As estratÃgias para prevenir a lesÃo de isquemia reperfusÃo durante as cirurgias hepÃticas incluem a oclusÃo intermitente do fluxo de sangue ao fÃgado ou a utilizaÃÃo de substÃncias que poderiam causar um efeito protetor ou aumento da resistÃncia do tecido hepÃtico à isquemia. O presente estudo teve o objetivo de avaliar o efeito do uso da L-Alanil-Glutamina (GLN) em Ratus novergicus submetidos à isquemia hepÃtica normotÃrmica, atravÃs de provas bioquÃmicas e imunohistoquÃmicas. Utilizou-se 30 ratos machos, da variedade Wistar, com peso mÃdio de 300 gramas, distribuÃdos em trÃs grupos de 10 ratos cada: grupo Controle, Grupo Isquemia ReperfusÃo (IR) e grupo Glutamina + Isquemia ReperfusÃo (GLN+IR). O grupo IR recebeu soluÃÃo salina 0,9% intra-peritoneal (IP), 2 horas antes de ser submetido laparotomia, e isquemia total por pinÃamento da trÃade portal por 30 minutos seguidos de reperfusÃo por 60 minutos; O grupo GLN + IR recebeu 0,75mg/Kg de glutamina IP 2 horas antes de isquemia total por 30 minutos, seguidos de reperfusÃo por 60 minutos. O grupo Controle foi submetido à punÃÃo peritoneal 2 horas antes da laparotomia, e de apenas manipulaÃÃo da trÃade portal, sem realizar pinÃamento algum. O procedimento foi realizado sob anestesia (IP) com uma soluÃÃo de cloridrato de ketamina, 80 mg/Kg + cloridrato xilazina, 10 mg/Kg. Ao final do perÃodo de reperfusÃo os animais foram relaparotomizados e colhido amostras de sangue para avaliaÃÃo dos nÃveis de ALT e DHL, e amostras de tecido hepÃtico para estudo imunohistoquÃmico com anticorpo para Caspase-3. A significÃncia estatÃstica foi calculada pelo teste ANOVA e pelo pÃs-teste de comparaÃÃo de mÃltiplas mÃdias de Tukey utilizando-se o software GraphPad Prism, versÃo 5.00. A mÃdia e erro padrÃo da dosagem de ALT, DHL, e do Ãndice de cÃlulas marcadas com Caspase-3 foi respectivamente para o grupo IR: 270,6+40,8; 2079,0+262,4 e 66,3+13,5; para o grupo GLN +IR: 127,9+31,17; 1019,0+187,9 e 36,6+12,0; para o grupo Controle: 83,3+5,5; 206,6+16,2 e 21,9+111,4. O prÃ-condicionamento com L-alanil-GLN IP reduziu significativamente os valores de ALT e DHL em Ratus novergicus, submetidos à lesÃo de IR hepÃtica, sugerindo hepatoproteÃÃo. / As estratÃgias para prevenir a lesÃo de isquemia reperfusÃo durante as cirurgias hepÃticas incluem a oclusÃo intermitente do fluxo de sangue ao fÃgado ou a utilizaÃÃo de substÃncias que poderiam causar um efeito protetor ou aumento da resistÃncia do tecido hepÃtico à isquemia. O presente estudo teve o objetivo de avaliar o efeito do uso da L-Alanil-Glutamina (GLN) em Ratus novergicus submetidos à isquemia hepÃtica normotÃrmica, atravÃs de provas bioquÃmicas e imunohistoquÃmicas. Utilizou-se 30 ratos machos, da variedade Wistar, com peso mÃdio de 300 gramas, distribuÃdos em trÃs grupos de 10 ratos cada: grupo Controle, Grupo Isquemia ReperfusÃo (IR) e grupo Glutamina + Isquemia ReperfusÃo (GLN+IR). O grupo IR recebeu soluÃÃo salina 0,9% intra-peritoneal (IP), 2 horas antes de ser submetido laparotomia, e isquemia total por pinÃamento da trÃade portal por 30 minutos seguidos de reperfusÃo por 60 minutos; O grupo GLN + IR recebeu 0,75mg/Kg de glutamina IP 2 horas antes de isquemia total por 30 minutos, seguidos de reperfusÃo por 60 minutos. O grupo Controle foi submetido à punÃÃo peritoneal 2 horas antes da laparotomia, e de apenas manipulaÃÃo da trÃade portal, sem realizar pinÃamento algum. O procedimento foi realizado sob anestesia (IP) com uma soluÃÃo de cloridrato de ketamina, 80 mg/Kg + cloridrato xilazina, 10 mg/Kg. Ao final do perÃodo de reperfusÃo os animais foram relaparotomizados e colhido amostras de sangue para avaliaÃÃo dos nÃveis de ALT e DHL, e amostras de tecido hepÃtico para estudo imunohistoquÃmico com anticorpo para Caspase-3. A significÃncia estatÃstica foi calculada pelo teste ANOVA e pelo pÃs-teste de comparaÃÃo de mÃltiplas mÃdias de Tukey utilizando-se o software GraphPad Prism, versÃo 5.00. A mÃdia e erro padrÃo da dosagem de ALT, DHL, e do Ãndice de cÃlulas marcadas com Caspase-3 foi respectivamente para o grupo IR: 270,6+40,8; 2079,0+262,4 e 66,3+13,5; para o grupo GLN +IR: 127,9+31,17; 1019,0+187,9 e 36,6+12,0; para o grupo Controle: 83,3+5,5; 206,6+16,2 e 21,9+111,4. O prÃ-condicionamento com L-alanil-GLN IP reduziu significativamente os valores de ALT e DHL em Ratus novergicus, submetidos à lesÃo de IR hepÃtica, sugerindo hepatoproteÃÃo. / The strategies to prevent the hepatic ischemia/reperfusion injury after hepatic resections or transplantation include intermittent control of blood influx to the liver or the use of a substance that could cause a protective effect or increase of the resistance of the hepatic tissue to ischemia. The present study had the objective to evaluate the effect of the use of the L-Alanil-Glutamina in Ratus novergicus submitted the normothermic hepatic ischemia on liver biochemists and imunohistochemistry, as well as evaluating apoptosis present in this experimental model. 