Cette thèse de Doctorat est rattachée au projet européen Eulafuel, visant à concevoir un biocarburant à partir des triterpènes du latex de l’épurge Euphorbia lathyris. Notre mission consiste à étudier l’origine biosynthétique des unités isopréniques constituant ces molécules. Proviennent-elles de la voie du mévalonate (MVA) et/ou de la voie du méthylérythritol phosphate (MEP) ? En premier lieu, nous avons mis au point un protocole de culture de la plante en conditions axéniques et comparé les profils triterpéniques de plantes cultivées dans différentes conditions. Nous avons ensuite montré, grâce à des expériences d’incorporation de précurseurs marqués au 13C et au 2H, que les isoprénoïdes d’E. lathyris étaient produits via la voie du MVA. La seconde partie de ce travail porte sur l’étude de l’origine biosynthétique d’isoprénoïdes de végétaux par GC-iRMS, une intéressante alternative aux expériences de marquage. Nous avons comparé les signatures isotopiques δD et δ13C des lipides provenant de huit organismes phototrophes et formulé plusieurs hypothèses permettant d’expliquer les différences de fractionnement isotopique observées. / This PhD thesis is included in a European project, Eulafuel, aiming to use latex triterpenes of caper spurge (Euphorbia lathyris) as a biofuel source. Our investigation focuses on the biosynthetic origin of isoprene units. Are they produced via mevalonate (MVA) pathway and/or methylerythritol phosphate (MEP) pathway? First, we proposed a procedure to cultivate E. lathyris in axenic conditions, and we compared triterpenic profiles from plants grown in different conditions. Then, we showed, by incorporating 13C- and 2H-labeled precursors, that E. lathyris isoprenoids were produced via MVA pathway. The second part of this work is based on an isotopic analysis of plant isoprenoids by GC-iRMS, an interesting alternative to labeling experiments. We compared isotopic signatures (δD and δ13C) of lipids arising from eight phototrophic organisms and we proposed several hypothesis to explain the isotopic fractionation differences we observed.

202 f. / Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2013-03-27T15:07:41Z No. of bitstreams: 1 Tese Maria de Lourdes Completa.pdf: 1276547 bytes, checksum: ab45e41c0f73a5e85be2b1a246cbdb9e (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca(anahilda@ufba.br) on 2013-06-05T16:01:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Maria de Lourdes Completa.pdf: 1276547 bytes, checksum: ab45e41c0f73a5e85be2b1a246cbdb9e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-05T16:01:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Maria de Lourdes Completa.pdf: 1276547 bytes, checksum: ab45e41c0f73a5e85be2b1a246cbdb9e (MD5) Previous issue date: 2012 / Os triterpenos são extensamente distribuídos na natureza, principalmente no reino vegetal, pois se acredita que uma de suas funções fisiológicas nos vegetais seja de defesa química contra patógenos e herbívora. Podem ser encontrados na forma livre, como glicosídeos ou ainda derivados esterificados. Os ácidos oleanólico, betulínico e ursólico são os triterpenos ácidos mais comuns de ocorrência em vegetais e, possuem atividades antitumorais conhecidas. Este trabalho descreve um levantamento da ocorrência dessas substâncias e obtenção de derivados a partir deles e de ácidos graxos comuns. Os ácidos betulínico, ursólico e oleanólico, isolados das partes aéreas de Eriope blanchetii (Lamiaceae), foram submetidos a diferentes reações de esterificação obtendo-se assim 12 derivados esterificados na posição C-3. Tanto as substâncias isoladas quanto os derivados triterpênicos foram caracterizados por técnicas espectroscópicas no IV, RMN de 1H e 13C. Os derivados foram submetidos a testes de atividade antioxidante, letalidade frente Artemia salina e atividade antimicrobiana. Além disso, o ácido o-metoxicinâmico e ácido oleico foram submetidos a esterificação com etanol e metanol empregando-se Novoenzyme, comparando-se o rendimento do produto da reação a temperatura ambiente e sob irradiação de microondas / Salvador

