Nous avons sélectionné des patients atteints d’une TO biologiquement confirmée et avons exploré les différences cliniques et biologiques de deux groupes de patients, l’un en France, l’autre en Colombie. Dans notre hypothèse de départ, les souches sud-américaines, seraient plus virulentes et elles pourraient jouer un rôle crucial dans la sévérité et l’évolution de la TO. Nous avons constaté, chez les patients colombiens, de plus grandes lésions de la rétine et une plus grande proportion de lésions maculaires, dans un contexte inflammatoire vitréen plus sévère. Le cytoquinome oculaire confirme une forte réponse inflammatoire chez les patients européens centrée sur l’IL-17, mais cette réponse Th17 est absente chez les sujets colombiens. L’IL-6 et l’IL-13 sont au contraire fortement augmentées chez ces derniers. Nous avons également démontré que certaines cytokines étaient associées à certaines caractéristiques cliniques comme la sévérité de l’inflammation ou la récurrence. Des travaux préliminaires nous ont permis de débuter une modélisation de ces affactions oculaires en employant une souche de type II et une souche atypique de T. gondii. Nous avons aussi évalué la possibilité d’effectuer des traitements ciblés en intraoculaires par transfection in vivo. Conclusion: Nous avons constaté des différences cliniques et biologiques entre les patients colombien et français. Il semble y avoir une régulation souche dépendante de la production d’IFN-y et d’IL-17. Ces différences pourraient contribuer à expliquer la plus grande sévérité des toxoplasmoses oculaires en Colombie. En se basant sur nos résultats nous pouvons envisager d’explorer des traitements immunomodulateurs plus ciblés. / Ocular involvement, mainly retinochoroiditis, is one of the most severe sequelae of Toxoplasma gondii infection. However, the pathophysiological mechanisms of retinal destruction are poorly understood. Several studies suggested a more frequent and more severe ocular involvement in South American infections compared with European infections, probably due to different T. gondii strains (Type I/III, and atypical vs. Type II). To compare the clinical characteristics and biological and immunological responses in a single study and using the same parameters, in Colombian and French patients with active ocular toxoplasmosis (OT), as well as to study the local cytokinome in aqueous humor of these patients and correlate it with the clinical features. We prospectively collected and compared the clinical features of patients with active OT, evaluated at the Department of Ophthalmology of Strasbourg University Hospital and of Quindio University Health-Center. Results of biological tests in the collected aqueous humor samples were compared between Colombian and French patients: the pattern of protein recognition by immunoblotting (IB); the relative diagnostic sensitivities of IB and Polymerase Chain Reaction (PCR); and the cytokine and chemokine profiles. We found that Colombian and French OT patients presented not only different clinical characteristics but also biological characteristics, and that more virulent South American strains might be responsible for these differences, due to a disruption of the protective effects of interferon gamma (IFN-γ). Retinal lesions were 50% greater in Colombian patients. Macular localization leading to visual impairment was observed in 56% of Colombian cases, compared with 13% of French patients. Moreover, more vitreous inflammation and vasculitis were observed in Colombian patients. However, cytokine assays of the aqueous humor showed upregulation of inflammatory responses in European patients, notably IL-17, which we did not observe in Colombian patients. In a mouse model, intraocular tachyzoite injection of type II and atypical T. gondii strains resulted in differences in parasite multiplication and pathology similar to those observed in human infections. Production of IL-17 and other inflammatory markers, like IL-6, MCP-1, and the Th17 transcription factor ROR-γt was observed upon infection with the type II PRU strain, but was much less with the atypical LEF strain. In a previous work, the cytokine and mRNA patterns showed an upregulation of Th1 responses, notably IFN-γ production, in French patients, and anti-IL-17A antibody markedly diminished clinical damage and retinal inflammation, and also diminished parasite proliferation. In contrast to these previous findings in French patients, the cytokinome of aqueous humor of OT Colombian patients showed a downregulation of Th1 and Th17 responses and an upregulation of the Th2 response. Correlation between the clinical characteristics of Colombian patients with active OT and the levels of cytokines in aqueous humor (AH) showed that local production of cytokines differed between patients with OT, and particular cytokine levels were related to more severe clinical characteristics. Some cytokines were related to a higher number of recurrences.There are clinical and biological differences between Colombian and French patients with OT. There seem to be strain-specific differences in IL-17 and IFN-γ induction, which play an important role in the pathogenesis of this disease. These differences should be considered when thinking in perspectives of any possible immune-modulatory treatment in OT.

