Nenhuma / A tomografia computadorizada (TC) do tórax constitui um dos principais métodos de estudo das patologias torácicas, fornecendo análise morfológica e funcional e permitindo desta forma uma abordagem terapêutica mais específica das alterações condicionadas pelas doenças. Entretanto, deve-se considerar que por envolver radiação ionizante no seu processo, este procedimento apresenta os riscos inerentes a esta e sua utilização deve resultar de um balanço preciso entre o custo e o benefício propiciado pelo procedimento. A proteção de pacientes submetidos a exames radiológicos, de uma maneira geral, é determinada pelos princípios da justificação e otimização. Desta forma, torna-se importante hoje em dia, o conhecimento dos níveis de radiação nas exposições envolvidos durante um procedimento tomográfico. Estes níveis foram observados através da estimativa das grandezas específicas para tomografia computadorizada, o Índice de Dose para Tomografia Computadorizada no ar (CTDI100,ar ) e o Índice de Dose ponderada para Tomografia Computadorizada (CTDIw) , e em seguida dos níveis de dose absorvida em órgãos durante um estudo tomográfico computadorizado do tórax realizado com varredura única. Os descritores de dose específicos para a tomografia foram estimados através da irradiação, em tomógrafo multidetector de quatro cortes, de uma câmara de ionização tipo lápis de forma livre no ar para a determinação do CTDI100,ar e dentro do simulador de tronco para a determinação do CTDIw. Os valores obtidos foram comparados com os valores fornecidos pelo fabricante e também com os valores obtidos por análise computacional. Eles foram utilizados, neste estudo, no cálculo da Dose Efetiva e para comparação com o nível de referência de dose estabelecido pela comunidade européia. Utilizando-se o programa de simulação computacional do grupo IMPACT, foram determinadas as grandezas de radioproteção relevantes para o estudo que são os valores de dose absorvida em órgãos e a dose efetiva referente ao procedimento. O nível do Produto dose comprimento (DLP), utilizando-se o CTDI100, ar previamente estabelecido, foi também obtido e comparado com o nível de referência de dose estabelecido pela comunidade européia. Os valores de dose absorvida em órgãos foram ainda utilizados para a estimativa do risco relacionado ao procedimento de acordo com as sugestões de cálculo da Comissão Internacional de Proteção Radiológica. Desta forma observamos que os níveis de exposição aos raios X proporcionados pela técnica com multidetetores de quatro fileiras e varredura única, permanecem dentro dos níveis conhecidos para os estudos envolvendo a tecnologia convencional e helicoidal, apesar do aumento significativo de informações proporcionadas. Os valores de CTDIw e DLP obtidos neste estudo encontram-se dentro dos níveis de referência diagnóstica sugeridos como padrões de boa prática pela comunidade européia. Os valores de doses em órgãos obtidos com esta técnica foi semelhante ao observado na literatura em relação ao estudo tomográfico do tórax. Neste estudo, considerando-se a grande incerteza associada a estes cálculos, podemos observar um risco maior para o pulmão, mama, medula óssea e esôfago. / The computerized tomography (CT) is an important method for studying chest pathologies to provide its morphological and functional analysis and to allow a specific therapeutic approach of signs or symptoms resulting from diseases. Since CT uses ionizing radiation, it should be considered that a precise balance between risks and benefits must be achieved in order to justify the adoption of such technique. Radiation protection of patients undergoing radiological exams is established based on the justification and optimization principles. Nowadays, it is important to know the dose radiation levels to which a patient is exposed during a tomographic procedure. Those are given by the estimation of specific dosimetric quantities called the computed tomography dose index in air, CTDI100,air and the weighted computed tomography dose index CTDIw , and the organ absorbed doses that are given to the patient during a chest CT with a single scanning. In this work, the CTDI100,air and the CTDIw were determined through measurements with a pencil ionization chamber free-in-air and in a trunk phantom.Results werecompared to values provided by the manufacturer and those that were calculated by computational methods. The protection quantities organ absorbed dose and effective dose, which are relevant to this work, were determined with a computational program from the IMPACT group. The dose length product DLP level was calculated from the CTDI100, air and compared to the reference dose level established by the European Community. Risk values were estimated based on the organ absorbed doses according to the procedure recommended by the International Commission on Radiological Protection. Although the significant increase on diagnostic information, results showed that x-ray dose levels from four-array multidetector CT system in a single-scanning were not so different to the published one from studies with the conventional and helical techniques. CTDIw and DLP values got in this work agreed with the diagnostic dose reference levels recommended by the European Community as standard for good practices. Organ doses provided by the studied chest tomography technique also agreed with those values published elsewhere. Although the dose results showed a large uncertainty in their values, it was observed that radiation risks were large in lungs, breast, bone marrow and esophagus.