Submitted by Edileide Reis (leyde-landy@hotmail.com) on 2013-04-23T14:23:17Z No. of bitstreams: 1 Vanessa Guedes.pdf: 1307366 bytes, checksum: 0e3f17a210e29edcec0a8ace90f12e91 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-23T14:23:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vanessa Guedes.pdf: 1307366 bytes, checksum: 0e3f17a210e29edcec0a8ace90f12e91 (MD5) Previous issue date: 2004 / O presente trabalho descreve o estudo fitoquímico das partes aéreas (folhas e galhos) de espécimens de Acritopappus micropappus (Asteraceae) coletados no Morro da Antena, município de Saúde (abril de 2001); no Morro do Cruzeiro, município de Jacobina (abril de 2001) e no município de Morro do Chapéu (agosto de 1999). A espécie Acritopappus micropappus é endêmica da Chapada Diamantina e até o presente momento, nenhum estudo fitoquímico foi relatado para a mesma. As partes aéreas foram submetidas a extrações com hexano e a seguir com metanol. Do extrato hexânico do espécimen coletado no município de Saúde, foram isoladas e identificadas as seguintes substâncias: o sesquiterpeno canferenol, que sofreu decomposição através de fotooxidação, levando aos derivados 10x-hidroperoxi-canferen-11-eno e 11-hidroperoxi-canferen-9-eno; a lignana yateína; uma mistura contendo os triterpenos b-amirina, a-amirina, lupeol e pseudotaraxasterol e uma mistura contendo os esteróides sitosterol e estigmasterol. Foram obtidos os óleos voláteis das partes aéreas dos três espécimens coletados, através de hidrodestilação. Estes óleos foram analisados através de cromatografia a gás acoplada à espectrometria de massas, levando à identificação de 31 constituintes, sendo 6 monoterpenos, 24 sesquiterpenos e a cetona 6-metil-5-hepten-2-ona, mostrando variabilidade estrutural entre os constituintes dos três óleos. Os componentes majoritários presentes no óleo volátil obtido do espécimen coletado em Jacobina foram germacreno D, a-pineno e b-pineno, do espécimen coletado no município de Saúde foram a-humuleno, cariofileno e valerianona e do espécimen coletado em Morro do Chapéu foram b-acorenol, 1,10-epoxi-cariofileno, (+)-junenol e 6-metil-5-hepten-2-ona. Os fracionamentos do extrato hexânico e os isolamentos das substâncias foram realizados através de cromatografia em coluna de sílica e sephadex LH-20. As identificações das substâncias foram realizadas através de métodos espectrométricos, tais como RMN de 1H e 13C (incluindo DEPT, COSY, HETCOR, COLOC e NOESY) e espectrometria de massas. O sesquiterpeno canferenol e a lignana yateína são raros na natureza, tendo sido relatados para poucas espécies de plantas. Os extratos dos espécimens coletados nos municípios de M. do Chapéu e Jacobina foram submetidos a bioensaios contra o fungo Cladosporium sphaerospermum utilizando o método bioautográfico e ensaios biológicos preliminares contra Staphylococcus aureus e Candida albicans, respectivamente. Sendo que apenas os extratos hexânicos mostraram-se ativos. / Salvador

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 9147230 bytes, checksum: 092aa2337723ed50987e1d968d4fd438 (MD5) Previous issue date: 2013-04-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The family Celastraceae is distributed in tropical and subtropical regions, including North Africa, South America and Asia, particularly in China. It consists of 98 genera and about 1200 species, and in Brazil, this family is represented by four genera: Maytenus Juss., Austroplenckia Lund., Franhofera Mart. and Salacia Mart. The genus Maytenus is one of the largest family Celastraceae, and in Brazil, 76 species are recognized. Maytenus distichophylla Mart. Reissek former is used in folk medicine to treat stomach ulcers and is well adapted to semi-arid Northeast of Brazil. There are no reports of phytochemical and pharmacological study with this species. The aim of this work was to contribute to the phytochemical study of plants of the Brazilian Northeast through the isolation and identification of chemical constituents from leaves and roots of Maytenus distichophylla. Was used for both adsorption and partition chromatography on columns, thin layer chromatography on analytical and preparative. M. distichophylla was collected in the municipality of Maturéia-PB, and identified by Prof.. Dr. Maria de Fátima Agra. The powder obtained from the leaves and roots was subjected to maceration with methanol for 72 hours to yield the methanolic solution which was concentrated on rotaevaporator to give the methanol extract. Leaf extract was partitioned generating phases hexane, chloroform and ethyl acetate. The chloroform phase and ethyl acetate was subjected to chromatographic procedures known pentacyclic triterpenes six isolating the series