Orientador: Ricardo Luiz Dantas Machado / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Karin Kirchgatter / Resumo: Plasmodium vivax é a espécie mais prevalente de malária no Brasil. O processo co-evolutivo parasita-hospedeiro pode ser visto como uma "ferramenta", na qual trocas genéticas adaptativas podem influenciar na diversidade da população. Objetivo: Investigar polimorfismos de genes envolvidos na resposta imune humoral visando identificar possíveis associações com a malária. Material e Métodos: a amostra foi constiuída por 103 pacientes com malária vivax não complicada e como grupo controle 97 indíviduos não-maláricos. A identificação dos SNPs -726T>C no gene CD40L, -1 C>T no gene CD40 e -871C>T no gene BLYS foram efetuadas pelo método de PCR-RFLP. As frequências genotípicas, alélicas e de indivíduos portadores de cada alelo foram estimadas por contagem direta. Também foram comparadas as frequências genotípicas observadas com as esperadas segundo o teorema de Hardy e Weinberg. Resultados: As freqüências genotípicas e alélicas para esses SNPs não diferiram estatisticamente entre pacientes e indivíduos do grupo controle. A combinação dos genótipos entre os genes CD40 e BLYS e entre CD40L e BLYS não revelou interação gênica na população estudada. Não foi observada associação entre resposta imune humoral e parasitemia nos indivíduos maláricos com os polimorfismos dos genes investigados. Ambos os genes se encontram em equilíbrio de Hardy e Weinberg. Conclusões: Os resultados deste estudo sugerem que as variantes genéticas analisadas nos genes CD40, CD40L e BLYS não afetam a funcionalidade das moléculas de modo que possa interferir na susceptibilidade a doença, mas estas variantes podem influenciar o curso clínico em vez de simplesmente aumentar ou diminuir a susceptibilidade / Abstract: Plasmodium vivax is the most prevalent malaria species in Brazil. The parasite-host coevolutionary process can be viewed as an 'arms race', in which adaptive genetic changes in one are eventually matched by alterations in the other. Objectives: following the candidate gene approach we analyzed the CD40, CD40L and BLYS genes that participate in B-cell co-stimulation, for associations with P. vivax malaria. Methods: the study sample included 97 patients and 103 controls. We extracted DNA using the extraction and purification commercial kit and identified the following SNPs: -1C>T in the CD40 gene, -726T>C in the CD40L gene and the -871C>T in the BLyS gene using PCR-RFLP. We analyzed the genotype and allele frequencies by direct counting. We also compared the observed with the expected genotype frequencies using the Hardy-Weinberg Equilibrium. Results: The allele and genotype frequencies for these SNPs did not differ statistically between patient and control groups. Gene-gene interactions were not observed between the CD40 and BLYS and between the CD40L and BLYS genes. Overall, the genes were in Hardy-Weinberg Equilibrium. Significant differences were not observed among the frequencies of antibody responses against P. vivax sporozoite and erythrocytic antigens and the CD40 and BLYS genotypes Conclusions: the results of this study show that, although the investigated CD40, CD40L and BLYS alleles differ functionally, this variation does not alter the functionality of the molecules in a way that would interfere in susceptibility to the disease. Significance: The variants of these genes may influence the clinical course rather than simply increase or decrease susceptibility / Mestre

Plasmodium vivax agente etiológico de la malaria, exhibe una gran variabilidad genética durante episodios recurrentes de la enfermedad. Esta recurrencia es informada como de baja prevalencia asociada con la malaria asintomática. Así mismo los episodios recurrentes (reinfecciones o relapsos) a menudo pueden ser confundidos por resistencia a fármacos como la cloroquina. Por lo tanto el objetivo principal de este estudio fue relacionar los patrones de recurrencia y la resistencia con la variabilidad genética de P. vivax. En este estudio se evaluaron las muestras secuenciales de individuos provenientes de una región endémica del Perú (Mazán-Iquitos), diagnosticados previamente con malaria, por microscopía, durante seguimientos activos y sometidos a