INTRODUÇÃO: O objetivo do presente estudo é apresentar dados morfométricos da fenda palpebral e da função do músculo levantador da pálpebra superior, ao longo de 6 meses de seguimento, após a aplicação da toxina botulínica tipo A, em pacientes com retração palpebral nas fases aguda e crônica da orbitopatia distireoidiana. MÉTODOS: Estudo prospectivo, no qual foram incluídos 24 indivíduos, divididos em dois grupos, agudos (n=12) e crônicos (n=12). Foram submetidos à aplicação de toxina botulínica na dose de 5 UI/0,1 ml em uma das pálpebras superiores e seguidos por 6 meses. A avaliação palpebral foi registrada por meio de captação de imagens com uma câmera filmadora de vídeo conectada a um microcomputador. Os valores médios obtidos nos diferentes momentos analisados foram comparados entre os dois grupos. RESULTADOS: A maioria dos pacientes apresentou melhora da retração da pálpebra superior, com redução média de 3,05 mm no grupo agudo e 3,81 mm no grupo crônico. Esta redução foi significativa até 1 mês no grupo agudo e até 3 meses no grupo crônico. Houve diminuição da função do músculo levantador e da diferença entre as áreas lateral e medial da fenda palpebral nos olhos tratados em ambos os grupos. No olho contralateral, houve aumento significativo da fenda palpebral até 2 semanas após a aplicação. Não houve diferença na freqüência dos efeitos colaterais entre os 2 grupos. CONCLUSÕES: A injeção de 5 unidades foi eficaz na redução da retração e da função do músculo levantador e na melhora do contorno palpebral superior, nos pacientes na fase aguda e crônica da orbitopatia distireoidiana, embora esta melhora tenha sido menos duradoura no grupo agudo / INTRODUCTION: The objective of this study is to compare morphometric data of the eyelid fissure and the levator muscle function after transcutaneous injection of botulinum toxin type A with six-month follow-up in patients with upper eyelid retraction from acute and chronic dysthyroid orbitopathy. METHODS: This was a prospective study that included 24 individuals with dysthyroid orbitopathy, divided into two groups, acute (n=12) and chronic (n=12). They were given a 5 UI/0,1 ml dose of botulinum toxin in the upper eyelid and examined periodically for 6 months. Clinical eyelid examination was performed and recorded using a video camera connected to a microcomputer. Mean values taken at different follow-up points were compared for the two groups. RESULTS: Most patients experienced marked improvement in upper eyelid retraction, with a mean reduction of 3.05 mm in acute group and 3.81 mm in chronic group. This reduction was significantly smaller during 1 month in acute group and during 3 months in chronic group. Reduction in levator function and in the difference between lateral and medial lid fissure measurements was observed in both groups. Measurements of the contralateral eye increased up to 2 weeks after the application. No difference was observed between the study groups with regard to the observed side effects. CONCLUSIONS: A single 5-unit botulinum toxin injection improved upper eyelid retraction, reduced levator function, and produced an adequate lid contour in patients with acute and chronic dysthyroid orbitopathy. The effect lasts longer in patients with chronic disease than in patients with acute disease.

Pulchellina é uma proteína inativadora de ribossomo (RIP) isolada de sementes de Abrus pulchellus fragmento que codifica a cadeia A da pulchellina (PAC) foi clonado e inserido no vetor pGEX-5X para expressar a cadeia A recombinante (rPAC) como uma proteína de fusão em Escherichia coli. A análise da seqüência de aminoácidos mostrou que a rPAC apresenta uma alta identidade seqüencial (&#62 86%) com a cadeia A da abrina-c. A habilidade que a rPAC possui para depurinar rRNA em ribossomos de levedura também foi demonstrada em testes in vitro. Objetivando verificar a atividade tóxica do produto heterólogo, nós promovemos a associação in vitro da rPAC com a cadeia B recombinante da pulchellina (rPBC). Ambas as cadeias foram incubadas na presença de um sistema de redução/oxidação, originando um heterodímero ativo (rPAB). O rPAB apresentou uma massa molecular aparente de aproximadamente 60 kDa, similar a pulchellina nativa. As atividades tóxicas do rPAB e da pulchellina nativa foram comparadas através da injeção intraperitonial em camundongos, usando diferentes diluições de cada proteína. O rPAB foi capaz de matar 50% dos animais testados com doses de 45&#956g.kg-1. Nossos resultados mostraram que o heterodímero recombinante apresenta tanto toxicidade quanto um padrão conformacional similar a pulchellina nativa. Estudos usando cultura de tecidos também