Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2016. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo liberado: introdução. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-06-05T19:48:41Z No. of bitstreams: 1 2016_LeandroJunioBarretodosReis_PARCIAL.pdf: 795431 bytes, checksum: 4f778192d4db623e78623e96af54f456 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-06-05T19:49:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_LeandroJunioBarretodosReis_PARCIAL.pdf: 795431 bytes, checksum: 4f778192d4db623e78623e96af54f456 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-05T19:49:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_LeandroJunioBarretodosReis_PARCIAL.pdf: 795431 bytes, checksum: 4f778192d4db623e78623e96af54f456 (MD5) Previous issue date: 2017-06-05 / Estrongiloidíase é uma doença parasitária causada pelo Strongyloides sp., com distribuição mundial e maior prevalência em países tropicais e subtropicais. Objetivo: Verificar se a presença ou ausência de hormônio testosterona influência na evolução do S. venezuelensis (Sv) em camundongos e se altera as respostas imunes celulares e humorais em camundongos orquiectomizados e infectados com esse helminto. Metodologia: Usamos no estudo camundongos, linhagem Swiss, pesando entre 18 e 20 g, e ratos Rattus novergicus Wistar pesando cerca de 120 g, para manutenção do helminto, ambos provenientes da Seção de Expedição Animal/CECAL da Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ), Manguinhos, Rio de Janeiro, Brasil. Grupos de animais: G1. Controle negativo; G2. Animais infectados; G3. Animais Sham negativos; G4. Animais Sham infectados; G5. Animais Operados negativos; G6. Animais Operados infectados; G7. Animais operados com reposição de uma dose de testosterona; G8. Animais operados com reposição de duas doses de testosterona. Os animais foram infectados com 1.500 larvas filarióides de Sv, via s.c. As doses de testosterona foram aplicadas nos dias 3, 7 e 14 via s.c. Os animais foram sacrificados por overdose de Ketamina/Xilazina nos dias 1, 3, 5, 7, 14 e 21 após infecção. Deles coletou-se o sangue para contagem de leucócitos totais e células diferenciais. Recolheram o intestino para contagens de parasitos fêmeas, baço, coração, fígado e pulmão para verificação da presença de formas evolutivas do helminto. Quantificaram anticorpos e citocinas no soro por ELISA, e fizeram exames histopatológicos do baço, coração, fígado, intestinos, e pulmões. Resultados: O número de vermes adultos, ovos e larvas recuperados dos animais orquiectomizados foram significativamente menores nos dias 5 e 7 após infecção, quando comparados com animais infectados e Sham. Porém, os animais operados com reposição de testosterona, essas formas evolutivas estavam aumentadas e o parasitismo nos camundongos foram maiores. A infecção por S. venezuelensis induz aumento de células inflamatórias no sangue ao longo da cinética, no entanto, nos dias 14 e 21 o aumento de leucócitos totais, eosinófilos e células mononucleares foram maiores, mas sem diferenças entre os grupos de animais analisados. Níveis de anticorpos (IgE e IgG1) e citocinas (IL-4, IL-5, IL-13) foram aumentados nos animais infectados, mas a concentração deles variaram ao longo da cinética experimental, e sem diferenças significantes entre os animais sem testosterona ou com reposição desse hormônio. A síntese de IL- 12 detectado nos animais infectados, operados, operados com reposição de testosterona e infectados foram semelhantes aos animais controles negativos. IFN-gama. IL-17 não foi detectado em nenhum grupo experimental. Infiltrado inflamatório de histiócitos estavam presentes nos animais Sv + Água, Sham + Sv, Op + Sv observado a partir do dia 3 da infecção e estendeu-se até o dia 7 após infecção, enquanto que nos animais operados com reposição da testosterona o processo inflamatório permaneceu até o dia 14. Presença de infiltrado de mastócitos e presença discreta de eosinófilos foram observadas na polpa branca de centro germinativo foi similar entre todos os grupos de animais infectados, operados e trados ou não com testosterona até o dia. Porém, no dia 14 nesses animais observaram infiltrados de neutrófilos associados a formação de granuloma (piogranuloma), sendo essas modificações no tecido hepático mais evidentes nos animais tratados com T indiferente no quantidade de doses. Infecção com Sv não induz alterações histopatológicas significativas no coração. Conclusões: A redução parcial de testosterona circulante nos animais orquiectomizados torna-os resistentes a infecção do S. venezuelensis, ao passo que níveis aumentados desse hormônio o parasitismo no hospedeiro, porém, não