30 male rats, with average weight of 300 grams, divided in three groups of 10 rats: Control group, Ischemia Reperfusion group and Glutamine group. Ischemia Reperfusion group received saline solution 0.9% intra-peritoneal (IP), 2 hours before being submitted to laparotomy, and total ischemia by clampping of portal triad for 30 minutes followed of reperfusion for 60 minutes; The Glutamine group received 0,75mg/Kg IP 2 hours before total ischemia for 30 minutes, followed by reperfusion for 60 minutes. Control group was submitted the peritoneal punction 2 hours before the laparotomy, and only manipulation of the biliary tree, without carrying through any clamping. The procedure was carried through under anesthesia (IP) with a solution of Ketamin chloridate , 80 mg/Kg + xilazin chloridate, 10 mg/Kg. To the end of the period of reperfusion the animals had been relaparotomized and blood collected for evaluation of the levels of ALT and DHL, and hepatic tissue samples for imunohistochemistry study with antibody for Caspase-3. The statistics significance was calculated by ANOVA and the post test of multiple comparison of Tukey, using the software GraphPad Prism, version 5.00. The average and error standard of the dosage of ALT, DHL, and of the index of cells marked with Caspase-3 was respectively for the Ischemia Reperfusion group: 270,6+40,8; 2079,0+262,4 and 66,3+13,5; for the Glutamine group: 127,9+31,17; 1019,0+187,9 and 36,6+12,0; for the Control group: 83,3+5,5; 206,6+16,2 and 21,9+111,4. The preconditioning with intraperitoneal L-alanil-glutamine significantly reduces the values of the biochemists markers, in Ratus novergicus submitted to the hepatic ischemia-reperfusion injury, suggesting hepatic protection. / The strategies to prevent the hepatic ischemia/reperfusion injury after hepatic resections or transplantation include intermittent control of blood influx to the liver or the use of a substance that could cause a protective effect or increase of the resistance of the hepatic tissue to ischemia. The present study had the objective to evaluate the effect of the use of the L-Alanil-Glutamina in Ratus novergicus submitted the normothermic hepatic ischemia on liver biochemists and imunohistochemistry, as well as evaluating apoptosis present in this experimental model. 30 male rats, with average weight of 300 grams, divided in three groups of 10 rats: Control group, Ischemia Reperfusion group and Glutamine group. Ischemia Reperfusion group received saline solution 0.9% intra-peritoneal (IP), 2 hours before being submitted to laparotomy, and total ischemia by clampping of portal triad for 30 minutes followed of reperfusion for 60 minutes; The Glutamine group received 0,75mg/Kg IP 2 hours before total ischemia for 30 minutes, followed by reperfusion for 60 minutes. Control group was submitted the peritoneal punction 2 hours before the laparotomy, and only manipulation of the biliary tree, without carrying through any clamping. The procedure was carried through under anesthesia (IP) with a solution of Ketamin chloridate , 80 mg/Kg + xilazin chloridate, 10 mg/Kg. To the end of the period of reperfusion the animals had been relaparotomized and blood collected for evaluation of the levels of ALT and DHL, and hepatic tissue samples for imunohistochemistry study with antibody for Caspase-3. The statistics significance was calculated by ANOVA and the post test of multiple comparison of Tukey, using the software GraphPad Prism, version 5.00. The average and error standard of the dosage of ALT, DHL, and of the index of cells marked with Caspase-3 was respectively for the Ischemia Reperfusion group: 270,6+40,8; 2079,0+262,4 and 66,3+13,5; for the Glutamine group: 127,9+31,17; 1019,0+187,9 and 36,6+12,0; for the Control group: 83,3+5,5; 206,6+16,2 and 21,9+111,4. The preconditioning with intraperitoneal L-alanil-glutamine significantly reduces the values of the biochemists markers, in Ratus novergicus submitted to the hepatic ischemia-reperfusion injury, suggesting hepatic protection.

