Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2012-10-20T15:17:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Neste trabalho foram padronizadas as técnicas de produção de anticorpos monoclonais contra o vírus rábico e a reação em cadeia da polimerase utilizando somente um iniciador específico em condições de baixa estringência, com o objetivo de caracterizar o pseudogene de amostras de vírus rábico isoladas em Santa Catarina. Foram identificados vinte clones produtores de anticorpos antirábicos, mas apesar desta identificação, não foi possível obter um que se mantivesse estável. Problemas de contaminação da cultura também foram detectados o que impediu a manutenção dos clones e a produção de anticorpos, impossibilitando a caracterização antigênica. A caracterização do pseudogene viral foi realizada através da "low stringency single-specific primer - polimerase chain reaction" (LSSP-PCR). Para tanto, a transcrição reversa (RT) do RNA viral foi realizada utilizando-se os mesmos iniciadores específicos dirigidos para a amplificação via PCR do pseudogene viral (G+ e L-). Após a definição das condições ideais para a amplificação do pseudogene, foi padronizada a LSSP-PCR utilizando-se o iniciador G+, o qual apresentou o melhor padrão informativo para a análise de variabilidade deste gene. Um total de 12 amostras de campo isoladas de bovinos no Estado de Santa Catarina e uma amostra padrão de vírus rábico foram analisadas pela LSSP-PCR. A análise dos resultados obtidos pelo coeficiente de similaridade de Dice e unweighted pair group method analysis (UPGMA) revelou a existência de uma importante variabilidade de seqüência entre as amostras estudadas, mas não permitiu uma clara separação das amostras quanto a sua origem geográfica.

Dissertação (Mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-04-27T14:04:10Z No. of bitstreams: 1 2012_LarissaCamposAquino.pdf: 2748540 bytes, checksum: d9985f6e70c6ca9fa3875745e8b3c73c (MD5) / Approved for entry into archive by Leila Fernandes (leilabiblio@yahoo.com.br) on 2012-04-30T12:36:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_LarissaCamposAquino.pdf: 2748540 bytes, checksum: d9985f6e70c6ca9fa3875745e8b3c73c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-30T12:36:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_LarissaCamposAquino.pdf: 2748540 bytes, checksum: d9985f6e70c6ca9fa3875745e8b3c73c (MD5) / O vírus da leucemia felina (FeLV) é um retrovirus que acomete gatos domésticos e já foi relatado mundialmente. Apenas o FeLV-A é transmitido, e, uma vez instalado no hospedeiro origina os subtipos B, C e T por meio de mutações ou recombinações com sequências endógenas. A infecção pelo FeLV está associada a doenças degenerativas e proliferativas de acordo com o subtipo. Um teste molecular (PCR) foi adaptado para diagnosticar gatos FeLV positivos em 3 grupos de animais do Distrito Federal: gatos mantidos em um abrigo (G1), gatos atendidos em clínicas e/ou hospitais veterinários (G2) e gatos de uma região periurbana com acesso à rua (G3). Eles foram avaliados quanto aos parâmetros hematológicos, subtipos do FeLV e principais coinfecções associadas. Realizou-se a comparação da PCR utilizada com o ELISA comercial. Foram identificados 38% de animais FeLV no G1, 26,8% no G2 e nenhum gato com o retrovírus no G3. Não houve associação da presença do FeLV com a idade, sexo ou acesso à rua. Observou-se que gatos FeLV positivos têm mais chance de ter anemia, mas não houve associação com FIV, hemoplasmas ou T. gondii. As proporções entre animais FeLV-A e FeLV-AB foram aproximadamente as mesmas e não demonstraram diferenças hematológicas significativas. A PCR utilizada apresentou 91,3% de concordância com o ELISA comercial. Concluiu-se que a ocorrência da infecção pelo FeLV no DF variou de acordo com o grupo amostrado, contudo as altas frequências de G1 (IC: 23,1-53%) e G2 (IC: 19,3-34,2%) não diferiram entre si. A coinfecção por FIV ou hemoplasmas não intensificou as alterações hematológicas nos gatos FeLV positivos. Além disso, os subtipos mais isolados (A e AB) parecem exercer efeitos semelhantes nas células precursoras hematopoiéticas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Feline leukemia virus (FeLV) is a retrovirus that infects domestic cats and have been described worldwide. Subtype A is the only transmissible, and, once inside the host, it gives rise to 3 others subtypes: B, C and T by means of mutations or recombinations with endogenous sequences. Infection produced by FeLV is associated mainly with degenerative and proliferative diseases according to subtype. A molecular test (PCR) was tried to diagnose FeLV in 3 different groups of animals in the region of Distrito Federal, Brazil: cats from a shelter (G1), patients from veterinary clinics and/or hospitals (G2) andoutdoor-roaming cats from a periurban region (G3). They were analyzed according to hematological parameters, subtypes and main co-infections. A comparison was made between PCR and ELISA test. FeLV provirus was detected in 38% of cats from G1, 26,8% in G2 and none cats from G3 was FeLV positive. Factors as age, sex and lifestyle were not significantly associated with risk of FeLV. Cats with FeLVwere more prone to anemia, but there wasn't association with FIV, haemoplasmas or T. gondii. There wasn't significant difference between the number of cats with FeLV-A and FeLV-AB, nor was seen hematological differences between these two subtypes. The PCR agreed with ELISA in 91,3% of the results. We concluded that FeLV infection in the region of Distrito Federal fluctuate between the groups, although the high frequencies seen in G1 (IC: 23,1-53%) and G2 (IC: 19,3-34,2%) weren't statistically different.Besides that, co-infections by FIV or hemoplasms didn't augmented hematological changes in cats with FeLV. Furthermore, the subtypes most commonly seen (A and AB) seam to cause the same effect in hematological precursor cells.