Nenhuma / Em exames que fazem uso da radiação ionizante, a dose a que o paciente é exposto deve ser mantida tão baixa quanto possível, de acordo com os princípios da proteção radiológica, porém sem comprometer a qualidade da imagem, que vai possibilitar o seu uso como ferramenta útil para o diagnóstico. A obtenção de imagens com definição e contraste satisfatórios pode ser alcançada com uma adequação do feixe de radiação e também com a escolha correta do sistema receptor e do seu processamento adequado. A mama é composta por estruturas com densidades muito próximas o que aumenta a dificuldade na obtenção de contraste desejado na imagem formada pelos raios X. Esse fator associado à qualidade da radiação, à compressão da mama, ao uso de grade, ao sistema filme-écran, e ao processamento dos filmes são fatores que influenciam no contraste da imagem mamográfica. Neste trabalho, a proposta foi levantar a situação dos serviços de mamografia do estado de Minas Gerais, através de uma amostra desses serviços e estabelecer procedimentos de garantia de qualidade e controle de risco, sob o ponto de vista de proteção radiológica e qualidade dos exames. Para realização do estudo foram coletados dados e realizados testes em 122 (cento e vinte e dois) serviços. Nestes serviços foram avaliados 134 (cento e trinta e quatro) mamógrafos convencionais, entre novembro de 2003 e dezembro de 2005, o que corresponde a aproximadamente 40% do total esperado de 330 equipamentos instalados e em uso no Estado de Minas Gerais. O trabalho foi conduzido enfocando o desempenho dos mamógrafos e processadoras, a qualidade da imagem, utilizando um simulador radiográfico que contém objetos que simulam estruturas da mama, e também um cartão dosimétrico com dosímetros termoluminescentes de Fluoreto de Lítio (TLD LiF-100) para medir a dose de entrada na superfície do simulador. Os resultados mostram que em 73 (54,5%) equipamentos não se obteve a pontuação mínima desejada para a qualidade da imagem. Dentre os resultados destaca-se o desempenho insatisfatório em 83 serviços (67%), no que ser refere ao sistema de processamento, tendo sido constatada significativa influência na qualidade final da imagem relacionado a este item. Na distribuição dos valores de kerma de entrada na superfície do simulador foram encontrados valores entre 2,41 a 16,05 mGy, com média de 7,8 mGy. Somente 17 serviços excederam o nível de referência adotado no país, de 10 mGy. Pode-se concluir que embora os níveis de radiação a que as pacientes estão expostas são aceitáveis na maioria dos serviços de mamografia, esforços devem ser feitos para garantir a qualidade da imagem. / In medical exposures, the radiological protection principles establish that doses provided to patients should be maintained as low as possible, but without reducing the quality of the image that is to be used as the main tool for diagnostic purpose. Images with definition and satisfactory contrast can be obtained under adequate geometry of the radiation beam and also with the correct choice of the receiving system and adequate processing. The breast is made of low density tissues that are formed by structures with very close densities; this increases the difficulty to get the contrast that is wanted for the image produced by the x-ray. Other factors that can influence the contrast of the mammographic image are the quality of the radiation, compression of the breast, use of gratings, film-ecran system, and the film processing. This work intended to get an overview of the mammographic services in the Minas Gerais state concerned the image quality and radiation protection, which was based on a representative sample of services. Data were collected and checks were performed in 122 services, where 134 mammography units were evaluated from November 2003 to December 2005. This amount corresponds to 40% of the total number of mammography units that are installed and used in Minas Gerais. A PMMA phantom with objects to simulate breast structures and LiF-100 thermoluminescent detectors to measure the entrance surface kerma were used to evaluate both the performance of the mammography and the processing units and the image quality. The results showed that 73 (54.5%) mammography units did not achieve the minimum acceptable performance as far the image quality. Besides, 83 (67%) services showed inadequate performance in their processing systems, which had significant influence on the image quality. Concerning the kerma values on the phantom entrance surface, they varied from 2.41 to 16.05 mGy with a mean value of 7.8 mGy; only 17 services exceeded the nationally adopted diagnostic reference level of 10 mGy. One may concluded that although the radiation levels given to the patient are acceptable in most mammographic services, efforts should be done to improve the quality of the provided image.

