Made available in DSpace on 2012-05-07T14:40:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000021.pdf: 7148485 bytes, checksum: d3a3aca355db988afba0a31f293e9c1e (MD5) Previous issue date: 2008 / O diagnóstico precoce da leishmaniose visceral (LV) é importante para evitar danos severos que podem levar o paciente à morte. Neste contexto, os métodos moleculares vêm sendo desenvolvidos com destaque para a tecnologia da reação em cadeia da polimerase (PCR). Recentemente, a PCR apresentou um significativo avanço em sua tecnologia; é a PCR quantitativa em tempo real (qPCR). Objetivouse desenvolver e avaliar um sistema baseado em qPCR para o diagnóstico da infecção por Leishmania infantum em cães, bem como efetuar uma análise comparativa com a PCR convencional utilizada no Serviço de Referência em Leishmanioses de Pernambuco. Com base na seqüência NCBI Z35273.1 de L. infantum disponível no BLAST-NCBI foram desenhados primers específicos para o complexo L. donovani. A combinação dos primers gerou sistemas de detecção, sendo o sistema Linf 1 B o mais promissor. A curva-padrão foi gerada resultando em limite de detecção de 10 fg de DNA genômico de L. infantum (7x10-2 parasitas), e = 0.9417, R2= 0.931 e slope= -3.47. O sistema desenvolvido foi avaliado em sangue de cães positivos e negativos para leishmaniose visceral canina, apresentando sensibilidade de 100 por cento e especificidade de 83,33 por cento. A análise comparativa com o PCR convencional mostrou que, utilizando-se amostras de sangue, o qPCR é mais sensível (sensibilidade PCR= 23,8 por cento, qPCR= 100 por cento). Em relação à especificidade, apesar da PCR convencional ter apresentado valor de 100 por cento, as análises por meio dos intervalos de confiança e o teste 2? mostraram que os dois testes (PCR convencional e qPCR) são equivalentes. Desta forma, conclui-se que os resultados obtidos para o sistema de qPCR, em amostra de sangue de cães e, a análise comparativa com a PCR convencional (RV1/RV2), sugerem sua utilização nas rotinas de diagnóstico da infecção por L. infantum

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-19T17:20:40Z No. of bitstreams: 1 Fred da Silva Juliao Uso de método de biologia molecular....pdf: 3387831 bytes, checksum: 0efc6396d21a6e8a634b8026665afe7c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-19T17:20:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fred da Silva Juliao Uso de método de biologia molecular....pdf: 3387831 bytes, checksum: 0efc6396d21a6e8a634b8026665afe7c (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A leishmaniose visceral (LV) é uma zooantroponose sistêmica de importância reconhecida em saúde pública, 90% dos casos no novo mundo são oriundos do Brasil. Os cães domésticos e as raposas são considerados como os principais reservatórios. A persistência da Leishmania em áreas endêmicas e o insucesso das medidas de prevenção, dirigidas exclusivamente ao reservatório canino, sugerem que outros animais podem ter importância na manutenção do ciclo de transmissão da LV. OBJETIVO: Avaliar potenciais reservatórios para LV numa área endêmica, utilizando método de biologia molecular quantitativo (PCR real-time). MÉTODOS: Foram estudados animais domésticos (bovinos, equídeos, caprinos e ovinos) e animais silvestres (marsupial), no município de Salinas da Margarida, Bahia, de 2007 a 2009. Todos os animais domésticos de produção mantidos e/ou pernoitando nas áreas urbanas do município foram incluídos. Os marsupiais foram capturados com armadilha animal modelo Tomahawk colocadas no peridomicílio das residências onde ocorreram casos de LV humana e/ou canina na localidade de Encarnação. Nos animais domésticos de produção foi coletado apenas amostra de sangue periférico e nos marsupiais, além de sangue, foi obtida uma amostra de pele através de biópsia da orelha. Em todas as amostras foi realizado PCR real-time para investigar a presença de DNA do parasito e estimar a carga parasitária. Os primers e sondas utilizados foram selecionados em gene SSU rRNA, que aparece 160 vezes no genoma de Leishmania spp. e é altamente conservado entre as espécies de Leishmania. RESULTADOS: No total, foram avaliados 80 animais domésticos (20 bovinos, 33 equídeos, 20 caprinos e 7 ovinos) e 103 marsupiais, todos da espécie Didelphis albiventris. Cinco bovinos foram positivos no teste de PCR real-time com carga parasitária variando de 12,7 a 183,5 parasitos/mL. Apenas um marsupial apresentou amostra de sangue positiva (6,0 parasitos/mL). Todos os demais animais testaram negativo. CONCLUSÃO: A técnica de PCR real-time pode ser uma ferramenta útil para avaliar o papel de potenciais reservatórios domésticos e silvestres para LV. A execução do PCR real-time é menos trabalhosa e mais prática do que a realização do teste de xenodiagnóstico, além disso, ela poder ser automatizada, permitindo a análise de grande número de amostras em estudos epidemiológicos. A detecção de carga parasitária de Leishmania em sangue de bovinos, em quantidade comparável à encontrada em cães, sugere que eles podem ser reservatórios para LV. A relativa abundância de bovinos nas áreas endêmicas para LV, assim como as evidências da preferência alimentar do vetor por estes animais, ressaltam a importância do papel que os bovinos podem ter na transmissão da LV. Mais trabalhos são necessários para elucidar estas questões. / Visceral leishmaniasis (VL) is a systemic zooantroponose of public health relevance, 90% of cases in the new world are from Brazil. Domestic dogs and foxes are considered the main reservoirs. The persistence of Leishmania in endemic areas and the failure of preventive measures, directed exclusively to the canine reservoir, suggest that other animals may be important in maintaining the transmission cycle of Leishmania. OBJECTIVE: To investigate potential reservoirs for VL in an endemic area, using molecular biology quantitative method (real-time PCR). METHODS: We studied domestic animals (cattle, horses, goats and sheeps) and wildlife (marsupial), in the city of Salinas da Margarida, Bahia, from 2007 to 2009. All livestock animals maintained and/or staying overnight in the urban areas of the municipality were included. The marsupials were captured with Tomahawk model animal traps placed outside the home of homes where there were human and/or dog VL cases in the locality of the Encarnação. In livestock animals, we collected only a sample of peripheral blood and in marsupials, in addition to blood we also collected a sample of ear skin biopsy. In all samples we carried out real-time PCR to detect the presence of parasite DNA and to estimate the parasite load. The primers and probes used were selected on SSU rRNA gene, which appears 160 times in the genome of Leishmania spp. and is highly conserved among species of Leishmania. RESULTS: In total, 80 livestock animals were evaluated (20 cattle, 33 horses, 20 goats and 7 sheep), and 103 marsupials, all Didelphis albiventris. Five cattle were positive by real-time PCR with parasite load ranging from 12.7 to 183.5 parasites/mL. Only one marsupial had a positive blood sample (6.0 parasites/mL). All other animals tested negative. CONCLUSION: The real-time PCR technique can be a useful tool for assessing the potential role of domestic and wild reservoir for LV. The implementation of real-time PCR is less laborious and more practical than the test of xenodiagnosis, in addition, it can be automated, allowing for the analysis of large number of samples in epidemiological studies. Detection of Leishmania parasite load in the blood of cattle, in an amount comparable to that found in dogs, suggests that they may be reservoirs for VL. The relative abundance of cattle in endemic areas for VL, as well as evidence of vector feeding preference for these animals, highlight the important role that cattle may exert in the transmission of VL. More research is needed to clarify these issues.

