Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, 2010. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2010-11-10T19:06:21Z No. of bitstreams: 1 2010_EduardoLourencodaSilva.pdf: 1331200 bytes, checksum: 0fc919ee04504d9f27bbc0833663f8f3 (MD5) / Rejected by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br), reason: Copiar abstract. Foi coladado errado. on 2010-12-03T00:46:09Z (GMT) / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2010-12-06T20:01:59Z No. of bitstreams: 1 2010_EduardoLourencodaSilva.pdf: 1331200 bytes, checksum: 0fc919ee04504d9f27bbc0833663f8f3 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-12-08T21:34:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_EduardoLourencodaSilva.pdf: 1331200 bytes, checksum: 0fc919ee04504d9f27bbc0833663f8f3 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-12-08T21:34:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_EduardoLourencodaSilva.pdf: 1331200 bytes, checksum: 0fc919ee04504d9f27bbc0833663f8f3 (MD5) / A Síndrome da Imuno-Deficiência Adquirida (AIDS), causada pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), caracteriza-se por ser uma infecção em que se observa uma alta taxa de mutações na formação das estruturas proteicas de seu agente etiológico, o que dificulta a terapia antibiótica e a resposta imunológica natural do indivíduo infectado. Desta forma, o conhecimento sobre a variabilidade genética humana e a análise da possível resistência deste à infecção pelo HIV é tão importante quanto o estudo da etiologia e dos ciclos biológicos do vírus para a correta aplicação da terapêutica e para a melhor orientação das pesquisas na busca por medicamentos mais eficientes. O presente estudo visou à caracterização genética populacional do hospedeiro do HIV em uma população do Distrito Federal. Para tal, foi realizada uma avaliação da distribuição gênica e genotípica de uma deleção de 32 pares de base no gene CCR5, CCR5*Δ32, e dos marcadores microssatélites TNFc, TNFd e TNFe associados aos genes do fator de necrose tumoral – TNFα e TNFβ -, que são marcadores genéticos associados à resistência ao HIV, em uma amostra de indivíduos nascidos no Distrito Federal. A frequência para a deleção de 32 pares de base neste estudo foi de 5,5% com a existência de um indivíduo homozigoto para a mutação e nove heterozigotos. O alelo 2 de TNFc foi encontrado com uma frequência de 9%, o que é muito abaixo em relação ao relatado para outras populações brasileiras e em africanos e europeus. TNFd teve o alelo 3 como mais frequente e o marcador TNFe apresentou o alelo 3 como o mais frequente. O haplótipo formado pelos alelos TNFc*1, TNFd*3 e TNFe*3 apresentou-se como o mais comum. Desta forma, o conhecimento da frequência do alelo CCR5*Δ32 no Distrito Federal fortalece a proposta de um gradiente associado com a presença de ancestralidade europeia e corrobora com os dados bibliográficos de que a população do Centro-Oeste é como um resumo da população brasileira. A descrição da distribuição alélica para os loci TNFc, d e e contribui para o melhor conhecimento da distribuição desses marcadores no Brasil. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / AIDS, the Acquired Immune Deficiency Syndrome, caused by the human immunodeficiency virus, HIV, is characterized as an infection where there has been found a high mutation rate in the formation of protein structures of its etiologic agent, troubleling the antibiotic therapy and natural immune response of the infected person. Therefore, knowledge of human genetic variability and analysis of the possible resistance of the HIV infection are so important as the study of the etiology and biological cycles of the virus to the correct application of therapy and for better targeting of research for more effective drugs. This study aimed to characterize the population genetics of the HIV´s host in Distrito Federal population. By reason of, an assessment of gene and genotypic distribution of a deletion of 32 base pairs in the CCR5 gene, CCR5*Δ32, and microsatellite markers TNFc, TNFd and TNFe genes associated with tumor necrosis factor - TNFα and TNFβ -, which are genetic markers associated with resistance/susceptibility to HIV in a sample of individuals born in Distrito Federal. The frequency of 32 base pairs deletion in this study was 5.5% with the existence of an individual homozygous for the mutation and nine heterozygotes. The allele 2 of TNFc was found with a frequency of 9%, which is much lower than previously