A manipulação comportamental é uma das principais correntes teóricas utilizadas para explicar as alterações comportamentais presentes em roedores parasitados pelo Toxoplasma gondii. Vários estudos propõem que o parasitismo pelo protozoário provoca mudanças metabólicas, imunológicas e neuropatológicas que possibilitam o desenvolvimento de mudanças no comportamento dos indivíduos infectados. Contudo, alguns fatores relacionados ao desenvolvimento da manipulação comportamental, ainda, não estão bem elucidados, entre eles, destaca-se o possível efeito do genótipo da cepa infectante nas modificações comportamentais. Neste trabalho, avaliamos o efeito da infecção crônica por cepas cistogênicas geneticamente distintas de T. gondii no comportamento de camundongos. Foram desenvolvidos modelos de infecção experimental com as cepas ME-49 (tipo II) e VEG (tipo III) em camundongos isogênicos BALB/c para avaliação da resposta imune humoral por ELISA, quantificação de parasitas em cistos cerebrais por PCR em tempo real e testes comportamentais como Esquiva Inibitória, Labirinto de Barnes, Labirinto em Cruz Elevado, Campo Aberto e Labirinto em Y visando, respectivamente, a avaliação da aprendizagem - memória, ansiedade, atividade locomotora e aversão ao odor do felino. Nossos dados mostram que camundongos infectados pela cepa VEG apresentaram redução mais acentuada da capacidade de recuperação de memória de longo prazo e alterações motoras mais proeminentes do que os animais infectados pela cepa ME-49. Na avaliação da aversão ao odor do felino, verificamos que a infecção pela cepa VEG induziu uma alteração comportamental mais acentuada no hospedeiro, nas fases iniciais da infecção, do que a infecção pela cepa ME-49, sendo este efeito observado tanto na presença de urina pura de gato como do aminoácido L-felinina. Nossos resultados sugerem que o genótipo da cepa infectante pode influenciar o desenvolvimento de alterações comportamentais em animais infectados pelo T. gondii, tornando o hospedeiro mais suscetível e exposto ao predador, sobretudo em infecções causadas por cepas do tipo III. / The behavioral manipulation is the main theoretical current used to explain the behavioral changes present in rodents parasitized by Toxoplasma gondii. Several studies suggest that protozoan parasitism causes metabolic, immunological and neuropathological changes that allow the development of changes in the behavior of infected individuals. However, some factors related to the development of behavioral manipulation are still not well understood, among them, the possible effect of the genotype of the infecting strain on behavioral modifications is highlighted. In this study, we evaluated the effect of chronic infection by genetically distinct cystogenic strains of T. gondii on the behavior of mice. Experimental models were developed with the ME-49 (type II) and VEG (type III) strains in isogenic BALB / c mice to evaluate the humoral immune response by ELISA, quantification of parasites in brain cysts by real-time PCR and behavioral tests as Passive Avoidance, Barnes Maze, Elevated Plus Maze, Open Field and Y - Maze aiming, respectively, evaluation of learning - memory, anxiety, locomotor activity and aversion to feline odor. Our data showed that mice infected with the VEG strain showed a more pronounced reduction in long-term memory retrieval capacity and more prominent motor alterations than the animals infected with the ME-49 strain. In the evaluation of feline odor aversion, we observed that infection by the VEG strain induced a more marked behavioral change in the host in the early stages of infection than the infection by the ME-49 strain, and this effect was observed both in the presence of urine pure cat as the amino acid L-felinine. Our results suggest that the genotype of the infecting strain may influence the development of behavioral changes in T. gondii infected animals, making the host more susceptible and exposed to the predator, especially in infections caused by type III strains.

A toxoplasmose afeta cerca de um bilhão de pessoa em todo mundo, é geralmente assintomática, apesar de doença ocular ou doenças grave e letal em fetos, pacientes com HIV e transplantados. A sorologia é a principal ferramenta para o diagnóstico e determinação de incidência, que é uma tarefa difícil, devido à alta prevalência na maioria dos países. Estudos de incidência são ideais em crianças, mas este grupo é protegido pela sociedade e de difícil abordagem por métodos invasivos como a punção venosa. A saliva pode ser uma ótima alternativa por sua coleta não ser invasiva, aceitável para crianças, e conter pequenas quantidades de IgG, eliminada através da mucosa gengival e fluido crevicular. Métodos de detcção de anticorpos disponíveis no mercado estão focados em amostras de soro, com baixa sensibilidade e são raros os relatos de pesquisas com material biológico alternativo, como a saliva. Sendo assim, padronizamos imunoensaios com alta sensibilidade para detecção de anticorpos anti- T. gondii na saliva frente a amostras de soro de 20 voluntários adultos. A sensibilidade e especificidade dos nossos dot-ELISA e ELISA de captura com proteína A foram semelhantes entre soro e saliva. Também testamos 100 