Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-16Bitstream added on 2014-06-13T18:29:21Z : No. of bitstreams: 1 borges_rj_me_botib.pdf: 1192920 bytes, checksum: 1ec44a09797fef66642b2e78f1373280 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As fosfolipases A2 (PLA2s) de veneno de serpente são uma das principais toxinas responsavéis pela miotoxicidade e necrose muscular observadas nos acidentes ofídicos. Essas toxinas podem ser separadas em Asp49-PLA2s, cujo mecanismo é catalítico e dependente de cálcio, e as PLA2s homólogas, cuja estrutura é semelhante, porém atividade em mecanismo não catalítico e independente de cálcio. Apesar de os detalhes deste mecanismo não serem bem conhecidos, estudos funcionais ressaltam importância da região do C-terminal e estudos cristalográficos propõem, mais especificamente, um sítio miotóxico composto por resíduos básicos e um hydrophobic knuckle composto por hidrofóbicos, ambos situados na região C-terminal da toxina. O presente trabalho tem objetivo de oferecer mais detalhes acerca do mecanismo de ação miotóxico independente de cálcio. Para tanto, realizamos estudos cristalográficos com miotoxinas botrópicas BthTX-II (uma Asp- PLA2s), BthTX-I e PrTX-I (duas PLA2s homólogas), em presença de íons relevantes para suas atividades. Recentemente, foi demonstrado que íons, tal como manganês, cálcio, zinco entre outros, interferem na atividade biológica de PLA2s e PLA2s homólogas. Assim, estudo cristalográfico da PrTX-I e BthTX-I com íons manganês e zinco foram elucidados no estado nativo e complexado. Experimentos in vivo indicam que tais íons promoveriam efeito inibitório da miotoxicidade. Enquanto os íons manganês não foram localizados no modelo cristalográfico, os íons zinco foram identificados interagindo apenas no modelo nativo com uma His48 e com as His120 de ambos monômeros. Estudos comparativos destas estruturas com a PrTX-II (PLA2s homóloga) com ácidos graxos foi desenvolvido e guiaram para elaboração de nova hipótese do mecanismo de ação independente de... / Phospholipases A2 (PLA2s) from snake venom are among the main toxins responsibles for miotoxicity and muscular necrosis observed in offidic accidents. These toxins can be separated in Asp49-PLA2s, whose catalytic mechanism of action is dependent of calcium, and in homologue PLA2s or PLA2s-like, whose terciary structure is similar, although its activity is not catalytic in a calcium independent mechanism of action. Despite the fact that this calcium independent mechanism is not well known, functional studies highlight the C-terminal region and structural studies points to a myotoxic site, composed by basic residues, and a hydrophobic knuckle, composed by aromatic and hydrophobic, in the C-terminal region. The present study aims to gather more knowledge about this myotoxic calcium independent mechanism of action. For this purpose, the botropic myotoxins BthTX-II (an Asp49- PLA2), BthTX-I and PrTX-I (homologue PLA2s) were studied in the presence of divalent ions by Xray crystallography. Recently, it was demonstrated divalent ions, such as manganese, zinc and calcium, interfere with the biological activity of these toxins. The crystallographic structure of PrTX-I and BthTX-I with manganese and zinc ions in a native and complexed form were elucidated. In vivo studies demonstrated that these ions inhibit the myotoxic activity of these proteins. Although manganese ions were not found in the structures, zinc ions were found interacting with His48 and the C-terminal residue His120. Comparative studies of this structure and PrTX-II (a homologue PLA2) complexed with stearic acid were performed and support a new hypothesis for the myotoxic mechanism of action for homologue PLA2s which includes both myotoxic site and hydrophobic knuckle and, for the first time, His120. Differently from most PLA2s of snake venom... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-16Bitstream added on 2014-06-13T20:33:38Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_cah_me_botib.pdf: 1288061 bytes, checksum: 481773a993e5e2c2a2095ba6bcf346cc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As serpentes do gênero Bothrops são de grande interesse científico, médico e social para o Brasil, visto que este gênero é responsável por cerca de 90% dos acidentes ofídicos que ocorrem em nosso país. Dois dos principais componentes do veneno desses animais são as fosfolipases A2 e as serino proteases. As fosfolipases A2 são enzimas responsáveis pela destruição da membrana celular através da hidrólise de fosfolipídios Ca2+ dependente. Uma classe destas fosfolipases, as fosfolipases homólogas (Lys49-PLA2s), que se caracteriza pela uma substituição natural na posição 49 de um resíduo de Asp para um resíduo de Lys, não apresenta atividade catalítica, mas é capaz de induzir mionecrose por um mecanismo Ca2+ independente devido, provavelmente, à resíduos da região C-terminal. Neste trabalho, através de estudos por cristalografia de raios-X de Lys49-PLA2s botrópicas nativas e quimicamente modificadas pelo brometo de p-bromofenacila (BPB), revisamos a posição da Lys122 – anteriormente apontado como um dos responsáveis ela ausência da atividade catalítica das Lys49-PLA2s por conta da hiperpolarização que causaria na ligação peptídica Cys29/Gly30 – e concluímos que, por conta de esta hiperpolarização ocorrer apenas em alguns monômeros de Lys49-PLA2s complexadas, a Lys122 não deve estar envolvida no “bloqueio” da atividade catalítica. Além disso, a comparação estrutural do loop de ligação de Ca2+ entre as Lys49 e Asp49-PLA2s nos mostra a importância da conservação da Tyr28 dentre as Asp49-PLA2s para a integridade do loop de ligação do Ca2+. Este resíduo estabiliza essa região através de uma ponte de hidrogênio com a Gly35. Nas Lys49-PLA2s, que possuem um resíduo de Asn na posição 28, não ocorre a formação dessa ponte, o que contribuiria para a desestabilização dessa região nessas proteínas... / The snakes from Botrops genus are objects with great scientific, medical and social interesting since that these snakes are responsible of 90% of snakebites in our country. Two of the main components of the venom from these animals are the phospholipases A2 and the serine proteases. The phospholipases A2 are enzymes responsible of cellular membrane disruption through phospholipids hydrolysis Ca2+-dependent. A class of these phospholipases, the homolog phospholipases (Lys49-PLA2s) that underwent a natural substitution Lys to Asp substitution in 49 position, does not show catalytic activity. However, these proteins can perform myonecrosis by a Ca2+-independent mechanism probably, due to action of C-termini region residues. In this work, by x-ray crystallography studies with bothropic Lys49-PLA2s in native and chemically modified by p-bromophenacyl bromide (BPB) forms, we revised the position of Lys122, previously pointed as one of the responsibles of Lys49-PLA2s due to hiperpolarization of its side chain on Cys29/Cys30 peptide bond. Here, we conclude that this hiperpolarization are present only in a few monomers and thus, Lys122 may not be involved in the “blocking” of catalytic activity. Furthermore, structural comparisons of Ca2+ binding loop between Lys49 and Asp49-PLA2s revels the importance of the Tyr28 residue conservation to the integrity of this region. This residue stabilizes the Ca2+ binding loop by a hydrogen bond to Gly35. In Lys49-PLA2s that have an Asn residue in 28 position, does not occur the formation of this bond, contributing to unstabilization of this region and difficulting the binding of Ca2+ cofactor. Phylogenetic studies showed that Asp49- PLA2s with reduced catalytic inactivity and capable to induce myonecrosis are phylogenetic more related to Lys49-PLA2s than to others Asp49-PLA2s, forming a ...