Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-01-11T17:05:00Z No. of bitstreams: 2 renata_luiz_ursine.pdf: 3230501 bytes, checksum: 2f2b878292cb8aa11d8b2f215f77aeda (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-01-11T17:05:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 renata_luiz_ursine.pdf: 3230501 bytes, checksum: 2f2b878292cb8aa11d8b2f215f77aeda (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-11T17:05:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 renata_luiz_ursine.pdf: 3230501 bytes, checksum: 2f2b878292cb8aa11d8b2f215f77aeda (MD5) license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Previous issue date: 2014 / Com o prop?sito de conhecer os aspectos epidemiol?gicos da Leishmaniose Visceral (LV) entre os munic?pios sob a jurisdi??o da Superintend?ncia Regional de Sa?de de Diamantina (SRSD), realizou-se um estudo da distribui??o da LV humana e canina nestes por meio de dados disponibilizados no Sistema de Informa??o de Agravos de Notifica??o e de dados registrados em livros da SRSD. No munic?pio com maior ocorr?ncia da LV humana, realizou-se o georreferenciamento dos casos humanos e caninos associados a fatores ambientais e sociais; analisou-se a percep??o das pessoas acometidas pela doen?a por meio de entrevistas; aspectos da estrutura e funcionamento do servi?o de controle da doen?a foram analisados por meio de question?rios. No per?odo de 2007 a 2012 houve a notifica??o de 79 casos de LV humana e 451 c?es positivos para a infec??o canina nos munic?pios que comp?em a SRSD. Nestes, a LV humana foi mais prevalente em crian?as, pessoas do g?nero masculino e residentes em ?reas rurais. Em Ara?ua?, munic?pio com maior transmiss?o da LV humana, houve a notifica??o de 41 casos de LV entre os anos de 2007 a 2013. Neste, a infec??o acometeu principalmente crian?as, pessoas do g?nero masculino e residentes da ?rea urbana. A distribui??o espacial dos casos de LV humana e da infec??o canina na ?rea urbana do munic?pio de Ara?ua? exibiu um padr?o aglomerado, com agrupamentos de casos humanos estatisticamente significativos a dist?ncias superiores a 350 metros e agrupamentos estatisticamente significativos de c?es infectados a dist?ncias superiores a 75 metros. A an?lise explorat?ria por meio do estimador de Kernel apontou para maior ocorr?ncia de casos humanos e caninos na ?rea central da cidade. N?o foi observada rela??o entre o ?ndice de Vegeta??o da Diferen?a Normalizada e as ?reas de maior ocorr?ncia da doen?a. A an?lise socioambiental dos ambientes domiciliares das pessoas acometidas pela LV no munic?pio de Ara?ua? revelou um predom?nio de defici?ncias em estruturas de saneamento ambiental; presen?a de arbustos, ?rvores frut?feras e diferentes animais ao redor dos domic?lios; proximidade com ambientes naturais e casas aglomeradas. Por meio das entrevistas com as pessoas que foram acometidas pela LV, foi poss?vel perceber um desconhecimento em rela??o ? doen?a, principalmente no que diz respeito ?s formas de transmiss?o. P?de-se perceber tamb?m que os m?dicos tiveram dificuldade em diagnosticar a LV e que o tratamento que estes prescreveram para os pacientes foi, no geral, demorado. De forma geral, o munic?pio de Ara?ua? desenvolve a maioria das a??es propostas pelo Minist?rio da Sa?de para o Programa de Controle da Leishmaniose Visceral (PCLV), contudo, h? necessidade de melhor estrutura??o do servi?o de controle da LV neste. A realiza??o de planejamentos para os levantamentos das demandas de materiais para a execu??o dos diagn?sticos da LV para que n?o os falte durante a realiza??o dos inqu?ritos e o estabelecimento de condi??es para a execu??o de levantamentos entomol?gicos ? uma necessidade premente. O investimento em trabalhos de educa??o em sa?de para a popula??o, educa??o continuada para os m?dicos, Agentes de Combate a Endemias e demais profissionais envolvidos no PCLV tamb?m ? fundamental. / Disserta??o (Mestrado Profissional) ? Programa de P?s-Gradua??o em Sa?de, Sociedade e Ambiente, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2014. / ABSTRACT In order to know the epidemiology of visceral leishmaniasis (VL) between the municipalities under the jurisdiction of the Regional Health Superintendency of Diamantina (SRSD), carried out a study of the distribution of human and canine LV these using data available in Diseases Information system Notification and data recorded in the SRSD books. In the city with the highest occurrence of human VL was held georeferencing of human and canine cases associated with environmental and social factors; analyzed the perception of people with the disease through interviews; aspects of the structure and function of disease control service were analyzed by means of questionnaires. In the period 2007-2012 there was a notification of 79 cases of human VL and 451 dogs positive for canine infection in the municipalities that make up the SRSD. In these, the human VL was more prevalent in children, male gender and living people in rural areas. In Ara?ua?, municipality with greater transmission of human VL, there was notification of 41 cases of VL between the years 2007 to 2013. In this, the infection affected mainly children, males and gender residents of the urban area. The spatial distribution of cases of human VL and canine infection in urban Ara?ua? municipality exhibited a pattern crowded with groups of statistically significant human cases at distances greater than 350 meters and statistically significant clusters of infected dogs at distances greater than 75 meters . The exploratory analysis using the Kernel estimator pointed to a higher incidence of human and canine cases in the central area of the city. No relationship was found between the Difference Vegetation Index Normalized and areas of highest incidence of the disease. The environmental analysis of the home environments of people affected by LV in the municipality of Ara?ua? revealed a predominance of deficiencies in environmental sanitation structures; presence of shrubs, fruit trees and different animals around the household; proximity to natural environments and clustered houses. Through interviews with people who have been affected by LV, it was revealed an ignorance about the disease, particularly with regard to forms of transmission. It could be perceived also that doctors had difficulty diagnosing VL and the treatment prescribed for these patients was generally, time consuming. In general, the municipality of Ara?ua? develop most of the actions proposed by the Ministry of Health for the Control Program Visceral Leishmaniasis (PCLV), however, there is need for a better structuring of the LV control this service. The realization of plans for surveys of the demands of materials for the execution of LV diagnostics lest they miss during the surveys and the establishment of conditions for the implementation of entomological surveys is urgently needed. Investment in health education work for the population, continuing education for physicians, Fighting Endemic Diseases agents and other professionals involved in PCLV is also key.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-05-24T17:14:51Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Anna Karla Roriz.pdf: 600029 bytes, checksum: a128c03681b70e123b2a092659ad818d (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-05-29T20:06:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Anna Karla Roriz.pdf: 600029 bytes, checksum: a128c03681b70e123b2a092659ad818d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-29T20:06:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Anna Karla Roriz.pdf: 600029 bytes, checksum: a128c03681b70e123b2a092659ad818d (MD5) / O excesso de gordura abdominal visceral vem sendo apontado como provável mediador da relação entre distúrbios metabólicos e a ocorrência de eventos cardiovasculares e outras morbidades. A antropometria tem sido estudada enquanto método alternativo para estimativa da gordura visceral e os exames bioquímicos têm boa correlação com esta gordura. Objetivo: Avaliar o desempenho da antropometria na predição de gordura visceral e verificar a existência de correlação entre os exames bioquímicos e a área de tecido adiposo visceral (ATAV) identificada pela tomografia computadorizada em adultos e idosos. Desenho: Validação, Transversal. Metodologia: Duzentos indivíduos foram estratificados por idade, massa corporal e sexo, sendo submetidos à realização da tomografia computadorizada –TC, antropometria (Diâmetro Abdominal Sagital -DAS, Circunferência da Cintura- CC e Razão Cintura-Quadril-RCQ) e à determinação das lipoproteínas: colesterol total- CT e frações, triglicérides-TG, da glicemia e do ácido úrico. Foi realizada análise descritiva, correlação de Pearson para as variáveis de distribuição normal e correlação de Spearman para as variáveis de distribuição não normais, curva ROC e Testes de médias para verificar diferenças entre a média da ATAV de acordo com os pontos de corte dos exames bioquímicos (p <0,05). Resultados: A média da CC foi mais elevada nos idosos quando comparada aos adultos do mesmo sexo. Para o DAS, verificou-se que a média foi maior entre os homens idosos (21,29cm) e a menor média foi observada entre as mulheres adultas (19,4cm). Os idosos de ambos os sexos apresentaram maiores valores de RCQ que os adultos. Foram encontradas correlações superiores a 0,7 (p=0,000) entre o DAS, CC e a ATAV em homens adultos e idosos e para as mulheres adultas. O RCQ apresentou as menores correlações. Os pontos de corte do DAS de melhor sensibilidade e especificidade foram iguais entre os homens (Adultos: 20,2cm/ Idosos: 20,2cm) e diferentes entre as mulheres (Adultas: 21,05cm/ Idosas: 19,9cm). As áreas sob a curva ROC ultrapassaram 0,80 com valores de p=0,000. Os pontos de corte da CC que identificaram uma ATAV 130cm2 foram de 90,2cm e de 92,2cm para os homens (adultos e idosos, respectivamente), enquanto que, para as mulheres, os valores encontrados foram de 92,3cm (adultas) e 88,2cm (idosas). Os idosos apresentaram maiores valores da ATAV, glicemia, ácido úrico e CT. As maiores correlações foram encontradas entre a ATAV e os TG e o VLDL-c (r > 0,5; p < 0,05) em ambos os grupos etários e o acido úrico (r > 0,42; p < 0,05). A média da ATAV mostrou-se sempre mais elevada quando os valores do TG e glicemia estavam alterados, em ambos os grupos etários. Conclusões: A CC e o DAS foram os indicadores que obtiveram melhor desempenho na identificação da gordura visceral. A maioria dos exames apresentou forte correlação com a ATAV identificada pela TC em adultos e idosos. Em idosos, a ATAV de risco para alterações metabólicas parece ser superior ao preconizado para os adultos. / Salvador

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-06-14T13:30:19Z No. of bitstreams: 1 Marcela de Lima Moreira-Duração da imunidade vacinal na Leishmaniose visceral canina- perfil fenotípico e funcional da atividade fagocítica anti Leishmania chagasi- 2013.pdf: 1972625 bytes, checksum: 20bef25e1a3fb4e90b4e04090bdb1adf (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-14T13:30:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcela de Lima Moreira-Duração da imunidade vacinal na Leishmaniose visceral canina- perfil fenotípico e funcional da atividade fagocítica anti Leishmania chagasi- 2013.pdf: 1972625 bytes, checksum: 20bef25e1a3fb4e90b4e04090bdb1adf (MD5) Previous issue date: 2013 / A leishmaniose visceral (LV) é uma doença que nas Américas, possui a Leishmania chagasi como agente etiológico, sendo transmitida através da picada de flebotomíneos e tem como principais hospedeiros membros da família Canidae. Por esta razão a eutanásia de cães soropositivos é recomendada no Brasil como estratégia de controle da doença, sendo a eficácia desta medida muitas vezes contestada. Desta forma, o uso de uma vacina efetiva na proteção contra leishmaniose visceral canina (LVC) poderá ser a melhor ferramenta de controle, capaz de reduzir o número de animais infectados e consequentemente a oferta de parasitos aos vetores, reduzindo assim o número de casos de LV. A primeira vacina contra a LVC licenciada e disponível comercialmente no Brasil é a Leishmune ®, uma vacina de segunda geração constituída da fração fucose manose ligante (FML) de Leishmania donovani, acrescida de saponina como adjuvante. Sua formulação demonstrou segurança e alta imunogenicidade para cães, mas poucos estudos a respeito da duração da imunidade foram realizados até o momento.Neste contexto, o principal objetivo deste trabalho foi investigar, nos intervalos de um, seis e doze meses após a intervenção vacinal com a Leishmune®, alterações de alguns eventos imunológicos relacionados a imunoproteção como: atividade fagocítica, produção de óxido nítrico e os aspectos fenotípicos e funcionais em células do sangue periférico dos animais. Nossos dados demonstraram que Leishmune® foi capaz de induzir aumento da atividade fagocítica em monócitos, e que este aumento apresentou correlação com a produção de óxido nítrico, atingindo pico de atividade funcional seis meses após a vacinação. Em neutrófilos, foi observado também aumento da capacidade fagocítica. A busca de fatores que possivelmente poderiam estar auxiliando o aumento da atividade fagocítica induzido pela vacinação, mostrou que os animais vacinados apresentavam aumento dos níveis de IgG anti-promastigotas de Leishmania chagasium e seis meses após a vacinação, acompanhado do aumento de expressão de receptor de FC(CD32) por monócitos. Além disso, aumentos na expressão de TLR2 e TLR4 foram correlacionados positivamente com atividade fagocítica e TLR5 e TLR9 estiveram correlacionados ao aumento de produção de óxido nítrico em monócitos. Aumento de expressão de moléculas ativadora (MHC II) e coativadora (CD80) também foram observados em monócitos um mês após a vacinação. A vacinação induziu,ainda, inibição da produção de IL-4 um e seis meses após a vacinação e aumento duradouro da produção de IL-8 por monócitos, acompanhados do aumento da produção de IFN-um e seis meses após a vacinação e da produção de IL-17a um mês após a vacinação por linfócitos T totais. Os resultados observados, leva-nos a acreditar que a vacinação com Leishmune® é capaz de induzir alterações na resposta imune mediada pela interação de imunidades inata e adaptativa, com impacto em propriedades funcionais de monócitos, consistentes com mecanismos potencialmente leishmanicidas que podem participar na imunidade protetora contra LVC. Além disso, os resultados indicam a necessidade de revacinação dos animais antes de doze meses após a primeira dose da vacina, conforme recomendado pelo fabricante. / Viceral Leishmaniasis (LV), a severe disease caused by Leishmania chagasi, is transmitted by the bite of phlebotimine sandflies and it hasthe main reservoir hosts wild canine and domestic dogs. For this reason, the elimination of seropositive dogs is recommended in Brazil as the current strategy for managing the disease control. Although the dog culling had a positive impact in maintenance of a low ratio of increase of LV, the canine incidence and seroprevalence do not negativate, maintaining a residual reservoir of parasites in the field. Comparatively, the use of a canine protective vaccine would represent the better control tool, reducing the parasites offer to sand fly vectors and consequently the LV cases number. The Leishmune®, a second-generation vaccine, have been recently licensed in Brazil and become commercially available. Its formulation proved to be safe protective and highly immunogenic for dogs, butthere are a few studies aboutduration of protective immunity responses. Accordingly, the main goal of the current work was to investigate if the time-frameof one year, proposed for protective immunity following vaccination with Leishmune®, is accompainied by supportive imunological events,such as cytokine profile change, nitric oxide syntesis, and phagocytosis in peripheral blood immunity cell. Our data identified that Leishmune® was able to induce an incremented phagocytic capacity in monocytes closely associated with the NO production by these phagocytes, reaching a peak of functionalactivity at six months after vaccination. In neutrophils, the higher long lasting phagocytic capacity triggered was not accompanied by enhanced NOproduction by them. Among the immunological events correlated with phagocytic capacity increase, high levels of anti-Leishmania chagasi promastigotes IgG were detected by flow cytometry (PPFP), one and six months following vaccination, besides increase of Fcreceptor (CD32) expression by monocytes. Moreover, increase expression of TLR2 and TLR4 were positively correlated with phagocytic capacity and TLR5 and TLR9 were positively correlated with NO production in monocytes. In addition, we observed increase expression of activation (MHC) and costimulatory (CD80) molecules by monocytes one month following vaccination.The vaccination induced too a long lasting blockage to IL-4 and an increase in the IL-8 production by monocytes along with higher IFN- production by T-cells upon L. chagasi challenge in vitro. The evidences presented suggested that Leishmune® is able to induce a long lasting change in the immune response mediated by the interface of adaptive/innate immunity with impact on the monocyte functional properties, consistent with supportive immunological events with potential anti-Leishmaniaeffector mechanisms that could participate in protective immunity against CVL.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-08-14T17:17:44Z No. of bitstreams: 1 dissertação Fernanda Alvarenga Cardoso 1.pdf: 1458584 bytes, checksum: a3070865cab7509b6900f5f36ab2b623 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-14T17:17:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertação Fernanda Alvarenga Cardoso 1.pdf: 1458584 bytes, checksum: a3070865cab7509b6900f5f36ab2b623 (MD5) Previous issue date: 2013 / Nas últimas décadas, a reação em cadeia da polimerase (PCR) vem sendo utilizada para o diagnóstico da leishmaniose visceral (LV) com diferentes objetivos: o diagnóstico da infecção, da doença e o controle de cura. Para utilização em larga escala, a etapa de eletroforese para detecção dos produtos amplificados na PCR, torna a técnica complexa e onerosa. A PCR-ELISA representa uma alternativa de detecção do produto amplificado por PCR através de um ensaio imunoenzimático (ELISA). Esta técnica é capaz de conferir maior sensibilidade e rapidez para a análise de grandes números de amostras clínicas com o uso de equipamentos utilizados para processamento de ELISA e, portanto, permite realizar PCR para fins de diagnóstico em laboratórios de média complexidade. Assim, este estudo objetivou desenvolver e validar o método de detecção colorimétrica dos produtos de amplificação gerados pela reação de PCR para o diagnóstico da LV em amostras de sangue periférico.O método de PCR-ELISA foi desenvolvido para detecção de fragmento de DNA do cinetoplasto (kDNA), complexo Donovani-específico. Utilizando-se cepas referências de Leishmania em cultivo e de painel de amostras de sangue periférico humano de 11 indivíduos não infectados, moradores de área endêmica e 14 casos de LV, caracterizadas clínica e parasitologicamente, determinou-se o limite de detecção da reação, medidas de precisão (repetibilidade e reprodutibilidade) e limite entre positivo e negativo (cut-off). A avaliação do desempenho do ensaio foi realizada com amostras de sangue periférico de 105 pacientes portadores de LV, 25 pacientes portadores da co-infecção Leishmania/HIV e de 73 indivíduos moradores de área endêmica para a LV. Foi desenvolvido ainda um ensaio de PCR-ELISA para detecção do DNA amplificado do gene humano ACTB, para uso como controle do processo de extração de DNA e amplificação por PCR das amostras clínicas. O ensaio PCR-ELISA kDNA desenvolvido apresentou limite de detecção de 1 parasito/mL de sangue e 0,07fg/µL de DNA de L. (L.) infantum, sensibilidade de 100% (IC 95%: 97,1 a 100%) e especificidade de 95% (IC 95%: 83,5 a 98,6%). Todos os indivíduos assintomáticos de área endêmica, com positividade por outras técnicas diagnósticas, foram também positivos pela PCR-ELISA. Todas as amostras foram testadas satisfatoriamente para o ensaio de PCR-ELISA ACTB. O ensaio de PCR-ELISA kDNA, desenvolvido e validado neste estudo, apresenta simplicidade metodológica e operacional, permite interpretação objetiva da amplificação por PCR do DNA de Leishmania do complexo Donovani e desempenho adequado no diagnóstico da LV em laboratórios de referência. / In recent decades, the polymerase chain reaction (PCR) has been used for the diagnosis of visceral leishmaniasis (VL) with different goals: diagnosis of infection, disease control and cure. For large-scale use, the step of electrophoresis to detect amplified products of PCR makes this technique more complex and costly. The PCR-ELISA is an alternative for the detection of the amplified PCR product through an immunoenzymatic assay (ELISA). This technique offers higher sensitivity and speed for the analysis of large numbers of clinical specimens, using equipment widely used for processing sets of ELISA and therefore allows performing PCR for diagnostic purposes in laboratory of medium complexity. Thus, this study aimed to develop and validate the colorimetric detection method (ELISA) for amplification products generated by PCR targeting the diagnosis of VL.The method of PCR-ELISA was developed to detect a fragment of DNA of kinetoplast (kDNA) specific from Leishmania donovani complex. Using reference strains of Leishmania in cultivation and a panel of human peripheral blood samples of 11 non-infected individuals, residents of endemic area and 14 cases of VL with clinical and parasitological characterization, we determined the detection limit of the reaction, precision measurements (repeatability and reproducibility) and limit between positive and negative (cut-off). The performance of the assay was evaluated with peripheral blood samples of 105 patients with VL, 25 patients showing the co-infection Leishmania/HIV and 73 individuals living in endemic areas for VL. A PCR-ELISA assay for detection of DNA from the human ACTB gene was also developed for use as control for the process of DNA extraction and amplification by PCR of clinical samples. The PCR-ELISA kDNA assay developed showed a detection limit of 1 parasite/ml blood and 0.07 fg/µL of DNA from L. (L.) infantum. The assay showed a sensitivity of 100% (IC 95%: 97.1 to 100%) and specificity of 95% (IC 95%: 83.5 to 98.6%). All asymptomatic individuals from an endemic area, who were diagnosed for LV by other techniques, were also positive by PCR-ELISA kDNA. All samples were tested satisfactorily by PCR-ELISA ACTB assay. The PCR-ELISA kDNA assay was developed and validated in this study. It presents methodological and operational simplicity; enables objective interpretation of PCR amplification of DNA from Leishmania donovani complex and have sufficient performance for diagnosis of VL in reference laboratories.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T16:14:55Z No. of bitstreams: 1 TESE ROSIMERY merged (2).pdf: 13670043 bytes, checksum: 3d066fc62d2695e641494985db2b5801 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T16:14:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE ROSIMERY merged (2).pdf: 13670043 bytes, checksum: 3d066fc62d2695e641494985db2b5801 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A história natural da leishmaniose visceral americana apresenta poucos estudos relacionados ao conhecimento dos reservatórios associados à Leishmania. Para os estudos de infectividade, foram realizados experimentos com os seguintes roedores silvestres: Nectomys squamipes, Rattus rattus e Galea spixii para incriminação de hospedeiros reservatórios de Leishmania (Leishmania) infantum , foram realizados duas repetições, com 10 roedores de cada espécie perfazendo um total de 60 animais, todos colonizados em laboratório. Como grupo controle foi utilizado seis hamsters (Mesocricetus auratus) para cada grupo de dez animais. Nas duas repetições, os animais foram inoculados com 2,8x105 /ml de promastigotas de fase log de Leishmania (leishmania) infantum. Amostras de pele, baço e fígado dos animais foram processadas para a detecção de DNA por meio de PCR específica para o subgênero Leishmania. Como resultado obtivemos dos 60 animais inoculados, 36 roedores positivos em amostras de pele, baço e fígado bem como 3 hamsters de controle (50%). Foram capturados entre 2009/2010 95 roedores silvestres para detecção de infecção natural. Destes, 9 animais das espécies: Nectomys squamipes, Necromys lasiurus e Rattus rattus foram positivos por PCR em amostras de pele, baço e fígado para Leishmania. As capturas de flebotomíneos utilizando armadilhas do tipo CDC para detecção de infecção natural dos espécimes coletados 420 flebotomíneos (fêmeas) de mais de 3.000 capturados foram processadas, 110 fêmeas em amostras individuais e 31 pools de 10 fêmeas cada um, destes, 6 foram positivos para Leishmania pela técnica de PCR e pela técnica de Dot-Blot hibridização, foram positivos 2 (33,3%) flebotomíneos para Leishmania (L.) infantum e 4 (66,6%) flebotomíneos para Leishmania (V.) braziliensis. Com a utilização da armadilha de Disney modificada em região de mata, utilizando como isca o roedor silvestre Galea spixii, foram capturados 131 flebotomíneos fêmeas e todas identificadas como da espécie Lutzomyia complexa. / The natural history of American visceral leishmaniasis presents few studies related to knowledge of reservoirs associated with Leishmania. In order to characterize the experimental infectivity in wild rodents of the following species: Nectomys squamipes, Rattus rattus and Galea spixii for trials of reservoir hosts of Leishmania (Leishmania) infantum , two experiments were conducted with 10 rodents of each species for a total 60 animals, all colonized in the laboratory. For the control was used six hamsters (Mesocricetus auratus) for each group of ten animals. In both experiments, the animals were inoculated with 2.8 x105 / ml log phase promastigotes of Leishmania infantum. Samples of skin, liver and spleen of animals were processed for DNA detection by PCR specific for the subgenus Leishmania. As a result we obtained the 60 injected animals, 36 (%) positive for samples of rodent skin, spleen and liver and 3 (50%) control hamsters. During 2009/2010 were collected 95 wild rodents for the detection of natural infection. Of these, nine animals: Nectomys squamipes, Bolomys lasiurus and Rattus rattus were positive by PCR in samples of skin, liver and spleen for Leishmania. The catch of sandflies using CDC traps for detecting natural infection, 420 female sand flies out of 3.000 were processed in 110 individual samples and 31 pools of 10 females sandflies each of these, 6 were positive by PCR and Dot-Blot hybridization technique, 2 (33.3%) were positive for L. (L.) infantum and, four (66.6%) for Leishmania (V.) braziliensis. During two years several attempts were made to obtain a colony of the Lutzomyia migonei for xenodiagnosis, however after several attempt no sufficient number of sandflies was able to perform this procedure, because of early mortality of the adults. Modified Disney trap baited with Galea spixii were used during a period of four months to capture sandflies in a forest area São Vincente Férrer. 131 sand flies captured were identified as Lutzomyia complexa.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-10-08T12:26:57Z No. of bitstreams: 1 Tese Jacqueline Fiuza.pdf: 10186945 bytes, checksum: ad5d72f0c0040b9985453d0f8d1b7116 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-08T12:26:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Jacqueline Fiuza.pdf: 10186945 bytes, checksum: ad5d72f0c0040b9985453d0f8d1b7116 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Laboratório de Imunologia Celular e Molecular / A leishmaniose visceral zoonótica (LVZ), causada pelo parasito intracelular Leishmania infantum, é uma doença tropical negligenciada que pode ser fatal quando não tratada. Os cães são considerados os principais reservatórios domésticos de L. infantum na LVZ, já que a presença de cães infectados pode aumentar o risco de infecção humana. A leishmaniose visceral canina (LVC) representa um dos maiores problemas veterinários e de saúde pública no sul da Europa, Oriente Médio e América do Sul. O controle de reservatórios animais é baseado na eliminação de cães soropositivos em áreas endêmicas. Contudo, o tratamento de cães infectados não é indicado no Brasil, pois esse procedimento pode levar a seleção de parasitos resistentes já que as mesmas drogas são usadas no tratamento de infecções em humanos. Sendo assim, o uso de vacinas contra a LVC continua sendo a melhor alternativa no controle de parasitos. Nesse trabalho, nós apresentamos dados de perfil de imunogenicidade e proteção conferido pelo uso de parasitos vivos atenuados LdCen -/-em modelo canino, comparando com Leishmune ® , uma vacina disponível comercialmente. A imunogenicidade e proteção foram avaliadas através da produção de anticorpos, proliferação e ativação celular, expressão de receptores TLR, produção de citocinas intracitoplasmáticas e secretadas no sobrenadante, e carga parasitária por Real Time PCR. A vacinação com LdCen -/-resultou em alta imunogenicidade e proteção, observado pela maior produção de IgG Total, IgG1, e IgG2, e maior linfoproliferação em resposta a antígenos solúveis. Além disso, cães vacinados com LdCen -/-apresentaram maior frequência de células T CD4 + e CD8 + ativadas, maior produção de IFN-γ e menor produção de IL-4 por essas células, secreção aumentada de TNF-α e IL-12/IL-23p40 e menor secreção de IL-4 em sobrenandante de culturas estimuladas. Também podemos observar alta expressão de receptores TLR2, 4 e 9 por linfócitos T CD4 +, maior expressão de TLR4 por células T CD8 +, e menor carga parasitária em cães vacinados. Os dados sugerem que a vacinação com parasitos LdCen -/-induz a produção de anticorpos, proliferação e ativação celular, expressão de receptores Toll e produção de citocinas pró-inflamatórias, sendo que esse conjunto de fatores permitiu a indução de proteção contra o desafio com L. infantum. Baseando nesses dados, a imunização com esses parasitos se mostrou segura e imunogênica, conferindo proteção em cães. / Zoonotic visceral leishmaniasis, caused by the intracellular protozoan parasite Leishmania infantum, is a neglected tropical disease that is often fatal when untreated. Dogs are considered the main reservoir of L. infantum in zoonotic VL as the presence of infected dogs may increase the risk for human infection. Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a major veterinary and public health problem in Southern Europe, Middle East and South America. Control of animal reservoirs relies on elimination of seropositive dogs in endemic areas. However, treatment of infected dogs is not allowed in Brazil as this approach can lead to emergence of drug resistance since the same drugs are used to treat human infections. Therefore, vaccination against CVL remains the best alternative in control of the animal reservoirs. In this study, we present data on the immunogenicity and protection profile of a live attenuated parasite LdCen -/-in a canine infection model and compared it to that of Leishmune ®, a commercially available recombinant vaccine. The immunogenicity and protection of the LdCen -/-parasites was evaluated by antibody secretion, activation and proliferation of T cells, production of intracytoplasmic and secreted cytokines, TLR expression and parasite load by Real Time PCR. Vaccination with LdCen -/-resulted in high immunogenicity and protection as revealed by the higher IgG Total, IgG1, and IgG2 production and higher lymphoproliferative response. Further, LdCen -/-vaccinated dogs showed higher frequencies of activated CD4 + and CD8 + T cells, IFN-γ production by CD4 + and CD8 + T cells and decreased production of IL-4 by theses cells, increased secretion of TNF-α and IL-12/IL-23p40 and decreased secretion of IL-4 in supernatant of stimulated cultures. We also observed higher expression of TLR2, 4 and 9 by CD4 + T cells, higher expression of TLR4 by CD8 + T cells, and lower parasite load in vaccinated dogs. These data suggest the vaccination using LdCen -/-can induce antibodies secrection, cell activation, lymph proliferative response, TLR expression, proinflammatory cytokines production, and all these factors together induced protection against challenge with L. infantum. Based on that, the immunization with these parasites shown to be safe and immunogenic, conferring protection in dogs.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-11-23T10:18:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 7633540 bytes, checksum: 3c399a3be8e26ba7fd0b6e20c37ad4bc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-23T10:18:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 7633540 bytes, checksum: 3c399a3be8e26ba7fd0b6e20c37ad4bc (MD5) Previous issue date: 2017-07-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Leishmania infantum chagasi é o agente etiológico da Leishmaniose Visceral, doença que afeta milhares de pessoas no mundo. O tratamento habitual é baseado em um repertório restrito de fármacos com toxicidade e custos elevados. O desenvolvimento de novas drogas é essencial para o controle e tratamento dessa enfermidade. No cenário atual, uma possibilidade para a descoberta de novos fármacos é o emprego de compostos químicos sintéticos. Neste contexto, nos propomos a avaliar a atividade leishmanicida dos compostos Triazólicos derivados de 6-hidroxiisobenzofuran-1(3H) -ona e de indan- 1,3-diona e de compostos derivados de Benzofenonas. Neste trabalho, realizamos o estudo in vitro da citotoxicidade destes compostos em macrófagos RAW 264.7, em formas promastigotas e em formas amastigotas de L. infantum chagasi internalizadas em macrófagos, utilizando metodologias convencionais, como a microscopia óptica, bem como implantação de uma nova metodologia utilizando citometria de fluxo. Após vários ensaios, os compostos derivados de Benzofenonas (AL-13, AL-16, AL-19 e B-5), cujas ações leishmanicidas se sobressaíram as demais, foram combinados em 11 diferentes associações. Estas foram testadas quanto à citotoxicidade em macrófagos e a ação leishmanicida em formas amastigotas internalizadas por macrófagos. Os resultados obtidos tanto pela microscopia óptica quanto pela citometria de fluxo apresentaram similaridades quanto à inibição da taxa de infecção em macrófagos infectados por L. infantum chagasi. Partindo deste pressuposto, nossos estudos sugerem que: 1) 3 (das 11 associações propostas) apresentam ação leishmanicida e merecem ser consideradas para estudos in vivo; 2) a grande similaridade dos resultados obtidos tanto pela técnica de avaliação do grau de infecção de Leishmania em macrófagos utilizando microscopia óptica quanto pela citometria de fluxo é um indicativo de que esta nova metodologia pode ser utilizada em um futuro próximo no estudo de triagens de drogas com potencial leishmanicida in vitro. / Leishmania infantum chagasi is the etiologic agent of Visceral Leishmaniasis, a disease that affects thousands of people worldwide. The usual treatment is based on a restricted repertoire of drugs with high toxicity and costs. The development of new drugs is essential for the control and treatment of this disease. In the current scenario, one possibility for the discovery of new drugs is the use of synthetic chemical compounds. In this context, we propose to evaluate the leishmanicidal activity of Triazole compounds derived from 6-hydroxyisobenzofuran-1 (3H) -one and indan-1,3-dione and compounds derived from Benzophenones. In this work, we performed the in vitro study of the cytotoxicity of these compounds in RAW 264.7macrophages, in promastigote and amastigotes forms of L. infantum chagasi internalized in macrophages, using conventional methodologies, such as optical microscopy, as well as implantation of a new methodology using flow cytometry. After several trials, the compounds derived from Benzophenones (AL-13, AL- 16, AL-19 and B-5), whose leishmanicidal actions stood out the others, were combined in 11 different associations. These were tested for macrophage cytotoxicity and leishmanicidal action in amastigote forms internalized by macrophages. The results obtained by both optical microscopy and flow cytometry showed similarities regarding inhibition of infection rate in L. infantum chagasi infected macrophages. Based on this assumption, our studies suggest that: 1) 3 (of the 11 proposed associations) present leishmanicidal action and deserve to be considered for in vivo studies; 2) the great similarity of the results obtained both by the technique of evaluation of the degree of Leishmania infection in macrophages using optical microscopy and by the flow cytometry is an indicative that this new methodology can be used in the near future in the study of drug screenings with leishmanicidal potential in vitro.

Visceral leishmaniasis is a severe systemic illness and early case management is important for the avoidance complications and control of the disease. Improving health workers’ knowledge on leishmaniasis is essential in improving the control programme. A quantitative, retrospective study of patient records and descriptive, explorative study of health care professionals’ knowledge on leishmaniasis were conducted. Data was collected from patient records (n=299) using a structured audit tool and from health care professionals (n=55) by means of a structured questionnaire. The study findings highlight that the commonest clinical manifestations of visceral leishmaniasis are fever and splenomegaly. Severe malnutrition and HIV co-infection contribute to mortality. The findings indicate the need for training to improve health care professionals’ awareness of visceral leishmaniasis. Leishmaniasis disease surveillance and support by the regional and district heath offices should be improved / Health Studies / M.A. Public Health (MPH)

MONTEIRO, Daniela Cristina Sensato. Prevalência de Leishmaniose visceral assintomática em doadores de sangue, em área endêmica para leishmaniose no Ceará. 2013. 106 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-06-05T12:36:48Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_dcsmonteiro.pdf: 3514198 bytes, checksum: 28e5c1aa9adb328d9c9eb888317bd64c (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-06-05T12:37:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_dcsmonteiro.pdf: 3514198 bytes, checksum: 28e5c1aa9adb328d9c9eb888317bd64c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-05T12:37:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_dcsmonteiro.pdf: 3514198 bytes, checksum: 28e5c1aa9adb328d9c9eb888317bd64c (MD5) Previous issue date: 2013 / Visceral Leishmaniasis (VL) is a public health problem worldwide. The urban transmission of Leishmania infantum (L. infantum) has been growing the prevalence of asymptomatic carriers of this parasite in large center. Occurrence of L. infantum transmission by blood transfusion has been reporting around the world, therefore it is important to evaluate the possibility of blood products as a potential risk for Leishmania transmission in endemic urban center. The aim of this study was to determine the prevalence of asymptomatic carriers of L. infantum among blood donors of Hemocenter of Ceará. It was used buffy coat of 438 blood donors, from May through November 2011. The positive samples for HIV, Hepatitis B and C, syphilis, HTLV, and Chagas’ disease were excluded from the study, resulting in 351 samples. The peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and plasma were separated through Histopaque® centrifugation. For detection of the parasite, PBMC were used to perform the microculture in NNN medium and conventional PCR. Anti-leishmanial antibodies were detected through ELISA. The prevalence of L infantum in blood donors of asymptomatic carriers was high (16.5%), with 43 (12.2%) by serology and 15 (4.3%) by PCR. The DNA sequencing confirmed to be the genus Leishmania in 6 samples analyzed. Promastigote was not detected in micro cultures. The risk of LV transmission by blood transfusion exists. In Brazil, the blood banks do not performed routine screening for Leishmania, thus, the recommendation to include screening for Leishmania or the use of pathogen inactivation technology appears to be essential in endemic areas of VL. / A Leishmaniose Visceral (LV) é considerada um problema de saúde pública mundial. Com a urbanização da Leishmania infantum (L. infantum), tem sido mais crescente o número de portadores assintomáticos, em grandes centros. Em diversos lugares do mundo, tem sido relatada a ocorrência de transmissão de L. infantum por transfusão sanguínea, como nas áreas de transmissão, os portadores assintomáticos representam um grande contingente, é importante avaliar a possibilidade dos hemoderivados serem um risco em potencial, para a transmissão sanguínea de Leishmania. O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de infecção assintomática por L. infantum em doadores de sangue do Hemocentro do Ceará. Para estabelecer a prevalência de LV entre doadores de sangue, foi avaliado creme leucocitário de 438 doadores de sangue, de maio a novembro de 2011. As amostras positivas para HIV, Hepatite B e C, Sífilis, HTLV I e II e Doença de Chagas, na triagem do Hemoce, foram excluídas do estudo nos resultados finais, resultando um numero amostral de 351. As amostras foram centrifugadas em Histopaque®, para separação das células mononucleares do sangue periférico (CMSP) e do plasma. As CMSP foram utilizadas para a realização de microculturas, em meio NNN, e também para o PCR convencional. O plasma foi utilizado para a sorologia anti-Leishmania por ELISA, empregando o antígeno de promastigotas de L. chagasi. A prevalência de doadores assintomáticos foi de 16,5%, sendo 43 (12,2%) pela sorologia e 15 (4,3%) pelo PCR. Foi realizado o sequenciamento do DNA de parte das amostras positivas no PCR. Destes, 6 amostras foram sequenciados o DNA e todas confirmaram ser do gênero Leishmania. Não foi isolado promastigota de nenhuma cultura. A possibilidade de risco de transmissão de LV por transfusão existe. Nos bancos de sangue do Brasil não é realizada triagem de rotina para Leishmania, deste modo, parece ser essencial à recomendação de incluir a triagem para Leishmania, nos bancos de sangue de áreas endêmicas de LV.

Made available in DSpace on 2011-05-04T12:36:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010 / Segundo o Ministério da Saúde, o diagnóstico laboratorial da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) permanece como um problema para os serviços de saúde, e está relacionado a três fatores: variedade de sinais clínicos semelhantes aos observados em outras doenças infecciosas, alterações histopatológicas inespecíficas e a inexistência de um teste de diagnóstico próximo a 100% de especificidade e sensibilidade. Esta questão, associada ao fato de haver registro de cães infectados por Leishmania sp, agente etiológico da LVC, desde o final da década de 1990 em Mato Grosso, motivou a realização deste trabalho. O objetivo geral desta dissertação foi analisar amostras de cães com suspeita clínica ou não de leishmaniose visceral, recolhidos pelo Centro de Controle de Zoonoses (CCZ), oriundos de área urbana de Cuiabá (MT), a partir da comparação de técnicas laboratoriais de RIFI, ELISA, teste rápido imunocromatográfico DPPTM e cultivo in vitro com o exame parasitológico direto (esfregaço de medula óssea), desenvolver uma metodologia de diagnóstico utilizando, como substrato, o papel de filtro FTA® Card embebido com o aspirado de tecido subcutâneo dos animais e caracterizar a espécie de Leishmania circulante. Foram analisados 45 cães, de ambos os sexos e de diferentes raças. (...) A combinação do aspirado de tecido subcutâneo dos cães, em papel de filtro FTA® Card, com a PCR não obteve resultados positivos nesta pesquisa. Portanto, esta metodologia deve ser aprimorada mediante novos testes. A priori, com abordagem diferente para a coleta do aspirado de tecido subcutâneo em cães e realização da PCR. A espécie de Leishmania, caracterizada pela enzima 6PGDH, circulante em cinco cães amostrados, provenientes de área urbana de Cuiabá, foi a Leishmania (Leishmania) infantum. / According to the Ministry of Health, the laboratory diagnosis of Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) remains as a problem for health services, and is linked to three factors: variety of clinical evidence similar to those observed in other infectious diseases, histopathologic-unspecific changes and the lack of a diagnostic test near 100% specificity and sensitivity. This issue associated with having infected dogs record for Leishmania sp, etiological microorganism of the CVL, since the late 1990s in Mato Grosso state, motivated this study. The main purpose of this dissertation was analyzing samples of dogs with clinical suspicion or not with leishmaniasis, collected by Zoonoses Control Center (ZCC) from Cuiabá (MT) urban area by comparing laboratory techniques IFR, ELISA, rapid test imunocromatographic DPPTM and cultivation in vitro with parasitological direct examination (smear of bone marrow), to develop a methodology for diagnosis using as substrate, the filter paper FTA ® card wet and embedded with the infiltrate of subcutaneous tissue of animals and characterize the species of Leishmania stock present in the culture. The results showed that 45 dogs were examined, of both sexes and of different races. The clinical evidences recorded in dogs sampled from Cuiabá urban area were, in descending order of frequency: desquamation (53.33%), alopecia (44.44%), injuries (40%), cachexia (26.67%), onychogryphosis (26.67%), mucosal pale (26.67%), keratoconjunctivitis, (26.67%) and apathy (13.33%). The positive results obtained by direct parasitological techniques (gold standard), cultivation in vitro IFR, ELISA and DPPTM accounted for 37.21% (16/43), 44.44% (8/18), 84.44% (38/45), 42.22% (19/45) and 46.67% (21/45), respectively. The rapid test sensitivity = imunocromatographic DPPTM (68.42%, specificity = 87.5%, accurate = 73.07%, k = 0.57) proved to be more sensitive, more specific and with greater reliability than IFR (sensitivity = 44.44%, specificity = 100%, accurate = 53.49%, k = 0.21) and ELISA (sensitivity = 58.52%, specificity = 76.92%, accurate = 69.77%, k = 0.36). The combination of subcutaneous infiltrate dogs tissues in filter paper FTA ® card with the PCR did not succeed in this poll. Therefore, this methodology must be enhanced by further testing. A priori with different approach to the collection of induction of subcutaneous in dogs tissues and the proceedings of PCR. The species of Leishmania, characterized by the enzyme 6PGDH, stock in five dogs sampled from Cuiabá, urban area was Leishmania (Leishmania) infantum.