Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Alberto Elias Marques.pdf: 241680 bytes, checksum: 919ae1559355f2402d175bade0935fc1 (MD5) Previous issue date: 2008-07-11 / The state of Goias has the third largest cattle herd in Brazil, but the production has some obstacles, such as reproductive diseases, which cause abortions and infertility, including leptospirosis, also important in public health. This study aimed to determine the prevalence of antibodies against Leptospira spp., determine their regional distribution and evaluate the main risk factors for the disease in cattle in the State of Goias. The study was conducted using the 4571 samples taken from 715 properties of 213 of the 246 municipalities in the state of Goiás The samples were analysed by the microagglutination test. To determine the correlation between the prevalence and associated factors, the test of Logistic Regression was used through the software SPSS. The percentage of positive samples for at least one of the16 serovars tested was 62.2%, with major prevalence of co-agglutination (40.24%), followed by serovars wolffi (14.53%), hardjo (12.70 %), grippotyphosa (10.55%) and shermani (6.55%). The prevalence of antibodies against Leptospira spp. proved to be associated to the following factors: stratum of production, with a greater prevalence in stractum one, predominantly for meat production; practice of artificial insemination; cattle breed; presence of sheep and goats; presence of capybaras; purchase of cattle in breeding exhibitions and from other properties; rent of pastures in any time of year; presence of maternity paddock and occurrence of abortions. On the other hand, it was not found correlation with the following factors: type of exploitation and creation charged in the property; kind of milking; presence of horses, pigs, dogs, cats, deer and other wild animals; presence of other animals; purchase of animal at fairs and/or auctions; selling of cattle in exhibitions, in fairs and/or auctions, from traders or from other properties; presence of pastures in common with other properties, veterinary care and vaccination against brucellosis, IBR and BVD. It was concluded that leptospiral infection is endemic in Goias. / O estado de Goiás tem o terceiro maior rebanho bovino do Brasil, mas a produção tem alguns entraves, como doenças do trato reprodutor, que causam abortos e infertilidade, entre elas a leptospirose, importante também na saúde pública. O presente trabalho visou determinar a prevalência de soroaglutininas anti-Leptospira spp., determinar sua distribuição regional e avaliar os principais fatores associados à enfermidade em bovinos do Estado de Goiás. O estudo foi realizado utilizando-se 4571 amostras colhidas em 715 propriedades de 213 dos 246 municípios do Estado de Goiás. As amostras foram analisadas pela técnica de soroaglutinação microscópica. Para a determinação da correlação entre a prevalência e fatores associados, foi utilizado o teste de Regressão Logística, através do software SPSS. A porcentagem de amostras positivas para pelo menos um dos 16 sorovares testados foi de 62,2%, com predominância de co-aglutinações (40,24%), seguidas pelos sorovares wolffi (14,53%), hardjo (12,70%), grippotyphosa (10,55%) e shermani (6,55%). A prevalência de anticorpos anti-Leptospira spp. mostrou-se associada aos seguintes fatores: estrato de produção, sendo mais prevalente no estrato um, de produção predominantemente de bovinos para corte; prática de inseminação artificial; raça dos animais; presença de ovinos e caprinos; presença de capivaras; compra de reprodutores em exposições e de outras propriedades; aluguel de pastos em alguma época do ano; presença de piquete maternidade e ocorrência de abortos. Por outro lado, não foi constatada associação com os seguintes fatores: tipo criação praticado na propriedade; presença de eqüídeos, suínos, cães, gatos, cervídeos e outros animais silvestres; presença de outras espécies animais não enquadradas nas categorias anteriores; compra de reprodutores em feiras e/ou leilões; venda de reprodutores em exposições, feiras e/ou leilões, de comerciantes ou de outras propriedades; presença de pastos em comum com outras propriedades; à assistência veterinária e vacinação contra, brucelose, IBR e BVD. Concluiu-se que a infecção por Leptospira spp. é endêmica no Estado de Goiás.

