Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-09-19T12:24:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Giwellington Albuquerque - AVALIAÇÃO IMUNOHISTOQUÍMICA DA ONCOPROTEÍNA E6, P16INK4a.pdf: 2878324 bytes, checksum: 0e191e85139b55d89a691fa2d3d6418f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-19T12:24:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Giwellington Albuquerque - AVALIAÇÃO IMUNOHISTOQUÍMICA DA ONCOPROTEÍNA E6, P16INK4a.pdf: 2878324 bytes, checksum: 0e191e85139b55d89a691fa2d3d6418f (MD5) Previous issue date: 2016-02-16 / CAPES / O Câncer de colo uterino é o quarto mais comum em mulheres no mundo. Sabe-se que a carcinogênese cervical precede da infecção e persistência do Papilomavírus humano (HPV), o qual tem a capacidade de se integrar ao genoma do hospedeiro introduzindo os genes E6 e E7. O produto desses genes, as oncoproteínas E6 e E7 perturbam o ciclo celular promovendo superexpressão da proteína p16INK4a e as metaloproteinases de matriz (MMP), que são moléculas capazes de promover a progressão das lesões cervicais uterinas. Nesse intuito, o presente estudo avaliou a expressão da oncoproteína E6, p16INK4a, metaloproteinase de matriz 3 (MMP-3) e inibidor tissular de metaloproteínase 2 (TIMP-2) nos diferentes graus de lesões e câncer cervical, associando com a presença do HPV e seus genótipos. Foram utilizadas 86 amostras de escovado cervical e de fragmentos de biopsias de mulheres que foram diagnosticadas citologicamente com lesões cervicais intraepiteliais e invasivas. Todas as amostras foram genotipadas e submetidas a técnica de imunohistoquímica para a identificação da oncoproteína E6-HPV16/18, p16INK4a, MMP-3 e TIMP-2. O perfil genotípico identificou o HPV16 (44,4%) como o mais prevalente, seguido por HPV31 (30,3%), HPV58 (15,1%), HPV18 (6,1%) e HPV33 (4,1%). A reação imunohistoquímica para E6 se mostrou mais intensa nos casos de invasão, assim como p16INK4a. Entretanto MMP-3 e o TIMP-2 se mostraram mais reativos em lesões pré-malignas. Portanto, este estudo mostra maior prevalência do HPV-16 em mulheres atendidas no Hospital das Clínicas – UFPE e sugere que a oncoproteína E6 e a proteína p16INK4a são biomarcadores úteis para aumentar a precisão do diagnóstico precoce de câncer de colo do útero. Contudo, em lesões pré-malignas os biomarcadores clinicamente úteis seriam MMP-3 e TIMP-2. / Cervical cancer is the fourth most common in women worldwide. Cervical carcinogenesis is known to precede the infection and persistence of human papillomavirus (HPV), which has the ability to integrate into the host genome by introducing the E6 and E7 genes. The product of these genes, E6 and E7 oncoproteins disrupt the cell cycle promoting overexpression of p16INK4a protein and matrix metalloproteinases, molecules which are able to promote the progression of cervical uterine injury. To that end, the present study aimed to evaluate the expression of the oncoprotein E6, p16INK4a, matrix metalloproteinase 3 and the tissue inhibitor of metalloproteinase 2 in varying degrees of injuries and cervical cancer, associated with the presence of HPV and its genotypes. 86 cervical brush samples were used and biopsies fragments of women who were diagnosed cytologically with intraepithelial cervical lesions and invasive. All samples were genotyped and subjected to immunohistochemistry to identify the oncoprotein E6, HPV16 / 18, p16INK4a, MMP-3 and TIMP-2. The genotype profile identified HPV16 (44.4%) was the most prevalent, followed by HPV31 (30.3%), HPV58 (15.1%), HPV18 (6.1%) and HPV33 (4.1%). The immunohistochemical reaction for E6 was more reactive in the case of invasion, as well as p16INK4a. However MMP-3 and TIMP-2 were more reactive in premalignant lesions. Therefore, this study showed a higher prevalence of HPV-16 in women treated at the Hospital - UFPE and suggests that the E6 oncoprotein and p16INK4a protein biomarkers are useful to improve the accuracy of early diagnosis of cervical cancer. However, in premalignant lesions would be clinically useful biomarkers MMP-3 and TIMP-2.