amostras de saliva de universitários em nossos ensaios, onde mostramos uma frequência da toxoplasmose de 19% (IC 95% 12-28%). Imunoensaios para detecção de IgG anti-T. gondii em saliva são uma ferramenta muito promissora para estudos epidemiológicos da toxoplasmose em crianças ou outros grupos protegidos. / Toxoplasmosis that affects about one billion people worldwide is usually asymptomatic, despite ocular disease and severe and lethal disease in fetuses, AIDS patients and transplant recipients. Serology is the main approach for diagnosis and incidence determination is a difficult task due to high prevalence in most countries. Incidence studies are feasible in children but this age group is protected and difficult to approach by invasive methods as venipuncture. Saliva could be obtained by non-invasive procedure, acceptable for children, and it contains small amounts of IgG from mucosal and gingival crevicular fluid. Available antibody detection methods are focused in serum samples, with low sensitivity and few reports of alternative biological material, like saliva. Here, we standardized immunoassays with high sensitivity for detection of anti-T. gondii IgG in paired saliva and serum sample from 20 adult volunteers, which allows DOT-ELISA and a Protein A IgG capture assay. The sensitivity and specificity of the saliva DOT-ELISA were similar to sera ELISA. We also tested 100 saliva samples from university graduates in all assays, showing 19% (95%CI 12-28%) frequency of toxoplasmosis in this group, lower than reported for our area. Protein A IgG capture saliva assay was also efficient with similar results. Immunoassay with saliva IgG for toxoplasmosis is a very promising tool for use for the epidemiology of toxoplasmosis in children or other protected groups.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-02T13:19:25Z No. of bitstreams: 1 Flaviana Santos Wanderley.pdf: 2218547 bytes, checksum: 33783f2ee07821db7f23103bcb5d7838 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-02T13:21:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flaviana Santos Wanderley.pdf: 2218547 bytes, checksum: 33783f2ee07821db7f23103bcb5d7838 (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / The objective was to evaluate the clinical, pathological, and reproductive aspects of the Toxoplasma gondii experimental infection in goats. Firstly was studied the transmission T. gondii in goats inseminated vaginally with semen contaminated with strain tachyzoites CPG (genotype III). Were divided into two experimental groups (G1 and G2) each with five goats. The females of the G1 were inseminated with semen containing 1x105 tachyzoites and females G2 (control) with semen free tachyzoites (insemination = day 0). To confirm infection were performed serologic tests (indirect immunofluorescence) and detection of parasitic DNA (polymerase chain reaction) in blood and organs. For monitoring pregnancy ultrasound exams were used. In G1, seroconversion occurred between days 7 and 14 at 4/5 goats. In the same group, the DNA of T. gondii was present between days 7 and 49 in blood and various tissues of 3/5 goats and two kids born at full term. In G2, all samples were negative for both techniques. In the second experiment, the goats of the G1 in the first experiment were monitored in the acute and chronic phases of infection; embryonic reabsorption occurred in 4/5 goats in the acute phase, while in the chronic phase were observed in anestrus 2/5 goats, 1/5 goats had both hydrosalpinx and ovarian cysts. The third experiment investigated to venereal transmission of T. gondii in goats mated with breeder experimentally infected orally with oocysts of the ME-49 strain. Ten goats were allocated into two groups (G1 and G2) each with five animals. The female goats in G1 were mated with a breeder that had been experimentally infected with T. gondii oocysts whereas those in G2 (control) were mated with a serologically negative goat. The infection of the breeder and the females was confirmed through clinical, serological, molecular and histopathological findings. Seroconversion ocurred in the breeder infected on the 7th day post-infection (d.p.i.) and T. gondii DNA was present in the blood and semen in the 3th d.p.i. In G1, 2/5 goats seroconverted and DNA was present in the blood in 2/5 goats. In G2, all goats were negative in all tests. With regards to gestational development, the goats in G1 ocurred embryonic reabsorption in 1/5 in day 34 after mating, 1/5 aborted in day 42 after mating and 3/5 goats gave birth to full-term healthy kids. One of the kids exhibited PCR-positive blood at birth. In total, 2/5 of the females in G1 and 4/5 of the kids born alive in G1 exhibited PCR-positive in at least one organ. In G2, the goats gave birth goats healthy. In conclusion, artificial insemination with semen containing tachyzoites of T. gondii infected goats, causing reproductive pathologies during acute and chronic phases of infection. Furthermore, it was found that venereal transmission of T. gondii occurs in goats mated with an infected breeder. / Objetivou-se estudar os aspectos clínicos, patológicos e reprodutivos da infecção experimental por Toxoplasma gondii em caprinos. No primeiro experimento foi avaliada a transmissão de T. gondii em