interferiu na fertilidade do parasito. Ausência ou concentração aumentada de testosterona circulante não induz síntese aumentada de anticorpos ou citocinas. Assim, esses resultados sugerem a testosterona possivelmente interfere em outras vias da resposta imune como: sistema complemento, quimiocinas, ou celular por nós não avaliados, que seja sinais entendido pelo Strongyloides permitindo a permanência no hospedeiro. / Strongyloidiasis is a parasitic disease caused by Strongyloides sp. It’s distributed worldwide with higher prevalence in tropical and subtropical countries. Objective: To verify if the presence or absence of testosterone hormone influences the evolution of S. venezuelensis (Sv) in mice and if it alters the cellular and humoral immune responses in orchiectomized mice infected with this helminth. Methodology: We used in the study mice, Swiss strain, weighing between 18 and 20 g, and RattusnovergicusWistar weighing about 120 g, for helminth maintenance, both from the Section of Animal Expedition / CECAL of the Oswaldo Cruz Foundation (FIOCRUZ), Manguinhos, Rio de Janeiro, Brazil. Animal groups: G1. Negative control; G2. Infected animals; G3. Negativesham-operated animals; G4. Infectedsham-operated animals; G5. Negative operatedanimals; G6. Infected operated animals; G7. Animals operated with a replacement dose of testosterone; G8.Animals operated with replacement of two doses of testosterone.The animals were infected with 1,500 filarial larvae of Sv, bys.c. The doses of testosterone were applied on days 3, 7 and 14 by s.c. The animals were sacrificed by overdose of Ketamine / Xylazine on days 1,3,5,7,14 and 21 after infection. Blood was collected from they for total leukocyte count and of differential cells. They collected the intestines to count parasites females, spleen, heart, liver and lungs to verify the presence of evolutionary forms of the helminth. They quantified antibodies and cytokines by ELISA, and did histopathological examination of the spleen, heart, liver, intestines, and lungs. Results: The number of adult helminth, eggs and larvae recovered from the orchiectomized animals were significantly lower on days 5 and 7 after infection when compared to infected and sham animals. However, the operated animals with testosterone replacement, these evolutive forms were increased and the parasitsm in mice were bigger. The infection by S. venezuelensis induces an increase in inflammatory cells in the blood along the kinetics, however, on days 14 and 21, the increase of total leukocytes, eosinophils and mononuclear cells were larger, but without significant differences between the groups of animals analyzed. The antibodies levels (IgE and IgG1) and citokynes (IL-4, IL-5, IL-13) were increased in the infected animals, but their concentrations varied along the experimental kinetics, and without significant differences between the animals without testosterone or with replacement of this hormone. The IL-12 synthesis detected in infected animals, operated, operated with testosterone replacement and infected were similar to negative control animals. IFN-gama. IL-7 was not detected in no experimental group. Inflamatory infiltrate of histiocytes were present in the animals Sv + Water, Sham + Sv, Op + Sv observed from day 3 of the infection and extended until day 7 after infection, while in the operated animals with testosterone replacement the inflamatory process remained until day 14. Presence of mast cell infiltrate and discrete presence of eosinophils were observed in the white germinative center pulp was similar among all groups of infected animals, operated and with or without testosterone up to the day. However, on day 14 in these animals they observed neutrophil infiltrates associated with granuloma formation (piogranuloma), these changes in hepatic tissue being more evident in animals treated with indifferent T in the amount of doses. Sv infection does not induce significant histopathological changes in the heart. Conclusion: The partial reduction of circulating testosterone in orchiectomized animals makes them resistant to infection of S. venezuelensis, whereas increased levels of this hormone parasitism in the host, however, did not interfere in the fertility of the parasite. Absence or increased concentration of circulating testosterone does not induce increased antibody or cytokine synthesis. Thus, these results suggest that testosterone possibly interferes in other immune response pathways such as: complement system, chemokines, or cellular by unvalued nodes, which are signals understood by the Strongyloides allowing the stay in the host.

Resumo não disponível.

