Submitted by CRISTIANE BECK null (cristiane.beck@unijui.edu.br) on 2016-06-28T00:42:01Z No. of bitstreams: 1 Tese completa biblioteca (1).pdf: 845254 bytes, checksum: 6e900872a3cf5efd5aa8d3ac1ff2985d (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-06-29T14:40:22Z (GMT) / Submitted by CRISTIANE BECK null (cristiane.beck@unijui.edu.br) on 2016-06-30T16:18:06Z No. of bitstreams: 1 Tese completa biblioteca.pdf: 1543432 bytes, checksum: 57e5b0af047f27b0a54c7540e57780b4 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-06-30T19:32:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 beck_c_dr_bot.pdf: 1543432 bytes, checksum: 57e5b0af047f27b0a54c7540e57780b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-30T19:32:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 beck_c_dr_bot.pdf: 1543432 bytes, checksum: 57e5b0af047f27b0a54c7540e57780b4 (MD5) Previous issue date: 2016-06-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Leishmaniose Visceral é uma doença infecciosa, de caráter zoonótico, emergente e de notificação obrigatória. No Brasil tem como agente o protozoário Leishmania infantum chagasi, e o principal reservatório é o cão (Canis familiaris). A transfusão sanguínea é muito utilizada na rotina da clínica, entretanto está associada a transmissão de doenças infecciosas. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do tratamento com a luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio na inativação da Leishmania infantum chagasi em sangue canino, quando inoculados em hamsters (Mesocricetus auratus). Foram preparados 3 grupos experimentais compostos por 6 hamsters cada. O grupo controle recebeu sangue negativo para Leishmania, o grupo doença foi inoculado com sangue parasitado com Leishmania infantum chagasi e o grupo tratamento recebeu sangue parasitado tratado com luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio. Os animais foram monitorados por 180 dias e então submetidos a avaliação clínica. Em seguida os animais foram anestesiados para a coleta de sangue por meio de punção intracardíaca e procedendo-se assim a eutanásia. O sangue foi colocado em microtubos e o soro separado por centrifugação e acondicionado a -30ºC, até a realização do teste de aglutinação direta. Após procedeu-se a coleta do fígado e baço para a realização da histopatologia. Outra parte destes órgãos e a medula óssea foram acondicionados em tubos livres de DNAse e RNAse, congelados a -30ºC até a realização da PCR e qPCR. Impressões do fígado e baço foram feitas em lâminas para a microscopia para verificar a presença das formas amastigotas do parasita. Após 180 dias os animais não apresentaram sinais clínicos e os exames sorológicos e parasitológicos foram negativos. Quanto ao exame macroscópico, alguns animais apresentaram hepato e esplenomegalia, já na análise histopatológica nenhum tecido analisado demonstrou formas amastigotas do parasita. Na avaliação da PCR o baço e a medula óssea de todos os hamsters, dos grupos doença e tratado, apresentaram amplificação da Leishmania infantum chagasi. Na qPCR ocorreu uma significativa diminuição (P<0,01) na parasitemia quando comparado ao grupo tratado com a luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio, com o grupo que recebeu sangue parasitado sem tratamento. Com esses resultados é possível concluir que a luz visível associada a ftalocianina de cloro-alumínio reduz a parasitemia da Leishmania infantum chagasi em sangue canino. / Visceral Leishmaniasis is an emerging zoonotic infectious disease that requires mandatory reporting. In Brazil, it is caused by the protozoan Leishmania infantum chagasi, with dogs as main reservoir (Canis familiaris). Blood transfusion is frequently used in clinical routine, however it is associated with the transmission of infectious diseases. The aim of this study was to evaluate the effects of treatment with visible light associated with chloro-aluminium phthalocyanine on the inactivation of Leishmania infantum chagasi in canine blood, when inoculated in hamsters (Mesocricetus auratus). Three experimental groups consisted of six hamsters each. The control group received blood negative for L. infantum chagasi, the diseased group was inoculated with blood infected with L. infantum chagasi, and the treatment group received infected blood previously subjected to therapy with visible light associated with chloroaluminium phthalocyanine. The animals were observed for 180 days and then subjected to clinical evaluation. Then the animals were anesthetized for blood collection through intracardiac puncture and were euthanized. The blood was placed into microtubes and the serum was separated by centrifugation and stored at -30 ° C until the direct agglutination test was performed. After, liver and spleen collection was performed to histopathological examination. Another part of these organs and bone marrow were placed in tubes DNase and RNase free, and frozen at -30°C until the PCR and qPCR were performed. Imprints of liver and spleen were performed on slides for microscopy to verify the presence of amastigotes of the parasites. After 180 days the animals showed no clinical signs and serologic and parasitological tests were negative. During pathological examination, some animals showed hepatomegaly and splenomegaly; under microscopic analysis, any tissue showed amastigote forms of the parasite. In the PCR evaluation of spleen and bone marrow, all hamsters from diseased and treated groups showed amplification of Leishmania infantum chagasi. Results from q-PCR revealed a significant decrease (P <0.01) in the number of parasites in the group inoculated with blood subjected to chloro-aluminium photodynamic therapy, compared to the group inoculated with parasitized blood that had not been subjected to photodynamic therapy. With these results it is possible to conclude that visible light associated with chlorine-aluminum phthalocyanine reduces parasitaemia of Leishmania infantum chagasi in canine blood. / FAPESP: 2014/03353-4

