Foram selecionados aleatoriamente 38 cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) infantum chagasi oriundos de Araçatuba, São Paulo, área endêmica para leishmaniose visceral, e os quais foram distribuídos em dois grupos: o primeiro com 24 cães sintomáticos e, o outro, composto por 14 animais assintomáticos. Correlacionou-se a caracterização clínica (assintomáticos ou sintomáticos) com os: potencial em infectar o inseto vetor, padrão inflamatório da pele, perfil de imunidade celular e parasitismo tegumentar desses cães. Quanto ao número de formas amastigotas/mm2 no tegumento, não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos (p = 0,1584), sendo que a densidade de parasitos na pele mostrou uma correlação positiva moderada com os títulos de anticorpos anti-Leishmania (p = 0,042). Quanto à infectividade ao vetor, evidenciada pelo xenodiagnóstico, 16 (66,7%) cães sintomáticos e 13 (93%) assintomáticos foram capazes em transmitir Leishmania aos flebotomíneos, dentre estes, respectivamente, seis (37,5%) e oito (61,5%) animais não apresentavam parasitismo cutâneo, embora todos, de ambos os grupos, tenham sido positivos quando da pesquisa de parasitos no linfonodo poplíteo. Observou-se um maior percentual de transmissibilidade para o vetor a partir de cães assintomáticos (p = 0,0494). As alterações histológicas cutâneas foram similares em ambos os grupos e se caracterizaram, de modo geral, por um infiltrado inflamatório, ora focal ora difuso, na derme, constituído, principalmente, por células mononucleares (macrófagos, linfócitos e plasmócitos), variando de discreto a intenso. Quanto à caracterização da resposta imune celular no tegumento dos animais, somente a densidade (células/mm2) de células iNOS+ foi significantemente maior na derme dos cães sintomáticos quando comparado aos assintomáticos (p = 0,0368). Observou-se correlação positiva moderada entre a densidade de parasitos na pele e a densidade de macrófagos (p = 0,031), de células T CD4+ (p = 0,015) e CD8+ (p = 0,023), e, também, naquela de células iNOS+ relativamente a de células T CD3+ (p = 0,005), CD4+ (p = 0,001) e CD8+ (p = 0,0001). Verificou-se, ainda, correlação negativa moderada com o número de manifestações clínicas e/ou gravidade da enfermidade (p = 0,028), confirmando, assim, maior transmissibilidade de parasitos ao vetor, a partir de animais assintomáticos, demonstrando-se, dessa forma, que tais cães são fontes de infecção em potencial para insetos vetores em áreas endêmicas para leishmaniose visceral canina. / Thirty-eight dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi were randomly selected from Araçatuba of São Paulo state (Brazil), an endemic area for visceral leishmaniasis. The subjects were distributed into two groups: the first comprising 24 symptomatic dogs and the second consisting of 14 asymptomatic dogs. Possible correlations of clinical characterization (in both symptomatic and asymptomatic subjects) with potential to infect the insect vector, skin inflammatory pattern, cutaneous cellular immunity profile and cutaneous parasitism were investigated. Regarding to the number of cutaneous leishmania amastigotes/mm2, there was not a significant difference between the groups (p = 0.1584); density of skin parasites showed a moderate positive correlation with anti-Leishmania antibody titers (p = 0.042). Concerning to the infectivity to the insect vector, as evidenced by xenodiagnosis, 16 (66.7%) symptomatic and 13 (93%) asymptomatic dogs were able to transmit Leishmania to phlebotomines. Among these, six (37.5%) and eight (61.5%) dogs, respectivelly, did not show cutaneous parasitism, although all participant dogs were found positive when searching for parasites in the popliteal lymph nodes. Asymptomatic dogs showed higher transmissibility to the vector than symptomatic ones (p = 0.0494). Histological features in the skin were similar in both groups and were generally characterized by an inflammatory infiltrate, either diffuse or focal, in the dermis, mainly consisted of mononuclear cells (macrophages, lymphocytes and plasma cells), varying from mild to intense. Concerning characterization of the cutaneous cellular immune response, only iNOS+ cells density (cells/mm2) was significantly higher in the dermis of the symptomatic dogs compared to the asymptomatic ones (p = 0.0368). Moderate positive correlation between the cutaneous parasites density and the macrophages density (p = 0.031), the CD4+ T cells (p = 0.015) and CD8+ T cells (p = 0.023) were observed. Furthermore, density of iNOS+ cells in relation to CD3+ T cells (p = 0.005), CD4+ T cells (p = 0.001) and CD8+ T cells (p = 0.0001) were found positively correlated at a moderate level. It was also found a moderate negative correlation between cutaneous parasites density and the number of clinical signs and/or disease severity (p = 0.028), confirming grater parasites transmission to the vector from asymptomatic animals. It was therefore demonstrated that these dogs are potential sources of infection to insect vectors in endemic areas for canine visceral leishmaniasis.