Orientadores: Aureo Tatsumi Yamada, Wirla Maria da Silva Cunha Tamashiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T04:32:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bizinotto-Assuncao_MarciaCristina_D.pdf: 17669234 bytes, checksum: 7623e53be29f1a69dba9c95b19066e0e (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O fenômeno da gestação em mamíferos de placentação hemocorial, onde o feto alogênico, apresentando metade dos genes de origem paterna, desenvolve um íntimo contato com o tecido materno sem desencadear uma resposta de rejeição pelo sistema imune materno, é ainda uma questão da imunologia da reprodução não esclarecida completamente. O diálogo na interface materno-fetal do útero gestante envolve uma gama de citocinas da categoria Th1fTh2, bem como de várias populações celulares, onde se destacam as células Natural KiUer uterinas (uNK). As uNK são populações linfocitárias transitórias que migram a partir de progenitores localizados em órgãos linfóides secundários como linfonodo e baço para o útero gestante e, neste proliferam e diferenciam ao longo da gestação. A presença destas células no útero gestante tem sido relacionada com o reconhecimento dos antígenos HLA-G e HLA-E expressos pelos trofoblastos, resultando na inibição tanto da resposta imune inata quanto da adaptativa. Esta atuação peculiar das uNK sugere que a modulação destas células no útero gestante esteja relacionada com a expressão de receptores específicos não compartilhada com células NK circulantes (eNK). Em uNK de camundongos, a lectina DBA (Doliehos biflorus agglutin) identifica glicoconjugados contendo N-acetil D-galactosamina presentes na superfície destas células e que não são expressos por outros linfócitos, corroborando com a hipótese de que as uNK expressam receptores específicos não comuns às eNK Neste trabalho, nós propusemos avaliar a possível expressão de moléculas específicas na superfície das células uNK de camundongos e identificar as proteínas candidatas através de técnicas proteômicas. Para tanto foram inicialmente utilizadas células uNK isoladas e purificadas de úteros de camundongos prenhes como in6culos antigênicos em machos da mesma espécie, para avaliar a capacidade de indução de uma resposta imune com produção de anticorpos reativos a esses antígenos. Outra estratégia utilizada foi o isolamento de proteínas de homogenados uterinos, de células uNK e da membrana destas células, na tentativa de isolar e identificar aquelas reativas à lectina DBA. Como resultado das inoculaçães de células uNK, os camundongos receptores produziram anticorpos séricos que reconheciam células uNK através de reações imunocitoquímicas. Este resultado confirma a expressão de moléculas específicas em células uNK, que por sua vez as caracteriza como uma subpopulação de NK específica da gestação. Dos dois animais com maior nível de anticorpos séricos foram coletados os baços para o preparo das células empregadas em experimentos de fusão celular para a obtenção de hibridomas secretores de anticorpos monoclonais. Um dos anticorpos monoclonais obtidos reconheceu moléculas presentes na superfície e no citoplasma das células uNK de várias linhagens de camundongos, assim como moléculas em células presentes no endométrio de ratas prenhes e no endométrio gestacional de humanos, sugerindo que moléculas homólogas são expressas em uNK de outras espécies. No entanto, este anticorpo monoclonal anti-uNK de camundongo (mamuNK1) apresentou reação cruzada com componentes citoplasmáticos de outras células, sugerindo não serem específicos para uNK Em relação ao isolamento dos glicoconjugados lectina DBA reativos observouse que através da cromatografia de gel filtração o isolamento mostrou-se pouco eficiente para o "pool" de proteínas contidas no homogenado uterino, ou mesmo de homogenado de células uNK, em decorrência da existência de múltiplas frações de proteínas capazes de ligar à lectina DBA. Restringindo-se o "pool" de proteínas àquelas obtidas apenas da membrana de células uNK e, através da eletroforese de duas dimensões pode-se delimitar as proteínas de interesse, as quais foram submetidas à análise proteomica. A identificação das proteínas isoladas das membranas de células uNK através de técnicas proteomicas sugeriram as proteínas Conserved oligomeric Golgí complex component 4 (COG4) e Heat shock 70-líke proteín 1 (Hsp 70 L1) como potenciais candidatas relacionadas com as atividades das células natural kíller no útero gestante / Abstract: The phenomenon of pregnancy in mammalians with hemochorial type placenta ions where the allogeneic fetus presenting the half of gene from paternal origins growth in tight contact with maternal tissues, without triggering the rejections responses of maternal immune system is still a non-solved question of immunology of reproduction. The cross-talk at maternal-fetal interface in the pregnant uterus involves a range of Th1rrh2 cytokines, as well as, several cell populations with accentuated participation of uterine Natural Killer (uNK) Iymphocytes. The uNK .are transient leukocyte population that migrate from precursor cells localized at secondary Iymphoid organs such as Iymph nodes and spleen into the pregnant uterus and proliferate and differentiate during the gestation. The presence of these cells in the pregnant uterus has been related to recognition of the HLAG and HLA-E antigen present in the trophoblast, which results in inhibition of both innate and adaptive immune response. This peculiar activity of uNK suggests that the modulation of such cells in the pregnant uterus should be related with the expression of specific receptors not shared with peripheral blood circulating NK (cNK) cell. In the mouse uNK, the DBA (Dolichos biflorus agglutin) lectin identify n-acetyl D-galactosamine containing glycoconjugates present on the surface of these cells not expressed by other Iymphocytes, which corroborate the hypothesis of uNK expressing specific receptors not shared by cNK. The present work aimed to evaluate the presumed expression of specific molecules on mouse uNK cell surface and identify the candidate proteins by proteomic methods. Initially were used uNK cells isolated and purified from pregnant mice uteri as antigen to be inoculated in the male mice and evaluate the capacity of induction of immune response with production of antibodies reactive to these antigens. Other strategy was to realize procedures of protein isolation from uterine homogenates, uNK cells and the membrane of these cells, in the attempt to isolate and identify those reactive to DBA lectin. As results of inoculation of uNK cells were verified responses in the inoculated males by presence of serum antibodies that recognized uNK with immunocytochemistry. These results confinn the expression of specific molecules in uNK cells which characterize these cells as specific NK subset of pregnancy. From two animaIs with highest levei of antibodies in 1he serum were