Made available in DSpace on 2014-08-11T12:39:30Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) lilian_nascimento_ipec_dout_2012.pdf: 11773852 bytes, checksum: 9ad71852b1c498a40fac78e3aacc2a0a (MD5) lilian_nascimento_ipec_dout_2012.pdf.txt: 134129 bytes, checksum: 8b9796bdb9c63ac5f6e402b7415a47e7 (MD5) lilian_nascimento_ipec_dout_2012.pdf.jpg: 1525 bytes, checksum: a60802c425a9ae7d9f39a8ad44377192 (MD5) Previous issue date: 2014-05-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, Brasil / Em decorrência da importância que o cão doméstico exerce frente à manutenção do ciclo de transmissão da leishmaniose visceral (LV), uma das estratégias de controle da doença é a eliminação de cães soropositivos. No entanto, até o início deste trabalho, ainda não havia sido realizado um estudo de acurácia diagnóstica com tamanho amostral expressivo do ensaio imunoenzimático (EIE) disponível no Brasil para diagnóstico de leishmaniose visceral canina (LVC). Neste estudo foi avaliada a acurácia, reprodutibilidade e a validação do EIE para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina (EIE-LVC) produzido pelo Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Foram incluídos 802 cães de áreas endêmicas captados por vigilância ativa e em Centros de Controle de Zoonoses (CCZ). Para o estudo de confiabilidade toda a amostra foi analisada de forma mascarada e em duplicata e 167 amostras foram repetidas também em outro laboratório (CCZ-Belo Horizonte). Foram considerados cães com LVC os que apresentaram diagnóstico parasitológico positivo com isolamento de Leishmania (Leishmania) chagasi ou imunofluorescência indireta (IFI) e reação em cadeia da polimerase (PCR) positivos. A confiabilidade das observações intraobservador foi excelente, com coeficiente de correlação intraclasse (CCI) de 0,98 (Intervalo de Confiança - IC 95% 0,98;0,99) para toda amostra e excelentes coeficientes de correlação de concordância de Lin Para a confiabilidade entreobservadores, o resultado também foi excelente. Os parâmetros de acurácia calculados para as duas aferições realizadas com toda amostra (N=802) indicaram sensibilidade de 89,9% (IC 95% 86,5;92,7) e 87,6% (IC 95% 83,9;90,7) para a 1ª e 2ª aferições, respectivamente, e especificidade de 89,4% (IC 95% 86,0;92,2) e 91,6% (IC 95% 88,5;94,1). A acurácia foi alta independente da condição clínica do cão com áreas sobre a curva ROC (Receiver Operating Characteristic) grandes variando de 0,94 a 0,92, e como esperado, os valores preditivos positivos aumentaram com a piora da condição clínica do cão. O desempenho do teste EIELVC o credencia para o diagnóstico em população de cães suspeitos de LVC / Due to the importance of domestic dog carries forward to the maintenance of the cycle transmission of visceral leishmaniasis, one of the strategies of disease control is the elimination of seropositive dogs. However, until the beginning of this work, had not been a study of diagnostic accuracy with expressive sample size available in Brazil for an enzyme immunoassay (EIA) for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL). We evaluated the accuracy, reproducibility and validation of EIA for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis (EIE-LVC) produced by the Immunobiological Technology Institute (Bio-Manguinhos). We included 802 dogs from endemic areas captured by active surveillance and Zoonosis Control Centers (ZCC). For the study of reliability, tests were performed in duplicate and masked for entire sample and 167 samples were also repeated in another laboratory (ZCC-Belo Horizonte). We considered those dogs with CVL showed positive parasitological diagnosis with isolation of Leishmania (Leishmania) chagasi or indirect immunofluorescence and polymerase chain reaction positive. The reliability of intraobserver was excellent, with intraclass correlation coefficient (ICC) of 0.98 (confidence interval - 95% CI 0.98, 0.99) for the entire sample and excellent Lin's concordance correlation coefficients. The reliability between observers was still excellent. Accuracy parameters calculated for the two measurements taken with all serum sample (N = 802) showed a sensitivity of 89.9% (95% CI 86.5,92.7) and 87.6% (95% CI 83.9,90.7) for the 1st and 2nd measurements, respectively, and a specificity of 89.4% (95% CI 86.0,92.2) and 91.6% (95% CI 88.5,94.1). Accuracy was high regardless of the clinical condition of the dog with areas under the Receiver Operating Characteristic (ROC) curve ranging from 0.94 to 0.92, and as expected the positive predictive values increased with worsening clinical condition of the dog. The performance EIE-LVC enable the diagnosis in a population of dogs suspected of CVL.