Streptococcus mutans (S. mutans) é considerado o principal agente etiológico da cárie dentária e estudos acerca de sua virulência têm sido realizados com o intuito de compreender melhor os mecanismos de patogenia da doença. Dentre outros fatores, a virulência dessa espécie bacteriana está relacionada a sua habilidade em produzir proteína ligante de glucano tipo A (GbpA) e mutacinas, proteínas que desempenham importante papel na adesão celular e colonização da superfície dentária. Desta forma, o objetivo da presente pesquisa foi analisar, geneticamente, esses fatores de virulência de S. mutans e verificar sua relação com a persistência e transmissão de genótipos entre os membros de oito famílias brasileiras. Foram utilizados 392 isolados clínicos de S. mutans obtidos a partir da saliva de 20 indivíduos adultos cárie-ativos. Os microrganismos foram previamente identificados e genotipados em um estudo anterior que avaliou sua transmissibilidade e estabilidade ao longo do tempo. As amostras estocadas a -86°C foram reativadas por semeadura em diferentes meios de cultura (ágar sangue e ágar Mitis Salivarius Bacitracina Sacarose) e repicadas em caldo de Infusão de Cérebro e Coração. Após extração do DNA cromossômico bacteriano foram realizadas análises genético-moleculares, por meio da reação em cadeia da polimerase, visando a detecção nas amostras dos genes envolvidos na produção de GbpA (gbpA) e codificadores dos tipos I, II, III e IV de mutacinas (mutAI, mutAII, mutAIII e mutAIV). Os dados obtidos foram analisados por meio das estatísticas descritiva e inferencial, utilizando-se os testes de Qui Quadrado, Odds Ratio (OR) e exato de Fisher, a um intervalo de confiança de 95% (IC95%) e nível de significância de 5%. Os genes gbpa, mutAI, mutAII, mutAIII e mutAIV foram detectados, respectivamente, em 77,3%, 12,5%, 51%, 16,6% e 89,8% dos isolados de S. mutans considerados viáveis (N=392). A virulência do S. mutans apresentou associação com sua transmissão (P<0,001) e estabilidade (P=0,011), sendo que os genótipos mais virulentos apresentaram aproximadamente três vezes mais chance de serem transmitidos (OR=3,07; IC95% 2,02 - 4,66) e aproximadamente duas vezes mais chance de persistirem na cavidade bucal dos indivíduos (OR=2,06; IC95% 1,17 - 3,63) do que os menos virulentos. Apesar da prevalência dos genes mutAI (P<0,001) e mutAIII (P<0,001) terem sido diferentes entre os genótipos de S. mutans transmitidos e não transmitidos, não houve associação (P=0,357) entre a experiência de cárie dentária das crianças e a virulência dos genótipos adquiridos. Os resultados sugerem que os genótipos dotados de informação genética para sintetizar GbpA e mutacinas apresentam importante vantagem ecológica no processo de colonização por S. mutans, mantendo-se estáveis na microbiota bucal do hospedeiro e favorecendo a transmissão intrafamiliar. / Streptococcus mutans (S. mutans) is the main etiologic agent in the development of dental caries and several studies about its virulence have been conducted to understand the mechanisms of disease pathogenesis. Among other factors, the virulence of this bacterial species is based on their ability to produce glucan-binding protein-A (GbpA) and mutacins, proteins that play an important role in cell adhesion and colonization of the dental surface. Thus, the aim of the present study was to analyze, genetically, these virulence factors of S. mutans and to investigate their relation with the persistence and transmission of genotypes among the members from eight Brazilian families. A total of 392 clinical isolates of S. mutans, collected from 20 caries-active adults, were utilized. These microorganisms were previously identified and genotyped in a study that evaluated their transmissibility and stability over time. The samples stored at -86°C were plated on different culture media (blood agar and Mitis Salivarius Sucrose Bacitracin agar) and grown in Brain Heart Infusion broth. After extraction of bacterial chromosomal DNA, the samples were amplified, by the technique of polymerase chain reaction, for the presence of genes coding for GbpA (gbpA) and for mutacins types I, II, III and IV (mutAI, mutAII, mutAIII and mutAIV). Data obtained were analyzed through descriptive and inferential statistics, using the Chi-Square, Odds Ratio (OR) and Fisher\'s exact tests, with a 95% confidence interval (95%CI) and a significance level of 5%. The gbpa, mutAI, mutAII, mutAIII and mutAIV genes were detected, respectively, in 77.3%, 12.5%, 51%, 16.6% and 89.8% of viable clinical isolates (N=392). The virulence of S. mutans was associated with the transmission (P<0,001) and stability of colonization (P=0.011). The most virulent genotypes showed approximately three times more likely to be transmitted (OR=3.07; 95%CI 2.02 - 4.66) and approximately two times more likely to persist in the oral cavity (OR=2.06; 95%CI 1.17 - 3.63) than the less virulent genotypes. Despite the prevalence of genes mutAI (P<0.001) and mutAIII (P<0.001) have been different between the genotypes of S. mutans transmitted and no transmitted, there was no association (P=0.357) between the experience of dental caries of children and the virulence of the acquired genotypes. The results suggest that the genotypes with genetic information to synthesize GbpA and mutacins can represent an important ecological advantage in the process of colonization by S. mutans, remaining stable in the oral microbiota of the host and favoring an intrafamilial transmission.

A colibacilose aviária caracteriza-se como uma infecção extra-intestinal secundária a outros agentes. É responsável por grandes perdas econômicas na criação de aves comerciais, sendo sua prevenção fundamental para minimizar prejuízos. O objetivo deste estudo foi atenuar cepas virulentas de Escherichia coli aviárias, por indução de mutagênese química. Foram selecionadas nove (09) cepas pertencentes à coleção de cultura do Laboratório de Ornitopatologia da FMVZ-USP. Todas as cepas estudadas foram resistentes à eritromicina, lincomicina, oxaciclina, penicilina, tiamulina e tilmicosin e sensíveis ao ácido nalidíxico, cloranfenicol, ciprofloxacina, colistina, enrofloxacina, florfenicol e gentamicina. Ocorreram resistências nas amostras analisadas de 33,33%, 22,22%, 11,11%, 55,55%, 66,66%, 77,77%, 33,33%, 22,22%, 22,22% e 33,33%, respectivamente, a amoxacilina, a ampicilina, a doxaciclina, a espectiomicina, a estreptomicina, a lincomicina-espectiomicina, a neomicina, a rifampicina, a tetraciclina e ao trimetropin-sulfa. Induziu-se resistência a estreptomicina ou rifampicina ou ácido nalidíxico como marcadores. Não houve o desenvolvimento de resistências a outros antimicrobianos testados, após a exposição a substância mutagênica. Os resultados da amplificação dos genes por PCR, mostraram que todas as cepas foram negativas para papC, cnf e astA e todas foram positivas para iuc e irp2. Duas cepas foram positivas para os genes vat, cinco para iss, quatro para o gene tsh, uma para cvi/cva, duas para sfaI e uma para astA. Após o uso da substância mutagênica duas cepas apresentaram reações negativas para os genes tsh, cvi/cva e sfaI e uma cepa para o gene astA. No teste de AFLP verificaram-se diferenças em similaridade de bandas em oito (08) das nove (09) cepas, quando comparadas com a amostra tratada com a substância mutagênica, sendo que este indice variou de 40% a 96,3%. Embora no teste de patogenicidade em pintinhos de um dia de idade não tenha ocorrido diferenças significativas na mortalidade nos diferentes grupos estudados, houve alteração de patogenicidade em cinco cepas expostas à substância mutagênica. Ocorreram reduções significativas em relação ao escore de lesões quando os grupos foram comparados (p<0,05), indicando atenuação pela substância mutagênica. / The avian colibacillosis is characterized as an extraintestinal infection which is secondary to other agents. It is responsible for considerable economic loss in the breeding of commercial birds, making its prevention essential to reducing damages. The aim of this study was to attenuate viral strains of avian Escherichia coli, using chemical mutagenesis induction. Nine (09) strains were selected from the culture collection of the Ornitopathology Laboratory of the School of Veterinary Medicine of the University of São Paulo. All analyzed strains were resistant to erythromycin, lincomicin, oxacillin, penicillin, tiamulin and tilmicosin and they were sensitive to nalidixic acid, chloramphenicol, ciprofloxacin, colistin, enrofloxacin, florfenicol and gentamicin. The analyzed samples presented the following resistance levels: 33.33%, 22.22%, 11.11%, 55.55%, 66.66%, 77.77%, 33.33%, 22.22%, 22.22% and 33.33% to, respectively, amoxicillin, ampicillin, doxycycline, spectinomycin, streptomycin, lincomycin-spectinomycin, neomycin, rifampicin, tetracycline and trimethoprim-sulfa. The resistance to streptomycin or rifampicin or nalidixic acid was induced as a marker. There was no development of resistance to other tested antimicrobials after the exposure to the mutagenic substance. The results of the PCR gene amplification showed that all strains were negative for papC, cnf and astA and they were all positive for iuc and irp2. Two strains were positive for the vat genes, five for iss, four for the tsh gene, one for cvi/cva, two for sfaI and one for astA. After using the mutagenic substance, two strains presented negative reactions for the tsh, cvi/cva and sfaI genes and one strain for the astA gene. In the AFLP test, differences were found for band similarity in eight (08) out of nine (09) strains, when compared with the samples treated with the mutagenic substance and this rate varied from 40% to 96.3%. Although the pathogenicity test in one-day-old chicks did not present significant differences in the mortality rate in the different analyzed groups, there was a pathogenicity alteration in five strains exposed to the mutagenic substance. There were significant reductions regarding the lesion scores when the groups were compared (p<0,05), indicating an attenuation due to the mutagenic substance.

O surgimento de cepas bacterianas resistentes a múltiplos fármacos impulsiona a busca por agentes antimicrobianos que possuem novos mecanismos de ação, incluindo compostos antivirulência. Apesar da ampla variedade de moléculas derivadas de química combinatória produzidas pela indústria farmacêutica, produtos naturais continuam a desempenhar um papel chave no desenvolvimento de fármacos. A seleção de plantas como fonte de compostos antimicrobianos é adequada do ponto de vista ecológico, uma vez que elas naturalmente produzem uma grande variedade de metabólitos secundários que atuam como defesa química contra micro-organismos no ambiente. Neste estudo, nós relatamos que miricetina (Myr), um flavonoide comum derivado de vegetais, frutas, nozes, frutas e chá, pode diminuir a produção de vários fatores de virulência de Staphylococcus aureus utilizando diferentes ensaios fenotípicos. Para explorar o mecanismo pelo qual Myr inibe a virulência de S. aureus, enquanto a sua forma glicosilada não, verificamos os níveis de expressão de genes relacionados à virulência e empregamos simulações de dinâmica molecular com enzimas cruciais no processo de patogênese. Além disso, Myr conferiu um grau significativo de proteção contra a infecção estafilocócica em modelo in vivo de Galleria mellonella. Outro foco deste estudo e com base em dados anteriores, o extrato de Harpochilus neesianus foi selecionado para o fracionamento bioguiado, uma vez que não há estudos fitoquímicos e de atividade biológica relatados na literatura para esta espécie. Utilizando o ensaio de proteinase e análises por MALDI-TOF, peptídeos foram identificados como os compostos bioativos, sendo então isolados por cromatografia em Sephadex G-50 e RPC18. Este estudo revela compostos derivados de plantas com um elevado potencial como protótipos antivirulência contra agentes bacterianos patogênicos e uma possível aplicação destes agentes na concepção de superfícies biomédicas anti-infectivas. / The emergence of drug-resistant bacterial strains drives the search for antimicrobials possessing new modes of action, including antivirulence compounds. Despite the wide variety of molecules derived from combinatorial chemistry by the pharmaceutical industry, natural products still play a key role in the development of pharmaceuticals. The selection of plants as source of antimicrobial compounds is appropriate from the ecological standpoint, since they naturally produce a wide range of secondary metabolites that act as a chemical defense against microorganisms in the environment. In this study, we report that myricetin (Myr), a common flavonol derived from vegetables, fruits, nuts, berries and tea, can remarkably decrease the production of several Staphylococcus aureus virulence factors using different phenotypic assays. To explore the mechanism by which Myr inhibits S. aureus virulence, while its glycosylated form does not, we verified the relative expression levels of virulence related genes and employed molecular dynamics simulations with pivotal enzymes in pathogenesis process. Furthermore, Myr conferred a significant degree of protection against staphylococcal infection in Galleria mellonella in vivo model. In addition to this study and based on previous data, Harpochilus neesianus extract was selected for the bioguided fractionation, since no phytochemical studies and biological activity is reported in the literature for this species. By using proteinase assay and MALDI-TOF analyses, peptides were identified as bioactive compounds which were isolated by Sephadex G-50 and RP-C18. This study reveals plant-derived compounds with high potential as antivirulence prototypes against bacterial pathogens and a possible application of these agents in the design of anti-infective biomedical surfaces.

Wong, Sze Ki. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2011. / Includes bibliographical references (leaves 87-106). / Abstracts in English and Chinese. / Acknowledgements --- p.i / Abstract --- p.ii / Abstract in Chinese --- p.iv / Table of contents --- p.V / List of figures --- p.ix / List of abbreviations --- p.X / Chapter Chapter 1. --- General introduction --- p.1 / Chapter Chapter 2. --- Literature review --- p.6 / Chapter 2.1. --- Pathogenic mechanisms of Vibrio species in fish --- p.7 / Chapter 2.1.1. --- Introduction --- p.7 / Chapter 2.1.2. --- Adhesion --- p.7 / Chapter 2.1.3. --- Invasion --- p.8 / Chapter 2.1.4. --- Proliferation --- p.9 / Chapter 2.2. --- Vibrio virulence factors --- p.12 / Chapter 2.2.1. --- Introduction --- p.12 / Chapter 2.2.2. --- Hemolysin --- p.12 / Chapter 2.2.3. --- Protease --- p.14 / Chapter 2.2.4. --- Siderophore --- p.15 / Chapter 2.2.5. --- Lipopolysaccharide --- p.15 / Chapter 2.3. --- General apoptotic pathways --- p.17 / Chapter 2.3.1. --- Introduction --- p.17 / Chapter 2.3.2. --- Extrinsic apoptotic pathway --- p.17 / Chapter 2.3.2.1. --- Death receptor signaling apoptosis --- p.17 / Chapter 2.3.2.1.1. --- Fas signaling pathway --- p.18 / Chapter 2.3.2.1.2. --- TNF-R1 signaling pathway --- p.19 / Chapter 2.3.2.1.3. --- TRAIL receptors signaling pathway --- p.20 / Chapter 2.3.2.2. --- Growth factor receptor signaling apoptosis --- p.21 / Chapter 2.3.3. --- Intrinsic apoptotic pathway --- p.21 / Chapter 2.3.3.1. --- Mitochondrial apoptotic pathway --- p.21 / Chapter 2.3.3.1.1. --- Cyto c --- p.22 / Chapter 2.3.3.1.2. --- Smac/DIABLO --- p.22 / Chapter 2.3.3.1.3. --- Omi/HtrA2 --- p.22 / Chapter 2.3.3.1.4. --- AIF and endo G --- p.23 / Chapter 2.3.3.1.5. --- Bcl-2 family --- p.23 / Chapter 2.3.3.1.6. --- Mitochondrial membrane permeabilization (MMP) --- p.23 / Chapter 2.3.3.2. --- p53-regulated apoptotic pathway --- p.24 / Chapter 2.3.3.3. --- Endoplasmic reticulum (ER) stress-induced apoptotic pathway --- p.25 / Chapter 2.4. --- Membrane vesiculation in erythrocytes --- p.26 / Chapter 2.4.1. --- Introduction --- p.26 / Chapter 2.4.2. --- Induction of vesiculation --- p.26 / Chapter 2.4.3. --- Contents of vesicles --- p.28 / Chapter 2.4.4. --- Mechanisms involved during vesiculation --- p.29 / Chapter 2.4.5. --- Correlation between apoptosis and membrane vesiculation in erythrocytes --- p.31 / Chapter 2.4.6. --- Reasons for vesiculation --- p.31 / Chapter Chapter 3. --- "Induction of apoptosis by Vibrio alginolyticus thermolabile hemolysin (TLH) in blood cells of silver sea bream, Sparus sarba" --- p.33 / Chapter 3.1. --- Abstract --- p.34 / Chapter 3.2. --- Introduction --- p.34 / Chapter 3.3. --- Materials and methods --- p.36 / Chapter 3.3.1. --- Experimental fish --- p.36 / Chapter 3.3.2. --- Whole blood preparation --- p.37 / Chapter 3.3.3. --- Preparation of V. alginolyticus TLH --- p.37 / Chapter 3.3.4. --- "Caspase-3, -8, -9/6 fluorescent assay" --- p.38 / Chapter 3.3.5. --- TUNEL assay --- p.39 / Chapter 3.3.6. --- Apoptotic DNA ladder assay --- p.40 / Chapter 3.3.7. --- Statistical analysis --- p.41 / Chapter 3.4. --- Results --- p.42 / Chapter 3.4.1. --- "Increase of caspase-3, -8, -9/6 activities" --- p.42 / Chapter 3.4.2. --- Detection of DNA fragmentation by TUNEL assay --- p.44 / Chapter 3.4.3. --- Detection of DNA fragmentation by apoptotic DNA ladder assay --- p.44 / Chapter 3.5. --- Discussion --- p.46 / Chapter Chapter 4. --- "Occurrence of membrane vesiculation, apoptosis and post-apoptotic necrosis after exposure to Vibrio alginolyticus thermolabile hemolysin (TLH) in erythrocytes of silver sea bream, Sparus sarba" --- p.51 / Chapter 4.1. --- Abstract --- p.52 / Chapter 4.2. --- Introduction --- p.52 / Chapter 4.3. --- Materials and methods --- p.54 / Chapter 4.3.1. --- Experimental fish --- p.54 / Chapter 4.3.2. --- Whole blood preparation --- p.54 / Chapter 4.3.3. --- Preparation of V. alginolyticus TLH --- p.55 / Chapter 4.3.4. --- Light microscopy --- p.55 / Chapter 4.3.5. --- Transmission electron microscopy (TEM) --- p.56 / Chapter 4.3.6. --- Measurement of membrane vesiculation - acetylcholinesterase (AChE) assay --- p.56 / Chapter 4.3.7. --- Measurement of necrosis - hemoglobin colorimetric assay --- p.57 / Chapter 4.3.8. --- Apoptotic DNA ladder assay --- p.58 / Chapter 4.3.9. --- Flow cytometry --- p.59 / Chapter 4.3.10. --- Statistical analysis --- p.59 / Chapter 4.4. --- Results --- p.60 / Chapter 4.4.1. --- Ultrastructural changes in red blood cells after exposure to TLH --- p.60 / Chapter 4.4.2. --- Changes of cell population in size and granularity after exposure of TLH --- p.67 / Chapter 4.4.3. --- Effect of TLH dosage on necrosis and DNA fragmentation --- p.72 / Chapter 4.4.4. --- "Occurrence of membrane vesiculation, necrosis and DNA fragmentation in cells exposed to TLH" --- p.72 / Chapter 4.5. --- Discussion --- p.76 / Chapter Chapter 5. --- General conclusions --- p.82 / References --- p.87

Made available in DSpace on 2017-03-14T14:10:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-11. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-14T14:42:44Z : No. of bitstreams: 1 000874673_20170911.pdf: 818016 bytes, checksum: 898364a16badcde0704d015be3994940 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-09-11T13:56:02Z: 000874673_20170911.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-09-11T13:56:51Z : No. of bitstreams: 1 000874673.pdf: 1470716 bytes, checksum: 97c5956d3d97debe1ce5a25d65262a7d (MD5) / Este estudo teve por finalidade: I. estabelecer um protocolo reprodutível utilizando a metodologia dos halos de precipitação em meio Ágar para avaliação da produção de fosfolipase e proteinase pela espécie Candida albicans (C. albicans); II. analisar a expressão dos fatores de virulência de Ca após inativação fotodinâmica (IF) mediada pela curcumina (CUR). No primeiro estudo utilizou-se 30 isolados clínicos e uma cepa de referência de C. albicans para obtenção de suspensões celulares (108ufc/mL) que foram plaqueadas nos meios específicos. Três variáveis independentes (nº de replicatas, cor de fundo e instrumento de leitura) originaram oito protocolos de leitura. A reprodutibilidade intra e interexaminadores da medida de produção de enzima (Pz) foi avaliada por meio do Coeficiente de Correlação Intraclasse (CCI). A enzima proteinase apresentou dois protocolos com ―Boa‖ reprodutibilidade intraexaminador (CCI ≥ 0,71) para todos os examinadores e o protocolo que utilizou leituras em triplicata sobre as fotografias contra luz natural atribuiu maior reprodutibilidade interexaminador para os valores de Pz-proteinase. Três protocolos com ‗Boa' concordância intraexaminador de Pz-fosfolipase foram selecionados para a análise interexaminador. Tanto as leituras em paquímetro como as realizadas em computador, em triplicata, mostraram reprodutibilidade ‗Muito Boa'. No estudo II, a concentração de CUR a 0,1µM foi utilizada associada a iluminação LED para promover dose subletal de IF. O grupo tratamento (C+L+) teve suas células fotossensibilizadas com CUR e iluminadas. O grupo controle positivo consistiu de amostras que receberam apenas CUR (C+L-), e o controle negativo não recebeu nem CUR nem luz (C-L-). A capacidade de adesão foi avaliada por meio das unidades formadoras de colônias (ufc/mL) e do método XTT. A formação de biofilme foi analisada ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / This study aimed to: I. to establish a reproducible protocol using the agar-Based methodology to evaluate the production of the phospholipase and proteinase by the species Candida albicans (C. albicans); II. to analyze the expression of virulence factors after photodynamic inactivation (PDI) mediated by curcumin (CUR). In the first study 30 clinical isolates and a reference strain of the C. albicans were used to obtain cell suspensions (108CFU/mL) that were plated in specific media. Three independent variables (number of replicates, background color and reading instrument) originated eight reading protocols. The intra- and inter-examiner reproducibilityof the enzyme production measure (Pz) was assessed using the intraclass correlation coefficient (ICC). The enzyme proteinase presented two protocols with good intra-rater reproducibility (ICC≥0.71) and the readings in triplicate against natural light showed the highest inter-examiner reproducibility for Pz-proteinase values. Three protocols with 'Good' intra-rater agreement for Pz-phospholipase were selected for interexaminer analysis. Caliper and computer readings, performed in triplicate, showed 'Very Good' reproducibility. In Study II, CUR at 0,1μM was used with LED light to promote sublethal dose of the PDI. The treatment group (C+L+) had its cells photosensitized with CUR and illuminated. The control group consisted of the samples that received only CUR (C+L-), and another which received neither CUR or light (C-L-). The adhesion ability was evaluated by means of CFU/mL and the XTT method. Biofilm formation was analyzed by means of CFU/mL, XTT and Crystal Violet (CV). The ability to secrete degradative enzymes was evaluated by the agarbased method and a colorimetric method. The results CFU/mL, XTT, CV were evaluated using a one-way multivariate analysis of the variance (MANOVA) and when statistically significant effects were detected, One... (Complete abstract electronic access below)

Orientador: Juliana Campos Junqueira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Martha Simões Ribeiro / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica sobre a patogenicidade de C. albicans e C. dubliniensis na candidose bucal em ratos. Foram utilizados 96 ratos (Rattus norvegicus, Albinus, Wistar), sendo que 80 animais foram submetidos à indução de candidose experimental no dorso da língua por C. albicans ou C. dubliniensis e 16 ratos não foram infectados por Candida. Após 5 dias da indução da candidose, foram realizados diferentes tratamentos: laser e azul de metileno como fotossensibilizador (Grupo L+F+), apenas laser (Grupo L+F-), apenas fotossensibilizador (Grupo L-F+) e grupo sem laser e fotossensibilizador (Grupo L-F-). Após 1 dia, amostras do dorso da língua foram coletadas e semeadas em ágar Sabouraud para contagem de UFC/mL recuperadas da cavidade bucal. Os