A leptospirose bovina é uma das principais doenças reprodutivas que interfere diretamente nos índices de produção e produtividade da pecuária brasileira e mundial e por isso necessita de um aprimoramento do diagnóstico laboratorial. O objetivo do presente trabalho foi investigar a conveniência do emprego de estirpes de leptospiras autóctones isoladas no Brasil, na coleção de antígenos da microtécnica de soroaglutinação microscópica (SAM) aplicada a leptospirose. A coleção de antígenos de referência foi constituída pelos sorovares: Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Bataviae, Canicola, Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panama, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Patoc e Sentot. As dez estirpes isoladas no Brasil incluíram os sorovares: Bananal (duas estirpes), Brasiliensis, Canicola (três estirpes), Copenhageni, Guaricura e Pomona (duas estirpes). Foram amostradas por conveniência, 109 propriedades e 9820 bovinos, fêmeas em idade de procriar, distribuídos em 84 municípios, dos Estados de: Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Paraná, Rio Grande do Sul, Santa Catarina e São Paulo. Dos 9820 animais examinados, 5806 (59,12%) foram reagentes na SAM para qualquer sorovar com a coleção de 23 sorovares de referência. Com a coleção de antígenos de referência e dez estirpes autóctones houve 6400 (65,17%) reagentes, a diferença observada foi significante (p= 0,001). O único Estado em que não houve diferença significante no número de animais reatores para qualquer sorovar foi o de Santa Catarina (p=0,522). Das 109 propriedades trabalhadas, 106 foram consideradas positivas com pelo menos um animal reagente na SAM. Não houve diferença no número de propriedades positivas segundo a coleção de antígenos empregada. Os sorovares mais prováveis identificados com a coleção de antígenos de referência foram Hardjo (43,03 %), Shermani (20 %), Wolffi (9,96%), Grippothyphosa (5,42%) e Pomona (4,28%). Com a coleção ampliada por dez estirpes isoladas no Brasil, os sorovares mais prováveis foram Hardjo (31,00%), Guaricura - M4/84 (22,50%), Shermani (15,43%), Wolffi (4,76%), Grippothyphosa (3,71%) e Autumnalis (3,24%). O sorovar Guaricura, estirpe M4/84, isolada de bovinos e búfalos no Estado de São Paulo, foi o primeiro colocado como sorovar mais provável no Estado de Mato Grosso, diferença significante do valor obtido para o sorovar Hardjo (p= 0,0001). No Mato Grosso do Sul a despeito do valor absoluto ter sido superior para o sorovar Guaricura, a diferença observada com o sorovar Hardjo foi destituída de significado estatístico (p=.0,753). Em São Paulo o Guraricura foi o segundo colocado e em Minas Gerais Goiás ocupou a terceira posição. Esta mesma estirpe foi a mais provável em 27 propriedades das 109 trabalhadas (24,77%). A introdução de estirpes autóctones na coleção de antígenos da SAM propiciou a confirmação do diagnóstico de leptospirose em 594 animais (6,00%) classificados como não reagentes pela coleção de referência (p=0,001) / Bovine leptospirosis is one of the main reproductive diseases which interferes economically on the livestock and thus it is needed the amelioration of the laboratory diagnostic procedures. The aim of this work is to investigate the adequacy to use autochthonous strains of leptospires isolated in Brazil, added into the antigen collection applied for the microscopic agglutination test (MAT). The reference antigen collection was constituted by the following serovars: Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Bataviae, Canicola, Whitcombi, Cynopteri, Grippothyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panama, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Patoc and Sentot. The ten strains isolated in Brazil included the serovars: Bananal (two strains), Brasiliensis, Canicola (three strains), Copenhageni, Guaricura and Pomona (two strains). By means of non-probability sampling, 109 farms and 9,820 bovines, females at reproductive age were chosen from the 84 municipalities of the states of Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Paraná, Rio Grande do Sul, Santa Catarina e São Paulo . Among the 9,820 examined animals, 5,806 (59.12%) were reactants to the MAT for any serovar using the 23 reference serovars. Using the collection of reference serovars and the ten autochthonous strains there were 6,400 (65.24%) reactants, and the difference found was significant (p=0.001). The only state with non-significant results in the number of reactants for any serovar was the State of Santa Catarina (p=0.522). Of the 109 properties analyzed, 106 were considered positive at least with one reactant animal by MAT. According to the antigens used, there was no significant difference among the properties. The most probable serovars identified by the collection of reference antigens were Hardjo (43.03%), Shermani (20.00%), Wolfi (9.96%), Grippothyphosa (5.42%) and Pomona (4.28%). With the collection amplified with the ten strains isolated in Brazil, the most probable serovars were Hardjo (31.00%), Guaricura M4/84 (22.50%), Shermani (15.43%), Wolffi (4.76%), Grippothyphosa (3.71%) and Autumnalis (3.24%). The serovar Guaricura, strain M4/84, isolated from bovines and buffaloes in the State of São Paulo, was ranked at the first place as the most probable serovar in the State of Mato Grosso and Mato Grosso do Sul, but the differences observed with the serovar Hardjo were significant only in Mato Grosso (p=0,0001). In São Paulo State, the Guaricura serovar was the second most probable and in the states of Minas Gerais and Goiás the third one. This same strain was the most probable in 27 properties among the 109 examined (24.77%). The addition of autochthonous strains into the MAT antigen collection provided the confirmation of the diagnosis of leptospirosis in 594 animals (6.00%) which have been classified as non-reactants by the reference collection

Realizou-se a pesquisa de anticorpos aglutinantes (AcA) anti-leptospira, através da técnica de soroaglutinação microscópica (SAM) e tentativas de isolamento do agente etiológico em 29 cães com suspeita clínica de leptospirose. Foi também realizada a pesquisa de material genético de Leptospira spp., utilizando-se a técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR) em 24 amostras de urina dos mesmos cães. Com o objetivo de determinar a proteção cruzada entre os sorovares icterohaemorrhagiae e copenhageni, 24 cães adultos foram avaliados antes e após a vacinação com uma dose de vacina contendo os antígenos icterohaemorrhagiae, canicola, grippotyphosa e pomona, utilizando-se o teste de inibição de crescimento in vitro (TIC) dos sorovares canicola, copenhageni e icterohaemorrhagiae. Os títulos de AcA anti-copenhageni foram os mais freqüentemente observados nos cães com suspeita clínica de leptospirose, havendo entretanto, reação cruzada entre diferentes sorovares. Foram isoladas quatro amostras de leptospira, das quais três foram caracterizadas por anticorpos policlonais e por Variable Number Tandem Repeat (VNTR) como sorovar canicola. A quarta amostra isolada reagiu em alto título com o anti-soro policlonal anti-sorovar copenhageni (51.200), não tendo sido testado com o anti-soro anti-icterohaemorrhagiae. Pela técnica de VNTR, essa amostra foi classificada como pertencente ao sorogrupo icterohaemorrhagiae e, finalmente, pelo uso dos anticorpos monoclonais F70 C24, F70 C14-10, F12 C3-11 e F89 C12, para a diferenciação dos representantes do sorogrupo icterohaemorrhagiae, essa amostra isolada apresentou o comportamento imunológico do sorovar copenhageni (cepa padrão L1 130, FIOCRUZ - Bahia). Considerando-se como critério sorológico de confirmação do diagnóstico clínico de leptospirose, títulos maiores ou iguais a 800 em amostra única de soro, ou o aumento ou declínio de quatro vezes os títulos de AcA (duas diluições) em duas amostras pareadas de soro, houve a confirmação do diagnóstico etiológico em 9 de 24 cães (37,5%) pela SAM. Por outro lado, 11 das 24 amostras de urina (45,8%) foram positivas à PCR. A associação das duas técnicas permitiu a confirmação diagnóstica em 15 cães (62,5%). Os títulos de anticorpos neutralizantes (AcN) (TL50) pré-vacinais contra os sorovares icterohaemorrhagiae, canicola e copenhageni foram respectivamente de 1,444±0,278, 0,725±0,317 e 0,583±0,322, e os títulos pós-vacinais foram respectivamente de 1,455±0,287, 1,475±0,270 e 0,510±0,304. Considerando-se o título de AcN maior ou igual a 1 como título protetor contra a infecção leptospírica, no momento pré-vacinal, os cães ainda apresentavam AcN contra o sorovar icterohaemorrhagiae capazes de protegê-los contra a infecção natural, não tendo havido também uma resposta adicional ao estímulo vacinal. Com relação ao sorovar canicola, houve aumento significativo dos títulos de AcN após a imunização (p=0,001) quando comparado ao momento pré-vacinal, tendo sido desenvolvida uma resposta protetora. Embora os animais não tenham sido vacinados contra o sorovar copenhageni, a presença de AcN pré-vacinal e pós-vacinal pode ser justificada pela reatividade cruzada entre ambos, copenhageni e icterohaemorrhagiae, pertencentes ao mesmo sorogrupo; entretanto os títulos pré- e pós-vacinais não foram da mesma magnitude dos produzidos contra o sorovar icterohaemorrhagiae. Portanto, a vacina contendo bacterina do sorovar icterohaemorrhagiae não é capaz de eliciar resposta protetora contra o sorovar heterólogo copenhageni. / A research on agglutinating antibodies (AAc) anti-leptospira has been performed, through microscopic agglutination test (MAT) and attempts of isolation of the etiologic agent in 29 dogs with clinical suspicious of leptospirosis. There was also made a research of Leptospira spp.