collected the spleen to isolate the Iymphocytes clones for monoclonal antibodies obtantion. One of these antibodies recognized antigen molecules found on the surface and cytoplasm of the uNK cells of several mice strains, as well as, molecules in cells present in the pregnant rats and human beings endometrium, which suggests the expression of homologous molecules in uNK of other species. However, this mouse anti-mouse uterine NK (mamuNK1) was reactive with citoplasmatic components the other cells, suggesting not be specific to uNK. About the isolation of DBA lectin reactive glycoconjugates by purification in gel filtration chromatography revealed low efficiency to the pool of proteins contained in the uterine homogenate, or even in the homogenate of isolated uNK cells due to the multiple DBA lectin positive protein fractions. By restriction of protein pool to those obtained from the uNK cells membrane and by two dimension electrophoresis was delimited the target proteins that were submitted to the proteomic analysis. The identification of isolated proteins of the membranes of uNK cells with proteomics methods suggested the Conserved proteins oligomeric Golgi complex Component (4 COG4) and Heat shock 7D-like protein 1 (Hsp 70 L1) as potential candidates related to the activity of the natural to killer cells in the pregnant uterus / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Jose Antonio Simões, Sophie Françoise Mauricette Derchain / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T07:56:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Campos_ElisabeteAparecida_M.pdf: 376476 bytes, checksum: 5cb1313dd5ebc4ab5d963f22dad4830d (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Objetivo: Avaliar a recuperação e estabilidade do DNA para detecção do papillomavírus humano (HPV) através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) utilizando amostras estocadas por até 24 meses em Universal Collection Medium (UCM) com reagente desnaturante. Métodos: Sessenta amostras de citologia da cérvix uterina positivas para HPV, - que foram coletadas em UCM com resultado de Papanicolaou NIC 2 e NIC 3 entre os anos de 2003 e 2005 e que foram estocadas - foram utilizadas para este estudo. Todas as amostras haviam sido congeladas a ¿20°C após a adição do reagente desnaturante (0,05% de azida sódica + solução de NaOH) e da retirada da alíquota necessária para a realização do teste de Captura¿Híbrida 2 (CH 2) para identificação do DNA-HPV. O tempo de estocagem das amostras utilizadas foi de 6, 12 e 24 meses (20 amostras para cada tempo de estocagem). A extração do DNA foi realizada de acordo com protocolo específico para este tipo de material. A técnica de PCR foi realizada para confirmação da presença e da integridade do DNA através da detecção da ß-globina humana utilizando-se primers de consenso G73 e G74, e a detecção do DNA-HPV foi realizada utilizando-se os primers de consenso PGMY09 e PGMY11. Resultados: O DNA extraído do material desnaturado foi recuperado em 57 das 60 (95%) amostras estudadas. O DNA-HPV só não pôde ser detectado por PCR em uma destas amostras recuperadas. Conclusão: A recuperação e a estabilidade do DNA-HPV foi excelente após dois anos de estocagem do material cervical colhido em UCM com reagente desnaturan / Abstract: Objective: To evaluate the recovery and stability of DNA for the detection of HPV by Polymerase Chain Reaction (PCR) from clinical specimens stored for up to 24 months in Universal Collection Medium (UCM) with denatured reagent. Materials and methods: Sixty stores HPV-positive cervical smears collected from women with CIN 2 or CIN 3 diagnosis at Pap smear cytology between 2003 and 2005 were utilized to study. All samples were stored at ¿20°C after add of the denaturing reagent (sódica azida 0,05% and solution NaOH) and removing the aliquot required for carrying out the hybrid capture 2 assay for the identification of HPV-DNA, the samples were stored for 6, 12 or 24 months (20 samples for each storage time). DNA-HPV extraction was performed according to a protocol specifically designed for this type of material. The presence and quality of DNA was confirmed by human ß-globin detection using the consensus primers G73 and G74 and HPV was detected using the consensus primers PGMY09 and PGMY11 through the technique of PCR. Results: The DNA extracted from the denatured material was recovered in 57 out of 60 (95%) of the samples studied. DNA-HPV failed to be detected in one of the recovered samples. Conclusions: The recovery and stability of DNA-HPV from cervical samples stored for up to two years in UCM were excellent / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Tocoginecologia

Orientadores: Liliana Aparecida Lucci de Angelo Andrade, Konradin Metze / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T06:41:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Triglia_RenatadeMarchi_D.pdf: 2275218 bytes, checksum: 3b9b61ceb5abbf3cd2002df7cf26737a (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: As Neoplasias Intra-epiteliais Cervicais (NIC) são precursoras do carcinoma do colo uterino e, em sua maioria, causadas pelos vírus do Papiloma Humano (HPV) de alto risco oncogênico. A maior parte das NIC1 regride, mas cerca de 15% pode progredir e a integração viral ao genoma da célula tem papel importante neste evento. A hibridização in situ (HIS) detecta o tipo de vírus na lesão e, tem sido atribuído que o sinal difuso desta reação se relaciona à forma epissomal do vírus, enquanto o puntiforme representa o DNA viral integrado ao genoma. O Ki67, marcador de proliferação celular, tem sido usado na graduação das NIC e pode ser um adjuvante na avaliação do comportamento das NIC1. Métodos: 74 biópsias de NIC1 foram estudadas, cujas pacientes apresentaram no acompanhamento biópsias com diagnósticos variados: 19 de cervicite (regressão), 29 com manutenção de NIC1 e 26 com progressão para NIC 2-3. A primeira biópsia foi analisada pela reação de HIS para HPV de alto risco oncogênico (Genpoint®) e pela reação imunoistoquímica para Ki67. Na HIS foram avaliados o número e a distribuição das células nas camadas epiteliais (basal, intermédia ou superficial) e o tipo de sinal (puntiforme ou difuso). A análise do Ki67 foi realizada de 2 formas: a) leitura com avaliação subjetiva da expressão em diferentes níveis do epitélio (camadas basal e para-basal, até a metade e mais da metade da espessura epitelial), b) análise morfológica quantitativa por um programa de computador ("Sociology"), capaz de fazer muitas medidas, como densidade nuclear e relações de vizinhança entre os núcleos. Resultados: a idade da pacientes variou de 16 a 65 anos, sendo a média diferente entre os grupos com e sem progressão (31 e 26, respectivamente, p=0,02). A HIS foi positiva em 22 casos (30%), dos quais 8 progrediram e 14, não. Todos mostraram sinais puntiformes e difusos, entretanto sinal puntiforme na camada basal foi observado