A Subtração Radiográfica Digital (SRD) vem sendo vastamente utilizada para inúmeros fins em Odontologia. Uma de suas aplicações é a avaliação do resultado radiográfico de procedimentos regenerativos. Este estudo avaliou radiograficamente defeitos infra-ósseos de 2 ou 3 paredes tratados com a proteína derivada da matriz do esmalte (PME) e/ou o retalho de espessura total reposto (RET). Foram selecionados 11 pacientes (3 ? / 8 ?) com periodontite crônica apresentando 2 ou mais defeitos. Antes da cirurgia e após 1 ano foram coletados os dados clínicos e radiográficos. Para a padronização radiográfica foi utilizado um posicionador modificado. Revelou-se os filmes numa processadora automática. As películas foram digitalizadas (500dpi/8bits) em um escaner (SprintScan 35 Plus - Polaroid). Através do programa AxioVision v 3.0 (Carl Zeiss) mediu-se as distâncias da JEC à crista óssea (CO), ao fundo do defeito (FD). Para criar uma escala milimétrica e calibrar a mensuração foi utilizada uma tela quadriculada (2 x 2 mm). As porcentagens de mudança óssea (MO) também foram calculadas. Os resultados mostraram perda da CO de 1,8 mm para PME (MO = -20,93%), revelando diferença estatística neste grupo (p<0,02), e de 0,9 mm para RET (MO = -10,71%), sem diferença entre os grupos. Observou-se maior preenchimento do FD em RET (1,1 mm; MO = 8,14%) do que em PME (-0,6 mm; MO = -3,92%), com diferença entre os grupos (p<0,01). Dentro das limitações deste estudo, conclui-se que através da análise por SRD linear o tratamento convencional de defeitos infra-ósseos humanos promoveu melhores resultados quando comparado à aplicação da PME. / Digital Subtraction Radiographic (DSR) has been widely used for several purposes in Dentistry. Among them is the radiographic evaluation of the results of regenerative procedures. This study evaluated radiographically 2 and 3-wall infra-bony defects which were treated with matrix derivative enamel protein (PME) and/or repositioned flap (RET). Eleven patients (3 ? / 8 ?) with chronic periodontitis were selected, presenting 2 or more defects. Clinical and radiographic data were collected before surgery. A modified filmholder was used to take standardized radiographs. X-ray were developed using an automatic machine. The films were digitized (500dpi/8bits) with the scanner SprintScan 35 Plus (Polaroid). The software AxioVision v 3.0 (Carl Zeiss) was used to measure the distances from the JEC to the alveolar crest (CO), to the bottom of the defect (FD). A grid (2 x 2 mm) was used to establish a milimetric scale after calibration. The amount of bone changes (MO) was also calculated. Results have shown loss of bone at the CO of 1,8 mm (PME) (MO = -20,93%), showing statistic significance (p<0,02), and of 0,9 mm to RET group (MO = -10,71%). No significant differences could be observed when groups were compared. A better fill was observed in the RET group (1,1 mm; MO = 8,14%) than in the PME group (-0,6 mm; MO = -3,92%), showing statistical significance between groups (p<0,01). In conclusion, radiographic analysis has shown that conventional treatment of human intra-bony defects promotes better results when compared to the application of PME.

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2017-07-04T12:59:07Z No. of bitstreams: 1 julianacristinapdasilva_dissert.pdf: 6143362 bytes, checksum: 40d299f2c23885568637781644986d64 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-04T12:59:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 julianacristinapdasilva_dissert.pdf: 6143362 bytes, checksum: 40d299f2c23885568637781644986d64 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / Introduction: Urinary Incontinence (UI) is a common symptom at some stages of a woman's life. It has an important negative impact on women's daily activities and can adversely affect their quality of life. Objective: To investigate the profile of women with urinary incontinence (UI) seen at an urological treatment center, according to the type of UI present. Methods: This descriptive, exploratory, quantitative study was conducted with 150 women with UI who had undergone urodynamic study at an urological treatment center in Sao Jose do Rio Preto, SP, Brazil. The research methodology followed for this research was based on the collection of primary and secondary data, which were analyzed using univariate and multivariate analysis of variance. Results: Most women were white (119-79.33%), overweight (68-45.33%), homemakers (58-38.7%), and menopausal (80-53.3%); drank coffee (124-82.67%); did not perform any physical activity (98-65.33%); and had urethral hypermobility (UH) ((91-60.67%). One hundred and forty-two women had gone through childbirth. There were 331 deliveries, of which 54.98% were cesarean sections. We found a statistically significant association between weight change and type of UI (p = 0.024); menopause (p=0.001) and intrinsic sphincter deficiency (ISD) and detrusor instability (DI); gynecological surgery and ISD and DI (p = 0.014); hysterectomy and all types of UI (p = 0.040); and performance of physical activity and mixed UI (p = 0.014). Conclusion: The obtained data suggest that the prevention and control of UI include measures such as weight loss (decrease in BMI), exercise, pelvic floor-strengthening exercises and improved care at primary healthcare level. This subject offers a fertile field for investigation regarding diagnosis, treatment and new inter-and multiprofessional care delivery