friedelano, 3β-friedelinol, fridelina 3-oxo-12α-hidroxifriedelano 3-oxo-29α-hidroxifriedelano 3-oxo-30β-hidroxifriedelano and a new natural product the 6β, 12α-dihydroxy-friedelan-1 en-3,16,21-trione called maytensifolona. The chloroform phase roots of M. distichophylla was subjected to Medium Pressure Liquid Chromatography. The group of fractions 115-121 was subjected to High Performance Liquid Chromatography obtaining two sesquiterpene pyridine alkaloids known to wilforina and ebinifolina. Thus, these data corroborate the chemical composition of other species of Maytenus and contribute to the chemical knowledge of M. distichophylla. / A família Celastraceae distribui-se nas regiões tropical e subtropical, incluindo no norte da África, América do Sul e Ásia, particularmente na China. É constituída por 98 gêneros e aproximadamente 1200 espécies, sendo que no Brasil, esta família é representada por quatro gêneros: Maytenus Juss., Austroplenckia Lund., Franhofera Mart. e Salacia Mart.. O gênero Maytenus é um dos maiores da família Celastraceae e, no Brasil, são reconhecidas 76 espécies. Maytenus distichophylla Mart. ex Reissek é utilizada na medicina popular para o tratamento de úlceras estomacais e é bem adaptada ao semi-árido nordestino do Brasil. Não há nenhum relato de estudo fitoquímico e farmacológico com essa espécie. O objetivo desse trabalho foi contribuir com o estudo fitoquímico de plantas do Nordeste Brasileiro através do isolamento e identificação dos constituintes químicos das folhas e raízes de Maytenus distichophylla. Para tanto foi utilizado cromatografias de adsorção e partição em colunas, cromatografias em camada delgada analítica e preparativa. M. distichophylla foi coletada no município de Maturéia- PB, e identificada pela Prof. Dra. Maria de Fátima Agra. O pó obtido das folhas e raízes foi submetido à maceração com metanol durante 72 horas, obtendo-se a solução metanolica, que foi concentrada em rotaevaporador obtendo-se o extrato metanolico. O extrato das folhas foi particionado gerando as fases hexanica, clorofórmica e acetato de etila. A fase clorofórmica e acetato de etila foi submetida a procedimentos cromatograficos isolando seis triterpenos pentacíclicos conhecidos da serie friedelano, 3β-friedelinol, fridelina, 3-oxo-12α-hidroxifriedelano, 3-oxo-29-hidroxifriedelano, 3-oxo-30β-hidroxifriedelano e um novo produto natural o 6β,12α-dihidroxi-friedelan-1en-3,16,21-triona denominado maytensifolona. A fase clorofórmica das raízes de M. distichophylla, foi submetida a Cromatografia Liquida de Média Pressão. O grupo de frações 115-121 foi submetida a Cromatografia Liquida de Alta Eficiência obtendo-se dois alcaloides sesquiterpenos piridinicos conhecidos a wilforina e ebinifolina. Dessa forma, esses dados corroboram com a constituição química de outras espécies de Maytenus e contribuem para o conhecimento químico de M. distichophylla.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O Ãcido oleanÃlico à um triterpeno pentacÃclico largamente encontrado em vÃrias plantas medicinais. Essa substÃncia demonstrou ter uma variedade de atividades farmacolÃgicas, dentre as quais se destacam: antiinflamatÃria, hepatoprotetora, gastroprotetora e antinociceptiva. Este trabalho objetivou investigar a atividade antinociceptiva do Ãcido oleanÃlico em modelos de nocicepÃÃo aguda induzida por capsaicina (20Âl/ 1,6 &#956;g) e Ãleo de mostarda (0,75%, 50 ÂL/animal) em camundongos, alÃm dos possÃveis mecanismos de aÃÃo envolvidos. Camundongos foram prÃ-tratados com Ãcido oleanÃlico (3, 10, 30, 100 mg/kg, v.o.) ou veÃculo, e os comportamentos de dor foram analisados. As doses de 10, 30 e 100 mg/kg, v.o., foram capazes de reduzir os comportamentos dolorosos expressos pelos animais nos modelos de nocicepÃÃo induzida por capsaicina e Ãleo de mostarda, sendo o maior nÃvel de inibiÃÃo (p<0,001) encontrado na dose de 30 mg/kg. Na tentativa de desvendar os possÃveis mecanismos de aÃÃo do Ãcido oleanÃlico no modelo de nocicepÃÃo induzido por capsaicina, avaliamos a participaÃÃo dos receptores opiÃides, &#945;2, Ãxido nÃtrico e canais de potÃssio. O efeito antinociceptivo do Ãcido oleanÃlico (30 mg/kg, v.o.) foi significantemente revertido pelo prÃ-tratamento com antagonista opiÃide, naloxona (2 mg/kg, i.p.); pelo doador de Ãxido nÃtrico, L-arginina (600 mg/kg, i.p.) e pela glibenclamida (2 mg/kg, i.p.), um antagonista dos canais de potÃssio. Por