Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2007. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-10-16T17:26:26Z No. of bitstreams: 1 Melina Ribeiro tese.pdf: 9595498 bytes, checksum: b054f79d09c76ca25b83c7c91c6c2708 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-27T13:29:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Melina Ribeiro tese.pdf: 9595498 bytes, checksum: b054f79d09c76ca25b83c7c91c6c2708 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-27T13:29:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melina Ribeiro tese.pdf: 9595498 bytes, checksum: b054f79d09c76ca25b83c7c91c6c2708 (MD5) Previous issue date: 2007 / O transplante de ilhotas pode ser uma opção para o tratamento do Diabetes do tipo I em função do aumento do controle metabólico e da qualidade de vida do paciente transplantado. As maiores limitações para a aplicação dessa técnica em larga escala são o alto número de ilhotas necessárias para a obtenção de um bom funcionamento do transplante e a deteriorização de ilhotas, causados por dano isquêmico por preservação a frio. Aqui propomos o uso de nova tecnologia denominada TAT- PTD como transportador de moléculas terapêuticas para o interior de ilhotas e pâncreas com a intenção de prevenir morte de ilhotas, aumentando, assim, o número e a qualidade das ilhotas para transplante de pacientes diabéticos. Resultados da Parte I: Construímos uma proteína de fusão composta por Heme oxigenase -1 (HO1) e o domínio de transdução protéica TAT- PTD (TAT) um peptídeo viral com 11 aminoácidos provenientes do vírus da imunodeficiência humana (HIV) e com capacidade de penetrar em membrana plasmática. A transdução de TAT-PTD-HO1 em células produtoras de insulina protege contra a ação citotóxica de TNF-α. A transdução de TAT-HO1 para o interior de células produtoras de insulina não danifica a fisiologia de ilhotas como foi mostrado quando estas são transplantadas em camundongos imunodeficientes e com Diabetes quimicamente induzida. Finalmente, mostramos que transdução de ilhotas com a proteína de fusão melhora a viabilidade de ilhotas em cultura. Essa abordagem pode ter um impacto positivo no aumento da disponibilidade de ilhotas para transplante. Resultados da Parte II: A produção de proteínas de fusão ligadas a TAT-PTD pode ser obtida em larga escala e eficientemente com a expressão protéica em E. coli. No entanto, a contaminação com endotoxina representa um problema para a aplicação dessas proteínas in vitro e in vivo. Desenvolvemos várias proteínas de fusão ligadas a TAT que têm aplicação terapêuticas em ilhotas. Apresentamos aqui um novo método para a eficiente remoção de endotoxina de soluções protéicas usando tubos de polipropileno em combinação com tratamento em pH ácido, mantendo a atividade biológica da proteína com bom rendimento protéico. Resultados da Parte III: Para poder detectar possíveis moléculas que possam ser citoprotetoras e que possam ser associadas à tecnologia de TAT-PTD, estabelecemos um modelo de isquemia a frio em pâncreas de ratos. Isso nos permitiu estudar a modulação de vias ativadas por sinal de stress que levam ao impedimento da recuperação da qualidade e função de ilhotas. Observamos que JNK e p38 são proteínas kinase ativadas por stress (SAPK) que estão presentes por causa de dano causado por isquemia pancreática e isolamento de ilhotas. Um experimento preliminar usando TAT-D-JNKi, inibidor de JNK, tentou prevenir dano causado pela ativação de JNK. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Islet transplantation can become a therapeutic option for the treatment of Type I Diabetes due to increased metabolic control and quality of life for transplanted patients. The major limitations for widespread application of this technique are, high number of islets needed to attain good function after transplantation and islet deterioration caused by pancreatic injury through cold ischemia storage. We here propose the use of a new technology using TAT-PTD as a transporter of therapeutic molecules into islets/pancreas with the attempt to prevent islet cell death and increase islet number/quality for transplantation of diabetic patients. Results from Part I: We have generated a fusion protein composed of HO-1 and TAT protein transduction domain (TAT/PTD), an 11-aa cell penetrating peptide from the human immunodeficiency virus TAT protein. Transduction of TAT/PTD–HO-1 to insulin producing cells protects against TNF-a-mediated cytotoxicity. TAT/PTD–HO-1 transduction to islets does not impair islet physiology, as assessed by reversion of chemically induced diabetes in immunodeficient mice. Finally, we report that transduction of HO- 1 fusion protein into islets improves islet viability in culture. This approach might have a positive impact on the availability of islets for transplantation. Results from Part II: While production of TAT-PTD-bound protein can be efficiently attained by E. coli protein replication, contamination with endotoxin represents a major hindrance for application of these proteins in the context of in vitro and in vivo testing. We have developed several TAT-attached proteins that have therapeutic cytoprotection applications on islet. Here we present a novel method for efficient removal of endotoxin from proteins in polypropylene tubes in combination with acidic pH treatment that does not interfere with biological activity of the protein and has good protein recovery. Results from part III: In order to identify possible molecular targets for islet cell cytoprotection by TAT-PTD technology, we have established a rat pancreas cold ischemia model and readout systems allowing for the study of the modulation of stress-activated cellular pathways leading to impairment of islet cell recovery and quality. We have observed that JNK and p38 stress activated protein kinases (SAPKs) are activated as a result of pancreas ischemia and islet isolation. A preliminary experiment was done using TAT-D-JNK inhibitor to try to prevent or reduce islet damage caused by activation of this SAPK pathway using this stringent model system.