models that improve the quality of life of women with UI. / Introdução: A Incontinência Urinária (IU) é um sintoma comum em algumas fases da vida da mulher, com impacto negativo em suas atividades diárias e também comprometendo sua qualidade de vida. Objetivo: Analisar o perfil de mulheres com incontinência urinária (IU) atendidas em um serviço de urodinâmica, segundo o tipo de IU que apresentam. Método Estudo descritivo, exploratório, quantitativo, realizado por meio de coleta de dados primários e secundários de 150 mulheres que realizaram elucidação da IU por meio de estudo urodinâmico em Centro de Diagnóstico e Tratamento Urológico da cidade de São José do Rio Preto SP. Os dados foram analisados por meio de técnicas de estatística uni e multivariada. Resultados: Entre as mulheres avaliadas, a maioria era: branca (119 – 79,33%), com sobrepeso (68 – 45,33%), do lar (58 – 38,67%), na menopausa (80 – 53,33%), ingeriam café (124 – 82,67%), não faziam atividade física (98 – 65,33%) e apresentavam hipermobilidade uretral (HU) (91 – 60,67%), Encontrou-se associação estatística significante entre mudança de peso e HU(p=0,024), menopausa e deficiência esfincteriana intrínseca (DEI) e instabilidade detrusora (ID) (P=0,001); ocorrência de cirurgia ginecológica com DEI e ID (p=0,014), histerectomia e todos os tipos de IU (p=0,040) e realização de atividade física com IU mista (p=0,014). Os dados sobre antecedentes obstétricos mostraram que 142 mulheres passaram pelo processo da parturição, resultando em 331 partos, a maioria cesarianas (54,98%), Conclusão: O perfil analisado sugere que as medidas de prevenção e controle da IU urinária seria uma diminuição do IMC, a prática de atividade física, o desenvolvimento de exercícios para o fortalecimento do assoalho pélvico e maior cuidado em nível de atenção básica de saúde. Também que é um amplo campo de investigação nos aspectos de diagnóstico, terapêutica e outras diretrizes assistenciais multi e interprofissionais, que contribuam para a melhoria da qualidade de vida das mulheres afetadas.

Introdução: A AIDS (Síndrome da Imunodeficiência Adquirida) é caracterizada por uma disfunção grave no sistema imunológico causada por uma infecção por HIV (Human Immunodeficiency Virus). A quantificação da viremia (carga viral) é uma ferramenta muito útil no monitoramento dos pacientes infectados pelo HIV, sendo um marcador de progressão da doença e eficácia do tratamento. A estimativa incorreta da carga viral pode levar à decisão terapêutica equivocada, portanto métodos acurados de quantificação se fazem necessários. Diversas técnicas comerciais estão disponíveis para a quantificação da carga viral do HIV-1: a maioria destas se baseiam na detecção de ácidos nucléicos e outras na detecção de enzimas e antígenos. O grau de automação varia nas diferentes técnicas assim como os procedimentos de isolamento, amplificação e detecção. A correlação e a concordância entre estas técnicas têm sido estudadas e há relatos de discordância entre os valores de carga viral produzidos por diferentes métodos. O conhecimento sobre o efeito das variações entre as técnicas se faz necessário para assegurar a interpretação adequada dos resultados. A interpretação dos resultados correta é particularmente importante quando estes estão próximos a pontos de corte utilizados para definições de rebote viral e falha virológica. Objetivos: O objetivo deste estudo é comparar as técnicas de PCR (Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) e b-DNA (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0) para quantificação do HIV-1. Métodos: 1000 amostras recebidas no HIV/GUM Research Laboratory do Chelsea and Westminster Hospital para quantificação da carga viral do HIV-1 durante os meses de Dezembro de 2009 e Janeiro de 2010 foram testadas pelos métodos de PCR (Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) e b-DNA (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0). Resultados: Uma superquantificação sistemática foi observada nos resultados testados por PCR. Esta superquantificação ficou evidente nos resultados entre 50 e 250 cópias. Uma concordância elevada foi observada na análise dos pontos de corte de 500 e 1000 copias/mL. Uma correlação linear forte foi observada entre estas técnicas na análise das amostras que obtiveram resultados dentro do limite comum de detecção de ambas as técnicas, porém o nível de concordância foi insatisfatório. Conclusão: A superquantificação observada nos resultados obtidos pelo Cobas AmpliPrep TaqMan HIV- 1 v2.0 em relação ao bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 é provavelmente o resultado de uma sensibilidade aumentada desta técnica. Nós recomendamos cautela quando resultados de duas metodologias diferentes são comparados, especialmente quando se comparam metodologias convencionais com aquelas baseadas em PCR em tempo real. / Introduction: AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome) is characterised by a severe immune dysfunction caused by the HIV (Human Immunodeficiency Virus). The HIV viral load quantification is an essential tool to monitor HIV-infected patients. The HIV quantification is a disease progression marker and it is a key indicator in treatment efficacy. Inaccurate viral RNA values may subsequently lead to inappropriate treatment decisions hence accurate quantification methods are necessary. Several different methodologies are available to quantify the HIV viral load: a number of them are