Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst. / Härtill 7 uppsatser.

Thesis (M.C.T.M. (Tropical Pediatrics))--Mahidol University, 2004.

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ParmenedesDB_DISSERT.pdf: 4637846 bytes, checksum: 67d41df07b3b4f4e02d12ff7e07e99c3 (MD5) Previous issue date: 2011-08-30 / Trypanosomiasis caused by Trypanosoma vivax, is a debilitating and often fatal disease in domestic animals, which causes economic losses to cause growth retardation, abortion, decreased productivity, high costs of treatment and even death of the severely affected animals. This study aims avaluate the changes caused by T. vivax on performance and carcass characteristics of sheep, with no racial pattern defined experimentally infected in Mossoró, Rio Grande do Norte, Brazil. We used 10 ovines, male, without defined racial standard (WDRS), adults of average weight 20 kg, during the finishing stage, arranged in two treatments: control group and the group infected with strain of T. vivax originating from the outbreak of Paraíba with inoculum of 1,3 x 105 viable tripomastigostas. The animals were kept in two in sheds covered for 70 days in the same management conditions and feeding. Clinical symptoms, temperature and parasitemia were monitored daily. Weekly blood tests were performed, serum biochemistry, evaluation of feed intake and weight measurements, and calculation of feed efficiency ratio and feed every 15 days. At the end of the experiment, was the sacrifice of animals for evaluation of performance and carcass traits. There was a negative effect of T. vivax in feed conversion and feed efficiency ratio (P <0.05). The average weekly weight gain of the infected group was always lower when compared to the control group. Inherent in the feed intake was observed that there was no difference (P> 0.05) in total feed consumed weekly. Only the beef ribs and ham cuts showed a significant difference (P <0.05). But it is noteworthy that the infected group showed weight of the palette, neck, back and saw, 9%, 16%, 24% and 25% lower compared to the control group. There was a negative effect on fat deposition surface (P <0.05) and longissimus muscle area (P <0.05). Trypanosomiasis caused by T. vivax can cause direct losses in animal performance of 19,72% and resulting in economic losses for rural producers of up to 45,86% when deaths occur in the herd / Tripanossomíase provocada pelo Trypanosoma vivax, é uma enfermidade debilitante e comumente fatal nos animais domésticos, que acarreta perdas econômicas por provocar crescimento retardado, aborto, queda na produtividade, altos custos de tratamento e até morte dos animais severamente afetados. O presente trabalho tem por objetivo avaliar as alterações causadas pelo T. vivax sobre o desempenho e características da carcaça de ovinos, sem padrão racial definido (SPRD), infectados experimentalmente, em Mossoró, Rio Grande do Norte, Brasil. Foram utilizados 10 ovinos machos, SPRD, adultos de peso médio 20kg, na fase de acabamento, dispostos em dois tratamentos, grupo controle e grupo infectado com cepa de T. vivax oriundo do surto da Paraíba, com inóculo de 1,3 x 105 tripomastigostas viáveis. Os animais foram mantidos em duas baias teladas, por 70 dias, em iguais condições de manejo e alimentação. Diariamente realizou-se acompanhamento de temperatura, parasitemia e sinais clínicos. Semanalmente, foram realizados exames hematológicos, bioquímico sérico, avaliação do consumo de ração e pesagens, além cálculo de conversão alimentar e índice de eficiência alimentar a cada 15 dias. Ao final do período experimental, foi realizado o sacrifício dos animais para avaliação do desempenho e das características da carcaça. Houve efeito negativo do T. vivax na conversão alimentar e no índice de eficiência alimentar (P<0,05). O ganho médio de peso semanal do grupo infectado sempre foi inferior quando comparado ao grupo controle. Inerente ao consumo de ração foi observado que não houve diferença (P>0,05) no total de ração consumida semanalmente. Somente os cortes cárneos costilhar e pernil mostraram diferença significativa (P<0,05). Contudo vale ressaltar que o grupo infectado apresentou peso da paleta, pescoço, lombo e serrote, 9%, 16%, 24% e 25% inferiores em relação ao grupo controle. Houve um efeito negativo na deposição de gordura superficial (P<0,05) e área de olho de lombo (P<0,05). A tripanossomíase causada pelo T. vivax pode causar perdas no diretamente no desempenho animal de 19,72% e resultando em perdas econômicas para o produtor de até 45.86% quando ocorre óbitos no rebanho.

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ErikaSP_DISSERT.pdf: 1538043 bytes, checksum: c1e9ee9d8ad94de102cf9059d099dad1 (MD5) Previous issue date: 2009-08-27 / This research has considered Trypanosome s outbreaks by T. vivax that occurred in four groups of little ruminants in three towns of Alto Sertão da Paraíba in 2008 and recreated the disease experimentally in caprines and ovines, in order to relate the cardiac and central nervous system injuries with the parasite. For the statistics analyses the Test of Tukey (SAS) and the Qui-square (Epi Info 6.0) were done. The natural infection evaluation was done in the first outbreak (outbreak 1) and second (outbreak 2) semester of 2008, when the clinic signs were registered, parasitemia, rectal temperature, PCV and body score. 20% of adult caprine and ovine from each flock were chosen. It was noticed that in the first outbreak, the parasitemia was significantly bigger than in the second outbreak for both species, suggesting an acute and chronic stage of the disease. There was also a significant relation between the parasitemia, the temperature, the PCV and the body score in caprines and ovines. The anemia is a more evident clinical signal of the disease, followed by weight loss. At the PCR checkup, it was noticed that all the animals checked had the parasite in the blood. To evaluate the relation between the cardiac injuries with the T. vivax, 14 male ovines were used, SRD, disposed in 3 groups, being G1 the animals evaluated up to the 20th dpi (day pos infection), the G2, animals evaluated up to the 90th dpi and the G3 which is the control group, corresponding to the days of the groups treated. The isolated from T. vivax was from the outbreak occurred from Paraiba, being inoculated 1 ml containing 107 tripomastigotes. Clinical exams were done, hematological and anatomic-pathological. The animals presented hyperthermia, hydrothorax, ascites and hidropericardium. To the necropsy, the heart from an ovine from G2 presented evidences of cardiac failure. In the histological exam, hyaline necrosis was noticed, miocarditis with infiltrated inflammatory, besides fibrosis, suggestive of cardiac failure. In the evaluation of the injuries at the SNC related to T. vivax 12 male caprines were used, SRD, also disposed in three groups: G1 (animals evaluated in the acute stage of the disease), G2 (animals evaluated at the chronic stage of the disease) and G3 (control group). The isolated from T. vivax was due to an outbreak from ovines in Paraíba, being inoculated 1 ml containing 1.25 x 105 tripomastigotes. Within this study, besides the clinical exams, hematological and anatomic-pathological exams, the biochemical exam of the LCR were also done. The animals presented tetany, bruxism, opisthotonos and severe hyperthermia. In the exam of the LCR, there was a significant increase of the proteins in general and cellularity, as well as glicorrhachia and tubidez LCR. In the histological exam, meningoencephalitis was noticed, characterized by the presence of infiltrated inflammatory, besides morules cells (cells of Mott). / Este trabalho avaliou surtos de tripanossomíase por T. vivax que ocorreu em quatro rebanhos de pequenos ruminantes em três municípios do alto sertão da Paraíba em 2008 e reproduziu a doença experimentalmente em caprinos e ovinos, a fim de relacionar as lesões cardíacas e do sistema nervoso central com o parasita. Para análise estatística foi realizado o teste de Tukey (SAS) e o Qui-quadrado (Epi Info 6.0). A avaliação da infecção natural foi realizada no primeiro (surto 1) e segundo (surto 2) semestre de 2008, quando foram registrados os sinais clínicos, parasitemia, temperatura retal, hematócrito e escore corporal. Foram escolhidos 20% de caprinos e ovinos adultos de cada rebanho. Foi observado que no surto 1, a parasitemia foi significativamente maior que no surto 2 para ambas as espécies, sugerindo uma fase aguda e crônica da doença. Houve também uma relação significativa entre a parasitemia, a temperatura, o hematócrito e o escore corporal em caprinos e ovinos. A anemia é o sinal clínico mais evidente na enfermidade, seguida da perda de peso. Ao exame da PCR, foram verificados que todos os animais avaliados possuíam o parasita no sangue. Para avaliar a relação das lesões cardíacas com o T. vivax foram utilizados 14 ovinos machos, SRD, dispostos em 3 grupos, sendo G1 os animais avaliados até o 20o dpi (dias pós-infecção), o G2, animais avaliados até o 90o dpi e o G3 que é o grupo controle, correspondente aos dias dos grupos tratados. O isolado do T. vivax foi proveniente do surto ocorrido na Paraíba, sendo inoculado 1 ml contendo 107 tripomastigotas. Foram realizados exames clínicos, hematológicos e anatomopatológicos. Os animais apresentaram hipertermia, hidrotórax, ascite e hidropericárdio. À necropsia, o coração de um ovino do G2 apresentou evidências de insuficiência cardíaca. No exame histológico, observou-se necrose hialina, miocardite com infiltrado inflamatório, além de fibrose, sugestivo de insuficiência cardíaca. Na avaliação das lesões no SNC relacionadas ao T. vivax foram utilizados 12 caprinos machos, SRD, também dispostos em três grupos: G1 (animais avaliados na fase aguda da doença), G2 (animais avaliados na fase crônica da doença) e G3 (grupo controle). O isolado do T. vivax foi decorrente de um surto em bovinos na Paraíba, sendo inoculado 1 ml contendo 1,25 x 105 tripomastigotas. Neste estudo, além dos exames clínicos, hematológicos e anatomopatológicos foram realizados também o exame bioquímico do LCR. Os animais apresentaram tetania, bruxismo, opistótono e hipermetria acentuada. No exame do LCR, houve um aumento significativo das proteínas totais e celularidade, bem como glicorraquia e tubidez do líquor. No exame histológico foi verificada meningoencefalite, caracterizada pela presença de infiltrado inflamatório, além de células morulares (células de Mott).

Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-06-21T13:48:12Z No. of bitstreams: 1 NicholasMB_TESE.pdf: 1002447 bytes, checksum: 959969855c6576cb811af5be5b00512a (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-06-22T11:39:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 NicholasMB_TESE.pdf: 1002447 bytes, checksum: 959969855c6576cb811af5be5b00512a (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-06-22T11:42:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 NicholasMB_TESE.pdf: 1002447 bytes, checksum: 959969855c6576cb811af5be5b00512a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-22T11:42:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NicholasMB_TESE.pdf: 1002447 bytes, checksum: 959969855c6576cb811af5be5b00512a (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / Agência Nacional do Petróleo / Whereas some species of trypanosomatids are capable of being transmitted by sexual intercourse and colostrum, these ways of transmission have not been proved yet through the trypanosomiasis caused by trypanosoma vivax. The actual study aimed to research trough the polymerase chain reaction (PCR) the presence of DNA of T. vivax on semen from goats infected by experiments and in the colostrum of infected goats at the last trimester of gestation. It also investigates the possibility of transmission in goats from the parasite through sexual intercourse between the male and female infected goats to those proles by breastfeeding six male goats were used in the experiment to test sexual transmission, which were intravenously infected with 0.5 ml of blood containing approximately 1.25 × 10⁵ trypomastigotes of T. vivax and 6 male goats that were not infected for being a group control. It was collected some samples of semen to the T. Vivax DNA analysis through a polymerase chain reaction (PCR). Six not infected goats by T. vivax, the ones of the Saanen breed, were mated with infected males. In order to analyze the transmission of T. vivax through sexual intercourse, after mating, the goats were submitted to parasitological (blood smear) and molecular (PCR) tests. At the experiment to test the transmission by colostrum were used twelve goats of the Saanen breed were assessed at the trial transmission by colostrum. from this analysis, six goats were infected and the other six ones were analyzed as control to observe the presence of the parasite DNA in the colostrum collected after calving, and later, this colostrum was ministered to newborns from others healthy goats. Then, the same ones were submitted to parasitological and molecular tests. The detection of T. vivax DNA (TviCatL-PCR) on samples of semen by the PCR technique proved to be effective in all those animals and periods of observations. It was also observed the presence of the parasite DNA in some colostrum samples from goats. However, the results for the transmission trials on goats of the first experiment and on newborns breastfeed of the second experiment were negative. Despite the negatives results on transmission, we cannot eliminate the possibility of transmission by sexual intercourse and colostrum since others factors may be involved / Considerando que algumas espécies de tripanossomatídeos são capazes de serem transmitidas por via sexual e pelo colostro. Estas vias de transmissão ainda não foram comprovadas na tripanossomose provocado por Trypanosoma vivax, o presente estudo teve como objetivos, pesquisar através da reação em cadeia da polimerase (PCR) a presença do DNA do T. vivax no sêmen de caprinos infectados experimentalmente, no colostro de cabras infectadas no terço final da gestação, investigar a possibilidade da transmissão em caprinos do parasita pela via sexual do macho para a fêmea e das cabras infectadas para bezerros saudáveis através da amamentação. No experimento para testar a transmissão sexual foram utilizados seis caprinos machos, os quais foram infectadas por via intravenosa com 0,5 ml de sangue contendo aproximadamente 1,25 × 105 tripomastigotas de T. vivax e seis caprinos machos que não foram infectados para serem um grupo controle. Foram coletadass de amostras de sêmen, para a pesquisa do DNA do T. vivax no sêmen através da realização do exame de reação em cadeia da polimerase (PCR). Seis cabras da raça saanen não infectadas por T. vivax foram acasaladas com os machos infectados. Para avaliar a transmissão do T. vivax pela via sexual, após o acasalamento as cabras foram submetidas a exames parasitológicos (esfregaço sanguíneo) e moleculares (PCR). No experimento para testar a transmissão pelo colostro foram usadas doze cabras da raça saanen, onde seis foram infectadas e seis foram usadas como controle, para observar a presença do DNA do parasita no colostro coletado após o parto, posteriormente o colostro foi ministrado para filhotes recém-nascidos de outras cabras saudáveis, depois os mesmos foram submetidos a exames parasitológicos e moleculares. A detecção do DNA de T. vivax (TviCatL-PCR) em amostras de sêmen pela técnica de PCR revelaram-se positivas em todos os animais e em todos períodos de observação. Também foi observado a presença do DNA do parasita em algumas amostras de colostro das cabras. Porém os resultados para as possibilidades da transmissão mostraram negativas tanto nas cabras cobertas do primeiro experimento como dos filhotes amamentados do segundo experimento. Apesar dos resultados negativos na transmissão, não podemos anular a possibilidade de transmissão sexual e pelo colostro já que outros fatores podem estar envolvidos / 2017-06-19

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-08-06T16:17:48Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_LeticiadeMenezesTorres.pdf: 1716063 bytes, checksum: b461cbc16a0524f9bee8e02c67961aaf (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T16:17:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_LeticiadeMenezesTorres.pdf: 1716063 bytes, checksum: b461cbc16a0524f9bee8e02c67961aaf (MD5) Previous issue date: 2013 / A Duffy binding proteindo Plasmodium vivax (PvDBP) e seu receptor na superfície dos eritrócitos, o antígeno Duffy/receptor para quimiocinas (DARC), estão envolvidos na principal via de invasão utilizada pelo P. vivax. No presente trabalho, realizou-se por um estudo do tipo coorte aberta, em área de assentamento agrícola da Amazônia brasileira, para avaliar a influência do receptor DARCna infecção e resposta imune ao P. vivax. Para isso, foi realizada a genotipagem do antígeno DARC através da técnica de PCR em tempo real. A pesquisa de anticorpos específicos foi realizada pela sorologia convencional (ELISA) e, por um ensaio funcional que avalia anticopos inibitórios da interação ligante-receptor. Entre os 690 indivíduos estudados, o genótipo FY*A/FY*Bfoi o mais frequente, consistente com a heterogeneidade étnica das populações que vivem na Amazônia brasileira. Na área estudada, não foi possível identificar associação entre a expressão DARCe a susceptibilidade a infecção pelo P. vivax. Em relação à resposta de anticorpos, nenhuma associação foi encontrada entre os genótipos de DARC e anticorpos IgG anti-PvDBP e nti-MSP119(outra proteína do P. vivax), ambos detectados pela sorologia convencional (ELISA). Contudo, a resposta de anticorpos inibitórios foi significativamente mais frequente em indivíduos heterozigotos carreadores de um alelo DARC-negativo (genótipos FY*A/FY*B ES e FY*B/FY*BES). Por último, a resposta de anticorpos inibitórios se manteve estável durante todo o período estudado (12 meses). Em conjunto, estes resultados demonstraram, pela primeira vez, que a expressão do receptor DARC pode influenciar na resposta imune inibitória contra a PvDBP . / The P. vivaxDuffy binding protein (PvDBP) and its erythrocytic receptor, the Duffy antigen receptor for chemokines (DARC), are involved in the major P. vivax erythrocyte invasion pathway. Here, in an agricultural settlement of the Brazilian Amazon area, we carried-out an open cohort study to analyzed DARC genotypes and its relationship to vivax susceptibility and the PvDBP immune response. To answer this question, DARC genotypes were determined by real-time PCR. Antibodies responses were analyzed by conventional serology (ELISA) using recombinant proteins, and byan in vitro functional assay that detect binding inhibitory antibodies (BIAbs) targeting PvDBP . Among 690 individuals enrolled in the study, the distribution of DARC genotypes was consistent with the heterogeneous ethnic origin of the Amazon population, with a predominance of genotype FY*A/FY*B.In the study area, DARC genotypes were not associated with P. vivax susceptibility. Also, there was no association between DARC and anti-PvDBP IgG, as detected by ELISA. However, the follow-up study demonstrated that BIAbs towards to be more frequent in heterozygous carrying a DARC-silent allele (genotypes FY*A/FY*BES and FY*B/FY*BES). In addition, antibodies to PvMSP119, another P. vivaxprotein,were not associated with DARC expression. Moreover, the BIAbs response remained constant during the 12 monthsof the follow up. Together, these results provide the first evidence that DARCexpression may influence the anti-PvDBP inhibitory immune response.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-01-25T17:09:48Z No. of bitstreams: 1 Bruno Antonio marinho sanchez.pdf: 12502355 bytes, checksum: 7b30ad984d538cf4d718b1955f880cce (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-25T17:09:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruno Antonio marinho sanchez.pdf: 12502355 bytes, checksum: 7b30ad984d538cf4d718b1955f880cce (MD5) Previous issue date: 2011 / O processo de invasão dos eritrócitos pelos plasmódios é complexo, sendo mediado por interações moleculares específicas do tipo ligante receptor. No caso do Plasmodium vivax, a invasão é altamente dependente do antígeno de grupo sanguíneo Duffy (DARC), presente na superfície dos eritrócitos, que interage com uma proteína do parasito, a Duffy binding protein (PvDBP). Considerando a importância do receptor DARC como principal via de invasão do P. vivax, no presente estudo desenvolveu-se uma metodologia para genotipagem do receptor DARC. A técnica foi realizada através da PCR em tempo real, em sistema multiplex, o que otimizou o método de genotipagem em larga escala e reduziu o custo. Esta nova metodologia permitiu genotipar o receptor DARC dos indivíduos que participaram de um estudo epidêmico de malária e de outros estudos com indivíduos de diferentes áreas endêmicas da região Amazônica brasileira. No presente trabalho, para avaliar a influência de DARC na infecção pelo P. vivax, duas abordagens metodológicas foram utilizadas: um estudo de prevalência e um de incidência do tipo prospectivo. Para o estudo que buscou associação de DARC com a prevalência de malária por P. vivax, foram estudados indivíduos, proveniente de outros estados brasileiros, que migraram para a Amazônia. Nesta população foi observado que os indivíduos que possuíam dois alelos DARC funcionais apresentavam um maior risco de infecção ao P. vivax. Já no estudo prospectivo de base populacional, o receptor DARC foi genotipado em cerca de 800 indivíduos nativos da Amazônia, residentes em um assentamento agrícola na Amazônia. Embora nenhuma associação tenha sido encontrada entre o genótipo DARC e infecção pelo P. vivax, os resultados sugeriram que o receptor DARC influenciou na resposta de anticorpos. Nesta área, indivíduos com apenas um alelo funcional (FY*B/FY*BES) apresentaram uma resposta maior de anticorpos anti-PvDBP. Estes achados são importantes, já que a relação entre DARC e a resposta de anticorpos anti-PvDBP tem sido pouco estudada. Além disso, foram determinados os genótipos de DARC em indivíduos residentes em uma área de transmissão epidêmica de malária por P. vivax (surto ocorrido na região metropolitana de Belo Horizonte, MG), onde se avaliou também a resposta de anticorpos anti-PvDBP. Na área do surto, a caracterização dos genótipos de DARC dos indivíduos expostos à transmissão demonstrou que os diferentes genótipos estavam igualmente distribuídos entre aqueles que se infectaram e os não infectados. Por último, nesta área do surto epidêmico, estudou-se a cinética da resposta dos anticorpos anti-PvDBP. O resultados mostraram que anticorpos anti-PvDBP são de curta duração e específicos para a variante do parasito que causou o surto. Em conjunto, acredita-se que os resultados apresentados aqui possam contribuir para os estudos que visem o melhor entendimento da relação entre DARC, resposta imune e susceptibilidade a infecção pelo P. vivax. / The complex process of erythrocyte invasion by malaria parasites is mediated by specific molecular interactions. In Plasmodium vivax, invasion is dependent on the interaction between Duffy blood group antigen (DARC) and Duffy binding protein (PvDBP). Due to its importance in erythrocyte invasion, we used real-time PCR to investigate the genotype of the DARC receptors. The technique was performed using a multiplex system, which optimized the genotyping method on a large scale and reduced costs. This methodology was used to genotype the DARC receptor of individuals living in an area experiencing a malaria epidemic as well as other areas within the Brazilian Amazon. In this study, to evaluate the influence of DARC in P. vivax infection two methodological approaches were used: a prevalence study and an incidence study (prospective). In the prevalence study, it was observed that individuals who possessed two functional DARC alleles had a higher risk of infection with P. vivax. In a prospective study, the DARC receptor was genotyped in 800 individuals native to the Amazon. The results showed no association between DARC genotype and P. vivax infection. Nevertheless, the results suggested that the DARC receptor does influence the antibody response, with individuals possessing only one functional allele (FY*B/FY*BES) showing a greater response to anti-PvDBP. These findings are important because the relationship between DARC genotype and immune response to PvDBP has not previously been explored. We also determined the DARC genotypes and evaluated the response of anti-PvDBP in individuals living in a P. vivax epidemic area (an outbreak in the metropolitan area of Belo Horizonte, MG). In this outbreak area, different DARC genotypes were equally distributed among infected and uninfected individuals. Finally, we evaluated the kinetics of anti-PvDBP responses among individuals in this outbreak area. The results showed that anti-PvDBP antibodies were short and specific to the parasite variant responsible for the outbreak. Together, we believe that the results presented here can contribute to an improved understanding of the relationship between DARC receptor, immune response and susceptibility to P. vivax infection.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T16:18:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_AraceleMariadeSouza.pdf: 1969310 bytes, checksum: ae3fecb3017333f3a7da611ca9281165 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T16:18:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_AraceleMariadeSouza.pdf: 1969310 bytes, checksum: ae3fecb3017333f3a7da611ca9281165 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-10T16:18:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao_AraceleMariadeSouza.pdf: 1969310 bytes, checksum: ae3fecb3017333f3a7da611ca9281165 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-10T16:18:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_AraceleMariadeSouza.pdf: 1969310 bytes, checksum: ae3fecb3017333f3a7da611ca9281165 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A malária é causada por parasitos do gênero Plasmodium, sendo P. vivax a espécie mais amplamente distribuída no mundo. Em áreas endêmicas, é frequente a coinfecção em um mesmo indivíduo por diferentes variantes de P. vivax, caracterizando uma infecção múltipla. Nestas infecções, diferentes proporções das variantes podem ser relevantes na competição entre elas, na virulência e na resistência às drogas. O objetivo deste trabalho foi de avaliar a eficiência dos marcadores moleculares na identificação de infecções múltiplas por P.vivax. Desta forma, foram selecionados seis marcadores (MS06, MS07, MSP-3α, MSP-1B2, MSP-1B10 e MN21) caracterizados por polimorfismos de tamanho analisados por eletroforese capilar. Para cumprir este objetivo foram usadas três estratégias metodológicas. Inicialmente dois diferentes alelos amplificados de cada loci foram clonados em plasmídeos para o estabelecimento de infecções múltiplas artificiais. Na segunda estratégia foram realizadas misturas artificiais de DNAs de pacientes com parasitemia e níveis de leucócitos semelhantes. E por fim, realizou-se a genotipagem de isolados de P. vivax de 47 pacientes da Amazônia Brasileira, sendo 22 pacientes com infecção múltipla previamente identificada. Ao simularmos infecções múltiplas artificiais com diferentes proporções de cada clone ou DNA de paciente verificamos que: (1) para os MS e TR, alelos menores foram preferencialmente amplificados por PCR; (2) para ambos os blocos da MSP-1, ocorreu titulação nos resultados; (3) para MSP-3α não houve amplificação preferencial do alelo menor; (4) a utilização do critério de altura mínima de ¼ da do pico predominante para a detecção dos alelos raros foi mais eficiente na detecção da multiplicidade de infecção. Na genotipagem de isolados de campo os marcadores MS06, MS07, MSP-1B10, MSP-3α e MN21 foram suficientes para detecção de 100% das infecções múltiplas em pacientes. Assim, estamos propondo um painel de marcadores neutros (MS06, MS07 e MN21) e não neutros (MSP-3α e MSP-1B10) na detecção de infecções múltiplas utilizando o critério menos estringente para detecção dos alelos raros. / Plasmodium vivax infection is often characterized by the presence of two or more genetically distinct variants co-infecting the same human host (multiple-clone infection). Competition between co-infecting parasite clones is a major factor in the evolution of phenotypes such as virulence, transmissibility and drug resistance. Thus, accurate detection of multiple-clone P. vivax infections is very important for malaria control. The accuracy of P. vivax genotyping and multiple-clone infections characterization depend on several factors, such as the methods and the molecular markers of choice used in genotyping, the number of markers assessed, and the population diversity of the markers. Thus, the present study sought to evaluate the efficiency of different molecular markers – antigen-coding genes (MSP-1B2 , MSP-1B10), tandem repeat (MN21) and microsatellites (MS06 and MS07) – to detect multiple-clone P. vivax infections. In addition, this study enabled us to compare the efficiency of molecular markers to detect multiple-clone infections with well known proportions of clones. These six markers are characterized by size polymorphisms, being amplified by PCR and analyzed by capillary electrophoresis. Three methodological strategies were used. Initially, two different fragments for each lócus were cloned into plasmids for the establishment of artificial multiple-clone infections. In the second strategy, artificial mixtures of DNA from patients with similar levels of parasitemia and leukocytes were performed. Finally, we genotyped 47 isolates of P. vivax from patients living in the Brazilian Amazon, being 22 patients with previously identified multiple-clone infections. From the artificial multiple-clone infections, the most important data were: (1) for microsatellites and the tandem repeat, the minor alleles were preferentially amplified by PCR; (2) for both blocks of the MSP-1, reliable estimates were obtained of the relative abundance of alleles present in clone mixtures; (3) for MSP-3α, no preferential amplification of the minor allele occurred, and (4) a minimum value of ¼ of the predominant peak for detection of rare alleles was more efficient in detecting the multiplicity of infection. For field isolate genotyping, a relevant result was that five markers - MS06, MS07, MSP-1B10, MSP-3α and MN21 - were sufficient for detection of 100% of multiple infections in patients. Considering all these findings, we were able to define a panel of markers to be used in determining multiple-clone infections in epidemiological studies composed by neutral (MS06, MS07 and MN21) and non neutral (MSP-3α and MSP-1B10) markers using the less stringent criteria for detection of rare alleles.

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Belo Horizonte, MG, Brasil / A Duffy binding protein do Plasmodium vivax (PvDBP) é uma proteína essencial para o processo de invasão do Plasmodium vivax em eritrócitos humanos Duffy/DARC positivos, sendo consequentemente uma forte candidata à vacina antimalárica. Apesar disso, estudos desenvolvidos pelo nosso grupo de pesquisa mostraram que a maioria dos indivíduos expostos à malária na Amazônia brasileira não desenvolvem anticorpos anti-PvDBP. Isto pode estar relacionado tanto a características do parasito quanto do hospedeiro vertebrado. Entre as características do parasito estão a baixa imunogenicidade da PvDBP ao sistema imune e o alto polimorfismo na região do ligante (região II). Entretanto, estas características do parasito não explicam o fato de que a maioria dos indivíduos expostos a diferentes variantes do parasito, por um longo período de tempo, não desenvolvem anticorpos bloqueadores da interação ligante-receptor. Diante disso, faz-se necessário avaliar características do hospedeiro vertebrado que poderiam influenciar nessa baixa resposta de anticorpos. Portanto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a influência de polimorfismos do receptor DARC e do HLA classe II (antígeno leucocitário humano) na resposta imune anti-PvDBP. O estudo foi do tipo coorte aberta de base populacional realizado em área de assentamento agrícola da Amazônia brasileira onde os indivíduos foram acompanhados por cerca de 12 meses. A abordagem metodológica envolveu: (i) genotipar o receptor Duffy/DARC (Real time PCR) e o HLA de classe II (locis HLA-DRB1, HLA-DQB1 e HLA-DQA1, por PCR-SSO) na população estudada (n=620); (ii) realizar ensaios sorológicos, convencionais (ELISA) e funcionais (bloqueio da interação DBPII-DARC) no plasma dos indivíduos estudados. Os resultados mostram que, na área estudada, o genótipo de DARC mais frequente foi FY*A/FY*B, o que foi consistente com o que tem sido descrito para as populações residentes na Amazônia brasileira. Em relação à resposta de anticorpos, nenhuma associação significativa foi encontrada entre os genótipos de DARC e as respostas de anticorpos IgG no ELISA (região II ou regiões II-IV da PVDBP). Contudo, a resposta de anticorpos que inibem a interação ligante (DBPII) - receptor (DARC) foi significativamente mais frequente em indivíduos heterozigotos carreadores de um alelo DARC positivo (genótipos FY*A/FY*BES e FY*B/FY*BES). Em geral, a distribuição de frequência dos alelos de HLA classe II na população estudada corrobora com as frequências já descritas em estudos anteriores realizados no Brasil e na América Latina. De interesse, o estudo permitiu identificar 11 alelos de HLA classe II associados positivamente com a resposta de anticorpos anti-PvDBP detectados no ELISA, com destaque para os alelos DQA1*01:03 e HLA-DRB1*02:02. Por outro lado, o estudo permitiu identificar 4 alelos associados negativamente com a resposta de anticorpos. Além disso, quatro alelos - HLADQA1* 02:01, HLA-DRB1*07:01, HLA-DQB1*02:02 e HLA-DQA1*02:01 - parecem influenciar positivamente na resposta de anticorpos inibitórios da interação DBPII-DARC, enquanto que o alelo HLA-DRB1*16:02 influenciou negativamente nesta resposta. Estes achados são de grande importância, pois, em áreas hiperendêmicas de malária, a resposta de anticorpos inibitórios tem sido associada com proteção clínica. Em conjunto, os resultados do presente estudo permitiram demonstrar, pela primeira vez, que polimorfismos do receptor DARC e do HLA classe II podem influenciar na resposta imune protetora contra a PvDBP. / The Duffy binding protein of Plasmodium vivax (PvDBP) is a critical adhesion ligand that participates in merozoite invasion of human Duffy/DARC positive erythrocytes, being considered, therefore, a target for vaccine-mediated immunity. Although anti-PvDBP immune responses have been well characterized, few studies have investigated the influence of host variability on the development of this immune response. In the present study, we examined whether host genetic polymorphisms might affect humoral immunity against PvDBP. More specifically, we investigated polymorphisms on the DARC receptor and in the human leucocyte antigen (HLA) class II. For that, we carried out a 12-months follow-up study in an agricultural settlement of the Brazilian Amazon region (n=620 volunteers). The methodological approach included (i) to genotype the DARC receptor (Real-time PCR), and the HLA class II (loci HLA-DRB1, HLA-DQB1 and HLADQA1 by PCR-SSO); (ii) to analyze the plasma levels of PvDBP antibodies through conventional serology (ELISA-detected IgG antibodies) and inhibitory binding assays (PvDBP binding inhibitory antibodies, BIAbs). The results showed no association between DARC polymorphisms and ELISA–detected antibodies. However, the follow-up study demonstrated that BIAbs targeting PvDBP towards to be more frequent in heterozygous carrying a DARC-silent allele (genotypes FY*A/FY*BES and FY*B/FY*BES), suggesting a gene-dosage effect. Regarding the HLA class II polymorphisms, we identified 11 alleles positively associated with the response of PvDBP ELISA-detected antibodies. In addition, the study revealed four alleles negatively associated with the antibody response (HLA-DRB1*10:01, HLA-DRB*14:02, DRB1*14:02 e DQA1*05:01 citar os 4 aqui). Of relevance, four alleles (HLA-DQA1*02:01, HLA-DRB1*07:01, HLADQB1* 02:02 and HLA-DQA1*02:01) were positively associated with the PvDBP BIAb, whereas a single allele (HLA-DRB1*16:02) was negatively associated with this protective response. Together, the results of the present study demonstrate, for the first time, that polymorphisms on the DARC receptor and in the HLA class II may influence the protective immune response against PvDBP.

A malária é uma doença tropical de grande relevância para a saúde pública no mundo. O objetivo do presente estudo foi construir a curva endêmica das espécies de Plasmodium falciparum e vivax, no período de 2003 a 2012 no Garimpo do Lourenço, verificando o efeito da periodicidade e da sazonalidade. Trata-se de um estudo ecológico, de série temporal e de caráter descritivo e exploratório, cujos dados foram obtidos do SIVEP-Malária, e o número de casos notificados ao mês foi utilizado como a variável dependente. Na amostra desta série 69% dos infectados eram do sexo masculino. As taxas cumulativas de infecção por gênero foram similares, sendo a infecção por P.vivax responsável por 75,4% das infecções em mulheres e por 72% do total de infecção em homens. As taxas por faixa etária foram de 72% entre 15 a 49 anos e de 39,6% em menores de 15 anos. Quanto à escolaridade, 66,57% não estudaram ou tinham menos de quatro anos de escolaridade. Observou-se um total de 12.357 infecções, de 12.056 casos novos e de 301 lâminas de verificação de cura (LVC). A infecção em garimpeiros foi responsável por cerca de 40% dessas infecções. Na avaliação da curva endêmica, realizada por meio do teste Augmented Dickey-Fuller, observou-se a ausência de estacionariedade das duas espécies (p > 0,05). A periodicidade, avaliada pelo teste G de Fisher, não evidenciou diferença estatisticamente significativa para os períodos da infecção no curso do ano para nenhuma das duas espécies (p > 0,05). O contexto observado nas zonas de garimpo da Amazônia Brasileira poderiam ser apoiadas por ações de controle ambiental e pesquisas, direcionados aos mosquitos transmissores, ao comportamento das espécies e aos aspectos climáticos, além do apoio à rede de serviços de saúde, de forma a interromper a cadeia de transmissão e controlar a endemia em patamares reduzidos nessa região garimpeira específica. / Malaria is a tropical disease of great relevance for the world’s public health. The objective of the present study was to construct the endemic curve of the species falciparum and vivax during the period starting from 2003 until 2012 in gold mining of Lourenço, assessing the effect of periodicity and seasonality. The present is an ecological time-series, descriptive and exploratory study, whose data were obtained from the SIVEP-Malária, using the number of cases per month as the dependent variable. 69% of those infected were male. Cumulative rates of infection by gender were similar, where vivax was responsible of 75.4% of the infections in females, and of 72% in males. Rates by age were 72% in those between 15 to 49 years old, and of 39.9% in those younger than 15 years old. Regarding literacy, 66.57% of the sample had never studied or had less than four years of schooling. It was observed a total of 12357 infections, 12056 new cases and 301 cure verification slides (CVS). Infection of gold miners was responsible of around 40% of the cases. Endemic curve assessment was performed using the Augmented Dickey-Fuller test, showing absence of seasonality of the two species (p > 0.05). Periodicity was assessed using the Fisher’s G test that did not show statistically significant difference for the infection periods along the year among the two species (p > 0.05). The context observed in the mining areas of the Brazilian Amazon could be supported by environmental control measures and research, targeted to mosquitoes, the behavior of species and climatic aspects and the support to the network of health services in order to stop the transmission chain and control endemic at low levels that specific gold mining region.