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Made available in DSpace on 2014-06-12T15:55:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6486_1.pdf: 5259085 bytes, checksum: 0455f27ed957ea8d402554cbef2e71be (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Os efeitos do tratamento crônico com tiazolidinonas sobre a esteroidogênese testicular foram avaliados, em virtude dos efeitos relacionados à deficiência androgênica. A fim de contribuir com a concepção de fármacos mais seguros, avaliamos o efeito do tratamento crônico com tiazolidinonas sobre os níveis plasmáticos de testosterona e sobre a produção testicular desse hormônio (modelo ex-vivo), em ratos machos normais. Foram utilizados ratos Wistar (Rattus norvegicus) adultos, machos, pesando entre 250-300g, divididos em grupos de 06 animais, tratados por 15 dias consecutivos por gavagem. O grupo controle positivo utilizou a rosiglitazona, o controle utilizou o veículo e os grupos tratados utilizaram os derivados 5-(2,4-dimetoxi-benzilideno)-3-(4-metil-benzil)-tiazolidina-2,4-diona (LPSF/GQ-06) ou 5-(4-cloro-benzilideno)-3-(4-fenil-benzil)-tiazolidina-2,4-diona(LPSF/GQ-24), ambos potencialmente hipoglicemiantes. Após o tratamento, os animais foram eutanasiados e em seguida, foi feita a coleta de sangue para análise por radioimunoensaio (RIE). Para o modelo ex vivo, dois animais de cada grupo tiveram os seus testículos removidos para obtenção e purificação das células de Leydig através do gradiente de Percoll. As células foram incubadas durante três horas com meio 199 (testosterona basal), com os ativadores da PKA hCG (1 mUIl/mL) e dbcAMP (1mM), e com precursores esteroidogênicos 22-OH-colesterol (10 μM) e pregnenolona (1 μM). A testosterona foi determina no meio de incubação por RIE. Estudos de microscopia eletrônica e de imunocitoquímica foram realizados para a melhor interpretação dos resultados. De acordo com os resultados, o tratamento com rosiglitazona não resultaram em redução significante na testosterona plasmática; já no estudo ex vivo constatamos uma redução da testosterona. O tratamento com LPSF/GQ-06 resultou em aumento dos níveis de testosterona, tanto no plasma quanto nos meios de incubação realizados no estudo ex vivo. O tratamento com o LPSF/GQ-24 resultou em redução significante na testosterona plasmática, contudo aumentou a secreção de testosterona nos meios de incubação. Nos estudos morfológicos por ME, tanto a rosiglitazona quanto o LPSF/GQ-24 resultaram em danos mitocondriais, já o LPSF/GQ-06 não ocasionou alterações celulares significantes. Na imunocitoquímica, os tratamentos com rosiglitazona e com LPSF/GQ-24, observamos aumento da expressão da StAR e da P450scc; já nos animais tratados com o LPSF/GQ-06, não foram observadas alterações nestas proteínas-chave da esteroidogênese. A partir destes resultados, concluímos que o tratamento crônico com tiazolidinonas implica em alterações na via esteroidogênica testicular, no que diz respeito à síntese e secreção da testosterona. Contudo, podemos observar que estes efeitos variam de acordo com a molécula estudada, sugerindo que moléculas atuam sobre diversos mecanismos. Dentre os compostos testados, o LPSF/GQ-06 se apresentou como mais seguro, visto que não ocasionou deficiência androgênica

Orientadores: Regina Celia Spadari Bratfisch, Denise Vaz de Macedo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:55:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garcia_MarciaCarvalho_M.pdf: 1068683 bytes, checksum: 21a0009397a20fae89e56e62183d1cac (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Em resposta a agentes estressores como, por exemplo, o exercício físico, o organismo tenta manter a homeostasia. Dependendo da carga de exercício imposta, a resposta adaptativa poderá resultar em adaptação positiva ou maladaptação. A maladaptação ao treinamento poderá resultar em overeaching e com sua permanência, em síndrome de overtraining. Esta síndrome se caracteriza por diminuição no desempenho do atleta, fadiga muscular, distúrbio do sono, perda do apetite, entre outros sintomas, concomitantes com alterações imunológicas, hormonais e indicadores de estresse psicológico. A literatura científica dispõe de poucos trabalhos que correlacionam alterações hormonais e limites de treino. Encontrar o limite entre carga de treinamento, sua duração e adaptação proporcionará maior controle sobre o desempenho físico de atletas de futebol e, conseqüentemente, sua permanência como atleta-ativo no máximo de seu desempenho. Não há dados na literatura sobre valores de referência para as concentrações plasmáticas destes hormônios