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Protium heptaphyllum March (Burseraceae), a medicinal plant commonly found in the Amazon and in the Northeast regions of Brazil, releases an oil-resin rich in pentacyclic triterpenes, such as the binary mixture of alpha- and beta- amyrin, that manifests antiinflamatory, antinociceptive and gastroprotective properties. This work was aimed to evaluate the antinociceptive effect of the alpha- and beta- amyrin mixture in the cyclophosphamide (400 mg/kg), acetic acid (0,6%, 10mL/kg, i.p.) and mustard oil-induced visceral nociception models in mice and to establish the likely mechanism(s) of action. In the cyclophosphamide-induced visceral pain model, pretreatment of mice with triterpene mixture at the oral doses of 10, 30 and 100 mg/kg significantly reduced (p<0.001) the pain-related behavioral expression time (59,7; 75,5 e 92,3%, respectively, versus the cyclophosphamide-treated group 12,25 +/- 2,98 min) in a dose-dependent manner. Suppression of visceral painârelated behaviors was also evidenced to the triterpenoid mixture (10 mg/kg) in the intraperitoneal acetic acid- and intracolonically injected mustard oil-induced test models of visceral nociception 50,4% e 61,1%, respectively compared to the acetic acid-treated group (42,33 +/- 3,78 abdominal constrictions/20 min) in the writhing test and to the control in the mustard oil (0,75%, 50 mcL/animal) experiment (39,28 +/- 3,26). In these tests, the maximal suppression of visceral pain was observed at 10 mg/kg. The possible mechanisms involved in the antinociceptive action of alpha- and beta- amyrin (10 mg/kg) were analyzed in the mustard oil-induced visceral pain model. In the evaluation of the opioid receptor involvement, both the triterpene mixture and morphine (5 mg/kg, s.c.) effectively inhibited (p<0.001) the number of pain-related behaviors, which could be significantly reversed by pretreatment of animals with an opioid antagonist naloxona (2mg/kg, i.p.), suggesting the opioid participation in the alpha- and beta- amyrin mechanism of action. In the study of the alpha2-adrenoreceptor involvement, the triterpene mixture as well as clonidine (0.1 mg/kg, i.p.), a known alpha2 agonist, inhibited (p<0.001) the nociceptive behavioral expression. However, when the animals were pretreated with yohimbine, an alpha2-adrenoreceptor antagonist, only the inhibitory action of clonidine was reversed, suggesting the non-participation of alpha2- adrenoreceptor in the antinociceptive action of alpha- and beta- amyrin. In the evaluation of TRPV1 receptor involvement, mice pretreated with either the alpha- and beta- amyrin, ruthenium red, a TRPV1 non-competitive antagonist, (3 mg/kg, s.c.) or their combination induced a significant and similar inhibition (p<0.001) of the number of nociceptive behaviors. The degree of inhibition with no potentiation or antagonism suggests that alpha- and beta- amyrin may act as a TRPV1 non-competitive antagonist, like ruthenium red. In order to evaluate a possible sedative, motor impairment and motor incoordination effects related to alpha- and beta- amyrin, the penthobarbitone-induced sleeping time, open-field and rota-rod tests were performanced, respectively. The data indicated that the treatment of animals with the alpha- and beta- amyrin mixture (10 mg/kg) was unable to cause sedation, motor impairment or motor incoordination effects (p>0.05), being even able to reverse (p<0.05) a mustard oil-induced motor impairment in the open field test. The results taken together strongly suggest the therapeutic potential of alpha- and beta- amyrin in oblitering visceral nociception through the mechanisms that involve the opioids and TRPV1 receptors. / O Protium heptaphyllum March. (Burseraceae), uma planta medicinal encontrada na regiÃo AmazÃnica e Nordeste do Brasil, produz uma resina rica em triterpenos pentacÃclicos, como a mistura binÃria alpha- e beta- amirina, que apresentam atividade antiinflamatÃria, gastroprotetora e antinociceptiva. Este trabalho objetivou investigar a atividade antinociceptiva de alpha- e beta- amirina em modelos de dor visceral induzida por ciclofosfamida, Ãcido acÃtico e Ãleo de mostrada em camundongos, alÃm dos possÃveis mecanismos de aÃÃo envolvidos. No modelo de nocicepÃÃo visceral induzida por ciclofosfamida (400 mg/kg, i.p.), a mistura de triterpenos nas doses de 10, 30 e 100 mg/kg, v.o., reduziu (p<0,001) de forma dose-dependente o tempo de expressÃo dos comportamentos relacionados à dor visceral (59,7; 75,5 e 92,3%, respectivamente, versus o controle ciclofosfamida 12,25 +/- 2,98 min). Realizou-se o estudo nos modelos de contorÃÃes abdominais induzidas por Ãcido acÃtico (0,6%, 10mL/kg, i.p.) e dor visceral induzida por Ãleo de mostarda (0,75%, 50 mcL/animal) intracolÃnico. Os resultados indicaram uma inibiÃÃo do nÃmero de comportamentos de dor expressos pelos animais, sendo o maior nÃvel de inibiÃÃo (p<0,001) encontrado na dose de 10 mg/kg da alpha- e beta- amirina 50,4% e 61,1% comparados respectivamente ao controle Ãcido acÃtico (42,33 +/- 3,78 contorÃÃes/20min) no teste de contorÃÃes abdominais e ao controle Ãleo de mostarda (39,28 +/- 3,26) no modelo de dor visceral por Ãleo de mostarda. Para o estudo do possÃvel mecanismo de aÃÃo de alpha- e beta- amirina foi utilizada a dose de 10 mg/kg da mistura de triterpenos no modelo de nocicepÃÃo por Ãleo de mostarda. Na avaliaÃÃo da participaÃÃo do sistema opiÃide, a mistura dos triterpenos e a morfina (5 mg/kg, s.c.) inibiram significativamente (p<0,001) o nÃmero de comportamentos de dor expressos, havendo uma reversÃo da antinocicepÃÃo (p<0,05) quando prÃ-tratados com naloxona (2 mg/kg, i.p.), sugerindo a participaÃÃo opiÃide no mecanismo da alpha- e beta- amirina. No estudo do envolvimento do sistema adrenÃrgico, a mistura de triterpenos e a clonidina (0,1 mg/kg, i.p.), um agonista alpha2-adrenÃrgico, inibiram (p<0,001) a expressÃo dos comportamentos nociceptivos. PorÃm, com o prÃ-tratamento com ioimbina, um antagonista alpha2, houve reversÃo (p<0,05) da antinocicepÃÃo induzida pela clonidina, mas nÃo da alpha- e beta- amirina, sugerindo o nÃo envolvimento deste receptor na antinocicepÃÃo da mistura de triterpenos. No estudo do envolvimento do receptor TRPV1, o prÃ-tratamento dos animais com alpha- e beta- amirina, vermelho de rutÃnio (3 mg/kg, s.c.), um antagonista nÃo competitivo deste receptor, ou com a combinaÃÃo da mistura de