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Enfermagem, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-11-30T17:39:08Z No. of bitstreams: 1 2017_RegianeTigulinideSouzaJordão.pdf: 1597365 bytes, checksum: f81ff71d39bd971a50cae60fed3c0197 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-02-05T18:23:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_RegianeTigulinideSouzaJordão.pdf: 1597365 bytes, checksum: f81ff71d39bd971a50cae60fed3c0197 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-05T18:23:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_RegianeTigulinideSouzaJordão.pdf: 1597365 bytes, checksum: f81ff71d39bd971a50cae60fed3c0197 (MD5) Previous issue date: 2018-02-05 / A prevalência da infecção pelo papilomavírus humano (hpv), importante fator de risco para o desenvolvimento do câncer cervical em mulheres, varia de 5 a 30%. Atualmente, três tipos de vacina contra o hpv estão disponíveis: bivalente (bhpv), quadrivalente (qhpv) e nonavalente (9vhpv). No brasil, a vacina qhpv foi introduzida no programa nacional de imunizações em 2014, atingindo altas taxas de cobertura vacinal; no entanto, os casos de reações psicogênicas relatados após aplicação da vacina têm interferido incisivamente na tomada de decisão pelas famílias e adolescentes. Portanto, este estudo teve como objetivo identificar a prevalência de eventos adversos reportados após a aplicação das vacinas quadrivalente e nonavalente de hpv, em pessoas de 9 a 19 anos de idade. Trata-se de revisão sistemática registrada no prospero pelo identificador crd42016049301, cujas buscas foram realizadas nas bases de dados pubmed, cochrane central, web of science, scopus, lilacs, cinahl e literatura cinzenta, sem restrição de período e idioma. Os estudos foram selecionados pelo título e resumo e, após, pela leitura na íntegra, seguido pela coleta de dados, sempre por dois revisores independentes. O risco de viés nos estudos foi avaliado por meio do jbi critical appraisal checklist for studies reporting prevalence data e a qualidade da evidência por meio do sistema grade. Foram identificados 3417 estudos nas seis bases de dados e após a remoção de duplicatas restaram 2022. Estes foram analisados por título e resumo, dos quais 133 foram selecionados para leitura na íntegra. Ao final, 14 estudos compuseram a amostra desta revisão. A prevalência de eventos adversos (ea) relacionados à vacina qhpv nas meninas variou de 79,3% a 90,3%, dos quais os ea locais foram de 11% a 88,3% e os sistêmicos de 24,3% a 78,2%. Nos meninos a ocorrência de ea de forma geral para a qhpv foi de 79,2%, sendo os ea locais 74% e os sistêmicos 27,2%. A prevalência de eventos adversos relacionados à vacina 9vhpv nas meninas variou de 86,6% a 93%, dos quais a ocorrência de ea locais foi de 81,9% a 91,6% e os sistêmicos foi de 20,7% a 20,9%, enquanto nos meninos os ea gerais foram de 81%, 72,8% de registro de ea locais e 21,8% sistêmicos. A metanálise mostrou para os eventos elencados como críticos ou importantes, que a frequência de dor intensa no local da injeção foi de 2,9% (ic 95%: 2,4 - 3,4), de febre foi 11,5% (ic 95%: 7,23 – 16,49), de tromboembolismo venoso foi 0,007% (ic 95%: 0,000470 - 0,0227), de síncope foi 0,072% (ic 95%: 0,000515 - 0,313), de convulsão foi 0,00141% (ic 95%: 0,0000410 - 0,00662). A maioria dos estudos foi avaliado como moderado risco de viés. De forma geral, os eventos adversos identificados foram leves e autolimitados, não havendo evidências de relação causal entre a síndrome de guillain barré e tromboembolismo venoso e as vacinas analisadas. No entanto, é importante fortalecer a vigilância dos eventos adversos, especialmente os raros, na fase pós-comercialização. / The prevalence of human papillomavirus infection (HPV), an important risk factor to the development of cervical cancer, in women varies from 5 to 30%. Nowadays, there are three types of vaccine against the HPV available: bivalent (bHPV), quadrivalent (qHPV) and nonavalent (9vHPV). In Brazil, the qHPV vaccine was introduced during the National Immunization Program in 2014, reaching high rates of immunization coverture; nevertheless, the cases of psychogenic reactions reported after the administration of the vaccine have incisively interfered in the decision making of families and teenagers. Thus, the objective of this study was to identify the prevalence of adverse events reported after the administration of quadrivalent and nonavalent HPV vaccines in people ranging from 9 to 19 years old. It was a systematic review, recorded in CRD42016049301 by PROSPERO, of searches performed in PubMed, Cochrane CENTRAL, Web of Science, Scopus, LILACS, CINAHL and gray literature databases, with no restriction related to publication date or language. The studies were selected by title and abstract and, afterwards, by a thorough reading, followed by the data collection, performed by two independent reviewers. The risk of bias in the study was evaluated by applying the JBI Critical Appraisal Checklist for Studies Reporting Prevalence Data and the quality of the evidence by using the GRADE system. Results: 3,417 studies were identified on the six databases and after removing the duplications 2,022 remained. These were analyzed by title and abstract, and 133 were selected for complete reading. In the end, 14 studies composed the sample of this review. The prevalence