A obstrução intestinal mecânica representa uma condição de urgência, necessitando diagnóstico precoce e terapêutica adequada, em virtude do seu elevado grau de morbidade e de mortalidade. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da N-acetilcisteína associada ao Ringer lactato ou à solução salina hipertônica na resposta inflamatória, histologia e translocação bacteriana em modelo experimental de obstrução e isquemia intestinal. Para tanto, Foram constituídos quatro grupos experimentais, com 10 ratos Wistar em cada, além do grupo de referência: OI - Submetidos a obstrução e isquemia intestinal e enterectomia com anastomose intestinal, sem reanimação volêmica; RL - Submetidos a obstrução e isquemia intestinal, reanimação volêmica com Ringer lactato (32ml/kg, i.v., em 10 minutos) e enterectomia com anastomose intestinal; RLNAC - Submetidos a obstrução e isquemia intestinal, reanimação volêmica com Ringer lactato associado a NAC (32ml/kg + 150 mg/kg i.v. em 10 minutos) e enterectomia com anastomose intestinal; SHNAC - Submetidos a obstrução e isquemia intestinal, reanimação volêmica com solução salina hipertônica a 7,5% associado com NAC (4ml/kg + 150 mg/kg i.v., em 10 minutos) e enterectomia com anastomose intestinal. Grupo Referência (n=5): Animais anestesiados, submetidos a coleta de materiais para cultura e histologia e sacrificados por exsanguinação. Os animais receberam uma associação anestésica de cetamina e xilazina intramuscular em membro posterior direito, na dose de 60mg/kg e 10mg/kg, respectivamente. Decorridas 24 h do tratamento, a eutanásia foi realizada por exanguinação, sob anestesia, após a coleta dos tecidos / Mechanical intestinal obstruction represents a condition of urgency, necessary early diagnosis and appropriate therapy, due to their high degree of morbidity and mortality. In this way, the objective of this study was to evaluate the effect of N-acetylcysteine associated with lactated Ringer\'s or hypertonic saline solution in the inflammatory response, histology and translocation in an experimental model of intestinal obstruction and ischemia. For Four experimental groups were constituted with 10 Wistar rats each, in addition to the reference group: OI - submitted to obstruction and ischemia intestinal and enterectomy with intestinal anastomosis, without volume resuscitation; RL - Undergoing intestinal obstruction and ischemia, volume resuscitation with Ringer\'s lactate (32ml / kg, i.v., within 10 minutes) and anastomosis enterectomy intestinal; RLNAC - Undergoing obstruction and intestinal ischemia, resuscitation with lactated Ringer\'s lactating NAC (32 ml / kg + 150 mg / kg i.v. in 10 minutes) and enterectomy with intestinal anastomosis; SHNAC - Submitted to obstruction and intestinal ischemia, volume resuscitation with saline solution hypertension at 7.5% associated with CAP (4 ml / kg + 150 mg / kg i.v., in 10 minutes) and enterectomy with intestinal anastomosis. Reference Group (n = 5): Anesthetized animals, submitted to collection of materials for culture and histology and sacrificed by exsanguination. The animals received a anesthetic association of ketamine and intramuscular xylazine in limb posterior right, at the dose of 60mg / kg and 10mg / kg, respectively. After 24 h of treatment, euthanasia was performed by exsanguination, under anesthesia, after collection of tissues

Introdução: A lesão de isquemia e reperfusão (I/R) intestinal pode causar danos celular e tecidual local e em órgãos a distância. Alguns fatores podem estar envolvidos nesses processos, tais como: a geração de espécies reativas de oxigênio, mediadores inflamatórios, óxido nítrico (NO) e estresse do retículo endoplasmático (RE). Devido ao envolvimento do estresse oxidativo nas lesões de I/R intestinal, algumas opções terapêuticas com antioxidantes estão sendo estudadas e testadas nas lesões de I/R intestinal. Objetivo: Avaliar o efeito local e sistêmico da glutamina no intestino e fígado de animais submetidos à I/R intestinal. Métodos: Foram utilizados 20 ratos wistar machos divididos em quatro grupos: Sham operated (SO), Glutamina+Sham operated (G+SO), Isquemia e reperfusão intestinal (I/R); Glutamina+Isquemia e reperfusão intestinal (G+I/R). Os animais foram anestesiados e, após, realizada a laparotomia mediana e identificação da artéria mesentérica superior. A artéria foi clampeada por 30 e após esse tempo, os animais foram mantidos por mais 15 minutos em reperfusão intestinal. A glutamina foi administrada por via intraperitoneal, na dose de 25 mg/Kg diluída em 1 mL de solução fisiológica. O tratamento foi realizado uma vez ao dia, durante 48 horas antes da indução da isquemia. Foram realizadas análises séricas para a função de integridade hepática através