El objetivo del presente estudio fue determinar lesiones histopatológicas y poder aislar agentes infecciosos en algunos tejidos de la gamitana (Colossoma macropomum). Se colectaron 40 peces aparentemente normales de estadio juvenil en una piscigranja de la de la Estación Experimental IVITA-Pucallpa, Ucayali (Perú); tomándose muestras del hígado, bazo, riñón, estómago, branquias y músculo para su estudio Histopatológico y Bacteriológico. Los hallazgos histopatológicos en el hígado fueron degeneración hidrópica (39/40) y congestión (31/40); en el riñón fueron degeneración hidrópica y necrosis tubular (40/40) y regeneración celular en túbulos (6/40), con un incremento de centros melanomacrófagos en la periferia de los túbulos; en el bazo se observó congestión (4/40); en el estómago se observó necrosis del epitelio de la mucosa (3/40) y necrosis de las glándulas gástricas (2/40); en las branquias se observó infiltración de células inflamatorias en filamento branquial (40/40), congestión en filamento (12/40), hiperplasia del epitelio interlaminar (40/40), hiperplasia del filamento branquial (18/40) y pérdida de láminas (2/40); y finalmente en el músculo se pudo observar necrosis (16/40) y atrofia muscular (5/40). Los hepatocitos presentaron unos pigmentos de coloración marrón negrusca en el interior del citoplasma (40/40); también se observó material hialino en el citoplasma de células del riñón (2/40) y estómago (25/40). Se encontraron parásitos mixosporidios en branquias (2/40), riñón (40/40) y músculo (12/40); y parásitos monogeneos en branquias (6/40). Se aislaron bacterias como: Pseudomona fluorescens/putida, Edwardsiella tarda, Plesiomona shigelloides, Salmonella arizonae, Aeromonas hydrophila, Bacilus cereus, Serratia sp., Escherichia coli, Salmonella enterica. Se concluye, según el estudio, que la histopatología es una técnica diagnóstica que sirve para la determinación de causas infecciosas como no infecciosas en Gamitanas de cultivo. Además, se determinaron lesiones de tipo no infeccioso en el estómago y riñón, que sugieren una asociación con alteraciones en el metabolismo de las proteínas; y las lesiones en branquias sugieren una asociación con una mala calidad del agua. Finalmente se aislaron bacterias potencialmente patógenas en peces tales como Aeromonas hydrophila y Edwardsiella tarda en branquias y órganos internos, pero no relacionadas a las lesiones histopatológicas encontradas. / The aim of this study was to determine histopathological lesions and bacterial isolates in some tissues of gamitana (Colossoma macropomum). Forty clinically healthy juvenile fishes were collected from the Experimental Station IVITA-Pucallpa, Ucayali (Perú), taking samples of the kidney, liver, spleen, stomach, gills and muscle. The histopathological findings in the liver were hydropic degeneration (39/40) and congestion (31/40); the findings in the kidney were hydropic degeneration and tubular necrosis (40/40) and tubule cell regeneration (6/40), with an increase of melano-macrophage centres in the periphery of the tubules; the findings in the spleen were congestion (4/40); the findings in the stomach were epithelial necrosis of the mucosa (3/40) and gastric glands necrosis (2/40); the findings in the gills were infiltration of inflammatory cells in branchial filament (40/40), congestion in filament (12/40), interlamellar epithelium hyperplasia (40/40), (18/40) and loss of lamellas (2/40); and finally in the muscle the findings were necrosis (16/40) and muscle atrophy (5/40). The hepatocytes had dark pigments in the cytoplasme (40/40); and hyaline pigments in the tubular cells of the kidney (2/40) and estomach (25/40). Also, the results showed myxosporean parasites in gills (2/40), kidney (40/40) and muscle (12/40); and monogenean parasites in gills (6/40). The bacteria isolated were: Pseudomona fluorescens/putida, Edwardsiella tarda, Plesiomona shigelloides, Salmonella arizonae, Aeromonas hydrophila, Bacilus cereus, Serratia sp., Escherichia coli, Salmonella enterica. It was concluded that the histopathology is a diagnostic technique to determine lesions caused by infectious or non-infectious agents in gamitanas under culture. Also, the study showed non-infectious lesions in the stomach and kidney. These results suggested an association with alterations in protein metabolism; and the branchial lesions, from mild to moderate, suggested an association with low quality of the water; and finally were isolated potentially pathogenic bacteria in fishes such as: Aeromonas hydrophila and Edwardsiella tarda in gills and organs, but also there was no relation between the isolated bacteria and the histopathological findings in any of the tissues.