of adverse events (EA) related to the qHPV vaccine in girls varied from 79.3% to 90.3%, from which the local EA ranged from 11% to 88.3% and the systemic EA ranged from 24.3 to 78.2%. The qHPV EA occurrence in boys was broadly 79.2%, with 74% local EA and 27.2% systemic EA. The prevalence of adverse events related to the 9vHPV vaccine in girls ranged from 86.6% to 93%, from which 81.9% to 91.6% were local EA and 20.7% to 20.9% were systemic EA, whereas in boys the general EA was 81%, with 72.8% local EA and 21.8% systemic EA. The meta-analysis demonstrated that for the events characterized as critical or important, the frequency of intense pain on the spot the shot was applied was 2.92% (CI 95%: 2.4 - 3.4), of fever was 11.46% (CI 95%: 7.23 - 16.49), of venous thromboembolism was 0.007% (CI 95%: 0.000470 - 0.0227), of syncope was 0.072% (CI 95%: 0.000515 - 0.313), of convulsion was 0.00141% (CI 95%: 0.0000410 - 0.00662). Most studies were evaluated as presenting moderate risk of bias. In general, the adverse events identified were mild intensity and self limited, with no evidence of causal relationship between the Guillain-Barré Syndrome and the venous thromboembolism and the analyzed vaccines. However, it is important to strengthen the vigilance over adverse events, especially the rare ones, in the post-commercialization phase. / La prevalencia de la infección por el papilomavirus humano (HPV), importante factor de riesgo para el desarrollo del cáncer cervical, en mujeres varía del 5 al 30%. Actualmente, tres tipos de vacuna contra el HPV están disponibles: bivalente (bHPV), cuadrivalente (qHPV) y nonavalente (9vHPV). En Brasil, la vacuna qHPV fue introducida en el Programa Nacional de Inmunizaciones en 2014, alcanzando altas tasas de cobertura de vacunación; sin embargo, los casos de reacciones psicogénicas informados después de la aplicación de la vacuna han interferido definitivamente en la toma de decisión de las familias y de los jóvenes. Por lo tanto, este estudio tuvo como objetivo identificar la prevalencia de eventos adversos informados después de la aplicación de las vacunas cuadrivalente y nonavalente de HPV, en personas con 9 a 19 años de edad. Se trata de una revisión sistemática grabado en CRD42016049301 por PROSPERO, cuyas búsquedas fueron hechas en las bases de datos PubMed, Cochrane CENTRAL, Web of Science, Scopus, LILACS, CINAHL y literatura gris, sin restricción de período de publicación y lengua. Los estudios fueron seleccionados por título y resumen y, después, por la lectura completa, seguido por la compilación de datos, siempre por dos revisores independientes. El riesgo de bies en los estudios fue evaluado por medio del JBI Critical Appraisal Checklist for Studies Reporting Prevalence Data y la calidad de la evidencia por medio del sistema GRADE. Fueron identificados 3417 estudios en las seis bases de datos y después de la remoción de las duplicidades restaron 2022. Estos fueron analizados por título y resumen, de los cuales 133 fueron seleccionados para la lectura completa. Al final, 14 estudios compusieron la muestra de esta revisión. La prevalencia de eventos adversos (EA) relacionados con la vacuna qHPV en niñas ha variado del 79,3% al 90,3%, de los cuales los EA locales variaron del 11% al 88,3% y los sistémicos del 24,3% al 78,2%. En niños la ocurrencia de EA de manera general para la qHPV fue 79,2%; los EA locales fueron 74% y los sistémicos 27,2%. La prevalencia de eventos adversos relacionados con la vacuna 9vHPV en niñas ha variado del 86,6% al 93%, de los cuales la ocurrencia de EA locales fue del 81,9% al 91,6% y los sistémicos fue del 20,7% al 20,9%, mientras en los niños los EA generales fueron del 81%, 72,8% de registros de EA locales y 21,8% sistémicos. La metaanálisis demostró para los eventos clasificados como críticos o importantes, que la frecuencia de dolor intenso en el local de la inyección fue del 2,92% (IC 95%: 2,4 -3,4), de fiebre fue del 11,46% (CI 95%: 7,23 - 16,49), de tromboembolismo venoso fue del 0,007% (IC 95%: 0,000470 - 0,0227), de síncope fue 0,072% (IC 95%: 0,000515 - 0,313), de convulsión fue del 0,00141% (CI 95%:0,0000410 - 0,00662). La mayoría de los estudios fue evaluado como teniendo riesgo moderado de bies. De manera general, los eventos adversos identificados fueron ligeros y auto limitados, no existiendo evidencias de relación causal entre la Síndrome de Guillain Barré y el tromboembolismo venoso y las vacunas analizadas. Sin embargo, es importante fortalecer la vigilancia de los eventos adversos, especialmente los raros, en la fase de post-comercialización.

O vírus da anemia das galinhas – CAV (chicken anemia virus) está presente em praticamente todos os países com produção avícola investigados, inclusive no Brasil. O CAV causa a doença chamada de anemia infecciosa das galinhas em aves jovens, que se caracteriza por anemia, aplasia de medula óssea, retardo no crescimento, mortalidade variável (2 a 20%), atrofia de órgãos linfóides e imunodepressão. O controle da anemia infecciosa das galinhas é baseado na transferência de imunidade passiva das matrizes à progênie. A transferência de anticorpos maternos via ovo em nível suficiente é uma forma de prevenir a transmissão vertical do vírus, reduzindo assim a ocorrência de surtos da doença. Este trabalho teve como objetivo comparar o desempenho entre frangos nascidos positivos e negativos para a presença de anticorpos contra o CAV. Para isso, foram utilizados dois lotes de matrizes pesadas, sendo um vacinado e o outro não. Com a progênie obtida dessas matrizes de ambos os lotes, foram constituídos três tratamentos com 50 fêmeas e 50 machos cada: T1 - pintos oriundos de matrizes vacinadas com títulos protetores; T2 - pintos oriundos de matrizes não vacinadas com títulos médios e; T3 - pintos oriundos de matrizes não vacinadas e negativas ou com títulos baixos. Todos os tratamentos permaneceram em regime de criação intensiva usual por 47 dias em 5 propriedades diferentes, portanto o experimento teve 5 repetições. Os dados analisados foram o peso inicial e final, conversão alimentar e mortalidade. Como resultado, foi observado que não houve diferença significativa (p>0,05) no peso final entre os tratamentos com relação as fêmeas. Já, nos machos, os frangos negativos (T3) foram significativamente (p<0,05) mais pesados que os frangos positivos (T1 e T2). Não houve diferença significativa (p>0,05) entre os tratamentos em relação à mortalidade e a conversão alimentar. A análise do soro e histologia do timo determinaram a não ocorrência do desafio durante o período de criação dos frangos. A vacinação das matrizes contra o CAV não gerou títulos de anticorpos superiores aos obtidos nas matrizes não vacinadas e infectadas naturalmente. Este estudo indicou que a presença de anticorpos contra o CAV em frangos de corte, seja através da vacinação ou da infecção natural das matrizes, não gerou uma progênie com melhor desempenho nas condições de criação testadas.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós Graduação em Biologia Molecular, 2015. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-06-29T14:06:39Z No. of bitstreams: 1 2015_MiguelSouzaAndrade.pdf: 4324801 bytes, checksum: 097b6845a2ae33f89b2fdc7d21c346a8 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2016-07-30T12:51:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_MiguelSouzaAndrade.pdf: 4324801 bytes, checksum: 097b6845a2ae33f89b2fdc7d21c346a8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-30T12:51:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_MiguelSouzaAndrade.pdf: 4324801 bytes, checksum: 097b6845a2ae33f89b2fdc7d21c346a8 (MD5) / Os baculovirus são um grupo de vírus de inseto com genoma grande de DNA fita dupla, cuja infecção primária é desencadeada por um vírion envelopado denominado vírus derivado da oclusão (do inglês: occlusion derived virus - ODV) embebido em um corpo de oclusão (do inglês, occclusion body- OB) formado por uma matriz proteica cristalina. Cada vírion pode conter um (SNPV) ou mais nucleocapsídeos (MNPV) por envelope, dependendo da espécie viral. A base genética deste fenótipo não foi identificada e há correlação deste fenótipo com a filogenia de baculovirus não foi estabelecida. Contudo, alguns baculovirus intimamente relacionados, como o BmNPV, BomaNPV-S2 e AcMNPV possuem fenótipos discordantes e podem ajudar a identificar possíveis genes responsáveis pelo múltiplo envelopamento. Portanto, nós comparamos os genomas desses vírus e identificamos um único gene presente em BomaNPV e AcMNPV e ausente em BmNPV. Esse gene é a diferença mais significativa entre esses genomas. Para avaliar se esse gene estava relacionado com o fenótipo MNPV nós construímos três baculovirus recombinantes: vAc-polh-p94-del (p94 deletado), vAc-polh-p94-ha-rep (p94 reparado com uma tag -HA) e vAc-polh (controle). Nós mostramos que a P94 é detectada a 6 h.p.i no citoplasma de células infectadas com acumulação máxima a 24 h.p.i.. A deleção completa do gene p94 no genoma do AcMNPV causou um retardo na replicação do DNA, na produção de BV, na expressão de IE1 e, a produção de OBs é diminuída. Entretanto, o fenótipo MNPV não foi alterado. Desta forma, o gene p94 de AcMNPV não é um gene essencial para replicação e estabelecimento da infecção viral e sua aquisição no genoma do AcMNPV provavelmente proporcionou ao vírus uma vantagem seletiva. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The baculoviruses are a group of insect viruses with large dsDNA genomes, and their primary infection is triggered by rod-shaped enveloped virions (ODV) embedded in a crystalline protein matrix. Each virion may contain single (SNPV) or multiple nucleocapsids (MNPV) within an envelope, depending on the viral species. The genetic basis of this phenotype has not been identified and it does not seem to be correlated with baculovirus phylogeny. However, some closely related baculoviruses, such as BmNPV, BomaNPV and AcMNPV, have discordant phenotypes and may help to identify candidate genes. Therefore, we compared the genome of these viruses and found a unique gene (p94) that was present in BomaNPV and AcMNPV and was absent in BmNPV. This gene was the most significant difference among the BmNPV and the BomaNPN and AcMNPV genomes. To analyze whether this gene was related to the MNPV phenotype we constructed three recombinant baculoviruses: vAc-pol-p94-del (p94 disrupted), vAc-pol-p94-ha-rep (p94 repaired with -HA tag) and vAc-pol (control). We found that the P94 was detected at 6 h post-infection (p.i.) in the cytoplasm of infected cells with maximum accumulation at 24 h p.i. The lack of complete p94 gene (including the exclusion of the origin of DNA replication located there) in the AcMNPV genome resulted in a delay in DNA replication, BV production and IE1 expression. OB production in vitro was also decreased. Moreover, the ODV nucleocapsid envelopment was not chanced. Therefore, the p94 gene of AcMNPV is not an essential gene for viral DNA replication and establishment of viral infection. Its acquisition in some baculoviruses genomes might give a selective advantage for the virus.