foram realizados com o objetivo de investigar a presença da pulchellina em calos obtidos a partir de sementes de A. pulchellus. Segmentos de cotilédones de sementes imaturas foram inoculados em meio MS suplementado com diferentes concentrações de auxina, citocinina e sacarose para promover a indução dos calos. A expressão da pulchellina nos calos foi monitorada através de RT-PCR e testes de atividade biológica. Os calos obtidos após 35 dias foram congelados, macerados e submetidos a extração de RNA total e proteínas. Um fragmento específico de DNA que codifica a cadeia A da pulchellina foi amplificado a partir do RNA total sugerindo a síntese da proteína nos calos. Isto foi confirmado no extrato bruto de calos, que mostrou atividade hemaglutinante contra sangue de coelho e uma alta toxicidade quando injetado via intraperitoneal em camundongos.O extrato bruto também foi submetido à cromatografia de afinidade em coluna de Sepharose-4B. A fração retida na coluna apresentou duas bandas protéicas quando analisadas em gel de poliacrinamida, sob condições desnaturantes, apresentando um padrão similar ao obtido com a pulchellina de semente. / Pulchellin is a type 2 ribosome-inactivating protein (RIP) isolated from seeds of the Abrus pulchellus tenuiflorus plant. The DNA fiagment encoding Pulchellin A-chain (PAC) was cloned and inserted in pGEX-5X to express the recombinant pulchellin Achain (rPAC) as a fusion protein in Escherichin coli. The deduced amino acid sequence analyses of the rPAC presented a high sequential identity (&#62 86%) with the A-chain of abrin-c. The ability of the rPAC to depurinate rRNA in yeast ribosome was also demonstrated in vitro. Intending to validate the toxic activity we promoted the in vitro association of the rPAC with the recombinant pulchellin binding chain (rPBC). Both chains were incubated in the presence of a reducedloxidized system, yielding an active heterodimer (rPAB). The rPAB showed an apparent molecular mass of about 60 D a similar to the native pulchellin. The toxic activities of the rPAB and native pulchellin were compared by intraperitoneal injection in mice using different dilutions. The rPAB was able to kill 50% of the tested mice with doses of 45&#956g.kg-1. Our results indicated that the recombinant heterodimer presented toxic activity and a conformational pattern similar to pulchellin. Studies using tissue cultures were also performed to investigate the presence of the pulchellin in callus established from seed explants of A. pulchellus. Cotyledon segments of immature seeds were inoculated in basal medium MS supplemented with different concentrations of auxin, citokinin and sucrose in order to determine the best callus induction. The pulchellin expression was monitored in callus cultures by RT-PCR and biological activity. The calli obtained aRer 35 days were freeze dried, macerated and submitted to extraction of total RNA and proteins. A specific DNA fragment codifying the A-chain pulchellin was amplified from callus RNA suggesting the synthesis of the protein. This was confirmed in the calli crude extract that showed haemagglutinating activity against rabbit blood cells and a high intraperitoneal toxicity to mice. The crude extract was also submitted to affinity chromatography on a Sepharose-4B column. The retained protein, showed to be composed by two main bands in polyacrylamide gel electrophoresis, in denaturating conditions, with a similar pattern to the results obtained with seeds pulchellin.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A soja à uma das leguminosas mais utilizadas no mundo, sendo o uso justificado pelo elevado teor nutricional de seus grÃos, constituÃdos, principalmente, por proteÃnas e lipÃdios. A estimativa atual da produÃÃo mundial de soja à de 250.000 toneladas/ano, porÃm hà fatores limitantes dessa produÃÃo, como o ataque de pragas. As doenÃas causadas por fungos, por exemplo, causam na soja perdas em torno de 4%, sendo 20% destas causadas por Septoria glycines e Cercospora kikuchii. Assim, a busca por medidas alternativas de controle à crescente, particularmente em diminuiÃÃo ao uso de agrotÃxicos, mas, para isso, à importante o entendimento dos mecanismos de defesa vegetal. Das sementes de soja foi purificada uma proteÃna, denominada toxina da soja (SBTX), que à ativa contra diversos fungos de plantas e do homem e, tambÃm, à neurotÃxica para ratos e camundongos, razÃo pela qual recebeu o nome de toxina. A SBTX apresenta massa molecular de 44 kDa, constituÃda por duas subunidades (17 e 27 kDa) codificadas por genes distintos e jà foi identificada nas sementes, raÃzes, caules e folhas. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o perfil de expressÃo gÃnica da SBTX em plantas cujas folhas primÃrias foram tratadas com elicitores (biÃtico e abiÃtico), usando a tÃcnica de PCR em tempo real, na tentativa de reforÃar o papel fisiolÃgico de defesa proposto para proteÃna. Assim sendo, Ãcido salicÃlico, injÃria mecÃnica e esporos do fungo Cercospora kikuchii foram utilizados como elicitores e os nÃveis de transcritos para as duas subunidades proteicas de SBTX avaliados. Respostas de induÃÃo foram verificadas para ambas as subunidades da SBTX, porÃm os perfis de expressÃo gÃnica foram diferenciados. Para o gene SBTX 27 kDa, o maior nÃvel de transcritos foi detectado quando o tratamento envolveu injÃria mecÃnica associada ao Ãcido salicÃlico, correspondendo a um aumento de cerca de 100 vezes apÃs 12 horas de aplicaÃÃo do tratamento. Jà para o gene SBTX 17 kDa este aumento nÃo foi verificado na mesma intensidade, tendo sido apenas em torno de 10 vezes. Os dados em conjunto mostram que SBTX à uma proteÃna passÃvel de induÃÃo por elicitores biÃticos e abiÃticos, reforÃando o seu papel fisiolÃgico de defesa, podendo vir a ser utilizada como ferramenta biotecnolÃgica no sentido de amenizar as perdas causadas por fungos. / Soybean is a legume most commonly utilized in the world, whose use is justified by the high nutritional content of its grain, consisting mainly of proteins and lipids. The current estimate of global soybean production is 250,000 tons/year, but there are limiting factors of this production, such as the pest attack. The fungal diseases, for example, cause losses in soybeans around 4%, where 20% of these are derived from infection by Septoria glycines and Cercospora kikuchii. Thus, the search for alternative measures is increasing, particularly in reducing the use of pesticides, but for this it is important to understand the plant defense mechanisms. Soybean toxin (SBTX) is a protein purified from soybean seeds with activity against plant and human pathogenic fungi and neurotoxic action to rats and mice, hence the reason it received the name of toxin. SBTX shows a molecular mass of 44 kDa, composed of two subunits (17 and 27 kDa) encoded by distinct genes and it has been detected seeds, roots, stems and leaves. This study aimed to evaluate the gene expression profile of SBTX in soybean plants whose primary leaves were treated with elicitors (biotic and abiotic), using the real-time PCR technique, in an attempt to strength the physiological role of defense proposed for this protein. Therefore, salicylic acid, mechanic injury and Cercospora kikuchii spores were used as elicitors and it was measured the transcript levels of SBTX subunits. Induction responses were observed for both subunits of SBTX, but the gene expression profiles were different. For SBTX 27 kDa gene, the highest transcript level was detected when the treatment involved mechanic injury associated to salicylic acid, an increase of about 100 fold after 12 hours of treatment application. Nevertheless, for SBTX 17 kDa gene the induction response was much smaller, it was only around 10 times. The data together show that SBTX is an inducible protein by biotic and abiotic elicitors, reinforcing its physiological role of defense, which could eventually be used as biotechnological tool in order to mitigate losses caused by fungi.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-08T13:37:15Z No. of bitstreams: 1 Jaciel Benedito de Oliveira.pdf: 2001810 bytes, checksum: 849f2538ec8321a9c6a102564bb281e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-08T13:37:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jaciel Benedito de Oliveira.pdf: 2001810 bytes, checksum: 849f2538ec8321a9c6a102564bb281e9 (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The aim of this study was to observe the morphometric, histological and histométricos aspects of submandibular glands of rats treated with botulinum toxin type A (BTX-A) and with bovine gelatin. We used 80 submandibular glands of adult Wistar rats and divided into three groups: group I, control (n = 14); group II (n = 34) submitted the intraglandular injection of bovine gelatin (0.25 mg); and group III (n = 32) treated with intraglandular injection of botulinum toxin type A (2.5 U). The groups II and III were divided into 3 subgroups according to the day of analysis of glands (7, 15 and 28 days after treatment), when they were removed, heavy and measures immediately for morphometric analysis. Next, were fixed in paraformaldehyde 4 % and processed conventionally for light microscopy, stained in H.E., P.A.S., alcian blue, Gomori trichrome and picrosirius red. Morphometric differences were not observed between