em atletas de futebol. Os objetivos desta tese foram: quantificar a concentração plasmática de catecolaminas, de cortisol, e de testosterona, correlacionando-a com o desempenho físico, para estabelecer valores de referência para estes hormônios sinalizadores do estado de overtraining, em atletas de futebol da categoria juniores. Para isso realizamos medidas periódicas das concentrações séricas de noradrenalina, adrenalina, cortisol e testosterona. Estes dados foram correlacionados com os resultados das avaliações de desempenho físico e dados sanguíneos de marcadores de estresse oxidativo. Os resultados mostraram que após o período de preparação para a disputa de um campeonato, o desempenho dos atletas se manteve. Os parâmetros bioquímicos indicam inicialmente um ataque às estruturas biológicas, mas ao final do período o aumento das capacidades antioxidantes possibilita adaptação à carga de treinamento. Não houve alterações nas concentrações plasmáticas de cortisol, testosterona e noradrenalina. A concentração de adrenalina não foi detectada. Concluímos que a carga de treinamento imposta a estes atletas foi adequada para manter o desempenho, o aumento das capacidades antioxidantes e evitar síndrome de overtraining. As concentrações hormonais determinadas podem ser referências para atletas desta categoria e modalidade esportiva quando submetidos a treinamento físico e adaptação positiva / Abstract: Regular physical exercise leads to adaptation, which may be positive, resulting in better performance capacity, or to maladaptation known as overreaching, that may lead to the overtraining syndrome. This syndrome is characterized by poor performance, fatigue, sleep disturbance, appetite loss, and other symptoms, besides immunological and hormonal alterations that indicate psychosomatic and psychological stress. In order to prevent overtraining and to ensure that the athletic training protocol is resulting in performance improvements it is necessary to know the limit between these two related states what is a condition to keep he or she as an active athlete. There are no data on reference values for soccer athletes concerning to the stress hormones and a few papers are focused to the overtraining syndrome. The aim of this work is to determine the plasmatic levels of noradrenaline, adrenaline, cortisol and testosterone and to establish a correlation between those levels with blood parameters indicative of adaptation and physical performance in junior soccer players. We measured the plasma levels of the above-mentioned hormones and of biochemical markers of oxidative stress as well as the physical performance of the athletes before, during and after a training period. The results have shown that after the training period the athletes performance was preserved. The biochemical parameters indicated that the oxidative stress was counterbalanced by the development of oxidative defense mechanisms and that the athletes were positively adapted. There were no alterations on the plasmatic levels of cortisol, testosterone and noradrenaline during the period. The plasmatic levels of adrenaline were not detected. This is probably due to the long period of storage of the plasma samples and/ or storage condition. We conclude that the training protocol was effective determining adaptation and avoiding overtraining. And that the hormonal levels presented here may be used as reference values for junior soccer players / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:00:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4199_1.pdf: 7087056 bytes, checksum: 2904d06b2b0020f646791deb08fd49cc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / A Olanzapina é usada para tratamento agudo e manutenção da esquizofrenia, bem como outras psicoses. Apesar dos antipsicóticos atípicos serem cada vez mais utilizados nos dias atuais, pouco se sabe sobre sua influência na espermatogênese. Tendo como base que já foram detectados receptores dopaminérgicos em células germinativas, o presente estudo tem como objetivo investigar os efeitos do tratamento com Olanzapina, durante o período de 45 dias. Após o prazo de aplicação, foi realizada a coleta do sangue e os ratos foram submetidos à eutanásia para retirada das gônadas e glândulas anexas. Foi observado que a Olanzapina produziu modificações estruturais e funcionais nas estruturas investigadas. Houve redução nos níveis séricos de testosterona, nos pesos testicular, epididimário e prostático, no diâmetro tubular e na altura do epitélio seminífero, as quais podem ser relacionadas à redução no processo espermatogênico