em 58,5% dos que progrediram e em apenas 4% dos casos sem progressão (p=0,05). A avaliação subjetiva do Ki67 demonstrou que o grupo que progrediu expressou positividade em mais da metade do epitélio (p=0.02). A análise morfológica quantitativa do Ki67 evidenciou os seguintes resultados significativos no grupo com regressão: menor densidade nuclear, menor quantidade de vizinhos e maior distância entre os núcleos vizinhos mais próximos (p=0,019; 0,008 e 0,02). As medidas da altura dos núcleos positivos no epitélio e da espessura epitelial não mostraram diferença. Conclusão: o sinal puntiforme da HIS na camada basal, a expressão do Ki67 em mais da metade do epitélio, avaliada subjetivamente, e a maior densidade de núcleos na análise morfológica quantitativa estão mais associados à manutenção e progressão das lesões de NIC1 / Abstract: Cervical Intraepithelial Neoplasias (CIN) are precursory lesions of the cervical carcinoma, and most of them are caused by high-risk Human Papillomavirus (HPV). The majority of CIN1 can regress, but around 15% progress, and viral integration has an important role in this event. Integration can be identified by In situ hybridization (ISH). Literature has considered a punctate signal in ISH as integrated HPV, and the diffuse signal as episomal virus. Ki67, a marker of cellular proliferation, can be useful in graduating CIN and evaluating CIN1 behavior. Methods: 74 CIN1 cases were studied and all patients had another biopsy in the follow-up which revealed: 19 without CIN (regression), 29 with maintenance of CIN1 diagnosis, and 26 that progressed to CIN2-3. ISH with Genpoint® for high risk HPV was evaluated according to the distribution of positive cells at different levels in squamous epithelium: basal, intermediate or superficial layers. The pattern of ISH reaction was classified as diffuse or punctate. Ki67 analysis was performed by 2 different ways: a) interpretation with subjective estimation of the immunostaining in different epithelium levels (basal and parabasal layers, until a half and more than a half of the epithelium thickness); b) quantitative morphological analysis by a software ("Sociology"), capable of performing many measurements, as nuclear density and neighborhood relations among the nuclei. Results: the age varied from 16 to 65 and mean age without progression was 26 and 31 for progression (p=0.02). ISH was positive in 30% (22 cases: 8 with lesion progression and 14 without). All cases showed punctate and diffuse signals, but punctate were observed in 58.5% with progression and only in 4% without (p=0.05). Ki67 subjective analysis revealed that group with progression expressed positive nuclei in more than a half of the epithelium thickness (p=0.02). In the regression group, Ki67 quantitative morphological analysis showed smaller nuclei density, a lower quantity of positive cells and a longer distance between neighbor cells when compared to the others (p=0,019; 0,008 e 0,02). The height of Ki67 positive nuclei and the epithelial thickness were not different among the 3 groups. Conclusion: an ISH punctate signal in the basal layer, Ki67 expression in more than a half of epithelium thickness and the nuclear Ki67 density evaluated quantitatively can be related to CIN1 maintenance and progression / Doutorado / Anatomia Patologica / Doutor em Ciências Médicas

Os minerais sáo essenciais para a saúde e para reprodução de vacas leiteiras. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da utilização de um suplemento de microminerais injetável contendo cobre, manganês, selênio e zinco, 20 dias antes da inseminação artificial, sobre a saúde uterina, perfil de progesterona, desenvolvimento do embrião e fertilidade de vacas Holandesas. O experimento doi dividido em duas fases. Na primeira fase foram usados 306 vacas, entre 2 a 8 anos de idade, foram divididas em um grupo que recebeu suplemento de microminerais injetável (SIM)contendo cobre, manganês, selênio e zinco, 20 dias antes da inseminação artificial (IA) e um grupo controle, que não recebeu nenhum tratamento. Esses animais foram bloqueados por pariedade (primíparas e multíparas), período voluntário de espera (pequeno período de espera PPE e longo período de espera - LPE) e por fazenda (fazenda 1 e 2). Nessa etapa foi avaliada saúde uterina, atraves do corrimento vaginal uterino e pela endometrite citológica. Na segunda fase foram separados 130 animais, divididos em um grupo que recebeu suplemento de microminerais injetável contendo cobre, manganês, selênio e zinco, 20 dias antes da inseminação artificial e um grupo controle, que não recebeu nenhum tratamento, esse animais foram bloqueados por pariedade (primíparas e multíparas). Foi avaliada a concentração de progesterona, o diagnóstico de gestação e a morfometria da vesícula amniótica e do embrião/feto. Não foi encontrado diferença estatística entre grupos experimentais nas avaliações do corrimento vaginal purulento e na endometrite citológica, quando foi bloqueado por pariedade, período voluntário de espera e fazenda, também não foi encontrado diferença estatística. Não houve diferença entre os grupos no ferfil de progesterona, mas quando foi analisada a porcentagem de animais que estava púberes, encontrou-se diferença estatística dentre os grupos no dia 4 (dias após IA), onde a porcentagem de animais púberes no grupo que recebeu SIM foi maior que o grupo tratamento (P = 0,0319). Não foi encontrada diferença no diagnostico de gestação e na perda de prenhez. Na avaliação da morfometria do embrião, os animais que receberam SIM, a vesícula amniótica (longitudinal) e o comprimento do embrião (cabeça-nádega e abdominal) foram maiores que o grupo controle com 36 dias. Em conclusão o emprego com o tratamento com Sim 20 dias antes da IA, não tem efeito sobre a saúde uterina, prenhez e na perda de prenhez, mas melhorou a porcentagem de animais púberes e o tamanho do embrião. / Minerals are essentials to the health and reproduction of dairy cattle. The aim of this study was to evaluate the effect of the use of na injectable trace element supplement containing copper, manganese, selenium and zinc 20 days before the artificial insemination, on the uterine health, progesterone profile, embryo development and fertility of Hostein dairy cows. The trial was divided in two steps. In the first step, 306 cows, between 2 and 8 years old were divided in two groups. The first group received injectable trace element supplement (ITES) containing copper, manganese, selenium and zinc 20 days before the artificial insemination (AI). The second group did not receive the treatment, constituting the control group. These animals were blocked by parity (primiparous and multiparous), voluntary waiting period (short voluntary waiting period SVWP and long voluntary waiting period - LVWP) and farm (farm 1 and 2).In this step, uterine healthy was evaluated by checking the uterine vaginal discharge and by cytological endimetritis. In