Orientador: Vera Lúcia Mores Rall / Abstract: Salmonella spp. é uma bactéria entérica, responsável por graves doenças de origem alimentar e um dos principais agentes envolvidos em surtos no mundo todo. A contaminação ocorre, principalmente pelo consumo de carne de frango e ovos, uma vez que esses animais podem ser portadores de vários sorovares patogênicos para o homem. O objetivo do estudo foi avaliar o potencial patogênico de 40 cepas de Salmonella spp., isoladas de esteiras de um abatedouro de aves, por testes fenotípicos de adesão, invasão e produção de biofilme e análise genotípica da presença de vários genes relacionados com fatores de virulência, além de verificar sua persistência no ambiente e sua susceptibilidade a antimicrobianos por disco-difusão. Foi observada resistência à tetraciclina (17,5%) ampicilina (10%), cefotaxima (7,5%), cotrimoxazol (5%) e cloranfenicol (2,5%). Todas as cepas apresentaram os genes invA, sipB, sipD, ssaR, sifA, sitC, iroN, tolC, flgK, fljB e flgL. Os genes sopB e sipA estavam presentes em 92,5% dos isolados, enquanto sopD e spvB foram observados em 90% e 32,5% das cepas, respectivamente. Todos os isolados aderiram e invadiram células HeLa, com índice de invasão variando de 1,4 a 73,8%. Com relação à produção de biofilme, 31 (77,5%) cepas foram capazes de produzir biofilme em microplacas de poliestireno. Pela técnica de eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE), detectou-se a persistência de clones no ambiente por até 18 semanas, entre as 20 amostradas. Não foi possível o estabelec... (Complete abstract click electronic access below) / Resumo: Salmonella spp. is an enteric bacterium responsible for serious foodborne disease, being one of the main agents involved in outbreaks worldwide. Contamination occurs mainly by poultry and egg consumption once these animals carry some pathogenic serotypes for the human being. Our aim was to evaluate the pathogenic potential of 40 strains of Salmonella spp., isolated from poultry slaughterhouse mats, by adhesion and invasion phenotypic tests, and biofilm production, and genotypic analysis to identify genes related to virulence factors, besides we verified its environment persistence and its antimicrobial susceptibility by disc-diffusion. We observed resistance to tetracycline (17.5%), ampicillin (10%), cefotaxime (7.5%), cotrimoxazole (5%) and chloramphenicol (2.5%). All strains possessed invA, sipB, sipD, ssaR, sifA, sitC, iroN, tolC, flgK, fljB and flgL genes. The genes sopB and sipA was present in 92.5% of the isolates, while sopD and spvB were observed in 90% and 32.5% of the strains, respectively. All strains adhered and invaded HeLa cells, with invasion index varying from 1.4 to 73.8%. Regarding to biofilm production, 31 (77.5%) strains were able to produce biofilm on polystyrene microplates. The Pulsed-field gel electrophoresis technique (PFGE) detected the existence of clones in the environment for up to 18 weeks, among de 20 sampled. It was not possible to establish a correlation between adhesion and invasion rates and the presence/absence of effector protein coding ge... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5) is the etiologic agent of neurological disease in calves. The use of recombinant differential vaccines have been proposed against the disease. This dissertation relates an investigation on the attenuation in calves of three BoHV-5 recombinants with deletions in the coding regions of glycoprotein E (BoHV-5gEΔ), thymidine kinase (BoHV-5TKΔ) or both (BoHV-5gETKΔ) for potential use in vaccines. Each of the four groups of calves was inoculated intranasally with one of the mutants or the wild type virus (wt [SV507/99]) and monitored thereafter. The calves inoculated with wt virus shed virus for an average of 12.3 days (106.8DICC50/mL), in the group BoHV-5gEΔ for 11 days (105.1DICC50/mL), in the group BoHV-5TKΔ for 9.6 (105.9DICC50/mL) and in the group BoHV-5gETKΔ for 6.2 days (104.7DICC50/mL). No respiratory or systemic signals were observed in animals inoculated with the recombinants, while two calves of the wt group presented neurologic disease and were euthanyzed in extremis. Seroconversion was verified on the 32 days post-inoculation (pi) in all animals of group wt and BoHV-5gEΔ, while 2 and 4 animals of the groups BoHV-5TKΔ e BoHV-5gETKΔ seroconverted, respectively. Aiming at reactivating latent infection, on the 42 days pi, animals were treated with dexamethasone (Dx). Reactivation was achieved in wt group while groups BoHV-5gE and BoHV-5TKΔ shed virus only for one or two days. No virus shedding was verified on group BoHV-5gETKΔ. Euthanasia was executed 30 days later and brain sections were collected for DNA viral detection. Viral DNA was detected in the brain of wt inoculated animals and in