das enzimas aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA) e danos ao DNA pelo ensaio cometa. Realizamos a análise histológica dos tecidos através da coloração de Hematoxilina-Eosina e imunohistoquímica para avaliar a quantidade de células marcadas com os anticorpos monoclonais IL-1β, IL-6, TNF-α e NF-B no intestino e fígado. O homogeneizado do intestino e fígado foram utilizados para a avaliação dos níveis de lipoperoxidação (LPO) através das substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), avaliação da atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx), determinação dos níveis de glutationa (GSH), avaliação dos metabólitos do óxido nítrico (nitritos/nitratos) e para as análises moleculares das proteínas iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 e ATF-6 por Western Blot. Resultados: O pré-tratamento com glutamina reduziu os níveis de LPO, óxido nítrico, danos ao DNA, bem como as enzimas de integridade hepática. Observamos que a glutamina foi eficaz na preservação da arquitetura tecidual do intestino e fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, reduzindo parâmetros como infiltrado inflamatório, perda das vilosidades intestinais e necrose. Constatou-se que a glutamina ativou a via do Nrf2 e as enzimas antioxidantes, reduziu o dano celular, e inibiu o estresse do RE, além de reduzir os mediadores do processo inflamatório. Conclusão: Neste estudo, sugerimos que o pré-tratamento com a glutamina desempenhou um papel protetor tanto no intestino como no fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, demonstrado pelas análises estudadas, possivelmente pela sua ação antioxidante e anti-inflamatória. / Background: Injury by intestinal ischemia and reperfusion (I/R) can cause local and cellular damage to tissues and organs at distance. Some factors may be involved in those processes, such as the generation of reactive oxygen species, inflammatory mediators, nitric oxide (NO) and endoplasmic reticulum stress. Due to the involvement of oxidative stress in intestinal I/R lesions, some therapeutic options with antioxidants are being studied and tested in order to reduce these damages. Objective: To evaluate the local and systemic effect of glutamine in the intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R. Methods: Twenty male Wistar rats were divided into four groups: Sham operated (SO), Glutamine+Sham operated (G+SO), Intestinal Ischemia and reperfusion (I/R); Glutamine+intestinal ischemia and reperfusion (G+I/R). The animals were anesthetized and after we performed the median laparotomy and identification of the superior mesenteric artery. The artery was clamped for 30 minutes and after that the animals were maintained for another 15 minutes in intestinal reperfusion. Glutamine was administered intraperitoneally at a dose of 25 mg/kg diluted in 1 ml of saline solution. Treatment was performed once daily for 48 hours prior to induction of ischemia. Serum samples for hepatic integrity were collected, and the enzymes aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase (FA) were accessed. DNA damage was evaluated by the comet assay. We performed the histological analysis of the tissues through the staining of Hematoxylin-Eosin and immunohistochemistry, in order to evaluate the amount of cells labeled with the monoclonal antibodies IL-1β, IL-6, TNF-α and NF-B in the intestine and liver. The intestinal and liver homogenates were used to evaluate the levels of lipoperoxidation (LPO) through thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), evaluation of the activity of antioxidant enzymes catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx), determination of glutathione levels (GSH) and nitric oxide (nitrites/nitrates), and for the molecular analyzes of the iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 and ATF-6 proteins we performed Western blot analysis. Results: Pretreatment with glutamine reduced levels of LPO, nitric oxide, DNA damage, as well as liver integrity enzymes. We observed that glutamine was effective in preserving the intestinal and liver tissue architecture of animals submitted to intestinal I/R, reducing parameters such as inflammatory infiltrate, loss of intestinal villi and necrosis. It was found that glutamine activated the Nrf2 pathway and antioxidant enzymes, reduced cell damage, and inhibited endoplasmic reticulum stress in addition to reducing mediators of the inflammatory process. Conclusion: In this study, we suggest that pretreatment with glutamine played a protective role in both intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R, demonstrated by the present analyzes, possibly for its antioxidant and anti-inflammatory action.

Resumo não disponível.