the second step, 130 cows were divided in two groups, which cows received same treatments used in the first step. These cows were blocked by parity (primiparous and multiparous) and progesterone concentration, pregnancy diagnosis, and amniotic vesicle and embryo/fetus morfology were evaluated. The evaluation of purulent vaginal discharge and cytological endometritis showed no statistical significance between treatment groups. When cows were blocked by parity, the voluntary waiting period and farm did not show any difference. While no differences were detected between groups when progesterone proflile was evaluated, the percentage of pubescent animais on day 4 after showed diferences. In the ITES group, the percentage of pubescent animals was increased compared to the treatment group (P = 0.0319). No differences were detected to pregnancy diagnosis and pregnancy loss. Studying embryo morphometry, the amniotic vesicle (longitudinal) and embryo length (head-buttock) were higher in ITES group compared to treatment group at 36 days. In conclusion, although the use of ITES 20 days before AI did not show any effect on the uterine healthy, pregnancy and pregnancy loss, the percentage of pubescent animais and embryo length was increased.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:27:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Linamar.pdf: 1949828 bytes, checksum: 59aa4c0da0250e8c1a8fb3c195d72988 (MD5) Previous issue date: 2009-04-17 / The treatment of uterine cancer, a slow-growing form of the disease, is particularly effective in regard to precursor lesions. In order to understand this illness from the perspective of health sociology, this study focused on women afflicted with uterine cancer. Semi-structured interviews were employed in an attempt to perceive these women s representations. The interviews revealed the coexistence of positive and negative aspects in experiences with cancer and confirmed the stigma borne by both the illness and the treatment. Results showed that public health policies and available health services need to complement individual prevention measures in attributing priority to information about the illness and the treatment, thus covering all dimensions of people s lives. This conclusion highlights the need for a humanized health system that guarantees access to quality health services and exposes the interface between sociology and health, which is essential for the promotion of humanization within the sociocultural context of the health-illness process. / O tratamento do câncer do colo do útero, uma doença com desenvolvimento lento, é eficaz, principalmente nas lesões precursoras. Para compreender essa doença, na perspectiva da sociologia aplicada à saúde, realizou-se um estudo com mulheres que vivenciaram a experiência do câncer uterino, mediante entrevista semiestruturada, visando apreender as representações criadas por elas. As entrevistas revelaram a coexistência tanto de aspectos positivos quanto negativos na experiência com a doença e confirmaram o estigma que a doença e o tratamento carregam. Os resultados demonstram que as ações de políticas públicas em saúde, dos serviços de saúde disponíveis, precisam ser complementares às ações individuais de prevenção, no sentido de priorizar a informação e o esclarecimento sobre a doença e o tratamento, contemplando as demais dimensões da vida dos sujeitos. Isso aponta para a necessidade de um sistema de saúde humanizado, que apresente garantias de acesso a bens e serviços de saúde de qualidade, evidenciando a interface entre a sociologia e a saúde, que é imprescindível para o alcance das propostas de humanização no contexto sociocultural do processo saúde-doença.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O cÃncer de colo uterino (CCU), segunda causa de morte por neoplasias em mulheres, caracteriza-se por possuir fatores de risco relacionados a hÃbitos e estilos de vida que poderiam ser minimizados e/ou eliminados atravÃs de aÃÃes de promoÃÃo da saÃde. Para tanto, realizou-se o presente estudo com os objetivos de avaliar as aÃÃes de promoÃÃo da saÃde desenvolvidas por enfermeiras do Programa de SaÃde da FamÃlia (PSF) no controle do CCU, identificar fatores de risco para CCU e verificar associaÃÃo entre a promoÃÃo de informaÃÃes sobre os fatores de risco e o conhecimento das usuÃrias sobre esses fatores. Tratou-se de estudo avaliativo realizado no municÃpio de SÃo GonÃalo do Amarante - CE, com 11 enfermeiras e 390 usuÃrias que compareceram a unidade de saÃde para realizaÃÃo do exame de Papanicolaou no perÃodo de maio a agosto de 2007. Os dados foram coletados por meio de entrevista, observaÃÃo indireta da coleta citolÃgica e registros fotogrÃficos e documentais das aÃÃes de promoÃÃo da saÃde. Foram utilizados trÃs instrumentos: um questionÃrio voltado ao levantamento do perfil profissional das enfermeiras; e dois formulÃrios, um abordando as cinco estratÃgias de promoÃÃo da saÃde e outro voltado à vulnerabilidade das clientes. Os dois primeiros foram aplicados Ãs enfermeiras e o Ãltimo Ãs usuÃrias. O formulÃrio aplicado Ãs enfermeiras teve como base o instrumento de AvaliaÃÃo para a Melhoria da Qualidade da EstratÃgia de SaÃde da FamÃlia (AMQ) adotada pelo MinistÃrio da SaÃde. Os dados estatÃsticos foram analisados atravÃs do sistema SPSS 13.0 e discutidos segundo a literatura pertinente. Verificou-se a realizaÃÃo de aÃÃes de promoÃÃo da saÃde principalmente relacionadas Ãs estratÃgias de promoÃÃo de ambientes favorÃveis à saÃde, desenvolvimento de habilidades pessoais e polÃticas pÃblicas saudÃveis, em detrimento das estratÃgias de participaÃÃo comunitÃria e reorientaÃÃo dos serviÃos de saÃde. Observou-se a participaÃÃo multiprofissional nas aÃÃes promotoras de saÃde e a diversidade de tÃcnicas e recursos utilizados nas atividades educativas. Os fatores de riscos para CCU mais presentes na populaÃÃo feminina estavam relacionados Ãs condiÃÃes socioculturais, econÃmicas e à saÃde sexual e reprodutiva. A maioria das usuÃrias (61,28%) referiu conhecer, no mÃnimo, um fator de risco para CCU. Os fatores de risco mais conhecidos foram: pluralidade de parceiros, higiene Ãntima inadequada, desuso de condom e infecÃÃes genitais de repetiÃÃo. A enfermeira foi reconhecida como a principal fonte de informaÃÃo, pelas clientes. As mudanÃas, mais citadas, ocasionadas pelo conhecimento dos fatores de risco foram: realizaÃÃo periÃdica do exame de Papanicolaou, monogamia e uso de condom. Verificou-se associaÃÃo estatisticamente relevante entre as aÃÃes educativas desenvolvidas pelas enfermeiras no controle do CCU e o conhecimento das usuÃrias sobre os fatores de risco. Portanto, o estudo demonstrou a atuaÃÃo das enfermeiras como as principais agentes promotoras de saÃde. Contudo, ainda existe a necessidade de envolver a comunidade e os demais setores da sociedade na discussÃo e enfrentamento dos problemas de saÃde, o que justificaria estudos nessa Ãrea.

O objetivo do presente trabalho foi comparar os efeitos dos distintos ambientes endócrinos peri-ovulatórios na proliferação celular, no metabolismo das poliaminas e no ambiente redox do útero bovino durante o diestro inicial. Para isso, controlou-se farmacologicamente o crescimento do folículo objetivando induzir a ovulação de folículos de maior diâmetro (grupo folículo grande-CL grande, FG-CLG) ou de menor diâmetro (grupo folículo pequeno-CL pequeno, FP-CLP). Trinta vacas multíparas Nelore, foram pré-sincronizadas, metade destes animais foram destinados para o grupo FG-CLG e receberam uma dose de prostaglandina F2&#945; (PGF) e um dispositivo de progesterona, juntamente com benzoato de estradiol no D10. No momento da retirada dos dispositivos de progesterona (entre D1,75 e D2,5) todos os animas receberam uma dose de PGF. A ovulação foi induzida com acetato de buserelina (D0). O que diferiu entre os tratamentos foi que os animais do grupo FP-CLP não receberam uma dose de PGF no D10 e o momento da retirada dos dispositivos foi entre D1,25 e o D1,5. No D7 um subgrupo dos animais foi abatido e amostras de endométrio e lavado uterino foram coletadas para as análises laboratoriais. Os animais do grupo FG-CLG apresentaram no D0 um folículo 1,2 vezes maior e estradiol 2,3 vezes maior em relação ao FP-CLP. Consequentemente, as vacas do FG-CLG desenvolveram CL maiores (1,6 vezes) e mais pesados (1,4 vezes) o que proporcionou no D7 concentrações de P4 1,5 vezes maior em relação ao FP-CLP. Primeiramente, uma análise do transcriptoma endometrial foi realizada e indicou que processos celulares como proliferação, composição de matrix extracelular, processos metabólicos e processos de oxirredução foram afetados pelo modelo experimental. Para avaliar a condição proliferativa e/ou apoptótica endometrial análises de imunomarcação foram realizadas (Ki-67, marcador de proliferação e caspase 3 ativada, marcador de apoptose). O número de células positivas para Ki-67 no epitélio luminal foi 4,1 vezes maior no FP-CLP, porém não houve diferença na marcação da caspase 3 ativada. No epitélio glandular tanto o ki-67 (1,4 vezes) como a caspase 3 ativada (2,6) estavam aumentados no grupo FG-CLG. Em relação à síntese das poliaminas não houve diferença entre os grupos nas concentrações das poliaminas e abundância dos transcritos e proteína das enzimas de síntese. Por outro lado, foi detectada uma forte associação entre a expressão do gene SAT1 com o gene ODC1 (r2: 0,73; P<0,01) e também entre os genes AZIN1 e AMD1 (r2: 0,61; P<0,01). Quanto ao ambiente redox não houve diferença entre os tratamentos no lavado uterino mas no endométrio, no grupo FP-CLP, houve redução da atividade das enzimas Catalase (0,5 vs 0,79 U/mg proteína; P<0,01), glutationa peroxidase (2,0 vs 2,43 nmol NADPH/min/mg proteína; P<0,01), aumento da atividade da Superóxido dismutase (44,77 vs 37,76 U; P=0,04) e da peroxidação lipídica (28,5 vs 17,43 nmol/MDA/mg proteína; P<0,001), mas sem alterar as quantidades da espécies reativas. De acordo com os resultados obtidos, pode-se concluir que o ambiente endócrino peri-ovulatório regula a proliferação endometrial mas sem alterar a via de síntese das poliaminas e modula também o ambiente redox uterino / This work aimed to compare the effects of the different periovulatory endocrine milieu on the several molecular pathways: as cellular proliferation, polyamine metabolism and redox environment of the bovine uterus during the early diestrus. For this, we controlled pharmacologically the follicular growth to induce the ovulation of larger follicle (Large Follicle-Large Corpus lutem group LF-LCL) or smaller follicle (Small follicle-Small Corpus luteum group SF-SCL). Thirty multiparous Nelore cows were synchronized. Fifteen cows were assigned for each group. On the LF-LCL, the cows received a dose of prostaglandin F2&#945; (PGF), a progesterone device and an estradiol benzoate on D10. On the time of progesterone device was withdraw (between D1.75 e D2.5) all the animals received a dose of PGF. The ovulation was induced with buserelin acetate (D0). The unique difference between the groups was that animals of SF-SCL did not received a dose of PGF on D10 and the progesterone device withdraw was between D1.25 e o D1.5. On D7 a subset of animals was slaughtered and the endometrial and uterine washings samples were collected for laboratorial analyses. On D0 the animals of LF-LCL had a 1.2 times larger follicles and 2.3 times higher levels of estradiol than animals of SF-SCL. Firstly, an endometrial transcriptome analyses was realized and suggested that several cellular processes as proliferation, metabolic processes and oxi-reduction processes were affected by experimental model. To evaluate the proliferative and/or apoptotic condition, endometrial immunohistochemistry analyses were realized (ki-67, proliferation marker and caspase 3 activated, apoptose marker). The number of Ki-67 positive cells in the luminal epithelium was 4.1 times higher on SF-SCL. However, there was no difference in caspase 3 activated analyses. On the glandular epithelium both ki-67 (1.4) and caspase 3 activated (2.6) were increased on LF-LCL. About polyamine synthesis pathway there was no difference in polyamines levels and gene and protein expression of synthesis enzymes between the groups. In other hand, it was detected a strong association between SAT1 gene expression and ODC1 gene expression (r2: 0.73; P<0.01) and also between AZIN1 and AMD1 gene expression (r2: 0.61; P<0.01). On the redox environment analysis there was no difference between the groups on the uterine washings but the SF-SCL group had lower endometrial catalase (0.5 vs. 0.79 U/mg protein, P<0.001) and glutathione peroxidase (GPx; 2.0 vs. 2.43 nmol NADPH/min/mg protein, P=0.04) activity, as well as higher lipid peroxidation (28.5 vs. 17.43 nmol MDA/mg of protein, P < 0.001) and superoxide dismutase (SOD) activity (44.77 vs. 37.76 U; P=0.04). There were no differences in the endometrial reactive species (RS) between the groups. In conclusion, the periovulatory endocrine milieu regulates the endometrial proliferation but without alterations in polyamine metabolism and also modulates the uterine redox environment in beef cattle