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-08-14T13:59:26Z No. of bitstreams: 1 2013_PedroHenriqueSilvadeJesus.pdf: 4011611 bytes, checksum: 5b85badd4e87a841dd20118cb8763b2e (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-08-14T14:41:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_PedroHenriqueSilvadeJesus.pdf: 4011611 bytes, checksum: 5b85badd4e87a841dd20118cb8763b2e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-14T14:41:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_PedroHenriqueSilvadeJesus.pdf: 4011611 bytes, checksum: 5b85badd4e87a841dd20118cb8763b2e (MD5) / IntroduçãoO transplante renal é uma das principais modalidades de tratamento da doença renal crônica na atualidade. No entanto,ainda ocorrem perdas do enxerto, embora as causas e os fatores de risco não estejam totalmente claros. Além disso, sabe-se que a maior causa de mortalidade em transplantados renais é a doença cardiovascular. A saúde bucal pode apresentar impacto sobre este processo, visto que a presença de doença periodontal está relacionada à inflamação. Evidências apontam para uma associação entre a presença da doença periodontal com a ativação do sistema imunológico e com a formação de placas de aterosclerose, o que poderia, em teoria, aumentar o risco das complicações cardiovasculares ou mesmo da aceleração da perdado enxerto em pacientes transplantados renais.Objetivo: Avaliar as condições periodontais de transplantados renais acompanhados pelo ambulatório da Unidade de Transplante Renal (UTR) do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto – Universidade de São Paulo (HCFMRP-USP), correlacionado-as com a evolução clínica do transplante renal e com risco cardiovascular. Metodologia: Pacientes transplantados renais foram submetidos a avaliação odontológica periodontal na qual foram determinados índice de placa, índice de sangramento papilar, índice de aumento gengival, extensão e gravidade da bolsa periodontal e do nível de inserção clínica (NIC). Dados do prontuário médico foram coletados, tais como idade, peso, gênero, data do transplante renal, característica do doador (vivo ou cadáver), medicamentos em uso, últimos valores de dosagem sérica de colesterol total, HDL e de creatinina, mensuração da pressão arterial sistólica e diastólica, presença de diabetes e tabagismo. Calculou-se a taxa de filtração glomerular(TFG) por meio do clearance estimado de creatinina, risco cardiovascular geral e o risco coronariano de Framingham.Os pacientes foram divididos em três grupos de períodos pós- transplante (0-11meses, 1 a 3 anos, acima de 3 anos) e de acordo com a presença ou ausência de doença periodontal.A comparação entre os grupos foi realizada por meio do teste de Kruskall Wallis seguido do pós-teste de Dunn ou ANOVA seguido pelo pósteste de comparação múltipla de Tukey. O teste do qui-quadrado ou teste exato de Fisher foi utilizado para dados categóricos. A relação entre o tempo pós transplante, a TFG ou o risco cardiovascular com a gravidade e extensão da bolsa periodontal e do NIC foram analisados por meio do coeficiente de correlação de Spearman. Os resultados foram considerados significativos para p  0,05. Resultados:Foram avaliados 83 transplantados renais. A prevalência de lesões bucais entre os transplantados renais foi baixa e não diferiu significativamente em relação ao tempo pós-transplante. O padrão de higiene bucal e da inflamação gengival foi similar nos diferentes tempos póstransplante. A extensão do NIC foi significativamente maior entre os pacientes com mais tempo pós-transplante [4,7(4,4 – 5,2); p=0,01)], e houve correlação positiva entre os mesmos (r=0,35;p=0,001).Não houve correlação entre a taxa de filtração glomerular e os parâmetros periodontais estudados e tampouco entre pacientes com e sem doença periodontal, denotando que a presença da doença periodontal não está associada à função renal e à perda do enxerto. O risco cardiovascular geral e o risco coronariano foram significativamente maioresentre os portadores de doença periodontal[8,2(5,0-24,7), p<0,0001 ; 7(4,0-15,8), p=0,0009] Conclusão:Em nossos achados não houve correlação entre a doença periodontal e a sobrevida do transplante renal. Entretanto, o risco cardiovascular mostrou-se significativamente maior nos portadores de doença periodontal. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction The kidney transplantation is major treatment modalities of chronic kidney disease at present. However, graft losses still occur, although the causes and risk factors are not totally clear. Furthermore, it is known that a major cause of mortality in renal transplant recipients is cardiovascular disease. Oral health can have an impact on this process, since the presence of periodontal disease is related to inflammation. Evidence points to an association between the presence of periodontal disease with immune system activation and the formation of atherosclerotic plaques, which could in theory increase the risk of cardiovascular complications or even acceleration of graft loss in renal transplant patients. Objective: To evaluate the periodontal conditions of kidney transplant followed by outpatient Renal Transplant Unit (RTU), Hospital das Clinicas da Faculdade de Medicine de Ribeirão Preto - University of São Paulo (USP-HCFMRP), correlated them with the clinical renal transplantation and risk cardiovascular. Metodologia: Patients underwent kidney transplant dental evaluation which were determined in periodontal plaque index, papillary bleeding index, gingival index increased, extent and severity of periodontal pockets and clinical attachment level ( NIC). Data were collected from medical records, such as age, weight, gender, date of renal transplantation, characteristic of donor (living or cadaver), current medication, past values of serum total cholesterol, HDL and creatinine, pressure measurement systolic and diastolic blood pressure, diabetes and smoking. It was estimated glomerular filtration rate (GFR) by estimated creatinine clearance, overall cardiovascular risk and the risk of coronary Framingham. Os patients were divided into three groups of post-transplant period (0-11meses 1 to 3 years up to 3 years) and in accordance with the presence or absence of disease periodontal. A comparison between groups was performed using the Kruskal Wallis test followed by Dunn's post-test or ANOVA followed by posttest, Tukey's multiple comparison . The chi-square or Fisher's exact test was used for categorical data. The relationship between time post-transplantation, the GFR and cardiovascular risk with the severity and extent of periodontal pockets and NIC were analyzed using the Spearman correlation coefficient The results were considered significant at p < 0.05. Results: We evaluated 83 renal transplant recipients. The prevalence of oral lesions among renal transplant patients was low and did not differ significantly with respect to time after transplantation. The standard of oral hygiene and gingival inflammation was similar in the different post-transplant. The extent of periodontal attachment lost was significantly higher among patients with longer post-transplant [4.7 (4.4 to 5.2), p = 0.01)], and there was a positive correlation between them (r = 0, 35, p = 0.001). There was no correlation between the rate of glomerular filtration and periodontal parameters studied, between patients with and without periodontal disease, indicating that the presence of periodontal disease is not associated with renal function and the loss of the graft. The overall cardiovascular risk and coronary risk were significantly higher in patients with periodontal disease [8.2 (5.0 to 24.7), p <0.0001; 7 (4.0 to 15.8), p = 0, 0009] Conclusion: In our findings there was no correlation between periodontal disease and kidney transplant survival. However, cardiovascular risk was significantly higher in patients with periodontal disease.