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Introdução: A lesão de isquemia e reperfusão (I/R) intestinal pode causar danos celular e tecidual local e em órgãos a distância. Alguns fatores podem estar envolvidos nesses processos, tais como: a geração de espécies reativas de oxigênio, mediadores inflamatórios, óxido nítrico (NO) e estresse do retículo endoplasmático (RE). Devido ao envolvimento do estresse oxidativo nas lesões de I/R intestinal, algumas opções terapêuticas com antioxidantes estão sendo estudadas e testadas nas lesões de I/R intestinal. Objetivo: Avaliar o efeito local e sistêmico da glutamina no intestino e fígado de animais submetidos à I/R intestinal. Métodos: Foram utilizados 20 ratos wistar machos divididos em quatro grupos: Sham operated (SO), Glutamina+Sham operated (G+SO), Isquemia e reperfusão intestinal (I/R); Glutamina+Isquemia e reperfusão intestinal (G+I/R). Os animais foram anestesiados e, após, realizada a laparotomia mediana e identificação da artéria mesentérica superior. A artéria foi clampeada por 30 e após esse tempo, os animais foram mantidos por mais 15 minutos em reperfusão intestinal. A glutamina foi administrada por via intraperitoneal, na dose de 25 mg/Kg diluída em 1 mL de solução fisiológica. O tratamento foi realizado uma vez ao dia, durante 48 horas antes da indução da isquemia. Foram realizadas análises séricas para a função de integridade hepática através das enzimas aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA) e danos ao DNA pelo ensaio cometa. Realizamos a análise histológica dos tecidos através da coloração de Hematoxilina-Eosina e imunohistoquímica para avaliar a quantidade de células marcadas com os anticorpos monoclonais IL-1β, IL-6, TNF-α e NF-B no intestino e fígado. O homogeneizado do intestino e fígado foram utilizados para a avaliação dos níveis de lipoperoxidação (LPO) através das substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), avaliação da atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx), determinação dos níveis de glutationa (GSH), avaliação dos metabólitos do óxido nítrico (nitritos/nitratos) e para as análises moleculares das proteínas iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 e ATF-6 por Western Blot. Resultados: O pré-tratamento com glutamina reduziu os níveis de LPO, óxido nítrico, danos ao DNA, bem como as enzimas de integridade hepática. Observamos que a glutamina foi eficaz na preservação da arquitetura tecidual do intestino e fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, reduzindo parâmetros como infiltrado inflamatório, perda das vilosidades intestinais e necrose. Constatou-se que a glutamina ativou a via do Nrf2 e as enzimas antioxidantes, reduziu o dano celular, e inibiu o estresse do RE, além de reduzir os mediadores do processo inflamatório. Conclusão: Neste estudo, sugerimos que o pré-tratamento com a glutamina desempenhou um papel protetor tanto no intestino como no fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, demonstrado pelas análises estudadas, possivelmente pela sua ação antioxidante e anti-inflamatória. / Background: Injury by intestinal ischemia and reperfusion (I/R) can cause local and cellular damage to tissues and organs at distance. Some factors may be involved in those processes, such as the generation of reactive oxygen species, inflammatory mediators, nitric oxide (NO) and endoplasmic reticulum stress. Due to the involvement of oxidative stress in intestinal I/R lesions, some therapeutic options with antioxidants are being studied and tested in order to reduce these damages. Objective: To evaluate the local and systemic effect of glutamine in the intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R. Methods: Twenty male Wistar rats were divided into four groups: Sham operated (SO), Glutamine+Sham operated (G+SO), Intestinal Ischemia and reperfusion (I/R); Glutamine+intestinal ischemia and reperfusion (G+I/R). The animals were anesthetized and after we performed the median laparotomy and identification of the superior mesenteric artery. The artery was clamped for 30 minutes and after that the animals were maintained for another 15 minutes in intestinal reperfusion. Glutamine was administered intraperitoneally at a dose of 25 mg/kg diluted in 1 ml of saline solution. Treatment was performed once daily for 48 hours prior to induction of ischemia. Serum samples for hepatic integrity were collected, and the enzymes aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase (FA) were accessed. DNA damage was evaluated by the comet assay. We performed the histological analysis of the tissues through the staining of Hematoxylin-Eosin and immunohistochemistry, in order to evaluate the amount of cells labeled with the monoclonal antibodies IL-1β, IL-6, TNF-α and NF-B in the intestine and liver. The intestinal and liver homogenates were used to evaluate the levels of lipoperoxidation (LPO) through thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), evaluation of the activity of antioxidant enzymes catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx), determination of glutathione levels (GSH) and nitric oxide (nitrites/nitrates), and for the molecular analyzes of the iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 and ATF-6 proteins we performed Western blot analysis. Results: Pretreatment with glutamine reduced levels of LPO, nitric oxide, DNA damage, as well as liver integrity enzymes. We observed that glutamine was effective in preserving the intestinal and liver tissue architecture of animals submitted to intestinal I/R, reducing parameters such as inflammatory infiltrate, loss of intestinal villi and necrosis. It was found that glutamine activated the Nrf2 pathway and antioxidant enzymes, reduced cell damage, and inhibited endoplasmic reticulum stress in addition to reducing mediators of the inflammatory process. Conclusion: In this study, we suggest that pretreatment with glutamine played a protective role in both intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R, demonstrated by the present analyzes, possibly for its antioxidant and anti-inflammatory action.

Resumo não disponível.