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-25Bitstream added on 2014-06-13T20:22:03Z : No. of bitstreams: 1 motta_yp_dr_botfmvz.pdf: 1035450 bytes, checksum: 6aeb7583602a97ca559f4e1cd97d4ada (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente projeto teve como objetivo quantificar os níveis de citocinas moduladoras da inflamação, entre estas TNF-α, interleucina-1β (IL-1β), IL-6, IL-10 e INF-γ e comparar o efeito do tratamento convencional com o efeito do tratamento complementado com extrato da planta Mikania glomerata na intoxicação experimental por Bothropoides jararaca e Crotalus durissus terrificus. Foram usados ratos Wistar divididos em 5 grupos: C – controle, VC - veneno crotálico + soro antifidico, VB – veneno botrópico + soro antiofídico, VCM - veneno crotálico + soro antiofídico + Mikania glomerata e VBM - veneno botrópico + soro antiofídico + Mikania glomerata. As citocinas foram quantificadas no soro, homogenato da pata e na cultura de células esplênicas, pelo teste de ELISA em três momentos (M1- 30 minutos, M2- seis horas e M3- 24 horas após a inoculação do veneno). O veneno botrópico mostrou um potencial para estimular as citocinas inflamatórias como IL-6, IL-1β, TNF-α quando essas foram quantificadas no soro, no sobrenadante do homogenato da pata e nas culturas de células esplênicas. O tratamento com extrato da planta teve como principal efeito o retardo ou uma menor produção dessas citocinas. Os animais que receberam o veneno crotálico demonstraram principalmente um aumento ou diminuição de algumas citocinas como IL-10, IL-6 e IFN-γ quando quantificadas no soro, homogenato da pata e cultura de células esplênicas. O extrato da planta teve ação anti-inflamatória causando diminuição das citocinas inflamatórias e aumento de citocinas anti-inflamatórias. Assim pode-se concluir que os acidentes ofídicos são capazes de causar liberação de citocinas provocando lesões teciduais e a planta mostrou-se eficiente para diminuição de algumas dessas citocinas / This experiment aimed to quantify the pro-inflammatory cytokine levels, including TNF-α, interleukin-1β (IL-1β) and IL-6 as well as the anti-inflammatory ones such as IL-10 and INF-γ. It was also our objective to compare the effect of the conventional treatment to the treatment complemented with Mikania glomerata plant in the experimental intoxication using Bothropoides jararaca and Crotalus durissus terrificus venom. Wistar rats were randomly divided into 5 groups: C – control, VC – Crotalus venom + antivenom serum, VB – Bothrops venom + antivenom, VCM - Crotalus venom + antivenom + Mikania glomerata and VBM - Bothrops venom + antivenom + Mikania glomerata. Cytokines were quantified in the serum, paw homogenates, and spleen cell culture by ELISA test in three different moments (M1- 30 minutes, M2- 6 hours and M3- 24 hours after venom injection). Bothrops venom showed an ability to stimulate inflammatory cytokines such as IL-6, IL-1β, and TNF-α, when they were quantified in the serum, paw homogenate supernatant and spleen cell cultures. The plant extract, it was responsible for a delay or even a lowering in the cytokine production. The animals that received Crotalus venom displayed an increase or decrease of certain cytokines such as IL-10, IL-6 and IFN-γ when they were quantified in the serum, paw homogenate and spleen cell cultures. The plant extract, in this case, had an anti-inflammatory effect diminishing the inflammatory cytokines and increasing the anti-inflammatory ones. Therefore, it can be said that snakebites are capable of triggering the release of cytokines that will lead to tissue damage and the plant proved to be efficient in diminishing some of those cytokines

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseCHBT.pdf: 1076798 bytes, checksum: a3573c0b2fab64ec79341d9ff5185211 (MD5) Previous issue date: 2004-11-26 / Universidade Federal de Minas Gerais / The α2β1 integrin is a major collagen receptor that plays an essential role in the normal and tumor cells adhesion to the extracellular matrix, as well as in the metastasis. Antagonists of integrins have been developed in order to provide powerful therapeutic approaches for the several types of cancer and metastasis treatment. A metalloproteinase/disintegrin was isolated, which is a specific inhibitor of the collagen type I binding to α2β1 integrin. This 55-kDa protein (Alternagin) and its disintegrin-like 30-kDa domain Alternagin-C (ALT-C) were isolated from the Bothrops alternatus a brazilian snake - venom. This disintegrin-like domain has an additional cysteine-rich domain, which is not found in RGD-disintegrins, and the RGD motif is replaced by an ECD sequence. So, the purposes of the project were (1) Evaluate the effect of ALT-C on tumor and non-tumor cell adhesion, proliferation and