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, Departamento de Ciências Fisiológicas, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-02-10T13:51:22Z No. of bitstreams: 1 2013_EllenCristinaRivasLeonel.pdf: 3584602 bytes, checksum: 90904b40a32ad73611369389a3a4e91e (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-02-10T14:09:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_EllenCristinaRivasLeonel.pdf: 3584602 bytes, checksum: 90904b40a32ad73611369389a3a4e91e (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-10T14:09:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_EllenCristinaRivasLeonel.pdf: 3584602 bytes, checksum: 90904b40a32ad73611369389a3a4e91e (MD5) / No Brasil, todas as espécies de felinos selvagens estão sob risco de extinção. Desta forma, técnicas de reprodução assistida aplicáveis a tais espécies são recursos valiosos para a conservação das mesmas. O gato doméstico (Felis catus) tem sido um excelente modelo experimental para estudos que visem aplicação em felinos selvagens. O presente trabalho teve como objetivos testar o efeito de diferentes protocolos de criopreservação, além da eficácia do autotransplante ovariano em manter a viabilidade e retomar o desenvolvimento de folículos pré-antrais inclusos em ovários de gatas domésticas. Um teste de criopreservação foi realizado comparando a eficácia de etilenoglicol (EG), dimetilsulfóxido (DMSO) e a associação de ambos (EG+DMSO) na preservação de folículos a aovarianos após descongelamento (1 Etapa). Na 2 Etapa do experimento, cinco gatas foram submetidas à cirurgia de ovariohisterectomia bilateral. Os animais tiveram seis fragmentos de ovário fresco transplantados para o tecido subcutâneo da região dorsal do pescoço.Foram realizadas cinco biopsias (7, 14, 28, 49 e 63 dias). O tecido ovariano foi fixado em Carnoy, processado para histologia clássica e analisado por microscopia de luz. Durante o período de transplante, foram realizadas análises ultrassonográficas para acompanhar o desenvolvimento do tecido ovariano. Na Etapa 1, a criopreservação com DMSO a 1,5 M mostrou-se mais eficaz. Durante as avaliações ultrassonográficas, foi possível identificar a presença de círculos hipoecóicos com diâmetro aproximado de 1 mm, nos animais 3,4 e 5. Tais estruturas correspondiam a folículos antrais. Nas biopsias , foi possível identificar folículos em todos os estágios do desenvolvimento. As porcentagens médias (±DP) de folículos morfologicamente normais encontrados nos fragmentos referentes às biopsias , realizadas nos dias 7, 14, 28, 49 e 63 pós-transplante, foram, respectivamente, 44,36±30,56, 46,95±13,97, 51,41±14,38, 54,80±36,47 e 37,70±31,11. A maioria dos folículos primordiais foi classificada como normal. Nas biopsias dos dias 7 e 14, houve grande concentração de folículos com o citoplasma do ovócito muito acidófilo e com ausência de núcleo (degeneração tipo 1). A partir do dia 14, muitos apresentaram-se com células da granulosa justapostas, que cobriam o local do ovócito, que estava ausente nestas estruturas (degeneração tipo 2). Em conclusão, é possível manter a morfologia folicular após criopreservação de tecido ovariano felino com DMSO a 1,5 M. Também é mantida a viabilidade e funcionalidade de tecido ovariano felino fresco após autotransplante. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / In Brazil, all wild felids species are endangered. This way, assisted reproduction techniques are a valuable resource to keep these species against extinction. The domestic cat (Felis catus) has been an excellent experimental model for studying new techniques to apply to wild felids. The aim of this work was to test different protocols of cryopreservation and the capacity of ovarian autotransplantation to keep the viability and resume preantral follicle development in domestic cats. The cryopreservation test was performed to compare ethylene glycol (EG), dimethyl sulfoxide (DMSO) and the association of both (EG+DMSO) in the preservation of preantral follicles included st nd in ovarian tissue (1 stage). In the 2 stage of the experiment, five cats were submitted to bilateral ovarian hysterectomy. In these animals, six fragments of fresh ovary were immediately transplanted to the subcutaneous tissue of the dorsal neck Five biopsies were performed after 7, 14, 28, 49 and 63 days of transplantation. The ovarian tissue was fixed in Carnoy, processed for classical histology and analysed under light microscopy. During the transplantation period, the ovarian tissue development and localization was monitored by ultrassonographic analysis. In the Stage 1 of the experiment, the cryopreservation with DMSO 1,5 M showed to be more efficient. During the ultrassonographic evaluation it was possible to identify the presence of hypoechoic circles with approximately 2 mm of diameter in the transplanted tissue of animals 3, 4 and 5. These structures corresponded to antral follicles. In the biopsies it was possible to identify follicles in all developmental stages. The mean (±SD) percentages of morphologically normal follicles found in the biopsies at days 7, 14, 28, 49 and 63 post-transplantation were respectively 44.36±30.56, 46.95±13.97, 51.41±14.38, 54.80±36.47 e 37.70±31.11. The majority of the primordial follicles were classified as normal. At days 7 and 14 biopsies there was a great number of follicles with acidophilic cytoplasm and with absent of nucleus (Type 1 degeneration). From day 14 on, a lot of follicles showed juxtaposed granulosa cells covering the place where the oocyte should be (Type 2 degeneration). Both these follicles were classified as degenerated. In conclusion, it is possible to keep the morphology of ovarian follicles after cryopreservation with DMSO 1,5 M. It is possible to keep the viability and function of fresh feline ovarian tissue after autotransplantation.

