EPEC atípicas (EPECa) são isoladas de surtos diarréicos em crianças, adultos e animais em países industrializados e em desenvolvimento. Hemolisinas são toxinas que atuam sobre a membrana de eritrócitos e de diversos tipos celulares. Tal grupo de toxinas é reconhecido como importante fator de virulência envolvido na patogênese bacteriana, por isso o objetivo foi avaliar a expressão de enterohemolisina em isolados de EPECa e analisar características fenotípicas como interferência do meio de cultivo e adesão a componentes de matriz extracelular. Observou-se prevalência de 5,4% de isolados enterohemolíticos, e variações na expressão da toxina foram associadas à concentrações de lactose e caseína nos meios de cultivo. Além disso, verificou-se forte associação entre produção de enterohemolisina e ligação à fibronectina celular. / Atypical EPEC (aEPEC) are isolated from diarrheal outbreaks in children, adults and animals in industrialized and developing countries. Hemolysins are toxins that act on the red cell membrane and various cell types. This group of toxins is recognized as an important virulence factor involved in the bacterial pathogenesis. The aim of this study was the evaluation of the enterohemolysin expression in aEPEC isolates as interference of the culture media and adhesion to components of extracellular matrix. The prevalence of enterohemolytic isolates was 5.4%, and variations in toxin expression were associated with lactose and casein concentrations in culture media. Moreover, it was found association between production of enterohemolysin and adhesion to cellular fibronectin.

A Síndrome Hemolítica Urêmica (SHU) é a principal doença associada à infecção com linhagens de Escherichia coli produtoras de toxina de Shiga (Stx), doença para qual não há uma vacina ou tratamento específico. A toxina Stx é formada por uma subunidade A enzimaticamente ativa e uma B pentamérica responsável pela ligação da toxina na célula hospedeira. Neste trabalho propomos o uso de Bacillus subtilis, uma bactéria não patogênica e formadora de esporos, como veículo vacinal para a expressão de formas atóxicas da Stx2, sob o controle de um promotor induzível por estresse (PgsiB). Camundongos BALB/c imunizados com células vegetativas ou esporos das linhagens vacinais de B. subtilis, por diferentes vias, induziram baixos níveis de anticorpos anti-Stx em soro (IgG) e fezes (IgA). Avaliamos também o potencial imunogênico da Stx gerada em linhagens recombinates de E. coli, mas os anticorpos gerados não foram capazes de neutralizar a toxina nativa. Os resultados indicam que formas alternativas de expressão e/ou o uso de adjuvantes são necessárias para gerar formulações vacinais eficazes contra a SHU. / The Hemolytic Uremic Syndrome (HUS) is the main disease associated with infections with Shiga toxin (Stx) - producing Escherichia coli strain and no effective vaccine or treatment exist. The Stx toxin consist of an enzymatically active A subunit and a pentameric B subunit responsible toxin binding to host cells. In this work we propose the use of Bacillus subtilis, a harmless spore form bacteria as a vaccine vehicle for the expression atoxic forms of Stx2, under the control of stress inducible (PgsiB) promoter. BALB/c mice immunized with vegetative cells and spores of the B. subtilis vaccine strain using different immunization routes elicited low specific antibody levels at serum (IgG) or fecal extracts (IgA). We also investigated the immunogenic potencial of StxB purified from recombinant E. coli strain, but the induced anti-StxB antibodies did not neutralize the native toxin. The results indicate that alternative expression system or the incorporation of the adjuvants are required for the generation of vaccine formulation active against HUS.