subgroups of group III, however in group II there was a significant difference between the three subgroups in the longitudinal length (p = 0.030) and transverse length (p = 0.025), having the gland has shown greater at day 28th after treatment. Histometrically, serous and mucous acini group III, were presented with a smaller diameter compared with the acinithe subgroups treated with bovine gelatina (group II). The wall thickness of the striated duct Group III was lower than in other. Histologically, there was a greater amount of cytoplasmic vacuolization in group III. addition to the greater spacing between the acini. Thus, we conclude that botulinum toxin type A interferes with the structural organization of the submandibular glands, promoting a reduction in the diameter of serous acini and in wall thickness striated ducts, macroscopically but this difference was not significant. / O objetivo deste trabalho foi observar os aspectos morfométricos, histométricos e histológicos das glândulas submandibulares de ratas tratadas com toxina botulínica tipo A (BTX-A) e com gelatina bovina. Foram utilizadas 80 glândulas submandibulares de ratas Wistar adultas e divididas em três grupos: grupo I controle (n = 14); grupo II (n = 34) submetidas a injeção intraglandular de gelatina bovina (0,25 mg); e grupo III (n = 32) tratadas com injeção intraglandular de toxina botulínica tipo A (2,5 U). Os grupos II e III foram divididos em 3 subgrupos de acordo com o dia de análise das glândulas (7, 15 e 28 dias após o tratamento), quando foram removidas, imediatamente pesadas e medidas para análise morfométrica. A seguir, foram fixadas em paraformaldeído 4% e processadas convencionalmente para microscopia de luz, coradas em H.E, P.A.S., alcian blue, tricrômico de Gomori e picrossirius red. Testes estatísticos dos resultados morfométricos e histométricos obtiveram o nível de significância de 0,05 (5%). Morfometricamente não foram observadas diferenças entre os subgrupos do grupo III, entretanto no grupo II houve diferença significativa entre os três subgrupos no comprimento longitudinal (p = 0,030) e comprimento transversal (p = 0,025), tendo a glândula se apresentado maior no 28º dia após o tratamento. Histometricamente, os ácinos serosos e mucosos do grupo III, apresentaram-se com diâmetro menor quando comparado com o ácinos dos subgrupos tratados com gelatina bovina (grupo II). A espessura da parede do ducto estriado do grupo III foi menor que nos demais. Histologicamente, observou-se a maior quantidade de vacuolizações citoplasmáticas no grupo III, além do maior espaçamento entre os ácinos. Dessa forma, concluímos que a toxina botulínica tipo A interfere na organização estrutural das glândulas submandibulares, promovendo uma diminuição no diâmetro dos ácinos serosos e na espessura da parede dos ductos estriados, mas que macroscopicamente tal diferença não se mostrou significante.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-22T16:06:42Z No. of bitstreams: 1 Alberto Belo Esteves Filho.pdf: 530229 bytes, checksum: 28c08bb0e17e310e91da456437ad8f31 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-22T16:06:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alberto Belo Esteves Filho.pdf: 530229 bytes, checksum: 28c08bb0e17e310e91da456437ad8f31 (MD5) Previous issue date: 2008-02-01 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Cotton plants have been genetically transoformed with genes from the bacterium Bacillus thuringiensis Berliner (Bt) which confers the plant resistance against certain lepidopoteran pest species. The Bt-cotton carries genes that express the toxin Cry1Ac. This creates new interactions in the agroecossystems encouraging researches to answer the questions about the potential impact on nontarget organisms. In the cotton ecosystem, the two spotted spider mite, Tetranychus urticae Koch, acquires and mantain in its body high concentrations of Cry toxins (Cry1Ab from Bt-corn and Cry1Ac from Bt-cotton). This finding leads to the question about the potential long term impact on the phytophagous minte, a nontarget, and their predators. Thus, this work investigated the biology and behavior of T. urticae and its predatory mite, Phytoseiulus macropilis (Banks) on Bt-cotton. The results obtained during three successive generations showed that the Bt-cotton does not affect negatively its development, viability of immature stages and reproductive output. Furthermore, the preference for feeding and oviposition of T. urticae and its predator, P. macropilis, were similar on both cotton types. In addition, P. macropilis exhibited similarpredatory behavior on T. urticae fed on both cotton types. Despite