triterpenos com vermelho de rutÃnio, houve uma inibiÃÃo (p<0,001) semelhante, para todos os tratamentos, dos comportamentos de dor. A nÃo potencializaÃÃo, ou antagonismo, do efeito antinociceptivo de alpha- e beta- amirina pelo vermelho de rutÃnio sugere que a mistura atue como um antagonista nÃo-competitivo TRPV1. Para avaliar a existÃncia de um efeito sedativo, de um impedimento locomotor ou de uma incoordenaÃÃo motora, foram utilizados os testes do tempo de sono induzido por pentobarbital, teste do campo aberto e o teste do rota rod, respectivamente. Os dados indicaram que o tratamento com a mistura de triterpenos (10 mg/kg) nÃo induziu (p>0,05) sedaÃÃo, impedimento locomotor ou incoordenaÃÃo motora nos animais, sendo ainda capaz de reverter (p<0,05) o impedimento locomotor induzido pelo Ãleo de mostarda no teste do campo aberto. Em conjunto os dados revelaram a efetividade da mistura de alpha- e beta- amirina em modelos de nocicepÃÃo visceral possivelmente envolvendo receptores opiÃides e TRPV1.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O lÃtex vermelho (Sangre de Grado) extraÃdo de algumas espÃcies de Croton à utilizado na medicina popular no tratamento de cÃncer, reumatismo, feridas, Ãlceras, diarrÃia, cÃlicas intestinais e no combate Ãs infecÃÃes. O presente trabalho teve por objetivo investigar uma possÃvel atividade antimicrobiana do lÃtex do Croton urucurana Baill. (LCU) e seu potencial antiinflamatÃrio intestinal e antinociceptivo visceral. Foram utilizados os modelos de colite induzida por Ãcido acÃtico e lesÃo intestinal induzida por isquemia-reperfusÃo mesentÃrica em ratos; contorÃÃes abdominais induzidas por Ãcido acÃtico, cistite induzida por ciclofosfamida e dor visceral induzida por capsaicina em camundongos; alÃm de modelos, in vitro, avaliando as atividades antibacteriana e antifÃngica do LCU. No modelo de colite induzida por Ãcido acÃtico, o prÃ-tratamento com LCU (200 e 400 mg/kg, v.r.) reduziu (p<0,05) a relaÃÃo peso Ãmido/comprimento do cÃlon, a atividade das enzimas mieloperoxidase e catalase e a produÃÃo de nitrito em relaÃÃo ao controle. No modelo de isquemia-reperfusÃo mesentÃrica o prÃ-tratamento com o LCU (200 e 400 mg/kg, v.o.) preveniu (p<0,01) o aumento das atividades da mieloperoxidase e catalase e o aumento dos nÃveis de nitrito associados à isquemia-reperfusÃo. O LCU (200 mg/kg) tambÃm preveniu (p<0,001) a reduÃÃo no nÃvel de glutationa reduzida neste modelo. Ambas as doses reduziram (p<0,05) o nÃmero de contorÃÃes induzidas por Ãcido acÃtico, o nÃmero de comportamentos nociceptivos induzidos pela capsaicina e o tempo de comportamentos relacionados a dor visceral na cistite induzida por ciclofosfamida. O prÃ-tratamento com naloxona (5 mg/kg, i.p.) reverteu a atividade antinociceptiva do LCU (200 mg/kg, v.o.) no modelo de dor visceral induzida por capsaicina, contudo, a ioimbina (2 mg/kg, i.p.) nÃo foi capaz de reverter tal efeito. A atividade antinociceptiva do LCU, neste modelo, nÃo foi potencializada pela administraÃÃo de L-nitro arginina metil Ãster (20 mg/kg, i.p.) ou vermelho de rutÃnio (3 mg/kg, s.c.). O LCU nÃo demonstrou atividade contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli e as leveduras Candida sp., Trichosporon sp. e Malassezia sp., no entanto, apresentou atividade contra os dermatÃfitos Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton tonsurans, Trichophyton rubrum, Microsporum canis e Epidermophyton floccosum no mÃtodo de difusÃo em discos e demonstrou concentraÃÃo inibitÃria mÃnima de 1,25 mg/mL para o Trichophyton tonsurans e 2,5 mg/mL para as demais espÃcies. Os resultados sugerem que o LCU apresenta atividade antiinflamatÃria intestinal, possivelmente por sua aÃÃo antioxidante, alÃm de atividades antinociceptiva visceral e antifÃngica. Sua atividade antinociceptiva nÃo depende de mecanismo &#945;2-adrenÃrgico, contudo parece haver envolvimento de mecanismo nitriÃrgico e opiÃide, assim como de receptores vanilÃides. Estes resultados confirmam o uso popular do LCU e este pode ser explorado como alternativa para o tratamento das dermatofitoses, das doenÃas inflamatÃrias intestinais e dos distÃrbios da funÃÃo gastrointestinal / The red sap (Sangre de Grado) extracted from some Croton species is used in folk medicine for the treatment of cancer, rheumatism, wounds, ulcers, diarrhoea, intestinal colics and to combat infections. The aim of this study was to evaluate a possible antimicrobian activity of the sap extracted from Croton urucurana Baill. (SCU) and its intestinal antiinflammatory and visceral antinociceptive potential. The experimental models used were acetic acid-induced colitis and mesenteric ischemia/reperfusion-induced intestinal injury in rats; acetic acid-induced writhing, cyclophosphamide-induced cystitis and capsaicin-induced visceral pain in mice; and in vitro models to evaluate the antibacterian and antifungal activities of SCU. In the acetic acid-induced colitis, the pretreatment with SCU (200 and 400 mg/kg, r.r.) reducted (p<0,05) the wet weight/length ratio of colonic tissue, the myeloperoxidase and catalase activities and the nitrite production in comparison to control animals. In mesenteric ischemia/reperfusion model the pretreatment with SCU (200 and 400 mg/kg, p.o.) prevented (p<0,01) the increase in the myeloperoxidase and catalase activities and the ischemia/reperfusion-associated increase in nitrite level. The SCU (200 mg/kg, p.o.) also prevented (p<0,001) the depletion in reduced glutathione level in this model. Both doses reduced (p<0,05) the number of acetic acid-induced writhing, the number of capsaicin-induced nociceptive behaviour and the time of visceral pain-related behaviour in cyclophosphamide-induced cystitis in mice. The pretreatment with naloxone (5 