Os objetivos deste estudo foram: caracterizar, comparar e correlacionar, em indivíduos com distonia laríngea, antes e após 30 e 120 dias da aplicação da toxina botulínica tipo A no músculo tireoaritenoideo unilateralmente, os parâmetros vocais perceptivo-auditivos e visuais e o impacto vocal na qualidade de vida. Participaram do estudo 16 indivíduos com diagnóstico de distonia laríngea, sendo 11 de gênero feminino e cinco de gênero masculino, com idade média de 57 anos e dois meses, sendo que 68,75% deles apresentaram tremor vocal associado. Todos foram submetidos à aplicação da toxina botulínica tipo A (Dysport®), no músculo tireoaritenoideo unilateralmente, guiado por eletromiografia, gravação do sinal vocal e preenchimento do protocolo de qualidade de vida, Índice de Desvantagem Vocal, antes da injeção da toxina botulínica, no primeiro retorno de seguimento, em média, após 36 dias, e no segundo retorno, coincidente com o dia da nova aplicação de toxina botulínica, que foi em média, 137 dias. Os resultados para análise perceptivo-auditiva e visual de sinais e sintomas vocais, realizada por dois juízes especialistas em voz, revelou, na comparação entre a pré-aplicação e o primeiro retorno, diminuição da severidade da oscilação de intensidade, quebras de voz (sonoridade) e tremor vocal (p=0,002), portanto sem alterações no segundo retorno. No grau de severidade da qualidade da voz, voz tensa-estrangulada, rugosidade, soprosidade e astenia não foram observadas alterações nos três tempos. Para esta análise, notou-se concordância excelente e muito boa (0,71 a 0,99) intrajuízes. Na comparação entre a pré-aplicação e o primeiro retorno, para o Índice de desvantagem vocal, verificou-se diminuição dos valores para o escore total (p=0,039) e para o domínio emocional (p=0,035). Quanto à comparação entre a pré-aplicação e segundo o retorno, houve redução significativa para o domínio funcional (p=0,03) unicamente. De modo que, entre a análise perceptivo-auditiva e visual, do grau de severidade da qualidade vocal e o escore total do índice de desvantagem vocal, evidenciou-se correlação moderada na pré-aplicação e segundo retorno e fraca no primeiro retorno. Portanto, concluiu-se que o tratamento com toxina botulínica para os indivíduos com distonia laríngea mostrou-se eficiente na diminuição de sinais e sintomas vocais, bem como no impacto vocal na qualidade de vida, gerando mudanças na função fonatória e facilitando a comunicação após 30 dias da aplicação, com retorno dos sintomas vocais para a maioria dos indivíduos após 120 dias. / The purpose of this study was to characterize, compare, and correlate the laryngeal dystonia in individuals before, after 30, and 120 days after the application of botulinum toxin type A in the unilateral thyroarytenoid muscle the perceptual vocal and visual parameters and the vocal impact in quality of life. 16 individuals with diagnosed laryngeal dystonia participated in the study, 11 being of the female gender and five of the male gender, with an average age of 57 years and two months, being that 68.75% of individuals having presented associated vocal tremor. All individuals were subjected to: the application of botulinum toxin type A (Dysport®) via electromyography in the unilateral thyroarytenoid muscle, a recording of the vocal sound waves, filling out a survey about his/her quality of life and an Voice Handicap Index (VHI) before the botulinum toxin injection, in the first follow-up on average 36 days after, and in the second follow-up concurrent with the new botulinum toxin application visit, which was on average after 137 days. The results for the perceptual auditory and visual analysis of vocal sound waves and symptoms, conducted by two adjudicating voice specialists, revealed in the comparison between the pre-application and the first follow-up a decrease in the severity of the oscillation intensity, voice breaks (sonority), and vocal tremor (p=0.002), however, revealed no changes in the second follow-up. During the three visits, no changes were observed in grading the severity of voice quality in tense-strangled voice, roughness, breathiness and asthenia. For this analysis, a very good and excellent agreement between the adjudicators was noted (0.71 to 0.99). Comparing the pre-application and the first follow-up, for the index of vocal disability, a decrease in the values of total score (p=0.039) and of emotional mastery (p=0.035) was observed, whereas comparing the pre-application and the second follow-up, there was a significant decrease only for functional mastery (p=0.03). In this way, between perceptual auditory and visual analysis, grading the severity of vocal quality and the total score of the Voice Handicap Index, a moderate correlation was evident in the pre-application and second follow-up and a faint correlation was evident in the first follow-up. Therefore, it can be concluded that the treatment with botulinum toxin for individuals with laryngeal distonia who participated in this study proved effective in the decrease of symptoms, as well as in a vocal impact of quality of life which created changes in the phonatory function and facilitated communication after 30 days of the application, with a return of vocal symptoms for the majority of individuals after 120 days.