of similar results, T. urticae acquired about 3.97 times more Cry1Ac than that expressed in the Bt-cotton plants. / Plantas de algodoeiro têm sido geneticamente transformadas com genes da bactéria Bacillus thuringiensis Berliner (Bt) os quais conferem resistência a certas espécies de lepidópteros-praga. O algodoeiro Bt BollgardTM possui genes que expressam a toxina Cry1Ac. Com esta nova variável interagindo nos agroecossistemas, algumas questões foram levantadas sobre a ação de toxinas Cry em artrópodos não-alvo, motivando o desenvolvimento de pesquisas para gerar os esclarecimentos necessários. O ácaro rajado, Tetranychus urticae Koch, adquire da planta e mantêm em seu corpo concentrações elevadas de toxinas Cry (Cry1Ab do milho Bt e Cry1Ac do algodoeiro Bt). Este resultado leva ao questionamento sobre os possíveis efeitos da toxina sobre este ácaro fitófago e aos seus predadores. Assim, este trabalho investigou a biologia e comportamento de T. urticae e do seu predador, Phytoseiulus macropilis (Banks) em algodoeiro Bt e não-Bt. Os resultados, obtidos durante três gerações consecutivas, mostram que o algodoeiro Bt não afetou negativamente o tempo de desenvolvimento, a viabilidade das formas imaturas e a reprodução dos dois ácaros. Também, a preferência para a colonização e postura de T. urticae e de P. macropilis foram similares entre os algodoeiros Bt e não-Bt. Além disso, não houve alteração na preferência de P. macropilis, quando predando de T. urticae criado em algodoeiro Bt e não-Bt. O ácaro rajado adquiriu e concentrou em seu corpo aproximadamente 3,97 vezes a quantidade de Cry1Ac expressada na planta de algodoeiro.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-06-28T17:52:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Melo-MCA_dissertacao.pdf: 6271738 bytes, checksum: ce55245b114aac78286d16fa3cabf5d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-28T17:52:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Melo-MCA_dissertacao.pdf: 6271738 bytes, checksum: ce55245b114aac78286d16fa3cabf5d4 (MD5) Previous issue date: 2015-07-12 / CAPES / O Staphylococcus (S.) aureus é responsável por inúmeros casos de infecções em animais e seres humanos. Essa bactéria secreta uma grande variedade de exoproteínas, incluindo quatro hemolisinas: alfa, beta, gama e delta. A atividade hemolítica da alfa-toxina (α-HL) se deve a formação de poros em membranas celulares. A α-HL é um monômero solúvel em água, que se torna mais estável ao se oligomerizar e formar poros heptaméricos transmembranares. Devido sua importância na patogênese bacteriana, essa proteína tem sido alvo de estudos no desenvolvimento de agentes terapêuticos. Sabe-se que os compostos de base de Schiff têm apresentado significativos resultados em testes de atividade biológica, incluindo antibacteriana. Neste contexto, avaliou-se a atividade de complexos de cobre-base de Schiff no bloqueio de poros da α-HL de S. aureus. Simultaneamente, foram realizados estudos conformacionais da δ-toxina em solução aquosa. Experimentos com eritrócitos de coelho expostos a α-HL foram utilizados na seleção dos compostos. Membranas lipídicas planas artificiais com canais individuais de α-HL, em condições de fixação de voltagem, foram utilizados para entender o mecanismo de ação dos compostos. Finalmente, avaliou-se através de docking molecular a interação entre os compostos e o canal de α-HL, visando corroborar o mecanismo de bloqueio. No estudo da δ-toxina, dinâmica molecular foi usada para determinar sua conformação em solução aquosa. Observou-se que os complexos de cobre inibiram parcialmente a atividade hemolítica da α-HL, devido ao bloqueio parcial dos canais desta toxina. O mecanismo molecular desse bloqueio ocorre pela interação dos compostos com a região de constrição do poro. Observou-se ainda que a δ-toxina em solução aquosa apresenta de 5 a 14 resíduos enovelados. Sugere-se que os complexos de cobre são potenciais candidatos a futuros agentes coadjuvantes no tratamento de infecções por S. aureus. / Staphylococcus (S.) aureus is responsible for a great number of infecctions in animals and humans. This bacteria produces several exoproteins and virulence factors, including four hemolysins: alfa, beta, gama and delta. The alfa-toxin (α-HL) hemolytic activity occurs due to the formation of pores in cellular membranes. α-HL is a soluble monomer in water, but becomes more stable when oligomerize and form transmembranar heptameric pores. Considering its importance for bacterial patogenesis, this protein has been target of studies on new antimicrobial agents. For example, base Schiff copper compounds have been observed to show significative results