mg/kg, i.p.) reverted the SCU (200 mg/kg, p.o.) antinociceptive activity in capsaicin-induced visceral pain model, however, ioimbine (2 mg/kg, i.p.) failed to mitigate in a significant manner, this antinociceptive effect. The SCU antinociceptive activity, in this model, was not potentiated by L-nitro-arginine-methyl esther (20 mg/kg, i.p.) or rutheniun red (3 mg/kg, s.c.). SCU failed to show activity against the bacterias (Staphylococus aureus and Escherichia coli) and yeasts tested (CÃndida sp., Trichosporon sp. and Malassezia sp.), although, presented activity against the dermatophytes Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton tonsurans, Trichophyton rubrum, Microsporum canis and Epidermophyton floccosum in paper disk diffusion method and showed minimal inhibitory concentration of 1,25 mg/mL for Trichophyton tonsurans and 2,5 mg/mL for the others species. In conclusion, the results of this study suggest that the SCU presents intestinal antiinflammatory activity, possible because of its antioxidant action, visceral antinociceptive activity and antifungal activity against dermatophytes. Its antinociceptive effect is probable dependent of opioid and nitriergic mechanism, with a possible participation of vaniloid receptors without involvement of &#945;2-adrenergic receptors. This results confirm its popular use, and it can be explored as an alternative treatment for dermatophytosis, inflammatory intestinal diseases and functional gastrointestinal disorders

As leishmanioses são um conjunto de doenças infecto parasitárias, de caráter zoonótico, que acometem os seres humanos, animais domésticos e silvestres, causadas por protozoários do gênero Leishmania. O presente trabalho objetivou comparar o desempenho de testes moleculares empregados no diagnóstico da leishmaniose visceral canina, em cães classificados em diferentes estágios clínicos da doença. Foram coletadas amostras biológicas, sangue e suabe conjuntival, em 215 cães, das cidades de Pirassununga, Santa Cruz das Palmeiras, Andradina e Ilha Solteira, todas localizadas no Estado de São Paulo, e foram separados e classificados em quatro estágios clínicos: assintomáticos, doença leve, moderada e severa, conforme os sinais clínicos, além da sorologia, hemograma e perfil bioquímico. Além disso, os animais foram submetidos a testes moleculares de PCR convencional com os primers 13A/13B, MC1/MC2, Nested-PCR ITS1, com os primers LITSR e L58S, PCR em tempo real com os primers LEISH-1 e LEISH-2 e sonda TaqMan-MGB. Nos resultados foi observado que os primers 13A e 13B, direcionados a amplificar fragmentos de kDNA de Leishmania spp., possuem uma maior capacidade em detectar animais positivos no sangue em estágio inicial de sintomatologia clínica, quando comparados aos outros (p&lt;0,05). Utilizando amostras de suabe conjuntival não houve diferença significativa na detecção de animais positivos entre as diferentes fases clínicas e diferentes testes moleculares avaliados (p&gt;0,05), exceto com relação aos primers MC1 e MC2, que foram significativamente menos capazes de detectar cães positivos na fase inicial da doença que os outros (p&lt;0,05). As amostras positivas ao ITS1 sequenciadas apresentaram 99 a 100% de similaridade com Leishmania infantum. Podemos concluir que a PCR com os primers MC1 e MC2 não é indicada na detecção de cães com leishmaniose e que a PCR de sangue com os primers 13A e 13B é mais eficiente na detecção de animais no início da doença. Os resultados reforçam a necessidade de se aprimorar as ferramentas de diagnóstico e de se associar mais de uma técnica e/ou tipo de amostra para a detecção eficiente da leishmaniose canina. / Leishmaniasis is a group of parasitic infectious diseases with zoonotic potential that affect humans, domestic, and wild animals caused by protozoa of the genus Leishmania. The present study aimed to compare the performance of molecular tests used in the diagnosis of canine visceral leishmaniasis in dogs classified in different clinical stages of the disease. Biological samples, blood and conjunctival swab, were collected from 215 dogs from cities of Pirassununga, Santa Cruz das Palmeiras, Andradina, and Ilha Solteira, all of them located in the State of São Paulo. The animals were separated into four clinical stages: asymptomatic, mild disease, moderate disease, and severe disease according to the clinical signs, serology, hemograma, and biochemical profile. In addition, the animals were submitted to conventional PCR molecular tests with primers 13A / 13B, MC1 / MC2, Nested-PCR ITS1, with primers LITSR and L58S, real-time PCR with LEISH-1 and LEISH-2 primers, and TaqMan-MGB probe. In the results, it was observed that primers 13A and 13B directed to amplify fragments of Leishmania spp. kDNA have greater capacity to detect positive animals in blood and initial stage of clinical symptomatology, when compared to others (p&lt;0.05). There was no significant difference in the detection of positive animals between the different clinical phases and different molecular tests evaluated using conjunctival swab samples (p&gt;0.05), except for primers MC1 and MC2, which were significantly less able to detect positive dogs in the initial phase of the disease than the others (p&lt;0.05). Sequenced positive samples by ITS1 showed 99 to 100% similarity to Leishmania infantum. We can conclude that PCR with the primers MC1 and MC2 is not indicated in the detection of dogs with leishmaniasis, and the PCR of blood with the primers 13A and 13B is more efficient in the detection of animals at the beginning of the disease than others. The results reinforce the necessity to improve diagnostic tools and to associate more than one technique and/or type of sample for efficient detection of canine leishmaniasis.