reported for other populations in Brazil and in Africa and Europe. TNFd had the allele 3 as the most frequent and TNFe marker allele 3 showed the most frequent. The haplotype formed by alleles TNFc *1, TNFd *3 and TNFe *3 was the most common. Consequently, knowledge of the frequency of the CCR5 * Δ32 in the Distrito Federal has supported the proposal of a gradient associated with the presence of European ancestry and corroborates the view that the population of Distrito Federal and also from this geographical region is a brief of the brasilian population. The description of the distribution of alleles for loci TNFc, TNFd and TNFe contributes to a better understanding of the distribution of these markers in Brazil.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2011. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-10-18T14:50:07Z No. of bitstreams: 1 2011_GreiceKellyMenezesMartins.PDF: 8249552 bytes, checksum: 41f1382a22b8a584754a3559c4b87408 (MD5) / Approved for entry into archive by Leila Fernandes (leilabiblio@yahoo.com.br) on 2011-10-18T15:02:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_GreiceKellyMenezesMartins.PDF: 8249552 bytes, checksum: 41f1382a22b8a584754a3559c4b87408 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-18T15:02:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_GreiceKellyMenezesMartins.PDF: 8249552 bytes, checksum: 41f1382a22b8a584754a3559c4b87408 (MD5) / No Brasil, a raiva e a dengue podem ser citadas como duas doenças que causam prejuízos econômicos. A raiva é uma doença causada por um vírus do gênero Lyssavirus, transmitida pela saliva de mamíferos infectados, e uma vez iniciados os sintomas, a mortalidade ocorre em praticamente todos os casos. O vírus da raiva é formado por cinco proteínas: a nucleoproteína, a fosfoproteína, a proteína de matriz, a RNA polimerase e a glicoproteína (GPV), principal proteína viral imunogênica. Neste trabalho, a GPV foi expressa em células de mamíferos utilizando um baculovírus recombinante. Baculovirus são vírus de insetos que têm sido amplamente utilizados como biopesticidas e como ferramenta para a expressão de proteínas heterólogas em células de inseto e de mamíferos. Eles são considerados seguros devido à sua especificidade ao hospedeiro e a incapacidade de se replicar em linhagens de células não-inseto, embora eles possam entrar nas células de mamíferos. Para a construção do vírus recombinante, um fragmento gênico contendo o promotor CMV e o gene GPV foi clonado no vetor pFastBac1. O vírus recombinante AcCMV-GPV foi obtido através do sistema Bac-to-Bac (Invitrogen) e foi usado para infectar células de inseto. O extrato celular foi analisado por SDS-PAGE e a presença da proteína GPV foi confirmada por western blot usando um anticorpo anti-vírus da raiva. Células HeLa, derivadas de hepatoma humano, foram transduzidas com o vírus recombinante e o extrato celular também foi analisado por SDS-PAGE e a proteína GPV marcada com o anticorpo anti-vírus da raiva. Células HuH-7, derivadas de hepatócitos humanos, foram transduzidas com o vírus recombinante e a proteína GPV foi quantificada através de um ELISA. Futuramente, testes in vivo poderão ser feitos a fim de analisar os efeitos imunogênicos do vírus recombinante. Baculovírus recombinante capaz de expressar GPV em células de mamíferos pode ser uma alternativa para o desenvolvimento de uma vacina contra a raiva a custos mais baixos. A dengue é uma doença tropical e tem se tornado um grave problema de saúde pública. A doença é causada pelo vírus da dengue (dengue virus, DENV), um Flavivirus composto de quatro sorotipos (DENV-1 a 4), todos transmitidos ao ser humano através da picada da fêmea de mosquitos do gênero Aedes. O DENV se replica tanto em células de vertebrados como nas células do mosquito. Há muito conhecimento sobre os mecanismos de entrada e replicação de Flavivirus em cultura de células de mamífero e seus efeitos in vivo. No entanto, pouco se sabe a respeito dos processos moleculares do vírus no vetor. Dentro desse contexto, o presente trabalho propos a análise transcricional de células de Ae. albopictus (C6/36) infectadas com DENV-1, isolado do Distrito Federal. Doze horas pósinfecção, as células foram coletadas, o RNA total de células infectadas e não infectadas foi extraído e utilizado para confecção da biblioteca subtrativa de cDNA, através da técnica de Representational Difference Analysis (RDA). Os cDNAs amplificados foram clonados no vetor pGEM-T Easy e seqüenciados. Cerca de 300 clones foram seqüenciados e as seqüências obtidas foram analisadas em um banco de dados. Infelizmente, a maioria das seqüências foi de RNA ribossomal. Tal resultado indica que houve problemas técnicos na construção da referida biblioteca. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / In Brazil, rabies and dengue fever may be cited as two diseases that cause economic impacts. Rabies is a disease caused by a virus of the genus Lyssavirus and it is transmitted through the saliva of infected mammals. Once the symptoms started, the mortality occurs in virtually all cases. The rabies virus is composed of five proteins: nucleoprotein, phosphoprotein, matrix protein, RNA polymerase and glycoprotein (GPV), the main immunogenic viral protein. In this work, the GPV was expressed in mammalian cells using a recombinant baculovirus. Baculovirus are insect viruses that have been widely used as biopesticides and as a tool for expression of heterologous proteins in insect and mammalian cells. They are considered safe due to their host specificity and the inability to replicate in non-insect cell lines, although they can enter in mammalian cells. To construct the recombinant virus, a gene cassete containing the CMV promoter and the GPV gene was cloned into the vector pFastBac1. The recombinant AcCMV-GPV was obtained by Bac-to- Bac system (Invitrogen) and was used to infect insect cells. The cell extract was analyzed by SDS-PAGE and the presence of the GPV protein was confirmed by western blot using an antibody anti-rabies virus. HeLa cells, derived from human hepatoma, were transduced with the recombinant virus, the cell extract was also analyzed by SDS-PAGE and the GPV protein was labeled with the same antibody. Huh-7 cells derived from human hepatocytes were transduced with the recombinant virus and the protein was quantified by ELISA. In future, in vivo tests can be done to examine the immunogenic effects of the recombinant virus. Recombinant baculovirus expressing GPV in mammalian cells may be an alternative for the development of vaccine against rabies at lower costs. Dengue is a tropical disease and has become a serious public health issue. The disease is caused by dengue virus (DENV), a Flavivirus, which has four serotypes (DENV-1 to 4), all transmitted to humans through the bite of female mosquitoes of the genus Aedes. The DENV replicates in both vertebrate and mosquito cells. There are a lot of knowledge about the mechanisms of Flavivirus entry and replication in mammalian cell culture and its effects in vivo. However, little is known about the molecular processes of the virus in the vector. In this context, this paper proposes cell transcriptional analysis of Ae. albopictus cells (C6/36) infected with DENV-1, isolated from Distrito Federal. Twelve hours after infection, cells were collected, total RNA from infected and uninfected cells was extracted and used to construct a subtractive cDNA library, using the technique of Representational Difference Analysis (RDA). The amplified cDNAs were cloned into pGEM-T Easy vector and sequenced. About 300 clones were sequenced and the sequences were analyzed in a database. Unfortunately, most of the sequences were ribosomal RNA. This result indicates that there were technical problems in building the library.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Fitopatologia do Instituto de Ciências Biológicas da Universidade de Brasília, Brasília, 2013. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo: foi restrito o capítulo 3. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2013-08-09T15:31:10Z No. of bitstreams: 1 2013_MarianaResendeMachado_Parcial.pdf: 2324547 bytes, checksum: 8d0c6777ef4824c6ee8daf0bcf70851f (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-08-16T14:28:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MarianaResendeMachado_Parcial.pdf: 2324547 bytes, checksum: 8d0c6777ef4824c6ee8daf0bcf70851f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-16T14:28:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MarianaResendeMachado_Parcial.pdf: 2324547 bytes, checksum: 8d0c6777ef4824c6ee8daf0bcf70851f (MD5) / A família Geminiviridae é caracterizada por espécies virais com partículas de morfologia geminada e genoma composto por DNA circular de fita simples, sendo o gênero Begomovirus o mais importante em termos de número de espécies e impacto econômico. Os begomovírus do Novo Mundo, em sua maioria, possuem dois componentes