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T10:18:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ashimine_Rika_M.pdf: 5750364 bytes, checksum: 6e356464e821f803ab86ff8474edb56f (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A insulite está presente em ambos os sexos do camundongo NOD (non obese diabetic), enquanto a incidência do diabetes tem alta prevalência em fêmeas. O diabetes manifesta-se em 90% das fêmeas e aproximadamente em 20% nos machos. Neste estudo, investigamos o efeito da testosterona na incidência do diabetes e no perfil de citocinas Th1 no pâncreas e em células esplênicas do camundongo fêmea NOD. Nós utilizamos diferentes doses in vitro (5, 10, 20 e 30nM) e in vivo (174JlMe 348JlM)com administração semanal e mensal. Os camundongos fêmeas foram mantidos em tratamento durante 28 semanas, iniciando na 48 semana de vida. Para os estudos in vivo o tratamento semanal e mensal com 174JlM de testosterona reduziu a incidência do diabetes em 40%, enquanto o tratamento semanal com 348JlMreduziu a incidência do diabetes a 20%, índice semelhante ao do macho, com menor índice de insulite. No pâncreas, o perfil de citocinas Th1 estava aumentado no grupo de animais tratados diabéticos que no grupo de camundongos não diabéticos. Semelhante aos resultados do estudo in vivo, os efeitos da testosterona in vitro sobre as citocinas Th1 de células esplênicas exibiram tempo e dose-dependência. Contudo, o efeito da testosterona in vivo sobre a diminuição do IFN-y foi mais proeminente. O efeito da testosterona sobre a ativação da Stat3, Stat4, Jak2 e Tyk2 evidenciou que o estímulo a fosforilação de Jak2 e a fosforilação de Stat3 reduzida é dose-dependente. Estes resultados reforçam os efeitos da testosterona sobre a incidência do diabetes tipo 1 e sua modulação nos níveis de citocinas Th1e na fosforilação dos fatores de transcrição no pâncreas e em células esplênicas no camundongo NOD / Abstract: Insulitis is present in both gender of non-obese diabetic (NOD) mice, where as the incidence of diabetes is much higher in females; overt diabetes appears in 90% of females and approximately 20% of males. In this study, we investigated the effect of testosterone on the incidence of diabetes and the Th1 cytokine profile in pancreas and spleen cells in female NOD mice. Testosterone was employed at different doses (in vivo 174uM and 348uM; and 5, 10, 20 or 30nM in vitro) and with variable frequencies (weekly and monthly) of administration., Female mice were maintained under treatment for 28 weeks, starting from the 4thweek of life. Diabetes was diagnosed by two consecutive blood glucose levels > 250mg/dL. For in vivo studies, the weekly and monthly schedule of 174J..lM testosterone treatment reduced the incidence of diabetes to 40% whilst the weekly dose of 348J..lMreduced the incidence to 20%, an incidence similar that of male diabetes with a lower insulitis index. In pancreas, the Th1 cytokine profile was higher in treated diabetic than non-diabetic mice. Similarly to in vivo studies, the in vitro effects of testosterone on spleen cells Th1 cytokine were time and dose dependent. However, in vivo, decrease in IFN-y was more prominent. Testosterone activation of Stat3, Stat4, Jak2 and Tyk2 induced a dose dependent increase in Jak2/Py and a decrease in Stat3/Py. These results demonstrate the effect of testosterone on the incidence type 1 diabetes and its modulation of the Th1 cytokine and transcription factor phosphorylation in NOD mice / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El objetivo del presente estudio fue la evaluación en campo una formula vacunal producida para provocar inmunocastración en cerdos machos de criadero, el método de acción de esta vacuna es a través de la producción de anticuerpos contra la hormona liberadora de Gonadotrofinas (GnRH), impidiendo su efecto y consecuentemente las características negativas relacionadas a la producción de cerdos machos enteros, principalmente, un fenómeno denominado “boar taint” que produce un olor y sabor desagradables en la carne del animal. Actualmente el método utilizado para prevenir esta situación en criaderos, es la castración quirúrgica a edad temprana de los cerdos machos, pero esta práctica presenta desventajas relacionadas con el bienestar y eficiencia productiva de los animales El estudio comprende 60 machos raza Camborough (♀C22 X ♂PB380), en condiciones normales de criadero comercial y separados en 3 grupos; cerdos castrados quirúrgicamente a edad temprana, cerdos inmunizados con vacuna comercial Improvac® (Zoetis Ltda.) y grupo de cerdos inmunizados con formula vacunal experimental