´s genetic material, using polimerase chain reaction (PCR) in 24 urine samples of the same dogs. With the aim to determine the cross protection between serovars icterohaemorrhagiae and copenhageni, 24 adult dogs were evaluated before and after vaccination with one dose of a vaccine containing icterohaemorrhagiae, canicola, grippotyphosa and pomona antigens, by the in vitro inhibition growth test (GIT) of serovars canicola, icterohaemorrhagiae and copenhageni. The AAc anti-copenhageni titers were the most frequently obseeved in the dogs with clinical suspicious of leptospirosis, existing however, cross reaction among different serovars. There were isolated four samplas of leptospira, of witch three were all characterizated by polyclonal antibodies and Variable Nunber Tandem Repeat (VNTR) as serovar canicola. The fourth isolated sample reacted in high titers to polyclonal antisera anti-copenhageno (51.200), but is was not tested with antisera anti-icterohaemorrhagiae. By VNTR technique, this sample was classified as belonging to the serogroup icterohaemorrhagiae, and finally by the use of monoclonal antibodies F70 C24, F70 C14-10, F12 C3-11 and F89 C12, for differentiation of the representatives of serogroup icterohaemorrhagiae. This isolated sample presented the immunological behavior of serovar copenhageni (standard strain LI 130, FIOCRUZ - Bahia). Considering the sorologic criteria confirmation of clinical diagnosis of leptospirosis, titers higher or equal than 800 in a unique serum sample, or the increase or decrease of four times of AAc titers (two dilutions) in two paired serum samples, there was the conformation of etiologic diagnosis in 9 of the 24 dogs (37,5%) by MAT. However, 11 out of 24 urine samples (45,8%) were positive at PCR. The association of both techniques allowed the diagnostic conformation in 15 dogs (62,5%). The prevaccinal neutralizing antibodies (NAc) titers (TL50) were respectively 1,444±0,278, 0,725±0,317 and 0,583±0,322. And the postvaccinal titers were respectively 1,455±0,287, 1,475±0,270 and 0,510±0,304. Considering the NAc titer higher than 1 as a protective titer against leptospiral infection, at prevaccinal moment the dogs still presented NAc against serovar icterohaemorrhagiae capable to protect them against natural infection, an adictional response to the vaccinal stimulus had not occurred. Concerning serovar canicola, there was a significant increase of NAc titers after immunization (p=0,001) when compared to prevaccinal moment, and a protective response was developed. Although the animals were not vacinated against serovar copenhageni, the presence of prevaccinal and postvaccinal NAc can be explained by cross reactivity between both, copenhageni and icterohaemorrhagiae, belonging to same serogroup; however, the pre- and postvaccinal titers were not of the same magnitude of those produced against serovar icterohaemorrhagiae. Therefore, the vaccine containing bacterins of serovar icterohaemorrhagiae is not capable of eliciting protective response against the heterologous serovar copenhageni.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2016-03-15T12:30:54Z No. of bitstreams: 2 Tese - Juliana Bonifacio de Alcantara - 2015.pdf: 1563501 bytes, checksum: a96b02c76ef8d17bbaa4c2f2bf2838fa (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-03-16T11:22:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Juliana Bonifacio de Alcantara - 2015.pdf: 1563501 bytes, checksum: a96b02c76ef8d17bbaa4c2f2bf2838fa (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-16T11:22:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Juliana Bonifacio de Alcantara - 2015.pdf: 1563501 bytes, checksum: a96b02c76ef8d17bbaa4c2f2bf2838fa (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-08-13 / Salmonella sp. might cause food deseases in humans and it be isolated from the gastrointestinal tract of different animal species, especially birds. In this study, we aimed to point out the main characteristics of non-conventional poultry farm systems at Central and South regions of the State of Goiás and to determine the frequency of Salmonella sp. Isolation in conventional and non-conventional poultry farms, as well as the frequency of positivity for antigen-antibody reaction at non-conventional poultry farms. On paper 1, we studied 190 non-conventional systems of broiler rearing; we collected 3,040 blood and organ samples (heart, liver, crop and cecum) from 760 birds. Rapid Plate Agglutination Test was used for the detection of anti-Salmonella sp. antibodies in blood serum, and conventional bacteriology and biochemistry tests were used for bacterium culture and isolation. Data on the characteristics of the properties were obtained through medical records. The poultry rearing systems were classified as semi-intensive (49.0%) and extensive (42.6%). In these breeding systems, 48.0% were of specific breed free-range chickens and 42.0% of rustic rustic free-range chickens; 74.2% of the farms had commercial purpose. The frequency of properties with chicken seropositive to