Orientador: Pablo Agustin Vargas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:21:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leon_JorgeEsquiche_M.pdf: 9408701 bytes, checksum: 4b5f37cf9e7b38e1a5149986ad2c3936 (MD5) Previous issue date: 2004 / Mestrado

Orientador: Maria Silvia Viccari Gatti / Dissertação (Mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T16:42:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Haga_IsmarRocha_M.pdf: 5409533 bytes, checksum: e14ff0f2cbe7ea6708538c1ae851ad5b (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: O picobirnavírus (PBV) é um novo vírus, descritos em fezes de humanos, ratos, suínos, cobaias, aves e coelhos. No presente trabalho, é relatada a primeira identificação, através de eletroforese em gel de poliacrilamida (EGP A), de picobirnavírus em fezes de um animal silvestre mantido em cativeiro, o tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla). Este fato sugere a existência de possíveis novos hospedeiros para o PBV na natureza. Também foram implementados e comparados diferentes métodos de concentração e purificação virais a partir de suspensões fecais de diferentes origens, buscando a obtenção de partículas virais purificadas para posteriores estudos de sua estrutura. Quanto aos métodos de concentração, foram usadas a adição de cloreto de cálcio (CaCI2), a adição de polietilenoglicol (PEG) e cloreto de sódio (NaCl) e a ultracentrifugação em colchão de sacarose, método este que apresentou os melhores resultados. Em relação aos processos de purificação, foram testadas soluções de sacarose, tartarato (ácido tartárico, sal dipotássico), cloreto de césio (CsCI) e cloreto de rubídio (RbCI). A utilização do cloreto de rubídio (RbCI) mostrou-se uma alternativa viável à utilização do cloreto de césio (CsCI), amplamente difundido como protocolo de purificação viral, indicando que soluções de RbCI podem ser usadas como protocolos alternativos de purificação do PBV. Foi ainda implementado o primeiro teste imunoenzimático para detecção de picobirnavírus em amostras fecais de diferentes origens, usando membranas de nitrocelulose como fase sólida. Foram observados resultados positivos nas amostras fecais das três espécies (ratos, suínos e tamanduásbandeira), o que pode indicar que os picobirnavírus que infectam estes animais podem possuir antígenos comuns. O teste pode ser utilizado como triagem de amostras em rotina diagnóstica, ao lado da eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA) como teste confirmatório. Esta é a primeira descrição de um ensaio imunoenzimático para detecção do PBV em amostras fecais / Abstract: A novel virus tentatively named picobirnavirus (PBV) has been described in faeces of several species of vertebrates (humans, rats, guinea pigs, pigs, rabbits and chickens). Examination by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) of faecal specimens of giant anteaters (Myrmecophaga tridactyla) kept in captivity revealed the presence of the two equimolar bands resembling those of the picobirnaviruses. This is the first report of picobirnaviruses in faeces of a wild animal in captivity, suggesting that there might be other natural PBV hosts. Different methods for virus concentration were tested: addition of calcium chloride (CaCI2), addition of polyethylene glycol (PEG) and sodium chloride (NaCl) and centrifugation through sucrose cushion, the method that provided the most reliable results. Cesium chloride (CsCI) solutions have been widely used for PBV purification protocols. Alternative protocols for density gradient centrifugation (rubidium chloride, sucrose and potassium tartrate) were tested. The results obtained by using rubidium chloride (RbCI) were compatible with those previously reported for CsCI solutions, indicating that RbCI solutions may be used as an alternative protocol for virus purification, not only for picobirnaviruses but for other viruses as well. An enzyme immunoassay using nitrocellulose membranes is described for the detection of picobirnaviruses in faeces from different origins. In this study, positive results were detected in faecal samples from three different animaIs (rats, pigs and giant anteaters), suggesting that viruses identified in these animaIs might share common antigens. The test characteristics indicate that it can be used as a screening test in routine diagnosis, along with a confirmatory polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) test. This is the first report of such an assay used to detect this new, and yet little known, virus in faecal specimens / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Antonio Fernando Pestana de Castro, Masaio Mizuno Ishizuka / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T20:00:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vaz_JulianadoAmaralMoreiraConforti_M.pdf: 3806128 bytes, checksum: 794d821727fd5d6ede02f208771d91e2 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Com a finalidade de se avaliar a eficácia das vacinas anti-rábicas de uso animal no Brasil de 1988 a 1996, foram examinadas 2442 partidas de vacinas, sendo 891 atenuadas e 1551 inativadas. Dentre as últimas, 1441 eram inativadas