraGrilo_DISSERT.pdf: 1083379 bytes, checksum: 5c4378ae79f8da0ab5335caca60a8c5d (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-28T21:55:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 EvellynCamaraGrilo_DISSERT.pdf: 1083379 bytes, checksum: 5c4378ae79f8da0ab5335caca60a8c5d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T21:55:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EvellynCamaraGrilo_DISSERT.pdf: 1083379 bytes, checksum: 5c4378ae79f8da0ab5335caca60a8c5d (MD5) Previous issue date: 2015-07-14 / As vitaminas A e E s?o nutrientes que possuem natureza lipof?lica e atuam em v?rios processos biol?gicos importantes, como a imunidade, reprodu??o, crescimento e desenvolvimento. Estas vitaminas s?o essenciais na fase inicial da vida e devem ser transferidas adequadamente da m?e para o filho durante a gesta??o e a lacta??o. A suplementa??o materna com vitamina A ? uma das estrat?gias de controle de sua defici?ncia no grupo materno-infantil, entretanto, estudos com animais evidenciaram que a suplementa??o com altas doses de vitamina A reduziu os n?veis de alfa-tocoferol (vitamina E) no soro e no leite. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influ?ncia da suplementa??o materna com vitamina A sobre a concentra??o de retinol e alfa-tocoferol nos leites colostro e maduro de lactantes. Pu?rperas a termo e saud?veis foram aleatoriamente distribu?das nos grupos controle (n = 44) e suplementado (n = 44). Amostras de sangue e leite colostro foram coletadas no p?s-parto imediato e uma amostra de leite maduro foi coletada ap?s 30 dias. O grupo suplementado recebeu uma suplementa??o com palmitato de retinila (200.000 UI), imediatamente ap?s a primeira coleta de colostro. O retinol e o alfa-tocoferol das amostras biol?gicas foram analisados por Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia (CLAE). Valores s?ricos abaixo de 20 ?g/dL para a vitamina A e 516 ?g/dL para a vitamina E foram indicativos de defici?ncia. As concentra??es de retinol e alfa-tocoferol no soro das lactantes foram 46,4 ? 15,9 ?g/ dL e 1.023,6 ? 380,4 ?g/ dL, respectivamente, sendo consideradas adequadas. No grupo suplementado, verificou-se um aumento significativo dos n?veis de retinol no leite colostro, 24 horas ap?s interven??o (p<0,001), entretanto, n?o foi observada diferen?a estat?stica entre a concentra??o de retinol no leite maduro dos grupos avaliados (p>0,05). Al?m disso, ap?s a suplementa??o materna com vitamina A, houve uma redu??o significativa na concentra??o de alfa-tocoferol no leite colostro (p<0,05), que correspondeu a um decl?nio de 16,4% dos n?veis de vitamina E. Por outro lado, a administra??o do suplemento n?o influenciou os n?veis de alfa-tocoferol no leite maduro (p>0,05). Diante disso, conclui-se que a suplementa??o materna com altas doses de vitamina A aumentou os n?veis desse micronutriente no leite colostro, por?m, reduziu a biodisponibilidade do alfa-tocoferol, o que pode trazer preju?zos ? sa?de do neonato, que possui reservas limitadas de vitamina E ao nascimento. / Vitamins A and E are lipophilic nutrients that act in many important biological processes, such as immunity, reproduction, growth, and development. These vitamins are essential during the initial phase of life and should be properly transferred from mother to child during pregnancy and lactation. Maternal supplementation with vitamin A is one of the strategies for controlling its deficiency in the mother-child dyad, but studies with animals showed that supplementation with high doses of vitamin A reduces the levels of alpha-tocopherol (vitamin E) in the mother?s serum and milk. Hence, the objective of this study was to assess the influence of maternal supplementation with vitamin A on the concentration of retinol and alpha-tocopherol in colostrum and mature milk. Healthy puerperal women with term deliveries were randomly distributed into a control group (n=44) and a supplemented group (n=44). Blood and colostrum samples were collected immediately after delivery, and mature blood samples were collected 30 days later. The supplemented group received 200,000 IU of retinyl palmitate immediately after the first colostrum collection. The retinol and alpha-tocopherol levels in the biological samples were determined by high-performance liquid chromatography (HPLC). Serum vitamin A levels below 20 ?g/dL and serum vitamin E levels below 516 ?g/dL indicated deficiency. The retinol and alpha-tocopherol levels in the maternal serum were considered adequate at 46.4 ? 15.9 ?g/ dL and 1,023.6 ? 380.4 ?g/ dL, respectively. The colostrum retinol levels of the supplemented group increased significantly 24 hours after the intervention (p<0.001). However, the retinol levels in the mature milk of both groups did not differ (p>0.05). Moreover, after maternal supplementation with vitamin A, colostrum alpha-tocopherol level decreased by 16.4%, a significant reduction (p<0.05). However, vitamin A supplementation did not affect the alpha-tocopherol level of mature milk (p>0.05). In conclusion, maternal supplementation with high doses of vitamin A increased the colostrum level of this nutrient but reduced the bioavailability of alpha-tocopherol, which may harm the newborn?s health since newborns have limited vitamin E reserves.