the anti-Salmonella sp. antigen was 16.3%, and 12.0% of the samples. Salmonella was detected in 4.7% of the properties and the identified serotypes were Anatum, Infantis, Mbandaka, Schwarzengrund and Panama. For Paper 2, we studied 44 flocks of chickens from nine poultry slaughterhouses, three with over 51,000 birds slaughtered/day and six with up to 50,000 birds slaughtered/day. On the slaughter line 1,232 organ samples and feathers were harvested. A total of 21 feather samples and 21 samples of each organ (spleen, crop and cecum) was collected, both of them were analyzed by conventional bacteriology and biochemistry tests. The organ samples were processed in groups of three, in a total of seven samples of each organ. Of the 44 flocks of chickens, 22 were positive for Salmonella. The feathers presented a higher positivity frequency (12.3%). The spleen presented the highest frequently of isolates (8.1%). The frequency of positive samples in both crop and cecum was 3.8%. Among 88 Salmonella isolates, the serovars Schwarzengrund (29.5%), Agona (25.2%), Mbandaka (12.6%), Anantum (8.0%) and Infantis (3.4%) were predominant. In conclusion, the non-conventional designs are characterized as semi-intensive, and use improved lineage of chickens for commercial purposes. Regardless of the levels of contamination, Salmonella sp. is present in chickens from both conventional and non-conventional production systems. The pathogen was identified in greater numbers in chicken organs at conventional farm. In non-conventional breeding samples, Salmonella sp. isolation was low, but the number of seropositive chickens was higher. The serovars identified in samples of both conventional and non-conventional systems were similar, and some of relevance to public health. / Salmonella sp. podem causar toxinfecção alimentar no homem e ser isolada do trato gastrintestinal de diferentes espécies animais, principalmente das aves. Objetivou-se com este estudo caracterizar os sistemas alternativos de criações avícolas nas regiões Central e Sul do Estado de Goiás e determinar a frequência de isolamento de Salmonella sp. em aves de criação alternativa e industrial, assim como a frequência de positividade da reação antígeno-anticorpo em soro de aves de criação alternativa. No artigo 1 estudou-se 190 propriedades de criações alternativas de frangos e em 760 aves colheram sangue e 3.040 amostras de órgãos, sendo coração, fígado, ceco e inglúvio. Realizou-se o teste de Soroaglutinação Rápida em Placa para detecção de anticorpos anti Salmonella sp. em soro sanguíneo e para cultura e isolamento da bactéria ultilizou-se bacteriologia convencional e provas bioquímicas. Os dados sobre as características das propriedades foram obtidos através de ficha de atendimento. As criações avícolas foram classificadas em semi-intensivas 49,0% e 42,6% extensivas. Observou-se que nestas criações as aves criadas são do tipo caipira melhorado 48,0% e 42,0% do tipo caipira rústico, e 74,2% das explorações têm a finalidade de comercialização. A frequência de propriedades com aves sororreagentes ao antígeno anti Salmonella sp. foi de 16,3%, e em amostras de 12,0%. Detectou-se Salmonella em 4,7% das propriedades e os sorovares identificados foram Anatum, Infantis, Mbandaka, Schwarzengrund e Panama. Para o artigo 2 o estudo foi realizado em 44 lotes de frangos de criação industrial de nove abatedouros, três com abate dia acima de 51.000 aves e seis com abate dia de até 50.000 aves dia. Na linha de abate colheram-se 1.232 amostras de órgão e penas. Num lote foram colhidas 21 amostras de penas e 21 amostras de cada órgão, sendo baço, ceco e inglúvio, ambas analisadas por bacteriologia convencional e provas bioquímicas. As amostras de órgãos foram processadas em pool de três, totalizando sete amostras para cada órgão. Dos 44 lotes de frangos, 22 foram positivos para Salmonella. As penas apresentaram maior frequência de amostras positivas (12,3%) e o baço foi o órgão com maior frequência de isolados (8,1%). A frequência de amostras positivas tanto para inglúvio quanto para ceco foi de 3,8%. Dentre os 88 isolados de Salmonella houve predominância do sorovar Schwarzengrund (29,5%), Agona (25,2%), Mbandaka (12,6%), Anantum (8,0%) e Infantis (3,4%). Conclui-se que as criações alternativas se caracterizam como do tipo semi-intensiva, utilizam aves de linhagem caipira melhorado com finalidade comercial. Independente dos níveis de contaminação, salmonella sp. está presente em aves dos sistemas industriais e alternativos de produção. O patógeno foi identificado em maior número em órgãos de frango de criação industrial. Em aves de criações alternativas obteve-se baixa frequência de isolamento do patógeno, mas obteve-se maior número de aves sororreagente. Observa-se que os sorovares identificados tanto em amostras de frango do sistema alternativo como do sistema industrial foram semelhantes, e alguns de relevância em saúde pública.