un régimen de tratamiento estándar con cloroquina. La genotipificación realizada en base al gen pvmsp3-α, utilizando el Nested PCR y la digestión enzimática, permitió identificar una alta variabilidad genética de P. vivax, a partir de la cual, se identificaron los patrones de recurrencia, establecidos como relapsos, a partir de estadios latentes o hipnozoitos homólogos (con haplotipos idénticos) y reinfecciones (con haplotipos diferentes). Los rangos de tiempo permitieron una identificación más precisa, observándose mayores frecuencias de relapsos por hipnozoitos homólogos antes de los 90 días post-primera evaluación y mayores frecuencias de reinfecciones después de este periodo. Así mismo las recurrencias en el primer periodo de tiempo, por haplotipos diferentes, pueden deberse también a hipnozoitos heterólogos. Complementando el estudio, el análisis de secuenciamiento del gen pvmdr1, permitió identificar SNPs, codificantes de mutaciones no sinónimas, relacionadas con resistencia a cloroquina. Estos SNPs, a través del software U-Melt (análisis in sílico), presentaron variaciones en las temperaturas de fusión. Finalmente los resultados de cuantificación relativa con qPCR Real Time no mostraron diferencias significativas en el número de copias del gen pvmdr1. Palabras clave: Cloroquina, Genotipificación, Haplotipos, Hipnozoito, Malaria Asintomática, Recurrencia, Variabilidad. / --- Plasmodium vivax etiologic agent of malaria has a large genetic variability during recurrent episodes of the disease. This recurrence is reported as low prevalence associated with asymptomatic malaria. Also recurrent episodes (reinfection or relapse) can often be mistaken for drug resistance as chloroquine. Therefore the main objective of this study was to correlate the patterns of recurrence and resistance to the genetic variability of P. vivax. In this study, we evaluated the sequential samples of individuals from an endemic region of Peru (Mazán-Iquitos), previously diagnosed with malaria microscopy during active follows and subjected to a standard treatment regimen with chloroquine. Genotyping based on the pvmsp3-α gene, using Nested PCR and enzymatic digestion, identified high genetic variability of P. vivax, from which were identified recurrence patterns established as relapse, from latent stages or homologous hypnozoites (with identical haplotypes) and reinfections (with different haplotypes). The time ranges allow more accurate identification, with higher frequency of relapses by homologous hypnozoites before 90 days post-first evaluation and higher frequencies of reinfection after this period. Also recurrences in the first period of time, for different haplotypes may also be due to heterologous hypnozoites. Complementing the study, the sequencing analysis of the gene pvmdr1, identified SNPs, encoding nonsynonymous mutations related to resistance to chloroquine. These SNPs, through U-Melt software (in sílico analysis), showed variations in the melting temperatures. Finally the results of relative cuantification with Real Time qPCR no showed significant differences in copy number of the pvmdr1 gene.} Keywords: Chloroquine, Genotyping, Haplotypes, Hipnozoite, Recurrence, Asymptomatic Malaria, Variability. / Tesis

Notre objectif a été d'évaluer (i) l'importance de Plasmodium vivax dans les infections palustres à Madagascar, (ii) la sensibilité de ce parasite à la chloroquine et à la sulfadoxinepyriméthamine, (iii) et la place des marqueurs moléculaires pour la surveillance de la résistance aux antipaludiques et de la circulation des souches parasitaires.<br />Pour cela, notre étude a été conduite sur 8 sites sentinelles. Les patients présentant un paludisme causé par P. vivax ont été inclus dans des tests d'efficacité thérapeutique selon les critères de l'OMS. L'analyse de polymorphismes génétiques sur les gènes pvcrt-o, pvmdr1, pvdhfr et pvdhps, impliqués dans la résistance aux antipaludiques, ainsi que sur les gènes pvcsp, pvmsp3, pvmsp1 utilisés pour le génotypage des souches a été réalisée sur les isolats<br />collectés. Des marqueurs microsatellites ont également été recherchés pour évaluer la diversité génétique de ces isolats, ainsi que la circulation des souches parasitaires et la propagation des isolats résistants.

El objetivo del presente trabajo fue identificar antígenos relevantes de valor diagnóstico de aislados de P. vivax y P. falciparum provenientes del departamento de Loreto, mediante la técnica de inmunoblot. Se seleccionaron pacientes entre 3 y 64 años con diagnóstico de malaria, gota gruesa positiva, procedentes de centros de salud en el departamento de Loreto. Fueron analizadas 4 mezclas de antígenos, una de P. falciparum (PF1) y tres de P. vivax (PV1, PV4 y PV5), preparadas a partir de 36 muestras de pacientes con alta parasitemia por P. vivax (2 700 – 69 000 parásitos/μL) y P. falciparum (2 750 – 10 000 parásitos/μL). Las mezclas de antígenos fueron enfrentadas a 39 sueros (12 de P. falciparum y 27 de P. vivax) mediante ensayos de inmunoblot.

Plasmodium vivax agente etiológico de la malaria, exhibe una gran variabilidad genética durante episodios recurrentes de la enfermedad. Esta recurrencia es informada como de baja prevalencia asociada con la malaria asintomática. Así mismo los episodios recurrentes (reinfecciones o relapsos) a menudo pueden ser confundidos por resistencia a fármacos como la cloroquina. Por lo tanto el objetivo principal de este estudio fue relacionar los patrones de recurrencia y la resistencia con la variabilidad genética de P. vivax. En este estudio se evaluaron las muestras secuenciales de individuos provenientes de una región endémica del Perú (Mazán-Iquitos), diagnosticados previamente con malaria, por microscopía, durante seguimientos activos y sometidos a un régimen de tratamiento estándar con cloroquina. La genotipificación realizada en base al gen pvmsp3-α, utilizando el Nested PCR y la digestión enzimática, permitió identificar una alta variabilidad genética de P. vivax, a partir de la cual, se identificaron los patrones de recurrencia, establecidos como relapsos, a partir de estadios latentes o hipnozoitos homólogos (con haplotipos idénticos) y reinfecciones (con haplotipos diferentes). Los rangos de tiempo permitieron una identificación más precisa, observándose mayores frecuencias de relapsos por hipnozoitos homólogos antes de los 90 días post-primera evaluación y mayores frecuencias de reinfecciones después de este periodo. Así mismo las recurrencias en el primer periodo de tiempo, por haplotipos diferentes, pueden deberse también a hipnozoitos heterólogos. Complementando el estudio, el análisis de secuenciamiento del gen pvmdr1, permitió identificar SNPs, codificantes de mutaciones no sinónimas, relacionadas con resistencia a cloroquina. Estos SNPs, a través del software U-Melt (análisis in sílico), presentaron variaciones en las temperaturas de fusión. Finalmente los resultados de cuantificación relativa con qPCR Real Time no mostraron diferencias significativas en el número de copias del gen pvmdr1. Palabras clave: Cloroquina, Genotipificación, Haplotipos, Hipnozoito, Malaria Asintomática, Recurrencia, Variabilidad. / --- Plasmodium vivax etiologic agent of malaria has a large genetic variability during recurrent episodes of the disease. This recurrence is reported as low prevalence associated with asymptomatic malaria. Also recurrent episodes (reinfection or relapse) can often be mistaken for drug resistance as chloroquine. Therefore the main objective of this study was to correlate the patterns of recurrence and resistance to the genetic variability of P. vivax. In this study, we evaluated the sequential samples of individuals from an endemic region of Peru (Mazán-Iquitos), previously diagnosed with malaria microscopy during active follows and subjected to a standard treatment regimen with chloroquine. Genotyping based on the pvmsp3-α gene, using Nested PCR and enzymatic digestion, identified high genetic variability of P. vivax, from which were identified recurrence patterns established as relapse, from latent stages or homologous hypnozoites (with identical haplotypes) and reinfections (with different haplotypes). The time ranges allow more accurate identification, with higher frequency of relapses by homologous hypnozoites before 90 days post-first evaluation and higher frequencies of reinfection after this period. Also recurrences in the first period of time, for different haplotypes may also be due to heterologous hypnozoites. Complementing the study, the sequencing analysis of the gene pvmdr1, identified SNPs, encoding nonsynonymous mutations related to resistance to chloroquine. These SNPs, through U-Melt software (in sílico analysis), showed variations in the melting temperatures. Finally the results of relative cuantification with Real Time qPCR no showed significant differences in copy number of the pvmdr1 gene. Keywords: Chloroquine, Genotyping, Haplotypes, Hipnozoite, Recurrence, Asymptomatic Malaria, Variability.

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2004. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 101-112).

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-14Bitstream added on 2015-04-09T12:48:09Z : No. of bitstreams: 1 000814014.pdf: 1627484 bytes, checksum: ce0b86b09943b35b985a7f8be30c27d6 (MD5) / Infecções pelo hemoprotozoário T. vivax causam grandes prejuízos à pecuária da África e Américas Central e do Sul. Surtos devido a este protozoário têm ocorrido com frequência cada vez maior no Brasil. O conhecimento das alterações que ocorrem durante a evolução desta enfermidade podem ser de grande valia. Para tanto foram estudados os sinais clínicos, parasitemia, alterações hematológicas, bioquímicas, sorológicas e anatomopatológicas de três bovinos naturalmente infectados (grupo N) e outros três experimentalmente infectados (grupo E) pelo T. vivax. com média de peso de 500 kg e 548 kg, respectivamente. O período pré-patente foi de dois a três dias (grupo E). Animais do grupo N apresentaram perda de peso intensa (140 Kg). No grupo E observou-se constante diminuição da contagem global de eritrócitos, teor de hemoglobina e volume globular (VG). O leucograma revelou alterações mais evidentes para o grupo E, com leucopenia por neutropenia e linfopenia durante a fase aguda da enfermidade. O grupo N apresentou um quadro de leucocitose por neutrofilia. Foram observados diminuição do colesterol total, colesterol ligado ao HDL, albumina, aspartato aminotransferase (AST), lactato desidrogenase (LDH) e aumento da glicose, globulinas, proteínas e fosfatase alcalina (FA) para o grupo E. Os animais do grupo E mostraram-se positivos tanto para Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) quanto para o ensaio de imunoabsorção enzimático (ELISA), fato que não ocorreu no grupo N, sendo este positivo para RIFI e alternando entre períodos positivos e negativos frente ao ELISA. No proteinograma, os bovinos do grupo E apresentaram inicialmente um incremento de ceruloplasmina, com posterior redução; valores elevados de transferrina praticamente por todo o período experimental; e um aumento inicial de haptoglobina com posterior redução. O grupo N apresentou valores baixos de ceruloplasmina, transferrina e ... / Infections by T. vivax cause great losses to livestock in Africa and Central and South America. Outbreaks due to this parasite have been occurred with increasing frequency in Brazil. Knowledge of changes that occur during the development of disease can be of great value. In order to evaluate clinical signs, parasitemia, hematologic, biochemical, serological and pathological changes caused by T. vivax, three naturally (group N) and three experimentally (group E) infected bovines by T. vivax, with an average weight of 500 and 548 kg, respectively, were studied. The observed prepatent period was two to three days (group E). Animals of group N showed severe weight loss (140 kg). Reduction of erythrocyte numbers, hemoglobin concentration and PCV were observed in group E. WBC showed pronounced changes for group E, such as severe neutropenia and lymphopenia during the acute phase of the illness. Group N showed leukocytosis by neutrophilia. Decrease in total cholesterol, HDL cholesterol, albumin, aspartate aminotransferase (AST), lactate dehydrogenase (LDH), and increased in glucose, globulin, protein, and alkaline phosphatase (ALP) were observed in group E. Animals from group E were positive for both Immunofluorescence Assay (IFA) and for the Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA), which did not occur in group N that was positive in IFAT and alternating between positive and negative periods in ELISA. Proteinogram of group E showed initially an increase of ceruloplasmin, which was later reduced, high values of transferrin almost the entire experimental period. On the hand, haptoglobin showed an initial increase with subsequent reduction in group E. In group N, low levels of ceruloplasmin, transferrin and haptoglobin were observed. Histopathological examination showed alterations mainly in were liver, spleen, heart, lung, lymph node, kidney and central nervous system. Changes mainly consisted in mononuclear inflammatory infiltrate in liver ...

Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-08-13T04:12:34Z No. of bitstreams: 1 bianca_e_gama_ioc_bp_0042_2011.pdf: 1968573 bytes, checksum: 439595e4d28df18cd5a083cc9b3673ad (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-13T04:12:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bianca_e_gama_ioc_bp_0042_2011.pdf: 1968573 bytes, checksum: 439595e4d28df18cd5a083cc9b3673ad (MD5) Previous issue date: 2011 / Instituto Nacional de Câncer. Centro de Transplantes de Medula Óssea. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A malária, doença infecciosa causada por parasitas do gênero Plasmodium, é um conhecido flagelo das populações humanas desde a antiguidade. Na falta de uma vacina, a política de controle baseia-se principalmente no diagnostico rápido e no tratamento dos casos. Devido ao impacto da quimiorresistência parasitária no controle, faz-se necessário o constante monitoramento da eficácia de drogas. Portanto, para contextualizar o Brasil no panorama mundial, nosso objetivo se constituiu em realizar um estudo descritivo sobre a ocorrência de mutações (SNPs) nos genes considerados marcadores moleculares associados à resistência como pfcrt, pfmdr1, pfdhfr, pfdhps e pvdhfr, assim como em genes potencialmente associados à quimiorresistência (pfatpase6 e pvmdr1) em isolados de P. falciparum e P. vivax coletados nas cidades Amazônicas de Porto Velho, Paragominas e Manaus. Para tal, utilizamos PCRs seguidas do sequenciamento de DNA. Ao investigarmos a ocorrência de mutações nos genes pfcrt, pfdhfr e pfdhps em amostras de P. falciparum provenientes de Porto Velho e Paragominas foi possível detectar 1 isolado apresentando um haplótipo ou perfil de sensibilidade CVMNK no gene pfcrt e ACNSVI no gene pfdhfr e, além disso, pudemos observar uma redução no numero de mutações no gene pfdhps, ao confrontarmos os nossos resultados com os de um estudo retrospectivo. Em relação ao P. vivax, a análise do gene pvdmr1 num conjunto de amostras provenientes de Paragominas revelou o predomínio de mutações no códon 976 do gene pvmdr1 (preliminarmente associado com a resistência à cloroquina) e a presença de haplótipos duplo-mutante FRTNI e triplo-mutante FRTNL para o gene pvdhfr. dando continuidade à caracterização de P. falciparum no Brasil, foi estabelecido um registro de base da ocorrência de mutações nos genes pfmdr1 e pfatpase6, em amostras procedentes de Porto Velho, Paragominas e Manaus. Tal análise permitiu a identificação de um haplótipo prevalente NEF/CDVY no pfmdr1, assim como identificação de mutantes em um único códon ou duplo-mutantes (630 e/ou 402) no caso do gene pfatpase6. também não foi encontrada a mutação 769N, associada com a diminuição da susceptibilidade ao arteméter. Concluímos que: (a) existem no Brasil popluações parasitárias de P. falcipoarum portando haplótipos sensíveis para o gene pfcrt e o pfdhfr; (b) a mutação no códon 976 no gene pfmdr1 pode não ser válida para o monitoramento da resistência à cloroquina em isolados brasileiros de P. vivax; (c) as populações de P. vivax avaliadas apresentaram mutações no gene pvdhfr, apesar de nunca ter sido instituído o tratamento com sulfadoxina-pirimetamina para malária vivax e; (d) as amostras de P. falciparum avaliadas não portavam todos os alelos do gene pfmdr1 associados a um potencial desenvolvimento de resistência à combinação arteméter-lumefantrina / Acknowledged as a febrile syndrome of human populat ions since ancient times, malaria is an infectious disease caused by parasites of the Plasmodium genus. In the absence of a reliable vaccine, the c ontrol policy is based mainly on diagnosis and case management. Since para site chemoresistance is a major factor hampering th e disease control, there is a need for drug efficacy surveillance. Therefore, to place Brazil into the w orld scenario, our goal was to conduct a descriptive study on the occurrence of mutations (SNPs) in genes acknowledge d as molecular markers to chemoresistance as pfcrt , pfmdr1 , pfdhfr , pfdhps and pvdhfr , as well as in genes potentially associated with chemoresistance ( pfatpase6 and pvmdr1 ) in isolates of P. falciparum and P. vivax collected in Porto Velho, Manaus and Paragominas ci ties in Brazilian Amazon. With this aim, we used PC R technique followed by DNA sequencing. The analysis of mutations in pfcrt , pfdhfr and pfdhps genes in P. falciparum samples from Porto Velho and Paragominas allowed us to detect a single isolate presenting a sensitivity profile CVMNK in the pfcrt gene and ACNCSVI in the pfdhfr gene. Additionally, we could observe a decrease in the mutations number for the pfdhps gene, when comparing our results with those from a retrospective study. Concerning P. vivax , the analysis from Paragominas samples revealed th e full predominance of mutations at codon 976 in the pvmdr1 gene (preliminarily associated with chloroquine resistance), and the presence of double-and triple- mutant haplotypes (FRTNI and FRTNL) for the pvdhfr gene. Lastly, to establish a genotypic baseline for pfmdr1 and pfatpase6 genes, P. falciparum isolates from Porto Velho, Manaus and Paragominas were also evaluated. This analysis allowed us to identify a major haplot ype NEF/CDVY in pfmdr1 gene, as well as to detect a single-mutant (in 630 or 402 codons) and double-mutant (in 630 and 402 codons) when pfatpase6 gene was surveyed. The 769N mutation, associated w ith decreased susceptibility to artemether, was not detected. We conclude that: (a) there exist P. falciparum populations presenting sensitive alleles for the gene pfcrt and pfdhfr in Brazil; (b) the 976 mutation in the pvmdr1 gene may not be valuable for monitoring chloroquine resistan ce in Brazilian P. vivax isolates; (c) P. vivax populations herein investigated presented mutations in the pvdhfr gene, although sulphadoxine-pyrimethamine therapy has never been preconized for malaria vivax and; (d ) the P. falciparum samples analyzed did not carry all alleles in the pfmdr1 gene that were associated with a potential develop ment of resistance to artemether- lumefantrine

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T13:24:29Z No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_DanielaCamargosCosta.pdf: 7549515 bytes, checksum: 6b70f7b5c83b5461482f80c7c7b76f8a (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T13:34:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_DanielaCamargosCosta.pdf: 7549515 bytes, checksum: 6b70f7b5c83b5461482f80c7c7b76f8a (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-17T13:34:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_DanielaCamargosCosta.pdf: 7549515 bytes, checksum: 6b70f7b5c83b5461482f80c7c7b76f8a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T13:34:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_DanielaCamargosCosta.pdf: 7549515 bytes, checksum: 6b70f7b5c83b5461482f80c7c7b76f8a (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / No Brasil, os casos de malária humana concentram-se na região amazônica. Entretanto, casos autóctones da doença têm sido relatados em diferentes regiões de Mata Atlântica. Sugere-se que a manutenção destes casos envolva a presença de macacos infectados. Nas regiões sul e sudeste do país circula o parasito de primatas Plasmodium simium, semelhante ao parasito de humanos P. vivax. No entanto, pouco se conhece sobre o parasito simiano e a sua proximidade morfológica, imunológica e genética com o P. vivax dificulta sua caracterização. Diante da necessidade de uma melhor compreensão da malária simiana, propôs-se neste trabalho realizar um levantamento da doença do ponto de vista clínico, molecular e imunológico em primatas de Mata Atlântica, dos estados Santa Catarina, Paraná e Mato Grosso do Sul. Em SC, foi observada uma taxa de infecção malárica pelo PCR de 35% em animais de vida livre e 4% em animais de cativeiro. Todos os animais do PR e MS foram negativos. Entretanto, em todos os estados foi identificado por meio do ELISA, uma reatividade de anticorpos contra as proteínas recombinantes PvDBPII, PvMSP-119 e PvAMA-1. Ainda, anticorpos presentes no soro de bugios foram capazes de bloquear a interação PvDBP-DARC, com uma relação positiva entre a reatividade no ELISA e presença de anticorpos bloqueadores. Além disso, a interação específica PvDBP-DARC em amostras de bugios ruivos sugere que o parasito P. simium possui uma proteína ortóloga a PvDBP e dessa forma, compartilhe a mesma via de invasão que o P. vivax. A análise de microssatélites demonstrou alelos novos e exclusivos, trazendo perspectivas para a diferenciação das populações do parasito. Através da análise da diversidade genética das sequências obtidas de P. simium foi possível caracterizar polimorfismos conservados, sendo alguns deles nunca descritos em P. vivax. Contudo, apesar destes polimorfismos, a reconstrução da filogenia baseada nos genes DBP, MSP-1 e 18S não permitiu a separação das espécies, o que reforça a proximidade genética entre os parasitos e aponta para uma transferência de hospedeiros recente. Finalmente, a presença de símios infectados em áreas de Mata Atlântica sugere que os primatas possam atuar como reservatórios da doença, uma vez que casos humanos já foram descritos nas cidades estudadas. / In Brazil, human malaria is concentrated in the Amazon region. However, autochthonous cases of the disease have been reported in the Atlantic Forest region. It has been hypothesized that these cases occurs due to accidental transmission from infected primates. Plasmodium simium is a parasite that circulates amongst primates in the southern and southeastern regions of Brazil. Critically, due to morphological, immunological and genetic similarities, it has not been possible to differentiate them. Faced with the need to obtain a deeper understanding of the relationship between human and simian Plasmodia, in this study we conducted a survey of plasmodia infection in the primates of regions of rainforest in Santa Catarina, Paraná and Mato Grosso do Sul states. In SC we identified plasmodia infection in 35% of wild animals, and in 4% of animals in captivity. However, for animals from all states, we successfully identified antibodies against the recombinant proteins PvDBPII, PvAMA-1 and PvMSP119 using ELISA. Moreover, antibodies in the serum of red howler monkeys blocked the interaction of PvDBP and its receptor DARC, with a correlation between a positive ELISA result and the presence of blocking antibodies. Furthermore, the specific interaction between DARC-PvDBP suggested that the simian parasite protein, an ortholog of PvDBP, was able to bind to the DARC receptor and thus, probably shares the same route of invasion as the P vivax merozoite in the human reticulocyte. The genotyping analysis of the simian parasites uncovered new and unique alleles for each host, furthering prospects for differentiation between populations of the human and simian parasites. By analyzing the genetic diversity between the P. vivax and P. simium variants of this protein and also MSP-1, it was possible to characterize conserved polymorphisms in P. simium, some of them never described for P. vivax. However, despite these polymorphisms, the reconstruction of phylogeny based on DBP, MSP-1 and 18S genes did not allow for separation between the two species, confirming the high degree of genetic similarity between the parasites and also suggesting a recent host transfer, as previously hypothesized. Finally, the presence of infected primates in the Atlantic Forest highlights the likelihood that these animals could act as a reservoir for malaria, as human cases have been reported in the cities studies during this work.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:54:00Z : No. of bitstreams: 1 alves_rt_me_sjrp.pdf: 897690 bytes, checksum: aa55c71d900e132e94af0abefd5cf6fa (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Clicar acesso eletrônico abaixo. / Click electronic access below.