A distonia é uma síndrome que consiste de contrações musculares involuntárias que resultam em movimentos distorcidos e repetitivos e/ou posturas anormais. O tratamento pode ser por farmacoterapia, com drogas anticolinérgicas ou com a injeção de toxina botulínica no grupo de músculos afetados. O objetivo do trabalho foi avaliar a deglutição nos pacientes com distonia laríngea, antes e após o tratamento com a toxina botulínica. Nossa hipótese foi que a toxina botulínica modificaria a deglutição dos pacientes com distonia laríngea. Foram avaliados 17 indivíduos adultos, acima de 18 anos de idade, com diagnóstico clínico de distonia laríngea antes e após o tratamento com o uso de toxina botulínica do tipo A, e 20 indivíduos adultos saudáveis como controles. Os participantes foram submetidos à anamnese fonoaudiológica e avaliação videofluoroscópica da deglutição. Os pacientes com distonia foram avaliados antes e 30 dias após a injeção de toxina botulínica, guiada por eletromiografia. Na videofluoroscopia foram avaliadas 6 deglutições de 5mL, sendo 3 na consistência líquida (sulfato de bário 100%, e 3 na consistência pastosa (3g do espessante alimentar ThickenUp Clear, em 50 mL de sulfato de bário (100%) oferecidas em uma colher. A ordem das deglutições foi aleatória. Foram estudadas as fases oral e faríngea da deglutição, com registro de 30 quadros por segundo. Os pacientes com distonia laríngea apresentaram aumento de resíduos na região oral e em valécula e maior número de deglutições. Os pacientes apresentaram tempo de trânsito faríngeo (TTF) menor do que os controles (p<0,01), para os bolos nas consistências líquida e pastosa. O TTF foi menor após aplicação do que antes da aplicação da toxina botulínica, quando da deglutição do bolo pastoso. Portanto, concluiu-se que os pacientes com distonia laríngea, comparado a controles, têm trânsito mais rápido pela faringe, aumento de resíduos na região oral e em valécula e maior número de deglutições para o mesmo volume.Trinta dias após a aplicação da toxina botulínica foi observado diminuição da duração do trânsito pela faringe, com o bolo pastoso, e resposta tardia do movimento do osso hióide em relação à chegada do bolo na faringe. / Dystonia is a syndrome consisting of involuntary muscle contractions that result in distorted and repetitive movements and/or abnormal postures. Treatment may be by pharmacotherapy with anticholinergic drugs or with the injection of botulinum toxin in the affected muscle group. The aim of this study was to evaluate swallowing in patients with dystonia before and after treatment with botulinum toxin. Our hypothesis was that botulinum toxin modify the swallowing of patients with spastic dystonia. Seventeen adult subjects over the age of 18 years with clinically diagnosed dystonia were evaluated before and after treatment with botulinum toxin type A and compared to 20 healthy adults as controls. Participants underwent phonologic anamnesis and videofluoroscopy assessment of swallowing. Patients with dystonia were assessed before and 30 days after injection of botulinum toxin, guided by electromyography. In fluoroscopy, 6 swallows were evaluated of 5ml: 3 in a liquid consistency (100% barium sulfate) and 3 in a pasty consistency (3g of food thickener, ThickenUp Clear) in 50 mL of 100% barium sulfate, offered on a spoon. The oral and pharyngeal phases of swallowing were studied from swallows of random order, with registration of 30 frames per second. Patients with dystonia showed an increase of residue in the oral region and vallecula and greater number of multiple swallows. Patients had less pharyngeal transit time (PTT) than controls (p<0.01) for boluses of liquid and pasty consistencies. PTT was lower after the application of botulinum toxin than before with the swallowing of a pasty bolus. It was concluded that patients with dystonia, compared to controls, have more rapid transit through the pharynx, increased residues in the oral region and vallecula and a greater number of swallows for the same volume. Thirty days after the botulinum toxin, it was observed a shorter pharyngeal transit time with paste bolus, and delayed hyoid movement response to bolus presence in pharynx.