GnRXG/Q. Se monitorearon títulos de anticuerpos anti GnRXG/Q, niveles de testosterona y diámetro testicular en diferentes tiempos post inmunización. Se demuestra en el estudio que ambas fórmulas vacunales son efectivas para producir inmunocastración en cerdos machos, obteniendo las ventajas productivas de mantener más tiempo el macho entero, utilizando su potencial anabólico y siendo una mejor alternativa para el bienestar de los cerdos. / The objective of the present study is to carry out an on-site evaluation for a vaccine formulation, produced to induce immunocastration in boars. The action mechanism of this vaccine occurs through the production of antibodies against Gonadotropin-releasing hormone (GnRH), blocking its effect and thus, the negative features associated to the production of functional male swine, such as the ―boar taint‖, which causes an unpleasant smell and flavor in the animal meat. The current method, in order to prevent this situation in pig houses, is surgical castration at an early age in male piglets, but this practice has shown disadvantages related to the welfare and productive efficiency of the animals. For this study, 60 Camborough (♀C22 X ♂PB380) boars were used under normal conditions of a commercial pig house, and they were put into 3 separated groups: surgically castrated pigs, pigs immunized against GnRH with commercial formulation Improvac® (Zoetis Ltda) and a group of immunized pigs with the experimental vaccine formulation GnRXG/Q. Anti GnRXG/Q antibody titles, testosterone levels and testicular diameter were monitored at different times post immunization. The study showed that both vaccine formulations are effective when it comes to produce immunocastration on male swine, obtaining the productive advantages of maintaining the male entire for a longer period of time, using its anabolic potential, resulting as well in a better alternative for the animals’ welfare.

La pérdida de masa y fuerza del músculo esquelético, característico de ciertas miopatías como la sarcopenia, es una condición frecuente durante el envejecimiento, y está asociada a disfunciones de los sistemas muscular y esquelético. Aunque los mecanismos moleculares involucrados en esta patología no están totalmente esclarecidos, existen evidencias que demuestran que la apoptosis es en parte responsable de la pérdida de miocitos en la adultez, contribuyendo a la patogénesis de la sarcopenia. Puesto que los niveles de hormonas sexuales disminuyen con la edad, la sarcopenia se ha asociado al déficit de las mismas. En este trabajo, se ha demostrado que la testosterona, a concentración fisiológica, protege frente a la apoptosis inducida por H2O2 en la línea celular de músculo esquelético murino C2C12. Las alteraciones morfológicas típicas de la apoptosis tales como fragmentación nuclear, desorganización del citoesqueleto, reorganización/disfunción mitocondrial y liberación de citocromo c inducidos por el H2O2, son inhibidas cuando las células son previamente tratadas con la hormona. Se ha observado que las células C2C12 muestran una respuesta bifásica en presencia del agente apoptótico. A tiempos cortos de exposición al H2O2, las células activan un mecanismo de defensa, para evitar entrar en apoptosis, el cual consiste en la fosforilación de ERK2, Akt y Bad y en un aumento de expresión de la proteína asociada a eventos de supervivencia, HSP70. Simultáneamente y a partir de aproximadamente media hora de tratamiento con H2O2, se observa la fosforilación de JNK, p66Shc y p53, estas últimas mostrando un pico máximo de activación a la 1-2 hs. A tiempos más largos de exposición al agente apoptótico (4 hs) se produce la defosforilación de ERK2, Akt y Bad, se mantiene la fosforilación de JNK, disminuye la activación de p53 y p66Shc, se produce la liberación de citocromo c, el clivaje de PARP, la fragmentación del ADN y la pérdida del potencial de la membrana mitocondrial, indicando que las células inician finalmente el proceso de muerte celular programada. Sin embargo, cuando las células son tratadas con testosterona, previo a la exposición al H2O2, se reduce la fosforilación de JNK, se observa la inactivación de la proteína apoptótica Bad, disminución de los niveles de la proteína apoptótica Bax, inhibición del clivaje de PARP, prevención de la pérdida del potencial de membrana mitocondrial y disminución de la fosforilación y localización mitocondrial de la proteína amplificadora del estrés oxidativo, p66Shc. El empleo de un antagonista no esteroideo específico para la testosterona, la Flutamida, reduce el efecto protectivo del esteroide, involucrando al