Resumo não disponível

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Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-12T11:55:14Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Amália Cristine Medeiros Ferreira.pdf: 1292292 bytes, checksum: cf06788df2c672bca8f740e4286d5815 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T11:55:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Amália Cristine Medeiros Ferreira.pdf: 1292292 bytes, checksum: cf06788df2c672bca8f740e4286d5815 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / CNPq / A α-amilase é uma endocarboidrase que atua na hidrólise de ligações glicosídicas α(1→4) presentes em polissacarídeos como o amido e glicogênio, gerando como produtos oligossacarídeos, dextrinas e maltose. Esta enzima corresponde à segunda classe de enzimas mais utilizadas na indústria, apresentando diversas aplicações biotecnológicas, principalmente nas indústrias alimentícia e de detergentes. A α-amilase é encontrada em diversos organismos, e pode ser obtida através de bactérias, fungos e tecidos animais e vegetais. Com o intuito de reduzir o impacto causado pelo avanço da indústria pesqueira, essas e outras classes de enzimas vêm sendo extraídas através do reaproveitamento dos resíduos pesqueiros. Neste trabalho, α-amilases foram obtidas através dos cecos pilóricos e intestinos do tambaqui, Colossoma macropomum, caracterizadas e avaliadas quanto ao seu uso como aditivo de limpeza em detergentes comerciais. Para isso, o extrato bruto obtido foi submetido a fracionamento salino utilizando sulfato de amônio, a fração 30-60% apresentou maior atividade, foi em seguida dialisada e aplicada a uma coluna de cromatografia p-aminobenzamidine-agarose (Sigma®). Após esse processo de purificação, foram realizados zimogramas e eletroforese SDS-PAGE, os resultados obtidos sugerem uma purificação parcial, e presença de isoformas. As α-amilases apresentaram atividade ótima no pH 7.0 e 8.5, respectivamente para AMY-1 (intestinos) e AMY-2 (cecos pilóricos). Foram termoestáveis durante 30 minutos a 40°C, e apresentando temperatura ótima de 40 e 45°C, respectivamente. As α-amilases foram fortemente inibidas pelos íons Hg+3 e Cu+2. Quanto ao seu uso como aditivo de detergentes, as α-amilases extraídas do tambaqui, foram significativamente estáveis durante incubação de 60 minutos com agente oxidante (H2O2 15%), surfactantes coleato de sódio, tween 20, tween 80 e SDS, sendo também compatíveis e estáveis com todas as marcas de sabão utilizadas neste trabalho. Estes resultados sugerem que estas enzimas possuem potencial aplicação na indústria de detergentes, podendo ser utilizadas como aditivo de limpeza. Adicionalmente, pode-se concluir que o reaproveitamento dos resíduos do tambaqui corresponde a uma fonte inovadora de α-amilase com alta atividade e aplicabilidade industrial.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3092_1.pdf: 8924491 bytes, checksum: 5067e92c81d9089d2399d7e237ac7fc7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O tambaqui (Colossoma macropomum) é uma das principais espécies nativas para a piscicultura brasileira, apresentando um ótimo padrão de crescimento e alta produtividade, fato que torna abundante a sua oferta no mercado consumidor. C. macropomum foi a primeira espécie de peixe amazônico que atraiu um número relativamente grande de pesquisadores, pois, ele incorpora em uma única espécie, a maioria dos problemas que precisam ser resolvidos para se manejar a pesca e ao mesmo tempo desenvolver a aqüicultura. Lectinas são proteínas ou glicoproteínas que reconhecem carboidratos com alto grau de especificidade através de sítios de ligação. As lectinas estão envolvidas na imunidade inata, sendo por isso, consideradas como a primeira linha de defesa imunológica dos peixes. Essas proteínas versáteis têm sido encontradas em ovos, muco da pele e também no soro de peixes. Neste trabalho, a lectina do soro de tambaqui foi purificada parcialmente através de precipitação com sulfato de amônio. A fração 0-50% (F0-50) apresentou maior atividade hemaglutinante específica e foi escolhida para as próximas etapas de purificação. F0-50 reconheceu especificamente os carboidratos fucose, galactose e metil-α-D-galactose. Em seguida F0-50 foi submetida à Con A Separose 4B; o material adsorvido e eluído foi submetido à DEAE Sepharose. Todas as etapas foram acompanhadas por medidas da atividade hemaglutinante, dosagem de proteínas e eletroforese nativa ácida e na presença de SDS. Frações e lectina parcialmente purificada foram caracterizadas também quanto à estabilidade térmica, dependência de íons e pH. A lectina parcialmente purificada do soro do tambaqui é uma proteína ácida, termoestável, com atividade independente de cálcio, que reconhece os monossacarídeos fucose, galactose e metil-α-D-galactose, podendo, portanto, ser incluída na família das fucolectinas