INTRODUÇÃO: A presença de rugas na face devido à hipercinese muscular é comum nas regiões frontal, glabelar e peri-orbitárias. São descritos diversos métodos para o tratamento das rugas de expressão, como a dermoabrasão, a ablação a laser, o laser não ablativo, preenchimentos, cirurgia e aplicações de toxina botulínica. O tratamento das rugas da face com toxina botulínica tipo A é método consagrado, porém são pouco definidos os efeitos a longo prazo. Este estudo retrospectivo teve como objetivo avaliar as rugas das regiões frontal e glabelar da face em pacientes submetidas a aplicações seriadas da toxina botulínica tipo A com finalidade estética, analisando os intervalos entre as aplicações e as doses utilizadas. MÉTODOS: Foram analisadas 24 pacientes do sexo feminino, submetidas entre 5 a 7 aplicações da toxina botulínica tipo A, no período de julho de 1997 a junho de 2006. O tempo médio de acompanhamento foi de 42,2 (± 4,0) meses e o intervalo médio entre as aplicações de 8 (± 0,51) meses. A idade média observada de início da aplicação foi de 48,0 (± 3,0) anos, e da última aplicação foi de 51,6 (± 3,0) anos. Foram métodos de avaliação a análise da documentação fotográfica de antes da primeira e antes da última aplicação, sendo as rugas frontais e glabelares avaliadas segundo escala padronizada, e dados colhidos dos prontuários. RESULTADOS: A longo prazo, verificou-se: 1) amenização das rugas estáticas da região frontal em 62,5% das pacientes e em 37,5% tais rugas se mantiveram inalteradas; 2) amenização das rugas estáticas da região glabelar em 47,2% das pacientes, em 50% tais rugas se mantiveram inalteradas e em 2,8% verificou-se pouca acentuação; 3) amenização das rugas dinâmicas da região frontal em 84,7% das pacientes e em 15,3% tais rugas se mantiveram inalteradas; 4) amenização das rugas dinâmicas da região glabelar (corrugadores) em 63,9% das pacientes, em 26,4% tais rugas se mantiveram inalteradas e em 9,7% verificou-se pouca acentuação. 5) amenização das rugas dinâmicas da região glabelar (prócero) em 57% das pacientes, em 32% tais rugas se mantiveram inalteradas e em 11% verificou-se pouca acentuação. A média da dose total de toxina botulínica utilizada por sessão no presente estudo foi de 43,83 ± 1,25 U, e a dose total cumulativa foi de 272,08 ± 20,42 U. CONCLUSÕES: No longo prazo, existe maior porcentagem de pacientes com amenização ou aspecto inalterado das rugas estáticas e dinâmicas das regiões frontal e glabelar da face em relação a pacientes com acentuação das mesmas. Não houve variação estatisticamente significativa das médias dos intervalos entre as aplicações. A dose total de toxina botulínica aumentou de forma estatisticamente significativa até a terceira aplicação, mantendo-se sem variação significativa a partir de então. / INTRODUCTION: The presence of wrinkles on the face due to the over activity of muscles is rather common on the frontal, glabellar, and periocular regions. A number of methods for the treatment of face lines, such as skin abrasion, laser resurfacing, fillers, surgery and botulinum toxin A have been described. The treatment of facial rhytids with botulinum toxin A is widely used. However, its long term effects are not well defined. This retrospective study assesses the rhytids of both the frontal and glabellar regions of the face on patients submitted to multiple botulinum toxin A applications for aesthetic use, analyzing intervals between applications and dosages. METHODS: 24 female patients who had undergone 5 to 7 botulinum toxin A applications from July, 1997 to June, 2006 were studied. The mean time of follow up was 42.2 (± 4.0) months and the mean interval between applications was 8 (± 0.51) months. The mean age of the patients at the beginning of application was 48.0 (± 3.0) years old, and 51.6 (± 3.0) years old at the last application. The evaluation was carried through the analysis of photographic documentation from before the first and last applications, and both frontal and glabellar rhytids were evaluated according to standardized scale, as well as data collected from patients charts. RESULTS: the long term analysis demonstrated that: 1) improvement of the static rhytids of the frontal region in 62,5% of patients and such rhytids remained unaltered in 37.5% of the patients; 2) improvement of the static rhytids of the glabellar region in 47.2% of the patients, they remained unaltered in 50% of the patients and there was a slight worsening in 2.8% of the patients; 3) improvement of the dynamic rhytids of the frontal region in 84.7% of patients, and they remained unaltered in 15.3% of the patients; 4) improvement of the dynamic rhytids of the glabellar region (corrugator) in 63.9% of the patients, they remained unaltered in 26.4% of the patients and there was a slight worsening in 9.7% of the patients; 5) improvement of the dynamic rhytids of the glabellar region (procerus) in 57% of the patients, they remained unaltered in 32% and there was a slight worsening in 11% of the patients. The mean total dosage of botulinum toxin A used per session in this study was 43.83 ± 1.25 U, and the total cumulative dosage was 272.08 ± 20.42 U. CONCLUSIONS: In the long run, a higher percentage of patients showed improvement or unaltered aspect of their static and dynamic rhytids of the frontal and glabellar regions of the face, when compared to the patients that showed worsening. There was no variation of the mean intervals between the applications. The total dosage of botulinum toxin was significantly increased up to the third application, and kept stable in the following sessions.