Neste trabalho foram desenvolvidos, em escala laboratorial, processos para o aproveitamento do soro de queijo como meio de cultura para as leveduras Kluyveromyces marxianus CBS 712 e Kluyveromyces marxianus CBS 6556 , objetivando a produção de lactase. A primeira etapa dos experimentos foi realizada em incubadora rotatória para determinar-se as condições ideais de crescimento microbiano (pH, meio de cultura e temperatura). Os resultados desta etapa definem que o pH e a temperatura ideais de crescimento são 5,5 e 37oC, respectivamente. Quanto ao meio de cultura, definiu-se soro de queijo in natura (7% w/v) para a cepa CBS 6556 e soro suplementado com extrato de levedura (1% w/v) para a cepa CBS 712. A segunda etapa dos experimentos foi realizada em biorreator aerado, utilizando-se as condições de crescimento determinadas na etapa anterior, com o objetivo de determinar a melhor cepa produtora de lactase. Ambas linhagens produziram quantidades equivalentes da enzima, sendo então escolhida, para os testes posteriores de otimização do processo e caracterização enzimática parcial, a levedura Kluyveromyces marxianus CBS 6556, por utilizar um meio de cultura mais simples e barato. Testou-se, então, o crescimento em soro de queijo concentrado (21% w/v), que resultou em uma maior produtividade específica de lactase pela levedura, contudo apresentou, também, maior produção de etanol, tóxico à célula. A caracterização enzimática mostrou que a lactase produzida possui atividade enzimática máxima em torno de 37oC e que possui pouca estabilidade à temperatura ambiente (30oC) e ao armazenamento à 4oC. Durante o armazenamento nas temperaturas de -4oC e -18oC a enzima conservou sua estabilidade durante as nove semanas.

Neste trabalho foram desenvolvidos, em escala laboratorial, processos para o aproveitamento do soro de queijo como meio de cultura para as leveduras Kluyveromyces marxianus CBS 712 e Kluyveromyces marxianus CBS 6556 , objetivando a produção de lactase. A primeira etapa dos experimentos foi realizada em incubadora rotatória para determinar-se as condições ideais de crescimento microbiano (pH, meio de cultura e temperatura). Os resultados desta etapa definem que o pH e a temperatura ideais de crescimento são 5,5 e 37oC, respectivamente. Quanto ao meio de cultura, definiu-se soro de queijo in natura (7% w/v) para a cepa CBS 6556 e soro suplementado com extrato de levedura (1% w/v) para a cepa CBS 712. A segunda etapa dos experimentos foi realizada em biorreator aerado, utilizando-se as condições de crescimento determinadas na etapa anterior, com o objetivo de determinar a melhor cepa produtora de lactase. Ambas linhagens produziram quantidades equivalentes da enzima, sendo então escolhida, para os testes posteriores de otimização do processo e caracterização enzimática parcial, a levedura Kluyveromyces marxianus CBS 6556, por utilizar um meio de cultura mais simples e barato. Testou-se, então, o crescimento em soro de queijo concentrado (21% w/v), que resultou em uma maior produtividade específica de lactase pela levedura, contudo apresentou, também, maior produção de etanol, tóxico à célula. A caracterização enzimática mostrou que a lactase produzida possui atividade enzimática máxima em torno de 37oC e que possui pouca estabilidade à temperatura ambiente (30oC) e ao armazenamento à 4oC. Durante o armazenamento nas temperaturas de -4oC e -18oC a enzima conservou sua estabilidade durante as nove semanas.