A patogenia na leishmaniose visceral (LV) não é totalmente conhecida. Em LV em hamsteres avaliamos a participação de imunoglobulinas nas lesões. IgG foi detectada no sinusóide hepático, nos septos pulmonares e nos capilares glomerulares, em maior intensidade aos 30 e 45 dias pós-infecção (PI); C3 estava ausente, exceto no rim. Os dados não sendo compatíveis com a deposição de imunocomplexo, estudamos ultraestruturalmente a internalização de imunoglobulinas. No fígado e no rim a quantidade de imunoglobulina em célula endotelial era maior aos 30 dias PI em relação ao controle não infectado e no pulmão, aos 30 dias PI em relação aos 60 dias PI. Imunoglobulina internalizada por célula endotelial observada neste estudo na LV em hamsteres, marcadamente aos 30 dias PI, pode ser um mecanismo alternativo de lesão na LV / Pathogenesis of visceral leishmaniasis (VL) is not fully known. In VL in hamsters we evaluated the participation of immunoglobulins in the lesions. IgG was detected in the hepatic sinusoid, in the lung alveolar walls and in the glomerular capillaries in higher intensity at 30 and 45 days post-infection (PI); there were no C3, except in the kidney. Since the data were not compatible with immune complex deposition, we studied ultraestructurally the internalization of immunoglobulins. In the liver and in kidney the amount of immunoglobulin within endothelial cells was greater at 30 days PI than in non infected control, and in the lung at 30 days PI in relation to 60 days PI. Immunoglobulin internalized by endothelial cells observed in VL in hamsters, remarkably at 30 days PI, may be an alternative mechanism of lesion in VL

A leishmaniose visceral (LV) é uma doença crônica e potencialmente fatal causada, no Brasil, pelo protozoário Leishmania infantum. A resistência à LV é relacionada ao desenvolvimento de uma resposta imune celular eficiente. Para isso, células dendríticas (DCs) reconhecem produtos antigênicos do parasito, através dos Toll-like Receptors (TLRs), e, após ativação, produzem fatores, que irão orquestrar o recrutamento celular e desenvolvimento da resposta imune protetora. Dentre os vários TLRs, tem sido demonstrado que o TLR9 está relacionado com a resistência à infecção em modelo de leishmaniose cutânea. No presente estudo, nosso objetivo foi determinar o papel do TLR9 durante a infecção por L. infantum. Nossos resultados demonstram que a expressão de TLR9 é modulada positivamente durante a infecção in vivo e in vitro pela L. infantum. O TLR9 é essencial para o controle da infecção contra L. infantum, uma vez que camundongos TLR9-/- são mais susceptíveis à infecção, apresentando maior número de parasitos no baço e fígado na 4ª e 6ª semana pós-infecção. A fenotipagem de leucócitos presente no baço demonstrou que camundongos TLR9-/- possuem menor número de neutrófilos. De maneira semelhante, a análise imuno-histoquímica mostrou uma reduzida marcação de células 7/4+ (específica para neutrófilos) no fígado de animais TLR9-/-. A falha na migração de neutrófilos observada em animais TLR9-/- não está associada a uma incapacidade de ativação dos polimorfonucleares, mas sim a deficiências na produção de fatores quimiotáticos, como CXCL1 (KC) e CXCL2 (MIP-2) nos órgãos-alvo. Investigando o mecanismo de ação, as células dendríticas oriundas de animais TLR9-/- falham em seu processo de ativação frente à infecção in vitro e in vivo com L. infantum, apresentando um fenótipo semi-maduro, com redução de expressão de MHC-II e moléculas coestimuladoras. Interessante que essas células apresentaram deficiência na produção de mediadores quimiotáticos de neutrófilos como KC e MIP-2, e consequentemente, induzindo o menor recrutamento de neutrófilos in vitro. Em conjunto, nossos resultados demonstram que o TLR9 é essencial para o controle da infecção por L. infantum, através de um mecanismo dependente do recrutamento de neutrófilos para o sítio inflamatório mediado pela ativação apropriada de fatores quimiotáticos de neutrófilos pelas DCs. / Visceral leishmaniasis (VL) is a chronic and potentially fatal disease caused by protozoan Leishmania infantum, in Brazil. The resistance against VL is related to the development of cellular immune response. During infection, the dendritic cells (DCs) recognize antigenic products through Toll-like Receptors (TLRs) and then orchestrate the cellular recruitment and immune response development. Among several TLRs, it has been showed that TLR9 is related to resistance to cutaneous leishmaniasis. In the present study, our aim was to determinate the role of TLR9 during L. infantum infection. Our results demonstrated that TLR9 is up regulated during in vitro and in vivo L. infantum infection. TLR9 is critical for protective immunity against L. infantum, since TLR9-/- mice infected were more susceptible to infection, displaying high amounts of parasites in spleen and liver, at 4th and 6th weeks post-infection. Phenotyping the leukocytes into the spleen, TLR9-/- mice presented reduced neutrophils when compared to WT. Likewise, imunohistochemistry analyses showed the reduced of 7/4+ cells (specific to neutrophils) staining into the TLR-9-/- liver. The failure of neutrophil migration is not associated to their stage of activation impaired, but due the reduced levels of CXCL1 (KC) and CXCL2 (MIP-2) (neutrophil chemoatracttant) produced into into the spleen cells culture from infected TLR9-/-. Furthermore, DCs from TLR9-/- presented a semi-mature stage during in vitro and in vivo L. infantum infection, showing reduced expression of MHC-II and co-stimulatory molecule. Interestingly, the ability of DC to produce the neutrophil chemotact mediators (KC and MIP-2) was completely reduced by that derived from TLR9-/- mice, affecting neutrophil migration into Boyden chamber. Altogether, we demonstrated that TLR9 presents a critical role in the protective response against L.infantu through the mechanism dependent of crosstalk between neutrophil recruitment and DC activation.