Técnicas espectroscópicas vibracionais Raman e infravermelho foram utilizadas no estudo conformacional de algumas proteínas de interesse biológico, no que se refere a aspectos estruturais de seus esqueletos polipeptídicos e microambientes de cadeias laterais de certos resíduos de aminoácidos. O trabalho foi dividido em dois grupos, de acordo com os sistemas em estudo: a) Toxina &#947; do veneno de escorpião brasileiro Tityus serrulatus. A análise vibracional revelou que o esqueleto polipeptídico dessa proteína consiste de diferentes estruturas secundárias, com predominância de folhas &#946;, seguida por estruturas do tipo não regular e &#945;-hélice, com alguma evidência de dobras &#946;. Conformação gauche-gauche-gauche foi detectada para os segmentos CCSSCC das quatro pontes dissulfeto. A intensidade do dubleto Raman da Tyr a 853 e 828 cm-1 indicou que 4 dentre 5 resíduos de Tyr encontram-se expostos na superficie molecular. Também há indicações de que os 3 resíduos de Trp apresentem localização externa. Sob o ponto de vista qualitativo, as características conformacionais da toxina no estado sólido amorfo e em solução são virtualmente as mesmas. b) Fosfolipases A2 de pâncreas de porco e de Crotalus durissus terrificus. Mudanças confarmacionais foram detectadas para as moléculas de fosfolipase como consequência de diferentes condições experimentais tais como mudança de estado físico, presença de certas espécies iônicas e interação com um análogo de substrato e com o próprio substrato. Características conformacionais discrepantes foram observadas para a forma sólida amorfa e forma cristalina da fosfolipase pancreática. Transições conformacionais foram detectadas para a transformação zimogênio &#8594; fosfolipase A2 e diferentes conteúdos estruturais foram calculados para a forma tóxica e atóxica dessa enzima. Todas essas mudanças conformacionais envolveram basicamente a arquitetura do esqueleto polipeptídico, não afetando a conformação das cadeias laterais dos resíduos de amino ácidos. As pontes dissulfeto apresentaram consistentemente uma conformação ggg a qual não foi perturbada por nenhuma das condições experimentais empregadas. A ocorrência externa de resíduos de triptofano constituiu uma característica comum para os sistemas ensaiados, assim como a localização predominante de residuos de tirosina em microambientes hidrofílicos, provavelmente na superficie molecular. / Raman and infrared spectroscopies were used to investigate conformational features of some proteins of biological interest, in what concerns structural aspects of their polypeptide backbones and microenvironments of certains amino acid residue side-chains. The work has been divided in two groups as related to the systems studied: a) Toxin &#947; from the venom of Brazilian scorpion Tityus serrulatus. The vibrational analysis has revealed that the protein polypeptide backbone consists of different secondary structures, with predominance of &#946;-sheet, followed by unordered structure and &#945;-helix, with some evidence of &#946;-turns. A gauche-gauche-gauche (ggg) conformation for the CCSSCC fragments of the four dissulfide bridges has been detected. The intensity of the Tyr Raman doublet at 853 and 828 cm-1 indicated that 4 out of the 5 Tyr residues are exposed at the molecular surface. External localization of the 3 Trp residues has also been indicated. Under a qualitative point of view, conformational features of the toxin the amorphous solid state and in solution were virtually the same. B) Crotalus durissus terrificus and porcine pancreatic phospholipases A2. Conformational changes were detected for the phospholipases molecules as a consequence of different conditions such as change of physical state, presence of certain ionic species and interaction with a model substrate analog and with the substrate itself. Amorphous and crystalline solid pancreatic phospholipases presented discrepant conformational features. Conformational transitions were detected for the pancreatic zymogen &#8594; phospholipase A2 transformation and different secondary structures contents were observed for the toxic and the non toxic phospholipase melecules. All those structural changes heve been shown to involve primarily the architecture of the polypeptide backbone rather than the conformation of amino acid residue side-chains. Disulfide bridges have shown consistently a ggg conformation which has not been disturbed by any of the experimental conditions employed. The external occurrence of tryptophan residues has been a common feature for the systems assayed, as well as the predominant localization of tyrosine residues in hydrophylic environments, probably at the molecular surface.