receptor de andrógenos (AR) en los efectos antiapoptóticos de la hormona. También, se obtuvieron evidencias bioquímicas, farmacológicas e inmunológicas, que demuestran la presencia del AR con localización clásica (nuclear) y no clásica en microdominios (específicamente caveolas y rafts) y mitocondrias. Las distintas localizaciones del AR podrían mediar el efecto antiapoptótico de la testosterona a distintos niveles subcelulares. Los resultados aquí presentados permiten comenzar a definir y esclarecer los mecanismos de señalización activados por la testosterona y su receptor, que median el efecto protectivo frente al daño oxidativo en músculo esquelético y su relación con miopatías asociadas al déficit de hormonas sexuales. / The loss of muscle mass and strength with aging, also referred to as sarcopenia, is a highly prevalent condition among the elderly, and it is associated with skeletal mechanisms underlying accumulating evidence muscle dysfunction. sarcopenia suggests are that far an Although from age-related the being exact clarified, acceleration of myocyte loss via apoptosis might represent a key mechanism responsible for impairment of muscle performance. Sarcopenia has been associated with a deficit of sex hormones as the levels of estrogens and/or testosterone decline with aging. In this work, it has been demonstrated that, at physiological concentrations, testosterone protects against H2O2- induced apoptosis in C2C12 muscle cells. Typical changes of apoptosis such as nuclear fragmentation, cytoskeleton disorganization, mitochondrial reorganization/dysfunction and cytochrome c release induced by H2O2, are abolished when cells are previously exposed to the hormone. It has been observed that C2C12 cells show a biphasic response when they are treated with the apoptotic agent. At short times of exposure to H2O2, C2C12 cells exhibit a defense response showing ERK2, Akt and Bad phosphorylation and an increase of HSP70 levels. Simultaneously and approximately after half an hour from the beginning of H2O2 treatment, JNK, p53 and p66Shc phosphorylation are observed, with maximum activation for p53 and p66Shc after 1-2 hours. At longer treatment times (4hs), dephosphorylation of ERK2, Akt and Bad is observed, JNK continues phosphorylated, the activation of p53 and p66Shc decreases and cytochrome c release, PARP cleavage, DNA fragmentation and the loss of mitochondrial membrane potential occur, indicating that cells finally enter into apoptosis. However, incubation with testosterone prior to H2O2, reduces JNK phosphorylation, induces Bad inactivation, inhibition of PARP cleavage, a decrease in Bax levels; reduces the loss of mitochondrial membrane potential and p66Shc phosphorylation and its mitochondrial localization. The employment of the androgen receptor (AR) antagonist, Flutamide, decreases the protective effects of the hormone, pointing to a possible participation of the AR in the anti-apoptotic effect of testosterone. Moreover, biochemical, pharmacological and immunological data demonstrate a classical (nuclear) and non-classical localization of the AR in microdomains (caveolae and rafts) and mitochondria. These results assign an active role for the AR during the anti-apoptotic effect of the hormone, possibly, at different subcellular levels. The data presented in this work unravel in part the molecular mechanisms activated by testosterone and its receptor, underlying the survival action of the hormone against oxidative stress damage in skeletal muscle and its relationship with myopathies associated with sex hormonal dysregulation.

As células de Sertoli são células fundamentais que fornecem fatores essenciais para a progressão da espermatogênese. Do período fetal ao imaturo, as células de Sertoli estão proliferando. A via não-clássica dos androgênios é caracterizada por rápido evento que conduz à ativação de cascatas de sinalização citosólicas desencadeadas por receptores de membrana. Diferente dessa, na via clássica são necessárias horas ou até mesmo dias para a produção de novas proteínas. Existe um receptor de membrana específico para os andrógenos que estimula a cascata de sinalização não-clássica nas células de Sertoli por interação com o ZIP9, um transportador de zinco. Esse estudo teve por objetivos: avaliar o envolvimento do receptor ZIP9 nos efeitos de membrana de células de Sertoli produzidos em resposta à aplicação de testosterona ou de nandrolona. Avaliar o papel do quelante de zinco (TPEN), nas concentrações 10 nM, 20 nM e 40 nM, sobre o potencial de membrana das células de Sertoli de ratos imaturos e avaliar o papel do quelante de zinco (TPEN), nas concentrações 10 nM, 20 nM e 40 nM, sobre a resposta eletrofisiológica da testosterona e da nandrolona em túbulos seminíferos isolados de testículos de ratos imaturos. O potencial e a resistência de membrana das células de Sertoli foram registrados através da técnica eletrofisiológica de registro intracelular. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares de borossilicato preenchidos com KCl 3 M acoplados a um eletrômetro. Nos túbulos seminíferos de animais entre o 12º e o 15º dpn foram aplicados e/ou perfundidos, DMSO (veículo) n = 8; quelante de zinco (TPEN) nas concentrações 10 nM n = 7; 20 nM n = 6; e 40 nM n = 8; Testosterona (T) 1 μM n = 15; T + TPEN 10 nM n = 10; T + TPEN 20 nM n = 9; T + TPEN 40 nM n= 7; Nandrolona (N) 1 μM n = 19; N + TPEN 10 nM n = 13; N + TPEN 20 nM n =12; N + TPEN 40 nM n= 9. Os dados foram analisados por ANOVA de medidas repetidas, seguida do pós-teste de Bonferroni. O projeto foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais – CEUA/UFRGS nº 29644. A aplicação tópica de DMSO e a perfusão de TPEN nas diferentes concentrações não altera o potencial de membrana de células de Sertoli. A aplicação tópica de T e de N resultou em despolarização do potencial de membrana de células de Sertoli e em aumento da resistência da membrana de células de Sertoli. A aplicação tópica da T e da N em meio com perfusão de TPEN, nas concentrações 10 nM, 20 nM e 40 nM, não alterou o potencial de membrana e a resistência da membrana de células de Sertoli de ratos imaturos. Concluímos que o quelante de zinco afeta o receptor de membrana de andrógenos na membrana de células de Sertoli de ratos entre o 12º e o 15º dpn. E podemos inferir que há envolvimento do ZIP9 nos efeitos de membrana de células de Sertoli produzidos em respostas à aplicação de T e de N. / Sertoli cells are key cells that provide essential factors for the progression of spermatogenesis. From the fetal to the immature period, Sertoli cells are proliferating. The non-classical signaling pathway is characterized by a rapid event that leads to the activation of cytosolic signaling cascades triggered by membrane receptors. On the other hand, in the classical pathway it takes hours or even days are necessary for the production of new proteins. There is an androgen-specific membrane receptor that stimulates the non-classical signaling cascade in Sertoli cells by interaction with ZIP9, a zinc transporter. This aim of this study was to evaluate the involvement of the ZIP9 receptor in the membrane effects of Sertoli cells produced in response to the application of testosterone or nandrolone. Also, to evaluate the role of zinc chelator TPEN at 10 nM, 20 nM and 40 nM concentrations on the membrane potential of Sertoli cells from immature rats and to evaluate the role of zinc chelator TPEN in 10 nM, 20 nM and 40 nM concentrations in the electrophysiological response of testosterone and nandrolone in seminiferous tubules isolated from testes of immature rats. The membrane potential and membrane resistance of Sertoli cells were recorded using a standard single microelectrode technique. The intracellular recording of Sertoli cells was performed using microcapillaries filled with 3 M KCl coupled to an electrometer. In the seminiferous tubules of animals between post-natal day (pnd) 12 and 15 were applied and/or perfused, DMSO (vehicle) n = 8; Zinc chelator (TPEN) at concentrations of 10 nM n = 7; TPEN 20 nM n = 6; and TPEN 40 nM n = 8; Testosterone (T) 1 μM n = 15; T + TPEN 10 nM n = 10; T + TPEN 20 nM n = 9; T + TPEN 40 nM n = 7; Nandrolone (N) 1μM n = 19; N + TPEN 10 nM n = 13; N + TPEN 20 nM n = 12; N + TPEN 40 nM n = 9. For statistical analyses it was used ANOVA for repeated measures followed by Bonferroni post-test. This study was approved by the Ethics Committee for Animal Research of UFRGS (CEUA/UFRGS nº 29644). Topical application of DMSO and perfusion of TPEN at different concentrations did not cause membrane potential depolarization of Sertoli cells. Topical application of T and N cause membrane potential depolarization of Sertoli cells and increased the cell resistance of Sertoli cells. Topical application of T and N in TPEN infusion at concentrations of 10 nM, 20 nM and 40 nM did not cause membrane potential depolarization and the cell resistance of the Sertoli cell membrane of immature mice. In summary, zinc chelator affects the androgen membrane receptor on the Sertoli cell membrane of rats between pnd 12 and 15. We can infer that there is the involvement of the ZIP9 in the membrane effects of Sertoli cells produced in response to T and N.