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AngelaPC.pdf: 1566185 bytes, checksum: 7d1058ec264f2b220826cdd6e4419f1f (MD5) Previous issue date: 2007-10-23 / The Visceral Leishmaniose (LV) disease is endemic in some places in Brazil. It is caused by the protozoa Leishmania chagasi, being transmitted for vector, the phlebotomies, Lutzomyia longipalpis. In virtue of the expansion of the illness in Rio Grande do Norte, it is necessary to evaluate the determinative ambient factors in the proliferation of the vector for better control of the illness. The variable rainfall and the social variables had been analyzed using space regression with two models and the ambient variable of ZANE and the variables analyzed in 205 houses in the cities of Natal, Extremoz, N?sia Floresta, S?o Gon?alo do Amarante, S?o Jose do Mipibu, Parnamirim and Maca?ba the Person and ML Chi-square were used . The analyses had shown that high rainfall, plain relief, the forest, the humid tropical climate the activities of production culture of sugar cane and fruit culture and the presence of bovines increase the risk of the LV. The work showed that it has space aggregation and that ambient factors influence in the LV in the State / A Leishmaniose Visceral (LV) ? uma doen?a end?mica em algumas regi?es do Brasil causada pelo protozo?rio Leishmania chagasi, sendo transmitida por vetor, o flebotom?neo, Lutzomyia longipalpis. Em virtude da expans?o da doen?a no Rio Grande do Norte, ? necess?rio avaliar os fatores ambientais determinantes na prolifera??o do vetor para melhor controle. Foram analisadas as vari?veis pluviom?tricas e sociais utilizando a regress?o espacial com dois modelos. Para as vari?veis ambientais do Zoneamento Agroecol?gico do Nordeste e as analisadas nos munic?pios de Natal, Extremoz, N?sia Floresta, S?o Gon?alo do Amarante, S?o Jos? do Mipibu, Parnamirim e Maca?ba, onde foram georeferenciadas 205 casas, utilizando-se o coeficiente de Pearson e tamb?m o qui-quadrado para as primeiras. Os resultados mostraram que alta pluviosidade, relevo plano, a presen?a de floresta, o clima tropical ?mido as atividades de produ??o cultivo de cana de a??car e fruticultura e a presen?a de bovinos aumentam o risco da LV. Foi confirmada que h? agrega??o espacial e que fatores ambientais influenciam na LV no Estado

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PauloRPN_DISSERT.pdf: 1361148 bytes, checksum: 4572b4a963991f34258d766f8d1c322f (MD5) Previous issue date: 2012-04-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Iron is an essential element for many cellular functions, including the immune response against intracellular pathogens. In this study, we aimed evaluate the effect of iron on IRP2, IFN-?, TNF-?, IL-6, IL-10, MIG and IP10 expression in PBMC and assess the effect of the spleen parasite load on the expression of these genes in the spleen of L. infantum naturally infected dogs. Blood sample from 7 DTH+ donor was collected and PBMC was obtained. The cells were cultivated in absence (iron chelator desferroximane, DFO 10 ?M supplemented media) or in presence of iron (hemin 6 mM) for 1 h, followed by stimulation with Leishmania infatum antigen for 4 h. 44 dog spleen samples were obtained and parasite load in this organ was determinate by qPCR. Gene expression was analyzed by qPCR and cytokine production quantified by flow cytometry. In antigen stimulated cells, genes involved in immune response are significantly more expressed in presence of iron. T CD4+ and TCD8+ lymphocytes produces IFN-?, TNF-? and IL-10 possibly in iron dependent pathway. Monocytes antigen stimulated reduced TNF-?, IL-6 and IL-10 production in presence of iron. We found spleen of infected dogs IRP2 expression increases according to parasite load in that organ, while an inverse profile was found for IFN-?, TNF-? e IL-10 expression. These results suggest that T lymphocytes depends on iron to produce IFN-?, TNF-? and IL-10, while iron seems to inhibit cytokine production in monocytes. So, we propose an immunoregulatory mechanism carried out by iron during L. infantum infection in humans and dogs / O ferro ? um elemento essencial para diversas fun??es celulares, incluindo a resposta imune a pat?genos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do ferro sobre a express?o dos genes IRP2, IFN-?, TNF-?, IL-6, IL-10, MIG e IP10 em c?lulas mononucleares de sangue perif?rico (CMSP) humano e examinar o efeito da carga parasit?ria espl?nica sobre a express?o destes genes no ba?o de c?es naturalmente infectados por L. infantum. Coletou-se amostras de sangue perif?rico de 7 indiv?duos DTH+ e obteve-se as CMSP. As c?lulas foram cultivadas na aus?ncia (quelante deferoxamina 10 ?M) ou presen?a de ferro (Hemina 6 mM) por 1 hora seguido de estimula??o com ant?geno de Leishmania infantum por 4 horas. Obteve-se o ba?o de 44 c?es e determinouse a carga parasit?ria neste ?rg?o por qPCR. A express?o g?nica foi avaliada por qPCR e a produ??o de citocinas foi quantificada por citometria de fluxo. Encontramos que na presen?a de ferro a express?o de genes envolvidos na resposta imune ? significativamente aumentada em CMSP. Linf?citos T CD4+ e TCD8+ produzem IFN-?, TNF-? e IL-10 possivelmente por uma via dependente de ferro. Em mon?citos a produ??o de TNF-?, IL-6 e IL-10 foram reduzidas em c?lulas estimuladas e cultivadas na presen?a do metal. Foi visto que no ba?o de c?es a express?o de IRP2 aumenta de acordo com a carga parasit?ria, sendo o inverso encontrado para IFN-?, TNF-? e IL-10. Os resultados sugerem que linf?citos T dependem de ferro para produzir IFN-?, TNF-? e IL-10, enquanto em mon?citos o ferro parece ter efeito inibit?rio sobre a produ??o de citocinas, sugerindo um efeito imunomodulat?rio para o ferro em humanos e c?es durante a leishmaniose visceral