cabras inseminadas via vaginal com sêmen contaminado com taquizoítos da cepa CPG (Genótipo III). Foram formados dois grupos experimentais (G1 e G2) constituídos por cinco cabras cada um. As fêmeas do G1 foram inseminadas com sêmen contendo 1x105 taquizoítos e as fêmeas do G2 (controle) com sêmen livre de taquízoitos (inseminação=dia 0). Para confirmar a infecção foram realizados testes sorológicos (reação de imunofluorescência indireta) e detecção do DNA parasitário (reação em cadeia da polimerase) no sangue e órgãos. Para o acompanhamento gestacional foram utilizados exames ultrassonográficos. No G1, a soroconversão ocorreu entre os dias 7 e 14 em 4/5 cabras. Neste mesmo grupo, o DNA de T. gondii foi detectado entre os dias 7 e 49 no sangue e vários tecidos de 3/5 cabras e em dois cabritos nascidos a termo. No G2, todas as amostras foram negativas para ambas as técnicas. No segundo experimento, as cabras do G1 do primeiro experimento foram monitoradas nas fases aguda e crônica da infecção; reabsorção embrionária ocorreu em 4/5 cabras na fase aguda, enquanto que na fase crônica foram observados anestro em 2/5 cabras, hidrossalpinge em 1/5 cabras e cisto ovariano em 1/5 cabras. No terceiro experimento pesquisou-se a transmissão venérea de T. gondii em cabras acasaladas com o reprodutor infectado experimentalmente por via oral com oocistos da cepa ME-49. Dez cabras foram alocadas em dois grupos (G1 e G2) cada um com cinco animais, sendo as cabras do G1 acasaladas com o bode infectado e G2 (controle) acasaladas com bode sorologicamente negativo. A infecção do reprodutor e das cabras foi confirmada por meio dos achados clínicos, sorológicos, moleculares e histopatológicos. No reprodutor, a soroconversão ocorreu no 70 dia pós-infecção (d.p.i.) e o DNA para T. gondii esteve presente no sangue e sêmen no 30 d.p.i. No G1, 2/5 cabras soroconverteram e em 2/5 cabras o DNA foi detectado no sangue. As cabras do G2 e o reprodutor não infectado foram negativos em todos os testes. Em relação ao desenvolvimento gestacional, nas cabras do G1 ocorreu reabsorção embrionária em 1/5 no 340 dia após o acasalamento, 1/5 abortou no 420 dia após acasalamento e 3/5 pariram cabritos saudáveis a termo. No G1, o DNA de T. gondii estava presente no sangue em 1/5 cabritos ao nascimento e em pelo menos um órgão em 2/5 cabras e 4/5 cabritos nascidos vivos. As cabras do G2 pariram cabritos saudáveis. A partir dos resultados obtidos, conclui-se que a inseminação artificial com sêmen contaminado com taquizoítos de T. gondii infecta cabras, causando patologias reprodutivas durante as fases aguda e crônica da infecção. Além disso, constatou-se que a transmissão venérea por T. gondii ocorre em cabras acasaladas com reprodutor caprino infectado experimentalmente.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-05T15:07:53Z No. of bitstreams: 1 Silvio Gomes de Sa.pdf: 1708875 bytes, checksum: a786d439ef8b4d1c09becfbe1f091fb2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T15:07:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silvio Gomes de Sa.pdf: 1708875 bytes, checksum: a786d439ef8b4d1c09becfbe1f091fb2 (MD5) Previous issue date: 2014-06-30 / The aim of the present study was to assess the occurrence of antibodies anti-Mycoplasma gallisepticum and anti-Toxoplasma gondii among chickens and turkeys on rural family properties in the state of Pernambuco, Brazil, as well as to identify risk factors associated with these infections. In chickens, antibodies anti-Mycoplasma gallisepticum were sought using the Immunoenzymatic assay (ELISA) and antibodies anti-Toxoplasma gondii were sought using the Immunofluorescence assay (IFA). In turkeys, antibodies anti-Toxoplasma gondii were investigated using the Modified Agglutination Test (MAT). In turkeys, antibodies anti-Toxoplasma gondii were investigated based on 204 serum samples on 28 properties. In chickens, antibodies anti-Toxoplasma gondii were investigated based on 629 serum samples from 39 properties, of which 421 samples came from 29 properties that participated in the study of risk factors. Antibodies anti-Mycoplasma gallisepticum were analyzed based on 300 serum samples from 23 properties, all of which participated in the study of risk factors. In the present study, an investigative questionnaire was applied on the properties and risk factors were checked based on univariate analysis (chi-squared test or Fischer’s exact test), followed by multivariate analysis (Logistic regression). The relative frequency of turkeys that were positive for antibodies anti-T. gondii was 11% (21/204). Thirteen (13) properties contained at least one reactive turkey (46.5%). The general prevalence of chickens that were positive for antibodies anti-Toxoplasma gondii in the region was 28% (176/629). The following variables exhibited significant associations with chicken infections in the multivariate analysis (logistic regression): the slaughter of animals on the properties (OR=1,66; p=0,027); the presence of sheep (OR=1,96; p= 0,004); the occurrence of sheep births (OR=1,72; p= 0,014) and reproductive disorders among sheep (OR=2,29; p=0,003). The prevalence of chickens infected by Mycoplasma gallisepticum was 53.33% (157/300), while 100% of the properties exhibited foci. The following risk factors