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Economia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2016. / Submitted by Patrícia Nunes da Silva (patricia@bce.unb.br) on 2018-07-23T22:52:13Z No. of bitstreams: 1 2016_AnaLourdesArraisdeAlencarMota.pdf: 1804102 bytes, checksum: c9ba2ab22b4637c2f7dcf9e7ef1f8507 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva (patricia@bce.unb.br) on 2018-07-23T22:52:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_AnaLourdesArraisdeAlencarMota.pdf: 1804102 bytes, checksum: c9ba2ab22b4637c2f7dcf9e7ef1f8507 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-23T22:52:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_AnaLourdesArraisdeAlencarMota.pdf: 1804102 bytes, checksum: c9ba2ab22b4637c2f7dcf9e7ef1f8507 (MD5) Previous issue date: 2018-07-23 / O Brasil é o quarto maior produtor e exportador de carne suína do mundo. A maioria das doenças suínas listadas pela OIE é exótica ou já foi erradicada do país. O Programa Nacional de Sanidade dos Suídeos concentra, então, seus esforços em ações de vigilância para a peste suína clássica (PSC), em razão do impacto comercial desta enfermidade. Hoje, a zona livre do país abrange áreas de 16 unidades federativas, recentemente reconhecidas internacionalmente como livres de PSC. As atividades que compõem o sistema de vigilância ativa da doença são: (1) o monitoramento sorológico semestral das granjas de reprodutores; (2) o acompanhamento sorológico das granjas comerciais de suínos; (3) a avaliação sorológica de reprodutores de descarte em abatedouros; e (4) a realização de inquéritos bianuais em criatórios de suínos. O atendimento a notificações de suspeita da doença destaca-se como a principal atividade da vigilância passiva. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método de avaliação quantitativo que comprovasse a eficácia das medidas previstas para a demonstração de ausência da doença e manutenção do status sanitário do país, utilizando inicialmente os dados dos estados do Rio Grande do Sul (RS) e de Santa Catarina (SC). Estes estados concentram cerca de 35% da população comercial e 70% da exportação de suínos do país e foram os primeiros a executar e registrar todas as atividades estabelecidas pelo sistema de vigilância da peste suína clássica na zona livre do Brasil. O modelo estocástico foi construído com base na metodologia de descrição por árvores de cenários, usando os dados do sistema de vigilância sorológica aplicada à população comercial de suínos, entre os anos de 2013 e 2015. Foram coletados dados primários sobre medidas de biosseguridade nas várias tipologias de produção da cadeia produtiva de suínos, com vista a calcular riscos relativos de introdução do vírus nas várias etapas da produção. Os atributos priorizados e quantificados foram a sensibilidade e o valor preditivo negativo (VPN) do sistema de vigilância. Os resultados indicaram sensibilidades anuais médias de até 91,1% e 98,6%, respectivamente para o RS e SC. Ao final dos três anos alcançou-se um VPN superior a 99,5%, supondo uma prevalência de rebanho de 1%, um risco de introdução da doença durante o ano nesta frequência especificada também de 1% e uma probabilidade prévia de estar livre da doença desconhecida. Obteve-se um nível de confiança alto na certificação de ambos os estados e pôde-se demonstrar a eficácia das medidas implementadas atualmente pelo RS e SC. Na análise de impacto dos componentes do sistema, os dados de vigilância sorológica em reprodutores de descarte nos abatedouros foram os que mais contribuíram para a sensibilidade final. As demais atividades executadas abrangem atualmente um número menor de animais ou são dirigidas a propriedades de baixo risco, o que limita o impacto para a vigilância anual da PSC em toda a população. Os resultados obtidos fornecem subsídios importantes para que as autoridades sanitárias possam otimizar a relação custo-eficácia do sistema de vigilância da PSC. / Brazil is the fourth pork producer and exporter in the world. Most of the OIE listed diseases are exotic or have been eradicated from the country. The National Program for Swine Diseases focuses on surveillance for Classical Swine Fever (CSF), due to its impact on trade. Currently, the free zone in Brazil comprises 15 states and the Federal District, and has been recently recognized by the OIE as CSF free. The active surveillance system has the following components: (1) serological monitoring of accredited breeding farms that sell genetic stock, twice a year; (2) serological surveillance of commercial farms triggered by mortality of piglets above a certain threshold or presence of hemorrhagic lesions; (3) serological monitoring of culled breeding stock at the abattoir; (4) sero-surveys of non-commercial backyard holdings every two years. The response to the notification of disease suspects stands out as the main passive surveillance activity. The present work aims at developing a quantitative analytical method of evaluation of the effectiveness of implemented measures for demonstration of free zones and maintenance of the country’s health status, initially using data from states of Rio Grande do Sul (RS) and Santa Catarina (SC). These states hold about 35% of the population and 70% of the Brazilian swine meat exports and were the first ones to perform and record all activities established by the Classical Swine Fever Surveillance System in the country’s free zone. The stochastic model followed the methodology of scenarios trees and used data from the serological surveillance system applied to the commercial pig population in the states of RS and SC, between the years 2013 and 2015. In addition, we collected primary data on biosecurity measures applied by the main types of commercial swine farms to derive relative risks of introducing the virus at the various stages of the production chain. Sensitivity and negative predictive value (NPV) of the surveillance system were the assessed attributes. Results indicated an average annual sensitivity of up to 91.1% and 98.6%, respectively for RS and SC. After three years, each state reached a NPV of up to 99,5%, assuming a 1% risk of disease introduction during a year and given a herd prevalence of 1% and an unknown prior probability of disease freedom. The CSF active surveillance system is effective as it is and allows for a high level of confidence in the absence of disease. The serological monitoring of culled breeding stock at the abattoir was the component that contributed more to the final sensitivity. The other components are currently performed in fewer animals or are applied to low-risk properties, resulting in lower impact to annual surveillance of CSF in the entire swine population of RS and SC.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-30Bitstream added on 2014-06-13T20:35:42Z : No. of bitstreams: 1 medeiros_jar_me_botfm.pdf: 769404 bytes, checksum: f2905508191b9ec700953a0b625dfb66 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Not available

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2013 / Submitted by Cristiane Mendes (mcristianem@gmail.com) on 2014-11-20T15:57:11Z No. of bitstreams: 1 2013_AdrianaRibeiroSilvaBatista.pdf: 1047867 bytes, checksum: 12e3ae6bf0f048123f1ab86e90f87883 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-11-25T11:23:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_AdrianaRibeiroSilvaBatista.pdf: 1047867 bytes, checksum: 12e3ae6bf0f048123f1ab86e90f87883 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-25T11:23:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_AdrianaRibeiroSilvaBatista.pdf: 1047867 bytes, checksum: 12e3ae6bf0f048123f1ab86e90f87883 (MD5) / Pepper ringspot virus (PepRSV) é um tobravírus, até o momento, detectado somente no Brasil, que destaca-se dentro do gênero por apresentar curiosa associação entre as partículas virais e mitocôndrias do hospedeiro. Os poucos avanços descritos desde a década de 60 aos dias atuais não foram suficientes para demonstrar o mecanismo físico-químico que explica essa relação. Na tentativa de ampliar o campo de estudo em PepRSV, buscou-se contruir um cDNA infeccioso visando o desenvolvimento de uma ferramenta capaz de expressar proteínas heterólogas ou induzir o silenciamento gênico: “virus induced gene silencing” (VIGS). Essa tecnologia visa a mesma aplicabilidade do cDNA infeccioso de Tobacco rattle virus (TRV), que já apresentou resultados significativos na indução de VIGS, contudo não pode ser utilizado livremente no Brasil, pois esse vírus é conhecido como praga quarentenária no País. Por essa razão, o uso de TRV em território brasileiro é restrito, principalmente pela dificuldade na obtenção de uma autorização de uso. O PepRSV apresenta genoma bipartido de RNA fita simples. Durante a obtenção do clone desse vírus a ser utilizado como ferramenta molecular, os dois segmentos completos do RNA genômico foram clonados em vetores plasmidiais comerciais (pGEM-T Easy; pCR4) e modificados, em seguida, com a adição do promotor 35S de Cauliflower mosaic virus (CaMV) na extremidade 5' e uma sequência de ribozima na região 3' do genoma de cada segmento. Além da construção dessa ferramenta, propõe-se avaliar a variabilidade do RNA2 de PepRSV, estudos que, atualmente, está restrito a um único isolado. Dois isolados de PepRSV (Pivo4 e Lavrinha) obtidos em campos de tomateiro no município de Luziânia do Estado de Goiás foram utilizados nesse estudo. O RNA2, segmento genômico destes isolados foi sequenciado. A análise filogenética baseada na comparação de sequências de aminoácidos (aa) da capa proteica dos três isolados (Pivo4, Lavrinha e CAM) de PepRSV não separou Pivo4 e Lavrinha do isolado CAM, pois a inferência do algoritmo correspondente bootstrap foi irrelevante. Os isolados obtidos foram semelhantes ao isolado CAM e apresentaram ORF para capa proteica (CP), mas não apresentaram homólogos das ORFs 2a e 2b presentes em isolados da espécie tipo TRV que pertence ao mesmo gênero. A comparação entre os três isolados sugere a presença de uma inserção a downstream a ORF do CP nos isolados Pivo4 e Lavrinha em relação ao isolado CAM e também uma recombinação na região 3' UTR entre as moléculas de RNA2 e RNA1 dessesisolados. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Pepper ringspot virus is a Tobravirus until now detected only in Brazil. It is a peculiar virus due to the occurrence of a curious association between viral particles and their host mitochondria. From the 60's to the present day, no studies have been able to demonstrate the physicochemical mechanism underlying this relationship. In an attempt to broaden the studies on PepRSV, it was planned to construct na infectious cDNA clone to be used as a viral vector for expression of heterologous proteins or a virus induced gene silencing (VIGS) vector. It is proposed the construction of an infectious cDNA of PepRSV with a similar applicability of the Tobacco rattle virus (TRV) vector. It is already shown that this vector is useful in the induction of VIGS. The TRV vector cannot be used in Brazil, because it is a quarantine pest. Hence the use of TRV in Brazil is extremely limited, mainly due to the difficulty of obtaining a permission to use in the Brazilian territory. The virus has a bipartite genome of single strand RNA components. During the construction development, the two complete segments of the genome of PepRSV were cloned in plasmid vectors (pGEM-T Easy; pCR4) and modified to contain a promoter 35 of Cauliflower mosaic virus in the 5' end and a ribozyme sequence in the 3' region of the genome of each segment. Additionally to this construction for infectious clones, we propose to assess the variability of the PepRSV RNA2, which was restricted to a single isolate. Two PepRSV isolates (Pivo4 and Lavrinha) obtained in tomato fields in the county of Luziânia, Goiás State. The genome segment (RNA 2) of these isolates was sequenced. Phylogenetic analysis based on the amino acid sequences of coat protein (CP) among three isolates did not separate those isolates in different ramifications due to lower bootstrap value. The isolates obtained were in agreement as CAM isolate for coat protein (CP) ORF feature, but do not showed homologous ORFs2a and 2b present in TRV isolates of the Tobravirus type species. By sequence comparison, Pivo4 and Lavrinha isolates had presentedlarge nucleotides insertion downstream of CP ORF as opposed to CAM isolate suggesting a recombination in 3'UTR between RNA1 and RNA2 of each isolate.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-04-27T18:22:43Z No. of bitstreams: 1 2015_ClaudioHenriqueGonçalvesBarbosa.pdf: 1097163 bytes, checksum: 58d81c1ad2e4f96fcfe4368a738328db (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-04-28T14:53:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_ClaudioHenriqueGonçalvesBarbosa.pdf: 1097163 bytes, checksum: 58d81c1ad2e4f96fcfe4368a738328db (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-28T14:53:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_ClaudioHenriqueGonçalvesBarbosa.pdf: 1097163 bytes, checksum: 58d81c1ad2e4f96fcfe4368a738328db (MD5) / O vírus Vaccina (VACV) é o agente etiológico da vaccínia bovina, doença zoonótica re-emergente e de grande importância socioeconômica. Raros são os relatos de VACV em equinos no Brasil, um dos mais recentes data de 2008 no município de Pelotas- RS, no qual duas cepas, Pelotas Vírus 1 e Pelotas Vírus 2 (P1V e P2V), acometeram 14 animais. Essas cepas foram inoculadas em equinos com o objetivo de verificar se há o desenvolvimento da infecção, assim como de lesões macro e microscópicas. Para tanto, seis equinos adultos e sadios foram inoculados via escarificação do plano nasolabial e foram acompanhados durante 28 dias pós inoculação (d.p.i.). Os animais desenvolveram lesões macroscópicas compatíveis com aquelas causadas pelo vírus Vaccinia no período compreendido entre dois e oito d.p.i.; análises dos fragmentos de tecidos coletados apresentaram acantose, degeneração balonosa de queratinócitos, úlceras e infecção bacteriana secundária. Inclusões eosinofílicas intracitoplasmáticas foram infrequentemente observadas em queratinócitos degenerados ao redor das áreas de necrose. Apenas um animal apresentou excreção viral nos locais de inoculação confirmada via PCR. Os resultados obtidos neste estudo demonstram que a inoculação das cepas P1V e P2V resultam em infecção e no desenvolvimento, ainda que brandas, de lesões macro e microscópicas. Estes achados sugerem que equinos apresentam baixa susceptibilidade ao VACV, especialmente às cepas P1V e P2V, e possivelmente representam baixo potencial transmissor do vírus para outras espécies. Portanto, estudos adicionais são necessários para avaliar o potencial de equinos na disseminação e/ou manutenção destas cepas do vírus Vaccinia em equinos, bovinos e no homem. / Vaccinia virus (VACV) is the etiologic agent of bovine vaccinia, a zoonotic re-emerging disease of high socioeconomic impact. There are few reports of VACV in horses in Brazil. The most recent was described in the city of Pelotas in 2008, where two strains, Pelotas Virus 1 and Pelotas Virus 2 (P1V and P2V), infected 14 animals. These strains were inoculated in horses in order to verify whether experimental inoculation results in infection, and gross and microscopic lesion development. Therefore, 6 adult healthy horses were inoculated via scarification of nasolabial surface. These animals were daily examined for 28 days post inoculation (d.p.i.). Gross lesions consistent with those caused by vaccinia virus were observed between 2 and 8 dpi. Microscopically there were epidermal hyperplasia (acanthosis), ballooning degeneration of the stratum spinosum, necrosis and loss of the epidermis, with intralesional bacteria. Moderate infiltration of neutrophils, macrophages and lymphocytes were observed in the superficial dermis. Intracytoplasmic eosinophilic inclusions were infrequently observed in degenerate keratinocytes from adjacent necrotic areas. Only one animal had viral excretion from the inoculation site, confirmed by PCR. The results of this study demonstrate that the inoculation of P1V and P2V strains result in infection, although mild, with macro and microscopic lesion development. These findings suggest that horses have low susceptibility to VACV, especially to P1V and P2V strains, and possibly represent low potential to transmit the virus to other species, especially dairy cattle. Therefore, additional studies are needed to evaluate the potential of horses in the dissemination and/or maintenance of these strains of vaccinia virus in cattle, horses, and in humans.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2013. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2013-06-19T13:34:03Z No. of bitstreams: 0 / Rejected by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br), reason: on 2013-06-19T13:34:41Z (GMT) / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2013-06-19T13:39:53Z No. of bitstreams: 1 2013_DanielaDamascenoXavierFerro_Parcial.pdf: 1954850 bytes, checksum: 6f8527c2a0e9d045508e774284edb0f7 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-08-01T15:54:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_DanielaDamascenoXavierFerro_Parcial.pdf: 1954850 bytes, checksum: 6f8527c2a0e9d045508e774284edb0f7 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-01T15:54:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_DanielaDamascenoXavierFerro_Parcial.pdf: 1954850 bytes, checksum: 6f8527c2a0e9d045508e774284edb0f7 (MD5) / O tomateiro (Solanum lycopersicum L.) é uma das hortaliças mais importantes no Brasil, sendo também uma das culturas que mais sofrem danos pelo ataque de diversos patógenos, com especial destaque para as diferentes espécies do gênero Begomovirus (família Geminiviridae). Um dos métodos de controle mais promissores tem sido o uso de cultivares contendo genes de resistência. O locus dominante Ty-1 (introgredido da espécie selvagem S. chilense) tem sido a principal fonte de resistência empregada nos programas de melhoramento genético no mundo. Acessos e linhagens contendo o locus Ty-1 apresentam resistência/tolerância a begomovírus monopartidos do complexo do Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) e para alguns vírus do complexo de espécies de genoma bipartido presente no Brasil, incluindo o Tomato severe rugose virus (ToSRV). O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito na expressão fenotípica da resistência em tomateiros com distintas dosagens/configurações alélicas do locus Ty-1 (homozigotas dominantes, heterozigotas e homozigotas recessivas) após inoculação com um isolado de ToSRV (Capítulo 2) e identificar em duas populações de mapeamento marcadores RAPD ( Random Amplified Polymorphic ) ( Sequence Characterized Amplified Region ) com ampla utilização em sistemas de seleção assistida de diferentes eventos de introgressão do locus Ty-1 (Capítulo 3). As notas de severidade atribuídas às plantas que continham o locus dominante Ty-1 em dupla dosagem (homozigotas resistentes) foram significativamente mais baixas do que as que continham apenas uma cópia do locus (heterozigotas). Por sua vez, plantas heterozigotas apresentaram notas mais baixas que as plantas duplo-recessivas (ty-1/ty-1). Os resultados indicam aos programas de melhoramento do tomateiro que híbridos com uma melhor expressão fenotípica da tolerância/resistência ao ToSRV devem, sempre que possível, apresentar o alelo dominante Ty-1 em homozigose. No Capítulo 3, seis primers RAPD foram selecionados gerando polimorfismos para a região contendo o locus Ty-1 exclusivamente para população #1; quatorze foram exclusivamente polimórficos na população #2 e nove detectaram polimorfismos nas duas populações. Um marcador SCAR codominante (heteroduplex) foi gerado a partir do marcador RAPD OPC-19. A análise de sequência e sua ancoragem no genoma do tomateiro confirmaram que esse marcador está localizado na mesma região do locus Ty-1 no cromossomo 6, recomendando o seu uso em sistemas de seleção assistida. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The tomato (Solanum lycopersicum L.) is one of the most important vegetable crops in Brazil and it is also the one that suffer the most with the attack of many pathogens, especially virus species from the genus Begomovirus (Geminiviridae family). The most promising control strategy has been the employment of cultivars with resistance/tolerance genes to this group of pathogens. The dominant locus Ty-1 (introgressed from the wild species S. chilense) has been one of the most important sources of resistance in tomato breeding programs throughout the world. Accessions and inbred lines carrying this locus display high levels of resistance to monopartite begomovirus species of the Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) complex and also against some viruses of the bipartite species complex from Brazil, including Tomato severe rugose virus (ToSRV). The objectives of the present work were to evaluate the effect on the phenotypic expression after inoculation with one ToSRV isolate in tomato plants carrying distinct dosages/allelic states of the locus Ty-1 (homozygous resistant, heterozygous, and homozygous recessive) (Chapter 2) and to identify in two mapping populations novel and robust RAPD ( Random Amplified Polymorphic DNA ) ( Sequence Characterized Amplified Region ) Ty-1 that would be suitable for employment in distinct assisted-selection programs (Chapter 3). The group of plants with double dominant locus dosage (homozygous resistant) had a disease grade significantly lower than that of heterozygous plants in both evaluations. Heterozygous plants had also superior performance when compared with plants displaying double recessive locus dosage (ty-1/ty-1). Our results indicate to breeding programs that F1 hybrids should have, whenever possible, both parental lines with the Ty-1 locus in homozygous condition in order to have the best phenotypic expression of tolerance/resistance against ToSRV isolates. In Chapter 3, six RAPD primers were selected due to the presence of polymorphic amplicons for the genomic region encompassing the locus Ty-1 exclusively for population #1; fourteen primers were able to detect polymorphic amplicons exclusively in population #2 and nine were able to detect polymorphic markers in both populations. One SCAR amplicon (derived from RAPD OPC-19) generated a marker with a peculiar heteroduplex and codominant pattern. The sequence analysis of the SCAR allowed us to anchor this marker in the physical map that corresponds iv to a region where the Ty-1 locus resides on tomato chromosome 6. Therefore, the use of this marker can be also recommended for employment in marker-assisted selection systems.