restricted brain sections in the BoHV-5gEΔ group. These results demonstrated that mutants are fully attenuated for calves during acute infection and present a reduced ability to establish and/or reactivate latent infection after Dx administration. Therefore these recombinants may be useful in vaccine formulations. / O herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) é o agente de doença neurológica grave em bovinos. A utilização de vacinas recombinantes tem sido preconizada para o controle da infecção pelo BoHV-5. O objetivo do presente trabalho foi investigar a patogenia, em bezerros, de três recombinantes do BoHV-5, com deleções nos genes da glicoproteína E (BoHV-5gEΔ), da enzima timidina quinase (BoHV-5TKΔ) ou ambos (BoHV-5gETKΔ) para uso potencial em vacinas. Para isso, quatro grupos de bezerros com 80 a 90 dias de idade foram inoculados pela via intranasal (IN) com um dos recombinantes ou com a cepa parental (SV507/99) e monitorados nos dias seguintes à inoculação. Os animais inoculados com o vírus parental (SV507/99) excretaram vírus por um período médio de 12,3 dias (título máximo 106,8DICC50/mL), no grupo BoHV-5gEΔ por 11 dias (105,1DICC50/mL), no grupo BoHV-5TKΔ por 9,6 dias (105,9DICC50/mL) e no grupo BoHV-5gETKΔ por 6,2 dias (104,7DICC50/mL). Os animais inoculados com os vírus recombinantes não desenvolveram sinais respiratórios ou sistêmicos importantes; dois animais do grupo SV507/99 apresentaram doença neurológica e foram sacrificados in extremis. No dia 32 pós-inoculação (pi), todos os animais inoculados com o SV507/99 e BoHV-5gEΔ haviam soroconvertido (títulos de 4 a 8), enquanto nos grupos BoHV-5TKΔ e BoHV-5gETKΔ, dois e quatro animais soroconverteram (títulos de 2 a 8), respectivamente. No dia 42 pi, realizou-se a administração de dexametasona (Dx) na tentativa de reativar a infecção latente. Após a administração de Dx, os animais dos grupos BoHV-5gEΔ e BoHV-5TKΔ excretaram vírus por um ou dois dias. Os animais do grupo BoHV-5gETKΔ não excretaram vírus, enquanto a excreção pelos animais do grupo inoculado com o vírus parental foi mais duradoura e em maiores títulos. No dia 30 pós-Dx, os animais foram submetidos à eutanásia para a coleta do encéfalo para a pesquisa de DNA latente por PCR. Não foi detectado DNA viral no encéfalo dos animais inoculados com o BoHV-5TKΔ e BoHV-5gETKΔ, enquanto no grupo SV507/99 foi detectado em todos os animais nas diferentes secções. Dentre os animais inoculados com o recombinante BoHV-5gEΔ, foi verificada uma distribuição de DNA viral restrita, com detecção em apenas uma secção (córtex anterior, ponte ou tálamo) em três animais. Esses resultados demonstram que os recombinantes foram atenuados durante a infecção aguda; apresentaram uma capacidade reduzida de estabelecer infecção latente e não foram facilmente reativados pela administração de Dx. Com isso, constituem-se em potenciais candidatos a cepas vacinais.

A emergência de resistência à vancomicina no mundo iniciou-se no final dos anos 80, sendo primeiro documentada na parte ocidental da Europa e posteriormente nos EUA. Depois disso, o isolamento de enterococos resistentes à vancomicina (VRE - do inglês, vancomycin-resistant enterococci) tem sido continuamente reportado em diversas localizações geográficas, inclusive no Brasil. As infecções nosocomiais causadas por enterococos são grandes desafios para os médicos devido à ocorrência de isolados resistentes a múltiplos antibióticos. Diversos métodos de tipagem molecular têm sido utilizados para estudar a epidemiologia de VRE. Neste trabalho, foi realizada a caracterização genética da resistência à vancomicina e epidemiologia molecular de VREs isolados de pacientes de dois hospitais de Ribeirão Preto, o Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo (HCFMRP-USP) e a Santa Casa de Misericórdia de Ribeirão Preto (SCMRP), no período de setembro de 2008 a setembro de 2010. Foram estudados também os primeiros VREs isolados no HCFMRP-USP, em meados de 2005/2006. Foram determinadas as espécies e os genótipos de 53 VREs, pela reação da polimerase em cadeia (PCR), e todos eram E. faecium e apresentavam o gene vanA. Todos E. faecium isolados dos 2 hospitais em estudo apresentaram CIM para vancomicina >256?g/mL pelo Etest®, já daptomicina mostrou valores de CIM dentro do limite de sensibilidade para todos os enterococos analisados. Com relação aos fatores de virulência, foi evidente a predominância dos genes acm e esp nos E. faecium estudados. Os primeiros VREfm (do inglês, vancomycin-resistant E. faecium) isolados em meados de 2005/2006 de pacientes do HCFMRP-USP apresentaram o transposon Tn1546 intacto, já todos os E. faecium isolados do HCFMRP-USP e da SCMRP, no período de setembro de 2008 a setembro de 2010, apresentaram produto de amplificação maior do que