were confirmed in the multivariate analysis: the presence of poultry such as Numida meleagris (OR=2,22; p=0,005); different species of parrots (OR=1,72; p=0,027) and the presence of passerines (OR=1,88; p=0,007). The results of the present study indicate that Mycoplasma gallisepticum and Toxoplasma gondii infection are quite widespread in the region studied. Chickens and turkeys infected with Toxoplasma gondii could serve as a source of human infection if their meat and viscera are poorly cooked and then consumed. The large number of Mycoplasma gallisepticum foci is significant, considering the dangers associated with backyard animal reproduction and the risks for the surrounding industrial poultry plants. The chickens and turkeys assessed in the present study were good indicators of the presence of these pathogens in the environment, highlighting the need for greater care on behalf of sanitary authorities in relation to control and educating the population. / Objetivou-se estudar a ocorrência de anticorpos anti Mycoplasma gallisepticum e Toxoplasma gondii em galinhas e perus de propriedades familiares rurais no estado de Pernambuco, Brasil e identificar os fatores de risco associados a estas infecções. Em galinhas, pesquisaram-se anticorpos contra Mycoplasma gallisepticum por meio de ensaio de imunoadsorção enzimática indireto (ELISA) e contra Toxoplasma gondii por meio da Imunofluorescência Indireta (RIFI); para pesquisa de anticorpos contra Toxoplasma gondii em perus utilizou-se o teste de Aglutinação Modificado (MAT). Para pesquisa de anticorpos contra Toxoplasma gondii em perus foram analisadas 204 amostras de soro sanguíneo em 28 propriedades. Para pesquisa de anticorpos contra Toxoplasma gondii em galinhas foram analisadas 629 amostras de soro sanguíneo originadas de 39 propriedades, das quais 421 amostras de 29 propriedades participaram do estudo dos fatores de risco. Para pesquisa de anticorpos contra Mycoplasma gallisepticum foram analisadas 300 amostras de soro sanguíneo de 23 propriedades e todas as propriedades participaram do estudo dos fatores de risco. Para este estudo, um questionário investigativo foi aplicado nas propriedades e os fatores de risco foram verificados numa análise univariada (Qui-quadrado ou Exato de Fischer) seguida de análise multivariada (Regressão Logística). A frequência relativa de perus positivos para anticorpos anti-T. gondii foi de 11% (21/204) e treze (13) foram as propriedades com pelo menos um peru reagente (46,5%). A prevalência de galinhas positivas para anticorpos contra Toxoplasma gondii na região foi de 28% (176/629). A ocorrência de abate de animais nas propriedades (OR=1,66; p=0,027), a presença de ovinos (OR=1,96; p= 0,004), a ocorrência de partos de ovinos (OR=1,72; p= 0,014) e distúrbios reprodutivos em ovinos (OR=2,29; p=0,003) foram as variáveis que apresentaram associação significativa com a infecção das galinhas na análise multivariada (regressão logística). A prevalência de galinhas infectadas por Mycoplasma gallisepticum foi de 53,33% (157/300) com 100% de propriedades foco e os fatores de risco confirmados na análise multivariada foram a criação de outras espécies de aves nas propriedades como Numida meleagris (OR=2,22; p=0,005), espécies de psitacídeos (OR=1,72; p=0,027) e a criação de passeriformes (OR=1,88; p=0,007). Os resultados indicaram que a infecção por Mycoplasma gallisepticum e Toxoplasma gondii ocorre na região estudada de forma bastante disseminada. Tanto perus quanto as galinhas infectadas por Toxoplasma gondii podem servir de fonte de infecção para humanos se estes consumirem carnes e vísceras mal cozidas. O grande número de focos para Mycoplasma gallisepticum é de grande importância, tendo em vista os prejuízos causados à criação de fundo de quintal e os riscos para as criações industriais circunvizinhas. As galinhas e perus neste estudo foram bons indicadores da presença destes patógenos no ambiente suscitando maior atenção das autoridades sanitárias em relação à educação da população e ao seu controle.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:55:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:05:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 12875.pdf: 11505877 bytes, checksum: cf326624456cdfcb9c4baefcb86bf22b (MD5) / Toxoplasma gondii vs radiação ionizante: Imunidade humoral e celular em baço e intestino de camundongos isogênicos imunizados com taquizoítos irradiados por Cobalto 60 Andrés Jimenez Galisteo Jr. Estudamos o desenvolvimento de uma vacina para toxoplasmose utilizando a radiação ionizante como ferramenta. Aqui avaliamos o desenvolvimento da imunidade sistêmica e intestinal e a resistência à infecção, em diferentes camundongos imunizados, por via oral e parenteral, com taquizoítos irradiados a 255 Gy e desafiados com cistos da cepa ME49. Camundongos C57Bl/6j, BALB/c e C57Bl/6j IFN--/- foram imunizados com 107 taquizoitos de T. gondii irradiados a 255Gy por diferentes vias. As preparações de taquizoítos irradiados, por via oral e parenteral, induziram produção de imunoglobulinas IgG e IgA no soro de camundongos, sendo predominante a subclasse de IgG2b, determinadas por ELISA. A produção de IgM foi mínima. Os animais imunizados pela via parenteral, apresentaram uma maturação mais rápida