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoseFlavioVC.pdf: 1066045 bytes, checksum: 95695454c994be62f483dac7ee237cd8 (MD5) Previous issue date: 2005-02-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Canine Visceral Leishmania (CVL) is an important zoonotic disease that has a world wide distribution and has a large impact on public health on the American Continent, especially in Brazil, where the nature of endemic diseases in humans affects a large part of the nation. The influence of the prevalence of CVL in the increased rate of human cases in endemic areas and in the unleashing of epidemic outbreaks shows the need for a more profound understanding, that would generate significant advances in the current measures used to control the reservoirs of sickness that are practiced by the Programa Nacional de Vigil?ncia e Controle da Leishmaniose Visceral. The present work describes and compares the clinical-laboratorial and histopathological findings of twenty-three dogs that were naturally infected by Leishmania chagasi, from endemic areas in metropolitan Natal, Rio Grande do Norte, Brazil. These animals, that were selected and given physical and serological exams (IFI and ELISA rK-39), were classified according to the degree of clinical severity and had blood samples drawn (whole blood and serum) for a complete hemogram and a coagulogram to be done as well as biochemical tests for kidney and liver function. The confirmation of infection by L. chagasi was done after the euthanasia of the animals, through the direct demonstration of the parasite in the impression of the spleen and liver crowned with GIEMSA and through a cultivation by means of NNN/Schneider. According to the clinical evaluation, the animals were classified as asymptomatic (7), oligosymptomatic (7) and polysymptomatic (9). Among the animals that were chosen to be autopsied, there were 2 asymptomatic, 3 oligosymptomatic and 3 polysymptomatic, for the purpose of studying their histopathology, having collected fragments of the spleen, liver, kidneys and skin and were fixed in 10% tamponed formol. The comparison between the average parameters of the clinical-laboratory tested animals in the groups was done through the Student t test (a<0.05). The main clinical signals observed were lymphadenomegaly, alopecy, dermatitis, exfoliation, cutaneous ulcers, onicogriphosis and emaciation. The main clinical-laboratorial alterations established, mainly in the polysymptomatic group, were anemia, hyperproteinemia, hyperglobulinemia, alterations in the albumin/globulin ratio and increased ALT activity. Renal alterations were not verified (urea and creatinine levels were normal). Thrombocytopenia was observed in three clinical groups. However, the other indicators of coagulation function (TAP and TTPA) did not have abnormal variations. There were inflammatory infiltrations and leishmania amastigotes in the skin of polysymptomatic dogs, however, they were not found in the skin of asymptomatic animals. Hypertrophy and hyperplasia of the phagocyte mononuclear system, leishmania amastigote parasites were found in the macrophages, extramedullary hematopoiesis and degenerative alterations were detected in the spleen and liver of 8 of the animals submitted to histopathological exams. In accord with these results, it was demonstrated that the expected alterations in the hematological and biochemical parameters in function of their viscerotropic nature of CVL are mainly observed in the more advanced stages of the disease. The absence of inflammatory infiltration and parasite load in the skin suggest that infected animals without symptoms may have an importance irrelevant to the infectiousness of the vector / A leishmaniose visceral canina (LVC) ? uma importante zoonose de distribui??o mundial com grande impacto em sa?de p?blica no Continente Americano, especialmente no Brasil, onde a natureza end?mica da doen?a humana afeta boa parte do territ?rio nacional. A influ?ncia da preval?ncia da LVC na amplia??o da taxa de casos humanos em ?reas end?micas e no desencadeamento de surtos epid?micos ainda carece de um entendimento mais profundo, o que geraria avan?os significativos nas atuais medidas destinadas ao controle de reservat?rios da doen?a preconizadas pelo Programa Nacional de Vigil?ncia e Controle da Leishmaniose Visceral. O presente trabalho descreveu e comparou os achados cl?nico-laboratoriais e histopatol?gicos de vinte e tr?s c?es infectados naturalmente pela Leishmania chagasi, provenientes de localidades end?micas da ?rea metropolitana de Natal-RN. Estes animais, escolhidos a partir de exame f?sico e sorologia (IFI e ELISA rK-39), foram classificados de acordo com o grau de comprometimento cl?nico e submetidos a coleta de sangue (sangue total e soro) para