Introdução: A lesão de isquemia e reperfusão (I/R) intestinal pode causar danos celular e tecidual local e em órgãos a distância. Alguns fatores podem estar envolvidos nesses processos, tais como: a geração de espécies reativas de oxigênio, mediadores inflamatórios, óxido nítrico (NO) e estresse do retículo endoplasmático (RE). Devido ao envolvimento do estresse oxidativo nas lesões de I/R intestinal, algumas opções terapêuticas com antioxidantes estão sendo estudadas e testadas nas lesões de I/R intestinal. Objetivo: Avaliar o efeito local e sistêmico da glutamina no intestino e fígado de animais submetidos à I/R intestinal. Métodos: Foram utilizados 20 ratos wistar machos divididos em quatro grupos: Sham operated (SO), Glutamina+Sham operated (G+SO), Isquemia e reperfusão intestinal (I/R); Glutamina+Isquemia e reperfusão intestinal (G+I/R). Os animais foram anestesiados e, após, realizada a laparotomia mediana e identificação da artéria mesentérica superior. A artéria foi clampeada por 30 e após esse tempo, os animais foram mantidos por mais 15 minutos em reperfusão intestinal. A glutamina foi administrada por via intraperitoneal, na dose de 25 mg/Kg diluída em 1 mL de solução fisiológica. O tratamento foi realizado uma vez ao dia, durante 48 horas antes da indução da isquemia. Foram realizadas análises séricas para a função de integridade hepática através das enzimas aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA) e danos ao DNA pelo ensaio cometa. Realizamos a análise histológica dos tecidos através da coloração de Hematoxilina-Eosina e imunohistoquímica para avaliar a quantidade de células marcadas com os anticorpos monoclonais IL-1β, IL-6, TNF-α e NF-B no intestino e fígado. O homogeneizado do intestino e fígado foram utilizados para a avaliação dos níveis de lipoperoxidação (LPO) através das substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), avaliação da atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx), determinação dos níveis de glutationa (GSH), avaliação dos metabólitos do óxido nítrico (nitritos/nitratos) e para as análises moleculares das proteínas iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 e ATF-6 por Western Blot. Resultados: O pré-tratamento com glutamina reduziu os níveis de LPO, óxido nítrico, danos ao DNA, bem como as enzimas de integridade hepática. Observamos que a glutamina foi eficaz na preservação da arquitetura tecidual do intestino e fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, reduzindo parâmetros como infiltrado inflamatório, perda das vilosidades intestinais e necrose. Constatou-se que a glutamina ativou a via do Nrf2 e as enzimas antioxidantes, reduziu o dano celular, e inibiu o estresse do RE, além de reduzir os mediadores do processo inflamatório. Conclusão: Neste estudo, sugerimos que o pré-tratamento com a glutamina desempenhou um papel protetor tanto no intestino como no fígado dos animais submetidos a I/R intestinal, demonstrado pelas análises estudadas, possivelmente pela sua ação antioxidante e anti-inflamatória. / Background: Injury by intestinal ischemia and reperfusion (I/R) can cause local and cellular damage to tissues and organs at distance. Some factors may be involved in those processes, such as the generation of reactive oxygen species, inflammatory mediators, nitric oxide (NO) and endoplasmic reticulum stress. Due to the involvement of oxidative stress in intestinal I/R lesions, some therapeutic options with antioxidants are being studied and tested in order to reduce these damages. Objective: To evaluate the local and systemic effect of glutamine in the intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R. Methods: Twenty male Wistar rats were divided into four groups: Sham operated (SO), Glutamine+Sham operated (G+SO), Intestinal Ischemia and reperfusion (I/R); Glutamine+intestinal ischemia and reperfusion (G+I/R). The animals were anesthetized and after we performed the median laparotomy and identification of the superior mesenteric artery. The artery was clamped for 30 minutes and after that the animals were maintained for another 15 minutes in intestinal reperfusion. Glutamine was administered intraperitoneally at a dose of 25 mg/kg diluted in 1 ml of saline solution. Treatment was performed once daily for 48 hours prior to induction of ischemia. Serum samples for hepatic integrity were collected, and the enzymes aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase (FA) were accessed. DNA damage was evaluated by the comet assay. We performed the histological analysis of the tissues through the staining of Hematoxylin-Eosin and immunohistochemistry, in order to evaluate the amount of cells labeled with the monoclonal antibodies IL-1β, IL-6, TNF-α and NF-B in the intestine and liver. The intestinal and liver homogenates were used to evaluate the levels of lipoperoxidation (LPO) through thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), evaluation of the activity of antioxidant enzymes catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx), determination of glutathione levels (GSH) and nitric oxide (nitrites/nitrates), and for the molecular analyzes of the iNOS, NF-B, Nrf2, Keap1, SOD, NQO1, HSP70, GRP78 and ATF-6 proteins we performed Western blot analysis. Results: Pretreatment with glutamine reduced levels of LPO, nitric oxide, DNA damage, as well as liver integrity enzymes. We observed that glutamine was effective in preserving the intestinal and liver tissue architecture of animals submitted to intestinal I/R, reducing parameters such as inflammatory infiltrate, loss of intestinal villi and necrosis. It was found that glutamine activated the Nrf2 pathway and antioxidant enzymes, reduced cell damage, and inhibited endoplasmic reticulum stress in addition to reducing mediators of the inflammatory process. Conclusion: In this study, we suggest that pretreatment with glutamine played a protective role in both intestine and liver of animals submitted to intestinal I/R, demonstrated by the present analyzes, possibly for its antioxidant and anti-inflammatory action.