de origem nacional. Foram realizados testes de potência, inocuidade e esterilidade. Verificou-se que, no período estudado, 93,4 % (1346 partidas) das vacinas inativadas nacionais e 98,2 % (108 partidas) das inativadas importadas foram aprovadas. Ao serem avaliadas através do cálculo dos Limites de Confiança dos percentuais de aprovação, constatou-se que não houve diferença estatisticamente significante entre os percentuais de aprovação, apresentando homogeneidade no decorrer do tempo. Com relação às vacinas atenuadas, houve 92,1 % de aprovação, de 1988 a 1996, ou seja, foram aprovadas 821 partidas de vacinas. Comparando-se os Limites de Confiança, verificou-se que houve diferença estatisticamente significante no decorrer do tempo. Ao se comparar a vacina inativada importada com a inativada e atenuada nacionais, verificou-se que houve diferença estatisticamente significante entre os percentuais de aprovação, mostrando-se a inativada importada superior às nacionais. As vacinas também foram avaliadas quanto ao seu percentual de aprovação de acordo com a espécie animal a que eram destinadas e percentual de reprovação de acordo com o teste. Nas vacinas inativadas, a principal causa de reprovação foi em decorrência do teste de potência. Já, nas atenuadas, houve maior reprovação nos testes de potência, titulação e potência e titulação. Além disso, com relação às atenuadas, o teste de potência de Koprowski foi comparado com o teste de Titulação com a finalidade de se verificar a possibilidade de se retirar um ou outro teste do controle, mostrando-se de extrema necessidade a realização simultânea de ambos os testes / Abstract: With the main purpose of evaluating rabies vaccines for animal immunization produced in Brazil from 1988 up to 1996,2442 batches of vaccines, being 891 attenuated and 1551 inactivated ones, were examined. Among the latter, 1441 batches were produced in Brazil. Tests to check potency, safety and sterility were carried out. Within this period, 93.4 % (1346) lots of Brazilian inactivated vaccines and 98.2 % (108) lots of imported inactivated ones were approved. When evaluated by the calculation of 95 % confidence intervals it was observed no significant difference among the percentages of approval, showing homogeneity of the respective data throughout the period of study. With regard to the attenuated vaccines, during the same period 92.1 % (821) batches of vaccines were approved. Comparison of the 95 % confidence intervals showed statistically significant differences within the period of study. Comparison of imported inactivated vaccine with inactivated and attenuated Brazilian produced vaccines, showed significant differences among the percentages of approval showing that the imported inactivated vaccines were better than the Brazilian ones. The vaccines were also evaluated according to the animal species, which they were produced for as well as the percentage of non-approval as to the type of test. Among the inactivated vaccine higher percentages of non-approval were observed in the tests of potency, titration and potency plus titration. Furthermore, with regard to the attenuated vaccines, the Koprowski's potency test was compared with the titration test, with the objective of ascertain whether there was a possibility of working with on1y one control test / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Clarice Weis Arns / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T00:16:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castro_TerezinhaAparecidaMartinsGomesde_D.pdf: 3942349 bytes, checksum: 197c32f0bac44952abb9c2999cf2dd2b (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: O pneumovirus aviário (PVA) causa infecção aguda no trato respiratório em perus (rinotraqueite de perus) e galinhas (síndrome da cabeça inchada) com início abrupto e disseminação. No presente trabalho foram estudados dois isolados de PVA: SHS BR-119 e SHS BR-12l quanto a morfologia, sorología, cultivo em anel de traqueal, inoculação experimental em aves SPF, propriedades físico-químicas e perfil eletroforético em PAGESDS frente a quatro isolados de PVA de diferentes origens. Inicialmente, todos os isolados de PVA foram inoculados e adaptados em culturas de células CER para produção de antígenos, que resultou em títulos virais variando de 105,5 a 106,5 TCID50/ml. Em cultivo de aneal traqueal observou-se ciliostase na segunda passagem apenas em uma das amostras virais analisadas. O estudo físico-químico demonstrou que os isolados brasileiros tratam-se de vírus RNA envelopados, termolábeis e sem atividade hemaglutinante e de hemadsorção. As observações morfológicas à microscopia eletrônica demonstraram ser um vírus pleomórfico e espiculado. O perfil eletroforético em PAGE-SDS demonstrou uma composição similar dos polipeptídeos virais entre as diferentes amostras estudadas. Os antissoros produzidos a partir dos vírus purifícados foram utilizados no teste de soroneutralização cruzada. Os resultados deste ensaio mostraram que as duas cepas virais brasileiras cruzam com as outras cepas estudadas, confírmando a ocorrência de semelhanças antigênicas amplamente descritas na literatura internacional. O