genômicos (DNA-A e DNA-B), são transmitidos por Bemisia tabaci (mosca-branca) e infectam plantas dicotiledôneas. A forma mais eficiente de controle tem sido o emprego de cultivares resistentes ao vírus e/ou ao vetor. No entanto, os dados referentes à eficiência e ao espectro da resposta das diferentes fontes de resistência para as espécies que compõe o complexo de begomovírus bipartidos do Brasil ainda são escassos. Os principais fatores de resistência empregados têm sido os loci Ty-1 e Ty-3 derivados de S. chilense. No entanto, a linhagem ‘TX-468-RG’ (portadora do gene recessivo tcm-1) derivada de ‘Tyking’ tem se destacado entre as diversas fontes por apresentar elevados níveis de resistência contra uma ampla gama de espécies de begomovírus de genoma bipartido do Brasil e monopartido da Europa. A estratégia de piramidização de genes de resistência aos begomovírus, para ser eficiente, requer o uso de marcadores moleculares em sistemas de melhoramento assistido para monitorar a incorporação de diferentes loci (dominantes e recessivos), especialmente por eles conferem idêntico fenótipo. No entanto, até o presente momento, não foram desenvolvidos trabalhos visando identificar a localização cromossômica ou desenvolver marcadores moleculares para monitorar a incorporação do locus tcm-1 em programas de seleção assistida. No Capítulo 2, a linhagem ‘TX-468-RG’(controle resistente) e cinco novas fontes/acessos de S. lycopersicum que se mostraram como promissoras fontes em ensaios conduzidos em telado e campo (‘LAM 100’, ‘LAM 156’, ‘LAI 132’, ‘H-24’ e ‘Ty-198’) foram inoculadas via bombardeamento de micropartículas com clones infectivos de quatro espécies do complexo de begomovírus bipartidos do Brasil: Tomato severe rugose virus (ToSRV); Tomato rugose mosaic virus (ToRMV); Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV) e Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV). A cultivar ‘Viradoro’ foi utilizada como controle suscetível. A acumulação do DNA viral nos diferentes acessos foi monitorada via Southern Blot. ‘Viradoro’ apresentou sintomas severos e alto acúmulo de DNA para todos os vírus. O acesso ‘H-24’ (fonte do locus Ty-2 introgredido de S. habrochaites) se mostrou suscetível ao ToSRV e ToRMV. A linhagem ‘LAI 132’ mostrou resistência efetiva apenas contra ToCMoV. ‘TX-468-RG’ e os acessos ‘LAM 100’, ‘LAM 156’ e ‘Ty-198’ foram resistentes a todas as espécies virais, sendo, portanto, recomendados como fontes preferenciais em programas de melhoramento, para incorporar fatores de resistência de mais amplo espectro. Uma análise foi conduzida com um painel de marcadores moleculares ligados aos principais loci de resistência a begomovírus caracterizados em tomateiro (Ty-1, Ty-2, Ty-3, Ty-4 e Ty-5/ty-5). Os resultados indicaram que os acessos ‘LAI 132’, ‘LAM 100’, ‘LAM 156’ e ‘Ty-198’ representam fontes de novos genes e/ou alelos de resistência. No Capítulo 3 o objetivo foi identificar e ancorar marcadores moleculares associados com o gene/locus tcm-1 no genoma-referência do tomateiro, permitindo a localização física desse fator de resistência. Os resultados da análise de uma população F2 segregando para reação a um isolado do ToSRV e da caracterização molecular de um painel de marcadores do tipo SCAR e CAPS associados com a resistência indicaram que o gene tcm-1 está localizado no topo do cromossomo 6. O locus tcm-1 se encontra em ligação estreita com um grupamento (‘cluster’) de genes de resistência que engloba a região genômica contendo os genes Ty-1 e Mi. Recentemente, um locus recessivo no cromossomo 4 controlando resistência a isolados da espécie de genoma monopartido Tomato yellow leaf curl virus foi reportado na Flórida. Essa região genômica contem o gene dominante Ty-5 e uma provável variante alélica de natureza recessiva (também derivada do híbrido ‘Tyking’) nomeada como ty-5. Embora polimórficos na população de mapeamento utilizada no presente trabalho, os marcadores moleculares para o locus Ty-5/ty-5 não se mostraram associados com a resposta de resistência ao ToSRV. Desta forma, nossos resultados indicam que tcm-1 e Ty-5/ty-5 são fatores genéticos distintos e que o híbrido ‘Tyking’ (fonte original do locus tcm-1) pode representar uma pirâmide de diferentes genes recessivos do tipo espécie-específico que, quando em associação, se mostram efetivos contra uma ampla gama de espécies de Begomovirus de genoma monopartido e bipartido de diferentes continentes. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Geminiviridae family is composed by virus species with geminated particles and circular, single-stranded DNA genome. The genus Begomovirus is the most important within this family in terms of number of species as well as in economic impact. The majority of begomoviruses from the New World has two genomic components (DNA-A and DNA-B), and they are transmitted to dicotyledonous plants by the whitefly Bemisia tabaci. The most efficient disease control strategy is the employment of cultivars with genetic resistance to either the virus or its vector. However, the amount of information available about the phenotypic expression, as well as the spectrum of efficiency of the distinct Solanum (section Lycopersicon) resistance sources to Brazilian begomovirus is still limited. So far, the Ty-1 and Ty-3 loci (introgressed from accessions of the wild species S. chilense) are the most employed resistance factors. The inbred line ‘TX-468-RG’ derived from the hybrid S. lycopersicum ‘Tyking’ is one of the most important sources of wide-spectrum resistance, being effective against a wide range of begomovirus isolates from both bipartite species from Brazil and monopartite species from Europe. To increase the efficiency of the pyramidization process, the establishment of a marker assisted selection system to all known (dominant and recessive) begomovirus resistance loci is necessary. However, molecular markers are still not available for the tcm-1 locus and even its genomic location is yet unknown. In Chapter 2, ‘TX-468-RG’ (resistant control due to presence of the recessive locus tcm-1) and five new accessions identified as promising sources of resistance in assays conducted under either greenhouse orfield conditions (named as ‘LAM 100’, ‘LAM 156’, ‘LAI 132’, ‘H-24’ and ‘Ty-198’), were evaluated in biolistic assays with infective clones of four begomovirus of the Brazilian complex virus: Tomato severe rugose virus (ToSRV); Tomato rugose mosaic virus (ToRMV); Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV) and Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV). The tomato cultivar ‘Viradoro’ was employed as susceptible control. Virus accumulation was monitored in all accessions via Southern Blot assays using a universal probe. ‘Viradoro’ displayed severe symptoms and high viral DNA accumulation in all assays. The line ‘H-24’ (source of Ty-2 locus introgressed from S. habrochaites) displayed a susceptible reaction to ToSRV and ToRMV. The accession ‘LAI 132’ displayed a peculiar species-specific resistant reaction only to ToCMoV. The ‘TX-468-RG’ as well as the accessions ‘LAM 100’, ‘LAM 156’ and ‘Ty-198’ were resistant to all virus species, being, therefore, recommended for preferential use in breeding programs aiming to develop lines with wider spectrum of resistance. Analyses conducted with a panel of molecular markers linked to all currently characterized begomovirus resistance loci in tomato (Ty-1, Ty-2, Ty-3, Ty-4 e Ty-5/ty-5) indicated that ‘LAI 132’, ‘LAM 100’, ‘LAM 156’ and ‘Ty-198’ are sources of either new genes or alleles for begomovirus resistance. In Chapter 3, molecular markers were developed in association with tcm-1 and were anchored in the reference tomato genome, aiming to develop efficient marker-assisted selection systems for this locus. Co-segregation analyses of an F2 population inoculated with an ToSRV isolate and the molecular characterization of a panel of SCAR and CAPS markers linked to the resistant reaction indicated that tcm-1 is located on the top of the chromosome 6 in linkage with a the well-characterized cluster of resistance genes, encompassing the Ty-1 and Mi loci. More recently, a recessive resistance to Florida isolates of the monopartite Tomato yellow leaf curl virus was also was characterized in inbred lines derived from the hybrid ‘Tyking’. This gene and its putative allelic variant (located in chromosome 4) have been tentatively named as Ty-5/ty-5. Even though polymorphic in our mapping population, the molecular marker linked with the Ty-5/ty-5 genomic region segregated independently from the resistant reaction to ToSRV. Therefore, our results indicated that tcm-1 and Ty-5/ty-5 are distinct resistance factors, and that ‘Tyking’ (the original source of the locus tcm-1) might represent a pyramid of distinct Begomovirus species-specific recessive genes, that in association might confer effective reaction observed against a range of monopartite and bipartite species in distinct continents.