migration, (2) To study the effects of ECD-motif derived peptides on tumor and non-tumor cell adhesion. ALT-C inhibited the adhesion of NITH3T3, human bladder ECV-304, human cervix HeLa and breast MDA-MB-231cells to collagen type I (IC50 of 2.2, 1.66, 1.38 and 0,95µM respectively). Besides, when immobilized on plate wells, ALT-C supported the adhesion of these cell lines. ALTC did not detach cells which were previously bound to collagen type I. In the presence of collagen type I, ALT-C stimulates the migration of MDA-MB-231 cells and in greater concentrations it inhibits migration. ALT-C does not inhibit the adhesion and the migration of estrogen dependent MCF-7 cells. ALT-C also induces significant HUVEC proliferation in vivo, by up-regulating VEGF expression in human fibroblasts and endothelial cells. ALT-C also strongly activates Akt/PKB phosphorylation, a signaling event involved in endothelial survival and angiogenesis. In addition, related to the up-regulation of the VEGF´s expression, ALT-C up-regulates other growth factors expression involved in cell proliferation, such as IL-11, TGFβ, and EGR2 and 3, which are probably also involved on its positive effect on HUVEC proliferation. These biological activities of ALT-C can be useful in anti-cancer therapy experimental studies. / A integrina-α2β1 é o principal receptor do colágeno tipo I, o qual possui papel essencial na adesão de células normais e tumorais à matriz extracelular, bem como no desenvolvimento de metástases. Portanto, desintegrinas que inibem especificamente a ligação do colágeno com a integrina-α2β1, são importantes ferramentas para o estudo do câncer metastático e para o desenvolvimento de derivados peptídicos inibidores de células tumorais invasivas (drogas antimetastáticas). Foram isoladas do veneno da serpente Bothrops alternatus ,uma metalopeptidase (Alternagina) de 55 kDa e seu domínio processado, Alternagina-C (ALT-C) (30 kDa). A ALT-C tem no domínio desintegrina a sequência adesiva ECD ao invés da seqüência RGD. Esta desintegrina-símile inibe a adesão mediada pelo colágeno tipo I de células transfectadas K562-α2β1, e a inibição é dose dependente (IC50- 100 nM). Assim, este projeto propôs (1) o estudo do efeito da ALT-C sobre células normais e tumorais através da realização de ensaios biológicos de adesão celular, migração e proliferação celulares, e (2) Ensaios biológicos com peptídeos sintéticos contendo a seqüência adesiva ECD da ALT-C. A ALT-C inibiu a adesão das linhagens celulares NITH3T3, MDA-MB- 231, HeLa, ECV-304 ao colágeno tipo I, com uma IC50 de 0,95; 1,38; 1,66 e 2,2µM respectivamente. Quando imobilizada em placas, a ALT-C promoveu a adesão das linhagens NITH3T3, HeLa e ECV-304. A ALT-C não foi capaz de desaderir linhagens NITH3T3, HeLa e ECV-304, estando estas previamente aderidas ao seu substrato. Em presença de colágeno tipo I, a ALT-C induziu a migração das células MDA-MB-231 e, em altas concentrações ela inibiu este efeito. A ALT-C não exerceu efeito inibitório ou indutor sobre a adesão ou a migração da linhagem celular dependente de estrógeno MCF-7, que expressa baixos níveis da integrina- α2β1 quando comparada com as demais linhagens estudadas. Quanto aos peptídeos sintéticos testados, mesmo em concentrações mais elevadas não foram capazes de inibir a adesão das células K562-α2β1 de forma significativa. A ALT-C, tanto na forma solúvel quanto na forma imobilizada ao plástico, induziu a proliferação celular em HUVECs e este efeito poderia estar relacionado com um aumento da expressão de fatores de crescimento. Em células da linhagem NITH3T3, a ALT-C na forma solúvel induziu de forma significativa a expressão de VEGF. A ALT-C também aumentou a expressão de outros fatores de crescimento, tais como IL-11, TGFβ e EGR2 e 3, os quais provavelmente estão envolvidos no efeito positivo sobre a proliferação celular das HUVECs e outros tipos celulares. Diante destes resultados, podemos concluir que a ALT-C pode vir a ser uma potencial ferramenta terapêutica para modelos de estudo sobre o câncer e para o desenho de fármacos que atuem especificamente em linhagens celulares tumorais que expressem a integrina α2β1, inibindo a adesão destas ao colágeno tipo I.