A obstrução intestinal mecânica representa uma condição de urgência, necessitando diagnóstico precoce e terapêutica adequada, em virtude do seu elevado grau de morbidade e de mortalidade. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da N-acetilcisteína associada ao Ringer lactato ou à solução salina hipertônica na resposta inflamatória, histologia e translocação bacteriana em modelo experimental de obstrução e isquemia intestinal. Para tanto, Foram constituídos quatro grupos experimentais, com 10 ratos Wistar em cada, além do grupo de referência: OI - Submetidos a obstrução e isquemia intestinal e enterectomia com anastomose intestinal, sem reanimação volêmica; RL - Submetidos a obstrução e isquemia intestinal, reanimação volêmica com Ringer lactato (32ml/kg, i.v., em 10 minutos) e enterectomia com anastomose intestinal; RLNAC - Submetidos a obstrução e isquemia intestinal, reanimação volêmica com Ringer lactato associado a NAC (32ml/kg + 150 mg/kg i.v. em 10 minutos) e enterectomia com anastomose intestinal; SHNAC - Submetidos a obstrução e isquemia intestinal, reanimação volêmica com solução salina hipertônica a 7,5% associado com NAC (4ml/kg + 150 mg/kg i.v., em 10 minutos) e enterectomia com anastomose intestinal. Grupo Referência (n=5): Animais anestesiados, submetidos a coleta de materiais para cultura e histologia e sacrificados por exsanguinação. Os animais receberam uma associação anestésica de cetamina e xilazina intramuscular em membro posterior direito, na dose de 60mg/kg e 10mg/kg, respectivamente. Decorridas 24 h do tratamento, a eutanásia foi realizada por exanguinação, sob anestesia, após a coleta dos tecidos / Mechanical intestinal obstruction represents a condition of urgency, necessary early diagnosis and appropriate therapy, due to their high degree of morbidity and mortality. In this way, the objective of this study was to evaluate the effect of N-acetylcysteine associated with lactated Ringer\'s or hypertonic saline solution in the inflammatory response, histology and translocation in an experimental model of intestinal obstruction and ischemia. For Four experimental groups were constituted with 10 Wistar rats each, in addition to the reference group: OI - submitted to obstruction and ischemia intestinal and enterectomy with intestinal anastomosis, without volume resuscitation; RL - Undergoing intestinal obstruction and ischemia, volume resuscitation with Ringer\'s lactate (32ml / kg, i.v., within 10 minutes) and anastomosis enterectomy intestinal; RLNAC - Undergoing obstruction and intestinal ischemia, resuscitation with lactated Ringer\'s lactating NAC (32 ml / kg + 150 mg / kg i.v. in 10 minutes) and enterectomy with intestinal anastomosis; SHNAC - Submitted to obstruction and intestinal ischemia, volume resuscitation with saline solution hypertension at 7.5% associated with CAP (4 ml / kg + 150 mg / kg i.v., in 10 minutes) and enterectomy with intestinal anastomosis. Reference Group (n = 5): Anesthetized animals, submitted to collection of materials for culture and histology and sacrificed by exsanguination. The animals received a anesthetic association of ketamine and intramuscular xylazine in limb posterior right, at the dose of 60mg / kg and 10mg / kg, respectively. After 24 h of treatment, euthanasia was performed by exsanguination, under anesthesia, after collection of tissues

A doença renal policística autossômica dominante (DRPAD) constitui-se na enfermidade humana monogênica com risco de óbito mais frequente, responsabilizando-se por 4,4 a 10,0% dos casos de doença renal terminal em diferentes populações. Na quase totalidade dos pacientes, a doença é causada por mutação em um de dois genes: PKD1 (polycystic kidney disease 1) ou PKD2 (polycystic kidney disease 2). Tais genes codificam, respectivamente, as proteínas policistina-1 (PC1) e policistina-2 (PC2). Mutações em PKD1, por sua vez, respondem pela ampla maioria dos casos de DRPAD. Camundongos haploinsuficientes para Pkd1 (Pkd1+/-), o gene ortólogo a PKD1 neste animal, consistem num modelo não cístico de deficiência de atividade deste gene. Em um estudo anterior, mostramos que animais Pkd1+/- apresentam lesão renal mais severa que camundongos selvagens (Pkd1+/+) quando submetidos a isquemia/reperfusão (I/R) renal. Esse estudo sugeriu, portanto, que a capacidade de regeneração renal pós-I/R esteja prejudicada em camundongos Pkd1+/- e em pacientes com DRPAD. O insulto por I/R constitui-se em uma causa importante de indução de estresse de retículo endoplasmático (ER), podendo ativar as vias UPR (unfolded protein response) e ERAD (ER-associated degradation). Além disso, a ativação de vias envolvidas no ER determinado por I/R exerce um efeito de agravamento da lesão decorrente deste insulto. O ER pode, ainda, ativar e ser induzido pela resposta