resultado do estudo sorológico do PVA em aves matrizes mostrou que das 901 amostras de soro analisadas através dos testes de ELISA e soroneutralização, ambos os testes demonstraram uma positividade anti-SHS BR119 (67% e 66,5% respectivamente). Também foram analisadas 724 amostras de soro de frangos de corte através dos testes de ELISA e SN com positividade de 2,9% e 5,1%, respectivamente / Abstract: Avian Pneumovirus (APV) causes an acute respiratory tract infection both in turkeys (turkey rhinotracheitis) and chicken (swollen head syndrome) with sudden onset and rapid spread through the flocks. In this work were characterized two types of avian pneumovirus from brazilian chicken by electron microscopy, serological analysis (serum neutralization and ELISA tests), physico-chemical properties (thermostability, chloroform sensitivity, effect of IUDR and pH, haemagglutination and haemodsortion tests) and compared its polypeptide composition with four other avian pneumoviruses using SDSP AGE. AlI isolates from APV were propagated in cells cultures of CER for antigens production with titre varying from 105.5 to 106.5 TCID50/ml. Only one isolated showed ciliostasis after the second passage. The physico-chemical tests and morphological observation showed that brasilian' s isolates are pleomorphic RNA viruses, spicular, enveloped, thermolabile and not haemagglutinating. The SDS-PAGE profile of the viruses were very similar. Virus neutralisation tests revealed non reaction of the two brazilian isolates with the other different isolates. Nine hundred one serum samples of breeders and seven hundred twenty four serum samples of broilers were analysed using the serological tests of serum neutralization (SN) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and both tests showed serum positivity, respectively, 66.5 and 67% to breeders and 5.1 and 2.9 to broilers. In the experimental inoculation of SPF birds with two brazilian isolates and one germany isolated observed serological conversion after the first inoculation / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Ciências

Orientador: Paulo Maria Ferreira de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T17:16:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_EdsonDelgado_M.pdf: 3862798 bytes, checksum: 9d1e4001cac9ec3a5722f8af853832f6 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A presença de coronavírus do tipo MHV foi associado à cepas Y de T. cruzi usualmente empregadas em modelos experimentais da Doença de Chagas, sugerindo que as observações imunohistológicas desenvolvidas nos animais são decorrentes da infecção concomitante do protozoário com o vírus (Exp. Parasitol. 78:429-431, 1994). Neste trabalho camundongos foram submetidos à infecção pelo coronavírus, visando o estudo da ativação de lintõcitos B esplênicos e das possíveis alterações histológicas nesse órgão. Camundongos CBNJ obtidos de colônias "SPF" (CEMIB-UNICAMP) foram inoculados intraperitonealmente com uma dose da suspensão viral, determinada através de uma estimativa de DLs() . Nos dias 3, 7, 11 e 15 pós-infecção, os camundongos foram sangrados para a obtenção de soros e sacrificados a seguir. Os baços isolados foram pesados e preparadas suspensões celulares que foram utilizadas nos ensaios de PFC-reverso, visando a determinação do número de células secretoras de imunoglobulinas No mesmo período, cortes histológicos corados com Hematoxilina­ Eosina foram utilizados para a pesquisa de alterações na estrutura interna do órgão. Nesta cinética de estudo pôde-se observar que entre os dias 7 e 11 pós-infecção houve um aumento no peso dos baços infectados (2 a 3 vezes superiores aos controles) associado com um aumento de 7 a 8 vezes no número de células secretoras de imunoglobulinas totais (PFC com anti-IgTotal) e de 5-6 vezes no número de células secretoras de imunoglobulinas da classe IgM (PFC com anti-lgM). Não foram detectados anticorpos específicos anti-MHV nos soros de quaisquer destes animais durante o período de observação. Alterações histológicas foram observadas nas preparações de animais infectados, caracterizadas por uma leve desestruturação nas áreas de polpa branca e polpa vermelha, quando comparadas com aquelas de baços normais. A alteração no perfil de linfócitos B esplênicos de camundongos infectados com o coronavírus caracterizada pelo aumento no número de células secretoras de imunglobulinas, está possivelment( associada à um processo de ativação policlonal. Assim, urna infecção sub-clínica dessa estirpe vira associada com outros patógenos poderá alterar substancialmente a resposta imune de animai desenvolvendo diferentes patologias / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2016 / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:11:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 340462.pdf: 1505088 bytes, checksum: a16e2e2d9a9e92fde60d1010eb026ecc (MD5) Previous issue date: 2016 / A dengue é considerada um grande problema de saúde pública em regiões tropicais e subtropicais do mundo. O principal alvo de anticorpos para o vírus da dengue (DENV) é a proteína do envelope (E). Áreas da proteína E que são conservadas estruturalmente e funcionalmente podem ser alvos de anticorpos neutralizantes contra os quatro sorotipos. Dados de bioinformática da proteína E do DENV identificaram a presença de um peptídeo altamente conservado na estrutura de todos os quatro sorotipos virais, localizado no E-DII da proteína viral. O peptídeo E250-270 constitui a maior porção conservada e é exposto na conformação trimérica da proteína E. Acredita-se que anticorpos direcionados contra ele possam ser neutralizantes. O presente trabalho avaliou a presença de anticorpos anti-E250-270 em soro de pacientes infectados. Para tanto, um ELISA indireto contra E250-270 foi desenvolvido. Inicialmente foram expressas as proteínas GST e KLH fusionadas ao peptídeo e ambas foram utilizadas como antígenos de imunização para obtenção de anticorpo monoclonal contra o E250-270. Para o ELISA indireto, foram selecionadas 82 amostras, 54 positivas para dengue (DV) e 28 de doadores saudáveis. A área sob a curva (ASC) foi calculada para cada amostra através de uma leitura cinética de 30 minutos (DO 450 nm) e a curva ROC foi construída visando o critério de máxima sensibilidade e especificidade. Os grupos testados diferiram entre si em relação à média da ASC (t = - 2,9722, df = 80, p = 0,0039). O ponto de corte sugerido pela curva ROC foi de 10,386, com sensibilidade de 59,2 % e especificidade de 64 %, VPP = 74,4 % e VPN = 45,0 %. Entre as amostras positivas para DV, 34 delas ficaram acima do ponto de corte, indicando a presença de anticorpos IgG anti E250-270. Entre os doadores saudáveis, 10 amostras ficaram acima do ponto de corte, entretanto foi verificado que sete delas haviam sido vacinadas contra a febre amarela, que também é um Flavivirus. Isso pode explicar o reconhecimento de E250-270, uma vez que existem similaridades entre as sequências do peptídeo com a sequência do vírus atenuado da vacina. Dessa forma, o estudo demonstrou a presença de anticorpos contra E250-270 em amostras positivas para DV. Estudos futuros poderão correlacionar a presença desses anticorpos com gravidade ou proteção da doença. <br> / Abstract : Dengue represents a large-scale public health problem in tropical and subtropical regions of the world. The main target of antibodies against dengue virus (DENV) is the envelope protein (E). Structurally and functionally preserved regions of the E protein can be target of neutralizing antibodies against all four serotypes. Bioinformatics data on the E protein of DENV identified the presence of a highly conserved peptide in all four serotypes structure located on the E-DII of the viral protein. E250-270 peptide is the most conserved portion of the E protein and is exposed in its trimeric conformation. It is thought that antibodies directed against it might be neutralizing. Therefore, this study evaluated the presence of anti-E250-270 antibodies in serum of infected patients through an indirect ELISA. E250-270 fused to GST and KLH proteins were expressed and used as immunizing antigens to obtain monoclonal antibodies against E250-270. For indirect ELISA, we selected 82 samples, 54 positive for dengue (DV) and 28 healthy donors. The area under the curve (AUC) was calculated for each sample from kinetic readings up to 30 minutes (OD 450 nm) and a ROC curve was built using maximum sensitivity and specificity criteria. Tested groups differed among each other in comparison to AUC mean (t = - 2.9722, df = 80, p = 0.0039). The suggested cut-off point for the ROC curve was 10.386, with a sensitivity of 59.2 % and specificity of 64 %, PPV = 74.4 % and NPV = 45.0 %. Among positive samples for DV, 34 of them were above the cut-off point, indicating the presence of IgG antibodies anti- E250-270. Among healthy donors, 10 samples were above the cut-off; however, seven of them had been vaccinated against yellow fever, which is also caused by a Flavivirus and has a similar peptide sequence. Thus, the study showed the presence of antibodies against E250-270 in positive samples for DV. Future studies could correlate the presence of these antibodies with gravity or protection against the disease.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-04T15:57:09Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1919886 bytes, checksum: ec68db1321db78abfb38c0249f4e0f9a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-04T15:57:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1919886 bytes, checksum: ec68db1321db78abfb38c0249f4e0f9a (MD5) Previous issue date: 2012-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O gênero Begomovirus (família Geminiviridae) inclui vírus com genoma composto por uma ou duas moléculas de DNA fita simples, transmitidos a espécies de plantas dicotiledôneas pela mosca-branca Bemisia tabaci. No Brasil, os begomovírus são um dos principais entraves para a produtividade do feijoeiro e tomateiro. Entretanto, begomovírus infectando soja (Glycine max) tem sido apenas esporadicamente relatados. Neste trabalho, foi isolado uma espécie do gênero Begomovirus infectando soja na região de Jaiba-MG e designado Soybean chlorotic spot virus (SoCSV). Para a caracterização da espécie, foi feita a clonagem de seu genoma completo seguida de análise molecular, e da obtenção de clones infecciosos para a determinação de sua gama de hospedeiros. Extratos de DNA total de plantas infectadas foram utilizados para a amplificação do genoma viral completo utilizando-se a DNA polimerase do fago ф29. Os produtos da amplificação foram clonados em plasmídeos, completamente sequenciados e submetidas a análise filogenética. O DNA-A de SoCSV apresentou maior identidade de sequência com o vírus Macroptilium yellow spot virus (85% de identidade), enquanto o DNA-B apresentou maior identidade com o Bean golden mosaic virus (67% de identidade). Este nível de conservação de sequências de SoCSV é suficientemente dissimilar (menos que 89%) para ser considerado uma nova espécie de begomovírus. Nos testes de gama de hospedeiros, dentre as espécies testadas foi constatada a infecção viral nas espécies Nicotiana clevelandii, N. tabacum e N. glutinosa, entretanto nenhum sintoma macroscópico foi observado. As plantas das espécies Capsicum annuum, N. benthamiana, N. debneyi, N. rustica e Glycine max, apresentaram sintomas leves. Os sintomas mais severos foram observados nas espécies Phaseolus vulgaris ‘Pérola’ e ‘Ouro Negro’, consistindo em deformação foliar, bolhosidade, clorose entre as nervuras, mosaico e mosaico dourado. Com o objetivo de induzir o silenciamento de genes em plantas de soja, foi construído um vetor de silenciamento viral baseado no DNA-A do SoCSV, denominado pUFV1713, através da substituição da maior parte da sequência que codifica a proteína capsidial (CP) por um sítio múltiplo de clonagem. Assim como os outros begomovírus, o SoCSV demonstrou não necessitar da proteína capsidial para causar infecção sistêmica. A construção do vetor viral foi confirmada por PCR, clivagem enzimática e sequenciamento. A capacidade de pUFV1713 induzir o silenciamento gênico foi testada com a inserção de um fragmento do gene magnesium chelatase subunit I (ChlI) no seu sítio múltiplo de clonagem, seguido por inoculação em plantas de soja. A infecção viral foi confirmada via PCR aos 21 dias pós-inoculação (dpi). O decaimento dos transcritos do gene endógeno ChlI foi avaliado por PCR em tempo real. Os dados do qRT-PCR confirmam a diminuição dos níveis de expressão do mRNA do gene ChlI nas plantas infectadas mas não nas plantas controles. Coletivamente, estes resultados indicam que o vetor VIGS derivado de SoCSV tem o potencial para aplicações em análises de genômica funcional de soja. / The genus Begomovirus (family Geminiviridae) includes viruses with mono or bipartite ssDNA genomes that are transmitted to dicotyledonous plant species by the whitefly Bemisia tabaci. In Brazil, begomoviruses are considered major constraints to tomato and bean production. However, soybean (Glycine max) infecting begomoviruses have been only sporadically reported. In this investigation, a new begomovirus species was isolated from a soybean plant in Jaiba-MG and designated Soybean chlorotic spot virus (SoCSV). The DNA-A and DNA-B of this new virus species were cloned, sequenced and infectious clones were obtained to determine the host range. Total DNA extracts from infected plants were used for the amplification of the full-length viral genome through phage ф29 DNA polymerase. The amplified fragments were cloned into plasmids, sequenced and submitted to phylogenetic analysis. The DNA-A of SoCSV was more closely related to Macroptilium yellow spot virus Tomato (85% identity), whereas the DNA-B was more closely related to Bean golden mosaic virus (67% identity). This level of sequence conservation of SoCSV is sufficiently dissimilar (less than 89%) to be considered a new species of Begomovirus. For the host range experiments, among the analyzed species, SoCSV was capable to cause a symptomless infection in Nicotiana clevelandii, N. tabacum e N. glutinosa. The plant species Capsicum annuum, N. benthamiana, N. debneyi, N. rustica and Glycine max displayed mild symptoms. The most severe symptoms were developed in the species Phaseolus vulgaris ‘Pérola’, and ‘Ouro Negro’, which consisted on leaf distortion, blistering, interveinal chlorosis, mosaic and golden mosaic. To induce gene silencing in soybean plants, we developed a SoCSV DNA-A-based silencing vector, designated pUFV1713, by replacing the majority of the coat protein (CP) sequences with a multiple cloning site. Like other begomoviruses, SoCSV did not require the coat protein for infection. The construction of the viral vector was confirmed by PCR, restriction analysis and sequencing. The capacity of pUFV1713 of inducing gene silencing was tested by cloning a magnesium chelatase subunit I (ChlI) gene fragment in its multiple cloning site followed by inoculation in soybean plants. Vairal infection was confirmed via PCR at 21 days post-inoculation (dpi). The decay of ChlI transcripts was monitored by real time RT-PCR. The results of qRT-PCR confirmed the decrease in the levels of ChlI mRNA expression in the infected plants but not in the control plants. Collectively, these results indicate that the SoCSV-derived VIGS vector has a potential for application in soybean functional genomics analysis. / Identidade da aluna, retirada do Virtua.

Orientador : Octavio Henrique de Oliveira Pavan / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T11:58:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_HelenaCamaraoTelles_D.pdf: 6327409 bytes, checksum: 4d87db1625cccde42014c5e12b02a8a9 (MD5) Previous issue date: 1989 / Resumo: Com base nos resultados obtidos no presente trabalho, conc1uiu-se que: a)Apesar da diferença de origem quanto ao hospedeiro, o VPNAgP, VPNAgF10, VPNTnP, VPNTnF11 e o VGDs, mostraram comportamento biológico muito semelhante em larvas de D. saccharalis. b)Os experimentos in vitro de estabilidade térmica do VPNAgP, VPNAgF10, VPNTnP, VPNTnF11 e VGDs, demonstraram que: os 5 baculovirus foram completamente inativados em temperaturas de 100ºC, 80ºC e 70ºC; em menos de cinco, dez e trinta minutos respectivamente. Os 5 virus foram capazes de resistir mantendo a infectividade por 2 horas a temperaturas de 60ºC, por 1 dia a 50QC e por até 5 dias a temperaturas de 40ºC. c)Os experimentos in vivo dos efeitos de diferentes temperaturas no desenvolvimento da infecção viral com o VPNAgP, VPNAgF10, VPNTnP e VPNTnF11 em larvas de D. saccharalis, revelaram que: Os 4 baculovirus se desenvolveram normalmente na faixa de temperatura de 17ºC a 39ºC em larvas de D. saccharalis.Para os 4 Virus de Poliedrose Nuclear, a temperatura de 39ºC foi onde ocorreu a menor produção viral.A temperatura ótima foi a ele 28ºC, onde ocorreu a maior produção viral em D. saccharalis, para os 4 virus testados.Com um aumento de 2ºC da temperatura ótima (30ºC), o VPNAgP, VPNAgF10,VPNTnP e o VPNTnF11 apresentaram uma redução na produção viral de 461%, 279%, 139% e 192%, respectivamente. Uma diminuição de 2ºC da temperatura ótima (26ºC), também causou uma redução na producão viral do VPNAgP, VPNAgF10, VPNTnP e o VPNTnF1,os quais respectivamente mostraram uma redução de 107%, 456%, 121% e 383%. d)A inoculação prévia dos 5 virus inativados, inibiu parcialmente o desenvolvimento da infecção dos mesmos quando inoculados 5 dias mais tarde em D. saccharalis. e)Na continuação da passagem seriada dos isolados selecionados, VPNAgF10 e VPNTnF11, constatou-se que: Tanto o VPNAg como o VPNTn foram capazes de infectar e multiplicar-se no hospedeiro alternativo, D. saccharalis. Após vinte passagens seriadas, o isolado F20 do VPNAg mostrou uma redução no valor de DL50 de 1500 vezes para D.saccharalis, quando comparado com o virus original obtido de larvas de A. gemmatalis.O isolado F11 de VPNTn, o qual mostrou uma redução no valor de DL50 de 800 vezes após 11 passagens seriadas em D. saccharalis, quando comparado com o virus original obtido de larvas de T. ni, não mais apresentou alteração a partir da 12º passagem seriada. Os poliedros ou cristais do VPNAg e do VPNTn não apresentaram qualquer modificação no decorrer das passagens seriadas, em D. saccharalis. A análise protéica dos isolados selecionados do VPNAg (F10 F15 e F20) não mostrou diferenças quando comparado com o virus original obtido de larvas de A. gemmatalis.O VPNAgP e os isolados VPNAgF10 VPNAgF15 e VPNAgF20 apresentaram 18 bandas polipeptídicas, cujos pesos moleculares variaram entre 15000 a 92000 daltons.O VPNTnP e o isolado selecionado VPNTnF20 não apresentaram diferenças quanto a seus polipeptídeos quando analisados em gel de SDS e poliacrilamida. O VPNTnP e o isolado selecionado VPNTnF20 exibiram 22 bandas polipeptídicas, cujos pesos moleculares variaram de 11000 a 135000 daltons. Tanto o VPNAg como o VPNTn e os seus isolados apresentaram o mesmo peso molecular de 28000 daltons para a poliedrina.A passagem seriada em um hospedeiro alternativo é um método eficiente para indução de alterações genéticas nos vírus de Poliedrose Nuclear (VPNs) / Abstract: Based on the results obtained in the present work we were able to conclude: a)Despite the different original hosts and different strains the AgNPV, AgNPVF10 TnNPV, TnNPVF11 and DsGV all exhibited the same general infection pattern in D. saccharalis, the sugarcane borer. b)The tests of thermal stability for these virus show that all five baculovirus were completely inactivated when exposed to temperatures of 100ºC, 80ºC and 70ºC in less than five, ten and thirty minutes respectively. All these virus stil1 retained infectivity for 2 hours when exposed to a temperature of 60ºC, for 24 hours at 50ºC and up to 5 days at 40ºC. c)The effect of temperature of the virus development in D. saccharalis was analysed for the AgNPV, AgNPVF10 TnNPV and TnNPVF11 and showed that: All four virus were able to develop normally in temperatures ranging from 17ºC to 39ºC exhibiting development of polyhedra.The greatest reduction in the number of polyhedra produced was observed at 39ºC. The optimal temperature for polyhedral production was 28ºC for all virus.An increase in the optimal temperature of 2ºC (30ºC) caused a reduction on the viral production of 461, 279, 139 and 192% for the AgNPV, AgNPVF10 TnNPV and TnNPVF11 respectively.The viral production at 2ºC below the optimal temperature (26ºC) also was drastically reduced; this reduction being respectively of 107, 456, 121 and 383% when compared to the production at 28ºC. d)A previous inoculation of the 5 heat-inactivated virus caused a partial inhibition of the infection when active virus was inoculated 5 days after the first treatment in D. saccharalis. e) The continuation of the serial passage on the AgNPVF10 and TnNPVF11 strains resulted in the following observations: No significant alterations were observed in the infection process and polyhedral formation of either virus.The F20 strain of AgNPV after 20 passages through D.saccharal showed a 1500 fold reduction in the LD50 value for the D. saccharalis larvae, when compared with the original inoculum obtained from Anticarsia gemmatalis larvae.The Fll strain of the TnNPV which showed a 800 fold reduction after 11 passages through D. saccharallis when compared to the original inoculum obtained from Trichoplusia ni showed no alteration on passages 12 through 20 in D. saccharalis.The protein analysis of the selected strains of AgNPV showed no differences when compared to the original inoculum obtained from A. gemmatalis.The SDS-PAGE pattern exhibited 18 polypeptide bands with the molecular weight ranging from 15 to 92 K daltons.The protein analysis comparing TnNPV and TnNPVF20 strain showed identical patterns.The SDS-PAGE pattern showed 22 popypeptide bands with the molecular weight ranging from 11 to 135 k daltons.The main protein component of the Nuclear Poolyhedrosis Virus, polyedrin showed for all the strain of both virus the same molecular weight of 28k daltons.The serial passage in an alternate-host has shown to be an efficient method for inducing directed genetic alterations in these NPVs / Doutorado / Genetica / Doutor em Ciências Biológicas

Orientadores: Luiz Tadeu Moraes Figueiredo, Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-18T14:51:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_SandraCeciliaBotelho_D.pdf: 3737424 bytes, checksum: de5dc95046ff93bc94f402e725decac5 (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: As complicações devidas à infecção por citomegalovirus representam um dos maiores problemas infecciosos observados em pacientes submetidos a transplantes em geral. Com o objetivo de avaliar a incidência e o impacto clínico da infecção por CMV em uma população de transplantados renais no Brasil foram estudados prospectivamente 37 pacientes submetidos a transplante renal no Hospital das Clínicas da UNICAMP, no período de Outubro de 1990 a Setembro de 1992. A identificação da infecção pelo CMV foi levada a efeito pela detecção direta de partículas virais na urina através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e por reações soro lógicas - ELISA e imunofluorescência indireta. A PCR foi realizada com 3 pares de iniciadores ("primers"). O material amplificado foi fixado em filtros de nylon como "dot-blot" e as partículas virais foram identificadas por hibridização com oligonucleotídeos específicos para a região amplificada (sonda), marcados com 32P por meio da T4 polinucleotídeo quinase. O material para análise foi obtido antes e em intervalos mensais após o transplante. Os resultados globais, agrupando sorologia e PCR mostraram 32 pacientes com evidências de infecção ativa pelo CMV entre 37 estudados (86,48%). Em 6 pacientes, só a PCR foi capaz de identificar infecção ativa. O diagnóstico foi mais precoce pela PCR do que pelas técnicas sorológicas. 10 pacientes já apresentavam virúria antes do transplante. A maior incidência de infecção ocorreu nos primeiros 4 meses que se seguiram ao transplante. Dos 32 pacientes com infecção ativa pelo CMV, 16 (50%) apresentaram manifestações clinicas sugestivas de serem secundária à replicação viral (doença por CMV). Os 5 pacientes que não apresentaram, por nenhum dos testes, evidências de infecção ativa pelo CMV, não tiveram problemas clínicos relevantes no seguimento e mantiveram boa função renal. Em seu conjunto, nossos resultados sugerem que a infecção pelo CMV é uma complicação frequente em transplantados renais no Brasil e que poderia estar associada à maior frequência de complicações clínicas nesses pacientes. Adicionalmente, comprovou-se que a PCR é um método eficaz de detecção precoce dessa infecção. / Abstract: Cytomegalovirus (C.M.V.) is the single most important infections agent affecting recipients of organ transplant. To evaluate the incidence and the clinical impact of cytomegalovirus infection on renal transplant in Brazil, 37 patients who underwent renal allograft transplants were periodically screened for the presence of C.M.V. virus DNA in urine by lIsing polymerase chain reaction (P.C.R.) and for the presence of IgM and IgG cytomcgalovirlls antibodies (ELlSA and I.F.I.). The P.C.R. amplificd prodllcts werc detected by gel electrophoresis and by dot blot hybridization with oligonucleotide probes. 32 out 37 patients (86.48%) were found to be positive by at least one of the three methods. In 6 patients, P.C.R. was the only test to detect the C.M.V. infection. 10 patients had a positive result by P.C.R.Qefore the transplantation. The diagnosis was made earlier by P.C.R. than by serologic tests. Active infection occured more frequently in the first 4 months after transplantation. 16 out 32 patients (50.00%) with active infection by C.M.V. presented clinical manifestations of C.M. V. disease. 5 patients without evidences of active infection by the 3 tests have only minor clinical complications during followup. Our results sugest that C.M.V. infection is a frequent problem in renal transplant patients in Brazil, with significant clinical complications. Moreover, we confirmed that P.C.R. is a very sensitive procedure to early detection of C.M.V. infection. / Doutorado / Doutor em Clínica Médica

Os morcegos (Ordem Chiroptera) estão entre as espécies de mamíferos mais diversificadas e distribuídas no mundo. É reconhecido o papel fundamental que eles exercem na natureza. Por outro lado, são conhecidos como importantes reservatórios de agentes de doenças infecciosas, dentre os quais vírus, até pouco tempo desconhecidos, que nas últimas décadas se tornaram emergentes em humanos e outras espécies. Dentre os vírus RNA emergentes, destacam-se o SARS-CoV, MERS-CoV, vírus Hendra e Nipah e o último a causar importante surto na África, vírus Ebola.Mais de 100 espécies de vírus já foram detectadas em morcegos em todo o mundo, tanto vírus RNA, quanto vírus DNA, embora importância desses últimos como agentes de zoonoses ainda não tenha sido confirmada. Estudos no Brasil com relação à detecção de vírus em morcegos são praticamente inexistentes, e são focados apenas na vigilância e epidemiologia do vírus rábico. Portanto, este trabalho objetivou a detecção de vírus, tanto RNA, quanto DNA, em amostras de morcegos no estado do Rio Grande do Sul, através de técnicas moleculares e sequenciamento dos fragmentos obtidos. Identificamos a presença de vírus da família Coronaviridae, Circoviridae e Adenoviridae em amostras de fezes e tecidos de morcegos insetívoros e hematófagos. A detecção de novas espécies de vírus da família Circoviridae confirma a diversidade viral que estes vírus podem apresentar. Os resultados obtidos por investigação não podem afirmar se tais vírus apresentam potencial zoonótico, mas por serem dados inéditos no país, reforçam a importância da vigilância e de estudos adicionais para melhor compreender o papel que diferentes espécies de morcegos tem como reservatórios de vírus que possam ter impacto na saúde animal e humana. / Bats (Order Chiroptera) are among the most diverse and worldwide distributed mammal species. It is recognized the important role they play in nature, but, on the other hand, they are known as important reservoirs of infectious diseases, including viruses, until then unknown, that have become emerging in recent decades. Among RNA viruses of great importance are the SARS-CoV, MERS-CoV, Hendra and Nipah viruses and the one responsible to cause major outbreaks in Africa recently, the Ebola virus. More than 100 species of virus have been detected in bats in the world, both RNA and DNA viruses DNA, although the latter still hasn't confirmed its importance on zoonosis or the impact it would cause to the host itself.Studies in Brazil are practically nonexistent, because they are focused only on surveillance and epidemiology of rabies virus. Therefore, this work aimed to virus detection, both RNA and DNA in samples from bats in the State of Rio Grande do Sul, through molecular techniques and sequencing of the fragments obtained.We identify the presence of viruses of the family Coronaviridae, Circoviridae and Adenoviridae in stool samples and tissues. In addition, the discovery of new species of viruses of the family Circoviridae confirms viral diversity that these bats can carry. The results obtained in this investigation cannot confirm if such viruses have zoonotic potential, but as they are the first data published in the country, it underscores the importance of vigilance and additional studies to better understand the role that different species of bats have as reservoirs of viruses that may have an impact on animal and human health.