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3112_1.pdf: 7058509 bytes, checksum: c034ea1869017a968a8ceca4f8707aae (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O tambaqui (Colossoma macropomum) é um peixe de importância comercial no Brasil e por isso, o estudo das biomoléculas obtidas a partir do processamento dos seus resíduos pode agregar valor à produção deste animal nativo dos rios e lagos amazônico. Dentre as biomoléculas de maior interesse comercial estão as peptidases alcalinas, como a tripsina, sendo elas aplicáveis em processos industriais e de biorremediação. Visando um aprofundamento do estudo das enzimas de peixes para aplicação comercial, o presente trabalho teve como objetivo purificar uma peptidase dos cecos pilóricos do tambaqui, através de um processo desenvolvido em quatro etapas (aquecimento, fracionamento salino, gel filtração e afinidade). A enzima purificada apresentou massa molecular de 23,9 kDa e sequência NH2-terminal IVGGYECKAHSQPHVSLNI. Na caracterização físico-química desta enzima com z-FR-MCA (substrato fluorogênico), a atividade mais alta foi observada no pH e temperatura de 9,0 e 50°C, respectivamente. Já nos experimentos com o substrato cromogênico BAPNA, a atividade máxima da enzima foi encontrada na faixa de pH entre 7,5 to 11,5 e na temperatura de 70°C. Quanto à sua estabilidade térmica, a enzima manteve mais de 60% da sua atividade inicial após 3h a 60°C, mas foi completamente desnaturada após passar o mesmo tempo a 70°C. A enzima foi significativamente inibida por TLCK e benzamidina (inibidores específicos de tripsina), bem como por PMSF (inibidor de serino peptidases) e pelos íons Al+3, Cu+2, Hg+2, Pb+2 Zn+2 e Ni+2. A especificidade de hidrólise desta enzima foi avaliada com duas séries de substratos fluorogênicos sintéticos (Abz- XRFK-Dnp-OH and Abz-RXFK-Dnp-OH), apresentando especificidade pelo aminoácido arginina na posição P1 e alta eficiência para a hidrólise de substratos com leucina (L) e lisina (K) na posição P2 e serina (S) e arginina (K) na posição P1 , sendo também capaz de hidrolisar substratos com prolina (P) na posição P1 . Na presença dos sabões em pó Omo multi ação®, Bem-te-vi®, Minerva® e Ala®, a enzima purificada do tambaqui manteve mais de 70% da sua atividade proteolítica, apresentando estabilidade semelhante à Alcalase® e sendo mais estável que a tripsina comercial de porco Sigma®. A enzima do tambaqui também se manteve estável na presença de tenso-ativos, como Triton X-100, SDS, Tween 20, Tween 80 e Chaps, bem como o agente oxidante, H2O2, em várias concentrações. Esses resultados indicam a versatilidade e estabilidade da tripsina-símile purificada

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-05-23T18:55:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação PPGCB.Diego Marques.versão final.ficha catalográfica.pdf: 1282275 bytes, checksum: f4bfca3ba7307797524e0ed6deece88a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-23T18:55:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação PPGCB.Diego Marques.versão final.ficha catalográfica.pdf: 1282275 bytes, checksum: f4bfca3ba7307797524e0ed6deece88a (MD5) Previous issue date: 2015-02-28 / FACEPE / O peixe amazônico tambaqui (Colossoma macropomum) é uma das espécies comerciais mais importantes da atividade piscícola no Brasil ocupando a terceira posição no “ranking” nacional. Doenças são as principais causas de perdas em piscicultura intensiva. A pressão que as técnicas de cultivo exercem sobre o organismo do peixe, torna-o suscetível a ação de patógenos. Dentre os patógenos de importância para a piscicultura destacam-se as bactérias pertencentes ao gênero Aeromonas, sendo agentes etiológicos de diversas patologias, com capacidade de gerar surtos de mortalidades em criações de peixes. O nosso grupo de pesquisa identificou iniciamente a lectina presente no soro do tambaqui (ComaSeL). Lectinas são proteínas ou glicoproteínas que se ligam especifica e reversivelmente a carboidratos. O objetivo deste trabalho foi isolar e identificar espécies de Aeromonas de tambaquis submetidos a estresse por confinamento, e avaliar o perfil de expressão da lectina presente no soro do peixe frente a desafio com espécies de Aeromonas isoladas do tambaqui. Para o isolamento de Aeromonas foram utilizados três peixes submetidos a estresse de confinamento, (permanência em tanque de 1000 L com a lâmina d’água no limiar do dorso do animal por 96 h) e três peixes utilizados como grupo controle (retirados diretamente do viveiro). O isolamento de Aeromonas foi efetuado do tecido branquial e seguiu procedimento padrão de maceração, diluição do macerado em água destilada esterilizada e semeio em meios específicos. A identificação em nível de gênero e espécie seguiu metodologia padrão de testes fisiológicos