O vírus da anemia das galinhas – CAV (chicken anemia virus) está presente em praticamente todos os países com produção avícola investigados, inclusive no Brasil. O CAV causa a doença chamada de anemia infecciosa das galinhas em aves jovens, que se caracteriza por anemia, aplasia de medula óssea, retardo no crescimento, mortalidade variável (2 a 20%), atrofia de órgãos linfóides e imunodepressão. O controle da anemia infecciosa das galinhas é baseado na transferência de imunidade passiva das matrizes à progênie. A transferência de anticorpos maternos via ovo em nível suficiente é uma forma de prevenir a transmissão vertical do vírus, reduzindo assim a ocorrência de surtos da doença. Este trabalho teve como objetivo comparar o desempenho entre frangos nascidos positivos e negativos para a presença de anticorpos contra o CAV. Para isso, foram utilizados dois lotes de matrizes pesadas, sendo um vacinado e o outro não. Com a progênie obtida dessas matrizes de ambos os lotes, foram constituídos três tratamentos com 50 fêmeas e 50 machos cada: T1 - pintos oriundos de matrizes vacinadas com títulos protetores; T2 - pintos oriundos de matrizes não vacinadas com títulos médios e; T3 - pintos oriundos de matrizes não vacinadas e negativas ou com títulos baixos. Todos os tratamentos permaneceram em regime de criação intensiva usual por 47 dias em 5 propriedades diferentes, portanto o experimento teve 5 repetições. Os dados analisados foram o peso inicial e final, conversão alimentar e mortalidade. Como resultado, foi observado que não houve diferença significativa (p>0,05) no peso final entre os tratamentos com relação as fêmeas. Já, nos machos, os frangos negativos (T3) foram significativamente (p<0,05) mais pesados que os frangos positivos (T1 e T2). Não houve diferença significativa (p>0,05) entre os tratamentos em relação à mortalidade e a conversão alimentar. A análise do soro e histologia do timo determinaram a não ocorrência do desafio durante o período de criação dos frangos. A vacinação das matrizes contra o CAV não gerou títulos de anticorpos superiores aos obtidos nas matrizes não vacinadas e infectadas naturalmente. Este estudo indicou que a presença de anticorpos contra o CAV em frangos de corte, seja através da vacinação ou da infecção natural das matrizes, não gerou uma progênie com melhor desempenho nas condições de criação testadas.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5201_1.pdf: 3875906 bytes, checksum: e19cd4aac5e7105844659ea731a31627 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / A Síndrome da Imunodeficiência adquirida (AIDS) é uma doença causada pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), e é caracterizada pela destruição de células pertencentes ao sistema imunológico, tais como, macrófagos e linfócitos T CD4+. Segundo as estatísticas da Junta das Nações Unidas sobre o HIV/AIDS (UNAIDS) aproximadamente 42 milhões de pessoas no mundo estão infectadas pelo HIV-1, e somente no Brasil aproximadamente 600 mil pessoas são portadores do vírus. O entendimento dos mecanismos da imunidade natural é de fundamental importância no controle da infecção e replicação. Este trabalho teve como objetivo propor uma metodologia simples, rápida e eficaz para correlacionar através da genotipagem de dois genes relacionados com a resposta imune inata (CCR5 e MBL-2), a susceptibilidade ou resistência à infecção pelo HIV, e o risco de transmissão materno infantil do vírus, utilizando os pares mães e filhos brasileiros, infectados pelo HIV-1, através da metodologia da PCR em tempo real, baseado na técnica de melting temperature assay . Nossos resultados para genotipagem do gene MBL-2 estão de acordo com os dados da literatura que indicam que a presença do alelo 0 confere risco relativo de 1,37 para infecção através da transmissão vertical. Neste trabalho, nós também analisamos a freqüência de quatro polimorfismos dentro da região promotora e um dentro da região codificadora do gene CCR5. Os polimorfismos foram detectados por amplificações por PCR e posteriormente confirmados por sequenciamento. Observamos que, embora não houvesse diferença significativa entre os polimorfismos CCR5-&#916;32, CCR5- 59356-C/T e CCR5-59653 C/T, as freqüências dos genótipos CCR5-59353 C/T e CCR5-59402-A/G diferem entre crianças HIV +, HIV - e saudáveis. A presença do genótipo CCR5-59353-TT indicou uma tendência ao aumento do risco da transmissão vertical da infecção do HIV-1 em crianças brasileiras, enquanto a presença do genótipo CCR5-59402-AA é sugestiva para um efeito protetor contra a transmissão vertical do HIV-1