Realizou-se a pesquisa de anticorpos aglutinantes (AcA) anti-leptospira, através da técnica de soroaglutinação microscópica (SAM) e tentativas de isolamento do agente etiológico em 29 cães com suspeita clínica de leptospirose. Foi também realizada a pesquisa de material genético de Leptospira spp., utilizando-se a técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR) em 24 amostras de urina dos mesmos cães. Com o objetivo de determinar a proteção cruzada entre os sorovares icterohaemorrhagiae e copenhageni, 24 cães adultos foram avaliados antes e após a vacinação com uma dose de vacina contendo os antígenos icterohaemorrhagiae, canicola, grippotyphosa e pomona, utilizando-se o teste de inibição de crescimento in vitro (TIC) dos sorovares canicola, copenhageni e icterohaemorrhagiae. Os títulos de AcA anti-copenhageni foram os mais freqüentemente observados nos cães com suspeita clínica de leptospirose, havendo entretanto, reação cruzada entre diferentes sorovares. Foram isoladas quatro amostras de leptospira, das quais três foram caracterizadas por anticorpos policlonais e por Variable Number Tandem Repeat (VNTR) como sorovar canicola. A quarta amostra isolada reagiu em alto título com o anti-soro policlonal anti-sorovar copenhageni (51.200), não tendo sido testado com o anti-soro anti-icterohaemorrhagiae. Pela técnica de VNTR, essa amostra foi classificada como pertencente ao sorogrupo icterohaemorrhagiae e, finalmente, pelo uso dos anticorpos monoclonais F70 C24, F70 C14-10, F12 C3-11 e F89 C12, para a diferenciação dos representantes do sorogrupo icterohaemorrhagiae, essa amostra isolada apresentou o comportamento imunológico do sorovar copenhageni (cepa padrão L1 130, FIOCRUZ - Bahia). Considerando-se como critério sorológico de confirmação do diagnóstico clínico de leptospirose, títulos maiores ou iguais a 800 em amostra única de soro, ou o aumento ou declínio de quatro vezes os títulos de AcA (duas diluições) em duas amostras pareadas de soro, houve a confirmação do diagnóstico etiológico em 9 de 24 cães (37,5%) pela SAM. Por outro lado, 11 das 24 amostras de urina (45,8%) foram positivas à PCR. A associação das duas técnicas permitiu a confirmação diagnóstica em 15 cães (62,5%). Os títulos de anticorpos neutralizantes (AcN) (TL50) pré-vacinais contra os sorovares icterohaemorrhagiae, canicola e copenhageni foram respectivamente de 1,444±0,278, 0,725±0,317 e 0,583±0,322, e os títulos pós-vacinais foram respectivamente de 1,455±0,287, 1,475±0,270 e 0,510±0,304. Considerando-se o título de AcN maior ou igual a 1 como título protetor contra a infecção leptospírica, no momento pré-vacinal, os cães ainda apresentavam AcN contra o sorovar icterohaemorrhagiae capazes de protegê-los contra a infecção natural, não tendo havido também uma resposta adicional ao estímulo vacinal. Com relação ao sorovar canicola, houve aumento significativo dos títulos de AcN após a imunização (p=0,001) quando comparado ao momento pré-vacinal, tendo sido desenvolvida uma resposta protetora. Embora os animais não tenham sido vacinados contra o sorovar copenhageni, a presença de AcN pré-vacinal e pós-vacinal pode ser justificada pela reatividade cruzada entre ambos, copenhageni e icterohaemorrhagiae, pertencentes ao mesmo sorogrupo; entretanto os títulos pré- e pós-vacinais não foram da mesma magnitude dos produzidos contra o sorovar icterohaemorrhagiae. Portanto, a vacina contendo bacterina do sorovar icterohaemorrhagiae não é capaz de eliciar resposta protetora contra o sorovar heterólogo copenhageni. / A research on agglutinating antibodies (AAc) anti-leptospira has been performed, through microscopic agglutination test (MAT) and attempts of isolation of the etiologic agent in 29 dogs with clinical suspicious of leptospirosis. There was also made a research of Leptospira spp.´s genetic material, using polimerase chain reaction (PCR) in 24 urine samples of the same dogs. With the aim to determine the cross protection between serovars icterohaemorrhagiae and copenhageni, 24 adult dogs were evaluated before and after vaccination with one dose of a vaccine containing icterohaemorrhagiae, canicola, grippotyphosa and pomona antigens, by the in vitro inhibition growth test (GIT) of serovars canicola, icterohaemorrhagiae and copenhageni. The AAc anti-copenhageni titers were the most frequently obseeved in the dogs with clinical suspicious of leptospirosis, existing however, cross reaction among different serovars. There were isolated four samplas of leptospira, of witch three were all characterizated by polyclonal antibodies and Variable Nunber Tandem Repeat (VNTR) as serovar canicola. The fourth isolated sample reacted in high titers to polyclonal antisera anti-copenhageno (51.200), but is was not tested with antisera anti-icterohaemorrhagiae. By VNTR technique, this sample was classified as belonging to the serogroup icterohaemorrhagiae, and finally by the use of monoclonal antibodies F70 C24, F70 C14-10, F12 C3-11 and F89 C12, for differentiation of the representatives of serogroup icterohaemorrhagiae. This isolated sample presented the