e bioquímicos. Para o desafio foram selecionadas duas cepas pertencentes a espécies reconhecidamente patógenas (A. caviae e A. bestiarum). Trinta e seis tambaquis foram divididos em três grupos: infectado 1 (desafiado com A. bestiarum), infectado 2 (desafiado com A. caviae) e o grupo controle. O desafio foi feito com a aplicação de 1 mL de uma suspensão de crescimento recente com concentração final de 1,5 x 108 UFC/mL de cada cepa em seu respectivo grupo, e de 1 mL de solução fisiológica no grupo controle. Nos tempos 0, 24, 48 e 72 h três animais de cada grupo foram sacrificados e amostras de sangue foram coletadas. A lectina foi avaliada através da atividade hemaglutinante específica. Ao total foram isoladas 72 cepas pertencentes ao gênero Aeromonas. A maior parte dos isolados (97%) foi obtida dos peixes submetidos ao estresse, confirmando que o estresse favorece a proliferação de patógenos. Houve prevalência das espécies A. bestiarum (48,6%) e A. caviae (37,5%) que são descritas como causadoras de septicemia por Aeromonas móveis. Em relação ao perfil de expressão da lectina, os tratamentos não apresentaram diferenças significativas entre si. Os tratamentos controle e infectado 1 não variaram significativamente entre os tempos. O tratamento infectado 2 apresentou aumento significativo na atividade hemaglutinante específica a partir de 48 h após a infecção. Comparando a atividade hemaglutinante em cada período para os três tratamentos, observou-se que no tratamento 1, 24 h após a infecção, houve diferença significativa na atividade hemaglutinante. Os resultados indicam que A. caviae e A. bestiarum foram capazes de estimular a expressão de lectinas no soro do tambaqui. / The tambaqui (Colossoma macropomum) is one of the most important commercial species of fish activity in Brazil. It offers a great quality of meat, excellent standard of high growth and hardiness, which favors its creation in intensive fish farming. Diseases are the main causes of losses in intensive fish farming. The pressure that cultivation techniques have on the fish’s body makes it susceptible to pathogens action. Among the pathogens of importance to fish there are the bacteria belonging to the genus Aeromonas, being etiological agents of various diseases, capable of generating mortality outbreaks in fish creations. Our research group identified the lectin there is present in the serum of tambaqui (ComaSeL). Lectins are proteins or glycoproteins that bind carbohydrates specifically and reversibly. The objective of this study was to isolate and identify species of tambaqui’s Aeromonas subjected to stress confinement, and evaluate the expression profile of this lectin in fishs infected with Aeromonas species isolated from tambaqui. For the isolation of Aeromonas were used three fish undergoing stress of confinement, held in 1000 L tank with a water depth in the animal's back the threshold for 96 h, and three slaughtered direct from fish nursery. The isolation of Aeromonas was made of gill tissue and followed standard procedure of maceration, dilution macerated in sterile distilled water and sow in specific media. The identification of the genus and species, followed standard methodology of physiological and biochemical tests. For the challenge were selected two strains of recognized pathogenic species (A. caviae and A. bestiarum). Thirty-six tambaquis were divided into three groups: 1 infected (challenged with A. bestiarum), infected 2 (challenged with A. caviae) and the control group. The challenge was done by applying 1 mL of a recent growth in suspension with a final concentration of 1.5 x 108 CFU / mL for each strain in the respective group, and 1 mL of saline control group. At 0, 24, 48 and 72 h three animals from each group were sacrificed and blood samples were collected. The lectin was evaluated by specific hemagglutination activity assay. In total were isolated 72 strains belonging to the genus Aeromonas. The majority of isolates (97%) was obtained from fish subjected to stress, confirming that stress favors the proliferation of pathogens. The prevalence of A. bestiarum (48.6%) and A. caviae (37.5%) that are described as sepsis-causing by mobile Aeromonas. In relation to the lectin expression profile, the treatments were not significantly different from each other. The control treatments and infected 1 did not vary significantly between the times. Treatment infected 2 showed an increase in specific hemagglutination activity from 48 h after infection. Comparing the hemagglutinating activity of each period for the three treatments, It was observed that the treatment 1, 24 h after infection, there was a significant difference in hemagglutination activity. The results indicate that A. bestiarum and A. caviae were capable of stimulating the expression of lectins in serum tambaqui.