in biological activity assays, including antibacterial. In this context, the present work intended to evaluate the activity of a base Schiff-copper compounds to block the S. aureus α-HL ion channel. The most effective compounds were selected based on the exposition of rabbit erythrocytes to α-HL, and tested against control conditions. The mechanism of action of these compounds were evaluated through single channel experiments in planar lipid bilayrs, through eletrophisiological techniques. Finally, molecular docking studies were employed to confirm the blocking mechanism of such compounds. Moreover, molecular dynamics simulations were used to determine δ-toxin conformation in aqueous solutions. The obtained results indicated that the copper(II) compounds were capable of partially blocking the α-HL hemolytic activity, due to partial blockade of the ionic channels. The molecular mechanis of pore blockade was identified to mainly occur due to the interaction of the compounds to the pore constriction. Additionally, it was observed that δ-toxin in aqueous solution presents from 5 to 14 amino acids showing α-helical content. Based on these results, we suggest that such compound may be further evaluated as a coadjuvante agent for the treatment of staphylococcal infections

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / C. difficile toxin A (TxA) plays an important pathogenic role in antibiotic-induced diarrhea and pseudomembranous colitis, a condition characterized by intense mucosal inflammation and secretion. Agonist activity at A2A adenosine receptors (A2A ARs) attenuates inflammation and damage in many tissues. This study evaluated the effect of a new selective A2A AR agonist (4-{3-[6-amino-9-(5-cyclopropylcarbamoyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-2-yl]prop-2-ynyl}piperidine-1-carboxylic acid methyl ester; ATL313) on TxA-induced enteritis in murine ileal loops. ATL313 (0.05-5 nM) and/or the A2A AR antagonist (ZM241385; 5 nM) or PBS were injected inside ileal loops immediately prior to challenge with TxA (1-10 mg/loop) or PBS. Intestinal fluid volume/length and weight/length ratios were calculated 3 h later. Ileal tissue samples were collected for measurement of myeloperoxidase (MPO) content, evaluation of ADA activity, for histopathology and apoptotic immunohistochemistry (ApopTagÃ) and for assessment of TNF-&#945; levels by ELISA. TxA (1-10 Âg/loop) significantly (p<0.05) increased volume/length and weight/length, reaching maximum values at 5Âg/loop dosage. ATL313 (5 nM) treatment significantly (p<0.05) reduced TxA-induced volume/length and weight/length, as well as prevented mucosal disruption and TxA-induced apoptosis. These protective effects were reversed by ZM241385 (5 nM), the A2A AR antagonist. ATL313 (5 nM) also reduced neutrophil infiltration, as measured by MPO content; reduced the toxin A-induced increase in ADA activity. Prior to the challenge with TxA, a systemic injection of fucoidin, but not PBS, also reduced tissue destruction and toxin A-induced increase in ADA activity. In conclusion, the A2A AR agonist ATL313 has a great antiinflammatory effect in TxA-induced mice enteritis, significantly reducing tissue destruction and ADA activity. In addition, our data suggested that TxA-induced increase in ADA activity and tissue damage in murine ileal loops are related to the neutrophil infiltration induced by this toxin. / A toxina A do Clostridium difficile (TxA) desempenha um importante papel na patogÃnese da diarrÃia induzida por antibiÃticos e na colite pseudomembranosa, uma condiÃÃo caracterizada por intensa secreÃÃo e inflamaÃÃo da mucosa. A estimulaÃÃo de receptores A2A da adenosina reduz a inflamaÃÃo e o dano tecidual. Neste estudo, avaliou-se o efeito de um novo agonista seletivo para receptores A2A da adenosina (metil Ãster do Ãcido 4-{3-[6-amino-9-(5-ciclopropilcarbamoil-3,4- dihidroxitetrahidrofuran-2-il)-9H-purin-2-il]prop-2-inil}piperidina-1-carboxÃlico; ATL313) na enterite induzida pela TxA em alÃas ileais de camundongos. O ATL313 (0,05-5 nM) e/ou o antagonista dos receptores A2A da adenosina (ZM241385; 5 nM) ou PBS foram injetados em alÃas ileais imediatamente antes da injeÃÃo de TxA (1-10 Âg/alÃa) ou PBS. As razÃes volume de secreÃÃo/comprimento da alÃa e peso/comprimento da alÃa foram calculadas 3h depois. Amostras de tecido foram coletadas para dosagem de atividade de mieloperoxidade (MPO), atividade de ADA, histopatologia, imunohistoquÃmica para apoptose (ApopTag_) e dosagem de TNF-a_ por ELISA. A injeÃÃo de TxA (1-10 Âg) nas alÃas ileais aumentou significativamente (p<0,05) as razÃes volume de secreÃÃo/comprimento da alÃa e peso/comprimento da