Resumo: Os objetivos do presente trabalho foram verificar o efeito do período (manhã e tarde) e tempo de colheita (30 e 60 minutos) na produção de veneno por abelhas Apis mellifera africanizadas e a influência desse manejo na expressão de genes relacionados ao estresse. Foram utilizadas cinco colméias de abelhas Apis mellifera L. As colheitas de veneno e abelhas ocorreram três vezes por semana (manhã às 09h00 e tarde às 14h00), em dias intercalados, de acordo com os seguintes tratamentos: T1: manhã/30 minutos; T2: manhã/60 minutos; T3: tarde/30 minutos; T4: tarde/60 minutos. O veneno foi colhido por meio de coletores elétricos. O nível de estresse das abelhas foi monitorado pela alteração na expressão do gene defensina (proteína de defesa). Como controle interno foi usado o gene da actina. Os resultados foram avaliados por ANOVA seguida do teste de Tukey-Kramer (P≤0,05). Pode-se concluir que o T2 apresentou produção de veneno significativamente maior e uma menor expressão de gene defensina relacionado ao estresse comparado aos demais tratamentos / Abstract: The objectives of this study was to investigate the effect of period (morning and afternoon) and harvest time (30 and 60 minutes) in the production of poison in Apis mellifera bees and the influence of management on the expression of genes related to stress. Collection of venom and bee took place three times a week (morning at 9 a.m. and afternoon at 2 p.m.), every other day, according to the following treatments: T1: morning/30 minutes, T2: morning/60 minutes, T3: afternoon / 30 minutes, T4: afternoon/60 minutes. Venom was collected by electric collector. The stress level of the bees was monitored by changes in gene expression of defensin (protein defense). Was used as internal control of the actin gene. The results were evaluated by ANOVA followed by Tukey-Kramer (P ≤ 0.05). It can be concluded that T2 had significantly higher production of poison and a lower defensin gene expression related to stress compared to other treatments / Orientador: Ricardo de Oliveira Orsi / Coorientador: Paulo Roberto de Lima Meirelles / Banca: Simone Fernandes / Banca: Luciana Francisco Fleuri / Mestre

Orientador: Michiko Sakate / Resumo: O presente trabalho teve por objetivo avaliar os aspectos clínico, laboratorial, eletrocardiográfico de cães intoxicados por veneno de sapo, além de verificar a resposta ao tratamento com propranolol. Para tanto, foram utilizados 20 cães sem raça definida, machos e fêmeas, sadios, divididos em 2 grupos: controle (n=5) e intoxicados com veneno de sapo (n=15). Os cães foram submetidos à indução anestésica com tiopental sódico IV e mantidos em anestesia volátil com isoflurano a 3% durante o período de avaliação e registro de dados (duas horas e meia). Neste período, os animais do grupo controle receberam somente placebo (solução fisiológica) e os do grupo Intoxicado receberam uma alíquota do veneno de sapo por sonda orogástrica. Os animais que apresentaram taquicardia ventricular foram tratados com propranolol a 0,5 mg/kg IV. Durante a avaliação foram observadas as alterações dos sinais clínicos, tais como: freqüência e ritmo cardíacos, sialorréia, irritação da mucosa oral, evacuação e micção, alterações respiratórias, coloração das mucosas, temperatura corpórea e freqüência de pulso. Também foi mensurada a pressão arterial (sistólica, diastólica e média) e colhido material para dosagem de marcadores cardíacos (CK-MB e TnIc), além de dosagem de eletrólitos plasmáticos (Na, K e Ca iônico) e os animais foram monitorados com eletrocardiógrafo para verificação de arritmias. Os resultados mostraram que a intoxicação por bufotoxina causa alterações cardiovasculares, como hipertensão e arritmias ventriculares (VPCs e TV); alterações neurológicas com sinais variáveis; alterações gastrointestinais com vômito, sialorréia, hiperemia da mucosa e diarréia. Além disso, os animais intoxicados apresentaram elevação de CK-MB e TnIc, mostrando lesão miocárdica aguda... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the clinical, laboratorial and eletrocardiographic aspects of the dogs intoxicated with toad venom, besides to check the answer to therapeutic with the use of propranolol. For this, were used 20 dogs without definitive breed, males and females, healthy, divided in two groups: Control (n=5) and Intoxicated with toad venom (n=15). These dogs were submitted to anesthesic induction with sodic thiopental IV and maintained in volatile anaesthesia with isoflurane 3% during the period of evaluation and value records (two and half hours). In this period, the Control group received only phisiologic solution and the Intoxicated group animals received a fraction of the toad venom through oro-gastric catheter. The animals that showed ventricular taquicardiac were treated with 0,5 mg/Kg Iv of propranolol. During the evaluation, was observed the present or not of these clinical signs: cardiac frequence and rhythm, profuse salivation, oral mucoses irritation, evacuation, urine, respiratory changes, color mucous, body temperature and pulse frequency. Also was mensured the arterial pressure (systolic, diastolic and medium) and was collected material by dosing cardiac markers (CK-MB and TnIc), besides dosing of eletrolyte plasmatics (Na, K and Ca ionic) and these animals were monitored with eletrocardiographic by cheking arrhythmias. The results showed that the intoxication by bufotoxin causes cardiovasculars alterations as hypertension and ventriculars arrhythmias (VPCs e TV), neurologics alterations with signs variables, digestive tract alterations as vomits, profuse salivation, hyperemic mucous membranes and diarrhoea. Besides, the intoxicated animals showed elevation of CK-MB and TnIc, showing sharp lesion of miocardic. Propranolol, in the dose utilized showed to be a medicine enough sufficient by treatment of ventryculars arrhythmias affronted by toad venom... (Complete abstract click eletronic address below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-22Bitstream added on 2014-06-13T20:16:36Z : No. of bitstreams: 1 wilson_c_me_sjrp.pdf: 535059 bytes, checksum: 514dc7e27d5f6dc577b4bea8fe8ef6de (MD5) / Os venenos de serpentes são constituídos por uma complexa mistura de substâncias que apresentam características e proporções variáveis de acordo com as diferentes espécies, distribuição geográfica dos indivíduos, variação ontogenética e sexual e alimentação. Essa variabilidade na composição dos venenos é de grande interesse na pesquisa e desenvolvimento de novos fármacos, pois um elevado grau de variação aumenta o número de seus potenciais usos. De acordo com essas propriedades dos venenos de serpentes, no presente estudo procurou-se comparar algumas variações existentes nas frações do veneno de Bothrops leucurus, uma serpente da família Viperidae que se caracteriza por produzir um veneno com toxicidade variável devido a diferentes fatores. A toxicidade do veneno deve-se principalmente à sua fração proteica, constituída em sua maior parte por proteinases (metalo proteinases e serino proteinases), fosfolipases e L-aminoácido oxidases que apresentam efeitos potenciais no sistema homeostático, além de possuírem ação citotóxica, antimicrobiana e inflamatória. Neste estudo foram realizados ensaios cromatográficos para a purificação de algumas dessas enzimas e a caracterização das mesmas para a verificação de suas propriedades proteolíticas e fibrinogenolíticas, além do potencial antimicrobiano do veneno bruto. Foram purificadas duas metalo proteinases de 28 e 65 kDa, respectivamente, uma serino protease de 35 kDa, uma LAAO de 66 kDa e duas fosfolipases com 14 e 15kDa. Constatou-se que a metalo protease de 65 kDa apresentou a maior atividade fibrinogenolítica. Além disso, foi realizado o teste da mínima concentração inibitória com o veneno bruto para verificar seu efeito antimicrobiano contra uma bactéria gram-negativa e outra gram-positiva, sendo que nesta última, apresentou atividade inibitória / The snake’s venoms are constituted by a mixture of substances that exhibit character and variable proportion according to different species, geographic distribution of individuals, ontogenetic and sexual and feed variability. That variability on poisons compositions is of great interest on research and development of new drugs, because a high degree of variation increases the number of potential use. According to those properties of snake’s poisons in the actual study it was sought to compare some variations existents on fractions of Bothrops leucurus venom, a snake of family Viperidae that is characterized by production of poison with variable toxicity due different factors. The poison toxicity should principally its protein fraction consisting mostly by proteinases (metalloproteinases and serine protease), phospholipases and L-aminoacid oxidases showing potential effects on homeostatic system, beyond having cytotoxic action, bactericidal and inflammatory. This study describe chromatographic separation of some enzymes and characterization of it and to verification of its proteolytic and fibrinogenolytic properties further the bactericidal potential of crude venom. Was purified two metalloproteinases of 28 and 65 kDa respectively, a serine protease of 35 kDa, a LAAO of 66 kDa and two phospholipases of 14 and 15kDa. It was found metalloproteinase of 65 kDa show a higher fibrinogenolytic activity. Futhermore crude venom was carried out the test of minimum inhibitory concentration with crude venom to check its antimicrobial effect against a gram-negative bacterium and other gram-positive, whereas in the latter showed inhibitory effect

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-17Bitstream added on 2014-06-13T20:18:06Z : No. of bitstreams: 1 modanesi_ms_me_botfmvz.pdf: 201295 bytes, checksum: ef772e852ba4f149e62fb93fb8448452 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Os objetivos do presente trabalho foram verificar o efeito do período (manhã e tarde) e tempo de colheita (30 e 60 minutos) na produção de veneno por abelhas Apis mellifera africanizadas e a influência desse manejo na expressão de genes relacionados ao estresse. Foram utilizadas cinco colméias de abelhas Apis mellifera L. As colheitas de veneno e abelhas ocorreram três vezes por semana (manhã às 09h00 e tarde às 14h00), em dias intercalados, de acordo com os seguintes tratamentos: T1: manhã/30 minutos; T2: manhã/60 minutos; T3: tarde/30 minutos; T4: tarde/60 minutos. O veneno foi colhido por meio de coletores elétricos. O nível de estresse das abelhas foi monitorado pela alteração na expressão do gene defensina (proteína de defesa). Como controle interno foi usado o gene da actina. Os resultados foram avaliados por ANOVA seguida do teste de Tukey-Kramer (P≤0,05). Pode-se concluir que o T2 apresentou produção de veneno significativamente maior e uma menor expressão de gene defensina relacionado ao estresse comparado aos demais tratamentos / The objectives of this study was to investigate the effect of period (morning and afternoon) and harvest time (30 and 60 minutes) in the production of poison in Apis mellifera bees and the influence of management on the expression of genes related to stress. Collection of venom and bee took place three times a week (morning at 9 a.m. and afternoon at 2 p.m.), every other day, according to the following treatments: T1: morning/30 minutes, T2: morning/60 minutes, T3: afternoon / 30 minutes, T4: afternoon/60 minutes. Venom was collected by electric collector. The stress level of the bees was monitored by changes in gene expression of defensin (protein defense). Was used as internal control of the actin gene. The results were evaluated by ANOVA followed by Tukey-Kramer (P ≤ 0.05). It can be concluded that T2 had significantly higher production of poison and a lower defensin gene expression related to stress compared to other treatments

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-09Bitstream added on 2014-06-13T19:47:18Z : No. of bitstreams: 1 aguiar_mb_me_sjrp.pdf: 1374388 bytes, checksum: 3f0881d7dfbe0cb771b8a1ffb4572604 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os venenos de vespas socias são ricos em peptídeos biologicamente ativos que causam alguns males ao ser humano como: dores prolongadas, edema, eritema, reações alérgicas e sistêmicas. Possuem em sua composição vários tipos de aminas biogênicas, peptídeos e proteínas. Dentre eles, o que chama mais atenção na atividade farmacológica do veneno são os peptídeos policatiônicos. São diversas as atividades desses peptídeos como: neurotoxicidade, hemólise, liberação de histamina de mastócitos e antibatericida. Neste trabalho, foram estudados peptídeos catiônicos da família Polybine, sintetizados pelo Departamento de Biologia, Unesp, Rio Claro-SP. Os peptídeos Polybine I e II foram sintetizados na forma acetilada e não-acetilada para o estudo detalhado da sua estrutura. Com este objetivo, utilizamos as técnicas de Dicroísmo Circular (CD), para uma análise da estrutura secundária da amostra e espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear (RMN) para o estudo da estrutura tridimensional do peptídeo em solução. / Social wasp venoms are rich of biologically active peptides that may cause some malady to human such as prolonged pains, edema, erythema, allergies and systemic reactions. They have, in its composition, many kinds of biogenic amines, series of polycationics peptides and proteins. Among them, the most interesting thing in pharmacological activity are the polycationics peptides. These peptides show several activities like neurotoxicity, hemolytic activity, histamine releasing activity and antimicrobial activity. In this project, cationic peptides of the Polybine family synthesized by the Department of Biology, CEIS/IBRC, UNESP, Rio Claro, SP were studied. The cationic peptides Polybine I and II were synthesized in acetylad and non-acetylad forms to the detailed study of the structure. This way, CD spectroscopy were performed to analyze secondary structure of the sample and, to analyze treedimension structure, NMR spectroscopy were used.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-03Bitstream added on 2014-06-13T20:29:34Z : No. of bitstreams: 1 pinto_jras_me_rcla.pdf: 1057969 bytes, checksum: 2e29026d533c6190983ed253a062779d (MD5) / Os venenos dos insetos da ordem Hymenoptera contêm uma variedade de proteínas alergênicas. As ferroadas desses insetos podem induzir reações alérgicas e ocasionalmente, anafilaxias fatais. Há um crescente interesse nos componentes químicos dos venenos desses insetos, sobretudo no campo da alergia e imunologia clínica. As principais reações desses venenos são as reações inflamatórias e/ou imunológicas em suas vítimas, podendo ocorrer alguns efeitos sistêmicos. Dentre os Hymenoptera sociais, os venenos de abelhas e vespas têm sido extensivamente estudados e muitos de seus componentes moleculares já foram isolados e identificados. Fosfolipase, hialuronidase, antígeno-5 e serinoprotease são proteínas antigênicas de elevada massa molecular que, quando injetadas durante o ato de ferroar, iniciam uma resposta imune peculiar, sensibilizando alguns indivíduos. Porém, poucos estudos têm sido realizados para a identificação e o mapeamento dos epítopos desses alérgenos. O conhecimento sobre a interação molecular dos principais alérgenos destes venenos certamente deverá contribuir para o aperfeiçoamento dos diagnósticos de alergia, bem como para o desenvolvimento de tratamentos mais seletivos de reações alérgicas mediadas por IgE. No presente estudo identificamos e mapeamos os epítopos lineares de células-B do antígeno-5 do veneno da vespa social Polybia paulista. O antígeno-5 é conhecido como um dos principais alérgenos do veneno de Hymenoptera com massa molecular em torno de 23 kDa e função biológica desconhecida, porém muitos estudos demonstram a sua alergenicidade. Tendo conhecimento da sequência primária do antígeno-5, a identificação e o mapeamento dos epítopos foram realizados através da síntese múltipla de peptídeos, utilizando as técnicas do SPOT-Synthesis, imunodetecção e método indireto do ELISA com soro de pacientes sensíveis... / The venom insects of Hymenoptera order contain a variety of allergenic proteins. The stings of these insects can induce allergic reactions and occasionally fatal anaphylaxis. There is a growing interest in the knowledge about the chemical components of the venom of these insects, especially in the field of allergy and clinical immunology. The main reactions of these venoms are inflammation and / or the induction of immune process in the victims; sometimes systemic effects also may be observed. Among the social Hymenoptera, the venoms of bees and wasps have been extensively studied and many of their molecular components have been isolated and identified. Phospholipase, hyaluronidase, antigen-5 and serine protease are antigenic proteins of high molecular weight, which may initiate a peculiar immune response to sensitize some individuals. However, few studies have been performed for the identification and mapping of the epitopes these allergens. The knowledge about the molecular interaction of the major allergens of these venoms with IgG and/or IgE will certainly contribute for improving the diagnosis of allergy, as well as to develop more selective treatments of reactions IgE-mediated allergy. In this study we identified and mapped the linear epitopes of B-cells of the antigen-5 from the venom of the social wasp Polybia paulista. The antigen-5 is known as one of the major allergens from Hymenoptera venoms with molecular weight around 23 kDa and unknown biological function, but many studies show its allergenicity. The aim of this study was to identify and to map the linear epitopes of B-cells of this allergen. Taking into account the knowledge the primary sequence of antigen-5, the identification and mapping of epitopes was performed by using multiple synthesis of peptides with the combination of different protocols: SPOT-Synthesis, immunoblotting and indirect method of ELISA with the sera... (Complete abstract click electronic access below)