Orientador: Maria Regina Bueno Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:02:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_NeivaMariade_D.pdf: 1130714 bytes, checksum: bcb549c1ba32b2d9bff99a59e20e5495 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O elevado consumo de ácidos graxos ômega 6 e o reduzido consumo de ômega o interesse para pesquisa dos acidos graxos, principalmente em relação aos ácidos graxos poliinsaturados da família ômega 3 eicosapentaenóico (EPA) e docosahexaenóico (DHA). Esse estudo tem como objetivo caracterizar os ácidos graxos dos lipídios totais (LT), das frações de lipídios neutros (LN) e fosfolipídios (FL) e determinar os teores de EPA e DHA nos músculos dorsais e no tecido adiposo da cavidade ocular do matrinxã (Brycon cephalus) e do tambaqui (Colossoma macropomum), provenientes de cultivo semi-intensivo e habitat natural, capturados na Amazônia Central, em diferentes períodos sazonais. Os LT foram fracionados em LN e FL por cromatografia em coluna clássica. Os extratos de LT, LN e FL foram metilados e os ésteres metílicos separados por cromatografia gasosa de alta resolução. No matrinxã foram detectados 64 ácidos graxos nos lipídios totais, 66 nos neutros e 55 nos fosfolipídios. Nos peixes de cultivo e nos capturados no habitat natural, os mesmos acidos graxos majoritários foram encontrados nos lipídios totais e nas frações e fosfolipídios, porem nos lipídios totais e neutros ocorreu uma inversão em relação aos peixes capturados na época da seca. Os peixes capturados durante o período da seca apresentaram menor teor de lipídios e maior percentual de ácidos graxos poliinsaturados (AGPI). No tambaqui foram encontrados 61 ácidos graxos nos lipídios totais, 67 nos neutros e 63 nos fosfolipídios. Os principais ácidos graxos encontrados, nos lipídios totais, neutros e fosfolipídios, dos peixes de cultivo e de recurso natural foram: ácido oléico (18:1ro9), palmítico (16:0), esteárico (18:0) e linoléico (18:2ro6), porém, houve inversão da ordem dos principais ácidos graxos dos peixes de cultivo em relação aos capturados na natureza, no período da cheia e seca. O peixe de cultivo foi inferior aos de ambiente natural em relação à quantidade de AGPI, entretanto a razão ro6/ro3 do peixe de cultivo foi menor no músculo e no tecido adiposo da cavidade ocular do que nos peixes capturados no período da cheia. A menor razão ro6/ro3 (2,42), ocorreu no músculo dos peixes capturados na seca. O perfil de ácidos graxos para as duas espécies estava dentro do esperado para peixes tropicais de água doce, confirmando-se como fonte de AGPI, não havendo distinção de qualidade e quantidade entre o músculo e a cavidade ocular que possa assegurar um tecido como melhor fonte de AGPI que o outro. O matrinxã e o tambaqui capturados na natureza foram considerados melhores para o consumo, principalmente quando capturados na época da seca. A característica sazonal da Amazônia influenciou a composição de ácidos graxos das espécies em estudo. A separação das frações de lipídios mostrou que pode haver uma predominância de determinados grupos ou ácidos graxos nas diferentes classes de lipídios. Do ponto de vista tecnológico, o fracionamento dos lipídios totais em classes pode fornecer informações importantes para a indústria de pescado, para o preparo, armazenamento e concentração. de ácidos graxos. No matrinxã de cultivo, os resultados indicaram teores de EPA de 4,15mg/g e 3,64mg/g para o músculo e a cavidade ocular, respectivamente, enquanto para DHA os teores foram de 30,04mg/g e 22,78mg/g. Para os peixes capturados na cheia, a concentração de EPA foi de 5,25mg/g, 6,22mg/g, para o músculo e a cavidade ocular, enquanto que para o DHA, o teor foi de 10,26 mg/g e 18,74 mg/g em cada tecido, respectivamente. Para os peixes capturados na época da seca, os teores de EPA foram de 8,14 mg/g e 4,93 mg/g, e para DHA, de 61,31mg/g e 19,66mg/g, no músculo e cavidade ocular, respectivamente. De acordo com a quantidade diária de 200mg/dia sugerida para AGPI ro3 pelo Department of Health (considerando somente EPA e DHA, como fonte de AGPI ro3) um individuo necessitaria ingerir 62,39g/dia, 135,28g/dia e 59,38g/dia do músculo de matrinxã cultivado e dos capturados no período da cheia e seca, respectivamente. Para