Neste trabalho foram pesquisados os efeitos in vitro da metaloproteinase jararagina, em modelo de células de tumores de mama humana MCF7, T47D e murina (Tumor de Ehrlich), além de células normais, avaliando-se a viabilidade celular, morfologia, modificações nas fases do ciclo celular e tipo de morte celular; como os efeitos no modelo murino nas formas ascítica e sólido-ortotópica de Ehrlich. Os resultados obtidos mostraram que a jararagina diminui significativamente a viabilidade e adesão de maneira dose dependente, formação de agregados e estruturas tipo esferoides com formação túbulo-acinar. Os parâmetros antitumorais in vivo, não mostraram diminuição no volume tumoral ascítico, entretanto, no modelo ortotópico, a jararagina induz resposta inflamatória e remodelação da matriz extracelular e resulta em alterações na distribuição e organização do colágeno. Conclui-se que a jararagina induz citotoxicidade nas linhagens de células tumorais de mama e normais, e foi capaz de induzir infiltrado inflamatório durante o crescimento e disseminação das células tumorais. / The present study investigated the in vitro effects of metalloproteinase jararhagin in human breast tumor cells model MCF7 and T47D, murine tumor cells (Ehrlich\'s tumor), and normal cells, assessing cell viability, morphological alterations, changes in the cell cycle phases and death cell, as the effects on ascitic and solid orthotopic murin Ehrlich tumor. The results showed that jararhagin significantly decreases adhesion and cell viability in a dose dependent, with cells aggregates and spheroids with tubulo-acinar formation. The in vivo parameters showed no decrease in ascites tumor volume, however, the orthotopic model, jararhagin induces the inflammatory response and extracellular matrix remodeling with changes in the collagen distribution and organization. It is concluded that jararhagin induces cytotoxicity in breast tumor and normal cell lines, and was able to induce inflammatory infiltrate during the growth and dissemination of tumor cells.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gabriel Montoro Nicacio.pdf: 4088906 bytes, checksum: 508e88d0a09b6a25c4f8b77058547fe5 (MD5) Previous issue date: 2015-11-25 / This study aims to determine the efficacy of intra-articular (IA) administration of botulinum toxin type A (BoNT/A) in dogs with signs of chronic pain associated with hip dysplasia. In a double-blind design fourteen dogs were randomized and distributed into two groups: BoNT (n=7): IA injection with 25U (0,5 mL) of botulium toxin; Control (n=7): IA injection with saline solution (0.5 mL). All dogs received conventional treatment with oral and carprofen (2.2 mg/kg, every 12 h, 15 days), and chondroitin sulfate (750-1000 mg, every 12 h, 90 days). The clinical signs of HD were evaluated prior to treatment (baseline), 15, 30, 60, and 90 days after the IA injection by the veterinary using a score system and by the owners with a questionnaire about their dog s condition using the Canine Brief Pain Inventory (CBPI) and Helsinki Chronic Pain Index (HCPI). The data were analyzed using test unpaired-t, ANOVA, Tukey test (P < 0.05). There was no difference between groups in the scores measured by the veterinary and by the owners (CBPI and HCPI). In comparison over time lower scores were observed in both groups during 90 days from baseline in the researcher evaluation and in the HCPI. The same result was obtained by the CBPI evaluation to the control group whereas for the BoNT group the difference was only observed in the first 60 days after IA injection. Analgesic intervention was not necessary during the evaluation period. Both treatments reduced the clinical signs associated with hip dysplasia, however adjunctive administration of BoNT didn t potentialize the results. / Objetivou-se avaliar a administração intra-articular (IA) da toxina botulínica tipo A (BoNT/A) como adjuvante do controle da dor crônica em cães com displasia coxofemoral (DCF). Em delineamento duplo-cego, 14 cães foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: BoNT (n=7): administração IA de 25U (0,5 mL) de toxina botulínica; Controle (n=7): administração IA de 0,5 mL de solução salina. Para todos os animais foi prescrito tratamento convencional com carprofeno (15 dias) e sulfato de condroitina (90 dias). Os sinais clínicos da DCF foram avaliados, antes do tratamento (basal), 15, 30, 60 e 90 dias após a injeção IA, por sistema de escore pelo pesquisador e mediante questionários respondidos pelos proprietários dos cães, empregando-se o Breve Inventário de Dor Canina (BIDC) e o Indicador de Dor Crônica de Helsinque (IDCH). Intervenção analgésica foi permitida se o somatório dos escores do BIDC e/ou IDCH excedesse 50%. Os resultados foram analisados pelo teste t não-pareado, ANOVA, teste de Tukey (P < 0,05). Não houve diferença entre os grupos nos escores avaliados pelo médico veterinário ou pelos proprietários (BIDC e IDCH). Na comparação ao longo tempo, escores inferiores foram observados em ambos os grupos durante 90 dias em relação ao basal na avaliação do pesquisador e no IDCH. O mesmo resultado foi obtido na avaliação pelo BIDC para o grupo controle, enquanto no grupo BoNT a diferença só foi observada nos primeiros 60 dias após a injeção IA. Intervenção analgésica não foi necessária durante o período de avaliação. Ambos os tratamentos reduziram os sinais clínicos associados à DCF, porém a administração adjuvante de toxina botulínica não potencializou os resultados.