based on nucleic acid detection and others in detection of enzymes and antigens. Automation is also variable among these methods in addition to differences in isolation, amplification and detection. Several studies have been carried out to evaluate their correlation and agreement and some have evidenced discordant viral load values assessed by different assays. The knowledge about these differences should be taken in to account when analysing viral load results, particularly when low-level viraemia is concerned or those close to endpoints employed for definition of virological failure. Objectives: In this study, two methods to quantify viral load are evaluated: one is based on real-time PCR (AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) and the other is based on branched-DNA technology (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0). Methods: 1000 plasma samples received at the HIV/GUM Research Laboratory within Chelsea and Westminster Hospital for HIV-1 viral load quantification between December 2009 and January 2010 were tested by both Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 and Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 methods. Results: Results obtained show that Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 PCR systematically overquantifies the viral loads results when compared to bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0. Conclusion: The overquantification by Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 over bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 is likely to be a result of its increased sensitivity. We recommend caution when comparing results from different methodologies, especially when a conventional assay and a real-time PCR assay are concerned.

Microrganismos do gênero Salmonella são eliminados em maior número por ocasião do abate, em função do estresse a que são submetidos os animais, pelo transporte da granja ao frigorífico e pelo reagrupamento anterior ao abate. Por este motivo, o estudo da presença de Salmonella spp. na linha de abate de suínos tem fundamental importância para o entendimento da epidemiologia deste agente e posterior melhoria no controle higiênico-sanitário, com conseqüente oferecimento ao consumidor de um produto de melhor qualidade. O presente trabalho teve como objetivo comparar o método tradicional de isolamento com o teste imunoenzimático (Assurance Salmonella EIA Gold - BioControl) a partir de amostras de fezes, linfonodos mesentéricos e carcaças de suínos abatidos no estado de São Paulo. Foram analisadas 92 amostras de fezes, 92 de linfonodos mesentéricos e 91 de suabes de carcaça. O teste imunoenzimático apresentou positividade de: fezes - 18,47% (17), linfonodos mesentéricos - 17,39% (16) e &quot;swabs&quot; de carcaça - 12,08% (11). Ao isolamento, foram observadas porcentagens de positivos em: fezes - 13,04% (12), linfonodos mesentéricos - 10,86% (10) e &quot;swabs&quot; de carcaça - 2,19% (2). A concordância entre os resultados obtidos através dos dois métodos foi fraca. O teste imunoenzimático se mostrou mais eficiente na pesquisa direta do agente quando comparado ao isolamento bacteriano, o que pode ser justificado pela alta sensibilidade das técnicas imunoenzimáticas e pela dependência da viabilidade das estirpes bacterianas para que as mesmas sejam isoladas em meios de cultura. A necessidade de métodos mais rápidos e menos laboriosos de detecção tem levado a avanços significativos no desenvolvimento de pesquisas e comercialização de kits de diagnóstico baseados em técnicas sorológicas, imunoabsorbância enzimática e hibridização de ácidos nucléicos. / Microorganisms of the Salmonella genera are eliminated in major number by occasion of the slaughter, in function of the stress that the animals are submitted for the transport of the farm to the slaughterhouse and for the reassemblage previous to the slaughter. For this reason, the study of the presence of Salmonella spp. in swine line of slaughter has fundamental importance for the understanding of epidemiology of this agent and subsequent improvement in the hygienic-sanitarium control, with consequent offer to the consumer of a product with better quality. The present study had as objective to compare the traditional method for isolation with imunoenzymatic assay (Assurance Salmonella EIA Gold - BioControl) from faeces samples, mesenteric lynfh nods and carcasses of slaughtered swine in São Paulo State. Ninety two faeces samples, 92 mesenteric lynfh nods and 91 carcass swabs were analyzed. The imunoenzymatic assay presented positivity of: faeces - 18,47% (17/92), mesenterics lynfh nods - 17,39% (16/92) and &quot;swabs&quot; of carcass -12,08% (11/91). The isolation showed: faeces - 13,04% (12/92) of positives samples, mesenteric lynfh nods - 10,86% (10/92) of positive samples and &quot;swabs&quot; of carcass - 2,19% (2/91) of positive samples. The agreement among the results obtained by the two methods was weak. The imunoenzymatic assay was shown more efficient when compared to the bacterial isolation, what can be justified for the high sensibility of imunoenzymatics techniques and the dependence of the bacterial sample viability for the isolation. The need of faster and less laborious methods of detection has been taking to significant progresses in the development of researches and commercialization of diagnosis kits based on sorological techniques, enzymatic immunoabsorbent and nucleic acid hibridization.