Uma análise espaço-temporal da leishmaniose visceral americana (LVA) humana no município de Bauru foi conduzida baseada em 239 casos diagnosticados entre junho de 2003 a outubro de 2008. O georreferenciamento, tomando como unidade os setores censitários, foi realizado a partir de informações cedidas pela Secretaria de Saúde de Bauru a respeito do endereço residencial dos pacientes acometidos pela enfermidade. A análise da distribuição espacial da doença demonstrou que os casos ocorreram especialmente na área urbana do município. As incidências cumulativas anuais de LVA, considerando os casos adotados por ano e as respectivas projeções populacionais, foram calculadas, evidenciando que a taxa mais elevada foi observada em 2006. Tal fato foi confirmado pelo delineamento da série histórica, que também derivou o cálculo da tendência, demonstrando que esta foi positiva durante o período analisado. O índice sazonal obtido foi confrontado com dados referentes às médias mensais de precipitação pluviométrica e temperatura do município, o que nos permitiu inferir que meses que obtiveram índices com valores superiores a um, eram, de maneira geral, precedidos por períodos chuvosos. A variável temperatura, por sua vez, apesar de provavelmente estar relacionada à ocorrência da enfermidade na região, aparentemente não exerceu influência na sazonalidade da doença por se apresentar sem oscilações importantes no período. A análise de clusters, utilizando o método estatístico espaço-temporal scan, detectou um provável aglomerado localizado nas regiões sudoeste e central do município no ano de 2006. Uma análise descritiva univariada, comparando setores censitários que apresentaram LVA com relação aos que não relataram casos da doença, foi conduzida. Apesar da diferença significativa observada entre os dois grupos, novos estudos são necessários para se confirmar a hipótese de que variáveis socioeconômicas são prováveis fatores de risco para a infecção na região. / A space-time analysis of human American visceral leishmaniasis (AVL) was carried out based on 239 cases diagnosed from June 2003 through October 2008. The georeferencing, taking the census tracts as units, was performed according to information supplied by the Bauru Health Department about AVL patient addresses. The disease spatial analysis showed that cases occurred specially at the urban area of the city. AVL annual incidence rates, considering adopted cases per year and the respective projected population, were calculated, demonstrating that the highest rate was observed in 2006. It was confirmed by the time series analysis, which also resulted the tendency calculation, showing that it was positive during the analyzed moment. The obtained seasonal indices were confronted with data about the citys average rainfall and temperature, which allowed us to infer that months with indices higher than one, were, generally, preceded by rainy periods. The temperature, on the other hand, although is probably related to the infection occurrence at the region, seemingly did not exert influence on the disease seasonality because it was presented without important fluctuations in the period. The cluster analysis, using scan space-time statistics, detected a most likely cluster located in the Southwest and Central city side in 2006. A univariate descriptive analysis, comparing census tracts that presented AVL with those that did not report case disease, was carried out. Although the significant difference observed between both groups, new researchers are needed to confirm the hypothesis that socioeconomic variables were likely infection risk factors in the region.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Visceral leishmaniasis (VL) is a serious infectious disease that if left untreated can lead to death. Chemotherapy is the main form of treatment and antimony are the drugs of first choice. Treatment efficacy is a consequence of the immunological profile of the patient, the pharmacokinetic properties of the drug and the inherent differences in each strain. The resistance of parasites to the antimonial and resistance to treatment is emerging worldwide. Few studies using clinical isolates of patients refractory to treatment seeking to understand the machinery of resistance. Thus, the present study aimed to characterize phenotypic components of clinical isolates of Leishmania (L.) infantum obtained from patients with LV refractory to treatment with Glucantime®. changes were evaluated ultrastructural front of the trivalent antimony (SbIII) and Action transport pumps related to drug efflux. In total, four strains were used: Two isolates treatment refractory patients and two isolates from patients responsive to treatment with antimony. The susceptibility of these strains was evaluated in vitro exposure to increasing concentrations of promastigotes SbIII and determination of median inhibitory concentration (IC50). In comparison, the IC50s of separate refractory patients are significantly greater than the IC50 of patients responsive isolated, showing an in vitro drug resistance profile. From these results, the concentration of 615 μM of SbIII was chosen to perform the experiments. This concentration proved to be toxic, but fully compatible with survival in all isolates. Then the isolates were subjected to transmission electron microscopy (TEM) after being exposed to 615 μM of SbIII for 48 hours. The two isolates from patients responsive to treatment demonstrated significant ultrastructural changes, with the presence of vacuolization, disorganization and cytoplasmic compression with increased eletrodensidade, and the strong presence of cells with intense loss eletrodense the cytoplasm, indicating incompatibility with life. While the two isolates from treatment refractory patients had preserved ultrastructure, with the presence of morphologically altered, compressed and electrodense cells, indicating the stress response. Finally, to assess the presence of transmembrane transport mechanisms related to drug efflux, the isolates were subjected to two protocols: using the fluorescent probe Rhodamine 123 with the channel blocker, verapamil hydrochloride, and the exposure to SbIII plus verapamil hydrochloride The results showed that MDR-1 type pumps are not related to the different in vitro resistance profiles to antimony in isolates from antimony-refractory patients. Together, the results of this study show that clinical refractory patients isolates have phenotypic characteristics that make her different behavior of isolates from patients responsive when exposed to antimony in vitro. / A leishmaniose visceral (LV) é uma doença infecciosa grave que se não tratada pode levar a morte. A quimioterapia é a principal forma de tratamento e os antimoniais são as drogas de primeira escolha. A eficácia do tratamento é uma consequência do perfil imunológico do paciente, das propriedades farmacocinéticas da droga e das diferenças intrínsecas de cada cepa. A resistência dos parasitos aos antimoniais e a refratariedade ao tratamento é mundialmente emergente. Poucos estudos utilizam isolados clínicos de pacientes refratários ao tratamento buscando compreender as maquinarias de resistência. Dessa forma o presente estudo teve como objetivo caracterizar componentes fenotípicos de isolados clínicos de Leishmania (L.) infantum obtidos de pacientes com LV refratários ao tratamento com Glucantime®. Foram avaliadas alterações ultraestruturais frente ao antimonial trivalente (SbIII) e ação de bombas de transporte relacionadas ao efluxo de droga. No total, foram utilizados quatro isolados: dois isolados de pacientes refratários ao tratamento e dois isolados de pacientes responsivos ao tratamento com antimonial. A susceptibilidade desses isolados foi avaliada in vitro com a exposição de promastigotas a concentrações crescentes de SbIII e determinação da concentração inibitória média (IC50). Quando comparadas, as IC50s dos isolados de pacientes refratários são significativamente maiores que as IC50s dos isolados de pacientes responsivos, mostrando um perfil de resistência a droga in vitro. A partir desses resultados, a concentração de 615 μM de SbIII foi escolhida para a execução dos experimentos. Essa concentração demonstrou ser tóxica, mas compatível com a sobrevivência em todos os isolados. Em seguida, os isolados foram submetidos a microscopia eletrônica de transmissão (MET) após serem expostos a 615 μM de SbIII por 48h. Os dois isolados de pacientes responsivos ao tratamento demonstraram alterações ultraestruturais significativas, com a presença de vacuolização, desorganização e compactação citoplasmática, com aumento da eletrodensidade, e a presença marcante de células com intensa perda de conteúdo eletrodenso do citoplasma, indicando incompatibilidade com a vida. Enquanto os dois isolados obtidos de pacientes refratários ao tratamento apresentaram algumas células morfologicamente alteradas, compactadas e eletrodensas, indicando resposta ao estresse. Por fim, para avaliar a presença de mecanismos de transporte transmembrana relacionados ao efluxo de droga, os isolados foram submetidos a dois protocolos: o uso da sonda fluorescente Rodamina 123 junto ao bloqueador de canais, cloridrato de verapamil, além do uso direto do verapamil na reversão da resistência durante a exposição ao SbIII in vitro. Os resultados obtidos demonstraram que bombas do tipo MDR-1 não estão relacionados aos diferentes perfis de resistência in vitro ao antimonial nos isolados de pacientes refratários. Juntos, os resultados encontrados no presente trabalho demonstram que isolados clínicos de pacientes refratários possuem características fenotípicas que tornam seu comportamento diferenciado dos isolados de pacientes responsivos quando expostos ao antimonial in vitro. / São Cristóvão, SE

Submitted by Adriana Martinez (amartinez@unoeste.br) on 2017-02-01T18:57:12Z No. of bitstreams: 1 LORIS.pdf: 1088686 bytes, checksum: d444fb845abdde639be5dfb9bc02c837 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-01T18:57:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LORIS.pdf: 1088686 bytes, checksum: d444fb845abdde639be5dfb9bc02c837 (MD5) Previous issue date: 2016-11-24 / Visceral leishmaniasis (VL) is considered an endemic zoonosis infecting people in more than 90 countries. Brazil alone harbors about 90% of VL cases in Latin America. In São Paulo state, canine visceral leishmaniasis (CVL) was first described in Araçatuba in 1998. In 2003, the disease was found in Dracena, which is located in the west region of São Paulo state, and, in 2010, in Presidente Prudente, which is considered a connecting axis between Mato Grosso do Sul and Paraná states, an epidemiological route of the disease. Our objective was to study the environmental risk factors related to the spreading of CVL in the urbanized area of Presidente Prudente, São Paulo state, Brazil. This is an epidemiologic, descriptive and sectional study, in which dogs showing positive serology to CVL in the period of 2010-2015 were distributed according to their owners address. In addition, watershed, forest fragments and irregular waste deposits were determined in the urbanized area of Presidente Prudente. There was a progressive increase of serologic positive dogs for CVL in the studied period. According to the Kernel map, the regions with increased number of infected dogs were around the open air drainage basins, forest fragments and irregular waste deposits, confirming that these are risk factors for the spreading of the disease. The determination of these risk factors and their possible association may contribute to the planning of effective public health policies, particularly in the environment system, human and canine population, intervening and controlling the biologic cycle of the disease. / A Leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose considerada endêmica a qual tem infectado pessoas em mais de 90 países. O Brasil concentra cerca de 90% dos casos na América Latina. No Estado de São Paulo o primeiro caso de leishmaniose visceral canina (LVC) foi descrito em 1998, em Araçatuba. Em 2003 foi encontrada em Dracena, região oeste do estado e, em 2010, na cidade Presidente Prudente, um eixo de ligação com Mato Grosso do Sul e Paraná, rota da cadeia epidemiológica da doença. Nosso objetivo foi determinar os fatores ambientais relacionados ao avanço da leishmaniose visceral canina na cidade de Presidente Prudente. Este é um estudo epidemiológico, descritivo, seccional, onde cães com sorologia positiva para leishmaniose visceral no período 2010-2015 foram distribuídos de acordo com o endereço de seus proprietários. Foram ainda determinados a bacia hidrográfica, fragmentos florestais e os locais de depósitos irregulares de resíduos na área urbanizada da cidade. Houve um aumento progressivo no número de cães com sorologia positiva para LV no período estudado. Pelo mapa de intensidade de Kernel, as regiões com maior número de cães infectados estavam próximas a bacia hidrográfica não canalizada, fragmentos florestais e depósitos irregulares de resíduos sólidos, mostrando serem esses fatores de risco para a dispersão do vetor. A determinação desses fatores, e suas possíveis associações, podem contribuir para o planejamento de políticas públicas dirigidas e eficientes no que se refere ao meio ambiente, a população humana e canina, intervindo e controlando o ciclo biológico da doença.

Submitted by Jakeline Ortega (jakortega@unoeste.br) on 2018-12-07T18:29:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Rodrigo Sala Ferro .pdf: 2121545 bytes, checksum: f1bfc8097c98c85ef74ff43ff78374c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-12-07T18:29:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Rodrigo Sala Ferro .pdf: 2121545 bytes, checksum: f1bfc8097c98c85ef74ff43ff78374c8 (MD5) Previous issue date: 2018-02-20 / Introduction: Human Visceral Leishmaniasis (HVL) is a serious illness with a distribution on all continents. In Latin America, Brazil harbors more than 90% of infected individuals and in the state of São Paulo the first case occurred in the northeast region in 1999; in 2005 autochthonous cases were found in the western region. Objective: analyze geospatial methods, to dispersion of HVL in the state of São Paulo, with an emphasis on the West of São Paulo. Methods: Epidemiological, sectional descriptive study, in which epidemiological data were obtained from public available databases. Maps were generated from georeferenced databases. Results: Between 1999 and 2016, 2715 people were diagnosed with HVL throughout São Paulo state, with an occurrence in 14.26% of the municipalities, with emphasis on the western region. R-square of 0.119 shows an increasing tendency of infection over the years, but with a decrease in the number of deaths. Even concentrated the disease reveals weak spatial dependence and transmission occurs in adjacent foci and jumps. The Normalized Difference Vegetation Index shows that HVL cases are mostly low to medium. In the state, there was no relationship between HVL and human development index (HDI). Conclusions: Throughout the state there is a new scenario of temporal distribution of HVL overwhelmed by jump dispersion. There has been a significant decrease in lethality especially in the last two triennia compared to the historical series. In the state of São Paulo, a relationship between low HDI and HVL was not observed. / Introdução: A Leishmaniose Visceral Humana (LVH) é uma doença grave com distribuição em todos os continentes. Na América Latina, o Brasil possui mais de 90% dos indivíduos infectados e no Estado de São Paulo o primeiro caso ocorreu na região nordeste em 1999. Em 2005, casos autóctenes foram encontrados na região oeste. Objetivo: analisar, por meio de métodos geoespaciais a dispersão de LV no Estado de São Paulo, com ênfase no Oeste Paulista. Métodos: Estudo epidemiológico, descritivo seccional, em que dados epidemiológicos foram obtidos a partir de órgãos disponíveis ao público, bem como a geração de mapas a partir de base de dados georreferenciadas. Resultados: Entre 1999 a 2016, 2715 pessoas apresentaram LVH em todo Estado de São Paulo, com uma ocorrência verificada em 14,26% dos municípios, destacando-se o Oeste Pauista. R-quadrado de 0,119 mostra uma tendência crescente da infecção ao longo dos anos, mas com diminuição no número de óbitos. Mesmo concentrada, a doença revela fraca dependência espacial, e a transmissão ocorre em focos adjacentes e saltos. O Índice de Vegetação por Diferença Normalizada mostra que os casos de LVH, em sua maioria, são de baixo a médio. No Estado, não houve relação entre LVH e IDH. Conclusões: Em todo o Estado há um novo cenário de distribuição espaço temporal da LVH com dispersão por saltos. Houve uma diminuição importante da letalidade especialmente nos últimos dois triênios, comparados com a série histórica. No Estado de São Paulo não observamos uma relação entre baixo IDH e LVH.