os 4,4kb esperados para grupamento gênico vanRSHAX. Resultados de overlapping PCR e sequenciamento da região do transposon que amplificou fragmento de DNA com tamanho maior que o esperado utilizando primers P11-P12, mostraram que 81% (43 VREfm) isolados nos dois hospitais em estudo, no período de setembro de 2008 a setembro de 2010, apresentaram deleção da extremidade esquerda do Tn1546 e insersão (IS1251), entre genes vanS e vanH. A análise da PFGE dos VREfm em estudo mostrou que havia ocorrido disseminações clonais com determinados perfis de PFGE em períodos específicos. O fato dos primeiros VREfm terem apresentado perfil de PFGE diferente da maioria dos isolados, não permitiu que se determinasse o ancestral comum por PFGE, mas resultados de MLST mostraram que VREfm isolados, no período de 2008-2010, podem ser descendentes diretos destes cinco primeiros VREfm ou podem ter evoluído de um mesmo ancestral comum. A análise da tipagem por MLST de 31 linhagens de VREfm selecionadas a partir dos resultados de PFGE, mostrou que havia 9 STs diferentes, dentre estes, sendo 5 STs novos (656, 657, 658, 659 e 660). Os STs predominantes foram STs 412 e 478. Todos STs identificados pertenciam ao complexo clonal 17 (CC17), com exceção do ST658 que era um singleton. O ST78 que vem se disseminando mundialmente, foi identificado pela primeira vez no Brasil em linhagens do presente estudo. E, por fim, a tipagem por MLST comprovou o que já havia sido determinado pelos resultados de PFGE, que existe relação clonal entre linhagens isoladas nos dois hospitais estudados de Ribeirão Preto. / World reports on vancomycin resistance emerged in the late 1980s and first documented in Western Europe and later in the United States. Since then, isolation of vancomycin-resistant enterococci (VRE) has been continuously reported in several geographic locations, including Brazil. The widespread occurrence of strains resistant to multiple antibiotics present a challenge to clinicians when treating enterococci caused nosocomial infections. Several molecular typing methods have been used to study the epidemiology of VRE. In this study, genetic characterization of vancomycin resistance and molecular epidemiology were performed in VREs isolated from patients in two hospitals in Ribeirão Preto, Sao Paulo/Brazil, the University Hospital of the Faculty of Medicine of Ribeirao Preto, University of Sao Paulo (HCFMRP-USP) and the Santa Casa de Misericórdia de Ribeirão Preto (SCMRP), from September 2008 to September 2010. The first five VREs isolated in the HCFMRP-USP, in mid 2005/2006 were also included in this study. Species and genotypes of 53 VREs determined by the polymerase chain reaction (PCR) were all E. faecium and had the vanA gene. MICs for vancomycin determined by Etest® were >256?g/mL for all E. faecium isolated in the two hospitals, whereas daptomycin showed MIC values within the limit of susceptibility for all the enterococci analyzed. acm and esp genes predominated as virulence factors. The first five vancomycin resistant E. faecium (VREfm) isolated in mid 2005/2006 showed an intact Tn1546 transposon, whereas all E. faecium isolated later, September 2008 to September 2010, gave a larger amplified DNA fragment than the expected 4,4kb gene cluster vanRSHAX. Results of overlapping PCR and sequencing (primers P11-P12) of the transposon region that amplified the larger than expected DNA fragment showed that 81% (n=43) of the these VREfm had a deletion of the left end of Tn1546 and also a IS1251, between the vanS and vanH genes. The analysis of VREfm PFGEs indicated the occurrence of clonal disseminations with some PFGE profiles at specific times. The different PFGE profiles of the first VREfm (2005-2006) in relation to the latter isolates showed that the common ancestor could not be determined by PFGE. However, MLST results indicated that VREfm isolated, in the period from 2008 to 2010, could be direct descendants of the first five VREfm or could have evolved from a common ancestor. MLST analysis of 31 VREfm isolates selected according to the PFGE results, showed that there were nine different STs, among these five new STs (656, 657, 658, 659, 660). The predominant STs were ST412 and 478. All STs identified belonged to clonal complex 17 (CC17), except for ST658, a singleton. The ST78 that has spread worldwide is being identified in Brazil for first time in this study. MLST confirmed PFGE results showing that there is a clonal link between strains isolated in the two hospitals of Ribeirao Preto, Sao Paulo, Brazil.