Made available in DSpace on 2015-06-17T12:06:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 339.pdf: 1673760 bytes, checksum: b6988680884c38393a1141615afb2832 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / A leishmaniose visceral ocorre em países dos cinco continentes e quando não tratada pode levar a óbito. Para se evitar esse desfecho, são essenciais o diagnóstico precoce e tratamento adequado. Com o objetivo de contribuir na pesquisa de novos diagnósticos para leishmaniose visceral, esse trabalho propôs desenvolver sistemas baseados em Nested-PCR convencional e em único tubo para o diagnóstico de leishmaniose visceral. A partir de uma revisão na literatura em busca de alvos moleculares utilizados no diagnóstico dessa parasitose, foram selecionados os alvos subunidade menor do RNA ribossômico (ssu rRNA) e espaçador transcrito interno 1 (ITS-1), que compõem o DNA do agente etiológico Leishmania infantum, para o desenvolvimento das nested-PCR. Foi também escolhido o alvo kDNA, o mais aplicado nas abordagens de PCR, para comparações com os sistemas desenvolvidos. Após otimizar todas as PCR com DNA genômico de L. infantum, esses sistemas foram avaliados em amostras de sangue, soro e urina de indivíduos com suspeita de leishmaniose visceral dos hospitais de referência da cidade do Recife - PE. Para utilização da urina, foram avaliados quatro protocolos de extração de DNA e identificou-se que a extração por fenol-clorofórmio, com modificações, foi a de melhor desempenho. Na avaliação com amostras biológicas, as PCR simples e nested-PCR com os alvos ssu rRNA e ITS-1 não tiveram boa sensibilidade ao se usar sangue, e não foram capaz de amplificar DNA do parasito em soro e urina. Esses sistemas desenvolvidos não podem ser usados para o diagnóstico da leishmaniose visceral. No entanto, a kDNAPCR apresentou bons resultados quando avaliada com urina. Mais estudos devem ser feitos para avalia-la como um diagnóstico seguro para esse tipo de amostra biológica. Esse trabalho representa um ponto de início para posteriores estudos que objetivem o aprimoramento e validação da nested-PCR único tubo para o diagnóstico da leishmaniose visceral

Made available in DSpace on 2015-11-11T12:04:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 23.pdf: 6208595 bytes, checksum: 560226dd418c8b7cdf79aa7955f3ab5c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / A detecção precoce das leishmanioses e a rápida instituição do tratamento são de suma importância para os indivíduos e comunidades afetadas, visto que pacientes contribuem para a manutenção do ciclo da doença. Diante das limitações apresentadas pelos métodos tradicionais de diagnóstico, a PCR tem se apresentado como ferramenta promissora para a detecção dos casos. No entanto, perdas de DNA durante o processo de purificação podem afetar mais significativamente o material genético dos parasitos, gerando resultados falso-negativos. Este estudo teve como objetivo desenvolver e avaliar dois protocolos de triplex PCR para investigar possíveis causas de negatividade no diagnóstico molecular das formas visceral (LV) e tegumentar (LT) das leishmanioses. Pares de primers para detecção de um controle interno (gene G3PD) e dois controles externos (DNA genômico de M. pachydermatis e plasmídeo comercial pUC18 foram adaptados a protocolos de PCR convencionais validados para a detecção de L. infantum e L.(V.) braziliensis e duas reações triplex foram otimizadas. Dados de sensibilidade (S), especificidade (E) e eficiência (e) dos novos sistemas foram calculados em 186 amostras de sangue coletadas de cães em áreas endêmicas, utilizando como referência protocolos de PCR e PCR em tempo real (qPCR) consagrados na literatura / A concordância entre os novos testes e os testes de referência foi determinada pelo cálculo do índice de Kappa. A tríplex PCR para o diagnóstico da LV mostrou S = 78.68 por cento, E= 85.29 por cento e e= 81.05 por cento com boa concordância (K = 0.60, p < 0.0001) com o conjunto de resultados PCR/qPCR. Para o diagnóstico da LT observou-se S = 97.29 por cento, E = 79.16 por cento, e = 90.16 por cento, com K = 0.78, (p < 0.0001) indicando excelente nível de concordância entre os testes. As novas ferramentas apresentadas podem ser aplicadas para aumentar a acurácia no diagnóstico das leishmanioses, contribuindo para a rápida implementação do tratamento e, reduzindo a longo prazo os índices de mortalidade e morbidade das leishmanioses