inflamatória. Estudos prévios revelaram que as policistinas também se relacionam com este processo. A expressão de PC2 pode ser superregulada pela ativação de um dos braços da via UPR, enquanto a ativação da via ERAD estimula sua degradação. A superexpressão de XBP1, por sua vez, atenua o fenótipo cístico em camundongos deficientes em Pkd1, revelando que a ativação da via UPR pode mitigar a formação cística. Para analisar a relação entre ER e suscetibilidade aumentada a I/R na deficiência de Pkd1, avaliamos diferentes marcadores de ER em camundongos Pkd1+/- e Pkd1+/+ submetidos a um insulto leve por I/R renal associado a 32 min de isquemia. A razão de expressão renal dos mRNAs Xbp1s/Xbp1u mostrou-se menor em camundongos Pkd1+/- que Pkd1 +/+ 48 h após I/R, enquanto a expressão proteica de XBP1s foi maior em rins Pkd1+/- comparados a Pkd1+/+ após o insulto. Não detectamos diferença na expressão renal do gene Hspa5 e de seu produto BIP/GRP78, assim como na expressão de Ddit3, gene que codifica CHOP, após intervenção sham e após I/R. Também não observamos diferenças entre os níveis renais e séricos de IL1beta, IL6, IL10, TNFalfa e RANTES entre camundongos Pkd1+/- e Pkd1+/+ pós-procedimento sham e pós-I/R, embora tendências não significantes de elevação de MCP1 tenham sido detectadas nos rins submetidos ao insulto para ambos os genótipos. As variações em sentidos opostos de XBP1s e Xbp1s/Xbp1u determinadas por I/R em rins Pkd1+/- são consistentes com uma maior suscetibilidade destes animais à indução de ER. Esses achados sugerem que a indução de ER em resposta a um insulto leve por I/R possa aumentar a atividade de PC1 e exercer um efeito de atenuação sobre a maior suscetibilidade de camundongos deficientes em Pkd1 a I/R renal / Autosomal dominant polycystic kidney disease (ADPKD) is the most common life-threatening monogenic disease in humans, accounting for 4.4 to 10.0% of the end-stage kidney disease cases in different populations. In almost all patients, this disorder is caused by a mutation in one of two genes: PKD1 (polycystic kidney disease 1) or PKD2 (polycystic kidney disease 2). These genes encode, respectively, the proteins polycystin-1 (PC1) and polycystin-2 (PC2). Mutations in PKD1, in turn, are responsible for the large majority of ADPKD cases. Pkd1- haploinsufficient mice (Pkd1+/-), the gene orthologous to PKD1 in this animal, constitute a noncystic model of this gene\'s deficiency. In a previous study, we showed that Pkd1+/- animals develop a more severe renal injury than wild-type mice (Pkd1+/+) when submitted to renal ischemia/reperfusion (I/R). This study suggested, therefore, that the capacity of renal regeneration following I/R is impaired in Pkd1+/- mice and in ADPKD patients. The I/R insult is an important cause of endoplasmic reticulum stress (RS) induction, potentially leading to activation of the UPR (unfolded protein response) and ERAD (ER-associated degradation) pathways. The activation of pathways involved in RS determined by I/R exerts an aggravating effect on the injury resulting from the insult. In addition, RS can activate and be induced by the inflammatory response. Previous studies revealed that polycystins also relate to this process. PC2 expression can be upregulated by the activation of one of the UPR pathway branches, while activation of the ERAD pathway stimulates its degradation. XBP1 overexpression, in turn, attenuates the cystic phenotype in Pkd1-deficient mice, revealing that activation of UPR can mitigate cyst formation. To analyze the relationship between RS and the increased susceptibility to I/R associated to Pkd1 deficiency, we evaluated different RS markers in Pkd1+/- and Pkd1+/+ mice submitted to a mild I/R insult determined by 32-min ischemia. The renal expression ratio of mRNA Xbp1s/Xbp1u was lower in Pkd1+/- than Pkd1+/+ mice 48 h after I/R, while the XBP1s protein expression was higher in Pkd1+/- compared to Pkd1+/+ kidneys after the insult. We have not detected differences in renal expression of the Hspa5 gene and its product BIP/GRP78, as well as in Ddit3 expression, the gene that encodes CHOP, postsham intervention and post-I/R. We have also not observed differences in the renal and serum levels of IL1beta, IL6, IL10, TNFalfa and RANTES between Pkd1+/- e Pkd1+/+ mice post-sham procedure and post-I/R, although non-significant trends of MCP1 increase have been detected in kidneys submitted to the insult for both genotypes. The variations in different directions of XBP1s and Xbp1s/Xbp1u induced by I/R in Pkd1+/- kidneys are consistent with a higher susceptibility of these animals to RS induction. These findings suggest that the RS induction in response to a mild I/R insult can increase PC1 activity and exert an attenuating effect on the increased susceptibility of Pkd1-deficient mice to renal I/R