Introdução: Na Nefrologia, e em particular nos transplantes renais, houve uma substancial evolução nos últimos anos. Atualmente a Lipocalina Associada à Gelatinase dos Neutrófilos Humanos (NGAL) é considerado um biomarcador precoce de injúria renal nos pacientes transplantados de rim. Metodologia: A revisão sistemática com enfoque diagnóstico – NGAL urinário e sérico versus creatinina para injúria renal aguda em rim transplantado pela AKIN (Acute Kidney Injury Network), foram realizadas nos seguintes bancos de dados: MEDLINE (Pubmed and OVID interface), Cochrane Central de registros de Estudos Controlados (CENTRAL), EMBASE, LILACS, SCOPUS, Web of Science, BIOSIS, GOOGLE ACADÊMICO, entre janeiro de 2000 até 20/07/2010. Foram procuradas também publicações através de busca manual, em periódicos médicos relevantes até maio de 2010 e listas de referência de artigos bem como resumos de conferências médicas em Congressos. Estudos comparando NGAL urinário e sérico e creatinina no diagnóstico da injúria renal aguda em rim transplantado, começaram a ser realizadas a partir de 2000. Os dados foram extraídos de forma independente por dois revisores que aferiam a qualidade do estudo e a qualidade dos dados extraídos. A extração dos dados inclui avaliar as características clínicas de cada estudo, como tipo de participantes, intervenção e desfechos e tipos de exames realizados (o teste padrãocreatinina sérica e o teste diagnóstico NGAL urinário e sérico). A qualidade dos estudos de foi apurada por um tipo de instrumento de avaliação metodológica: QUADAS (Qualidade dos estudos de Acurácia Diagnóstica incluídos numa Revisão Sistemática). Casuística: Foram revisados 147 estudos publicados, de janeiro de 2000 até maio de 2010, sobre NGAL e IRA, sendo 17 escolhidos por trazer a maioria dos dados completos e destes, 7 foram selecionados para serem submetidos à análise crítica da validade metodológica, pois, preenchiam os critérios exigidos. Resultados: A revisão sistemática com enfoque diagnóstico – NGAL urinário e sérico versus creatinina sérica na avaliação de injúria renal aguda em rim transplantado, somente encontrou quatro estudos de coorte e três transversais, mas com pobre qualidade metodológica. Portanto, tornou-se impossível realizar a metaanálise devido à diferença entre os estudos. Devido à presença de uma heterogeneidade devido a aspectos metodológicos, clínicos ou /e estatística, não se realizou os cálculos de uma meta-análise. Conclusão: A revisão sistemática com enfoque diagnóstico não encontrou evidências que apóiem o uso da dosagem urinária e sérica de NGAL como uma ferramenta diagnóstica na avaliação da injúria aguda pós-transplante renal. Verifica-se a necessidade de estudos com boa qualidade metodológica comparando o NGAL urinário e sérico e creatinina sérica no manejo da injúria renal que pode acometer os rins transplantados. Apesar de todas as nossas tentativas, através de uma revisão minuciosa da literatura médica em diversos bancos de dados e na Grey Literature (British Library e Google Acadêmico) da última década, de podermos eleger o NGAL como um instrumento capaz de nos dar uma indicação precoce sobre os eventos agudos de perda de função renal, não conseguimos demonstrar nosso objetivo, pois, não obtivemos fundamentos que pudessem alicerçar esta afirmação. Desta forma depreendemos que há a necessidade para o prosseguimento desta investigação, uma vez que ao longo da revisão bibliográfica, este teste se mostrou de extrema importância no manejo precoce da injúria renal aguda que pode acometer os rins transplantados no pós-operatório imediato. Este é o teste em que não há qualquer tipo de intervenção no paciente se comparado ao que o que temos hoje ainda é a biópsia renal, que é um método extremamente invasivo, agredindo um órgão com um universo de respostas imunológicas desordenadas e com potencial de fracasso através desta abordagem diagnóstica mais agressiva. Seria interessante dar prosseguimento a estes trabalhos elaborando estudos prospectivos com enfoque diagnóstico, aprimorados metodologicamente, evitando determinados vieses detectados nessa revisão. Nosso trabalho de Doutorado pretende contemplar este aspecto trazendo uma contribuição mais sustentável para o uso do NGAL na prática Nefrológica dos Transplantes. / Introduction: In Nephrology, and in particular in the renal transplants, there was a substantial evolution in the last years. Nowadays Lipocalin Associate to Gelatinase of Neutrophil Human (NGAL) is considered a biomarker precocious of renal offense in the patients transplanted of kidney. Methodology: The systematic review with focus diagnosis – serum and urinary NGAL versus creatinine for acute renal offense in kidney transplanted by AKIN (Acute Kidney Injury Network), was accomplished in the next databases: MEDLINE (Pubmed and OVID interface), Cochrane records Central of Controlled Studies (CENTRAL), BASE, LILACS, Scopus, Web of Science, BIOSIS, GOOGLE ACADEMIC, between January 2000 up to 20/07/2010. Also were demanded publications through seeks manual, in important medical periodicals until May 2010 and goods reference lists as well as summaries of medical conferences in Congresses. Studies comparing serum and urinary NGAL and creatinina in the diagnosis of the acute renal offense in transplanted kidney, they started to accomplished being starting from 2000. The data were extracted of independent form for two reviewers who checked the study quality and the quality of the extracted data. The data extraction includes evaluate the clinical characteristics of each study, like kind of participants, intervention and outcomes and kinds of accomplished exams (the test standard- serum creatinine and the test diagnosis serum and urinary NGAL). Studies quality was select for a kind of instrument of methodological evaluation: QUADAS (Studies quality of accuracy diagnostic included in a Systematic Revision). Casuistically: They were revised 147 published studies, of January 2000 until May 2010, about NGAL and IRA, being 17 chosen to for bring most complete data and of these, 7 were selected to be submitted to the critical analysis of the methodological validity, because, performed the demanded criteria. Results: The systematic revision with focus diagnosis – serum and urinary NGAL versus creatinine in the evaluation of acute renal offense in transplanted kidney, only found four cohort studies and three cross-sectional, but with poor methodological quality. Therefore, it became impossible to accomplish the goal-analysis due to the difference among studies. Due to the presence of a heterogeneity due to methodological, clinical aspects or /e statistical, did not accomplish the calculations of a goal-analysis. Conclusion: The systematic revision with focus diagnosis did not find evidences that support the use of the urinary and serum dosage and NGAL as a tool diagnostic in the evaluation of the acute offense post-transplant renal. It verifies-if the need to studies with good methodological quality comparing NGAL urinary and sérico and serum creatinine in the handling of the renal offense that can attack the transplanted kidneys. Despite all our attempts, through a meticulous revision of the medical literature in several databases and in Grey Literature (British Library and Google Academic) of the last decade, of can choose NGAL as an instrument capable of give us a precocious indication about the acute events of loss of renal function, do not manage to demonstrate our goal, because, did not obtain foundations that could sustained this affirmation. Thus deduce that there is the need for the prosecution of this investigation, once along the bibliographical revision, this test showed of extreme importance in the precocious handling of the acute renal offense that can attack the kidneys transplanted in immediate postoperative. This is the test in which there is not any kind of intervention in the patient if compared to that what we have today still is the renal biopsy, that is an extremely invasive method, attacking an organ with an immunologic answers universe disordered and with failure potential through of this approach diagnostic more aggressive. It would be interesting to give prosecution to these jobs elaborating prospective studies with focus diagnosis, improved methodological, avoiding determined bias detected in this revision. Our Doctorate work intends to contemplate this aspect bringing a more sustainable contribution for NGAL's Use in the practice Nephrologists of the Transplants.