da avidez de anticorpos IgG que os animais imunizados por via oral. Houve excreção de IgG, IgA e IgM nas fezes dos animais imunizados, mais intensa nos animais imunizados por via oral. No estudo da imunidade celular induzida por antígeno e detectada for real-time PCR, houve uma grande produção de IFN- por células esplênicas, menor por células das placas de Peyer intestinais, onde houve maior produção de IL-2. Houve proteção em todos os nossos esquemas avaliados, maior nos animais BALB/c. Os animais deficientes de IFN-, não foram afetados pelo processo de imunização e apresentaram produção de IgG e IgA sérico e excreção de S-IgA e S-IgM nas fezes, com menor numero de cistos cerebrais em animais imunizados por via parenteral. Todos nossos dados apontam para a possibilidade do desenvolvimento de uma vacina oral para toxoplasmose, utilizando taquizoítos irradiados, com aplicação prática na imunização de felinos domésticos e selvagens. / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:47:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:08:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 08348.pdf: 16202265 bytes, checksum: a433f0473985298a07dd71f10a5fc7a6 (MD5) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-05-21T19:50:01Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hanstter Hallison Alves Rezende - 2015.pdf: 1875029 bytes, checksum: a2cbf1f53df5830e4fdd38a866fc6ff4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-05-21T19:53:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hanstter Hallison Alves Rezende - 2015.pdf: 1875029 bytes, checksum: a2cbf1f53df5830e4fdd38a866fc6ff4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-21T19:53:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Hanstter Hallison Alves Rezende - 2015.pdf: 1875029 bytes, checksum: a2cbf1f53df5830e4fdd38a866fc6ff4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-02-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The domestic cat is an important zoonotic agent for humans, especially as a transmissor of Toxoplasma gondii. The cat is capable of the elimination of millions of oocysts in the environment leading to a massive contamination of these places and leading to a public health issue. Toxoplamosis is a disease with high prevalence throughout the world and the cat is responsible for the parasite’s perpetuation. The evaluation of the accuracy of parasitological diagnostic methods is of vital importance to improve the veterinarian laboratory diagnosis through the use of high sensitivity, specificity and reproducible tests. The aim of this study was to verify the prevalence of intestinal parasites from stray cats in Goiania-GO, to verify the seroprevalence of anti-T. gondii antibodies through the modified aglutination test (MAT) and to perform the evaluation of the accuracy of the parasitological tests applied. Therefore 155 samples of feces and 50 blood samples from stray cats from the Zoonosis Center of Goiania were collected during the year of 2012. The feces samples were processed by the Willis (gold standard), Sheather, Faust and Hoffman-Janer-Pons-Lutz (HJPL) techniques. The MAT was performed in the blood samples. The accuracy was performed through the determination of sensitivity, specificity, positive predictive value (PPV), negative predictive value (NPV), and kappa index (k). The intestinal parasites prevalence in the feces from stray cats was 71.68% (115/154). The most prevalent helminth was Ancylostomatids (83.48%, 96/115) and the most prevalent protozoan in monoparasitism was Cystoisospora sp (7.83%, 9/115). T. gondii presented high prevalence (18.27%, 21/115) in fecal samples, 64% in blood samples (32/50) while 36% seronegative (18/50). The accuracy showed that the HJPL and Sheather techniques presented association to the golden standard for the intestinal parasites diagnosis. For the specific diagnosis of T. gondii oocysts the Faust techniques was the one with high accuracy in comparasion to the golden standard, with we emphasize the importance of using two parasitological techniques for the diagnosis of intestinal parasites / O gato doméstico é um importante transmissor de agentes zoonóticos para o homem, em especial Toxoplasma gondii. O gato infectado é capaz de eliminar milhões de oocistos no meio ambiente, provocando uma contaminação maciça nestes locais, sendo considerado um problema de saúde pública. A toxoplasmose é uma doença com alta prevalência em todo o mundo, sendo o gato responsável pela perpetuação do parasito. Avaliar a acurácia de métodos parasitológicos é de extrema importância para melhorar o diagnóstico laboratorial veterinário, utilizando testes de alta sensibilidade, especificidade e reprodutibilidade. O objetivo deste trabalho foi verificar a prevalência de parasitos intestinais em gatos errantes em GoiâniaGO, verificar a soroprevalência de anticorpos anti-T. gondii pelo teste de aglutinação modificado (MAT) e realizar a avaliação da acurácia de técnicas parasitológicas aplicadas no diagnóstico de parasitos intestinais. Foram coletadas 155 amostras de fezes no ano de 2012 no Centro de Controle de Zoonoses de Goiânia-GO e 50 amostras de sangue de gatos no mesmo período. As amostras de fezes foram processadas pelos métodos de Willis (padrão-ouro), Sheather, Faust