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-11-30Bitstream added on 2014-06-13T20:44:12Z : No. of bitstreams: 1 santo_e_dr_jabo.pdf: 2769623 bytes, checksum: 67ca8d21675f50ba7c4d00ceff7f7038 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Esta pesquisa foi realizada em 23 açougues da cidade de T aquaritinga, estado de São Paulo, durante um período de 10 meses. Foram isoladas duzentas e oitenta e sete cepas de Escheríchía calí de carne moída, moedor de carne e mãos de manipuladores de carne. Cinco destas cepas foram caracterizadas como E.coli patogênica extra-intestinal (ExPEC). Investigou-se a presença de fímbrias, produção de hemolisina, aerobactina e colicina. Também foi analisada a presença dos genes (pap, afa, sfa) relacionados com a expressão de fímbrias, através da reação em cadeia da polimerase (PCR). Das amostras analisadas 100% apresentavam aerobactina e fímbria do tipo 1, 80% produziam hemolisina, e 60% expressaram colicina e fímbria P. Também foi verificado que 60% das cepas de ExPEC apresentavam o genótipo pap e 40% o genótipo pap-sfa concomitantemente. Quanto ao nível de resistência aos 12 antimicrobianos testados, observou-se que 80% das cepas eram resistentes a múltiplos antimicrobianos (3). Os antimicrobianos mais eficientes foram: ceftriaxona e amoxicilina-ácido clavulânico (0%) de resistência, seguidos de amicacina, amoxicilina, ciprofloxacina e gentamicina com resultado, considerado satisfatório, de 20% de resistência. Em contraste, houve elevada resistência (80%) para tetraciclina e estreptomicina . Conclui-se que retalhos de carne podem ser um importante veículo para disseminação na comunidade de cepas ExPEC. Este trabalho chama a atenção para os retalhos de carne como fonte potencial de cepas de ExPEC, que não são reconhecidas como patógeno de origem alimentar, o que pode representar um motivo de preocupação para as autoridades da vigilância epidemiológica. / For ten months, at Taquaritinga city, São Paulo State, we have conducted an malysis over meat conditions, at 23 butcheries. In this survey we collected. two hundred eighty seven generic Escherichia coli from ground beef, mincers and of the hands of neat manipulators. Five of these isolates were recognized as Extraintestinal Pathogenic :.coli (ExPEC) strains. The presence of fimbriae, hemolysin production, aerobactin and colicin. were lVestigated, as well the existence of genes (pap, ata, sfa) related to fimbriae !xpression, using a Polimerase Chain Reaction (PCR). In this ExPEC strains, we have verified the presence of aerobactin and fimbriae Ipe 1 (100%), hemolysin (80%) and related results for colicin and P fimbriae (60%). We Iso confirmed that 60% of ExPEC strains exhibited pap, and 40% were simultaneously, ap-sfa.. From twelve antimicrobial agents tested, we found a resistance levei (80%) to lultiple antimicrobial agents (~3). The most efficient antimicrobial agents were: 3ftriaxone and amoxacilin-clavulanic acid (0%) resistance, followed by a satisfactory resistance for amicacin, amoxacilin, ciprofloxacin and gentamicin (20%). In contrast, we lund a high levei of resistance (80%) for tetracycline and streptomycin. From this study, we have toncluded that meat can be a very important vehicle for community dissemination of ExPEC, which may represent a reason of concern.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-12-13Bitstream added on 2014-06-13T19:22:47Z : No. of bitstreams: 1 bernardi_aca_dr_arafcf.pdf: 1525508 bytes, checksum: c65f0bdce77e95dac615f5ee33dd6287 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Os Staphylococcus coagulase-negativa, particularmente, os Staphylococcus epidermidis são a causa mais freqüente de infecções relacionadas ao cateter por sua habilidade em aderir a uma superfície e entre si (aderência intercelular) formando biofilme em multicamadas sobre superfícies de polímeros. O objetivo do presente estudo foi avaliar cepas hospitalares de Staphylococcus coagulasenegativa isoladas de cateteres intravenosos, quanto à resistência a oxacilina, produção de slime, aderência ao poliestireno, habilidade de formar biofilme sobre superfícies abióticas (cateter esterilizado) e a presença de genes icaAD. Na presente pesquisa, a presença de icaA e icaD foi determinada pelo método PCR, em uma coleção de 27 amostras Staphylococcus coagulase-negativa (10 Staphylococcus epidermidis, 4 S. haemolyticus, 2 S. hominis, 2 S. lugdunensis, 1 S. saprophyticus, 1 S. schleiferi, 2 S. xylosus e 4 S. warneri). Os genes icaAD foram detectados em dez cepas S. epidermidis... / Coagulase-negative Staphylococcus, particularly, Staphylococcus epidermidis are frequent cause of infections associated with catheters and is attributed to the attachment ability on a surface and each other (intercellular adhesion) forming a multilayered biofilm on polymeric surfaces. The objective of the present study was to evaluate coagulase-negative Staphylococcus strains isolated from intravenous catheters by oxacillin resistance, slime production (qualitative method) and spectrophotometric assay (quantitative method), ability to form biofilm on abiotic surfaces (steriled catheter) and the presence of icaAD genes. In the present study icaA and icaD were determined by PCR method, in a collection of 27 coagulasenegative Staphylococcus (10 Staphylococcus epidermidis, 4 S. haemolyticus, 2 S. hominis, 2 S. lugdunensis, 1 S. saprophyticus, 1 S. schleiferi, 2 S. xylosus and 4 S. warneri). The icaA genes were detected in nine S. epidermidis and icaD in ten. The slime-producing ability was determined by culture on Congo red agar plates in which slime-producing strains formed black colonies in 10 S. epidermidis, 4 S.haemolyticus, 4 S. warneri, 2 S. xylosus and 1 S. chromogenes, while nonslimeformingones develop red colonies. The quantitative assay of coagulase-negative Staphylococcus was observed in 19 strains, including: 10 S. epidermidis, 3 S.haemolyticus, 3 S. warneri, 2 S. xylosus, 1 S. chromogenes. The ability of coagulasenegative Staphylococcus to form biofilm embedded in an amorphous substance wasobserved by scanning electronic microscope on abiotic surface in 10 S. epidermidis,3 S. haemolyticus, 2 S. hominis, 2 S. lugdunensis, 1 S. saprophyticus, 1 S. schleiferi,2 S. xylosus and 3 S. warneri. The oxacillin resistance was observed in 9 strains S.epidermidis, 3 S. haemolyticus, 3 S. warneri, 1 S. xylosus and 1 S. chromogenes. All strains of staphylococci were susceptible... (Complete abstract, click eletronic address below)

Orientador: Ana Maria Centola Vidal / Banca: Karina Paes Bürger / Banca: Andréia Cristina Nakashima Vaz / Resumo: O tratamento térmico por UAT elimina formas vegetativas dos microrganismos, porém, formas esporuladas altamente resistentes ao calor podem permanecer nos produtos e após a germinação dos esporos são capazes de liberar toxinas causadoras de doenças transmitidas por alimentos (DTAs). No presente estudo, objetivou-se avaliar a qualidade microbiológica de produtos tratados por UAT, por meio da contagem de microrganismos heterotróficos aeróbios mesófilos, isolamento e contagem de bactérias do grupo do Bacillus cereus e de Clostridium perfringens, comparar lotes dos três produtos quanto a tais microrganismos, identificar a espécie dos isolados e a presença dos fatores de virulência de bactérias do grupo do B. cereus. Para isso, foram obtidas 75 amostras, sendo 25 de cada produto (de leite de cabra UAT, alimento com soja UAT e bebida de leite de cabra e soja UAT), de 5 diferentes lotes, no comércio do interior do Estado de São Paulo. Os resultados evidenciaram possíveis falhas de processamento e utilização de matéria-prima inadequada, uma vez que altas populações (>104UFC/mL) de microrganismos heterotróficos aeróbios mesófilos foram verificadas em 100% dos lotes de alimento com soja e bebida de leite de cabra e soja e 80% dos lotes de leite de cabra. Microrganismos do grupo do B. cereus foram isolados de 80% dos lotes de alimento com soja, e 60% dos lotes de bebida de leite de cabra e soja e leite de cabra, com populações superiores a 1018 UFC/mL. C. perfringens foi isolado de 20% d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Heat treatment by UHT (ultra-high temperature) eliminates the vegetative forms of microorganisms, however, sporulated forms highly resistant to heat can remain in the products and following spore germination are capable of releasing toxins that cause foodborne diseases (FD's). The objective of this study is to evaluate the microbiological quality of products submitted to UHT, namely goat milk, soy food, and goat and soy milk drinks, by the counting of heterotrophic aerobic mesophilic microorganisms, the isolation and counting of bacteria from the Bacillus cereus groups and Clostridium perfringens, comparing batches of the three products for such microorganisms, to identify the species of the isolated and the presence of the virulence factors of bacteria of the B. cereus group. For this, 75 samples were obtained, 25 of each product (from UAT goat milk, food with UAT soy and drink from goat milk and UAT soy) from 5 different lots, in the interior trade of the State of São Paulo. The results demonstrated possible failures in the processing and use of inadequate raw material since high population (>104 ) of heterotrophic aerobic mesophilic microorganisms were found in 100% of the lots of soy food and goat and soy milk drinks and 80% of the lots of goat milk. Microorganisms from the B. cereus group were isolated from 80% of the lots of soy food and 60% of the lots of goat and soy milk drinks, with population above 1018 . The C. perfringens microorganisms were isolated from 20% of the soy food lots, with population above 103 . In the comparison between the lots, the expiration date did not influence the population of the analyzed microorganisms, therefore, they were conveyed by the raw material used. Of the B. cereus isolated, 100% (29/29) showed amplification for the hbl complex gene, 96,5% (28/29) for the nhe complex gene and 75,8% (22/29) for t... Complete abstract click electronic access below / Mestre

Orientador: José Moacir Marin / Banca: Maria Cristina Monteiro de Souza-Gugelmin / Banca: Luiz Florencio Franco Margatho / Banca: Clóvis Maurílio de Souza / Banca: Roberto Alves de Oliveira / Resumo: Esta pesquisa foi realizada em 23 açougues da cidade de T aquaritinga, estado de São Paulo, durante um período de 10 meses. Foram isoladas duzentas e oitenta e sete cepas de Escheríchía calí de carne moída, moedor de carne e mãos de manipuladores de carne. Cinco destas cepas foram caracterizadas como E.coli patogênica extra-intestinal (ExPEC). Investigou-se a presença de fímbrias, produção de hemolisina, aerobactina e colicina. Também foi analisada a presença dos genes (pap, afa, sfa) relacionados com a expressão de fímbrias, através da reação em cadeia da polimerase (PCR). Das amostras analisadas 100% apresentavam aerobactina e fímbria do tipo 1, 80% produziam hemolisina, e 60% expressaram colicina e fímbria P. Também foi verificado que 60% das cepas de ExPEC apresentavam o genótipo pap e 40% o genótipo pap-sfa concomitantemente. Quanto ao nível de resistência aos 12 antimicrobianos testados, observou-se que 80% das cepas eram resistentes a múltiplos antimicrobianos (3). Os antimicrobianos mais eficientes foram: ceftriaxona e amoxicilina-ácido clavulânico (0%) de resistência, seguidos de amicacina, amoxicilina, ciprofloxacina e gentamicina com resultado, considerado satisfatório, de 20% de resistência. Em contraste, houve elevada resistência (80%) para tetraciclina e estreptomicina . Conclui-se que retalhos de carne podem ser um importante veículo para disseminação na comunidade de cepas ExPEC. Este trabalho chama a atenção para os retalhos de carne como fonte potencial de cepas de ExPEC, que não são reconhecidas como patógeno de origem alimentar, o que pode representar um motivo de preocupação para as autoridades da vigilância epidemiológica. / Abstract: For ten months, at Taquaritinga city, São Paulo State, we have conducted an malysis over meat conditions, at 23 butcheries. In this survey we collected. two hundred eighty seven generic Escherichia coli from ground beef, mincers and of the hands of neat manipulators. Five of these isolates were recognized as Extraintestinal Pathogenic :.coli (ExPEC) strains. The presence of fimbriae, hemolysin production, aerobactin and colicin. were lVestigated, as well the existence of genes (pap, ata, sfa) related to fimbriae !xpression, using a Polimerase Chain Reaction (PCR). In this ExPEC strains, we have verified the presence of aerobactin and fimbriae Ipe 1 (100%), hemolysin (80%) and related results for colicin and P fimbriae (60%). We Iso confirmed that 60% of ExPEC strains exhibited pap, and 40% were simultaneously, ap-sfa.. From twelve antimicrobial agents tested, we found a resistance levei (80%) to lultiple antimicrobial agents (~3). The most efficient antimicrobial agents were: 3ftriaxone and amoxacilin-clavulanic acid (0%) resistance, followed by a satisfactory resistance for amicacin, amoxacilin, ciprofloxacin and gentamicin (20%). In contrast, we lund a high levei of resistance (80%) for tetracycline and streptomycin. From this study, we have toncluded that meat can be a very important vehicle for community dissemination of ExPEC, which may represent a reason of concern. / Doutor

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Coorientador: Carlos Magno Castleo Branco Fortaleza / Banca: Carlos Roberto Veiga Kiffer / Banca: Elizabeth Losshchagin Pizzolitto / Resumo: Estudos recentes apontam para elevação da incidência e da gravidade das infecções por Staphylococcus aureus. Esse fato é agravado pela ampla disseminação de isolados de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA) nos hospitais, além de sua recente introdução na comunidade. A colonização nasal de indivíduos assintomáticos é o principal fator responsável pela persistência e disseminação de S. aureus nas populações humanas. Assim sendo, inquéritos de carreamento nasal são importantes para estimar a "carga" (burden) de S. aureus como um todo e de MRSA na comunidade. Além disso, a compreensão da relação bactéria-hospedeiro e dos fatores de virulência envolvidos se faz necessária para o combate às infecções que colocam em risco a vida da população em geral. O presente trabalho teve como objetivo investigar a distribuição de clones de Staphylococcus aureus e MRSA na população da área urbana de Botucatu, SP, identificando a prevalência dos determinantes de virulência junto aos fatores de risco associados em isolados obtidos da