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-02T20:07:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Rita de Cássia Pereira de Lima.pdf: 2090852 bytes, checksum: df6f7838949b3a9d06e3a4aa1380550c (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-03T22:32:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Rita de Cássia Pereira de Lima.pdf: 2090852 bytes, checksum: df6f7838949b3a9d06e3a4aa1380550c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:32:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Rita de Cássia Pereira de Lima.pdf: 2090852 bytes, checksum: df6f7838949b3a9d06e3a4aa1380550c (MD5) Previous issue date: 2017-03-08 / CAPES / Cervical e um subconjunto de cânceres de cabeça e pescoço são causados pela infecção persistente por papilomavírus humano (HPV) de alto risco. A oncogenicidade do HPV está fortemente associada a fatores ambientais, a exemplo dos tipos virais e suas variantes, e também tem sido associado a presença de polimorfismos em oncogenes virais, os quais podem estar envolvidos no risco de progressão maligna. O conhecimento sobre como a variância genética é bem distribuído entre diferentes populações e sua relação com lesões de alto grau pode ser crucial para o diagnóstico e estratégias terapêuticas contra doenças relacionadas ao HPV. Os polimorfismos podem levar à alteração da função biológica com conseqüências clínicas. Além de prejudicar o controle do ciclo celular mediado por pRB, as atividades de E7 incluem perturbação da via NF-κB afetando uma importante via crítica celular anti-viral. Em pacientes do Nordeste do Brasil, nosso estudo descreveu a presença de tipos de HPV e variantes de amostras cervicais por técnica de PCR e sequenciamento e realizou uma das primeiras análises funcionais baseadas na atividade NF-κB dos polimorfismos E7 de HPV-16. Adicionalmente, para se ter acesso aos níveis de expressão de mRNA de E7 a partir de culturas de células. O HPV-16 foi encontrado como o tipo mais prevalente, seguido por HPV-31 e HPV-58. Entre as variantes do HPV-16, as linhagens C e D foram detectadas principalmente em lesões cervicais de alto grau. Além disso, identificamos quatro polimorfismos do gene E7 do HPV-16. Um polimorfismo não-sinônimo foi localizado em epítopos preditos de células T e B, que estão sob seleção positiva. Este polimorfismo também está localizado em uma região de loop próximo ao domínio da hélice LXCXE, que é responsável pela interação da proteína E7 e pRb, passo crucial no desenvolvimento do câncer. Novas mutações adaptativas podem levar o vírus a evadir o sistema imunológico do hospedeiro e aumentar a patogenicidade. Sobre os resultados da via NF-kB, estes mostraram que as variantes do gene E7 do HPV-16 nas quais os três polimorfismos estão presentes podem exercer um forte efeito supressor nos pacientes infectados com HPV com implicações na persistência da infecção e na sua progressão. No entanto, as alterações resultantes dos polimorfismos podem não estar necessariamente relacionadas com os níveis de expressão diferencial das variantes. Estes resultados adicionam dados importantes para os estudos sobre a variabilidade de E7, o que poderia contribuir para uma melhor compreensão da diversidade e infecção do HPV. / Cervical and a subset of head and neck cancers are caused by high-risk human papillomavirus (HPV) persistent infection. HPV oncogenicity is strongly associated with environmental factors, viral types, and their variants, where even polymorphisms in viral oncogenes may be involved in malignant progression risk. Knowledge about how genetic variance is distributed among populations and its relationship with high-grade lesions may be critical to diagnosis and therapeutic strategies against HPV-related diseases. Polymorphisms may lead to altered biological function with clinical consequences. Besides impairing pRB-mediated cell cycle control, E7 activities include NF-κB disturbing, which affects an anti-viral cellular critical pathway. In Brazilian Northeastern patients, our study described the presence of HPV types and variants from cervical cells by PCR technique and sequencing and performed one of the first NF-κB activity-based functional analysis of HPV-16 E7 polymorphisms. In addition, in order to access E7 mRNA expression levels from cell cultures. HPV-16 was found as the most prevalent type, followed by HPV-31 and HPV-58. Among HPV-16 variants, C and D lineages were detected mostly from high-grade cervical lesions. Furthermore, we have identified four HPV-16 E7 gene polymorphisms. A non-synonymous polymorphism was located into predicted T and B-cell epitopes, which are under positive selection. This polymorphism is also located in a loop region next to LXCXE helix domain, which is responsible for the interaction of E7 protein and pRb, critical step in cancer development. Novel adaptive mutations could lead the virus to evade host immunological system and increase pathogenicity. About the NF-kB pathway, results have shown that HPV-16 E7 gene variants in which the three polymorphisms are present may perform a strong suppressive effect on the in HPV-infected patients with implications for infection persistence and its progression. However, the changes resulting from polymorphisms may not necessarily be related to the differential expression levels of the variants. These results add important data on E7 variability studies, which could contribute to a better understanding of HPV diversity and infection.