alÃa com pico em 5Âg. O tratamento das alÃas com ATL313 (5 nM) reduziu significativamente (p<0,05) a secreÃÃo e o edema, preveniu a destruiÃÃo da mucosa e a apoptose induzidos por TxA. Tais efeitos protetores foram revertidos pelo antagonista dos receptores A2A de adenosina, o ZM241385 (5 nM). O tratamento com ATL313 (5 nM), reduziu ainda a infiltraÃÃo neutrofÃlica, avaliada pela dosagem de MPO, e reduziu o aumento da atividade de ADA induzidos pela TxA, bem como a dosagem de TNF-a no tecido das alÃas ileais. O prÃ-tratamento sistÃmico com fucoidina, mas nÃo com PBS, tambÃm reduziu o dano na mucosa e atividade de ADA no tecido das alÃas ileais tratadas com TxA. Assim, conclui-se que na enterite induzida pela TxA em camundongos, o agonista dos receptores A2A da adenosina (ATL313) possui um potente efeito antiinflamatÃrio, reduzindo consideravelmente a lesÃo tecidual e a atividade de ADA. Nossos resultados tambÃm indicam que o aumento da atividade de ADA e o dano tecidual induzido pela TxA em alÃa ileal de camundongos està relacionado com a infiltraÃÃo neutrofÃlica induzida por esta toxina.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pedro henrique(parte_2)_Recorrigida.pdf: 952650 bytes, checksum: 7afd49b434f553dda644f41af93f0152 (MD5) Previous issue date: 2009-06-29 / In Brazil, the snake Crotalus durissus collilineatus is much studied, particularly its component crotoxina. The crotoxina is the most toxic component of venom from the species cascavéis amicanas Crotalus durissus. It is composed of two different subunits, the crotapotina (acid component) and a phospholipase A2 (basic component). The enzyme phospholipase A2 is the most studied of these poisons, being largely responsible for its toxicity. Its main effects are neurotoxicity, myotoxicity, cytotoxicity, platelet aggregation, anti-coagulant and bactericide. This study aims to purify and characterize a new phospholipase A2 isolated from Crotalus durissus collilineatus, and uses it as a model for studies of compounds with potential antinflamatório. Samples (5mg) of crude venom of Crotalus durissus collilineatus were applied on a C18 column coupled to a system semipreparativa HPLC. 20 peaks were obtained for proteins / peptides, and the increased activity of fofolipase (PLA) was detected in fraction 14. This fraction was subjected to a new phase chromatography on C18 analytical column, resulting in the isolation of a new PLA. By electrophoresis, SDS-PAGE the enzyme showed high degree of purity, with molecular mass around 13 kDa. The PLA2 activity showed optimal at pH of 8.2 and at temperatures between 35-40 º C and remains stable up to temperatures of 60 º C. According to our experiments isolated PLA was inhibited Ca2 +, and activity was not changed by Cu2 +. Manaca extract, ellagic acid and quercetin strongly inhibited the PLA, showing that this enzyme has potential for the selection of compounds with potential antiinflammatory. / No Brasil, a serpente Crotalus durissus collilineatus é muito estudada, devido a sua importância médica, já que é uma das responsáveis pelo envenenamento crotálico. A crotoxina é o componente mais tóxico do veneno das cascavéis sulamericanas da espécie Crotalus durissus. É composta por duas diferentes subunidades, a crotapotina (componente ácido) e uma fosfolipase A2 (componente básico). As fosfolipases A2 é a enzima mais estudada destes venenos, sendo a maior responsável por sua toxicidade. Dentre seus principais efeitos estão os efeitos neurotóxico, miotóxico, citotóxico, agregação plaquetária, anti-coagulante e bactericída. Este estudo tem como objetivo caracterizar uma nova fosfolipase A2 isolada de Crotalus durissus collilineatus, e utilizá-la como modelo para estudos de compostos com potencial antinflamatório. Amostras do veneno bruto de Crotalus durissus collilineatus foram aplicados em uma coluna C18 semipreparativa acoplada a um sistema HPLC. Foram obtidas 20 picos de proteínas/peptídios, sendo que a maior atividade de fofolipase (PLA) foi detectada na fração 14. Esta fração foi submetida a uma nova etapa cromatográfica, em coluna C18 analítica, resultando no isolamento de uma nova PLA. Através de eletroforese, SDS-PAGE a enzima apresentou alto grau de pureza, com massa molecular em torno de 13 kDa. A PLA2 apresentou atividade ótima em pH de 8,2 e temperatura entre 35-40 ºC, e se mantendo estável em temperaturas de até 60 ºC. De acordo com nossos experimentos a PLA isolada foi inibida Ca2+, e a atividade não foi alterada por Cu2+. Extrato de manacá, ácido elágico e quercetina inibiram fortemente a PLA, mostrando que esta enzima tem potencial para a seleção de compostos com potencial antiinflamatório.