immunological behavior of serovar copenhageni (standard strain LI 130, FIOCRUZ - Bahia). Considering the sorologic criteria confirmation of clinical diagnosis of leptospirosis, titers higher or equal than 800 in a unique serum sample, or the increase or decrease of four times of AAc titers (two dilutions) in two paired serum samples, there was the conformation of etiologic diagnosis in 9 of the 24 dogs (37,5%) by MAT. However, 11 out of 24 urine samples (45,8%) were positive at PCR. The association of both techniques allowed the diagnostic conformation in 15 dogs (62,5%). The prevaccinal neutralizing antibodies (NAc) titers (TL50) were respectively 1,444±0,278, 0,725±0,317 and 0,583±0,322. And the postvaccinal titers were respectively 1,455±0,287, 1,475±0,270 and 0,510±0,304. Considering the NAc titer higher than 1 as a protective titer against leptospiral infection, at prevaccinal moment the dogs still presented NAc against serovar icterohaemorrhagiae capable to protect them against natural infection, an adictional response to the vaccinal stimulus had not occurred. Concerning serovar canicola, there was a significant increase of NAc titers after immunization (p=0,001) when compared to prevaccinal moment, and a protective response was developed. Although the animals were not vacinated against serovar copenhageni, the presence of prevaccinal and postvaccinal NAc can be explained by cross reactivity between both, copenhageni and icterohaemorrhagiae, belonging to same serogroup; however, the pre- and postvaccinal titers were not of the same magnitude of those produced against serovar icterohaemorrhagiae. Therefore, the vaccine containing bacterins of serovar icterohaemorrhagiae is not capable of eliciting protective response against the heterologous serovar copenhageni.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Leptospirosis is a zoonosis of global public health importance and can affect all groups of vertebrates, including reptiles. These animals can play a role in the epidemiological cycle of the disease spreading and keeping the causative agent in the environment. Leptospirosis is little known in snakes and this study was designed to cover the gaps in the occurrence of the disease in these animals. The occurrence of anti-Leptospira spp. antibodies in rattlesnakes Crotalus durissus collilineatus kept in captivity was evaluated and the most common serotypes in these animals were determined using the Microscopic Agglutination Test (MAT). Changes in concentrations of plasma biochemical constituents in positive snakes were also evaluated, depending on the antibody titre presented at MAT. Almost 90% of the rattlesnakes used in this study were positive to the serological test and the most common serotypes were Javanica, Andamana and Patoc. The most common titres were 25 and 50, but there were titres as high as 1600. Captive snakes can act as important sources of leptospira infection for humans and so it is critical that the disease is recognized and controlled. Although apparently healthy, alterations in biochemical parameters indicated inflammation and infection in animals with low antibody titres. Rattlesnakes with high titres showed signs of severe kidney damage and liver disease, which are common in leptospirosis. The biochemical assessment of positive MAT reptiles may be important to diagnose the infection in these animals. / A leptospirose é uma zoonose de importância em saúde pública global e pode acometer praticamente todos os grupos de vertebrados, inclusive répteis. Esses animais podem atuar no ciclo epidemiológico da doença mantendo e disseminando o agente causador no ambiente. A leptospirose é pouco conhecida em serpentes e, por isso, objetivou-se estudar a ocorrência da doença nesses animais. Para isso, foi avaliada a ocorrência de anticorpos anti-Leptospira spp. em Crotalus durissus collilineatus mantidas em cativeiro e as sorovariedades mais frequentes nesses animais, utilizando o teste de Soroaglutinação Microscópica (SAM). Também foram avaliadas as alterações nas concentrações de constituintes bioquímicos plasmáticos nas serpentes reagentes, relacionadas com o título de anticorpos apresentado na SAM. Quase 90% das cascavéis utilizadas nesse estudo foram reagentes no teste sorológico com triagem de 1:25 e os sorovares mais frequentes foram Javanica, Andamana e Patoc. Os títulos mais frequentes foram 25 e 50, mas houve títulos de até 1600. Apesar de aparentemente saudáveis, a avaliação dos parâmetros bioquímicos indicou inflamação e infecção mesmo nos animais com títulos de anticorpos considerados baixos para mamíferos (≤50). As cascavéis com títulos altos apresentaram quadros mais graves que aquelas com títulos menores, sugestivos de lesão renal grave e indícios de doença hepática, que são lesões características da leptospirose. Serpentes de cativeiro podem atuar como fontes de infecção de leptospiras para humanos e outros animais e por isso, é fundamental que a doença seja conhecida e controlada em criadouros. A avaliação bioquímica de répteis reagentes no teste sorológico pode ser importante para o diagnóstico da infecção por Leptospira spp. nesses animais. / Mestre em Ciências Veterinárias

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-01-16T19:06:55Z No. of bitstreams: 2 Tese - Adriana da Silva Santos - 2014.pdf: 3299451 bytes, checksum: 52a612ede01e4713d7dd458d61176fe1 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-01-16T19:07:03Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Adriana da Silva Santos - 2014.pdf: 3299451 bytes, checksum: 52a612ede01e4713d7dd458d61176fe1 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-16T19:07:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Adriana da Silva Santos - 2014.pdf: 3299451 bytes, checksum: 52a612ede01e4713d7dd458d61176fe1 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-05-30 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Swine leptospirosis is a worldwide anthropozoonosis caused by spirochetes of the species Leptospira interrogans, predominantly by serovars Pomona, Icterohaemorrhagiae, Taravossi, Canicola Grippotyphosa and Bratislava. Experimental infection were performed in 18 sows at 40 days of age with L. interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae serovar Conpenhageni strain Fiocruz L1-130, and serogroup Pomona serovar Kennewicki strain Pomona From divided in groups: GI (control), GII (inoculated with serogroup Pomona) and GIII (inoculated with serogroup Icterohaemorrhagiae). Clinical course of the disease, results of serological tests and detection of bacteria by polymerase chain reaction (PCR) and bacterial isolation during the experiment, were compared between groups. Additionally, the main histological changes observed in brain, liver, lymph nodes, lung and kidney of 12 animals experimentally infected and seropositive for leptospirosis were described. In lesions suggestive of the disease the technique of silver impregnation of Warthin-Starry, was used as direct detection method. During the experimental period, all samples of the GI (control) were negative in the microscopic agglutination test, with the GII positivity exclusive to serogroup Pomona in six animals from 6 dpi, and in GIII, only to serogroup Icterohaemorrhagiae in five animals from 3 dpi. At necropsy the only change was pale kidney in 50% of GI, 83.33% of GII and 83.33% of GIII (p> 0.05). Only in seropositive pigs was found lesions suggestive of leptospirosis as focal microgliosis in the brain (8.33%), lymphoid hyperplasia in lymph nodes of the mediastinum a nd mesentery (41.66%), mononuclear interstitial pneumonia (58.33 %), multifocal mononuclear hepatitis, further acute tubular nephrosis (100%) and interstitial nephritis (91.66%). There was a strong association between serological condition and lesions of mononuclear hepatitis (p = 0.0128), mononuclear interstitial nephritis (p = 0.0004), tubular nephrosis (p <0.0001) and mononuclear interstitial pneumonia (p = 0, 0377). / A leptospirose suína é uma antropozoonose difundida mundialmente e causada por espiroquetas da espécie Leptospira interrogans, principalmente pelos sorovares Pomona, Icterohaemorrhagiae, Taravossi, Canicola, Grippotyphosa e Bratislava. Neste trabalho descreve-se a infecção experimental por L. interrogans sorogrupo Icterohaemorrhagiae sorovar Conpenhageni estirpe Fiocruz L1 -130, e sorogrupo Pomona sorovar Kennewicki estirpe Pomona From, em 18 fêmeas suínas com 40 dias de idade divididas em três grupos: GI (controle), GII (inoculados com sorogrupo Pomona) e GIII (inoculados com sorogrupo Icterohaemorrhagiae). Compararam -se entre os grupos, o curso clínico da doença, os resultados dos exames sorológicos e de detecção da bactéria durante o período experimental pelas técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR) e isolamento bacteriano. Foram ainda descritas as principais alterações histológicas observadas em cérebro, fígado, linfonodos, pulmão e rins de 12 animais experimentalmente infectados e soropositivos para leptospirose. Em lesões sugestivas da doença utilizou-se a técnica de impregnação pela prata de Warthin-Starry, como método de detecção direta. Durante o período experimental foram negativas na soroaglutinação microscópica todas as amostras do GI (controle), havendo no GII positividade exclusiva ao sorogrupo Pomona nos seis animais a partir do 6º dia pós-infecção (dpi), e no GIII, apenas ao sorogrupo Icterohaemorrhagiae, em cinco animais a partir do 3º dpi. Na necropsia a única alteração observada foi rim pálido em 50% do G I, 83,33% do GII e em 83,33% GIII (p>0,05). Somente nos suínos soropositivos constataram-se lesões sugestivas de leptospirose, como microgliose mononuclear focal no cérebro (8,33%), hiperplasia linfoide em linfonodos do mediastino e mesentério (41,66%), pneumonia intersticial mononuclear multifocal (58,33%), hepatite mononuclear focal (41,66%), além de nefrose tubular aguda (100%) e nefrite intersticial (91,66%). Houve forte associação entre a condição sorológica e as lesões de hepatite mononuclear (p=0,0128), nefrite intersticial mononuclear (p=0,0004), nefrose tubular (p<0,0001) e pneumonia intersticial mononuclear (p=0,0377).