nasofaringe de indivíduos hígidos do município. Um total de 223 amostras de S. aureus isoladas de secreções nasais foi submetido a testes de susceptibilidade antimicrobiana à oxacilina e cefoxitina através da técnica de discodifusão. O método de E-test foi empregado para determinar a Concentração Inibitória Miníma (CIM) em amostras resistentes. Em seguida, foram realizadas reações de PCR para a detecção dos genes mecA, genes codificadores de fatores de virulência das enterotoxinas (sea, seb e sec) e toxina associada à síndrome do choque tóxico (tst); toxinas esfoliativas A e B (eta, etb), leucocidina de Panton-Valentine (lukS-PV e lukF-PV), hemolisinas alfa e delta (hla e hld); e biofilme (icaA e icaD). A tipagem molecular para a determinação dos clusters foi realizada pela técnica de PFGE. Para avaliar os fatores ... / Abstract: Recent findings show an increase on the incidence and severity of Staphylococcus aureus infection. This fact is worsened by the wide dissemination of the methicillin-resistant S. aureus (MRSA) isolates in hospitals and its recent introduction in the community settings. The nasal colonization in asymptomatic individuals remains the main factor responsible for the persistence and dissemination of S. aureus in the human population. Thereby, nasal carriage surveys are an important tool in order to estimate the total S. aureus burden and the MRSA in the community. Besides, understanding the bacterial-host relationship and the virulence factors involved is necessary in order to manage the infections that jeopardize the population's health. The present study aims at investigating the clonal distribution of S. aureus and MRSA strains in an urban population area in Botucatu, SP, identifying both the prevalence of the virulence determinants together to the associated risk factors in samples obtained from the nasopharynx of healthy individuals from Botucatu. A total of 223 S. aureus samples isolated from nasal secretions were submitted to the antimicrobial susceptibility tests through the disk-difusion method with oxacillin and cefoxitin disks. The E-test method with oxacillin was applied in order to obtain the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) among oxacillin disk resistant samples. Afterwards, PCR (Polimerase Chain Reaction) was carried out for the detection of the mecA gene and of the following virulence genes: enterotoxins (sea, seb and sec), toxic shock syndrome toxin (tst), exfoliative toxin A and B (eta, etb), Panton-Valentine Leukocidin (lukS-PV and lukF-PV), alphaand delta-hemolysins (hla and hld), and biofilms (icaA and icaD). The PFGE molecular typing was employed in order to determine the prevalent clusters. The univariate and multivariate linear regression was carried out so that the risk factors ... / Mestre

Orientador: Ana Lúcia Barretto Penna / Banca: Kátia Sivieri / Banca: Sabrina Neves Casarotti / Banca: Ana Carolina Conti Silva / Banca: Natália Soares Janzanti / Resumo: A busca por alimentos que proporcionem melhorias na saúde e bem estar dos consumidores é uma tendência mundial. Os produtos lácteos fermentados estão incluídos entre os alimentos que atendem a esta demanda. O objetivo desta pesquisa foi selecionar novas linhagens de bactérias ácido-láticas (BAL) potencialmente probióticas e seguras, bem como avaliar a aplicação das cepas selecionadas em leite. Na primeira etapa, o potencial probiótico (capacidade de hidrolise de sais biliares [BSH], capacidade de autoagregação, coagregação com Lactobacillus spp. e Listeria spp. e hidrofobicidade e tolerância em diferentes valores de pH e concentrações de NaCl) e a segurança (susceptibilidade a antibióticos e degradação da mucina) foram avaliados em vinte cepas de BAL, previamente isoladas de queijo muçarela de búfala e identificadas como Lactobacillus helveticus (SJRP56 e SJRP191), Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus (SJRP49), Lactobacillus fermentum (SJRP42), Enterococcus durans (SJRP14, SJRP17, SJRP25, SJRP26 e SJRP68), Enterococcus faecium (SJRP20, SJRP28, SJRP65, SJRP69) e Enterococcus sp. (SJRP04, SJRP11, SJRP16, SJRP101, SJRP120, SJRP122 e SJRP125). Seis cepas apresentaram atividade de BSH e a maioria delas apresentou elevada capacidade de autoagregação e hidrofobicidade. Algumas cepas apresentaram capacidade de coagregação com outras BAL e patógenos. A maioria das cepas cresceu bem em pH neutro e a tolerância ao NaCl foi dependente da temperatura. Nenhuma das... / Abstract: The search for food which improves consumer health and well-being is a worldwide trend. The fermented dairy products are included among food which satisfies this demand. The aim of this research was to select new strains of lactic acid bacteria (LAB) potentially probiotic and safe, as well as to evaluate the application