o tambaqui de cultivo, os resultados de EPA e DHA no músculo foram de 5,03mg/g e 25,1Omg/g e, para o tecido adiposo da cavidade ocular, foram de 4,41mg/g e 8,12mg/g, respectivamente. Para os exemplares capturados no período da cheia, os teores de EPA e DHA no músculo foram de 3,84mg/g e 14,15mg/g e para o tecido adiposo da cavidade ocular, de 5,54mg/g e 9,31mg/g, respectivamente. Para os peixes capturados na época da seca, os teores de EPA e DHA no músculo foram de 9,35mg/g e 40,18mg/g e para o tecido adiposo da cavidade ocular de 7,05 mg/g, e 8,95 mg/g. De acordo com a recomendação do Department of Health um indivíduo deveria ingerir 138,31g/dia, 444,74g/dia e 144,21g/dia do músculo de tambaqui de cultivo e dos capturados no habitat natural no período da cheia e seca, respectivamente.O matrinxã e o tambaqui apresentaram equilíbrio entre músculo e cavidade ocular para o ácido graxo EPA, enquanto um maior teor de DHA fio observado no músculo do que no tecido adiposo da cavidade ocular para as duas espécies, indicando que não é viável o aproveitamento deste tecido em escala industrial. De acordo com os teores de EPA e DHA, o matrinxã e o tambaqui, principalmente quando capturados na natureza, durante a época da seca, podem ser considerados uma fonte rica em ácidos graxos essenciais (AGE) da família ro3e ser indicado por nutricionistas quando o objetivo for balancear dietas, para melhorar a razão ro6:ro3.Os teores de EPA e DHA no músculo do tambaqui de cultivo foram superiores ao encontrados para o peixe de recurso natural capturado na época da cheia. / Abstract: The elevated consumption of omega-6 fatty acids and the low consumption of omega-3 fatty acids, in the western diet there is a need for more studies into polyunsaturated fatty acids (PUFAs) especially in to eicosapentaenóico (EPA) and docosahexaenóico (DHA). This study aims to research total lipid (TL) fatty acids and the fractions of neutral lipids (LN) and phospholipids (PL) and determine the levels of EPA and DHA in the dorsal muscles and fatty tissue of the orbital cavity of the matrinxã (Brycon cephalus) and the tambaqui (Colossoma macropomum) from both semi-intensive farming and the wild in the Central Amazon in different seasonal periods. The TL was fractioned into NL and PL using classic column chromatography. The LT, NL and PL were derivation and the methyl esters separated by high-resolution gaseous chromatography. In the matrinxã 64 fatty acids were detected in the totallipids, 66 in the neutral and 55 in the phospholipids. Fish caught during the dry season had lower lipid levels and a higher percentage of polyunsaturated fatty acids. The PUFA do not differ significantly between farmed matrinxã and those caught in the flooded season. In the tambaqui, results showed 61 fatty acids in the totallipids, 67 in the neutral and 63 in the phospholipids. The main fatty acids found in the total and neutral lipids and the phospholipids in farmed and wild fish were: oleic (18:1ro9),palmitic (16:0), stearic (18:0) and linoleic(18:2ro6) acids. However, there was an inversion in the order of the main fatty acids in farmed fish in relation to those caught in the wild, during the flood and dry season. Farmed fish were inferior to wild fish in quantities of PUFAs, however the ro6/ro3ratio for farmed fish was less in the muscle and the fatty tissue of the orbital cavity than in wild fish caught in the flood. The lowest ratio ro6/ro3 (2,42), occurred in the muscle of fish caught during the dry season. The profile of fatty acids for both species was that expected for tropical fresh water fish, confirming it as a source of PUFA. There is no distinction between the quality and quantity of the muscle and the orbital cavity, which may point to one tissue being a superior source of PUFA than the other. The fish caught in the wild are considered superior for consumption, especially when caught during the dry season. The seasonal characteristic of the Amazon influenced the composition of the fatty acids in the species being studied. The division into classes of lipids shows that there may be a predominance of determined groups or fatty acids in the different classes of lipids. From a technological point of view, this division may offer important information about the preparation, storage and concentration of fatty acids for the fishing industry. In farmed matrinxã results show EPA levels of 4,15mg/g and 3,64mg/g for the muscle and orbital cavity respectively, whilst for DHA the levels were 30,04mg/g and 22,78mg/g. For fish caught during the flood EPA concentrations were 5,25mg/g, 6,22mg/g, for the muscle and the orbital cavity, whilst for the DHA the levels were 10,26 mg/g and 18,74 mg/g for each tissue respectively. For fish captured in the dry season EPA levels were 8,14 mg/g and 4,93 mg/g, and for DHA, 61,31mg/g and 19,66mg/g, in the muscle and orbital cavity respectively. According to the daily quantities of 200mg/day of 003PUFAs recommended by the Department of Health (considering solely EPA and DHA as a source of 003PUFAs) an individual needs to ingest 62.39g/day, 135.28g/day and 59.38g/day of the muscle of farmed matrinxã and those captured during the dry and flood periods respectively. For farmed tambaqui the EPA and DHA levels in the muscle were 5,03mg/g and 25,1Omg/gand for the fatty tissue of the orbital cavity were 4,41mg/g and 8,12mg/g, respectively. For the specimens caught during the flood, EPA and DHA levels in the muscle were 3,84mg/g and 14,15mg/g and for the fatty tissue of the orbital cavity, 5,54mg/g and 9,31mg/g, respectively. For fish caught during the dry season the EPA and DHA levels in the muscle were 9,35mg/g and 40,18mg/g and for the fatty tissue of the orbital cavity 7,05 mg/g, and 8,95 mg/g. the seasonal characteristic of the Amazon region influenced the EPA and DHA levels of the matrinxã and tambaqui. According to the recommended by the Department of Health an individual should ingest 138,31g/day, 444,74g/day and 144,21g/day of the muscle of tambaqui farmed and wild fish during the flood and dry season respectively. The matrinxã and the tambaqui show a balance between the muscle and the orbital cavity for the fatty acid EPA, whilst there was a higher levei of DHA in the muscle than in the orbital cavity, indicating that this tissue is not feasible for use on an industrial scale. According to EPA and DHA levels, the matrinxã and the tambaqui, especially those caught in the wild during the dry season, can be considered a rich source of 003fatty acids to be indicated by nutritionists when the objective is to balance diets to improve the 006:003ratio. EPA and OHA levels in the muscle of farmed were higher than those found in wild fish caught during the flooded season. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Tambaqui (Colossoma macropomum) is the largest native Characiform species from the Amazon and Orinoco river basins of South America. Tambaqui farming is growing rapidly in Brazil, its production reached 139.209 tons in 2014, what corresponds to 57.7% of increase compared with 2013. However, few genetic studies of tambaqui are currently available. The tambaqui genetic studies for cultured and wild populations need a holistic approach for a rational action facing ecological and market challenges in aquaculture. Approaches based on genetic studies have provided important tools to understand population dynamics, local adaptation, and gene function to improve selection strategies to be applied in breeding programs. The next-generation sequencing (NGS) allowed a great advance in genomic and transcriptomic approaches, especially related to non-model species. The genotype-by-sequencing (GBS) is one of this approaches based on genome complexity reduction using restriction enzymes (REs). This thesis presents the application of these approaches to provide advances in the genetic background for tambaqui studies. The GBS approach provided a high-density SNPs panel that allowed us to develop the first linkage map, and association studies with environmental variables, local adaptation, and lack of intermuscular bones, both using tambaqui as a model. This work can give us many theoretical references to be applied in genetic breeding programs for tambaqui, allowing a better understanding of genetic processes related to traits of interest in aquaculture. / O tambaqui (Colossoma macropomum) é a maior espécie nativa de Characiforme da América do Sul e é encontrado nas bacias do rio Amazonas e Orinoco. O cultivo do tambaqui está crescendo rapidamente no Brasil, sua produção atingiu 139.209 toneladas em 2014, o que corresponde a 57,7% de aumento em relação a 2013. No entanto, poucos estudos genéticos realizados com o tambaqui estão disponíveis atualmente. Estudos genéticos em tambaqui, tanto em populações cultivadas quanto em populações selvagens, necessitam de uma abordagem holística para uma ação racional frente aos desafios ecológicos e mercadológicos na aquicultura. Abordagens baseadas em estudos genéticos têm fornecido ferramentas importantes para se entender a dinâmica populacional, adaptação local e função gênica visando melhorar as estratégias de seleção a serem aplicadas em programas de melhoramento genético. O sequenciamento de nova geração (NGS) permitiu um grande avanço nas abordagens genômicas e transcriptômicas, especialmente relacionadas a espécies não-modelo. A genotipagem por sequenciamento (GBS) é uma dessas abordagens que utilizam enzimas de restrição (REs) para reduzir a complexidade do genoma. Esta tese apresenta a aplicação desta abordagem objetivando proporcionar avanços significativos nos estudos genéticos de base para tambaqui. A técnica de GBS forneceu um painel de SNPs de alta densidade que nos permitiu desenvolver o primeiro mapa de ligação e estudos de associação com variáveis ambientais, adaptação local e ausência de ossos intermusculares no tambaqui. Este trabalho pode nos dar muitas referências teóricas a serem aplicadas em programas de melhoramento genético do tambaqui, permitindo uma melhor compreensão dos processos genéticos relacionados a traços de interesse na aquicultura.

O objetivo do trabalho foi verificar se existe associação dos polimorfismos de lócus microssatélites com o desempenho e expressão gênica. Após genotipagem, os alelos 122 e 130 foram observados, com frequência de 0,94 e 0,06. A frequência gênica foi de 0,88 para animais 130/130 e de 0,12 para indivíduos 122/130. Não houve diferença para os dados fenotípicos entre animais de genótipos diferentes, embora o grupo de animais heterozigoto tenha apresentado uma leve superioridade. A taxa de expressão do Gh não é estatisticamente diferente entre os genótipos observados, porém o grupo homozigoto teve uma taxa de expressão de mRNA maior e mesmo assim menores valores de peso e comprimento, sugerindo uma correlação. O par de iniciadores desenhado amplificou e genotipou com eficiência o locus STR nos animais estudados. A falta de qualidade da água e o manejo inadequado dos animais podem ser os causadores das alterações histopatológicas encontradas no fígado dos animais estudados. Os peixes podem ser via de contaminação humana, devido ao seu consumo como alimento, portanto, medidas de controle devem ser iniciadas para minimizar esse processo. Estudos mais aprofundados com maior controle ambiental, maior variabilidade alélica, maior número amostral e análise de outros genes de interesse associados, seriam interessantes para complementar e enriquecer o presente trabalho. / The objective of this study was to verify if there is association of polymorphisms of microsatellite loci with the performance and gene expression. After genotyping, alleles 122 and 130 were observed, with a frequency of 0,94 and 0,06. The gene frequency was 0,88 for 130/130 animals and 0,12 for 122/130 individuals. There was no difference for phenotypic data among animals of different genotypes, although the group of heterozygous animals presented a slight superiority. The expression rate of GH is not statistically different among the observed genotypes, but the homozygote group had a higher mRNA expression rate and even lower values of weight and length, suggesting a correlation. The pair of primers designed amplified and efficiently genotyped the STR locus in the animals studied. The lack of water quality and inadequate management of the animals may be the cause of the histopathological changes found in the liver of the animals studied. Fish can be a way of human contamination, due to their consumption as food, therefore, control measures must be initiated to minimize this process. Further studies with greater environmental control, greater allelic variability, greater sample size and analysis of other associated genes of interest, would be interesting to complement and enrich the present work.