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 662232 bytes, checksum: af7e8ce650eb7e98bfec292cda8d020b (MD5) Previous issue date: 2008-12-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The quality control in food industries is a global requirement, and in chicken slaughtering is conducted primarily through monitoring of hygiene indicator microorganisms and pathogens in specific processing steps. This need requires the development and application of rapid and reliable methods to be used in quality control. This study evaluated the differences in the microbiological contamination of chicken carcasses obtained at different processing steps from two distinct slaughterhouses (Ab1, classified as large-scale, and Ab2, small-scale). Still, a PCR methodology for detection of Salmonella spp. was compared to the conventional method (CM). Surface samples of chicken carcasses were collected in the following sequential steps: A) immediately before evisceration, B) after evisceration, C) after showering and D) after a cooling tank (chiller). All samples were tested for microbiological hygiene indicators (mesophilic aerobes - MA, total coliforms - TC, thermotolerant coliforms - TTC and Escherichia coli - EC) and Salmonella spp. In addition, Salmonella spp. was detected by PCR directly from the sample (PCR-S), from the pre-enrichment broth immediately after inoculation (PCR-PE) and from pre- enrichment broth after incubation (PCR-PEI). No significant differences were observed between the frequencies of Salmonella spp. obtained at different steps in Ab1 and Ab2 (P > 0.05). Ab2 showed higher levels of microbiological contamination in different steps of processing when compared to Ab1, for MA (in B and D steps), TC and TTC (D step) and EC (all steps) (P < 0.05). Regarding PCR, PCR-PEI showed higher sensitivity when compared to PCR-S and PCR-PE, despite the absence of significant difference when compared to the CM (P > 0.05). The results indicate the significance of different processing steps during slaughter in the microbiological contamination of chicken carcasses, and the necessity of development and evaluation of alternative methods for Salmonella spp. detection. / O controle de qualidade em indústrias alimentícias é uma exigência mundial, e em abatedouros de aves é conduzido basicamente pelo monitoramento de microrganismos indicadores de higiene e patógenos em pontos específicos da linha de processamento. Essa necessidade demanda o desenvolvimento e aplicação de metodologias rápidas e confiáveis a fim de serem utilizadas no controle de qualidade. Neste estudo foram avaliadas as diferenças na contaminação microbiana em carcaças de frangos obtidas em diferentes etapas do processamento em dois abatedouros (Ab1, classificados como de grande porte e Ab2, de pequeno porte). Ainda, uma metodologia de reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de Salmonella spp. foi comparada com a metodologia convencional (MC). Amostras superficiais de carcaças de frangos foram coletadas nas seguintes etapas: A) imediatamente antes da evisceração, B) após a evisceração, C) após o chuveiro, e D) após o tanque de resfriamento (chiller). Todas as amostras coletadas foram submetidas à pesquisa de bactérias indicadoras de higiene (aeróbios mesófilos - AM, coliformes totais - CT, coliformes termotolerantes - CTT e Escherichia coli - EC) e Salmonella spp. A pesquisa de Salmonella spp. por PCR foi realizada diretamente das amostras (PCR-A), do caldo do pré- enriquecimento recém-semeado (PCR-PE) e do caldo de pré- enriquecimento após incubação (PCR-PEI). Não foram observadas diferenças significativas entre as freqüências de Salmonella spp. obtidas pela MC em diferentes etapas do processamento em Ab1 e Ab2 (P > 0,05). Verificou-se maior contaminação em Ab2 em relação a Ab1 por AM (nas etapas B e D), CT e CTT (etapa D) e EC (todas as etapas) (P < 0,05). Em relação à metodologia de PCR avaliada, verificou-se maior sensibilidade da PCR-PEI em relação às demais variações (PCRA e PCR-PE), porém não se constatou diferença significativa com a MC (P > 0,05). Os resultados obtidos indicam a importância de diferentes etapas do processamento na contaminação microbiana de carcaças de frangos em diferentes sistemas de abate e a necessidade de avaliação de metodologias alternativas a serem utilizadas na pesquisa de Salmonella spp.

Introdução: A AIDS (Síndrome da Imunodeficiência Adquirida) é caracterizada por uma disfunção grave no sistema imunológico causada por uma infecção por HIV (Human Immunodeficiency Virus). A quantificação da viremia (carga viral) é uma ferramenta muito útil no monitoramento dos pacientes infectados pelo HIV, sendo um marcador de progressão da doença e eficácia do tratamento. A estimativa incorreta da carga viral pode levar à decisão terapêutica equivocada, portanto métodos acurados de quantificação se fazem necessários. Diversas técnicas comerciais estão disponíveis para a quantificação da carga viral do HIV-1: a maioria destas se baseiam na detecção de ácidos nucléicos e outras na detecção de enzimas e antígenos. O grau de automação varia nas diferentes técnicas assim como os procedimentos de isolamento, amplificação e detecção. A correlação e a concordância entre estas técnicas têm sido estudadas e há relatos de discordância entre os valores de carga viral produzidos por diferentes métodos. O conhecimento sobre o efeito das variações entre as técnicas se faz necessário para assegurar a interpretação adequada dos resultados. A interpretação dos resultados correta é particularmente importante quando estes estão próximos a pontos de corte utilizados para definições de rebote viral e falha virológica. Objetivos: O objetivo deste estudo é comparar as técnicas de PCR (Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) e b-DNA (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0) para quantificação do HIV-1. Métodos: 1000 amostras recebidas no HIV/GUM Research Laboratory do Chelsea and Westminster Hospital para quantificação da carga viral do HIV-1 durante os meses de Dezembro de 2009 e Janeiro de 2010 foram testadas pelos métodos de PCR (Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) e b-DNA (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0). Resultados: Uma superquantificação sistemática foi observada nos resultados testados por PCR. Esta superquantificação ficou evidente nos resultados entre 50 e 250 cópias. Uma concordância elevada foi observada na análise dos pontos de corte de 500 e 1000 copias/mL. Uma correlação linear forte foi observada entre estas técnicas na análise das amostras que obtiveram resultados dentro do limite comum de detecção de ambas as técnicas, porém o nível de concordância foi insatisfatório. Conclusão: A superquantificação observada nos resultados obtidos pelo Cobas AmpliPrep TaqMan HIV- 1 v2.0 em relação ao bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 é provavelmente o resultado de uma sensibilidade aumentada desta técnica. Nós recomendamos cautela quando resultados de duas metodologias diferentes são comparados, especialmente quando se comparam metodologias convencionais com aquelas baseadas em PCR em tempo real. / Introduction: AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome) is characterised by a severe immune dysfunction caused by the HIV (Human Immunodeficiency Virus). The HIV viral load quantification is an essential tool to monitor HIV-infected patients. The HIV quantification is a disease progression marker and it is a key indicator in treatment efficacy. Inaccurate viral RNA values may subsequently lead to inappropriate treatment decisions hence accurate quantification methods are necessary. Several different methodologies are available to quantify the HIV viral load: a number of them are based on nucleic acid detection and others in detection of enzymes and antigens. Automation is also variable among these methods in addition to differences in isolation, amplification and detection. Several studies have been carried out to evaluate their correlation and agreement and some have evidenced discordant viral load values assessed by different assays. The knowledge about these differences should be taken in to account when analysing viral load results, particularly when low-level viraemia is concerned or those close to endpoints employed for definition of virological failure. Objectives: In this study, two methods to quantify viral load are evaluated: one is based on real-time PCR (AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0) and the other is based on branched-DNA technology (Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0). Methods: 1000 plasma samples received at the HIV/GUM Research Laboratory within Chelsea and Westminster Hospital for HIV-1 viral load quantification between December 2009 and January 2010 were tested by both Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 and Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 methods. Results: Results obtained show that Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 PCR systematically overquantifies the viral loads results when compared to bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0. Conclusion: The overquantification by Cobas AmpliPrep TaqMan HIV-1 v2.0 over bDNA Siemens Versant HIV-1 RNA 3.0 is likely to be a result of its increased sensitivity. We recommend caution when comparing results from different methodologies, especially when a conventional assay and a real-time PCR assay are concerned.