Resumo não disponível

Introdução: O transplante de pulmão é considerado tratamento de escolha para alguns casos selecionados de doença pulmonar avançada. Diferentes fatores prognósticos têm sido relatados por centros transplantadores. O objetivo desse estudo é reportar a experiência recente da Santa Casa de Porto Alegre com essa modalidade terapêutica e destacar fatores associados a mortalidade. Métodos: Foi realizada uma análise retrospectiva de 130 pacientes submetidos a transplante pulmonar com doador cadavérico no período entre janeiro de 2004 e julho de 2009. Foram coletados dados do doador, do receptor, do trans e pós-operatório. Resultados: A idade média foi de 53,14 anos, variando entre 8 e 72. Oitenta pacientes (61,5%) eram do sexo masculino. As principais causas de doença pulmonar foram fibrose intersticial 53 (40,7%) e doença pulmonar obstrutiva crônica 52 (40%). A sobrevida atuarial em 1 ano foi de 67,7%. Variáveis correlacionadas com sobrevida foram: idade (p=0,004), distância percorrida no teste de caminhada dos seis minutos (p=0,007), doença arterial coronariana (p=0,001), necessidade de circulação extracorpórea (p=0,02), necessidade de transfusão no intra-operatório (p=0,016), pressão venosa central aumentada 12 e 24 horas pós-transplante (p=0,02 e p=0,001, respectivamente), aumento da pressão capilar pulmonar 24 horas póstransplante (p=0,01); tempo em ventilação mecânica (p<0,01, ponto de corte em 36 horas estabelecido por uma curva ROC), reintubação (p=0,001), tempo de permanência em UTI (p<0,001), complicação abdominal (p=0,003), insuficiência renal aguda com necessidade de diálise (p<0,001), hiperinsuflação do pulmão nativo (p=0,02) e rejeição aguda no primeiro mês (p=0,03). Na análise multivariada, apenas diálise (p=0,004, HR 2,68), tempo em ventilação mecânica (p=0,004, HR 1,002 para cada hora) e reintubação (p=0,003, HR 2,88) permaneceram como preditores independentes de má evolução. Conclusões: A análise de variáveis na população do estudo mostrou que diálise, necessidade de ventilação mecânica por maior período (> 36 horas) e necessidade de reintubação são fatores prognósticos independentes em transplante pulmonar. / Background: Lung transplantation has been established as current therapy for selected patients with end-stage lung disease. Different prognostic factors have been reported by transplant centers. The objective of the present study is to report recent results from Santa Casa de Porto Alegre with lung transplantation and to search for prognostic factors. Methods: We performed a retrospective analysis of 130 patients who underwent lung transplantation at our institution from January 2004 to July 2009. Donor, recipient, intra and postoperative variables were collected. Results: The mean age was 53.14 years (from eight to 72) and 80 (61.5%) were male. The main causes of end-stage respiratory disease were pulmonary fibrosis 53 (40.7%) and chronic obstructive pulmonary disease 52 (40%). The actuarial 1-year survival was 67.7%. Variables correlated with survival were: age (p=0.004), distance in the six-minute walk test (p=0.007), coronary heart disease (p=0.001), cardiopulmonary bypass (p=0.02), intraoperative transfusion of red blood cells (p=0.016), increasing central venous pressure at 12 and 24 postoperative hours (p=0.02 and p=0.001, respectively), increasing pulmonary capillary wedge pressure at 24 hours (p=0.01); length of intubation (p<0.01, cut off at 36 hours through a ROC curve), reintubation (p=0.001), length of ICU stay (p<0.001), abdominal complication (p=0.003), acute renal failure requiring dialysis (p<0.001), native lung hyperinflation (p=0.02) and acute rejection in the first month (p=0.03). In multivariate analysis, only dialysis (p=0.004, HR 2.68), length of intubation (p=0.004, HR 1.002 for each hour) and reintubation (p=0.003, HR 2.88) proved to be independent predictors. Conclusion: Analysis of variables in our cohort highlighted dialysis, longer mechanical ventilation requirement (> 36 hours) and reintubation as independent prognostic factors in lung transplantation.