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T18:34:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cunha_AndreaMendoncaGusmao_M.pdf: 21317689 bytes, checksum: 5103e97d3a55024fcfa23ce2b647a65c (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: o Herpesvírus Humano 8 (HHV-8), ou Herpesvírus associado ao sarcoma de Kaposi (KSHV), foi identificado em 1994 por CHANG et aI em biópsia de pele de pacientes com sarcoma de Kaposi (SK) associado à Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA / AIDS). O HHV-8 pertence à família Herpesviridae, sub-família Gamaherpesvirinae e gênero Rhadinovirus, o único do gênero a infectar humanos....Observação: O resumo, na integra, podera ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Human herpesvirus 8 (HHV-8), or Kaposi's sarcoma associated herpesvirus (KSHV), was identified in 1994 by Yuan Chang et ai in skin biopsies ftom patients with Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) related Kaposi's sarcoma. HHV-8 belongs to Herpesviridae family, Gamaherpesvirinae subfamily and Radinovirus genus, the only one ftom this genus which infects humans.... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Eliana Amaral / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-29T05:40:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Magalhaes_Jarbas_D.pdf: 159085 bytes, checksum: 44f637a534929bf4e2e8c7c60f6ba75d (MD5) Previous issue date: 2001 / Doutorado

Orientador : Sandra Cecilia Botelho Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-01T03:21:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castro_SimoneMartinsde_M.pdf: 18534135 bytes, checksum: 3db4e17b5bf69e85414e72740cd531f7 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Foram examinadas alterações no número absoluto de células T, B e NK.circulantes para determinar se mudanças significativas acontecem após o transplante renal e durante a infecção por citomegalovirus (CMV). Foram analisadas amostras consecutivas de sangue de 61 pacientes transplantados renais e em terapia padrão de immunossupressão triplice. Foram determinados, usando-se dupla marcação por citometria de fluxo, os números absolutos de linfócitos CD3+, CD4+, CD8+, CD19+, CD3+HADR+ e CD16+56+. Quarenta e oito pacientes (78,7%) desenvolveram infecção ativa por CMV, e todos recuperaram. Vinte destes pacientes infectados (32,8%) contrairam doença por CMV durante o processo infeccioso. O número de linfócitos e o de suas principais subpopulações eram normais antes do episódio de doença por CMV. Durante a doença houve uma diminuição, seguida de um crescimento significante (P <0,005) no número de linfócitos CD3+, CD4+, CD8+ e CD3+HADR+. Nenhuma mudança significativa foi observada no número absoluto de células NK.e nos linfócitos B durante a doença. Nós concluímos, uma vez que todos os pacientes com viremia desenvolveram uma resposta celular, que esta recuperação está associada com crescimento no número de subpopulações de células T / Abstract: We examined changes in the number of circulating T, B and NK cells to see if consistent changes occur folIowing renal transplantation, during cytomegalovirus (CMV) infection. Serial blood samples were taken from 61 patients on standard triple immunossuppression therapy. Using two-color flow cytometry analysis, the absolute number of CD3+, CD4+, CD8+, CD19+, CD3+HLADR+ and CD16+56+ were determine. Forty-eight (78,7%) patients developed active CMV infection, and alI ofthem subsequently recovered. Twenty of these infected patients (32,8%) developed disease during the infectious process. The number of lymphocytes and their main subpopulations was normal before the onset of CMV disease. During the disease there was a decrease folIowed for significant growth (P<0,0005)in the number of CD3+, CD4+, CD8+ and CD3+HLADR+. No significant changes were seen in natural killer celIs and B lymphocytes during disease. We conclude, as alI viraemic patients recovering from the infection developed a celular response, this recovery is associated with growth in the number of T subsets / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores: Lucila Costallat Ricci, Antonio Fernando Pestana de Castro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:36:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferraz_MirtisMariaGianciani_M.pdf: 6199459 bytes, checksum: 5178264e436b95d9608ded8b8db43e6f (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: E. coli é um dos patógenos relacionados a casos de diarréia. Em nosso trabalho analisamos 27 amostras de E. coli isolados em 14 crianças portadoras do HIV, com diarréia persistente. Em 51,8% das fezes foi observada a presença de EAEC, sendo que estas amostras não apresentam nenhum fator de virulência quando analisadas por PCR, e outros testes realizados com exceção de duas amostras que apresentam o gene ast. Observou-se que 51,1% destas amostras apresentam invasão em células HeLa. Entretanto, tais amostras puderam ser caracterizadas como pertencentes ao grupo EIEC, através de provas sorológicas, bioquímicas, biológicas e moleculares. A sorogrupagem não evidenciou a presença de sorogrupos patogênicos entre estas amostras / Abstract: E. coli is pathogen relatd to episodes of diarrhea. In our study, 27 strains from 14 HIV + children with persistent diarrhea were analyzed. 51.8% of the patients showed EAEC. These E. coli did not show any virulent factors in the PCR tests, except two that presented ast gen and was not pathogenic serotype. However, 5.1% had invasion in the HeLa cells can not considered EIEC in serological, biochemistry, biological and molecular tests. The sosotype of these strains did not present pathogen serotype / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular