Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-03-14T15:46:34Z No. of bitstreams: 1 dissertação DANIELLE MIMOSO.pdf: 901513 bytes, checksum: 7f7c98092741a35d39bc3f951c13e94a (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-04-24T12:30:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertação DANIELLE MIMOSO.pdf: 901513 bytes, checksum: 7f7c98092741a35d39bc3f951c13e94a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T12:30:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertação DANIELLE MIMOSO.pdf: 901513 bytes, checksum: 7f7c98092741a35d39bc3f951c13e94a (MD5) / FAPESB / O eixo (HPA) hipotálamo-pituitária-adrenal é ativado em resposta ao estresse.Estudos mostraram que, em algumas infecções os níveis de cortisol, corticosterona e de ACTH estavam aumentados, indicando uma ativação do eixo HPA. Os glicocorticoides são hormônios que afetam o metabolismo e a resposta imunitária de várias formas, incluindo a diminuição da produção de citocinas pró-inflamatórias. A leishmaniose é uma doença causada por protozoários do gênero Leishmania, sendo um grave problema de saúde em várias partes do mundo, incluindo Brasil. Infecção por Leishmania pode levar a um amplo espectro de manifestações clínicas: a leishmaniose cutânea (LC), leishmaniose disseminada (DL), leishmaniose mucosa (LM), leishmaniose cutânea difusa (DCL) ea leishmaniose visceral (LV). No presente trabalho, investigamos se os pacientes com LV tem mudanças nos níveis de ACTH e cortisol e se essas alterações estão relacionadas a alguns marcadores clínicos e/ ou imunológicos da doença. MATERIAL E MÉTODOS Foram avaliados um grupo de pacientes com LV (n = 37) e CTL (n = 34), com idades variando de 2 a 11 anos e índice de massa corporal (IMC) similares.Os Hormônios (ACTH e cortisol) foram quantificados utilizando tecnologia Luminex e citocinas (IL1β, TNF-α, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IFN-γ) foram determinadas por citometria de fluxo (CBA). RESULTADOS E DISCUSSÃO Os indivíduos com LV apresentaram níveis mais altos de cortisol (14,79 ng / mL ± 11,13) e ACTH (9.040 pg / mL ± 26,42) que os controles (12,00 ng / mL ± 1,831, P = 0,0004 e 1,880 pg / mL ± 48,08, P <0,0001, respectivamente) .O cortisol teve correlação positiva com o tempo de doença (r = 0,4105, P = 0,04), frequência respiratória (r = 0,44 P = 0,015) e IL-6 (r = 0,389, P = 0,0405). O ACTH teve correlação positiva com TNF-α (r = 0,3769, P = 0,040) e IL-1β (r = 0,3762, P = 0,0405). CONCLUSÕES: Nossos resultados indicam que os pacientes com LV tem uma ativação do eixo HPA e que esta pode ser associada com a progressão da doença. A elevação de algumas citocinas como a IL-6 pode estar envolvida nesta ativação e aumento do cortisol. / INTRODUCTION The Hypothalamic-Pituitary-Adrenal (HPA) axis is activated in response to stress. Studies have showed that in some infections there is elevation of cortisol or corticosterone and ACTH, indicating an activation of HPA axis. Glucocorticoids are hormones that affect the metabolism and immune response in several ways, including decreased production of proinflammatory cytokines. Leishmaniasis is a disease caused by protozoans of the genus Leishmania that is a serious health problem in several parts of the world including Brazil. Leishmania infection can lead to a wide spectrum of clinical manifestations: cutaneous leishmaniasis (CL), disseminated leishmaniasis (DL), mucosal leishmaniasis (ML), diffuse cutaneous leishmaniasis (DCL) and visceral leishmaniasis (VL). In the present work, we investigated whether patients with VL have changes in ACTH and cortisol levels and if these alterations are related to some clinical or immunological markers of disease. MATERIAL AND METHODS We evaluated a group of patients with VL (n=37) and healthy volunteers (n=34) with ages ranging from 2 to 11 years and similar body mass index (BMI). Hormones (ACTH and cortisol) were quantified using multiplex bead-based Luminex technology and cytokines (IL1β, TNF-α,IL-6,IL- 8,IL-10,IL-12,IFN-γ) were determinate by cytometric beads array (CBA). RESULTS AND DISCUSSION Individuals with VL exhibited higher levels of cortisol (14.79 ng/mL ±11.13) and ACTH (9.040 pg/mL±26.42) than controls (12.00 ng/mL±1.831, P=0.0004 and 1.880 pg/mL±48.08, P<0.0001, respectively).Levels of cortisol positively correlated with time of disease (r= 0.4105, P=0.04), respiratory frequency (r=0.44 P=0.015) and IL-6 (r=0.389, P=0.0405). ACTH positively correlated with TNF-α (r=0.3769, P=0.040) and IL- 1β (r=0.3762, P=0.0405). CONCLUSIONS: These results indicate that patients with VL have an activation of the HPA axis and that this activation could be associated with the outcome of disease. The elevation of some cytokines as IL-6 could be involved in the HPA activation and increase of cortisol.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-05-26T15:49:55Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Adenilma Duranes Sousa.pdf: 2663510 bytes, checksum: fba19cb0e919e73195f00b46394234aa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-26T15:49:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Adenilma Duranes Sousa.pdf: 2663510 bytes, checksum: fba19cb0e919e73195f00b46394234aa (MD5) / As leishmanioses são infecções causadas pelo tripanosomatídeo Leishmania sp. Estima-se que 350 milhões de pessoas estão sob o risco de contrair leishmaniose, em todo mundo. A Leishmaniose visceral (LV) é a forma clínica mais grave da doença. Os principais sintomas apresentados são febre prolongada, hepatomegalia, esplenomegalia, hipergamaglobulinemia, pancitopenia, perda de peso, e em casos não tratados, óbito. Algumas alterações bioquímicas e metabólicas são observadas na VL, principalmente aumento das concentrações plasmáticas de triglicerídeos, colesterol e LDL. O tecido adiposo e as adipocinas, podem participar da regulação da resposta imune em processos inflamatórios e em diversas infecções. O objetivo geral desse trabalho foi investigar a relação do tecido adiposo e das adipocinas com parâmetros bioquímicos e imunológicos observados na leishmaniose visceral experimental. Foram utilizados 41 hamsters dourados (Mesocricetus auratus) machos adultos, com peso médio de 132 gramas. Os animais foram infectados com 1X105 promastigota de L. infantum na derme da orelha. A eutanásia ocorreu 4 e 8 meses após a infecção. O Tecido adiposo, o baço e o fígado foram coletados, pesados e acondicionados em solução de conservação. A carga parasitária do baço e fígado, foi avaliada por meio da técnica de diluição limitante. A expressão das citocinas no baço foi avaliada por meio da realização do qRT-PRC. Os parâmetros bioquímicos e as adipocinas foram dosadas no soro. Foi realizada a análise histopatológica e a morfometria do tecido adiposo corado por HE. As análises estatísticas foram realizadas usando o Software GraphPad Prism 5.0. Os animais infectados apresentaram perda de peso e esplenomegalia no oitavo mês de infecção. Os animais apresentaram carga parasitária moderada, tanto no baço, quanto no fígado. Não houve diferença na expressão das citocinas, nem na concentração sérica dos parâmetros bioquímicos e das adipocinas. A carga parasitária do baço e do fígado apresenta correlação negativa com os níveis de albumina. A carga parasitária do baço apresentou correlação negativa com os níveis de colesterol total. A Análise de correlação das adipocinas, mostrou que a adiponectina está correlacionada negativamente com as concentrações de glicose e albumina dos animais controles. E a leptina apresentou correlação negativa com o peso relativo do baço no grupo dos animais controle e correlação positiva com as concentrações séricas de triglicérides e VLDL, em ambos os grupos. Adicionalmente, a leptina apresentou correlação positiva com a carga parasitária do baço e com o peso relativo do tecido adiposo epididimal e retroperitoneal. Já as concentrações de HDL estão correlacionadas negativamente com os níveis de leptina, em hamster infectados com L. infantum. As análises de correlação mostraram que leptina tem relação com o estabelecimento da LV em hamsters.

PEREIRA, H. F. Correlação entre as manifestações hematológicas na medula óssea e no sangue periférico de pacientes com leishmaniose visceral. 2015. 57 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-20T13:36:39Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_hfpereira.pdf: 1025156 bytes, checksum: 36f92d6f7f7f598929de6eeb211b0b13 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-20T13:36:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_hfpereira.pdf: 1025156 bytes, checksum: 36f92d6f7f7f598929de6eeb211b0b13 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-20T13:36:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_hfpereira.pdf: 1025156 bytes, checksum: 36f92d6f7f7f598929de6eeb211b0b13 (MD5) Previous issue date: 2015-11-19 / Visceral leishmaniasis (VL) or Kala Azar is a zoonosis with wide distribution, reaching about 88 countries with 500,000 new cases per year. In Piauí, the Institute of Tropical Diseases NatanPortela-IDTNP located in Teresina is the referral hospital for the disease. Objectives: This study sought to identify the hematologic changes and the occurrence of possible correlations between the bone marrow and the peripheral blood of patients with visceral leishmaniasis, in order to contribute to the definition of new medical and therapeutic pipelines. Material and methods: quantitative study was carried out in 62 patients diagnosed with transverse LV, in the period October 2007 to January 2008, in IDTNP. After anamnesis were requested laboratory tests (CBC, RIFI, bone marrow smears eous) for attestation of pathology. After confirmation of the disease, interviewed the patient or his legal guardian, on the objectives of the survey, requesting the signature of informed consent. For data analysis were elaborated specific tables in Microsoft excel, with subsequent statistical analysis by Biostat 5.3 and 20 SPSS. Results: patients came from three States: Piaui with 37 (59.7), with 22 (35.5) and Stop with 3 (4.8) (p 0.0001). The age ranged from 10 months to 70 years, being 18 (29.1) female and 44 (70.9) male (p 0.0005). The positivity was established through one of three laboratory methods (RIFI, MO and culture), and 41 (66.1) (p 0.0001) were positive in the three methods used. Hematologic analyses performed on blood smears and Cell dyn, demonstrated that, on white series, 162 (1.6) patient presented Leukocytosis, 1262 (19.4) were within the parameters considered normal and 4962 (79.0) had leukopenia. As the count specifies, it was observed that: 4 (6.4) had levels considered normal neutrophil and 58 (93.6) with neutropenia; lymphocytes: 6 (9.7) presented Lymphocytosis, 36 (58.1) lymphopenia and 20 (32.2) normal. The lymphocyte atypia was observed in 17 (27.4) (p 0.0001) patients and reached different levels: sharp: 317 (17.6) patients moderate: 1317 (76.5) and discreet: 117 (5.9). In the Red series, only 1 (1.6) patient had normal levels of red blood cells, hemoglobin and hematocrit; the remaining 61 (98.4) presented low levels, with hipocromia, anisocytosis, microcytosis and macrocytosis in varying degrees. It was noted even the occurrence of a patient with poikilocytosis, with refers, two policromatofilia and one with 8 of eritroblastos. In platelet series noted that 38 (61.3) patients had thrombocytopenia and 24 (38.7) levels were normal. Bone marrow aspirates were performed on all survey respondents for diagnostic purposes. In just 15 (24.0) not found the parasite (leishmania sp.), either by direct search, is the culture in appropriate media. Reading was held in 40 (65.0) (p 0.0234) blades of bone marrow smear, where he noted that three were normocelulares and normoplasiamegacariocítica. As for global cellularity 21 (52.5) patients were hypocellular, 13 (32.5) normocelular and 6 (15.0) hypercellular, while megacariocítica series, 28 (70.0) showed hypoplasia, 8 (20.0) normoplasia and 4 (10.0) enlarged. In the mielóideeritróide relationship, the occurrence of inversion in 7 (17.5) cases (p 0.0001). Values less than 21 were recorded on 10 (25.0) patients, while 18 (45.0) were within the reference range (21 to 41) and 5 (12.5), were above this value (41). Conclusion: the research demonstrated that the hematological changes are common in patients with visceral leishmaniasis and involve a complex and multifactorial pancytopenia. Anemia hypochromic microcytic and type is and although there are positive correlations between the changes in the bone marrow and peripheral blood, in this study, statistical significance was not observed among these correlations. / A leishmaniose visceral (LV) ou calazar é uma zoonose com ampla distribuição, atingindo cerca de 88 países com 500.000 casos novos por ano. No Piauí, o Instituto de Doenças Tropicais Natan Portela – IDTNP localizado em Teresina é o hospital de referência para esta doença. Objetivos: Nesse estudo, procurou-se identificar as alterações hematológicas e a ocorrência de possíveis correlações entre a medula óssea e o sangue periférico de pacientes com leishmaniose visceral, visando contribuir para a definição de novas condutas médicas e terapêuticas. Material e Métodos: Foi realizado estudo quantitativo transversal em 62 pacientes diagnosticados com LV, no período de outubro de 2007 a janeiro de 2008, no IDTNP. Após anamnese foram solicitados testes laboratoriais (hemograma, RIFI, esfregaços de medula óssea e/ou cultura) para comprovação da patologia. Após confirmação da doença, entrevistava-se o paciente ou seu responsável legal, sobre os objetivos da pesquisa, solicitando-se então a assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido. Para análise dos dados foram elaboradas tabelas específicas no Microsoft excel, com posterior análises estatísticas pelo Biostat5.3 e SPSS 20. Resultados: Os pacientes eram provenientes de três estados: Piauí com 37 (59,7%), Maranhão com 22 (35,5%) e Pará com 3 (4,8%) (p < 0,0001). A idade variou de 10 meses a 70 anos, sendo 18 (29,1%) do sexo feminino e 44 (70,9%) do sexo masculino (p = 0,0005). A positividade foi constatada através de um dos três métodos laboratoriais (RIFI, MO e cultura), sendo que 41 (66,1%) (p < 0,0001) foram positivos nos três métodos utilizados. As análises hematológicas realizadas em esfregaços sanguíneos e no Celldyn, demonstraram que, na série branca, 1/62 (1,6%) paciente apresentava leucocitose, 12/62(19,4%) estavam dentro dos parâmetros considerados normais e 49/62(79,0%) apresentavam leucopenia. Quanto à contagem especifica, observou-se que: 4 (6,4%) tinham neutrófilos em níveis considerados normais e 58 (93,6%) com neutropenia; linfócitos: 6 (9,7%) apresentavam linfocitose, 36 (58,1%) linfopenia e 20 (32,2%) normais. A atipia linfocitária foi observada em 17 (27,4%) (p < 0,0001) pacientes e alcançou diferentes níveis: acentuada: 3/17 (17,6%) pacientes, moderada: 13/17 (76,5%) e discreta: 1/17(5,9%). Na série vermelha, apenas 1 (1,6%) paciente tinha níveis considerados normais de eritrócitos, hemoglobina e hematócrito; os demais 61 (98,4%) apresentavam níveis baixos, com hipocromia, anisocitose, microcitose e macrocitose em diferentes graus. Constatou-se ainda a ocorrência de um paciente com poiquilocitose, um com pecilocitose, dois com policromatofilia e um com 8% de eritroblastos. Na série plaquetária observou-se que 38 (61,3%) pacientes tinham trombocitopenia e em 24 (38,7%) os níveis estavam normais. Aspirados de medula óssea foram realizados em todos os participantes da pesquisa para fins de diagnóstico. Em apenas 15 (24,0%) não foi encontrado o parasito (leishmania sp.), seja pela pesquisa direta, seja pela cultura em meios apropriados. Foi realizada leitura em 40 (65,0%) (p = 0,0234) lâminas de esfregaço de medula óssea, onde se observou que três apresentavam-se normocelulares e com normoplasiamegacariocítica. Quanto à celularidade global, 21 (52,5%) pacientes estavam hipocelular, 13 (32,5%) normocelular e 6 (15,0%) hipercelular, enquanto que da série megacariocítica, 28 (70,0%) apresentavam hipoplasia, 8 (20,0%) normoplasia e 4 (10,0%) hiperplasia. Na relação mielóide/eritróide, observou-se a ocorrência de inversão em 7 (17,5%) casos (p < 0,0001). Valores menores que 2/1 foram registrados em 10 (25,0%) pacientes, enquanto que 18 (45,0%) estavam dentro da faixa de referência (2/1 a 4/1) e 5 (12,5%), estavam acima desse valor (4/1). Conclusão: A pesquisa demonstrou que as alterações hematológicas são comuns em pacientes com leishmaniose visceral e envolvem uma pancitopenia complexa e multifatorial. A anemia é do tipo hipocrômica e microcítica e embora haja correlações positivas entre as alterações ocorridas na medula óssea e no sangue periférico, neste estudo não se observou significância estatística entre estas correlações.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-08-25T11:37:42Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 916025 bytes, checksum: 85faad5f8964dc85d9e69cc0251905ad (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-25T11:37:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 916025 bytes, checksum: 85faad5f8964dc85d9e69cc0251905ad (MD5) Previous issue date: 2017-07-06 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A Leishmaniose Visceral (LV) está amplamente distribuída em 98 países, com mais de 350 milhões de pessoas em risco. Não existem vacinas licenciadas para uso em humanos e o antimônio pentavalente ainda é o fármaco de primeira escolha para o tratamento da doença, apesar de sua toxicidade. Em um estudo prévio foram realizados ensaios sobre a participação de proteína ligante de heparina de L. infantum chagasi (PLHLc) no processo infeccioso do parasito, considerando os processos de adesão, penetração e internalização em macrófagos, demonstrando que a proteína nativa está envolvida na interação entre parasito e hospedeiro. Também foram demonstrados níveis de imunogenicidade e de proteção contra L.infantum chagasi quando camundongos BALB/c foram imunizados com a PLHLc nativa. A partir disso, foi feito o sequenciamento dessa proteína e a produção da sua forma recombinante (rPLHLc). Nesse trabalho, utilizamos a rPLHLc em experimentos de imunização de camundongos BALB/c para avaliar se, assim como a proteína nativa, a forma recombinante também confere imunogenicidade e proteção após desafio com as formas promastigotas do parasito. Nossos resultados mostraram que no teste de imunogenicidade, os grupos imunizados com a rPLHLc, com AIF + rPLHLc e com SAP + rPLHLc produziram níveis altos de IgG1 e IgG2a anti-rPLHLc quando comparados aos seus grupos controles, caracterizando, de acordo com a razão IgG1/IgG2a, resposta mista nos grupos imunizados com rPLHLc e SAP + rPLHLce um perfil de resposta Th2 no grupo imunizado com AIF + rPLHLc. Já no teste de desafio, nossos resultados mostraram que houve redução da carga parasitária no baço e no fígado dos grupos imunizados com a rPLHLc, com AIF + rPLHLc e com SAP + rPLHLc. Os grupos imunizados com AIF + rPLHLc e com SAP + rPLHLc produziram as citocinas IFN-γ, TNF e IL-2, que direcionam o padrão de resposta imune para Th1, as citocinas IL-17 e IL-6 que direcionam para Th17 e a citocina reguladora IL-10, sendo que a média de produção dessas citocinas foi maior no grupo que tinha como adjuvante a SAP. Na produção de IgG1 e IgG2a anti-rPLHLcos grupos imunizados com a rPLHLc, com AIF + rPLHLc e com SAP + rPLHLc produziram níveis altos dos dois isotipos comparado aos seus grupos controles e de acordo com a razão IgG1/IgG2a conclui-se que encontramos perfil de resposta Th1 nos grupos imunizados com rPLHLc e com SAP + rPLHLc e perfil de resposta Th2 no grupo imunizado com AIF + rPLHLc. Portanto, concluímos que houve imunogenicidade e proteção contra L. infantum chagasi quando os grupos experimentais são imunizados com a proteína recombinante, mostrando a viabilidade de uso da mesma como vacina e que o grupo imunizado com SAP + rPLHLc foi o que apresentou resultados mais promissores, o que torna essa preparação uma possível vacina contra LV. / Visceral Leishmaniasis (VL) is widely distributed in 98 countries, with more than 350 million people at risk. There are no licensed vaccines for use in humans and the pentavalent antimony is still the drug of choice for treatment of this disease despite its toxicity. In a previous study, tests were performed on the involvement of the heparin binding protein of L.infantum chagasi (HBPLc) in the infectious process of the parasite, considering the processes of adhesion, penetration and internalization in macrophages, demonstrating that the native protein is involved in the interaction between parasite and host. Levels of immunogenicity and protection against L. infantum chagasi were also demonstrated when BALB/c mice were immunized with native HBPLc. From that, the sequencing of this protein and the production of its recombinant form (rHBPLc) was carried out. In this work, we used rHBPLc in experiments for immunization of BALB/c mice to evaluate whether, the recombinant protein form also confer immunogenicity and protection after challenge with the promastigote forms of the parasite. Our results showed that in the immunogenicity test, the groups immunized with rHBPLc, FIA + rHBPLc and ASP + rHBPLc produced high levels of anti-rHBPLc IgG1 and IgG2a when compared to their control groups, characterizing, according to the IgG1/IgG2a ratio, mixed response in the immunized groups with rHBPLc and ASP + rHBPLc and a Th2 response profile in the group immunized with FIA + rHBPLc. In the challenge test, our results showed that there was a reduction of the parasite load in the spleen and liver of the groups immunized with rHBPLc, with FIA + rHBPLc and with ASP + rHBPLc. The groups immunized with FIA + rHBPLc and ASP + rHBPLc produced the cytokines IFN-γ, TNF and IL-2, which direct the immune response pattern for Th1, the cytokines IL-17 and IL-6 directed for the Th17 and for the regulator cytokine IL-10, and the mean production of these cytokines was higher in the adjuvant group containing ASP. In the production of anti-rHBPLc IgG1 and IgG2a the groups immunized with rHBPLc, with FIA + rHBPLc and with ASP + rHBPLc produced high levels of the two isotypes compared to their control groups and according to the IgG1/IgG2a ratio we found that Th1 response profile in the group immunized with rHBPLc and with ASP + rHBPLc and Th2 response profile in the group immunized with FIA + rHBPLc. Therefore, we concluded that there was immunogenicity and protection against L.infantum chagasi when the experimental groups were immunized with the recombinant protein, showing the feasibility of using it as a vaccine and that the group immunized with ASP + rHBPLc presented the most promising results, which makes this preparation a potencial vaccine against VL.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-09-04T17:28:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2871487 bytes, checksum: 93ead2c58375b69782a5d7277b06e620 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-04T17:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2871487 bytes, checksum: 93ead2c58375b69782a5d7277b06e620 (MD5) Previous issue date: 2017-06-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leishmania infantum chagasi é um protozoário intracelular responsável por causar uma doença fatal em humanos, a leishmaniose visceral. Identificar moléculas que estejam envolvidas no processo de infecção da célula do hospedeiro pelo parasito é importante para a concepção de estratégias para o controle da doença. Dentre estas moléculas estão as Proteínas Ligantes de Heparina (PLH’s), cuja característica principal é a capacidade de se ligar a carboidratos presentes em glicoproteínas ou glicolipídios. Há evidências de que PLH’s presentes na superfície de Leishmania participam dos processos de adesão e penetração dos parasitos nos tecidos e células, tanto dos hospedeiros vertebrados quanto dos invertebrados. Portanto, compreender as interações entre a PLH de L. chagasi (PLHLc) e o açúcar ao qual ela se liga, a heparina, bem como demonstrar propriedades da proteína, é importante para desenvolver mecanismos que interrompam a progressão da infecção. Este trabalho foi dividido em dois manuscritos onde foi proposto para o primeiro identificar e realizar análises estruturais in silico e análises funcionais da PLHLc. A proteína foi sequenciada e identificada como sendo a proteína LPG3 de L. infantum chagasi, que foi então sintetizada, clonada e a composição da sua estrutura foi determinada. Cromatografia de gel filtração, eletroforese em gel não desnaturante e ensaio de cross- linking sugerem que a rPLHLc/LPG3 está organizada como um tetrâmero. Calorimetria de titulação isotérmica confirma a capacidade da proteína em se ligar a heparina com afinidade micromolar. A inibição da atividade ATPásica pela presença da heparina, juntamente com as análises in silico, sugerem que o sítio de ligação a heparina sobrepõe ao sitio de ligação ao ATP. No segundo trabalho a proteína recombinante produzida foi avaliada para o imunodiagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina apresentando sensibilidade de 79-87% e especificidade de 63-83%, indicando o potencial da rPLHLc/LPG3 recombinante no diagnóstico imunológico da LVC. / Leishmania infantum chagasi is an intracellular protozoan parasite responsible for causing a fatal disease in humans, visceral leishmaniasis. Identification of molecules from the parasites involved in the host cell infection process is important for designing strategies to control this disease. Among these molecules is Heparin Binding Protein (HBP), whose main characteristic is the ability to bind to carbohydrates present in glycoproteins or glycolipids. Evidence suggests that HBP's present on Leishmania surface participate in the adhesion of parasites to tissues of both vertebrate and invertebrate hosts as well as in cell invasion. Therefore, understanding the interactions between L. chagasi HBP (HBPLc) and the sugar to which it binds, heparin, as well as demonstrating protein properties, is important to develop mechanisms that interrupt the infection progression. This work was divided into two manuscripts where it was proposed to first identify and perform in silico structural and functional PLHLc analyzes. The protein was sequenced and identified as the L. infantum chagasi LPG3 protein, which was then synthesized, cloned and the composition of its structure determined. Gel filtration chromatography, non-denaturing gel electrophoresis and cross-linking assay suggest that rPLHLc/LPG3 is organized as a tetramer. Isothermal titration calorimetry confirms the ability of the protein to bind heparin with micromolar affinity. Inhibition of ATPase activity by the presence of heparin, together with in silico analyzes, suggests that the heparin binding site overlaps the ATP binding site. In the second study, the recombinant protein was evaluated for the Canine Visceral Leishmaniasis immunodiagnosis presenting a sensitivity of 79-87% and specificity of 63-83%, indicating the potential of recombinant rPLHLc/LPG3 in the immunological LVC diagnosis.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Introdução: O transplante renal e a terapia mais efetiva em restaurar a qualidade de vida e produtiva dos pacientes portadores de Doenca Renal Cronica (DRC). O Brasil tem o maior programa publico de transplante renal do mundo, utilizando em mais de 70% dos procedimentos, rim de doador falecido. Imunossupressao mais seletiva tem reduzido episodios de rejeicao e aumentado a sobrevida do enxerto e receptor de rim. Entretanto as equipes transplantadoras e os receptores de orgaos enfrentam um novo desafio: as infeccoes emergentes causadas por agentes oportunistas que podem comprometer este sucesso terapeutico. A Leishmaniose Visceral (LV) e uma zoonose causada por protozoario do genero Leishmania. Ocorre de forma endemica nos 5 continentes e ao acometer receptores de transplante renal, causa uma sindrome sistemica com caracteristicas clinicas atipicas. Tem seu diagnostico laboratorial, fatores de risco e tratamento ainda nao consensualidados. A LV em receptores de transplante renal, na grande maioria das vezes, tem evolucao desfavoravel com obito do paciente e/ou perda do enxerto. OBJETIVOS: Identificar fatores de risco para Leishmaniose Visceral (LV) em transplantados renais e analisar o impacto da doenca sobre enxertos e receptores de rim. MATERIAL E METODO: E um estudo tipo caso-controle, retrospectivo. Estudou-se 120 pacientes submetidos a transplante renal em area endemica para LV. O grupo de tratamento incluiu pacientes (n=20) que tiveram LV no pos-transplante. O grupo controle (n=100) foi composto por receptores de transplante renal sem LV no pos-transplante. O estudo investigou variaveis socioeconomicas, demograficas e clinicas, bem como dados de laboratorio. Analise Bivariada e Regressao Logistica Multipla foram realizadas para identificar fatores de risco para LV. RESULTADOS: O tempo medio entre o transplante e infeccao por Leishmania foi de 29,4 meses. A maioria (85%) dos casos foi curada. Em 95% dos casos o mielograma foi utilizado na identificacao das formas de Leishmania. Os Potenciais fatores de risco identificados nos pacientes transplantados renais incluiram: infeccao bacteriana apos o transplante (odds ratio [OR] = 3,00; intervalo de confianca de 95% [IC] = 0,96-9,37), infeccao por Citomegalovirus (CMV) apos o transplante (OR=5,29; IC 95% =1,27-21,97), convivio com gatos (OR= 5,74; IC 95% = 1,15-28,76) e ausencia de ruas pavimentadas no bairro (OR= 2,14; IC 95% = 0,71-6,43). Fator Rh negativo foi um fator protetor para LV (OR = 0,26; IC 95% = 0,06-1,02). CONCLUSAO: Infeccao por CMV no pos-transplante e o convivio com gatos elevaram significativamente o risco para LV em transplantados renais, enquanto o fator Rh negativo foi um fator protetor. O mielograma foi o exame mais utilizado na identificacao de Leishmania. No presente estudo, a LV apresentou-se na sua forma clinica classica, e apesar da gravidade, houve baixos indices de mortalidade dos receptores e perda dos enxertos renais / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-08-21T18:19:33Z No. of bitstreams: 1 Tese_versao_final_Tália.pdf: 1946064 bytes, checksum: 3f43e249b71311bf82e36d76fdcdf61d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-21T18:19:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_versao_final_Tália.pdf: 1946064 bytes, checksum: 3f43e249b71311bf82e36d76fdcdf61d (MD5) / A leishmaniose visceral (LV) e uma doenca parasitaria grave que afeta anualmente 500.000 pessoas em 65 paises. No Brasil, mais de 15.000 casos de LV foram registrados entre os anos de 2007 e 2010, com 880 mortes. Esta elevada taxa de letalidade esta, em parte, relacionada a ineficiencia dos servicos de saude em diagnosticar e tratar precocemente os pacientes. O diagnostico da LV exige suspeicao clinica e confirmacao laboratorial eficientes. Assim, uma reestruturacao do algoritmo e do arsenal de metodos diagnosticos disponiveis nos servicos de saude pode ajudar a melhorar este cenario, aumentando o acesso e a disponibilizacao de testes nos municipios. O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho de diferentes abordagens para o diagnostico da LV humana no Brasil, atraves da avaliacao do desempenho do teste de aglutinacao direta (DAT) e do teste rapido IT-LEISH; do desenvolvimento e validacao de modelos preditivos clinico-laboratoriais e da avaliacao de metodos diagnosticos pela analise de classes latentes (ACL). O grupo de estudo compreendeu 404 pacientes, residentes no Piaui, Maranhao, Bahia e Minas Gerais, com suspeita de LV, submetidos ao exame do aspirado de medula ossea e a coleta de sangue para a realizacao dos testes sorologicos. Para a avaliacao do desempenho do DAT e do IT-LEISHR foi utilizada a analise de validacao classica (AVC) utilizando como padrao de referencia o exame do aspirado de medula ossea. Para o desenvolvimento e a validacao dos modelos preditivos foram utilizados dados epidemiologicos, clinicos e laboratoriais dos pacientes avaliados. Os modelos preditivos utilizando regressao logistica multipla (RLM) foram desenvolvidos no software STATAR e aqueles utilizando arvore de classificacao e regressao (CART) foram desenvolvidos no software SPLUSR. Para a avaliacao da aplicabilidade da ACL foram utilizados dados do estudo de validacao do IT-LEISHR e do DAT e a analise foi realizada no software R. O DAT e o IT-LEISH apresentaram, pela AVC, sensibilidades e especificidades de 90 e 93%; 93 e 97%, respectivamente. O modelo preditivo composto pelas variaveis clinicas e laboratoriais associadas ao teste rapido foi o que apresentou melhor desempenho, tanto pela RLM, quanto por CART (sensibilidade de 90,1% e especificidade de 97,2-97,4%). A ACL mostrou-se util na validacao de testes diagnosticos para LV no Brasil, estimando para o DAT e o IT-LEISH sensibilidades de 88,5 e 94% e especificidades de 95,4 e 100%, respectivamente. Diante do elevado desempenho apresentado, o DAT e o teste rapido IT-LEISH estao indicados para o diagnostico da LV humana no Brasil. Os modelos preditivos desenvolvidos sao uteis e poderiam ser utilizados em centros de referencia para a doenca no pais. A ACL esta indicada para validacao de testes diagnosticos no pais e quando possivel deve ser utilizada. / Visceral leishmaniasis (VL) is a severe parasitic disease that affects 500 000 people yearly in approximately 65 countries. In Brazil, more than 15.000 VL cases were reported between 2007 and 2010, with 880 deaths. This high fatality rate is partly related to the inefficiency of health services to diagnose and treat early patients. The diagnosis of VL requires effective clinical suspicion and laboratory confirmation. Thus, a restructuring of the algorithm and the arsenal of available diagnostic methods in health services can help improve this scenario, by increasing the access and availability of tests in the municipalities. The objective of this study was to evaluate the performance of several approaches for the diagnosis of human VL in Brazil, through of evaluation of performance of DAT and rapid test IT-LEISH; of developing and validating of predictive models and of evaluation of diagnostic methods by the latent class analysis (LCA). The study group was composed by 404 patients, from the states of Piaui, Maranhao, Bahia and Minas Gerais, with suggestive clinical of VL, submitted to the examination of bone marrow aspirate and blood collection for the performance of serological tests. To evaluate the performance of the DAT and the rapid test IT-LEISHR was used the classic validation analysis, using as reference standard the examination of bone marrow aspirate. To develop and validate the predictive models were used epidemiological, clinical and laboratory data of the patients. The predictive models using logistic regression were developed in STATAR software and those using classification and regression tree (CART) were developed in the software SPLUSR. To evaluate the applicability of the LCA were used data from the validation study of the rapid test IT-LEISHR and the DAT and the analysis was performed in software R. The DAT and the rapid test IT-LEISHR showed, by the classic validation analysis, sensitivities and specificities of 90 and 93%, 93 and 97% respectively. The predictive model composed of clinical-laboratory variables and rapid test IT-LEISHR developed using both logistic regression and the model CART showed the best performance (sensitivity 90.1% and a specificity of 97.2 to 97.4%). The LCA proved to be a useful tool for the validation of diagnostic methods for human VL in Brazil, estimating for the DAT and the rapid test IT-LEISHR sensitivities of 88.5 and 94% and specificities of 95.4 and 100% respectively. The DAT and the rapid test IT-LEISHR showed high performance and are indicated for the diagnosis of VL in Brazil. The predictive models developed are useful and could be used in reference centers for VL in the country. The LCA is indicated for validation of diagnostic tests in Brazil and when possible should be used.

Made available in DSpace on 2015-11-11T12:07:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 joanna_oliveira_ioc_dout_2012.pdf: 15696220 bytes, checksum: 6efb10fddae91e99a98db7885605ee11 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-05-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A coinfecção Leishmania/HIV vem sendo considerada uma associação em várias regiões do mundo e a evolução da doença é agravada pelo comprometimento imune causado por ambos os patógenos. A ativação crônica é um dos principais substratos imunopatogênicos decorrentes da infecção pelo HIV-1 e também pela Leishmania infatum. Neste contexto, este estudo teve por objetivo avaliar a influência da infecção por Leishmania no grau de comprometimento quantitativo e qualitativo dos linfócitos T e na ativação do sistema imune de pacientes coinfectados. Além disso, foram avaliados fatores microbianos associados à ativação celular na leishmaniose visceral (LV) e na coinfecção LV/HIV-1, bem como, o impacto da reconstituição imune pós-terapia antiretroviral (TARV) e do tratamento anti-Leishmania na recuperação da resposta imune celular na LV. Para isso, foram avaliados LV/HIV-1, sendo vinte e um casos com LV ativa e quatorze em fase de remissão pós-tratamento anti-leishmania. Sete casos fazem parte de um estudo longitudinal e ainda se encontram em acompanhamento até o momento Indivíduos com LV (fase ativa e de remissão), casos de HIV-1 e indivíduos sadios também foram estudados como controles. O comprometimento imune foi avaliado através das contagens absolutas de linfócitos T CD4 + , expressão de moléculas associadas à ativação celular (CD38) e à senescência/diferenciação replicativa (CD57 e CD27), bem como, pela caracterização das regiões variáveis da cadeia beta (V\03B2) do receptor de linfócitos T ex vivo e in vitro. Os fatores potencialmente associados à ativação celular também foram avaliados, entre eles: carga viral plasmática (CV), quantificação do parasitismo por Leishmania, níveis de lipopolissacarídeo (LPS), CD14 solúvel (sCD14), proteína intestinal ligadora de ácido graxo (IFABP) e o perfil de citocinas circulantes. Os pacientes LV/HIV-1 apresentaram contagens de linfócitos T CD4 + inferiores a 250 células/mm 3 , sem correlação com a CV e independente da fase clínica. Os maiores percentuais de linfócitos T CD8 + expressando CD38 foram observados nos pacientes coinfectados, comparados aos casos de HIV-1/AIDS e de LV apenas. Além disso, tais níveis permaneceram elevados apesar do uso de TARV e da menor carga parasitária pós-tratamento anti-leishmania. O acompanhamento prospectivo de um paciente LV/HIV-1 até longo tempo pós-tratamento para LV também mostrou a ausência de recuperação quantitativa e qualitativa da resposta imune celular, aliado à presença de lesões cutâneas concomitantes e episódio de reativação Altos níveis de LPS foram observados nos casos de LV apenas, os quais se correlacionaram com a ativação de células T, sCD14, IFABP e citocinas pró-inflamatórias, sugerindo que um produto bacteriano não associado à infecção por Leishmania e, de provável origem luminal, pode exercer um papel importante na imunopatogênese da LV. Os níveis de LPS também foram elevados na coinfecção LV/HIV-1 e embora não tenham sido superiores aos casos de HIV-1 apenas, se correlacionaram com o percentual de células T CD8 + ativadas e com o perfil de citocinas pró-inflamatórias. Consistente com o status de ativação celular e comprometimento imune, os pacientes LV/HIV-1 apresentaram níveis elevados de células senescentes e alterações no repertório do TCR, sem a mobilização diferencial de uma determinada família V\03B2 frente à coinfecção. Além disso, a análise prospectiva de cinco casos de LV/HIV-1 mostrou que o desfecho clínico da LV não pôde ser associado a um perfil de distribuição dos V\03B2 (mono/oligo/policlonal). Nossos resultados sugeriram que a associação LV/HIV-1 resulta num efeito sinérgico in vivo, no qual o grau de ativação celular e o perfil de citocinas liberadas podem estar diretamente relacionados à infecção por L. infantum e suas consequências imunopatogênicas, bem como à atividade estimulatória do LPS. Estudos prospectivos poderão auxiliar a validar o papel desses parâmetros imunológicos no prognóstico da associação Leishmania/HIV / Leishmania/HIV co-infection has been considered an association in many regions around the world and the outcome of this disease is aggravated by immune impairment caused by both pathogens. Chronic immune activation is a hallmark of HIV-1 and Leishmania infantum infection separately. In this context, our aim was to evaluate the influence of Leishmania infection in the degree of quantitative and qualitative impairment of T lymphocytes and in the cellular activation of co-infected patients. In addition, we also evaluated microbial products associated with cellular activation in visceral leishmaniasis (VL) and in VL/HIV co-infection, as well as, the impact of immune reconstitution after antiretroviral therapy (ART) and anti-leishmania treatment in the recovery of specific immune response to VL. For this purpose, VL/HIV-1 co-infected patients were evaluated: twenty one cases in the active phase of VL and fourteen in the remission. Among VL/HIV-1 patients, seven cases are part of a longitudinal study and they are still in follow up until this moment. Individuals with VL (active and remission), HIV-1 infection and healthy subjects were also investigated as controls. The immune impairment was evaluated by the absolute counts of CD4+ T cells, expression of molecules associated with cellular activation (CD38) and to replicative senescence/differentiation (CD57 and CD27), as well as, by the ex vivo and in vitro characterization of the variable regions of the beta chain (Vβ) of T cell receptor (TCR). Factors potentially associated with cellular activation were also assessed, such as: plasma viral load, Leishmania parasite load, lipopolyscharide levels (LPS), soluble CD14 (sCD14), intestinal fatty acid binding protein (IFABP) and the profile of plasma cytokines. VL/HIV-1 co-infected patients presented counts of CD4+ T cells lower than 250 cells/mm3, without correlation with viral load and independent of clinical phase of leishmaniasis. The highest percentages of CD8 T cells expressing CD38 were observed in co-infected patients, especially those with the visceral form of the disease, compared with HIV-1 and VL cases alone. Moreover, such high levels remained despite ART use and lower parasite load in the remission co-infected patients. The prospective analysis of one VL/HIV-1 patient until long term after anti-Leishmania treatment also showed the absence of quantitative and qualitative recovery of the cellular immune response, coupled with concomitant cutaneous lesions and reactivation episode. High levels of LPS were observed in VL cases alone, which correlated with T-cell activation, sCD14, IFABP and pro-inflammatory cytokines levels, suggesting that a bacterial molecule not associated with Leishmania infection, and probably from luminal origin may play an important role in the immunopathogenesis of VL. LPS levels were also elevated in VL/HIV-1 patients, and although no higher than HIV-1 cases, it were correlated with activated CD8+ T cells and with inflammatory cytokines. Consistent with the cellular activation state and immune impairment, co-infected patients presented high levels of senescent cells and alterations in the TCRVβ repertoire, without the differential mobilization of any Vβ for VL/HIV-1 co-infection. In addition, prospective analysis of five VL/HIV-1 cases showed the clinical outcome could not be associated with any Vβ profile (mono/oligo/polyclonal). Our results suggested that VL/HIV-1 association results in a synergistic effect in vivo, in which the degree of cellular activation and the profile of cytokines may be directly related to L.infantum infection and its immunopathogenic consequences, along with the stimulatory LPS activity. Prospective studies may help to validate the role of these immunologic parameters in the prognosis of Leishmania/HIV co-infection.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-04-11T16:10:17Z No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_LaraSaraiva.pdf: 5064404 bytes, checksum: 0de0a8fd07fbd0e6a577f8be885ebb1b (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2016-04-11T16:10:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_LaraSaraiva.pdf: 5064404 bytes, checksum: 0de0a8fd07fbd0e6a577f8be885ebb1b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-11T16:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_DIP_LaraSaraiva.pdf: 5064404 bytes, checksum: 0de0a8fd07fbd0e6a577f8be885ebb1b (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / O município de Belo Horizonte e sua região metropolitana ilustram o mais sério exemplo de expansão da leishmaniose visceral no sudest e do Brasil. O município e o parque Estadual do Sumidouro localizam-se no bioma cerrado, segundo ma ior bioma terrestre da América do Sul. Os objetivos deste projeto foram: estudar a variação sazonal da fauna flebotomínica no DS Venda Nova (Belo Horizonte) e no PES; descrever os padrões de riqueza e diversidade fauna flebotomínica nas formações vegetais do PES e no DS Venda Nova; de terminar a taxa de infecção natural de fêmeas capturadas; est udar a variação morfológica das populações de Lu. longipalpis coletadas nos diferentes ambientes; aval iar os impactos das ações de controle realizadas no DS Venda Nova nas taxas de oc orrência sazonal e dens idade das populações de flebotomíneos. Foram realizadas coletadas mensais no pe ríodo de agosto de 2011 a agosto de 2013. Os insetos foram identificados de acordo com Galati 2003. As fêmeas coletadas não ingurgitadas foram submetidas à extração de DNA e reações de PCR e de PCR-RFLP para a averiguação da infecção natural por espécies de Leishmania. Para comparação das localidades de estudo foi utilizada análise descritiva e índices ecológicos. Para a comparação morfológica trinta casais (quinze proveni ente do DS Venda Nova e quinze do PES) da espécie Lu. longipalpis foram medidos, e foram comparados tantos as médias como as variâncias dos caracteres entre os grupos. As ações de contro le da LV no DS Venda Nova realizadas nos período de janeiro de 2011 a dezembro de 2013 foram analisadas descritivamente e relacionadas à curva sazonal de Lu. longipalpis . A riqueza, a diversidade e a equitabilidade da fauna de flebotomíneos foram marcadamente dife rentes entre o DS Venda Nova e o PES. Na área urbana foram coletados 2.247 espécimes pertencentes a cinco gênero s e oito espécies, a curva de acumulação de espécies atingiu a satu ração na 19º amostragem. No DS Venda Nova a curva de variação sazonal foi delineada principalmente por Lu. longipalpis e 95,3% dos espécimes pertenciam a esta espécie. Lu. longipalpis apresentou taxas de infecção natural de 1,01% para Leishmania infantum e 1,77% para Leishmania braziliensis . No PES foram coletados 4.675 espécimes pertencentes a ci nco gêneros e 25 esp écies e a curva de acumulação atingiu a saturação na 16º amostragem. No PES não houve uma única espécie que apresentasse padrão tão pronunciado de dominância. Lu. longipalpis correspondeu a 5,35% dos espécimes. Diversas espécies com envolvi mento (suspeito ou comprovado) nos ciclos de LTA foram registradas. Uma fêmea do comple xo cortellezzi apresent ou detecção positiva para Le. braziliensis. A comparação morfométrica e de co mposição de feromônios indicou grande similaridade entre as duas populações de Lu. longipalpis avaliadas. A análise realizada para co rrelação das ações de controle com a variação sazonal de Lu. longipalpis indicam a necessidade de estudos pormenorizados para inferências mais robustas. Os resultados evidenciam a dominância da espécie Lu. longipalpis no ambiente urbano, e indicam que as mudanças antrópicas no cerrado podem a lterar a composição das populações de flebotomineos e os ciclos de tran smissão de patógenos aos humanos. / The municipality of Belo Horizonte and its me tropolitan region illustrate the most serious example of the expansion of leishmaniasis in southeast Brazil. The m unicipality of Belo Horizonte, its metropolitan region, and th e Sumidouro State Park, are in the Brazilian Savannah biome (Cerrado). This is the second la rgest terrestrial biome in South America. The aims of this project were: to study the seasona l variation of sand flies in SD Venda Nova (Belo Horizonte) and in the PES; to describe the ric hness and diversity pa tterns of sand flies in the vegetable formations of PES and SD Venda Nova; to determine the natural infection rate of females captured; to study the morphological variation of Lu. longipalpis populations from different environments; to evaluate the im pacts of LV control actio ns carried out in DS Venda Nova in seasonal occurr ence of sandflies. Sampling was performed every month over three consecutive days using HP light trap s form August 2011 to August 2013. The insects were identified according to Galati 2003. Th e non-engorged females were subjected to DNA extraction and PCR reactions and the PCR-RFLP for the investigation of natural infection with Leishmania species. To compare the study sites was used descriptive analysis and ecological indexes. In the morphological comp arison thirty couples (fifteen from the DS Venda Nova and fifteen PES) of Lu. longipalpis species were measured and the means and variances were compared. The LV control actions in DS Venda Nova conducted in the period from January 2011 to December 2013 were analyzed descriptively and related to seasonal curve Lu. longipalpis. Richness, diversity and evenness in the study areas, urban and park protected area, were distinct. In Venda Nova SD 2.427 sand flies specimen s belonging to five genera and eight species were collected and the species accumulation curve reached saturation in the 19º sampling. In Sumidouro State Park a total of 4,675 sand flie s specimens belonging to nine genera and 25 species were collected and the species accumulation curve reached the saturation in the 16º sampling. In Venda Nova SD the species seasonal variation curve is predominantly determined by Lu. longipalpis . In Venda Nova 95.3% of the collected specimens belonged to the species Lu. longipalpis and this species exhibited a natural infection rate of 1.01% for Le. infantum and 1.77% for Le. braziliensis . In the Sumidouro State Park a total of 4,675 sand fly specimens of 25 species bel onging to nine genera were collected. The seasonal curve is not delineated by a unique species. In the park area, Lu. longipalpis accounted for only 5.35% of the collect ed specimens. The main vector of Le. infantum , Lu. longipalpis, accounted for only 5.35% of the specimens collected. Proven or suspected vectors of Le. braziliensis were recorded, and one female of the cortellezzii complex tested positive for Le. braziliensis DNA. The results make evident the Lu. longipalpis dominance in the urban environment. Our d ata demonstrate that anthropic modifications in the savannah studied area sign ificantly altered the sandflies populations and the Leishmania transmission cycles.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:01:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 78.pdf: 8994728 bytes, checksum: 69b907a918fd891b88f8ba01c3be666b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Este trabalho buscou avaliar a eficiência do teste rápido SandFly em campo, tendo a PCR como padrão ouro. As coletas e a realização dos testes se deram na Ilha da Marambaia, Estado do Rio de Janeiro, que possui registros de LTA em humanos e LVC. As capturas de flebotomíneos ocorreram utilizando armadilhas luminosas do tipo CDC, que funcionaram entre 19:00 hr e 7:00 hr da manhã seguinte, durante 2 meses consecutivos, Setembro e Outubro de 2014, totalizando 8 coletas em 5 áreas distintas. No total, foram coletados 1505 espécimes de flebotomíneos. Para o diagnóstico de infecção, as fêmeas de cada coleta foram escolhidas ao acaso e separadas em pools de dez; cada pool foi macerado com o tampão de lise e metade de cada amostra foi utilizada nos testes; a outra metade foi encaminhada para realização da PCR. O restante dos flebotomíneos foi encaminhado para identificação de espécies. Nos TRs, 4 resultados foram positivos, 1 em Setembro (amostra A13) e 3 em Outubro (B11, B13 e B14) nos 49 pools analisados, todos sendo fracos. O diagnóstico pela PCR revelou infecção natural por Leishmania em flebotomíneos de 3 áreas na Ilha de Marambaia: Praia Grande, Praia de São José e Praia da Cutuca: 7 resultados positivos (A13, A17, A18, A19, A22, A23 e A24) nas 29 amostras de Setembro e 7 resultados positivos (B01, B02, B05, B06, B09, B13 e B17) nas 19 amostras com fêmeas de Outubro, totalizando 14 resultados positivos. Comparando ao padrão ouro, dos 49 testes realizados: 2 revelaram ser verdadeiros positivos, 33 verdadeiros negativos, 2 falsos positivos e 12 falsos negativos. / Cálculos foram feitos para avaliar a eficiência do TR comparado à PCR: a sensibilidade relativa encontrada foi de 14 por cento e a especificidade relativa de 94,2 por cento. O Valor Preditivo Positivo encontrado foi VPP= 0,50 enquanto o Valor Preditivo Negativo foi VPN= 0,73; a acurácia foi 0,71. Para verificar a concordância entre os testes diagnósticos foi utilizado o índice de concordância de Kappa. Esta concordância foi considerada fraca, com o valor de k= 0,1091 Concluiu-se que apesar do teste rápido SandFly possuir boa especificidade, a sensibilidade deve ser melhorada. Para identificar as espécies de flebotomíneos foi utilizada a nomenclatura de Galati (2003); dentre essas, 6 espécies foram identificadas Nyssomyia intermedia, Migoneimyia migonei, Pintomyia fischeri, Evandromyia edwardsi, Brumptomyia sp. e Micropygomyia capixaba. Cabe ressaltar que as taxas de infecção encontradas foram altas e carecem de mais investigações. A taxa mínima de infecção referente aos dois meses foi de 2,9 por cento e a taxa mínima de infecção em Praia Grande nos dois meses foi de 3,5 por cento. A melhora da sensibilidade do teste rápido e sua validação de campo apontam para um avanço significativo na luta contra as Leishmanioses. / This study aimed to evaluate the efficiency of the Sandfly rapid test in the field considering the PCR as the gold standard. The collections and the tests were performed in Marambaia Island (State of Rio de Janeiro) that has records of Tegumentar Leishmaniasis in humans and Visceral Leishmaniasis in dogs. The collections were performed using CDC light traps from 7 pm to 7 am, for 2 consecutive months - September and October 2014, totaling 8 collections in 5 different areas. A total of 1505 sandflies were collected. Females of each collection were chosen at random and stored in labeled pools of 10 specimens. Each pool was macerated with lysis buffer solution and half of each sample was used in the tests; the other half of the samples was referred for evaluation of infection by Leishmania spp. through PCR. The remaining sandflies were sent for species identification. 4 rapid test results were positive - 1 September (sample A13) and 3 October (B11, B13 and B14) in the 49 analyzed pools and all were weak. Diagnosis by PCR revealed Leishmania natural infection in 3 areas in Marambaia Island: Praia Grande, Praia de São José and Praia da Cutuca. It was 7 positive results (A13, A17, A18, A19, A22, A23 and A24) in 29 samples of September and 7 positive results (B01, B02, B05, B06, B09, B13 and B17) in 19 samples with October females, totaling 14 positive results. Considering PCR as the gold standard, 2 rapid tests results were evaluated as true positives, 33 as true negative, 2 as false positives and 12 as false negatives. Some calculations were performed to evaluate the rapid test efficiency compared to PCR. The relative sensitivity was 14 percent and the relative specificity was 94.2 percent. The Positive Predictive Value was PPV = 0.50 while the Negative Predictive Value was 0.73. The accuracy was 0.71. ^ien / The Kappa agreement index was used to verify the correlation between the diagnostic tests, that was considered weak, with the value of k = 0.1091. It was concluded that despite the Sandfly rapid test has a good specificity the sensitivity needs to be improved. 6 species of sandflies were identified: Nyssomyia intermedia, Migoneimyia migonei, Pintomyia fischeri, Evandromyia edwardsi, Brumptomyia sp. and Micropygomyia capixaba. It is noteworthy that infection rates found were high and require more investigation. The minimum infection rate of the two months was 2.9 percent and the minimum rate of infection in Praia Grande within two months was 3.5 percent. The improvement of the rapid test sensitivity and its field validation points to a significant advance in the fight against Leishmaniasis. (AU)^ien