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2018-06-19T15:38:25Z No. of bitstreams: 1 Maria Eliege de Souza.pdf: 1276931 bytes, checksum: dc49846f1db7db8cc9034d54ff988caf (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-19T15:38:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Eliege de Souza.pdf: 1276931 bytes, checksum: dc49846f1db7db8cc9034d54ff988caf (MD5) Previous issue date: 2015-12-14 / The cerebral palsy (CP) is characterized by a group of non progressive disorders of the brain’s development and posture caused by a malformation or brain injury. As treatment , there are therapeutic approaches aimed at normalizing muscle tone and prevent change in the relation between bone growth and muscle, that can lead to poor posture and structured deformities. The aim this study was to investigate the effects of botulinum toxin type A (TB-A) for spasticity and functionality in spastic CP childrem. This was a prospective, controlled, randomized, consisting of 24 children (aged 5 to 12 years) with spastic CP, being divided into two groups: experimental group (EG) consisting of 12 patients (mean age 7.83 ± 2, 07 years) treated with TB-A toxin and physiotherapy and control group (CG) with 12 patients (mean age 8.50 ± 2.17 years) treated only with physical therapy. All participants were assessed through motor and functional scales (GMFCS, GMFM-88, Ashworth, Berg Balance Scale, Time up and go -TUG and Inventory Assessment Pediatric Disorders - ASK) at three different times: before treatment, 30 days and 3 months after the treatment proposed. By analysis of variance (ANOVA) for repeated measures it was observed significant differences (p < 0.001) between groups (groups vs treatment) to the data obtained in the GMFCS, GMFM-88, BERG, TUG, Ashworth and ASK, being observed functional improvement only for the GE group. In this study it was concluded that the use of TB-A provides a significant improvement on spasticity and child functionality with spastic CP, over a period of up to 3 months after application. / A Paralisia Cerebral (PC) é caracterizada por um grupo não progressivo de desordens do desenvolvimento e postura decorrentes de uma malformação ou lesão cerebral. Como tratamento, destacam-se abordagens terapêuticas que visam normalizar o tônus muscular e prevenir alteração na relação entre o crescimento ósseo e o muscular, que podem provocar posturas inadequadas e deformidades estruturadas. Dessa maneira, o objetivo desse estudo foi verificar os efeitos da toxina botulínica tipo A (TB-A) sobre a espasticidade e funcionalidade da criança com PC espástica. Esse foi um estudo prospectivo, controlado, randomizado, constituído por 24 crianças (idade entre 5 e 12 anos) com PC espástica, distribuídas em dois grupos sendo: Grupo experimental (GE) constituído com 12 pacientes (idade média 7,83  2,07 anos) tratadas com toxina TB-A e fisioterapia e Grupo controle (GC) sendo 12 pacientes (idade média 8,50  2,17 anos) tratados somente com fisioterapia. Todos os participantes foram avaliados por meio de escalas motoras e funcionais (GMFCS, GMFM-88, Ashworth, escala de equilíbrio de BERG, Time up and go –TUG e o Inventário de Avaliação Pediátrica de Disfunções - PEDI) em três momentos distintos: antes do tratamento, 30 dias e 3 meses após o tratamento proposto. Por meio da análise de variância (ANOVA) para medidas repetidas foi possível observar diferenças significativas (p < 0,001) entre os grupos (grupos vs tratamento) para os dados obtidos na escala de GMFCS, GMFM-88, BERG, TUG, Ashworth e PEDI, sendo observada melhora funcional somente para o grupo GE. Nesse estudo foi possível concluir que o uso da TB-A proporciona uma melhora significativa sobre a espasticidade e funcionalidade da criança com PC espástica, em um período de até 3 meses após sua aplicação.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A vacina anti-diftérica de uso corrente no Brasil (DTP), embora de alta eficácia na prevenção da difteria, está associada com episódios de toxicidade e reatogenicidade no recipiente vacinal, resultantes de proteínas residuais derivadas do processo de produção ou detoxificação. Estratégias para o desenvolvimento de vacinas menos reatogênicas e ao mesmo tempo mais eficazes e economicamente viáveis contra a difteria têm sido alvo de intensa investigação. A alternativa proposta por nosso grupo é a utilização da vacina contra a tuberculose (Mycobacterium bovis BCG sub-cepa Moreau), como vetor do gene que codifica o fragmento B da toxina diftérica (dtb) de 58,3 kDa. Neste trabalho o dtb foi clonado no vetor micobacteriano bifuncional (pUS977) de expressão