outro lado, o prÃ-tratamento com um antagonista &#945;2, ioimbina (2 mg/kg, i.p.), nÃo ocasionou a reversÃo da antinocicepÃÃo. Na tentativa de desvendar os possÃveis mecanismos de aÃÃo do Ãcido oleanÃlico no modelo de nocicepÃÃo visceral induzida por Ãleo de mostarda, avaliamos a participaÃÃo dos receptores opiÃides, &#945;2 e TRPV1. O efeito antinociceptivo do Ãcido oleanÃlico (30 mg/kg, v.o.) foi significantemente revertido (p<0,05) pelo prÃ-tratamento com antagonista opiÃide, naloxona (2 mg/kg, i.p.), enquanto que o antagonista &#945;2 , ioimbina (2 mg/kg, i.p.), nÃo teve o mesmo efeito. O prÃ-tratamento com vermelho de rutÃnio (3 mg/kg, s.c.), um antagonista nÃo competitivo do receptor TRPV1 causou inibiÃÃo significativa da nocicepÃÃo (p<0,01) induzida pelo Ãleo de mostarda, entretanto a administraÃÃo conjunta com o Ãcido oleanÃlico nÃo produziu antagonismo nem potenciaÃÃo da antinocicepÃÃo causada pelo Ãcido oleanÃlico. Para avaliar a existÃncia de um impedimento locomotor ou de uma incoordenaÃÃo motora, foram utilizados os testes do campo aberto e o teste do rota rod, respectivamente. Os dados indicaram que o tratamento com o Ãcido oleanÃlico (30 mg/kg, v.o.) nÃo induziu (p>0,05) impedimento locomotor ou incoordenaÃÃo motora nos animais, sendo ainda capaz de reverter (p<0,05) o impedimento locomotor induzido pelo Ãleo de mostarda no teste do campo aberto. Em conjunto os dados revelaram a efetividade do Ãcido oleanÃlico em modelos de nocicepÃÃo possivelmente envolvendo receptores opiÃides, TRPV1, Ãxido nÃtrico e canais de potÃssio. / Oleanolic acid is a triterpene pentacyclic widely distributed in the plant kingdom. Different biologic activities have been reported including: antiinflammatory, hepatoprotective, gastroprotective and antinociceptive. This work was aimed to evaluate the antinociceptive &#61472;effect of oleanolic acid in acute nociception models induced by capsaicin (20Âl/ 1.6 &#956;g) and mustard oil (0.75%, 50 ÂL/animal) in mice and to establish the likely mechanism(s) of action. Mice were pretreated orally with oleonolic acid (3, 10, 30 and 100 mg/kg) or vehicle, and the pain-related behavioral responses were analysed. The pain behavioral responses were significantly suppressed at doses 10, 30 and 100 mg/kg in acute nociception models induced by capsaicin and mustard oil. The maximal suppression (p<0.001) was observed at the dose of 30 mg/kg. In order to verify the possible mechanisms involved in the antinociceptive action of oleanolic acid in the capsaicin-induced nociception, the involvement of endogenous opioids, &#945;2, nitric oxide and KATP channels were analyzed. The antinociception produced by OA (30 mg/kg, v.o.) was found to be significantly blocked in animals pre-treated with the opioid antagonist, naloxone (2 mg/kg, i.p.); the substrate for oxide nitric synthase, L-arginine (600 mg/kg, i.p.); or a KATP-channel blocker, glibenclamide (2 mg/kg, i.p.) but was unaffected by yohimbine (2 mg/kg, i.p.), an &#945;2 -adrenoceptor antagonist. In order to verify the possible mechanisms involved in the antinociceptive action of oleanolic acid in the mustard oil-induced visceral pain model, opioid, &#945;2 adreno and TRPV1 receptors were analyzed. The antinociceptive effect of oleanolic acid (30 mg/kg, v.o.) was significantly blocked (p<0.05) by pretreatment with the opioid antagonist, naloxone (2 mg/kg, i.p.), but the &#945;2-adrenoceptor antagonist, yohimbine (2 mg/kg, s.c.), had no effect. Pretreatment with ruthenium red (3 mg/kg, s.c.), a non-competitive TRPV1 antagonist alone caused significant inhibition (p<0.01) of mustard oil-induced nociception but its co-administration with oleanolic acid produced neither antagonism nor potentiation of oleonolic acid antinociception. Further, to evaluate a possible motor impairment and motor incoordination effects related to oleanolic acid, open-field and rota-rod tests were performed. The data indicated that the treatment of animals with the oleanolic acid (30 mg/kg, v.o.) was unable to cause motor impairment or motor incoordination effects (p>0.05), being even able to reverse (p<0.05) a mustard oil-induced motor impairment in the open field test. The results taken together strongly suggest the therapeutic potential of oleanolic acid in oblitering nociception through the mechanisms that possibly involve the opioids, TRPV1 receptors, nitric oxide and KATP channels.