animais foram submetidos à eutanásia para análise microscópica do dorso da língua. Foi avaliada também a capacidade de produção de fosfolipase e proteinase por C. albicans e C. dubliniensis. Os resultados demonstraram que a quantidade de C. albicans recuperadas da cavidade bucal dos ratos foram semelhantes entre os quatro grupos estudados. C. dubliniensis não foi recuperarada da cavidade bucal dos ratos estudados. Na análise microscópica do dorso da língua, observou-se a presença de várias lesões teciduais induzidas por C. albicans, sendo que no grupo L+F+ essas lesões foram menores em relação aos demais grupos estudados. C. dubliniensis exibiu lesões teciduais discretas sem diferença estatística entre os grupos. Em relação aos fatores de patogenicidade de C. albicans, o grupo L+F+ produziu menor quantidade de fosfolipase e proteinase em relação aos demais grupos. C. dubliniensis produziu menor quantidade de fosfolipase em relação à C. albicans, sem diferença entre os 4 grupos estudados. Entretanto, C. dubliniensis não foi capaz de produzir proteinase... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective was to evaluate the effects of photodynamic therapy on the pathogenicity of C. albicans and C. dubliniensis in oral rats candidosis. Were evaluated 96 rats, while 80 were subjected to candidosis experimental induction on the tongue dorsum by C. albicans or C. dubliniensis and 16 rats were not infected. After 5 days of induction candidosis, different treatments were performed: laser and methylene blue as photosensitizers (Group L+F+), laser only (Group L+F-), only photosensitizers (Group L-F+) and without laser neither photosensitizers group (Group L-F). After 1 day, samples of the tongue dorsum were collected and sown on Sabouraud agar for counts of UFC/mL recovered from the oral cavity. The animals were submitted to euthanasia for microscopic analysis. It also evaluated the production capacity of a proteinase and phospholipase C. albicans and C. dubliniensis. The results showed that the amount of C. albicans recovered from rats oral cavity were similar among the four groups. To recover C. dubliniensis of the oral cavity from studied rats was not possible. In microscopic examination of tongue dorsum, was seen the presence of multiple tissue lesions induced by C. albicans, whereas in group L+ F+ these lesions were smaller than in other groups. C. dubliniensis showed slight tissue lesions with no statistic difference between groups. Regarding the factors of pathogenicity of C. albicans, the group L+F+ produced smaller amounts of phospholipase and proteinase compared to other groups. C. dubliniensis produced fewer quantitiy of phospholipase related to C. albicans, without difference between the 4 (four) groups studied. However, C. dubliniensis was not able to produce proteinase. It was concluded that the development of experimental candidosis by C. dubliniensis was less than that induced by C. albicans. Photodynamic therapy was effective on treatment... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-01-06T18:29:27Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jéssica de Oliveira Veloso - 2016.pdf: 2794813 bytes, checksum: 8bd9adfbbc795e1b905411f5c2a04d01 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-09T09:47:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jéssica de Oliveira Veloso - 2016.pdf: 2794813 bytes, checksum: 8bd9adfbbc795e1b905411f5c2a04d01 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-09T09:47:16Z (GMT). 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The objectives of the study were to determine the prevalence of S. aureus contamination in patients and ICU environment of a university hospital in the city of Goiânia-GO, as well as to determine the antimicrobial susceptibility and virulence profile of the isolates and perform molecular typing of methicillin-resistant S. aureus (MRSA) isolates. The isolation and presumptive identification of S. aureus by phenotypic techniques and the confirmation of the species by detection of femA gene by PCR were performed. The isolates were subjected to diskdiffusion test for determining antimicrobial susceptibility profile, and those showing resistance to cefoxitin were subjected to E-Test® to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) to oxacillin and vancomycin, as well as the mecA gene detection for identification of MRSA strains. In these isolates the SCCmec typing was performed. In all S. aureus isolates were detected virulence factors-coding genes and held the genetic comparison for determining the similarity profile by pulsed field gel electrophoresis. Fifty hundred and thirty six swabs were collected being 134 of patients and 402 of ICU environment. The prevalence of colonization by S. aureus was 12.7% (68/536), being 13.4% (18/134) for patients and 12.4% (50/402) for the environment. The highest resistance rate presented was to penicillin (85.3%) followed by erythromycin (69.1%) clindamycin (66.2%) and sulfamethoxazole-trimethoprim (54.4%). Fifty-six isolates (82.4%) were classified as multiresistant. The prevalence of MRSA was 20.6% (14/68), and seven isolates (10.3%) presented intermediate susceptibility to vancomycin (VISA). The inducible resistance phenotype (iMLSb) was found in 11 strains (16.2%) and the constitutive resistance (cMLSb) in 25 (36.8%). Eleven isolates showed genes encoding for at least one virulence factor and were detected six virulence profiles. Of the 14 MRSA strains, six (42.9%) were SCCmec type IV, five (35.7%) SCCmec type I, two (14.3%) SCCmec type II and one (7.1%) SCCmec type III. PFGE analysis showed genetic diversity among the isolates, although a cluster grouped 16 isolates showing the spread of the bacteria among patients and environment. One MRSA isolate showed genetic relationship to the USA300 strain and two isolates MRSA/VISA were similar and another identical to the clone USA400. The results suggest that the prevalence of S. aureus and MRSA remains high in health institutions, especially in the ICU, with high rates of antimicrobial resistance and pathogenic potential. The detection of these microorganisms in the environment shows risk of cross-transmission primarily via health professionals. Identification of isolates with genetic background of strains acquired in the community alert to a flow of intra and inter- hospital and community environment. In addition, it is believed that environmental surfaces can be acting as reservoirs of genes of resistance and virulence as well as potential sources of contamination to patients, professionals and environments. / Staphylococcus aureus é um importante patógeno relacionado a infecções nosocomiais, com elevadas taxas de prevalência, morbidade e mortalidade. Nesse contexto, as Unidades de Terapia Intensiva (UTI) tem sido áreas de alto risco para a seleção de cepas multirresistentes. O ambiente (objetos, equipamentos e superfícies) de uma UTI também pode se contaminar, e os microrganismos podem permanecer viáveis por um longo período de tempo, podendo colonizar pacientes, trabalhadores, visitantes e contaminar ainda outros ambientes. Os objetivos do estudo foram determinar a prevalência de colonização por S. aureus em pacientes e ambiente da UTI de um hospital universitário na cidade de Goiânia-GO, bem como o perfil de susceptibilidade antimicrobiana e perfil de virulência dos isolados e realizar a tipagem molecular dos S. aureus resistentes à meticilina (MRSA). Foi realizado o isolamento e identificação presuntiva de S. aureus por técnicas fenotípicas e a confirmação da espécie pela detecção do gene femA por PCR. Os isolados foram submetidos ao teste de disco-difusão para determinação do perfil de suscetibilidade antimicrobiana e aqueles que apresentaram resistência à cefoxitina foram submetidos ao E-test® para determinação da concentração inibitória mínima à oxacilina e vancomicina, assim como, à detecção do gene mecA para identificação das cepas MRSA. Nestes isolados foi realizada a tipagem do SCCmec. Em todos os S. aureus isolados foi realizada a detecção dos genes codificadores de fatores de virulência e a comparação genética para determinação do perfil de similaridade por eletroforese em gel em campo pulsado. Foram coletados 536 swabs sendo 134 de pacientes e 402 de ambiente de UTI. A prevalência de colonização por S. aureus foi de 12,7% (68/536), sendo 13,4% (18/134) para pacientes e 12,4% (50/402) para o ambiente. A maior taxa de resistência apresentada foi à penicilina (85,3%) seguida da eritromicina (69,1%), clindamicina (66,2%) e sulfametoxazol-trimetoprim (54,4%). Cinquenta e seis isolados (82,4%) foram considerados multirresistentes. A prevalência de MRSA foi de 20,6% (14/68), houve ainda a existência de sete (10,3%) isolados com suscetibilidade intermediária à vancomicina (VISA). O fenótipo de resistência induzível (iMLSb) foi encontrado em 11 isolados (16,2%) e o de resistência constitutiva (cMLSb) em 25 (36,8%). Onze isolados apresentaram genes codificadores para pelo menos um fator de virulência pesquisado, sendo detectados seis perfis de virulência. Das 14 cepas MRSA, seis (42,9%) foram SCCmec tipo IV, cinco (35,7%) SCCmec tipo I, duas (14,3%) SCCmec tipo II e uma (7,1%) SCCmec tipo III.A análise de PFGE revelou diversidade genética entre os isolados, apesar de que um cluster agrupou 16 isolados mostrando a disseminação da bactéria entre pacientes e fômites. Um isolado MRSA mostrou relacionamento genético à cepa USA300 e dois isolados MRSA/VISA foram semelhantes e outro idêntico ao clone USA400. Os resultados sugerem que a prevalência de S. aureus e MRSA permanece elevada em instituições de saúde, especialmente em UTI, com elevadas taxas de resistência antimicrobiana e potencial patogênico. A detecção desses microrganismos no ambiente evidencia risco de transmissão cruzada desses patógenos, principalmente via profissionais da saúde. A identificação de isolados com background genético de cepas adquiridas na comunidade alerta para um fluxo de disseminação intra e inter-ambiente hospitalar e comunitário. Além disso, acredita-se que as superfícies ambientais podem estar atuando como reservatórios de genes de resistência e virulência, bem como fontes potenciais de contaminação de pacientes, profissionais e ambientes.

A capacidade do Staphylococcus aureus escapar do sistema imune do hospedeiro é atribuída à existência de algumas exotoxinas, as quais são codificadas por genes acessórios. A expressão de genes codificadores de exotoxinas é controlada por reguladores, tais como o agr (acessory gene regulator), sendo identificados 4 tipos polimórficos deste regulador. Neste estudo, foram utilizadas 37 isolados de Staphylococcus aureus, sensíveis à oxacilina, originados de laboratórios e hospitais públicos e privados brasileiros. Utilizou-se a técnica de PCR para a amplificação dos genes codificadores dos fatores de virulência estudados e do tipo de agr presente em cada cepa. A técnica da eletroforese em campo pulsado (PFGE) foi utilizada para se verificar a existência clonal entre os isolados. Observou-se que o gene codificador de enterotoxina mais freqüentemente isolado foi o gene sea, todos relacionados com o tipo III de agr. Observou-se, também, alguns pontos divergentes com publicações anteriores como a presença dos genes seb e tst na mesma cepa (33%), cuja relação julgava-se não ser muito freqüente, o mesmo acontecendo com os genes tst e lukElukD. Não se encontrou isolado portador dos genes codificadores das toxinas esfoliatinas. Segundo a técnica de PFGE, não houve relação clonal entre os isolados. Conclui-se, portanto, que as bases moleculares da patogenicidade do S. aureus são multi-fatoriais, dependendo não somente da presença como também da expressão de alguns genes acessórios como também do tipo de agr presente. / The capacity of the Staphylococcus aureus to escape from the immune system of the host is conferred to the existence of some exotoxins, which are codified by accessory genes. The expression of the genes of exotoxins is controlled by regulators, such as agr (acessory gene regulator), being identified four different types of this regulator. In this study, it had been used 37 strains of Staphylococcus aureus, sensible to the oxacillin, proceeding from public and private Brazilians laboratories. It had been used the PCR technique for detention of the genes of the virulence factors and the agr type present in each strain. The PFGE had been used for detectation of clonal relationship between the strains. Thus, it was observed that the most frequently determined gene coder of enterotoxin was sea (100% were related as type of agr III). it was observed divergent points to the studies carried through in other countries, like strains with coders genes of seb and tst (33%).This correlation, the literature judged not to be frequent, the same happening for the simultaneous presence of tst and lukE-lukD. It was not found in this study strains carrying of exfoliatin toxins. According to PFGE, there wasn\' t evidence of clonal relationship between the strains. It is concluded, therefore, that the molecular bases of the pathogenicity of the S. aureus are multifactorial, depending not only on the presence, as also of the expression of some accessory genes and the agr type present.

Neste estudo, 26 amostras de ostras (Crassostrea gigas) comercializadas na cidade de São Paulo e em alguns pontos do litoral de São Paulo, e 36 amostras de mexilhões (Perna perna) colhidas mensalmente em 3 pontos do litoral de Ubatuba - SP, foram submetidas à pesquisa de vibrios potencialmente patogênicos. As amostras desses moluscos eram submetidas a enriquecimento em água peptonada alcalina sem cloreto de sódio e com 1 por cento de cloreto de sódio, e GSTB. O isolamento foi realizado em ágar TCBS. Colônias sacarose positivas e negativas, sugestivas de espécies de Vibrio foram identificadas presuntivamente em meio de ágar ferro de Kligler, sendo confirmadas através de provas bioqufmicas complementares. Uma parte das amostras de vibrios potencialmente patogênicos isoladas foi submetida ao teste de Dean e teste de alça ligada em íleo de coelhos. Os vibrios potencialmente patogênicos encontrados em amostras de ostras foram V. alginolyticus (81 por cento ), V.parahaemolyticus (77 por cento ), V. cholerae não 0:1 (31 por cento ), V. fluvialis (27 por cento ), V. furnissii (19 por cento ), V. mimicus (12 por cento ) e V. vulnificus (12 por cento ) e em amostras de mexilhões foram V. alginolyticus(97 por cento ), V. parahaemolyticus(75 por cento ), V. fluvialis (47 por cento ), V. vulnificus (11 por cento ), V. cholerae não 0:1 (6 por cento ), V. furnissii (6 por cento ) e V. mimicus (6 por cento ). Observou-se acúmulo de fluido em alça ligada de íleo de coelho entre 0,25 e 0,49 ml/cm em 6,9 por cento das amostras, entre 0,5 e 0,99 ml/cm em 15,6 por cento e maior ou igual a 1 ml/cm em 15,1 por cento , e/ou intestino de camundongos lactentes (Teste de Dean) em 26,6 por cento das amostras testadas, confirmando o elevado potencial desses microrganismos em causar gastrenterite. Verificou-se ausência de variação sazonal e também, de correlação entre os vibrios potencialmente patogênicos isolados e os indicadores de contaminação fecal, confirmando que a presença desses microrganismos ocorre de forma autóctone e que, as condições climáticas foram favoráveis à sobrevivência dessas espécies em todas as épocas do ano. Considerando-se os resultados obtidos no presente estudo e o fato de que ostras e mexilhões são habitualmente ingeridos crus ou insuficientemente cozidos, pode-se concluir que sua ingestão constitui-se em um determinado grau de risco para a saúde do consumidor. / In this work, 26 oysters samples (Crassostrea gigas), found in the market of São Paulo city and some coastal areas of São Paulo State, and 36 mussels samples (Perna perna), that were collected monthly in 3 coastal areas of Ubatuba city - SP., were analyzed for the potential patogenic vibrios occurrence. Samples were enriched in alcalin peptone water with (1 per cent ) and without sodium cloride and GSTB. Isolation was performed on TCBS agar. suspect sacharosis positive and negative colonies, resembling vibrio species, were presumptively identified on Kligler iron agar, and confirmed by complementary biochemical tests. Some of this potential patogenic vibrios were submitted to suckling mouse assay and rabbit ileal loop assay. Potential patogenic vibrios isolated from oyster samples were: V. alginolyticus (81 per cent ), V. parahaemolyticus (77 per cent ), V. cholerae non 0:1 (31 per cent ), V. fluvialis (27 per cent ) I V. furnissii (19 per cent ), V. mimicus (12 per cent ) and V. vulnificus (12 per cent ) and from mussels samples were: V. a.1ginolyticus (97 per cent ), V. parabaemolyticus (75 per cent ), V. fluvialis (47 per cent ), V. vulnificus (11 per cent ), V. cholerae non 0:1 (6 per cent ), V. furnissii (6 per cent ) and V. mimicus (6 per cent ). It was found 6,9 per cent of samples between 0,25 and 0,49 ml/cm of fluid accumulation in ileal loop assay, 15,6 per cent between 0,5 and 0,99 ml/cm and 15,1 per cent was equal or higher than 1 ml/cm. Among the samples assayed for suckling mouse 26,6 per cent were positive. These results confirm the high potential of these microrganisms to induce gastroenteritis. Seasonal variation as well as correlation between the potential patogenic vibrios isolated and the fecal contamination indicators were not found, confirming that the presence of such microrganisms occurs autochthonously and that the climate conditions were favourable to these species survival during the whole year. with the results of this work and considering that oyster and mussels are usually ingested raw or insufficiently cooked, the conclusion is that the ingestion of such mollusks presents a certain degree of risk for the consumer\'s health.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008 - Shana de Mattos de Oliveira Coelho.pdf: 1309260 bytes, checksum: d56e11e43855d92c6e9b5e2b5f5f4ab0 (MD5) Previous issue date: 2008-12-18 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The present study was done to characterize phenotypic and genotypically the virulence factors and resistance profile to antibiotics, specifically to the oxacillin, of species of Staphylococcus spp. coagulase-positives isolated from milk samples of cows with mastitis. Of 150 isolated, the species S.aureus, S.intermedius and S.hyicus were identified. The antimicrobial susceptibility test yielded high resistance to penicillin and ampicillin and distinct antibiotyps had been identified, being of sensitivity to all the antibiotics prevalent. A total of 94,6% and 70,7% was positive for the production of betalactamases and presence of the mecA gene, respectively. The femA gene was detected in 80,9% of isolated mecA positive. The isolated presented distinct standards of growth in the tests of susceptibility to oxacillin. The tests of agar screen and the evaluation of the microdilution in plate, presented considerable values of sensitivity and specificity when the isolated ones were considered as an only group (Staphylococcus spp coagulase-positives) or when the species had been discriminated, respectively. The addition of 4% of NaCl in the agar plate can have effect in the increase of the sensitivity of the test of diffusion using the oxacillin and the test of diffusion presented the better capacity in the detention of the resistance isolates with cefoxitin disk. A total of 80% of the S.aureus was classified as MRSA and had presented resistance higher than 15% to the ampicillin and sulbactam association, vancomicin and gentamicin. About the virulence factors, the technique of the microplate disclosed 82.8% of isolated producers of slime and the intensity of the production was not associated with the presence of the icaA and icaD genes. In addition, the agar with the congo red presented effectiveness in the detention of isolated the not producing ones of slime . In all hemolitics isolates were detected the beta-hemolisin and 11.3% of the non-hemolitics had produced hemolisins in the presence of beta-hemolitic strain, indicating the presence of the delta hemolisin. spaA, coa and agr genes had been carried through the amplifications of the genes the S.aureus. The spaA gene, that it codifies protein A region X, was positive in all isolated ones, disclosed only amplicon for each isolated one and presented polimorfism being the prevalent size of 315pb. The amplification of the coa gene presented three distinct polimorfics types, with only amplicon for each isolated and the prevalent profile was of 900pb. The amplification of the agr gene resulted in amplicons with 350 and 550 pb in 74% of the isolated. The test of biotyping disclosed the bovine ecovar as the prevalent in the S.aureus. Seven S.aureus that had presented the same profiles of the coa, spaA, agr genes, antibiotyps and ecovars was detected being 4 pertaining the same properties and 3 isolated from distinct properties. / O presente estudo foi conduzido para caracterizar feno-genotipicamente os fatores de virul?ncia e perfil de resist?ncia aos antibi?ticos, especificamente ? oxacilina, de esp?cies de Staphylococcus spp. coagulase-positivos isolados de amostras de leite de vacas com mastite. Do total de 150 isolados, foram identificadas as esp?cies S.aureus, S.intermedius e S.hyicus. O teste de suscetibilidade antimicrobiana revelou elevada resist?ncia ? penicilina e ampicilina e distintos antibiotipos foram identificados, sendo o de sensibilidade a todos os antibi?ticos o prevalente. Um total de 94,6% e 70,7% foi positivo para a produ??o de betalactamases e presen?a do gene mecA, respectivamente. O gene femA foi detectado em 80,9% dos isolados mecA positivos. Os isolados apresentaram distintos padr?es de crescimento nos testes de suscetibilidade ? oxacilina. Os testes de ?gar screen e a avalia??o da microdilui??o em placa, apresentaram valores consider?veis de sensibilidade e especificidade quando os isolados foram considerados como um ?nico grupo (Staphylococcus spp coagulase-positivos) ou quando as esp?cies foram discriminadas, respectivamente. A adi??o de 4% de NaCl no meio de cultura pode ter efeito no aumento da sensibilidade do teste de difus?o em disco utilizando o disco de oxacilina e o teste de difus?o em disco apresentou melhor capacidade na detec??o dos isolados resistentes ? oxacilina com discos de cefoxitina. Um total de 80% dos S.aureus foi classificados como MRSA e apresentaram resist?ncia superior a 15% ? associa??o de ampicilina e sulbactam, vancomicina e gentamicina. Quanto aos fatores de virul?ncia, a t?cnica da microplaca revelou 82,8% de isolados produtores de slime e a intensidade da produ??o n?o foi associada ? presen?a dos genes icaA e icaD. Em adi??o, o ?gar contendo vermelho congo apresentou efic?cia na detec??o do isolados n?o produtores de slime . Em todos os isolados hemol?ticos foi detectada a beta hemolisina e 11,3% dos n?o-hemol?ticos produziram hemolisinas na presen?a da cepa beta-hemol?tica, indicando a presen?a da delta hemolisina. Foram realizadas as amplifica??es dos genes spaA, coa e agr em todos os S.aureus. O gene spaA, que codifica a regi?o X, foi positivo em todos isolados, revelou um ?nico amplicon para cada isolado e apresentou polimorfismo sendo o tamanho prevalente o de 315pb. A amplifica??o do gene coa apresentou tr?s tipos polim?rficos distintos, com ?nico amplicon para cada isolado e o perfil prevalente foi o de 900 bp. A amplifica??o do gene agr resultou em amplicons com 350 e 550 pb em 74% dos isolados. A prova de biotipifica??o revelou o ecovar bovino como o prevalente nos S.aureus. Foram identificados 7 S.aureus que apresentaram os mesmos perfis dos genes coa, spaA, agr, antibiotipos e ecovares, sendo 4 pertencentes mesma propriedades e 3 provenientes de propriedades distintas.