e Hoffman-Janer-Pons-Lutz (HJPL). Nas amostras de sangue foi realizado o MAT. A análise de acurácia foi realizada determinando a sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo (VPP), valor preditivo negativo (VPN) e índice kappa (k). A prevalência de parasitos intestinais no ano de 2012 foi de 71,68% (115/154), sendo os Ancilostomídeos o helminto mais prevalente 83,48% (96/115), o protozoário mais prevalente foi Cystoisospora sp. em monoparasitismo 7,83% (9/115). T. gondii apresentou alta prevalência: 18,27% (21/115). Ao analisar a soroprevalência de um grupo de 50 animais, 64% (32/50) eram soropositivos e 36% (18/50) soronegativos. A análise de acurácia demonstrou que as técnicas de HJPL e Sheather apresentaram associação ao padrão-ouro para o diagnóstico de parasitos intestinais. No diagnóstico específico de oocistos de T. gondii a técnica de Faust apresentou melhor acurácia comparada ao padrão-ouro, com isso ressaltamos a importância do uso de duas técnicas parasitológicas para o diagnóstico de parasitos intestinais.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Aline A Barbaresco.pdf: 3370221 bytes, checksum: 707471f496b902352a55ab3c490d78b1 (MD5) Previous issue date: 2009-11-05 / The infection caused by Toxoplasma gondii, Trypanosoma cruzi, Rubella virus, Cytomegalovirus (CMV) and Treponema pallidum, can reach the fetus via the placenta or transamniótica may cause different damage. The severity of the infection or even abortion, depend on the virulence of the strain of microorganism, the immune response of the mother and the period. The aim of this study was to analyze the results of serological, pathological and parasitological material for abortive infections with risk of vertical transmission, with emphasis on toxoplasmosis. They were invited to participate in the study, women who miscarried and complete or incomplete, attended at two public hospitals in Goiânia, Goiás, between the period June 2008 to June 2009. Were interviewed through a questionnaire and collected blood samples and abortive material. There were immunologic tests for toxoplasmosis, Chagas disease, rubella, cytomegalovirus and syphilis and pathology in cytogenetic. 55% of women were aged 20 to 30 years of age. The majority (68%) had gestational ages ranging from 7-14th weeks. 54.3% of women had completed high school or incomplete. Regarding the number of abortions, most women (69%) had only one abortion and minority (2.9%) were already in the fourth or fifth abortion. For the analysis of serology, infection with the risk of vertical transmission was more frequent with the CMV 97.1% positivity and then the rubella 95.2%. Toxoplasmosis has a percentage of 54.3%, Chagas disease by 1.9% and syphilis by 0.95%. The analysis of the biopsy showed that 63.1% showed inflammation and 34% absence of inflammation. Analysis of serological, pathological and parasitological of 105 women, 57 were seropositive for T. gondii. It was observed that 77.1% showed inflammation, detected in pathological examination. None has tested positive for Polymerase Chain Reaction (PCR) and inoculation in mice. This study demonstrated the high frequency of seropositive for CMV and rubella then toxoplasmosis, Chagas disease and syphilis in our country. The elucidation of the cause of miscarriage is still not routine in our country. These data showed that the prevalence of disease with risk of congenital transmission in patients with spontaneous abortion is important, more research is needed to elucidate the etiology of abortion. Women's health should receive more attention from our managers because primary care is the best and most efficient path to be followed in order to quality of life for mothers and their future children. / A infecção primária causada por Toxoplasma gondii, Trypanosoma cruzi, Rubella virus, Citomegalovirus (CMV) e Treponema pallidum, podem atingir o concepto por via transplacentária ou transamniótica podendo causar diferentes danos. A gravidade da infecção ou até mesmo o aborto, dependem da virulência da cepa do microrganismo, da resposta imune da mãe e do período. O objetivo deste estudo foi analisar os resultados sorológicos, anatomopatológicos e parasitológicos de material abortivo para infecções com risco de transmissão vertical, com ênfase na toxoplasmose. Foram convidadas para participar da pesquisa, mulheres que sofreram aborto espontâneo completo e/ou incompleto, atendidas em duas maternidades públicas em Goiânia-Goiás, entre o período de junho 2008 a junho de 2009. Foram entrevistadas, por meio de um questionário, e coletadas amostras de sangue e material abortivo. Realizaram-se testes imunológicos para toxoplasmose, doença de Chagas, rubéola, citomegalovírus e sífilis e o exame anatomopatológico nos restos ovulares. 55% das mulheres tinham entre 20 a 30 anos de idade. A maioria (68%) apresentou idade gestacional entre 7ª a 14ª semanas. 