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5106_1.pdf: 3183906 bytes, checksum: 2e940415f50a8b240c639a58645d7142 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / A levedura Kluyveromyces marxianus Hansen tem sido apontada como sistema biológico para estudos genéticos e biotecnológicos baseado nas suas vantagens fisiológicas e bioquímicas. Contudo, a ausência de plasmídios naturais e o pouco conhecimento sobre sua genética e comportamento têm sido os principais entraves para estudos mais aplicados. Sua capacidade de utilizar lactose como fonte de carbono possibilita o uso do soro de queijo, atualmente um importante poluente da indústria de laticínios, como matéria-prima para outros processos industriais. Buscou-se, portanto, construir vetores plasmidiais eficientes e compatíveis com a levedura K. marxianus para avaliar a capacidade de linhagens recombinantes utilizarem o soro de queijo como meio de crescimento de baixo custo no processo de expressão de genes de interesse industrial, tais como enzimas extracelulares ou peptídeos antimicrobianos. Este trabalho permitiu verificar que: um método simples e rápido de transformação mediado por acetato de lítio permitiu um aumento da eficiência de transformação de células de K. marxianus em 2,5 vezes em relação ao método convencional; o crescimento de células de leveduras recombinantes transformadas com pDblet ou seus derivados não foi afetado pela alta concentração de lactose no soro de queijo, apresentando perfil de crescimento similar ao de células parentais. Esses dados sugerem a possibilidade do uso de linhagens recombinantes de Kluyveromyces marxianus portadoras de plasmídios baseados no pDblet para processos biotecnológicos a partir do soro de queijo advindo das indústrias de laticínios

Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-10-01T11:49:29Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2113944 bytes, checksum: 8aa2ddb02051739fffa6b2d22d464bd0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-01T11:49:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2113944 bytes, checksum: 8aa2ddb02051739fffa6b2d22d464bd0 (MD5) Previous issue date: 2018-08-02 / A conjugação de proteínas com polissacarídeos é utilizada para o melhoramento e/ou intensificação das propriedades técnico-funcionais das proteínas, aumento da estabilidade térmica das mesmas e formação de nanoestruturas destinadas à incorporação de compostos bioativos. Face à busca por sistemas proteicos com propriedades diferenciadas, o Capítulo I apresenta uma revisão sobre as técnicas de obtenção e caracterização de conjugados de proteínas e polissacarídeos formados por reação de Maillard. Os artigos 2 e 3 descrevem a formação e caracterização de conjugados de α-lactoalbumina (α-la) e β-lactoglobulina (β-lg), respectivamente, com goma tara (TG), bem como a obtenção e caracterização de nanoestruturas a partir destes conjugados. Os conjugados foram obtidos por meio da reação de Maillard utilizando o método de aquecimento a seco. Dispersões contendo proteína e polissacarídeo (razão mássica 1:1) foram incialmente secas por liofilização e/ou atomização com o objetivo de avaliar o efeito da técnica de secagem sobre as propriedades dos pós. Posteriormente, foram aquecidas a 60 °C e mantidas em ambiente de umidade relativa de 79 % por até 9 dias. A formação dos conjugados nos diferentes sistemas foi determinada por medidas do índice de escurecimento e pelo teste orto-ftalaldeído. Foram utilizados a análise de variância e o teste Tuckey como critérios para determinação do tempo de incubação apropriado para a obtenção dos conjugados. As nanoestruturas dos conjugados obtidas em diferentes condições físico- químicas (temperatura, pH e tempo de aquecimento) foram caracterizadas via espalhamento dinâmico de luz, potencial zeta (ζ), fluorimetria e dicroísmo circular. Foram determinados os parâmetros de estabilidade térmica (temperatura de desnaturação, T d ; variação da entalpia, ∆H) por meio da técnica de calorimetria diferencial de varredura, bem como as propriedades técnico-funcionais (habilidade de formação de espuma e índice de estabilidade de emulsão) das proteínas puras, misturas de proteína+TG e das nanoestruturas. A morfologia das nanoestruturas foi avaliada usando a microscopia eletrônica de transmissão e microscopia de força atômica. Em geral a extensão da reação de Maillard aumentou com o tempo de aquecimento, tendo uma maior extensão em conjugados obtidos de misturas liofilizadas. O tempo de glicosilação mais apropriado foi de 2 dias. Sistemas contendo β-lg-TG, secos em spray dryer (SD) apresentaram instabilidade eletrostática com valores de potencial ζ na faixa de -30 a 30 mV. As condições de processamento de 50 °C, pH 9,2, 45’ para o sistema β-lg-TG (SD) apresentou excelente estabilidade emulsificante. Nanoestruturas de conjugados de α-la-TG mostraram um formato cônico com diâmetro médio hidrodinâmico variando entre 34,3 e 290,1 nm. As condições de processamento de 50 °C, pH 9,2, 45’ para o sistema α-la-TG (SD) apresentaram T d = 67.50 °C, um indicativo de uma melhor estabilidade térmica quando comparado ao controle (α-la; T d = 63.56 °C). Foram observadas mudanças na estrutura secundária das nanoestruturas de conjugados de α-la-GT, como a diminuição do conteúdo de α-hélice. / The conjugation of proteins with polysaccharides has been used to improve and/or enhance the technical-functional properties of proteins, to increase the thermal stability of proteins and to form nanostructures able to act as carrier of bioactive compounds. Due to the differentiated functionality of conjugates, Chapter I presents a review on the techniques used to produce and to characterize proteins/polysaccharides conjugates formed via Maillard reaction. Articles 2 and 3 describe the formation and characterization of, respectively, α-lactalbumin (α-la) and β-lactoglobulin (β-lg) conjugates with Tara gum (TG), as well as the obtaining and characterization of nanostructures formed from these conjugates. The conjugates were obtained through Maillard reaction using the dry-heating method. Dispersions containing protein and polysaccharide (mass ratio 1:1) were initially lyophilized and/or spray-dried in order to evaluate the effect of the drying technique, and subsequently heated to 60 ° C and relative humidity of 79 % for up to 9 days. The formation of the conjugates was evaluated by measures of the browning index and by using the ortho-phthalaldehyde test. Variance analysis and Tukey test were used as criteria to determine the most appropriate incubation time for obtaining the conjugates. Nanostructures from conjugates were synthesized under different physicochemical conditions (temperature, pH and heating time) and characterized by dynamic light scattering, zeta (ζ-) potential, fluorimetry and circular dichroism. The thermal stability parameters (denaturation temperature, T d ; change of enthalpy, ΔH) were determined by differential scanning calorimetry, as well as the technical-functional properties (foam ability and emulsion stability index) of pure proteins, mixtures of protein+TG and nanostructures. The morphology of the nanostructures was evaluated by transmission electron microscopy and atomic force microscopy. The progress of the Maillard reaction increased with the increment of the heating time, with a larger extension in the systems formed with lyophilized mixtures. The most appropriate time of glycosylation for the two studied systems was 2 days. Nanostructures from β-lg-TG conjugates presented electrostatic instability with ζ-potential values varying from -30 to 30 mV. Systems containing β-lg-TG, formed at process condition of 50 °C, pH 9.2, 45’ and dried by spray (SD) showed excellent emulsifying stability. Nanostructures from α-la-TG conjugates showed a conical shape with a mean hydrodynamic diameter ranging from 34.3 to 290.1 nm, depending on the system and the conditions used. Systems of α-la-TG (SD) formed at conditions of 50 °C, pH 9.2, 45’ showed T d = 67.50 °C indicating better thermal stability when compared to the control (pure α-la; T d = 63.56 °C). Changes were observed in the secondary structure of nanostructures formed from α-la-GT system, mainly a decrease in α-helix content.