Diante da importância das lectinas no sistema imunológico avaliamos o papel da Nattectina, lectina tipo C identificada no veneno de Thalassophryne nattereri, no desenvolvimento das respostas imunes inata e específica. A Nattectina induziu peritonite em camundongos, caracterizada pelo influxo de neutrófilos e macrófagos, acompanhada da liberação de PGE2, LTB4, IL-1<font face=\"symbol\">b, IL-6, KC, MCP-1, IL-10 e IL-12p70. A resposta imune específica induzida pela Nattectina foi caracterizada pela produção de anticorpos específicos IgG, IgG1 e principalmente IgG2a com síntese de IL-10 e IFN-<font face=\"symbol\">g pelas células esplênicas re-estimuladas in vitro. A incubação de células dendríticas imaturas com a Nattectina gerou maturação destas células com aumento da expressão de moléculas MHC classe II, CD40, CD80, CD86 e expressão de MMP-2 e MMP-9 distribuídas no núcleo e no citoplasma celular, produção das citocinas IL-10 e IL-12p70 e eficiente apresentação antigênica. Concluímos que a Nattectina é capaz de induzir inflamação e resposta imune específica do tipo Th1 mediante a ativação de células dendríticas. / Due to the importance of the lectins in the immunological system we evaluated the role of Nattectin a C-type lectin identified in the venom of Thalassophryne nattereri on development of the innate and specific immune responses. Nattectin induced a significant cellular recruitment into peritoneal cavity of mice, mainly by influx of neutrophils, followed by macrophages, with synthesis of PGE2, LTB4, IL-1<font face=\"symbol\">b, IL-6, KC, MCP-1, IL-10, and IL-12p70. The specific immune response induced by Nattectin was characterized by the production of specific antibodies IgG, IgG1 and mainly IgG2a with IL-10 and IFN-<font face=\"symbol\">g synthesis by splenic cells. Incubation of immature dendritic cells with Nattectin resulted in maturation with up-regulation of MHC class II, CD40, CD80, CD86, and expression of MMP-2 e MMP-9 distributed in nucleus and cytoplasm. Mature dendritic cells produced and release IL-10 and IL-12p70 and present the antigen efficiently. We concluded that Nattectin is able to induce inflammation and Th1 specific immune response through the activation of dendritic cells.

INTRODUÇÃO: A paralisia facial é constrangedora tanto do ponto de vista funcional quanto estético. Esta pesquisa teve por objetivo verificar o efeito da terapia miofuncional em pacientes com paralisia facial de longa duração associada à aplicação de toxina botulínica. MÉTODOS: Foram tratados vinte e cinco pacientes, divididos em dois grupos. Os pacientes do grupo A receberam quatro sessões de terapia miofuncional antes da aplicação de toxina botulínica e os pacientes do grupo B simultaneamente à aplicação. A terapia foi composta por manobras isométricas e isotônicas passivas, intra e extraorais, além de exercícios de resistência. RESULTADOS: Após a terapia miofuncional os pacientes apresentaram aumento significativo da mobilidade do lado paralisado da face, do índice de satisfação do paciente com a face, do Índice Funcional da Face (IFF) e do Índice de Bem-Estar Social (IBES). O grupo de pacientes que realizaram a terapia miofuncional previamente, apresentou freqüência significativamente maior de dificuldade para falar, enquanto o grupo que realizou a terapia miofuncional a partir da data da aplicação de toxina botulínica, apresentou freqüência significativamente maior de dificuldade para mastigar. A terapia miofuncional promove simetria facial; satisfação dos pacientes com a face, funcionalidade oromiofacial, qualidade de vida e deve ser realizada antes e após aplicação de toxina botulínica para reduzir os possíveis efeitos adversos. / INTRODUCTION: The facial paralysis is constraining so much of the functional point of view as aesthetic. This research had for goal verified the myofunctional therapy effect in patients with long-standing facial paralysis associate to the botulinum toxin application. METHODS: Twenty-five patients were treated, divided into two groups. The patients from the group A received four sessions of myofunctional therapy before the toxin botulinum application and the patients from the group B received it simultaneously to the application. The therapy was composed by isometric and passive isotonic maneuvers, inside and outside oral, and resistance exercises. RESULTS: After the myofuncional therapy the patients presented significant increase of the mobility of the paralyzed side, of the patient satisfaction index with the face, Functional Index of the Face (IFF) and of the Index of Social Welfare (IBES). The group of patient that accomplished the myofuncional therapy previously presented significantly larger frequency of talking difficulty, while the group that accomplished the miofuncional therapy from the toxin botulínica application date presented significantly larger frequency of chewing difficulty. The myofuncional therapy promotes facial symmetry; patients satisfaction with the face, myofuncional functionality, life quality, and should be accomplished before and after toxin botulínica application to reduce the possible adverse effects.