54,3% das mulheres tinham o ensino médio completo ou incompleto. Em relação ao número de aborto, a maioria das mulheres (69%) tiveram apenas um aborto e a minoria (2,9%) já estavam no quarto ou quinto aborto. Pela análise da sorologia, a infecção com risco de transmissão vertical mais frequente foi o CMV com 97,1% de positividade e em seguida a rubéola com 95,2%. A toxoplasmose teve um percentual de 54,3%, a doença de Chagas de 1,9% e a sífilis de 0,95%. A análise dos laudos de biópsia demonstrou que 63,1% apresentaram inflamação e 34% ausência de inflamação. Das análises sorológica, anatomopatológica e parasitológica das 105 mulheres, 57 foram soropositivas para T. gondii. Observou-se que 77,1% apresentaram inflamação, detectados no exame anatomopatológico. Nenhuma teve resultado positivo para a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e para inoculação em camundongos. Este estudo demonstrou a alta frequência de soropositivas para CMV e rubéola em seguida de toxoplasmose, doença de Chagas e sífilis em nosso meio. A elucidação da causa dos abortos espontâneos ainda não é rotina em nosso país. Estes dados demonstraram que a prevalência de doenças com risco de transmissão congênita nas pacientes com abortamento espontâneo é importante, sendo necessário mais pesquisas visando esclarecer a etiologia do aborto. A saúde da mulher deve receber mais atenção de nossos gestores, pois a atenção primária é o melhor e o mais eficiente caminho a ser seguido visando uma qualidade de vida para mães e seus futuros filhos.

A toxoplasmose é uma protozoose de alta prevalência no Brasil, causada pelo Toxoplasma gondii, sendo transmitida pela ingestão de alimentos contaminados com oocistos, excretados em fezes de felinos, ou cistos, em carnes cruas ou mal cozidas. A doença é usualmente assintomática, mas em fetos ou pacientes com imunodepressão, pode ser devastadora. Neste trabalho, estudamos a prevalência sorológica da infecção em animais de diferentes regiões do estado de São Paulo, tanto de vida livre, cães (200/ABC) como indicadores ambientais, e gatos (100/São Paulo) como hospedeiros definitivos, e em animais de produção, bovinos (200/Taquarituba), suínos (200/Osasco), caprinos( 200/Botucatu), ovinos (200/São Manuel) e frangos de corte(185/Botucatu), além de estudos parasitológicos em gatos e águas sob suspeita. Foram padronizados ELISA para cada espécie animal, utilizando índices adequados e reprodutíveis, com confirmação por Western Blotting e determinação da avidez em amostras positivas. A prevalência da toxoplasmose animal foi determinada sendo crescente em suínos (8.5%), bovinos (11%), caprinos (17%), ovinos (31%), felinos (40%) e cães (50,5%), não sendo encontrada em frangos de corte. Em suínos, caprinos, cães e gatos, a freqüência de anticorpos de baixa avidez sugere que a transmissão da infecção é constante durante a vida do animal, mas em bovinos e ovinos não foram encontrados anticorpos de baixa avidez, sugerindo infecção precoce ou sazonal na vida do animal. Pela alta taxa de infecção recente em felinos, é possível prever uma fração significativa de animais excretando oocistos, embora sem comprovação parasitológica. A avaliação da presença de anticorpos anti-T.gondii deve ser criteriosa, sendo que os reagentes de hemaglutinação para uso humano fornecem resultados erráticos nesta medida. A pesquisa de oocistos na água é de baixa sensibilidade, devendo ser feita em materiais colhidos no período de suspeita da transmissão. Em São Paulo, o risco de transmissão da toxoplasmose está relacionado a quase todas as fontes de infecção pesquisadas, tornando necessários estudos para o melhor manejo dos animais de consumo humano e tratamento de água, com eliminação de gatos errantes. / Toxoplasmosis, caused by Toxoplasma gondii and highly prevalent protozoan disease in Brazil, is mainly transmitted by ingestion of contaminated food and water, both by oocysts, excreted in cat feces, or cysts from undercooked meat from warm-blooded animals. Usually asymptomatic, it is extremely severe in the fetus or immunosuppressed patients. In this work, we studied the serological prevalence of toxoplasmosis in animals from several regions of the São Paulo State, both free living, as dogs (ABC) as environmental contamination index, and cats (São Paulo, as definitive hosts, or livestock as cattle (Taquarituba), swine (Osasco), goats (Botucatu), sheep (São Manuel) and fowls (São Paulo), with parasitological studies in cats and suspicious drinking water. We standardized ELISA for each species, using reproducible and adequate indexes, with Western blot confirmation and avidity assays in positive samples. Toxoplasmosis prevalence was increasing in swine (8.5%), cattle (11%), goats (17%), sheep (31%), cats (40%) and dogs (50.5%), without positive sample in fowls. Goats, pigs, dogs and cats presented 5-20% low avidity antibody samples, suggesting sustained transmission during animal life, but cattle and sheep presented only high avidity samples, suggesting an seasonal or early in life infection. Due to the high recent infection rate in cats, it is possible to preview a significant oocyst excreting cat frequency, despite parasitological evidence. Antibody determination must be carefully evaluated, as human hemagglutination reagents give erratic information. Oocyst detection in drinking water presented very low sensitivity and must be performed only in water collected at the period of the infection. In São Paulo, almost all of tested sources are able of toxoplasmosis transmission, reinforcing the need of better management of livestock, adequate water treatment and elimination of free living cats.