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 patricia.pdf: 1402951 bytes, checksum: fa643b3df0305f63289e3de3b444457e (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Protium is the main genus of the Burseraceae family and one of the most common genera in South America, being representative of the flora of the Amazon region. In folk medicine, gums and oil-resins Protium species are used for various diseases, as a tonic and stimulating, for the treatment of ulcers and inflammation. The present study aimed investigates the anti-inflammatory activity of triterpenes compounds isolated from oil-resin of Protium paniculatum Engler (Burseraceae). Were evaluated the cytotoxic potential of pentacyclic triterpenes in murine J774 macrophage lines by Alamar Blue method. Cells were treated with triterpenoids and stimulated with LPS after 24 hours and the cell supernatant was collected for evaluation of nitric oxide (NO ) by Griess reaction and cytokines (TNF-α, IL-6, IL-10 and IFN-γ) by flow cytometry. In the assessment of cytotoxicity was observed that triterpenes pentacyclic αβ-amyrin, αβ-amyrin acetylated, αβ-amyrone and brein/maniladiol did not alter the viability of murine J774 macrophages (IC50 > 20 μg/mL), with the exception of triterpene brein/maniladiol which showed moderate cytotoxic activity. Analyzing the effects on the production of inflammatory mediators, it was observed that the triterpene compounds at 10 μg/mL inhibited more than 80% production of NO , although only α,β-amyrin was able to inhibit the production of TNF-α (52.03 ± 2.4%). All analyzed triterpenes compounds inhibited the production of IL-6 and induced the production of IL-10 in murine J774 macrophages stimulated by LPS. The triterpene αβ-amyrone inhibited the expression of COX-2 in the same way that inhibited the formation of paw edema in rats induced by carrageenan, producing a quick and immediated effect. This study may provide a basis for future investigations on the therapeutic role of α, β-amirona in treating inflammation. / Protium é o principal gênero pertencente à família Burseraceae e um dos gêneros mais comuns na América do Sul, sendo representativo na flora da Região Amazônica. Na medicina popular, gomas e óleo-resinas de espécies de Protium são utilizadas para diversas enfermidades, como tônico e estimulante, para o tratamento de ulcerações e inflamações. O presente trabalho teve como objetivo investigar a atividade antiinflamatória dos compostos triterpênicos isolados de óleo-resina de Protium paniculatum Engler (Burseraceae). Foi avaliado o potencial citotóxico dos triterpenos pentacíclicos na linhagem de macrófagos murinos J774 pelo método Alamar Blue. As células foram tratadas com os triterpenóides e estimuladas com LPS após 24 horas e o sobrenadante celular foi coletado para avaliação da produção de óxido nítrico (NO ) pela reação de Griess, e das citocinas (TNF-α, IL-6, IL-10 e IFN-γ) por citometria de fluxo. A atividade antiinflamatória do triterpeno αβ-amirona foi evidenciada pela expressão da COX-2 pelo método de western blotting e no edema de pata em ratos induzido por carragenina. Na avaliação da citotoxicidade foi observado que os triterpernos pentacíclicos αβ-amirina, αβ-amirina acetilada, αβ-amirona e breína/ maniladiol não alteraram a viabilidade de macrófagos murino J774 (CI50 > 20 μg/mL), com exceção do triterpeno breína/maniladiol que apresentou atividade citotóxica moderada. Analisando os efeitos sobre a produção de mediadores inflamatórios, foi observado que os compostos triterpênicos na concentração de 10 μg/mL inibiram acima de 80% a produção de NO , embora apenas os triterpenos α,β-amirina tenham apresentado a capacidade de inibir a produção de TNF-α (52,03±2,4%), todos os compostos triterpênicos analisados inibiram a produção de IL-6 e induziram a produção de IL-10 em macrófagos murino J774 estimulados por LPS. O triterpeno αβ-amirona inibiu a expressão de COX-2, da mesma forma em que inibiu a formação do edema de pata em ratos induzido por carragenina. Este estudo pode fornecer uma base para investigações futuras sobre o papel terapêutico da α,β-amirona no tratamento da inflamação.

La saveur sucrée est à l’origine de l’équilibre gustatif des vins secs. On observe uneaugmentation de son intensité au cours de la macération post-fermentaire et de l’élevage enbarrique. Nous montrons que ces phénomènes sont respectivement liés à la libération depeptides de la levure et de composés non-volatils du bois de chêne dans les vins.Le rôle de la protéine Hsp12 de S. cerevisae sur le gain de sucrosité est établi enutilisant des techniques de biologie moléculaire et d’analyse sensorielle.Le développement d’un couplage chromatographie de partage centrifuge –gustatométrie permet de fractionner un extrait de bois de chêne et de purifier plusieurscomposés sapides. L’utilisation de la LC-FT/MS et de la RMN nous a permis d’identifierquatre nouvelles molécules, appelées quercotriterpénosides (QTT), deux d’entre elles (QTTI et III) possédant une saveur douce. Les seuils de perception du QTT I et d’un lignane amer,le lyonirésinol, sont respectivement 590 μg/L et 1.52 mg/L.La mise au point d’une méthode de quantification de ces composés en LC-FT/MS nous apermis de démontrer l’impact organoleptique du lyonirésinol dans les vins.Il est probable que les QTT I et III contribuent, directement ou indirectement, au gain desucrosité conféré par le bois de chêne. / Sweetness contributes to the balance in taste of dry wines. An increase in sweet taste isobservable during post-fermentation maceration and oak-barrel aging. We have revealed thatthese phenomena are respectively due to the release in wines of yeast peptides and nonvolatileoak wood compounds.The role of Hsp12 protein from S.cerevisae on the increase in sweetness is establishedwith both molecular biology and sensorial analysis techniques.The development of a method coupling centrifugal partition chromatography andgustatometry has enabled us to fractionate an oak-wood extract and to purify several sapidcompounds. Thanks to both the LC-FTMS and the NMR spectroscopy methods, we havehighlighted four new molecules, called quercotriterpenosides (QTT), out of which QTT Iand III are responsible for a sweet taste. The perception thresholds of QTT I and a bitterlignan, lyoniresinol, are respectively 590 μg/L and 1.52 mg/L.LC-FT/MS method has been used to develop a quantification method for these compoundsand we have demonstrated the organoleptic impact of lyoniresinol in wines.QTT I and III are likely to contribute, directly or indirectly, to the increase in sweetnessconsecutive to barrel aging in dry wines.

A mistura triterpênica ¤ e ß- amirinas é comumente encontrada em quantidades significativas em espécies do gênero Protium (Burseraceae) e possuem reconhecidas atividades anti-inflamatória, hepatoprotetora, gastroprotetora e analgésica, dentre outras. Entretanto, pouco se sabe sobre sua farmacocinética e metabolismo. Neste sentido, esta tese teve o objetivo de desenvolver metodologias bioanalíticas para determinar a farmacocinética e a eliminação de ? e ?-amirinas isoladas de P. spruceanum bem como avaliar o metabolismo in vitro destes triterpenos. A mistura de ¤ e ß-amirinas foi isolada em grau de pureza cromatográfica acima de 99%. Foi desenvolvida e caracterizada uma nanoemulsão do tipo O/A contendo ¤ e ß-amirinas a fim de viabilizar a administração por vias oral e endovenosa e realizar os estudos de disposição cinética dessas substâncias em camundongos. O tamanho médio das partículas da nanoemulsão foi de 103,5 ± 0,44 nm, com porcentagem de encapsulação de acima de 99%. Os estudos de liberação in vitro mostraram baixa taxa de liberação após 24 horas. A avaliação da disposição cinética de ? e ?-amirinas em camundongos mostrou que após administração oral a suspensão de CMC não foi absorvida, entretanto a nanoemulsão contendo as substancias foi absorvida e a biodisponibilidade oral de ¤ e ß-amirinas foi de 1,03 ± 0,08 e 1,56 ± 0,24%, respectivamente. O Vd foi elevado e a T1/2 foi de 2,61±0,15 e 2,57±0,07 horas, respectivamente. O ClB mostrou-se elevado, comparado ao ClR. Após administração oral da nanoemulsão, praticamente toda a mistura foi eliminada inalterada nas fezes devido a baixa absorção. Entretanto, após administração endovenosa cerca de 50% da mistura foi eliminada inalterada pela via biliar. Estudos de eliminação renal de ¤ e ß-amirinas mostraram que apenas cerca de 0,2% das substâncias foram eliminadas por via renal após administração endovenosa. O fenômeno Flip-Flop ocorreu para a via extravascular utilizada. Os resultados da eliminação parcial e de baixa liberação in vitro sugerem que após administração endovenosa da nanoemulsão pode ocorrer acúmulo extravascular dos compostos, corroborando com altos Vd. As reações biomiméticas de oxidação de ¤ e ß-amirinas mostraram baixa taxa degradação. Apenas um metabólito putativo foi encontrado, entretanto, não foi possível observá-lo nas matrizes biológicas analisadas. / The triterpene mixture of ¤ and ß-amyrins is generally found in significative amounts in Protium species (Burseraceae). They have known biological activities as anti-inflammatory, hepatoprotective, gastroprotective and antinociceptive effects among others. However, their pharmacokinetics and metabolism are practically unknown. The purpose of this thesis was to develop bioanalytical methodologies to perform pharmacokinetic and elimination studies of ¤ and ß-amyrins from P. spruceanum as well as to evaluate in vitro metabolism of these triterpenes. The mixture ¤ and ß-amyrins was isolated with chromatography purity above 99%. One ¤ and ß-amyrins loaded O/W nanoemulsion was developed and characterized to enable the intravenous and oral administration and to performed pharmacokinetic studies of these compounds in mice. The average particle size was 103.5 ± 0.44 nm and the encapsulation efficiency was higher than 99%. In vitro release study demonstrated low release rater after 24 hours. The pharmacokinetics studies of ? and ?-amyrins indicated CMC suspension was not absorbed, however ¤ and ß-amyrins loaded O/W nanoemulsion was poorly absorved and bioavailability was 1.03 ± 0.08 and 1.56 ± 0.24% respectively. The Vd was high and T1/2 was 2.61 ± 0.15 e 2.57± 0.07 hours respectively. The ClB was high compared to ClR. After oral administration almost all ¤ and ß-amyrins were eliminated unchanged in faeces due to low absorption. However, after intravenous administration about 50% was excluded unchanged by biliar excretion pathway. Studies of ¤ and ß-amyrins renal elimination directed only 0.2 % were removed unchanged by renal pathway after intravenous administration. The Flip-Flop phenomenon was happen when ¤ and ß- amyrins was dispensed by extravascular via. The partial biliar excretion in vivo and low release rate in vitro suggests ¤ and ß-amyrins could be stored after nanoemulsion intravenous administration confirming high Vd. The biomimetic reactions of oxidation of ¤ and ß-amyrins showed low degradation rate and only one metabolite was found however it was not detected in biological samples.

A família Rubiaceae se caracteriza por produzir uma grande variedade de metabólitos secundários. Alcalóides, triterpenos iridóides e antraquinonas destacam-se entre os produtos naturais de maior ocorrência nas rubiaceas. Espécies desta família ocorrem com frequência no cerrado brasileiro, sendo que o gênero Alibertia, não havia sido estudado até recentemente. O presente trabalho, que é o primeiro com a espécie Alibertia edulis A. Rich, descreve o isolamento, identificação e determinação estrutural de triterpenos presentes nas folhas de um espécimen coletado nas proximidades de Campo Grande, Mato Grosso do Sul. O estudo da fração clorofórmica do extrato etanólico mostrou a ocorrência predominante de triterpenos. Foram isolados através dos métodos cromatográficos usuais (coluna e placa preparativa), os pares oleanano-ursano urs-12-en-3&#946;,28-diol e olean-12-en-3&#946;,28-diol; 3&#946;-hidroxiurs-12-en-28-óico e 3&#946;-hidroxiolean-12-en-28-óico; 3&#946;,23-diidroxiurs-12-en-28-óico e 3&#946;,23-diidroxiolean-12-en-28-óico, que foram identificados através dos espectros de RMN de 13C e 1H. A mistura dos ésteres metílicos dos ácidos 3&#946;, 19&#945;,23,24-tetraidroxiurs-12-en-28-óico e 3&#946;, 19&#945;,23,24-tetraidroxiolean-12-en-28-óico também foi isolada desta mesma fração. Após ser acetilada, esta mistura foi submetida à cromatografia líquida de alta eficiência, o que possibilitou a separação dos seus componentes. Destes, o triterpeno com esqueleto tipo ursano foi identificado pelos seus espectros de RMN de 13C e 1H. Como não foi encontrado registro na literatura do triterpeno com esqueleto oleanano, a determinação estrutural deste foi feita por comparação com os dados de RMN do éster metílico do ácido 3&#946;,19&#945;,23,24-tetraidroxiur-12-en-28-óico, associado a uma análise do espectro bidimensional 1H-1H (COSY). Do extrato hexânico de A. edulis também foi isolada uma mistura, constituída por &#945; e &#946;-amirina, além de fitol. / The Rubiaceae family affords as secondary metabolites, mainly alkaloids, triterpenes and iridoids. Species of this family are spread in the region of Brazilian \"cerrado\". The genus Alibertia has not been studied until recently. This work, the first one with the specie Alibertia. edulis A. Rich, reports the isolation, identification and structural determination of the triterpenes that occurred in the leaves of a specimen colleted in Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brazil. The chloroform fraction of the ethanolic extract shows the predominance of triterpene compounds. From this fraction, we isolate, by means of chromatographic procedures, the ursane-oleanane pairs: 3&#946;,28-dihydroxy-urs-12-en and 3&#946;,28-dihydroxy-olean-12-en; 3&#946;-hydroxyurs-12-en-28-oic and 3&#946;-hydroxyolean-12-en-28-oic; 3&#946;,23-dihydroxyurs-12-en-28-oic and 3&#946;,23-dihydroxyolean-12-en-28-oic; 3&#946;,19&#945;,23,24-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic and 3&#946;,19&#945;,23,24-tetrahydroxyolean-12-en-28-oic. The last compound is a new natural product and its structure was determined based on methyl-triacetylated derivative. From the hexanic extract we isolated &#945; and &#946;-amyrin and phytol.

Momordica charantia é uma espécie de planta pertencente à família Cucurbitaceae. No Brasil, é conhecida pelo nome popular de Melão de São Caetano. É encontrada em grande parte do globo terrestre, sendo que no Brasil é observada nas regiões litorâneas e principalmente nas regiões do interior do país. Escolhemos o estudo com Momordica charantia devido suas propriedades terapêuticas conhecidas serem de grande interesse. Ela vem ganhando cada vez mais reconhecimento através de pesquisas científicas realizadas, visto que, já é utilizada a milhares de anos através da cultura popular. Tais pesquisas têm confirmado e entendido cada vez mais as propriedades medicamentosas desta planta e os mecanismos responsáveis por tais funções nesta espécie, sendo as propriedades antidiabéticas, antivirais e anticancerígenas as de maior destaque. Os experimentos realizados em torno da Momordica charantia, na busca destes compostos foram todos realizados utilizando extratos retirados dos próprios tecidos já diferenciados na planta adulta (sementes, folhas, raízes e frutos). Neste trabalho, foi realizado a pesquisa de metabólitos secundários produzidos pela cultura de células em suspensão de Momordica charantia durante a fase de crescimento desta e após a realização de ensaios de elicitação com Ácido Salicílico (AS). Nosso laboratório vem se dedicando aos estudos da composição da parede celular vegetal e suas alterações, bem como dos mecanismos de defesa empregados pelas células em suspensão em condições de estresse biótico e abiótico. O ácido salicílico é um dos hormônios vegetais envolvido em vários mecanismos de respostas que envolve o estresse vegetal e de desenvolvimento da planta tais como o de garantir resistência a patógenos por exemplo. Quando ocorre algum processo de infecção ou lesivo para a planta, ocorre um aumento na concentração de AS no interior da planta. Esse aumento leva a ativação de certas vias metabólicas que culminam na produção de metabólitos secundários e na degradação, fragmentação ou espessamento da parede celular. Como reposta dos ensaios de elicitação realizados podemos comprovar os efeitos do AS mediados na produção de metabólitos secundários que foram aumentados conforme a concentração de AS. Foi utilizado para os ensaios de elicitação AS nas concentrações de 0,5 , 1,0 e 5 mmol/L. Para o monitoramento da cultura e averiguação da efetividade dos ensaios de elicitação foi utilizado a monitoria através da dosagem de proteínas totais, compostos fenólicos totais e açúcares redutores totais tanto liberados para o meio extracelular quanto produzidos no meio intracelular. Foi determinado as variações dos componentes da parede celular durante a fase de crescimento e após os ensaios de elicitação onde foi comprovado que quanto maior a concentração de AS, maiores são os fragmentos de açúcares fragmentados da parede celular. Foi evidenciado também a presença de triterpenos na cultura celular (em comparação com os padrões isolados da planta), tanto na fase de crescimento e também após a indução com os ensaios de elicitação com AS. / Momordica charantia is a plant from the Cucurbitaceae family. In Brazil, it is known by the popular name of Melão de São Caetano. It is found across the whole world, and in Brazil it can be found in coastal and interior regions of the country. The aim to study Momordica charantia is due to its known therapeutic properties that are already used for thousands of years through popular culture. The studies have confirmed and understood various drug-like properties of this plant and the mechanisms responsible for such functions in this species, such as antidiabetic, antiviral and anticancer properties. The researches with Momordica charantia were all performed using extracts obtained from seeds, leaves, roots and fruit. In this work, the isolation and characterization of metabolites as standards from leaves and stems of Momordica charantia was performed. The research of secondary metabolites produced in cell culture suspension of Momordica charantia without elicitor or after elicitation with salicylic acid (SA) was conducted. Salicylic acid is a plant hormone involved in various mechanisms of responses. When the plant suffers an infection or injury, it is followed by an increase in AS concentration. This increase leads to activation of certain metabolic pathways that culminate in the production of secondary metabolites and degradation, fragmentation or cell wall thickening. AS was utilized for the elicitation experiments at 0.5, 1.0 and 5 mmol/L. For the monitoring of plant cell culture, it was determinate the total protein, phenolic compounds and reducing sugars content, into the extra and intra cellular medium. Where it was verified that AS modulates the production of these molecules in culture. After this, we determined the variation in the oligosaccharides in the extracellular medium obtained in the presence or absence of AS. It was observed the degree of polymerization of oligosaccharides higher when increase AS concentration in the medium. In conclusion, this study can demonstrate the effects of SA on the production of secondary metabolites in plant cell culture, which were increased as the concentration of AS increased. The presence of triterpenes in cell culture was confirmed to compare the molecules obtained from culture with that isolated from plant standards.