realiza??o de hemograma completo, provas bioqu?micas de fun??o renal e hep?tica, e coagulograma. A confirma??o da infec??o por L. chagasi foi realizada ap?s a eutan?sia dos animais, pela demonstra??o direta do parasita em impress?o de ba?o e f?gado corado com GIEMSA e atrav?s de cultivo em meio NNN/Schneider. De acordo com a avalia??o cl?nica, os animais foram classificados em assintom?ticos (7), oligossintom?ticos (7) e polissintom?ticos (9). Dentre os animais necropsiados, foram selecionados 2 c?es assintom?ticos, 3 oligossintom?ticos e 3 polissintom?ticos para o estudo histopatol?gico, sendo colhidos fragmentos de ba?o, f?gado rins e pele e fixados em formol a 10% tamponado. A compara??o entre as m?dias dos par?metros cl?nico-laboratoriais testados nos grupos foi realizada atrav?s do teste t de Student (&#945;<0,05). Os principais sinais cl?nicos observados foram linfadenomegalia, alopecia, dermatite esfoliativa, ?lceras cut?neas, onicogrifose e emacia??o. As principais altera??es cl?nico-laboratoriais estabelecidas, principalmente no grupo polissintom?tico, foram anemia, hiperproteinemia, hipoalbuminemia, hiperglobulinemia, altera??es no ?ndice albumina/globulina e aumento da atividade da ALT. Altera??es renais n?o foram verificadas (ur?ia e creatinina normais). Trombocitopenia foi observada no tr?s grupos cl?nicos, contudo, os outros indicadores da fun??o de coagula??o (TAP e TTPA) n?o apresentaram varia??es anormais. Foi observado Infiltrado inflamat?rio e amastigotas de leishmania na pele de c?es polissintom?ticos, por?m n?o na pele de animais assintom?ticos. Hipertrofia e hiperplasia do sistema fagocit?rio mononuclear, macr?fagos parasitados por amastigotas de leishmania, hematopoiese extramedular e altera??es degenerativas foram detectadas no ba?o e f?gado dos 8 animais submetidos a exame histopatol?gicos. De acordo com esses resultados, foi demonstrada que as altera??es esperadas nos par?metros hematol?gicos e bioqu?micos em fun??o da natureza viscerotr?pica da LVC s?o observadas principalmente em est?gios mais avan?ados da doen?a. A aus?ncia de infiltrado inflamat?rio e carga parasit?ria na pele sugerem que animais infectados sem sintomatologia talvez tenham import?ncia irrelevante na infectividade para o vetor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-06Bitstream added on 2014-06-13T20:38:48Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_jlb_me_botfmvz.pdf: 220428 bytes, checksum: f55d9bbbbfb43a44b14dd39304bafe3b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A estruturação dos serviços de saúde para o desenvolvimento de programas de controle de zoonoses como a raiva e leishmaniose se depara com recomendações sobre a importância de programas de controle populacional de cães, no entanto as normas do Estado de São Paulo para transporte de cães exigem apenas o atestado veterinário, inexistindo controle e registro da entrada de animais importados pelos órgãos oficiais, representando risco da introdução de novas doenças. O presente estudo foi realizado durante a 36ª campanha anual de vacinação anti-rábica de 2004, realizada pela Prefeitura de Botucatu em parceria com a FMVZ/UNESP de Botucatu/SP. O objetivo foi descrever a população de cães com ênfase em sua origem. Foi aplicado um questionário, a 676 proprietários, 4% dos 17.910 cães vacinados, em 20 postos de vacinação, representativos dos 47, distribuídos homogeneamente em cinco regiões da área territorial urbana. Para a escolha dos animais, considerou-se um plano de amostragem sistemática e para definição da amostra foi considerada a taxa de 10% de erro de estimação, com 95% de confiança. Cerca de 10% dos animais são originários de outras cidades, várias com transmissão de leishmaniose visceral, sendo um dos animais originário de outro estado. A maioria destes animais já residia na cidade há mais de um ano. Estes achados reforçam a importância de programas de controle populacional com registro e identificação de cães no estado, a fim de garantir informações para a tomada de decisão e definição de estratégias de contenção de doenças exóticas. / The organization of the health services for development of zoonosis programs control, as rabies and leishmaniasis are based on recommendations about the importance of control population of dogs, however São Paulo stateþs norms to transport dogs requires just the veterinarian authorization, no existing control and register of official agencies on the entrance of imported animals, representing risk of new diseases introduction. The present study was realized during the 36ª anti-rabies campaign on 2004 for the Botucatu city and the FMVZ/UNESP of Botucatu/SP. The objective was to describe the population of dogs emphasing the source, it was applied a questionnaire on 676 owners, 4% of 17,910 vaccinated dogs, in 20 ranks of vaccination, representing from 47, with equal distribution in five regions of the urban area. For selection of the animals, a systematic sample was performed and for sample definition, it was considered the tax of 10% of estimate error, with 95% confidence interval. Around 10% of the animals are from other cities, several had transmission of visceral leishmaniasis. Being one of the animals from another state. The majority of these animals inhabited in this city over than one year. These findings strengthen the importance of programs identification, register and control population of dogs in the state, in order to guarantee information for the decision and definition of strategies to block exotic diseases.

Resumo: A estruturação dos serviços de saúde para o desenvolvimento de programas de controle de zoonoses como a raiva e leishmaniose se depara com recomendações sobre a importância de programas de controle populacional de cães, no entanto as normas do Estado de São Paulo para transporte de cães exigem apenas o atestado veterinário, inexistindo controle e registro da entrada de animais importados pelos órgãos oficiais, representando risco da introdução de novas doenças. O presente estudo foi realizado durante a 36ª campanha anual de vacinação anti-rábica de 2004, realizada pela Prefeitura de Botucatu em parceria com a FMVZ/UNESP de Botucatu/SP. O objetivo foi descrever a população de cães com ênfase em sua origem. Foi aplicado um questionário, a 676 proprietários, 4% dos 17.910 cães vacinados, em 20 postos de vacinação, representativos dos 47, distribuídos homogeneamente em cinco regiões da área territorial urbana. Para a escolha dos animais, considerou-se um plano de amostragem sistemática e para definição da amostra foi considerada a taxa de 10% de erro de estimação, com 95% de confiança. Cerca de 10% dos animais são originários de outras cidades, várias com transmissão de leishmaniose visceral, sendo um dos animais originário de outro estado. A maioria destes animais já residia na cidade há mais de um ano. Estes achados reforçam a importância de programas de controle populacional com registro e identificação de cães no estado, a fim de garantir informações para a tomada de decisão e definição de estratégias de contenção de doenças exóticas. / Abstract: The organization of the health services for development of zoonosis programs control, as rabies and leishmaniasis are based on recommendations about the importance of control population of dogs, however São Paulo stateþs norms to transport dogs requires just the veterinarian authorization, no existing control and register of official agencies on the entrance of imported animals, representing risk of new diseases introduction. The present study was realized during the 36ª anti-rabies campaign on 2004 for the Botucatu city and the FMVZ/UNESP of Botucatu/SP. The objective was to describe the population of dogs emphasing the source, it was applied a questionnaire on 676 owners, 4% of 17,910 vaccinated dogs, in 20 ranks of vaccination, representing from 47, with equal distribution in five regions of the urban area. For selection of the animals, a systematic sample was performed and for sample definition, it was considered the tax of 10% of estimate error, with 95% confidence interval. Around 10% of the animals are from other cities, several had transmission of visceral leishmaniasis. Being one of the animals from another state. The majority of these animals inhabited in this city over than one year. These findings strengthen the importance of programs identification, register and control population of dogs in the state, in order to guarantee information for the decision and definition of strategies to block exotic diseases. / Orientador: José Rafael Modolo / Coorientador: Hélio Langoni / Banca: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: Sônia Regina Pinheiro / Mestre

Submitted by Simone Souza (simonecgsouza@hotmail.com) on 2018-04-30T14:51:55Z No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Patrícia Lazari.pdf: 1908360 bytes, checksum: 5c0cb095c70321b58bc79e57b6f59453 (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2018-05-16T14:36:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Patrícia Lazari.pdf: 1908360 bytes, checksum: 5c0cb095c70321b58bc79e57b6f59453 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-16T14:36:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Patrícia Lazari.pdf: 1908360 bytes, checksum: 5c0cb095c70321b58bc79e57b6f59453 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / CNPq / A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença causada pelo protozoário Leishmania chagasi e transmitida pela picada de fêmeas de flebotomíneos. O cão é considerado o principal reservatório do agente em áreas urbanas e a eutanásia de cães sororreagentes é um dos métodos de controle da LV. As técnicas utilizadas para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC) no Brasil, Ensaio Imunoenzimático (ELISA) e Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), foram amplamente questionadas devido à precisão desses testes. Neste contexto, testes moleculares têm sido utilizados para caracterizar o agente. Com o objetivo de isolar por cultura axênica, identificar a espécie de Leishmania circulante em cães e comparar a detecção pelas técnicas de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e eletroforese de isoenzimas, foram submetidos à eutanásia, 101 cães sororreagentes para LV aos testes de ELISA e RIFI, pertencentes à área urbana de Jaciara, Mato Grosso, município endêmico para LV e coletadas as amostras de baço, medula óssea, pele e sangue para estudo. Através da PCR, o baço apresentou melhor percentual de detecção, seguido da medula óssea e em 97 (96,03%) cães foi detectado DNA de Leishmania, confirmada como L. chagasi. A cultura axênica apresentou 60 (15%) isolados com a medula óssea apresentando maior percentual de isolamento da L. chagasi. Em 13 (12,87%) cães foi possível a caracterização do agente através da eletroforese de isoenzimas. Os resultados deste trabalho concluem que a L. chagasi circula em cães pertencentes à área urbana de Jaciara, ampliando informações sobre a distribuição do parasito no Estado e ressaltam a importância da identificação etiológica em área de simpatria com outros agentes, principalmente onde a eutanásia é método de controle de expansão da doença. / The visceral leishmaniasis (VL) is a disease caused by Leishmania chagasi and transmitted by the bite of female sand flies. The dog is considered the main agent reservoir in urban areas and euthanasia of seropositive dogs is one of the LV control methods. The techniques used for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL) in Brazil, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) and Reaction Immunofluorescence Assay (IFA), were widely questioned due to the accuracy of these tests. In this context, molecular tests have been used to characterize the agent. In order to isolate by axenic culture, identify the species of Leishmania circulating in dogs and compare the detection by reaction techniques Polymerase Chain (PCR) and isozyme analysis were euthanized, 101 seropositive dogs for LV to test ELISA and IFA, from the urban area of Jaciara, Mato Grosso, an endemic county for LV and collected the spleen samples, bone marrow, skin and blood to study. Using PCR, the spleen showed better detection percentage, followed by bone marrow and 97 (96.03%) dogs Leishmania DNA was detected and confirmed as L. chagasi. The axenic culture showed 60 (15%) isolates with bone marrow showing higher percentage of isolation of L. chagasi. In 13 (12.87%) dogs was possible to characterize the agent by isoenzyme electrophoresis. These results conclude that L. chagasi circulating in dogs from the urban zone of Jaciara, expanding information on the distribution of the parasite in the state and emphasize the importance of etiological identification sympatric area with other agents, especially where euthanasia is method expansion of disease control.

Submitted by Mariana Gatto (marianagatto11@hotmail.com) on 2018-05-21T17:47:50Z No. of bitstreams: 1 Tese Mariana Gatto.pdf: 3235524 bytes, checksum: b7c9938cd744aff0ff8a8ee5f858831e (MD5) / Approved for entry into archive by Sulamita Selma C Colnago null (sulamita@btu.unesp.br) on 2018-05-22T14:28:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gatto_m_dr_bot.pdf: 3235524 bytes, checksum: b7c9938cd744aff0ff8a8ee5f858831e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-22T14:28:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gatto_m_dr_bot.pdf: 3235524 bytes, checksum: b7c9938cd744aff0ff8a8ee5f858831e (MD5) Previous issue date: 2018-04-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A leishmaniose visceral (LV) é uma doença negligenciada causada por Leishmania donovani na Índia e África ou Leishmania infantum na Europa e América Latina. O desenvolvimento de resposta imune eficaz e subsequente eliminação destes patógenos, requer o reconhecimento inicial da Leishmania, o qual é intermediado por receptores de reconhecimento padrão expressos por células da imunidade inata, entre eles os receptores de ligação a nucleotídeo (NLRs). Alguns NLRs ativam uma plataforma de proteínas, os inflamassomas, responsáveis pela ativação da caspase-1 e maturação de IL-1β e IL-18 e outra classe de NLRs, chamada NODs, ativam vias que culminam na ativação de NF-κB e produção de mediadores inflamatórios. O envolvimento desses receptores na LV ainda é pouco elucidado. Mesmo diante dos mecanismos de defesa do hospedeiro, esses parasitas conseguem sobreviver dentro dos macrófagos utilizando várias estratégias para escapar da resposta imune. Para um melhor entendimento dos mecanismos imunes envolvidos na LV, caracterizamos o perfil transcricional e a formação de inflamassomas e NODsomas de células THP-1 infectadas com L. infantum. Os resultados mostram que a L. infantum não induziu produção de TNF-α, IL-6 e IL-1β e nem ativação de caspase-1 após 8, 24 e 48 horas de infecção. Além disso, a infecção resultou em padrão de expressão gênica similar às células sem estímulo e distinto de células estimuladas com LPS, indicando que os parasitas entram nas células de forma mais silenciosa. Após a infecção houve aumento da expressão de alguns genes como ACTG1, ACTB, CD36 e DUSPs relacionados com vias de motilidade celular e regulação de MAPKs. Os genes CSF1 e CDC20 foram dois dos 30 mais expressos após infecção e estão relacionados com ciclo celular e diferenciação de macrófagos para um perfil anti-inflamatório. O gene GBP1, associado com ativação de inflamassomas, foi sub expresso após a infecção. Além disso, infecção com L. infantum resultou na expressão de poucos genes relacionados com a via dos NLRs, destacando-se entre esses o TNFAIP3 e IL1RN, referentes à modulação negativa dessa via. Os resultados obtidos indicam que a L. infantum entra nas células THP-1 de forma mais silenciosa, desativa vias inflamatórias, entre essas a via de receptores NLRs e evita a montagem de uma resposta imunológica efetora. Provavelmente o parasita usa esses recursos como mecanismos adicionais de escape para garantir sua sobrevivência dentro das células. / Visceral leishmaniasis (VL) is a neglected infectious disease caused by Leishmania donovani in India and Africa or Leishmania infantum in Europe and Latin America. The development of an effective immune response and subsequent elimination of these pathogens requires the initial recognition of the Leishmania that is mediated by pattern recognition receptors expressed in innate immunity cells, such as nucleotide-binding receptors (NLRs). Some NLRs activate a multiprotein platform named inflammasomes, responsible for the activation of caspase-1 and consequent maturation of IL-1β and IL-18; and another class of NLRs, the NODs, activate pathways that trigger NF-κB activation and production of inflammatory mediators. The involvement of NLRs in LV is poorly elucidated. Even in the presence of host defense mechanisms, these parasites can survive within the macrophages by employing successful strategies to escape from immune response. For a better understanding of the immune mechanisms involved in LV, we characterized the transcriptomic profiling and assembly of inflammasomes and NODsomas during infection with L. infantum in THP-1 cells. The results show that L. infantum did not induce the production of TNF-α, IL-6 and IL-1β nor activation of caspase-1 after 8, 24 and 48 hours of infection. In addition, the infection resulted in a pattern of gene expression similar to the non-stimulated cells and distinct from LPS-stimulated cells, indicating that the parasites enter inside cells in a more silent way. After infection, there was increased expression of some genes, such as ACTG1, ACTB, CD36 and DUSPs related to cellular motility and regulation of MAPKs pathways. The CSF1 and CDC20 genes were two of the 30 most expressed after infection and were related to cell cycle pathway and macrophage differentiation to an anti-inflammatory profile. The GBP1 gene, associated with inflammasome activation, was downregulated after infection. In addition, infection with L. infantum resulted in the expression of few genes related to the NLRs pathway, such as TNFAIP3 and IL1RN that are related to down modulation of this pathway. The results indicate that L. infantum enters inside the THP-1 cells more quietly, deactivates inflammatory pathways, including the NLR receptor pathway, and avoids the assembly of an effector immune response. Probably the parasite uses these strategies as additional escape mechanism to ensure its survival within host cells.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:01:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MichelleRFV.pdf: 525804 bytes, checksum: d94754591de23bce5b0b460d3e10d382 (MD5) Previous issue date: 2008-02-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / With advent of the technology of the recombinant DNA, the recombinant protein expression becomes an important tool in the studies of the structure, function and identification of new proteins, mainly with therapeutical purposes. The Escherichia coli has been procarioto predominant in the studies of genetic engineering due to wealth of information regarding its metabolism. Despite the expressivo advance of the studies of molecular biology and the immunology of the infections, it does not exist, currently, no prophylactic drug capable to prevent calazar. Of this form, it exists a great necessity of specific antigen identification for the vaccine development and kits for disgnostic against the visceral Leishmaniose. In this context, this work objectified to study the recombinant antigen expression of the Leishmania chagasi during the culture of Escherichia coli in shaker. A first set of assays was carried through with the objective of if knowing the kinetic behavior of the growth of two clones recombinant proteins (eIF, LACK) in two different compositions of culture medium (2xTY, TB) supplemented by antibiotics, without IPTG addition. In the second stage of the assays, the procedure of induction for IPTG was carried through, in order to verify the influence of the composition of the ways tested in the expression them recombinant proteins. On the basis of the gotten results, can be observed that the high complexity of culture medium favored the kinetic one of growth of clones recombinant (eIF, LACK), however, to if to deal with the assays submitted to the procedure of induction for IPTG, the raised complexity of culture medium did not favor the expression of recombinant proteins. On the other hand, they had been gotten resulted positive for all clones recombinant (eIF, LACK) tested, confirmed through the eletrofor?tico profile / Com advento da tecnologia do DNA recombinante, a express?o de prote?nas recombinantes torna-se uma ferramenta importante nos estudos da estrutura, fun??o e identifica??o de novas prote?nas, principalmente com finalidades terap?uticas. A Escherichia coli tem sido o procarioto predominante nos estudos da engenharia gen?tica devido ? riqueza de informa??es a respeito do seu metabolismo. Apesar do avan?o expressivo dos estudos da biologia molecular e da imunologia das infec??es, n?o existe, atualmente, nenhuma droga profil?tica capaz de prevenir o calazar. Desta forma, existe uma grande necessidade de identifica??o de ant?genos espec?ficos para o desenvolvimento de vacinas e kits para diagn?sticos contra a Leishmaniose visceral. Neste contexto, este trabalho objetivou estudar a express?o de ant?genos recombinantes da Leishmania chagasi durante o cultivo de Escherichia coli em incubador rotativo (shaker). Um primeiro conjunto de ensaios foi realizado com o objetivo de se conhecer o comportamento cin?tico do crescimento dois clones recombinantes (eIF, LACK) em duas diferentes composi??es de meios (2xTY, TB) suplementados por antibi?ticos, sem adi??o de IPTG. Na segunda etapa dos ensaios, foi realizado o procedimento de indu??o por IPTG, a fim de verificar a influ?ncia da composi??o dos meios testados na express?o das prote?nas recombinantes. Com base nos resultados obtidos, pode-se observar que a elevada complexidade do meio de cultivo favoreceu a cin?tica de crescimento dos clones recombinantes (eIF,LACK), no entanto, ao se tratar dos ensaios submetidos ao procedimento de indu??o por IPTG, a elevada complexidade do meio de cultivo n?o favoreceu a express?o das prote?nas recombinantes. Por outro lado, foram obtidos resultados positivos para todos os clones recombinante (eIF, LACK) testados, confirmada atrav?s do perfil eletrofor?tico

A obesidade abdominal já se aproxima de proporções epidêmicas em todo mundo. Estudos sugerem que o acúmulo de gordura intra-abdominal ou visceral (GV) está associado aos fatores de risco (FR) cardiometabólicos. A avaliação da GV é limitada pela falta de métodos confiáveis e de baixo custo. Nosso objetivo foi avaliar a GV medida pela ultrassonografia (US), sua relação com as medidas antropométricas, perfil metabólico e o risco cardiovascular (RCV), e seu papel no diagnóstico da síndrome metabólica (SM). Foram selecionados 148 participantes do projeto Atividade Física na Vila, sendo 113 mulheres com 50,9611,47 anos e 35 homens com 49,4012,29 anos. Foram avaliados os parâmetros clínicos e metabólicos. O RCV foi classificado como baixo, moderado e grave. A US abdominal foi realizada sempre pelo mesmo observador. A espessura da GV foi definida como a distância entre a superfície posterior do músculo reto-abdominal e a parede anterior da aorta, e a gordura sub-cutânea (GSC) como a distância entre a superfície anterior do músculo reto abdominal e o limite gordura/pele. Foi calculada a razão GV/GSC. A SM ocorreu em 59% e o RCV foi baixo em 69% dos casos. A GV mostrou maior associação com a cintura abdominal do que com o IMC e não houve diferença entre os sexos. A GV (5016,4 x 38,3 16,2 mm; p=0,001) e a GV/GSC (2,41,1 x 1,70,5; p=0,001) foram maiores no grupo com SM. A GV &#8805;37,2 mm representou um risco oito vezes maior (OR=8,9, IC=3,7-21, p<0,001) para o desfecho da SM. Este ponto de corte mostrouA obesidade abdominal já se aproxima de proporções epidêmicas em todo mundo. Estudos sugerem que o acúmulo de gordura intra-abdominal ou visceral (GV) está associado aos fatores de risco (FR) cardiometabólicos. A avaliação da GV é limitada pela falta de métodos confiáveis e de baixo custo. Nosso objetivo foi avaliar a GV medida pela ultrassonografia (US), sua relação com as medidas antropométricas, perfil metabólico e o risco cardiovascular (RCV), e seu papel no diagnóstico da síndrome metabólica (SM). Foram selecionados 148 participantes do projeto Atividade Física na Vila, sendo 113 mulheres com 50,9611,47 anos e 35 homens com 49,4012,29 anos. Foram avaliados os parâmetros clínicos e metabólicos. O RCV foi classificado como baixo, moderado e grave. A US abdominal foi realizada sempre pelo mesmo observador. A espessura da GV foi definida como a distância entre a superfície posterior do músculo reto-abdominal e a parede anterior da aorta, e a gordura sub-cutânea (GSC) como a distância entre a superfície anterior do músculo reto abdominal e o limite gordura/pele. Foi calculada a razão GV/GSC. A SM ocorreu em 59% e o RCV foi baixo em 69% dos casos. A GV mostrou maior associação com a cintura abdominal do que com o IMC e não houve diferença entre os sexos. A GV (5016,4 x 38,3 16,2 mm; p=0,001) e a GV/GSC (2,41,1 x 1,70,5; p=0,001) foram maiores no grupo com SM. A GV &#8805;37,2 mm representou um risco oito vezes maior (OR=8,9, IC=3,7-21, p<0,001) para o desfecho da SM. Este ponto de corte mostrou boa sensibilidade (81%) e valor preditivo positivo (74%). Os pacientes com GV &#8805;37,2mm apresentaram RCV moderado/ grave (43,4%, p<0,01). Concluímos que a GV medida pela US é útil no diagnóstico da SM e na identificação de pacientes com alto RCV. Sugerimos como ponto de corte da GV o valor &#8805; 37,2mm para o diagnóstico da SM. / Abdominal obesity is closer to epidemic proportions in some countries with increasing prevalence among population around the world. Epidemiological studies have been confirmed that abdominal obesity, and the increase of visceral fat (VF), is associated to cardiometabolic diseases. The visceral fat analysis is limited because of the lack of confident and low cost methods. The prior objective of this work was to analyze the relationship between antropometrical and VF measures taken from ultrasonography (US) and estimate the use of US in prediction of cardiometabolic diseases. Abdominal circumference, body mass index, glicemic / lipidic profile and blood pressure and measurement of VF and SCF were taken from 148 volunteers. The US was always performed by de same examiner. VF measure was proceed with a 3,5 MHz probe, 1,0 cm from the umbilicus in a transversal view, and defined as the distance between the internal face of rectus-abdominis muscle and the anterior wall of the aorta. The same probe was used to the subcutaneous fat (SCF) measurements, at the same region.SCF was defined as the distance between the cutaneous surface and the external face of rectus-abdominis muscle, and also determining VF/SCF ratio. VF was better associated to abdominal circumference than to BMI, and there wasnt found significant difference between gender. The group with metabolic syndrome (MS) showed highest values of VF and VF/SCF. VF &#8805; 37,2 mm represented an eight times increased risk in MS development (OR = 8,9, IC=3,7-21, p<0,001).This cut off (37,2 mm) showed good sensibility (81%) and positive predictive value (74%). 43% of the patients with VF&#8805;37,2 mm were identified as moderate/severe CVR. We concluded that VF measured by US is useful on MS diagnosis and at the identification of severe CVR patients. We also suggest a cut off value &#8805; 37,2mm to the MS diagnosis.