A epilepsia é uma condição crônica frequentemente acompanhada de perda celular e distúrbio cognitivo. Na maioria das vezes, é difícil saber o quanto isso se deve à patologia de base que provoca as crises epiléticas, as crises epilépticas por si ou seu tratamento com fármacos antiepilépticos, bem como o contexto sócio-cultural do paciente. Para investigar o efeito das células mononucleares da medula óssea (CMO) sobre a neuroplasticidade no sistema nervoso central, induzida pelo status epilepticus, provocado por lítio e pilocarpina, foram estudados ratos epilépticos e controles que receberam o transplante de (1x107 CMO/100μl ou o mesmo volume de solução salina, na veia da cauda), 90 min após SE (grupo agudo) ou 22 dias após SE (grupo crônico). Aqui mostramos que, no grupo agudo, ao compararmos os ratos controles com os transplantados, as CMO estavam presentes em (1-3, 5, 10 e 120 dias) após o transplante no cérebro epiléptico. Em 10 dias expressavam o marcador de microglia (CD11b), em 120 dias expressaram o marcador de neurônio jovem (doublecortina). Verificamos por vídeo-monitoração, (15-21dias) após o SE, que os ratos do grupo tratado com CMO não apresentaram crises espontâneas recorrentes (CER), e que, entre (120-127 dias) após SE, 20% dos ratos transplantados apresentaram CER. Observamos perda neuronal significativa nas três regiões hipocampais analisadas (CA1, CA3 e hilo do GD) no grupo epiléptico que recebeu o transplante de solução salina, sendo extremamente significativa na região de CA1 (em 10 dias); CA1, CA3 e no hilo do GD em (120 dias) após o SE. Entretanto, no grupo tratado com CMO, a perda neuronal foi menor nas regiões analisadas em 120 dias após SE. As medidas do volume hipocampal revelaram que não foram observadas diferenças significantes entre o grupo epiléptico tratado com CMO quando comparado com o grupo controle não epiléptico, tanto em 10 quanto em 120 dias após SE. O volume hipocampal entre os ratos epilépticos (não-tratado e tratado) apresentou diferença significativa em 120 dias após SE. No estudo da atividade elétrica em fatias hipocampais, ao compararmos os dados dos ratos epilépticos encontramos uma tendência a maior facilidade de se obter LTP no grupo tratado com CMO (80% das fatias) enquanto no grupo tratado com solução salina ocorreu indução em (30% das fatias) 10 dias após SE. Esta facilidade de indução foi maior em 120 dias após SE, onde a indução da LTP ocorreu em 100% das fatias do grupo epiléptico tratado com CMO e em nenhuma do grupo epiléptico tratado com solução salina. O desempenho dos ratos epilépticos de ambos os grupos experimentais foi prejudicada no teste de aprendizagem espacial do labirinto aquático. Embora que esta função foi menos afetada nos ratos epilépticos tratados com CMO do que os ratos não tratados. No grupo crônico, avaliamos por vídeo-monitoração o comportamento dos ratos epilépticos entre os dias 15-21 após SE, no dia 22 os ratos foram transplantados com CMO de dois diferentes doadores (1) ratos Wistar e (2) camundongos EGFP C57/bl6, ou solução salina e foram observados por mais 7 dias (1) e 14 dias (2). Verificou-se que independente do doador os ratos tiveram uma diminuição na freqüência das CER de aproximadamente 50% e de 53,5% [doadores (1) e (2), respectivamente], quando comparado o período pós com o pré-tratamento. Verificamos que as células GFP-positivas foram encontradas dispersas por todo o cérebro dos ratos epilépticos 45 dias após o transplante, e estavam presentes principalmente nas áreas corticais e no giro denteado do hipocampo. Algumas destas células expressaram o marcador de neurônio adulto (NeuN) e de células da glia (GFAP). No entanto, não foram observadas nos grupos agudo e crônico, células GFPpositivas no cérebro dos ratos controle (não epilépticos). A análise quantitativa de secções do cérebro de ratos do grupo epiléptico tratado com CMO mostrou que o número de neurônios não diferiu significativamente do grupo controle (não-epiléptico) nas duas regiões avaliadas (CA1 e hilo). No estudo do brotamento neuronal o grupo de ratos tratado com CMO apresentou aproximadamente 78,6% menos brotamento das fibras musgosas que os ratos epilépticos não tratados. No estudo eletrofisiológico a LTP induzida por estimulação tetânica foi obtida em (100%) das fatias hipocampais obtidas de ratos controles não-epilépticos, em (100%) das fatias de ratos epilépticos tratados com CMO e em nenhuma das fatias dos ratos epilépticos tratados com solução salina. Nossos dados sugerem que o transplante de células mononucleares da medula óssea protege e/ou previne a progressão da epilepsia crônica. / The epilepsy is a chronic condition frequently accompanied by cellular loss and cognitive disturbance. Most of the time, it is difficult to know how much this occurs due to the base pathology that provokes epileptic crises, the epileptic crises by themselves or their treatment with anti-epilepsy medications, as well as the patient’s social-cultural context. In order to investigate the effect of bone marrow mononuclear cells (BMCs) on the neuroplasticity in the central nervous system, induced by status epilepticus, provoked by lithium and pilocarpine, epileptic and control rats were studied and received a transplant of (1x107 BMC/100μl or the same volume of saline solution, in the vein of the tail), 90 min after SE (acute group) or 22 days after SE (chronic group). Here we have demonstrated that, in the acute group, when comparing the control rats to the transplanted ones, BMCs were presented in the epileptic brain (1-3, 5, 10 and 120 days) after the transplant. In 10 days they expressed the microglial marker (CD11b), in 120 days they expressed the young neuronal marker (doublecortin). We verified by video monitoring, (15-21 days) after SE, that the rats from the treated group with BMCs did not present spontaneous recurrent seizures (SRS), and that, between 120-127 days after SE, 20% of the transplanted animals presented SRS. We observed significant neuronal loss in the three analyzed hippocampus regions (CA1, CA3 and hilo of GD) in the epileptic group that received the transplant of saline solution, being extremely significant in the region of CA1 (in 10 days); CA1, CA3 and in hilo of GD in (120 days) after the SE. However, in the group treated with BMCs, the neuronal loss was smaller in the areas analyzed in (120 days) after SE. The measures of the hippocampus volume revealed significant differences not observed between the epileptic group treated with BMCs, when compared to the non-epileptic control group, as in 10 as in 120 days after SE. Nevertheless, the hippocampus volume between the epileptic rats (non-treated and treated) presented a significant difference in 120 days. In the study of electrical activity in hippocampal slices, by comparing the epileptic rats data, we found a tendency of a greater facility in obtaining LTP in the treated group with BMCs (80% of the slices) while in the treated group with a saline solution an induction in (30% of the slices) it occurred 10 days after SE. This facility of induction was higher in 120 days after SE, where the induction of LTP occurred in 100% of the slices in the epileptic group treated with BMCs and in none of the epileptic group treated with saline solution. In the spatial reference memory version of the water Maze test, the performance of both epileptic experimental groups was impaired. Although this function was less affected in epileptic rats treated with BMCs than in saline treated rats. In the chronic group, we evaluated the epileptic rats behavior through video monitoring between the days 15-21 after SE, in the day 22 the rats were transplanted with BMCs from two different donors (1) Wistar rats and (2) EGFP C57/bl6 Mice, or saline solution, and were observed for more 7 days (1) and 14 days (2). It was verified that regardless on the donor, the rats had a decrease in the frequency of SRS of approximately 50% and of 53,5% [donors (1) and (2), respectively], when comparing the pos-period with the pre-treatment. We verified that the GFP-positive cells were found scattered through the whole epileptic rats brain 45 days after the transplant, and they were mainly present in the cortical areas and the dentate gyrus of hippocampus. Some of these cells expressed an adult neuronal marker (NeuN) and glial cells (GFAP). Nevertheless, this was not observed in acute and chronic groups, GFP-positive cells in the brain of the control rats (non-epileptic). The quantitative analysis of the sectors from the brain of the epileptic rats group treated with BMCs demonstrated that the number of neurons did not differ significantly from the control group (non-epileptic) in two evaluated regions (CA1 and hilo). In the study of neuronal sprouting, the group of rats treated with BMCs presented approximately 78,6% less sprout than the rats from the non-treated group. In the electrophysiological study LTP induced by tetanic stimulation was obtained in (100%) of the hipocampal slices of nonepileptic control rats, in (100%) of the slices of epileptic rats treated with BMCs and in none of the slices from the epileptic rats treated with saline solution. Our data suggest that the transplant of cells from the bone marrow protects and/or prevents the progression of chronic epilepsy.

Introdução: Técnicas que possibilitem o diagnóstico não-invasivo das condições que afetam a sobrevida dos transplantes e os mecanismos associados ao seu desenvolvimento encontram-se em intensa investigação. Este estudo objetiva delinear perfis de expressão de RNA mensageiro de alo-imunidade, tolerância, fibrose e injúria tubular aguda associados aos diferentes imunossupressores utilizados na prática clínica dos transplantes renais. Métodos: Amostras de sangue e urina foram coletadas de 53 pacientes transplantados renais com pelo menos um ano de seguimento pós-transplante e com níveis séricos de creatinina estáveis. Os pacientes foram divididos em 6 grupos, de acordo com seu regime de imunossupressão, todos contendo corticosteróides em baixas doses de manutenção: (1) inibidor da calcineurina (IC) + azatioprina (AZA) (7 pacientes); (2) ácido micofenólico (AMF) (6 pacientes); 3) rapamicina (RAPA) (7 pacientes); 4) IC + AMF (15 pacientes); 5) IC (6 pacientes); 6) belatacept (BLT) + AMF (11 pacientes). A quantificação do RNA mensageiro dos genes FOXP3, TIM-3, KIM-1, TGF-β e CTGF foi realizada através da técnica de reação em cadeia da polimerase em tempo real utilizando o método de quantificação relativa 2-ΔΔCT. Resultados: A expressão de FOXP3 foi maior nos grupos RAPA (P = 0,049) e IC (P = 0,039) em comparação ao grupo IC+AZA; a expressão na urina foi maior no grupo AMF em relação aos grupos IC+AZA(P = 0,004) e IC+AMF (P = 0,003), e no grupo RAPA em comparação ao grupo IC+AMF (P = 0,003). O grupo RAPA apresentou maior expressão de TIM-3 no sangue do que o grupo IC+AZA (P = 0,049); na urina, a expressão foi maior no grupo AMF quando comparada aos grupos IC+AZA (P = 0,005), RAPA (P = 0,003), IC+AMF (P = 0,001) e BLT+AMF (P = 0,021). TGF-β no sangue foi menos expresso no grupo IC+AZA em comparação aos grupos IC+AMF (P = 0,005), IC (P = 0,014) e BLT+AMF (P = 0,013); a expressão urinária foi menor no grupo IC+AMF em relação aos grupos IC+AZA(P = 0,008), AMF (P = 0,002), RAPA (P = 0,01), IC (P = 0,015) e BLT+AMF (P < 0,001); os grupos IC+AZA e RAPA também apresentaram menor expressão de TGF-β na urina em comparação aos grupos AMF (P = 0,028 e 0,032, respectivamente) e BLT+AMF (P = 0,001 e 0,006, respectivamente). A expressão de CTGF no sangue não foi diferente entre os grupos; sua expressão urinária foi menor no grupo IC+AMF quando comparada aos grupos IC+AZA (P = 0,004), AMF (P = 0,001), RAPA (P = 0,01) e BLT+AMF (P = 0,001). KIM-1 não foi expresso em células sanguíneas; na urina, o grupo IC+AZA apresentou maior expressão de KIM-1 do que o grupo IC+AMF (P = 0,019). Conclusões: A análise dos perfis de expressão gênica nos vários regimes de imunossupressão permite identificar associação de diferentes processos a cada tipo de combinação terapêutica. Os resultados evidenciam a associação dos inibidores de calcineurina aos marcadores de fibrose tecidual, enquanto que rapamicina e micofenolato parecem mediar processos de tolerância imune e modulação da alo-imunidade. Estudos com maior poder estatístico poderão estreitar essas associações, determinando o real papel da expressão de biomarcadores como ferramentas para o diagnóstico das condições que afetam os enxertos renais.

O transplante renal representa atualmente a melhor opção terapêutica e de reabilitação para o paciente com insuficiência renal crônica terminal. As rejeições são as principais causas de perda dos rins transplantados e, entre essas, as rejeições agudas são as que apresentam maior relevância clínica. Desta maneira, a monitorização do transplante renal com vistas ao diagnóstico precoce da rejeição e seu rápido tratamento é de grande relevância no manejo adequado desses pacientes. Como a rejeição celular aguda é mediada predominantemente por linfócitos T e, visto que, a enzima adenosina deaminase (ADA) é encontrada principalmente, a nível de sangue periférico, em linfócitos, objetivou-se com esse estudo, verificar a possível associação entre atividade sérica da ADA e a rejeição aguda do enxerto renal. Buscou-se, também, determinar a sua utilidade como método diagnóstico de rejeição celular aguda. Foram acompanhados até 1 mês de internação 35 pacientes transplantados renais. Dosagens da atividade de ADA sérica foram feitas cinco vezes por semana e sempre que houvesse suspeita clínica de rejeição aguda. O diagnóstico de rejeição aguda foi estabelecido por 2 nefrologistas, aos quais foram omitidos os resultados dos níveis séricos ADA. Estes médicos tinham todas informações clínicas e laboratoriais, incluindo valores séricos de creatinina e ciclosporina, cintilografias, ecografias, citologia aspirativa, punção biópsia renal quando esta era realizada e resposta aos diferentes tratamentos imunossupressores usados. A análise estatística foi feita utilizando-se testes de Mann-Whitney e Qui-quadrado. O nível p menor do que 0,05 foi considerado como significativo. A mediana dos episódios de rejeição celular aguda ficou entre o sexto e sétimo dia pós-transplante, havendo diferença estatisticamente significativa nos valores de ADA no sexto dia de seguimento entre os pacientes com rejeição (60.16), em relação aos que não tiveram rejeição celular aguda (24,55) (p=0,021 MW). Para se avaliar a eficácia da atividade sérica de ADA com método diagnóstico de rejeição aguda, empregou-se pontos de corte de valores de ADA>35,>40,>45, >50 e > que 30% dos valores do período pré-rejeição. Houve associação estatisticamente significativa entre ADA>30% e rejeição celular aguda (p=0.035 MW). Verificou-se, também, aumento significativos da atividade sérica de ADA em pacientes anti-HCV positivos e com necrose tubular aguda, sem interferência sobre os resultados dos episódios de rejeição celular aguda. Usando esses pontos de corte como parâmetros de diagnóstico para rejeição aguda observou-se: sensibilidade = 55,5%, especificidade = 82,3%, valor preditivo positivo = 76,9%, valor preditivo negativo = 63,6% e acurácia = 69,0%. Conclui-se que há um aumento significativo da atividade sérica da ADA durante os episódios de rejeição aguda de enxertos renais humanos, encontrando-se associação significativa entre o aumento de 30% dos valores de ADA pré-rejeição e o diagnóstico de rejeição celular aguda.

As vacinas de DNA têm sido utilizadas para a indução de imunidade contra antígenos virais e bacterianos. A aplicação de modelos experimentais tem sido explorada visando a indução de tolerância imunológica através da expressão de genes cujos produtos podem modular o sistema imune para um estado de não responsividade. A terapia gênica oferece a possibilidade de manipulação do sistema imune do receptor, através de um sistema de administração de genes específicos sob condições pré-definidas. Sua eficácia depende dos níveis de expressão e da natureza do antígeno, da via de administração assim como de sua distribuição nos tecidos (a qual às vezes depende do promotor utilizado). Porém, sua aplicação clínica é limitada em parte devido aos baixos níveis de expressão obtidos in vivo. A VP22 é uma proteína do tegumento do vírus Herpes simples tipo 1, que tem a propriedade de fazer tráfego intercelular. Estudos recentes têm demonstrado a alta eficiência desta molécula no transporte de proteínas heterólogas como VP22-p53, VP22-β galactosidase e VP22-proteína verde fluorescente. Para a indução de tolerância imunológica, tem sido demonstrado que a persistência do antígeno, pelo menos por algum período, é muito importante. Moléculas do complexo de histocompatibilidade principal (MHC) têm sido utilizadas para induzir tolerância a nível central ou periférico, em diferentes protocolos. Dentre estas, as moléculas da classe I do camundongo, Kb, têm sido utilizadas com sucesso. O objetivo desse trabalho foi de construir duas vacinas recombinantes: pVP22::Kb e pCIneo::Kb. A primeira contém dois genes clonados na mesma pauta de leitura: a cadeia pesada de classe I Kb e VP22. O cDNA que codifica para o Kb foi obtido pela extração de RNA total de baço de um camundongo C57BL/6 (haplótipo H-2b) seguido de transcrição reversa. Este produto foi amplificado pela reação em cadeia da polimerase. Esta molécula também foi obtida pela amplificação direta do gene Kb previamente clonado no sítio EcoR I do plasmídeo pBluescriptIISK (Stratagene®). Ambos os produtos de PCR foram subclonados com extremidades cegas no plasmídeo pCRBluntII (Invitrogen®). Foram obtidos dezenove plasmídeos recombinantes, denominados pCRBluntII::Kb, e um deles foi escolhido e digerido com as enzimas de restrição Spe I e Xba I e defosforilado com a enzima fosfatase alcalina (CIAP). O fragmento digerido foi clonado nos plasmídeos pVP22-myc/His (Invitrogen®) e pCIneo (Promega®) previamente digeridos com a enzima Xba I. Os novos plasmídeos pVP22::Kb e pCIneo::Kb foram utilizados para transfectar a linhagem celular eucariótica CHO. A expressão do mRNA para o Kb foi confirmada pela transcrição reversa e PCR e a expressão da proteína por imunofluorescência e citometria de fluxo.