Em bovinos, o sucesso no estabelecimento da gestação depende de interações entre o concepto e o útero. Tais interações ocorrem através de moléculas presentes no ambiente uterino. Falhas nesse processo causam 30-40% de perdas de gestação. As proteínas são constituintes desse ambiente e possuem um importante papel nesse processo. Objetivou-se na presente dissertação caracterizar o perfil protéico do ambiente uterino de fêmeas bovinas, ciclando ou prenhes, durante o período crítico, utilizando eletroforese bidimensional. O objetivo específico foi comparar a composição protéica de lavados uterinos obtidos in vivo, por sonda de folley ou post-mortem no dia 18 após o estro de vacas não inseminadas ou gestantes. Para a obtenção das amostras, 48 fêmeas bovinos tiveram seu ciclo estral sincronizado e foram alocadas aleatoriamente para receberem lavagens in vivo por sonda de folley (12 inseminadas e sete não inseminadas) ou para receberem lavagens post-mortem (12 inseminadas e cinco não inseminadas) no dia 18 após o estro. Após a coleta, os lavados foram processados e submetidos à eletroforese bidimensional. Os géis foram analisados utilizando o programa Image Master-2D ELITE V. 4.01 (GE Healthcare) para determinação do ponto isoelétrico (PI) e peso molecular relativo (PMR) das proteínas nos diferentes grupos e análise da densidade óptica. Foram selecionadas 178 proteínas presentes nos lavados. Em relação à distribuição das proteínas de acordo com o ponto isoelétrico, 74% (132/178) apresentaram PI entre 5,5 e 8, em relação ao peso molecular, 44% (79/178) das proteínas possuíam PMR menor que 50KDa enquanto 54% (95/178) entre 50 e 100KDa. Nos lavados realizados por sonda de folley (FC ou FP) foram selecionadas 151 proteínas, sendo 96 nos lavados de animais cíclicos e 86 nos prenhes. Os lavados realizados post-mortem (PMC ou PMP) apresentaram apenas 54 proteínas, das quais 24 estiveram presentes nos lavados PMC e 36 nos lavados PMP. Em relação ao estado reprodutivo 115 proteínas foram encontradas nos lavados dos animais cíclicos (FC ou PMC), enquanto 104 proteínas foram selecionadas nos lavados de animais prenhes (FP e PMP). Entre os lavados realizados por sonda de folley (FC e FP) 31 proteínas foram comuns entre os estados, enquanto entre os lavados realizados post-mortem (PMC e PMP) apenas seis proteínas estiveram presentes em ambos os lavados. Nos lavados realizados em animais ciclando (FC e PMC) cinco proteínas estiveram presentes em ambos os tipos de lavados, enquanto nos lavados realizados em animais prenhes (FP e PMP) 18 proteínas foram comuns em ambos os tipos de lavado. Entre os lavados FC e PMP ou FP e PMC, 15 e 6 proteínas, respectivamente, foram comuns. As proteínas presentes exclusivamente nos lavados de vacas prenhes, possivelmente estão envolvidas no diálogo materno-embrionário durante o processo de estabelecimento da gestação. Proteínas detectadas exclusivamente nos lavados obtidos via sonda de folley podem ser devidas ao influxo de proteínas do soro sanguíneo em resposta à manipulação do trato reprodutivo durante a obtenção dos lavados. Esperava-se uma maior efetividade dos lavados realizados post-mortem em relação aos realizados por sonda de folley. Entretanto os lavados obtidos por sonda de folley foram melhores por identificar um maior numero de proteínas, permitindo identificar diferenças maiores entre os lavados de animais ciclando e prenhes. Concluiu-se que a eletroforese bidimendional constitui um método adequado para avaliar quantitativamente o perfil protéico do ambiente uterino bovino e que tanto o estado reprodutivo quanto o método de obtenção de lavados uterinos modificam sua composição protéica. Novos estudos são necessários para se obter a seqüência de aminoácidos das proteínas localizadas para que se conheça sua identidade e função na gestação inicial de bovinos. / In the cattle, the outcome for the establishment of pregnancy depends on interactions between conceptus and uterus. These interactions occur through molecules presents in the uterine environment. Failure in this process causes 30-40% of loss in gestation. The proteins are component of this environment and have a important role in this process. The aim of this dissertation was to characterize the protein profile of the uterine environment in cows, cyclic or pregnant, during the critical period, using two-dimensional electrophoresis. The specific aim was to compare the protein composition of uterine washings recovered in vivo, through a folley catheter, with washings recovered post-mortem at day 18 after estrus of not inseminated or pregnant cows. To obtain the samples 48 cows had their estrous synchronized and here aleatoric put in the group to receive washings in vivo through the folley catheter (12 inseminated and seven not inseminated) or to be washed post-mortem (12 inseminated and five not inseminated) at day 18 after estrus. After the recover, the washings were proceeded and submitted to two-dimensional electrophoresis. The gels were analyzed using the software Image Master-2D ELITE V. 4.01 (GE Heathcare) to determine the isoelectric point (PI) and relative molecular weight (PMR) of the proteins presents in the different groups and analysis of the optical density. One hundred and seventy eight proteins were presents in the washings. The distribution of the proteins according to the PI, 74% (132/178) had PI between 5,5 and 8 and according to the PMR 44% (79/178) of the proteins showed PMR lower than 50KDa, while 54% (95/178) had PMR between 50 and 100KDa. In the washings recovered through the folley catheter (FC and FP) 151 proteins were selected, being 96 from the cyclic cows and 86 from the pregnant cows. The washings recovered post-mortem (PMC and PMP) showed only 54 proteins, from those 24 were present in the cyclic animals and 36 in the pregnant animals. According to the reproductive status 115 proteins were found in the washings from the cyclic animals (FC and PMC), while 104 proteins were selected from the washings of the pregnant animals (FP and PMP). Among the washings recovered through the folley catheter (FC and FP) 31 proteins were the same between the reproductive status. While in the washings recovered post-mortem (PMC and PMP) only six proteins were present in both washings. In washings done in the cyclic animals (FC and PMC) five proteins were presents in both kind of washings, while in washings done in the pregnant animals (FP and PMP) 18 proteins were the same in both kind of washings. Among the washings FC and PMP or FP and PMC, 15 and six proteins, respectively were the same. The proteins presents exclusively in the washings of the pregnant animals are probably involved with the embryo-maternal interplay during the process of pregnancy establishment. Proteins detected exclusively in the washings recovered through the folley catheter may be inflow of proteins from the serum, in response to the uterine manipulation during the process of washing. It was expected a better effect from the washings post-mortem than the ones through the folley catheter. However the washings from the folley catheter had a better result, because they identified a greater number of proteins which allowed identify greater differences between the washings from cyclic and pregnant animals. In conclusion, the two-dimensional electrophoresis is a adequate method to analyze the quantitatively proteins profile of the uterine environment in the cow and that both the reproductive status and the method to obtain the uterine washings modify the proteins composition. New studies are necessary to obtain the amino acids sequence of the proteins found so that we know their identity and function in the beginning of pregnancy in the cow.

Submitted by Rosangela Silva (rosangela.silva3@unioeste.br) on 2018-05-24T12:24:37Z No. of bitstreams: 2 Angélica Reolon.pdf: 1414182 bytes, checksum: 24ef86620ffa2bfc3e82176b316ebf86 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-24T12:24:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Angélica Reolon.pdf: 1414182 bytes, checksum: 24ef86620ffa2bfc3e82176b316ebf86 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-03-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / A deltamethrin is an insecticide belonging to the type II pyrethroid group, widely used without as a pest control in agriculture, industry, public health and in homes, but its indiscriminate and unprotected use has become a problem for population, since several pyrethroids had their action associated with disruption. Therefore, this work aimed to evaluate the possible disrupting actions of deltamethrin on the male and female reproductive systems of rats. Four female rats and two adult, nonbreeding male Wistar albino rats were used. The animals were placed for mating and the pregnant rats (F0 generation) were divided into 2 groups: treatment and control. From the 8th to the 14th day of pregnancy the treatment group received intraperitoneal injections of deltamethrin (0.01 mg / kg) and the control group received canola oil. Pregnant rats (F0 generation) were monitored daily and at 21 days postpartum weaning was performed (F1 generation), at 70 and 76 days of age, this generation was placed for procreation, and, as in the F0 generation, weaning was performed after 21 days of delivery (F2 generation). All the generations had the time of pregnancy, the number of pups and the sexual proportion between females and males evaluated. After euthanasia, the organs weight of the female and male reproductive systems and the integrity of the sperm plasma membrane were analyzed. Exposure to deltamethrin resulted in increased right-sided seminal vesicle weight in both generations and influenced uterine volume increase and right ovary decrease in subsequent generations, and decreased left ovary in F1 generation. The relative weight of the testes, vas deferens, left epididymis, left seminal vesicle and prostate, and the integrity parameter of the sperm plasma membrane did not change. Pregnancy time and number of pups in F1 generation were not affected and the proportion between females and males in both generations was similar. We can conclude that the exposure to deltamethrin altered anatomical aspects of weight of the right seminal vesicle, uterus and ovaries in subsequent generations. However, fertility patterns (number and sex ratio) remained unchanged. / A deltametrina é um inseticida pertencente ao grupo dos piretroides do tipo II, muito utilizada no controle de pragas na agricultura, indústria, saúde pública e nas residências, porém, seu uso indiscriminado e sem a devida proteção tem se tornado um problema para a saúde da população, já que vários piretroides tiveram suas ações associadas com alterações disruptoras. Diante disso, este trabalho teve como objetivo avaliar as possíveis ações disruptoras da deltametrina sobre o sistema reprodutor masculino e feminino de ratos. Utilizou-se 4 ratas fêmeas e 2 ratos machos adultos, não consanguíneos, albinos da linhagem Wistar. Os animais foram colocados para acasalamento e as ratas prenhes (geração F0) foram divididas em 2 grupos: tratamento e controle. A partir do 8° ao 14° dia de prenhez, o grupo tratamento recebeu injeções por via intraperitoneal de deltametrina (0,01 mg.kg-1) e o grupo controle recebeu óleo de canola. As ratas prenhes (geração F0) foram acompanhados diariamente e, aos 21 dias após o parto, foi realizado o desmame da ninhada (geração F1), aos 70 e 76 dias de vida esta geração foi colocada para procriação, e, assim como na geração F0, após 21 dias do parto foi realizado o desmame da ninhada (geração F2). Todas as gerações tiveram o tempo de prenhez, o número de filhotes e a proporção sexual entre fêmeas e machos avaliados. Após a eutanásia, foi analisado o peso dos órgãos do sistema reprodutor feminino e masculino e a integridade da membrana plasmática dos espermatozoides. A exposição à deltametrina resultou no aumento do peso da vesícula seminal direita em ambas as gerações e influenciou o aumento de volume uterino e a diminuição do ovário direito nas gerações subsequentes, e a diminuição do ovário esquerdo na geração F1. O peso relativo dos testículos, ductos deferentes, epidídimo esquerdo, vesícula seminal esquerda e próstata e o parâmetro integridade da membrana plasmática dos espermatozoides não tiveram alterações. O tempo de prenhez e o número de filhotes na geração F1 não foram afetados e a proporção entre fêmeas e machos em ambas as gerações foram semelhantes. Podemos concluir que a exposição à deltametrina alterou aspectos anatômicos de peso de vesícula seminal direita, útero e ovários nas gerações subsequentes. Entretanto, os padrões de fertilidade (número e proporção sexual) mantiveram-se inalterados.