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T14:17:29Z No. of bitstreams: 1 Tese_MiriamNogueiraBarbosa.pdf: 4081639 bytes, checksum: 6948e224189055ff20882287acf132c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T14:18:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_MiriamNogueiraBarbosa.pdf: 4081639 bytes, checksum: 6948e224189055ff20882287acf132c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T14:18:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_MiriamNogueiraBarbosa.pdf: 4081639 bytes, checksum: 6948e224189055ff20882287acf132c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-10T14:18:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_MiriamNogueiraBarbosa.pdf: 4081639 bytes, checksum: 6948e224189055ff20882287acf132c7 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / O estudo, desenvolvido no período de 2010 a 2012, visou implantar e avaliar uma estratégia de organização de serviços de saúde para prevenção e controle da leishmaniose visceral (LV) no Município de Ribeirão das Neves - MG. A estratégia teve como eixo norteador a integração dos serviços de assistência, controle de zoonoses e epidemiologia, por meio da criação de uma equipe de coordenação (EC) e teve o técnico de enfermagem (TE) como um elo importante do trabalho. A EC participou do processo de implantação e avaliação da estratégia, que consistiu em: análise de contexto organizacional; reorganização da assistência aos casos da doença com definição de portas de entrada e divulgação de fluxogramas; reorganização da vigilância com definição de fluxos, análise e divulgação de dados; formação por meio de oficina de um TE por serviço de saúde para atuar como referência da prevenção e controle da doença; intervenção na comunidade por meio de quatro visitas domiciliares realizadas por agentes de saúde, que constaram em aplicação de questionário sobre a LV aos responsáveis pelos domicílios, inspeção sanitária e diálogo a respeito da doença com o morador. A análise dos questionários e dos dados da inspeção sanitária foi realizada entre a primeira e última visita. Foi realizado estudo qualitativo para contribuir na compreensão da influência dos fatores de contexto na implantação da estratégia. Avaliou-se o grau de implantação da estratégia nas dimensões de estrutura e processo. Os dados foram coletados a partir da aplicação de questionários a médicos, enfermeiros, agentes de saúde e TE; grupos focais; análise de banco de dados, entre outros. Observou-se que o sistema de saúde apresentava ausência de fluxos, de protocolos, de apoio diagnóstico e equipes de saúde incompletas. Foi observado baixo conhecimento da população sobre a doença e falta de sistematização de atividades de prevenção na rotina de trabalho dos agentes de saúde. No período de estudo, houve aumento significativo de notificações de casos de LV e redução do intervalo entre a notificação do caso e início do tratamento. Na intervenção na comunidade, observou-se aumento significativo do percentual de acerto dos moradores nos questionários e melhoria da condição sanitária. O grau de implantação da estratégia mostrou-se adequado em relação à estrutura física, atuação da EC, planejamento, formação dos TEs e intervenção na comunidade, mas foi considerado crítico em relação a recursos humanos, cujos efeitos repercutem diretamente na qualidade da atenção à saúde. / The study, conducted during the period of 2010-2012, aimed to implement and evaluate a strategy of health services organizations for prevention and control of visceral leishmaniasis (VL) in Ribeirão das Neves - MG. The strategy had as a guideline the integration of care services, zoonosis control and Epidemiology through the creation of a coordination team (CT) and had the practical nurse (PN) as an important work link. The CT took part in the implementation process and evaluation of the strategy which consisted of: analyzing the organizational context; reorganization of assistance to cases of disease with gateways definition and divulgation of flow diagrams; reorganization of the surveillance with flow definition, analysis and divulgation of data; training through a PN by health service to act as a reference of prevention and control of disease; community intervention through four home visits by health workers, which were included a questionnaire about the VL to the heads of householders, sanitary inspection and dialogue about the disease with the resident. The analysis of the questionnaires and the health inspection data was carried out between the first and last visit. Qualitative study was conducted to contribute to the understanding the influence of context factors in the implantation. It was evaluated the degree of strategy implementation in the dimensions of structure and process with data collected from questionnaires to doctors, nurses, health workers and PN; focus groups, analysis of the database, among others. It was observed low knowledge of the population about the disease and lack of systematic prevention activities in the routine work of health workers. During the study period there was a significant increase of reported cases of VL and gap reduction between the case notification and treatment. In the community intervention there was a significant increase in the percentage of correct answers in the questionnaires of residents and improvement of sanitary condition. The degree of implementation of the strategy proved to be adequate in relation to the physical structure, CT actuation, planning, training of PNs and intervention in the community, but was considered critical in relation to human resources which the effects affects directly in the quality of health care.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T16:26:15Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_MariaVitóriaAssumpçãoMourão (1).pdf: 1293649 bytes, checksum: 77059bdd9914c6dfe5771a713c8af94b (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T16:26:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_MariaVitóriaAssumpçãoMourão (1).pdf: 1293649 bytes, checksum: 77059bdd9914c6dfe5771a713c8af94b (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T16:26:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_MariaVitóriaAssumpçãoMourão (1).pdf: 1293649 bytes, checksum: 77059bdd9914c6dfe5771a713c8af94b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T16:26:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_MariaVitóriaAssumpçãoMourão (1).pdf: 1293649 bytes, checksum: 77059bdd9914c6dfe5771a713c8af94b (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / No Brasil, observa-se aumento dos casos de leishmaniose visceral (LV) nos últimos anos, associado à alta letalidade. É necessária a identificação de indicadores sensíveis e específicos que reconheçam precocemente a gravidade e possibilitem intervenção imediata e adequada. O objetivo do presente estudo prospectivo foi correlacionar parâmetros clínicos e laboratoriais e carga parasitária à evolução da LV em crianças. Foram incluídas 48 crianças com diagnóstico de LV, internadas no Hospital Infantil João Paulo II, em Belo Horizonte, de junho de 2010 a junho de 2011. Os pacientes foram avaliados clinicamente e tiveram amostras de sangue periférico coletadas antes (T0), entre 10 e 15 dias (T1) e entre 40 e 60 dias (T2) após início do tratamento. Nestas amostras, a carga parasitária foi quantificada por PCR quantitativa em tempo real (qPCR), sendo o gene alvo a SSU rRNA de Leishmania. Evolução grave foi definida como internação em UTI ou administração de amina vasoativa, ventilação mecânica ou hemotransfusão. As manifestações clínicas mais observadas à admissão foram febre, palidez e hepatosplenomegalia, associado à pancitopenia, elevação das aminotransferases hepáticas e hipoalbuminemia. A positividade da RIFI e dos testes rápidos Kalazar Detect® e Diamed-IT Leish® foi de 66,7%, 85,4% e 100%, respectivamente. Observou-se elevada positividade (100%) em exames de PCR convencional em sangue periférico e aspirado de medula óssea. Como tratamento específico, administrou-se Glucantime® em 45,8%, anfotericina B desoxicolato em 35,5%, anfotericina B lipossomal em 8,3% e associação de anfotericina B lipossomal e Glucantime® em 10,4% dos pacientes. Considerou-se que 56,2% das crianças apresentaram evolução grave, mas sem nenhum óbito. Em T2, todos apresentavam melhora clínica. A classificação por critérios de gravidade proposta pelo Ministério da Saúde em 2006 foi aplicada à admissão, não apresentando boa acurácia para detecção de casos com evolução grave. O qPCR apresentou bom desempenho e foi positivo em todas as crianças em T0. Observou-se variação ampla da carga parasitária em T0, não correlacionada a características clínicas e laboratoriais, a critérios de gravidade e escores preditores de óbito à admissão e à evolução grave durante a internação. Redução significativa do número de cópias do fragmento gênico foi constatada em T1 e T2, que não variou de acordo com a medicação usada. Identificaram-se como fatores de risco para evolução grave idade menor do que 12 meses, taquidispneia, infecção, hepatomegalia volumosa, anemia, plaquetopenia e hipoalbuminemia à admissão. / In Brazil, there is an increasing number of cases of visceral leishmaniasis (VL) in recent years, associated to a high case-fatality rate. It is necessary to identify sensitive and specific clinical factors that may prompt to adequate and immediate intervention. The purpose of this prospective study was to correlate clinical and laboratory parameters and parasite load with clinical outcome in children with VL. Forty-eight children diagnosed with VL and hospitalized in Hospital Infantil João Paulo II, in Belo Horizonte, Brazil, were included from June 2010 to June 2011. The patients were assessed clinically and peripheral blood samples were obtained before (T0), from 10 to 15 (T1) and from 40 to 60 days (T2) after starting treatment. In these samples, the parasite load was quantified by real-time quantitative PCR (qPCR) using as molecular target the SSU rRNA gene of Leishmania. Severe outcome was defined as admission in intensive care unit, administration of vasoactive amines, mechanical ventilation or blood transfusion. The most frequently observed features were fever, pallor and hepatosplenomegaly associated with pancytopenia, elevated liver aminotransferases and hypoalbuminemia. The positivity of IFAT and of the rapid tests Kalazar Detect® and Diamed-IT Leish® was 66,7%, 85,4% e 100%, respectively. There was a high positive rate (100%) in conventional PCR in peripheral blood and bone marrow aspirates. The drugs used for specific therapy were Glucantime® in 45,8%, amphotericin B deoxycholate in 35,5%, liposomal amphotericin B in 8,3% and combination of liposomal amphotericin B and Glucantime® in 10,4% of the patients. It was considered that 56,2% of the children presented severe outcome but no deaths occurred. At T2, all patients had clinical improvement. The classification of severity proposed by the Ministry of Health in 2006, applied at admission, showed low accuracy for detection of severe cases. The quantitative PCR assay presented high performance and was positive in all children in T0. There was a wide variation in parasite load at T0 and no correlation was observed with clinical and laboratory features, with severity at admission and with severe outcome. Significant decrease in the number of copies of the gene fragment was found in T1 and T2, which did not vary according to the drug used. The identified risk factors for severe outcome were children younger than 12 months and the presence of tachydyspnea, infection, hepatomegaly, anemia, thrombocytopenia and hypoalbuminemia at admission.

Made available in DSpace on 2015-10-16T12:52:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 monique_campos_ini_mest_2014.pdf: 312415 bytes, checksum: 120ed5a2ca6efa0020e1e67a2556df00 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-06-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A leishmaniose visceral (LV) representa um importante problema de saúde pública no Brasil. Podem acometer os seres humanos e mamíferos silvestres e domésticos, sob a forma de doenças infecciosas crônicas com uma ampla gama de manifestações clínicas. O diagnóstico laboratorial é requerido para confirmar a suspeita clínica. Atualmente as técnicas moleculares baseadas na reação em cadeia da polimerase (PCR) têm demonstrado alta especificidade e sensibilidade. Na literatura existem diversos relatos da utilização da PCR com diferentes tipos de material clínico, alvos moleculares, conservação das amostras. Alguns autores consideram amostras congeladas mais vantajosas em relação às amostras fixadas em formol e embebidas em parafina (FFPE). No entanto, muitos pesquisadores defendem a importância das amostras FFPE devido à facilidade de conservação e possibilidade de utilização da PCR em estudos retrospectivos. O objetivo desse projeto foi avaliar a acurácia da qPCR realizada em amostras de pele íntegra congelada e parafinada. Trata-se de um estudo de validação, com 50 amostras de tecido congelado e 50 de tecido parafinado, provenientes de cães da cidade de Belém-PA. De cada animal foram coletados fragmentos de pele íntegra, sendo um dos fragmentos congelado e outro conservado por parafinização. As amostras de pele íntegra analisadas foram coletadas da região escapular utilizando punch de 3 mm. A qPCR foi orientada para alvos do kDNA da espécie Leishmania infantum A extração de DNA de amostras de pele íntegra FFPE foi realizada com o \201Ckit\201D comercial QIAamp® DNA FFPE Tissue (Qiagen, Califórnia, USA) de acordo com as recomendações do fabricante e para as amostras de tecido congelado foi utilizado o \201Ckit\201D IllustraTM Tissue & Cells Genomicprep Mini spin (GE Healthcare), seguindo as recomendações contidas no \201Ckit\201D. Os resultados obtidos demonstraram índices de sensibilidade e especificidade para as amostras FFPE de 63,7% e de 77,8%. Para as amostras congeladas foram de 100% e 45,9%, respectivamente. O índice Kappa obtido foi considerado fraco. A recuperação/concentração de DNA nas amostras FFPE foi baixa, mas os resultados obtidos indicam sensibilidade e especificidade moderados, demonstrando que é possível o diagnóstico da leishmaniose visceral canina com amostras FFPE / Visceral leishmaniasis (VL) is a significant public health problem in Brazil. It affects humans, wild and domestic mammals, in the form of chr onic infectious disease with a wide range of clinical manifestations. Laboratory diagnosis is required to confirm the clinical suspicion of VL. Currently, molecular techniques based on polymerase chain reaction (PCR) have shown high specificity and sensitivity. Some authors consider more advantageous the use of frozen samples in PCR due to the better quality of DNA, in relation to that of fixed in formalin and embedded in paraffin (FFPE) samples. Howeve r, many researchers argue describe the importance of FFPE samples, due to the facility of conservation and the possibility of using PCR in retrospective studies. The aim of this study was to evaluate the accuracy of the quantitative polymerase chain reaction (qPCR) performed on intact frozen and FFPE skin samples. This is a validation study with 50 fr esh tissue samples and 50 FFPE tissues of dogs from Belém-PA. From each animal fragments of intact skin were collected, being one of the frozen fragments and another saved by paraffinization. The samples analyzed were collected from intact skin of the scapular region us ing a 3 mm punch. The qPCR was oriented targets kDNA of Leishmania infantum . The DNA extraction from FFPE samples of normal skin was performed with the QIAamp ® DNA FFPE Tissu e kit (Qiagen, California, USA) "kit" business according to the manufacturer's recomme ndations and for samples of frozen tissue the "kit" used was IllustraTM Tissue & Cells Genomicprep Mini spin (GE Healthcare), according to the manufacturer's recommendations in "kit". The results showed sensitivity and specificity for FFPE samples of 63.7 % and 77.8 %. For frozen samples were 100% and 45.9 %, respectively. The Kappa index obtained was considered weak. The recovery/concentration of DNA in FFPE samples was low, but the results indicate moderate sensitivity and specificity, demonstrating that it is possible th e diagnosis of canine visceral leishmaniasis from FFPE samples.

Made available in DSpace on 2015-11-11T12:13:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 elvia_esparza_ioc_dout_2014.pdf: 5839066 bytes, checksum: 29e89c3117f3207c7a4df861cc312204 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-06-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A expressão de arginase-1 (Arg1) está associada com a patogênese da leishmaniose visceral (LV), embora os mecanismos que norteiam a sua regulação na doença não sejam adequadamente conhecidos. Nesta tese foram explorados os mecanismos de regulação da Arg-1 no modelo experimental hamster, a fim de aplicar o conhecimento para o tratamento da doença. Encontrou-se que células infectadas in vitro com Leishmania (Leishmania) donovani expressaram Arg-1 e inhibiram a produção do óxido nítrico, o que contribuiu para o aumento da carga parasitária. A regulação da Arg1 dependeu do fator de transcrição STAT-6, que foi ativado de forma independente da IL-4. Para explorar outros mecanismos envolvidos na ativação de STAT-6 foi utilizada uma biblioteca quimica de 80 inibidores dos receptores tirosine quinases (RTK) e uma membrana microarranjo revestidas com anticorpos contra proteínas phosphoriladas dos RTK. Desta forma, foi possível identificar a ativação do receptor do fator de crescimento de fibroblasto-1 (FGFR-1) e o receptor do fator de crescimento semelhante à insulina tipo I (IGF-IR) nos macrofagos. Além disso, realizou-se uma caracterização mais detalhada da cascata de fosporilação canônica dessos receptores. Experimentos in vitro mostraram que macrófagos infectados com L. donovani aumentaram a transcrição de Arg1 quando foram tratados com os ligantes dos RTK, o FGF-2 e o fator de crescimento semelhante à insulina tipo 1 (IGF-I), sugerindo que estes RTK tinham um papel na regulação da Arg1 na LV Quando inibidores químicos do FGFR-1 e IGF-IR foram testados em macrófagos infectados, a Arg1 e o STAT-6 foram inibidos sugerindo uma ligação entre essas vias. De fato, a estimulação com FGF-2 e IGF-I aumentou a fosforilação e a ativação transcripcional do STAT-6, e se observou um efeito aditivo quando a citocina IL-4 foi adicionada, demonstrando a interação positiva destas vias. A inibição do STAT-6 mediante interferência de RNA impediu ou diminuiu significativamente a Arg-1 induzida nos macrófagos infectados e estimulados com FGF-2 e por IGF-I. respectivamente, indicando um papel chave do STAT-6 na Arg-1 induzida pelos RTK. A relevância destes achados experimentais para os seres humanos foi avaliada em cultivos de sangue total de doadores sadios estimulados in vitro e no plasma de crianças durante a doença ativa, um mês, seis meses e até um ano após tratamento. Foi observado um aumento de Arg-1 após o estimulo in vitro com IL-4 e FGF-2 ou IGF-I, consistente com o achado no modelo hamster. Nos pacientes, os níveis plasmáticos de Arg-1 não mudaram com a evolução da doença após e o tratamento e o FGF-2 só apresentou um aumento associado com a resolução um ano após tratamento. Em conclusão, os sinais comuns ativados através do FGF-1R e IGF-IR convergem com a IL-4 para ativar STAT-6 e a transcrição de Arg-1 na LV experimental, mas determinar o papel destes fatores de crescimento na LV humana requer estudos adicionais. Este estudo propõe a base mecanicista da regulação da Arg1 mediada pela convergência da sinalização RTK e IL-4R ao STAT-6 na LV e sugere que os inibidores RTK são de utilidade potencial como tratamento adjuvante da doença / Arginase - 1 (Arg1) expression is associated with the pathogenesis of visceral leishmaniasis (VL) but the mechanisms that lead to its up - regulation on disease are not completelly k nown . The objective of this thesis project was to explore the mecanistic ba sis of Arg - 1 regulation in the experimental hamster model of VL with the aim to apply the knowledge to the treatment of the disease. We found that cells infected in vitro with Leishmania donovani expressed Arg1 and that nitric oxide production was inhibite d , contibuting to the increased parasite burden. Arg - 1 regulation was dependent of the transcription factor STAT - 6, but the activation of this transcription factor was independent of IL - 4 cytokine. To explore other mechanisms involved in activation of STAT - 6 and the expression of Arg1 we used a chemical library of 80 tyrosine kinase receptor (RTK) inhibitors and a protein array with antibodies against phosphorylated RTKs. This allowed identify the activation of fibroblast growth factor receptor - 1 (FGFR - 1) a nd insulin - like growth factor receptor (IGF - IR) and the canonical down - stream signaling cascade. Macrophages infected in vitro with L. donovani increased transcription of Arg1 when treated with RTK ligands (FGF - 2, IGF - I), suggesting a role of these RTKs in the regulation of the Arg1 in LV. C hemical inhibitors of the activated receptors were used to assess the effect on infected macrophages. We found that inhibitors of FGFR - 1 and IGF - IR inhibited parasite burden, Arg1 and STAT - 6, suggesting a connection betw een these routes. Furthermore, the simultaneous stimulation of RTKs with its ligands FGF - 2 or IGF - I and IL - 4 increased the phosphorylation and transcriptonal activation of STAT - 6 and increased Arg1 in an additive manner, showing a positive interaction betw een these signaling cascades. STAT - 6 inhibition by RNA interference prevented or significantly diminished the induction of Arg - 1 in macrophages stimulated with FGF - 2 and IGF - I respectively, indicating a key role of the STAT - 6 on Arg - 1 induced by RTKs. The relevance of these experimental findings to humans was evaluated in stimulated whole blood cultures of healthy donor’s o r plasma of children during active disease, 1 month, 6 months or after 1 year of treatment . We found that the Arg - 1 induced by in vitro stimulation with IL - 4 and FGF - 2 or IGF - I, was consistent with the animal model. However, in the patients plasmatic Arg - 1 did not change over the follow - up, while FGF - 2 increased only after 1 year of treatment. We conclude that the signals activated throu gh FGFR - 1 and IGF - I converge to IL - 4 to activate STAT - 6 and induce Arg - 1 in experimental VL . This study propose that the mecanistic basis of the regulation of Arg1 in VL is mediated by the convergence of RTK signaling pathways and IL - 4R to STAT - 6 and sugge st the potential utility of RTK inhibitors as adjuvant treatment for the disease.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T18:51:23Z No. of bitstreams: 1 fabiana.pdf: 63742461 bytes, checksum: 0ba3064ab0df6fc4dbb19dc66da0ff61 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-20T18:51:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fabiana.pdf: 63742461 bytes, checksum: 0ba3064ab0df6fc4dbb19dc66da0ff61 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T18:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fabiana.pdf: 63742461 bytes, checksum: 0ba3064ab0df6fc4dbb19dc66da0ff61 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Este estudo foi realizado em Belo Horizonte (Minas Gerais, Brasil), área endêmica para Leishmaniose visceral (LV), onde a doença vem se expandindo rapidamente, com 1.612 casos registrados nos últimos 10 anos. Nossa pesquisa avaliou o perfil epidemiológico em duas Áreas de abrangência (AA) dos Centros de Saúde (CS) Miramar e Salgado Filho do município de Belo Horizonte, com transmissão recente de LV, buscando compreender a tríade envolvida na transmissão: parasito-vetor-reservatório. Cada AA foi dividida em três trechos, controle, borrifação e manejo, a fim de avaliar o impacto das medidas de controle no número mensal de Lutzomyia longipalpis, através da curva flebotomínica. Em todos os trechos a captura de flebotomíneos e o inquérito canino censitário foram realizados. Durante 24 meses (setembro/2010 a agosto/2012) foram capturados 5194 flebotomíneos, distribuídos em 6 espécies, sendo Lu. longipalpis, vetora da LV, a espécie predominante (96,54%). Houve uma correlação entre a precipitação pluviométrica e o número de Lu. longipalpis capturados, mostrando que o número de espécimes de flebotomíneos capturados aumentou após o período chuvoso. Através do uso da Leishmania Nested PCR e sequenciamento, foram analisados 93 “pools” espécie-específicos. Leishmania infantum e Le. braziliensis foram encontradas em 23 e em 2 dos 26 “pools” de Lu. longipalpis, respectivamente. O DNA de Le. infantum foi encontrado em um “pool” de cada uma das espécies Lu. lloydi e complexo cortelezzii. A taxa mínima de infecção natural de flebotomíneos na área foi alta, 18,8% para Lu. Longipalpis, 20% para complexo cortelezzii e 100% para Lu. lloydi. Em relação às medidas de controle, observamos uma redução estatisticamente significativa no número de flebotomíneos no trecho manejo ambiental, enquanto houve apenas uma tendência de queda no número de flebotomíneos no trecho borrifação. Em relação ao reservatório doméstico, um total de 1408 cães foram examinados em 2011 através de testes sorológicos; 3,6% apresentaram-se soropositivos para LV canina (LVC). Biópsias de linfonodo, pele, baço e aspirado de medula óssea destes animais foram obtidos e analisados através do diagnóstico parasitológico e molecular. A positividade tanto para mielocultura como para o técnica de aposição em lâmina foi de 72.5%. Todas as amostras de baço mostraram-se positivas para LnPCR, indicando a presença de Le. infantum nas 51 amostras. O linfonodo foi o tecido menos sensível na PCR (57%) em relação aos demais. Cães sintomáticos demonstraram uma tendência a ter mais testes positivos. Nossos resultados mostram que as interfaces parasito-vetor e parasitoreservatório são ativas em áreas de médio risco para transmissão de LV, e que ações eficazes e rápidas devem ser implementadas para controlar a expansão da doença. / This study was conducted in Belo Horizonte (Minas Gerais, Brazil), an endemic area for visceral leishmaniasis (VL), where the disease has been expanding rapidly, with 1,612 cases recorded in the last 10 years. Our research assessed the epidemiological profile in two coverage areas (AA) of the Miramar and Salgado Filho Health Centers (HC) in the city of Belo Horizonte, with recent transmission of VL, willing to understand the triad involved in the transmission: parasite-vector-reservoir. Each AA was divided into three sections, control, spraying and management in order to assess the impact of control measures in the monthly number of Lutzomyia longipalpis through the sand fly curve. In all the sections, the capture of sand flies and canine census survey was conducted. For 24 months (from September / 2010 to August / 2012), 5194 sandflies were captured and distributed into 6 species. Lu. longipalpis, vector of LV, was the predominant species (96.54%). There was a correlation between the precipitation and the number of Lu. longipalpis captured, showing that the number of captured sandflies of specimens increased after the rainy season. With the use of Leishmania nested PCR and sequencing, 93 species-specific "pools" were analyzed. Out of the 26 Lu. longipalpis positive “pools”, Leishmania infantum was found in 23 while Le. braziliensis was found in 2. Le. infantum DNA was found in a "pool" of each species Lu. lloydi and cortelezzii complex. The sand flies natural infection minimum rate in the area was high, 18.8% for Lu. Longipalpis, 20% for cortelezzii complex and 100% for Lu. lloydi. Regarding control measures, we observed a statistically significant reduction in the number of sand flies in the environmental management section, while there was only a decreasing trend in the sand flies number in the spraying section. Concerning the domestic reservoir, 1408 dogs were examined in 2011 by serological tests; 3.6% were positive for canine visceral leishmaniasis (CVL). Lymph node biopsies, skin, spleen and bone marrow aspirate were obtained from these animals and analyzed using parasitological and molecular diagnosis. Positivity for both mielocultura as "imprint" was 72.5%. All spleen samples were positive for LnPCR, indicating the presence of Le. infantum in 51 samples. The lymph node was the least sensitive tissue in the PCR (57%), in relation to the others. Symptomatic dogs showed a tendency to have results that are more positive on the tests. Our results show that the vector-parasite and parasite reservoir interfaces are active in areas of medium risk of VL transmission, and rapid and effective actions must be implemented to control the spread of the disease.

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:45:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 pricilla_oliveira_ioc_dout_2007.pdf: 1378604 bytes, checksum: f0dbf6910f9fd7228967184a959a3bd6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / expansão e a urbanização da leishmaniose visceral (LV) em Mato Grosso do Sul tornaram a doença um problema de saúde pública no Estado. Para conhecer o comportamento clínico e epidemiológico da LV em indivíduos infectados pelo HIV, foi estudada uma série de 23 casos atendidos em dois hospitais da capital, Campo Grande, região Centro-Oeste do Brasil, de janeiro de 2000 a dezembro de 2006. Foram incluídos os pacientes com resultado sorológico positivo para o HIV documentado no prontuário e cultura positiva para Leishmania sp. em aspirado de medula óssea. Oitenta e sete por cento dos pacientes eram do sexo masculino, com mediana de idade de 37 anos (variando de 21 a 56 anos) Todos os pacientes foram procedentes de Mato Grosso do Sul. 34,8% dos pacientes apresentavam o uso de drogas injetáveis como categoria de exposição para o HIV. A maioria dos pacientes apresentava imunodeficiência avançada, com 80% dos pacientes com contagem de linfócitos T CD4+ inferior a 200 células/mm3 (mediana - 44,5 células/mm3) durante o primeiro episódio de LV. Apesar deste fato, ambas as doenças foram diagnosticadas simultaneamente em 43% dos pacientes. Todos os pacientes infectados pelo HIV com LV apresentaram febre e 78% hepatoesplenomegalia. Os pacientes apresentaram graus variados de diminuição das células sangüíneas e de anormalidades bioquímicas A pesquisa direta de Leishmania sp. em aspirado de medula óssea demonstrou alta positividade (87%) nos pacientes estudados. Cinco pacientes foram tratados exclusivamente com antimoniato de meglumina, cinco pacientes exclusivamente com desoxicolato de Anfotericina B e doze pacientes foram tratados com ambas as terapias, por reação adversa ou falha ao antimoniato de meglumina. Uma a duas recidivas por paciente foram observadas em 56,7% dos casos. Somente um paciente foi a óbito em conseqüência da LV / The outspread and urbanization of visceral leishma niasis in Mato Grosso do Sul becoming the disease a public health problem in the state. To know the clinical and epidemiological characteristics of visceral leishmaniasis in HIV patients, a series of 23 patients attended in Campo Grande, center west region of Brazil, from 2000 to 2006, was studied. We selected the patients with HIV and bone marrow culture positive for leishmaniasis The medi an age of patients was 37 years (range 21*56), 87% were male, All the patients live d in Mato Grosso do Sul, 34.8 percent of patients had intravenous drug use as the ir HIV transmission category. The majority of patients had advanced HIV disease, 80 p ercent had CD4+T cells count less than 200 cells/mm 3 and a median of 44.5 cells/mm3 during the first ep isode of visceral leishmaniasis. Despite of this fact, both diseases were diagnosed at the same time in 43 percent of the patients. All HIV in fected patients with visceral leishmaniasis presented fever, 78 percent presented enlargement of the liver and spleen. The patients presented varying degrees of b lood cytopenias and biochemical abnormalities. Diagnosis was also achieved in 87% o f the patients with the detection of Leishmania amastigotes in Giemsa*stained smears from aspirate s of bone marrow Five patients were treated only with meglumine anti moniate, four patients were treated with only amphotericin B and twelve patient s were treated with both therapies. One or two relapses were seen in 56.7 pe rcent of patients. Only one patient died due to leishmaniosis

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:47:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 amanda_cavalcanti_ioc_dout_2014.pdf: 8125448 bytes, checksum: a21804f13675939416a209e2c1250af8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Visceral causada pela Leishmania infantum é uma doença zoonótica no Novo Mundo em que o cão é o principal hospedeiro doméstico. O conhecimento prévio dos mecanismos imunopatogênicos associados à infecção por L. infantum é necessário para o desenvolvimento de vacinas e outras estratégias de controle. O objetivo geral desta tese foi correlacionar a expressão clínica, a carga parasitária, a resposta imunológica do hospedeiro e a diversidade genética dos parasitos em cães naturalmente infectados por L. infantum. O presente estudo é uma avaliação transversal de noventa e dois cães naturalmente infectados por L. infantum provenientes do estado do Mato Grosso. A infecção dos animais incluídos no estudo foi confirmada por sorologia, cultura e /ou PCR. O diagnóstico etiológico foi realizado por PCR-RFLP para o gene hsp70 e por eletroforese de enzimas nos parasitos isolados. Foram ainda analisados os sinais clínicos, a resposta imune pela expressão gênica de citocinas, a carga parasitária por qPCR, as alterações histológicas no baço e fígado e a as populações e genótipos de L. infantum circulantes por meio da análise do polimorfismo de microssatélites. Foram definidos grupos de acordo com a carga parasitária esplênica e hepática. Os animais com alta carga parasitária apresentaram altos títulos de anticorpos específicos anti-Leishmania e mais sinais clínicos da doença A carga parasitária no baço foi maior do que no fígado e houve correlação com o rompimento da arquitetura esplênica, caracterizado principalmente pela desorganização da polpa branca. No fígado, a carga parasitária foi correlacionada positivamente à ocorrência de granulomas, à degeneração dos hepatócitos bem como à intensidade do infiltrado inflamatório. Mostramos que a maior carga parasitária promoveu menor expressão gênica de IL-12, IFN\03B3, TNF, IL-6, TGF\03B2 e IL-10 no baço e maior expressão de CCL2, CXCL8 e MAP4K4 no fígado. A análise genética dos parasitos é indicativa de que há infecção policlonal e tropismo tissular de alguns clones, mais evidente na análise das amostras pareadas (tecidos e isolados do tecido). Foi observada baixa variabilidade genética em que a maioria (96%, 49/51) das amostras foi caracterizada como pertencente a POP2, dentre as populações circulantes no Brasil previamente descritas pelo nosso grupo. Não houve associação entre a variabilidade genética dos parasitos e os parâmetros clínicos, parasitológicos ou imunológicos. Apesar disso, os dados gerados pelos ensaios in vitro com as cepas de diferentes populações sugerem que há sim diferenças na infectividade entre cepas com genótipos de microssatélites distintos. Foi reunida uma série de dados que, em conjunto, mostram que na região estudada a Leishmanise Canina é causada por população geneticamente homogênea não tendo sido observada nenhuma correlação entre genótipos específicos e o fenótipo da infecção canina / Visceral leishmaniasis is a zoonotic disease in the New World and the domestic dog is the main host of Leishmania infantum . Prior knowledge of the immunopathogenic mechanisms associated with infection by L. infantum is required for the development of vaccines and other control strategies. The overall aim of this thesis was to compare the clinical expression, parasite load, the host immune response and genetic diversity of parasites in dogs naturally infected with L. infantum . This study is a cross - sect ional assessment of ninety - two dogs naturally infected by L. infantum . Infection was confirmed by serology, parasite culture and / or PCR. The etiology was assessed by hsp70 PCR - RFLP and MLEE . We further analyzed clinical signs , immune response by cytokine gene expression, molecular parasite load by qPCR, histological changes in sple nic and hepatic compartments and also L. infantum populations and genotypes through microsatellite analysis. Groups according to the spleen and liver parasite load were defined. Animals with high parasite load had high titers of anti - Leishmania antibodies and more clinical signs. The paras ite load in the spleen was higher than in liver and correlated with disruption of splenic architecture, mainly characterized by white pulp diso rganization. Liver parasite load was correlated with the occurrence of granulomas, degeneration and intensity of the inflammatory infiltrate. We show that the higher parasite load promoted lower gene expression o f IL - 12, IFNγ, TNF, IL - 6, IL - 10 and TGFβ in the spleen and increased expression of CCL2, CXCL8 MAP4K4 in the liver. Genetic analysis of parasites is indicative of polyclonal infection and tissue tropism of some clones, more evident in the analysis of paire d samples ( strain isolated and tissue). We also found l ow genetic variability , in which the majority (96%, 49/51) of the samples was characterized as belonging to POP2, among tree populations previously described by our group. There was no association betw een the genetic variability of the parasites and the clinical, parasitological and immunological parameters. Nevertheless, the data generated by in vitro assays with strains from different populations suggest that there are differences in infectivity betwe en strains with distinct m icrosatellite genotypes. Taken together, these results show that in the region studied Canine Leishmaniasis is caused by genetically homogeneous population without any correlation between specific genotypes and the phenotype of ca nine infection .