citoplasmática e os clones recombinantes (pUS977dtbPW8), após a transformação do BCG, foram testados com relação a expressão do DTB em BCG e quanto a antigenicidade frente a anticorpos policlonais anti-toxóide diftérico por Immunobloting. A integridade do gene dtb e a identidade das sequências de DNA da construção plasmidial pUS977dtbPW8 foram confirmadas por sequenciamento de DNA e análise de similaridade. A imunogenicidade do BCGr pUS977dtbPW8 expressando o DTB foi investigada em camundongos BALB/c, os resultados obtidos revelaram uma soroconversão específica (IgG). A infectividade e atividade microbicida do BCGr pUS977dtbPW8 no ambiente intracelular foi avaliada através da infecção de linhagens de células de monócitos humano (THP-1), os dados obtidos indicaram que houve sobrevivência intracelular em até 12 dias. Nesse contexto, esplenócitos dos camundongos imunizados com 30 e 60 dias foram extraídos, mostrando que o BCGr pUS977dtbPW8 persistiu até 60 dias na ausência de pressão seletiva e a viabilidade celular não sofreu alteração significativa durante o período testado. Por outro lado, o BCGr pUS977dtbPW8, quando submetido a seis sub-cultivos consecutivos in vitro não apresentou diferença significativa na capacidade de expressar o DTB, demonstrando portanto a persistência da estabilidade funcional da linhagem recombinante. A estabilidade estrutural da construção pUS977dtbPW8 também foi avaliada por PCR confirmando a presença do gene dtb em colônias do BCGr pUS977dtbPW8 . Adicionalmente, foi possível avaliar preliminarmente in vitro a capacidade soroneutralizante dos soros de camundongos imunizados com BCGr pUS977dtbPW8 após 30 e 60 dias em células VERO. A ação citotóxica da toxina diftérica entre as diluições de 1/4 e 1/16 foram neutralizadas com o pool de soros imunes com 60 dias. Finalmente, em nosso estudo foi possível avaliar o potencial da vacina BCG como vetor de expressão de um antígeno de Corynebacterium diphtheriae in vitro e in vivo. / The diphtheria vaccine currently used in Brazil (DTP), despite its history of high efficacy in the prevention of diphtheria, is associated with episodes of toxicity and vaccine reactogenicity in the vaccinee, resulting from the presence in the vaccine of residual proteins derived from the production process or detoxification. Strategies for the development of new vaccines more effective and economically viable against diphtheria have been the subject of intense investigation. The alternative proposed by our group is the use of the vaccine against tuberculosis (Mycobacterium bovis BCG Moreau sub strain) as a vector for the gene that encodes the 58.3 kDa fragment B of the diphtheria toxin (DTB). In our project the dtb gene was cloned into the bifunctional vector pUS977 for cytoplasmic expression and recombinant BCG (rBCG) clones, selected after transformation of BCG, were tested for expression of the DTB polypeptide and antigenicity against polyclonal antibodies anti- diphtheria toxoid by immunoblotting. The integrity and identity of the DNA sequence encoding the dtb gene carried by the plasmid construct pUS977dtbPW8 was confirmed by DNA Sequencing and Analysis of Similarity. The immunogenicity of the rBCG expressing the DTB was investigated in BALB/c mice and the results revealed a specific seroconversion (IgG). Also, infectivity and microbicidal activity were analyzed in the intracellular environment by infecting human monocytes (THP-1 cell line) with rBCG. The data obtained indicated intracellular survival within 12 days. In this context, splenocytes collected from mice at days 30 and 60 after immunization were removed and assayed for live bacteria. The results showed that rBCG persisted viable up to 60 days in the absence of selective pressure and cell viable counts did not change significantly during testing. Additionally, the rBCG subjected to six consecutive sub-cultures in vitro showed no significant difference in the ability to express the DTB, thus demonstrating the functional stability of the recombinant vaccine. The structural stability of the construct pUS977dtbPW8 was also confirmed by PCR detection of the dtb gene in rBCG colonies. Also, it was possible to have a preliminary evaluation of the neutralizing capacity of sera from mice immunized with BCGr 30 and 60 days after immunization. The cytotoxic action of diphtheria toxin, between dilutions 1/ 4 and 1/16, was neutralized by mice sera in an in vitro assay using VERO cells. Finally, in our study it was possible to evaluate the potential of BCG as a vector for expression of an antigen of Corynebacterium diphtheriae in vitro and in vivo.