of selected strains in milk. In the first stage, the probiotic potential (bile salt hydrolase capacity [BSH], capacity of auto-aggregation, co-aggregation with Lactobacillus spp. and Listeria spp., hydrophobicity, tolerance in different pH values and concentrations of NaCl) and safety (susceptibility to antibiotics and mucin degradation) were evaluated in twenty LAB strains, previously isolated of water- buffalo mozzarella cheese and identified as Lactobacillus helveticus (SJRP56 and SJRP191), Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus (SJRP49), Lactobacillus fermentum (SJRP42), Enterococcus durans (SJRP14, SJRP17, SJRP25, SJRP26 and SJRP68), Enterococcus faecium (SJRP20, SJRP28, SJRP65, SJRP69) and Enterococcus sp. (SJRP04, SJRP11, SJRP16, SJRP101, SJRP120, SJRP122 and SJRP125). Six strains presented BSH activity and most of them presented high capacity of auto-aggregation and hydrophobicity. Some strains presented capacity of co-aggregation with other LAB and pathogens. The majority of strains grew well in neutral pH and the tolerance to NaCl was dependent on the temperature. None of the LAB degraded the mucin; however, some of them presented resistance to ... / Doutor

Orientador: Cristiano Gallina Moreira / Banca: Waldir Pereira Elias Nunes / Banca: Carla Raquel Fontana Mendonça / Resumo: A sinalização química é o mecanismo através do qual bactérias patogênicas interagem com o hospedeiro e sua microbiota, de modo a promover a regulação dos seus mecanismos de virulência. O estudo da sinalização química, em bactérias entéricas, do sistema de 2-componentes QseBC via autoindutor-3 (AI-3), epinefrina (Epi) e norepinefrina (NE), tem aberto perspectivas para desvendar novos mecanismos. Escherichia coli O104:H4 possui características fenotípicas clássicas de E. coli enteroagregativa (EAEC) e se apresenta positiva para toxina de Shiga, encontrada em cepas de E. coli enterohemorrágica (EHEC). A presença dessa toxina pode levar o hospedeiro ao desenvolvimento de complicações mais graves, como a síndrome hemolítica urêmica (SHU). Dessa forma, essa combinação se torna altamente perigosa e patogênica a humanos, conforme observado no surto epidêmico em 2011 na Europa. O presente estudo teve como objetivo investigar a sinalização química e os mecanismos de patogenicidade em EAEC O104:H4 C227-11, já descritos em EAEC e EHEC, bem como buscar mecanismos ainda não elucidados na literatura. Comparada com cepas protótipos de E. coli diarreiogênicas, os resultados demonstraram que a cepa C227-11 possui um fenótipo de adesão e formação de biofilme acentuados. Em meio ácido, apresentou mais robustez na sobrevivência e maior motilidade em relação à EAEC 042. Também foi possível observar que o nível de expressão gênica para qseC apresentou-se semelhante ao de EHEC e exerce um importante... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chemical signalling is the mechanism through which pathogenic bacteria interact with the host microbiota, in order to promote regulation of virulence mechanisms. The study of chemical signalling in two-component system QseBC in enteric bacteria, by autoinducer3 (AI-3), epinephrine (Epi) e norepinephrine (NE), has opened perspectives to discover new mechanisms. Escherichia coli O104:H4 has classic phenotypic characteristics of enteroaggregative E. coli (EAEC) and presents itself positive for Shiga toxin, which is found in enterohemorrhagic E. coli strains (EHEC). This toxin may lead the host to the development of more serious diseases, such as the Hemolytic Uremic Syndrome (HUS). Therefore, this combination is highly dangerous and pathogenic to humans, as observed during the epidemic outbreak in Europe in 2011. This study aimed to investigate chemical signalling and mechanisms of pathogenicity in EAEC O104:H4 C227-11, already described in EAEC and EHEC, as well as mechanisms still not elucidated in literature. Compared to prototype strains of diarrheagenic E. coli, the results have shown that C227- 11 has accentuated phenotype of adhesion and biofilm formation. In acid medium, it presented more strength of survival and more motility than EAEC 042. In addition, gene expression level in qseC was found similar to EHEC and it holds an important participation in activation of virulence factors expression, highlighting, thereby, the possibility of its participation in related mechanisms. Through in vivo tests, it was noticed considerable variation of microbiota, compared to C227-11, just as significant differences among other EAEC that mostly did not present great alterations during analysed days, with predominance of Bacteroidetes over Firmicutes Phylum. The conclusion was that its large profile of adhesion and its elevated tolerance... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre