Resumo: Estudaram-se os efeitos do sulfato de condroitina 3% (SC), da N-acetilcisteína 10% (NAC), do EDTA 1% (EDTA) e solução salina (GC), sobre a viabilidade do epitélio corneal e a concentração de metaloproteinases (MMP-2 e MMP-9), em córneas de ratos submetidos à ulceração química por NaOH 1N. Compuseram-se quatro grupos de vinte e quatro animais, que foram submetidos à queimadura química corneal com NaOH 1N. Os tratamentos foram realizados a intervalos de 6 horas e as córneas fotografadas, nos mesmos períodos, após tingimento com fluoresceína, até a reepitelização. Doze animais de cada grupo foram submetidos à eutanásia humanitaria, 20 horas após ulcerações. O mesmo procedimento foi repetido às 42 horas para os outros doze animais de cada grupo. As córneas foram processadas para quantificação de microvilosidades do epitelio corneal por microscopia eletrônica de varredura e para quantificação da MMP-2 e -9, por zimografia. O tempo médio de epitelização em horas foi de 28,00±12,82 (SC), 29,00±11,01 (NAC), 35,00±7,01 (EDTA) e de 35,00±7,01 (GC), sem diferença signficativa (p=0,46) entre os grupos. Não se observou diferença quanto ao número de MEC entre os grupos (p>0,05). Às 20 e às 42 horas, a forma latente da MMP-2 foi significativamente mais elevada nos grupos NAC e SC (p<0,001), e às 42 horas observou-se maior concentração em EDTA, relativamente ao GC (p<0,001). Às 42 horas, a concentração da MMP-2, em sua forma ativa, foi significativamente maior, no grupo SC, relativamente aos demais grupos (p<0,001). A MMP-9 só se expressou em sua forma latente, sendo sua concentração significativamente mais elevada, no grupo NAC, às 42 horas (p<0,001). Concluiu-se, que das substâncias testadas, só o sulfato de condroitina acelerou a epitelização corneal, mas nenhuma delas apresentou efeitos protetores às microvilosidades do epitélio corneal ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed evaluate the effects of topical 3% chondroitin sulfate (SC), 10% N-acetylcysteine (NAC), 1% EDTA (EDTA) and 0,9% NaCl on corneal epithelial viability and the expression of matrix metalloproteinase-2 and -9 (MMP-2 and -9), in alkali burned rat corneas. Ninety eight healthy rats were divided into four groups and animals were submitted to corneal burn with NaOH 1N. All treatments occurred every 6 hours, and the corneas were photographed at the same time points until lesions were fluorescein negative. Twelve animals of each group were euthanized 24 and 42 hours after burn, and corneas were processed for corneal epithelial microvilli quantification (CEM) by scanning electron microscopy and MMP-2 and -9 evaluation by zimography. Images were quantified by Image J. Average corneal wound healing rate was 28,00±12,82 (SC), 29,00±11,01 (NAC), 35,00±7,01 (EDTA) and 35,00±7,01 hours in controls (GC) (p=0,46). CEM count did not change significantly among groups (p>0,05). At 20 and 42 hours, MMP-2 latent form quantity was significantly increased in NAC and SC groups (p<0.001); at 42 hours, MMP-2 latent form was significantly elevated in EDTA, in comparison to GC (p<0,001). At 42 hours, MMP-2 active form was significantly increased only in SC (p<0,001). MMP-9 was expressed only in its latent form, being significantly higher in NAC, at 42 hours (p<0,001). This study indicated that only 3% chondroitin sulfate accelerated corneal wound healing. 10% N-acetylcysteine, 1% EDTA and 3% chondroitin sulfate did not protect the corneal epithelial microvilli. In addition, none of the tested agents showed any benefit over MMPs inhibition in alkali burned / Orientador: José Luiz Laus / Coorientador: Adriana Morales / Banca: Cristiane dos Santos Honsho / Banca: Alexandre Lima de Andrade / Mestre

Orientador: Sergio Luis Felisbino / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T07:36:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Delella_FlaviaKarina_M.pdf: 11309280 bytes, checksum: ef8a102f72cd9b9373b2ad5df1fdea29 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: As células do câncer prostático são geralmente dependentes, para o seu crescimento e sobrevivência, do estímulo androgênico mediado pelos receptores de andrógeno (RA). Conseqüentemente, a manipulação hormonal, como a castração e/ou o uso de antagonistas de RA, resulta na regressão do câncer. Entretanto, esses tratamentos raramente levam à cura da doença em estágios mais avançados e o câncer, conseqüentemente, torna-se independente de andrógeno. Importantes evidências sustentam a hipótese de que as metaloproteinases de matriz (MMPs) têm papel fundamental nos múltiplos passos da progressão tumoral, incluindo a promoção tumoral, angiogênese, invasão e metástase. As MMPs constituem uma ampla família de endopeptidases dependentes de zinco e cálcio e atuam na degradação da matrix extracelular e da membrana basal. Dois importantes membros da família das MMPs, MMP-2 e MMP-9, pertencentes à subfamília das gelatinases, são conhecidas por degradarem especificamente o colágeno do tipo IV, principal componente das membranas basais. Recentemente, o PCPT (Prostate Cancer Prevention Trial) mostrou que a finasterida, um inibidor da enzima 5_-redutase amplamente usado no tratamento da hiperplasia prostática benigna, diminuiu significativamente a incidência do câncer prostático quando comparado ao grupo que recebeu apenas placebo. Porém, tumores com gradação de Gleason entre 7 e 10 foram significativamente mais comuns no grupo tratado com finasterida que no grupo placebo. Nesse sentido, o papel da finasterida na quimioprevenção do câncer prostático necessita de mais investigação. Assim, este trabalho examinou se as alterações induzidas pela finasterida na morfologia e na fisiologia prostáticas têm impacto na expressão e atividade das MMPs 2 e 9. Ratos machos Wistar (90 dias de idade) foram tratados diariamente com injeções subcutâneas de finasterida (25mg/Kg) durante 3, 7, 30 e 90 dias. Um grupo de animais controle recebeu diariamente injeções subcutâneas do veículo farmacológico (óleo de milho). Os lobos ventrais (PVs), dorsolaterais (PDLs) e anteriores (PAs) foram dissecados, pesados e processados para as análises citoquímicas, imunocitoquímicas, morfométrico-estereológicas e de zimografias. A finasterida promoveu involução progressiva no compartimento epitelial e luminal, redução na altura e na proliferação das células epiteliais e aumentou o índice apoptótico e a área estromal dos três lobos prostáticos. A análise das zimografias mostrou que o tratamento com finasterida altera de modo lobo específico o padrão gelatinolítico da próstata do rato, com o aumento da pró- MMP-9 no dia 30 e da forma ativa da MMP-9 nos dias 30 e 90 na PV, aumento da pró- MMP-9 na PDL nos dias 7 e 30 e o aumento da forma intermediária da MMP-2 na PA no dia 7. Porém, a atrofia induzida pela finasterida não promoveu um aumento significativo na atividade das MMPs, em contraste com o que é encontrado na ablação hormonal pela castração. Isso se deve, provavelmente, ao fato das alterações promovidas pela finasterida na próstata constituírem um processo mais lento em comparação com a castração. Assim, os nossos resultados sugerem que a finasterida é eficaz no tratamento das afecções prostáticas sem promover um ambiente favorável para o crescimento de tumores invasivos e metástase / Abstract: Prostate cancer cells are generally dependent on androgen stimulation mediated by the androgen receptor (AR) for growth and survival. Therefore, hormonal manipulation, such as castration and/or the use of AR antagonists, results in a regression of the cancer. However, these treatments very rarely lead to the ''cure¿¿ of advanced disease and cancer eventually become androgen-independent. A substantial amount of evidence supports the hypothesis that Matrix Metalloproteinases (MMPs) play a key role in multiple steps of tumor progression, including tumor promotion, angiogenesis, invasion, and metastasis. MMPs constitute a broad family of zinc-binding endopeptidases that play a key role in degradation of the extracellular matrix and basement membrane. Two important members of the MMP family, MMP-2 and MMP-9, belonging to the gelatinase subfamily, are known to specifically cleave type IV collagen, the major component of basement membranes. Recently, The Prostate Cancer Prevention Trial (PCPT) showed that finasteride, a 5 alphareductase inhibitor widely employed in the treatment of benign prostatic hyperplasia, significantly decreased the incidence of prostate cancer versus placebo. However, Gleason score 7-10 tumors were significantly more common in the finasteride versus the placebo group. In this sense, the role of finasteride for prostate cancer chemoprevention needs further examination. Thus, this study examined whether the finasteride-induced changes on prostate morphology and phisiology has an impact on MMP-2 and MMP-9 expression and activity. Male Wistar rats (90 days of age) were treated daily with finasteride subcutaneously injected (25mg/Kg) during 3, 7, 30 and 90 days. A control group of animals received daily doses of vehicle (corn oil). The ventral (VPs), dorsolaterals (DLPs) and anterior (APs) lobes had been dissected, weighed and processed for citochemistry, immunocitochemistry, morphometric-stereological, and zymography analyses. Finasteride promoted a progressive involution in the epithelium and lumen compartments, reduced of the epithelial cell heights and proliferation and increased apoptosis and the stromal area in the three prostatic lobes. Gelatin zymography analysis showed that finasteride treatment changed the gelatinolitic profile in the prostatic lobes, with an increase in the pro-MMP-9 at day 30 and in the active-MMP-9 at days 30 and 90 in VP, increase in the pro-MMP-9 inDLP at days 7 and 30 and an increase in the intermediate-MMP-2 in PA at day 7. However, finasteride induced-atrophy did not cause a significant increase in MMPs activity, in contrast with is found in androgen ablation by castration. This is probably due to the fact that finasteride changes in prostate are a slow process in comparison with castration. Take together, our results suggest that finasteride is effective in treating prostate diseases without creating a most favorable environment for tumor growth invasion and metastasis / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

O diagnóstico da tromboembolia pulmonar aguda (EPA) e a avaliação da gravidade desta condição é desafiador. Enquanto as concentrações de troponina I cardíaca (TI) já estão bem estabelecidas quanto ao risco de estratificação, não há estudos prévios que tenham examinado se há alguma relação linear entre as concentrações de TI cardíaca e a gravidade da EPA. Além disso, as metaloproteinases (MMPs) da matriz extracelular estão envolvidas na fisiopatologia da EPA. Entretanto, é desconhecido se o aumento da atividade gelatinolítica das MMPs após a EPA reflete a gravidade desta condição. Nós examinamos se as concentrações circulantes destes biomarcadores aumentam em proporção à gravidade da EPA experimental induzida em cães anestesiados. A EPA foi induzida com coágulos de sangue autólogo (salina, 1, 3 ou 5 mL/Kg) injetados no átrio direito. As avaliações hemodinâmicas foram realizadas no momento basal e 120 minutos após a EPA. Da mesma forma, foram realizadas as quantificações de troponina I no soro e a zimografia das MMPs 2 e 9 no plasma. Nossos resultados sugerem não haver aumento significativo da atividade gelatinolítica da pró-MMP-2 no plasma após a EPA, enquanto que a atividade da pró-MMP-9 aumenta em 80% apenas no grupo que recebeu 5 mL/Kg de coágulos. A TI cardíaca no soro e a atividade da pró-MMP-9 no plasma tiveram uma correlação positiva com o índice de resistência vascular pulmonar (p=0,007 e rs=0,833 para a TI, e p=0,034 e rs=0,684 para a pró-MMP-9) e com a pressão média na artéria pulmonar (p=0,005 e rs=0,610 para a TI, e p=0,022 e rs=0,720 para a pró-MMP-9). Concluímos que a TI cardíaca e a pró-MMP-9 circulantes aumentam em proporção à gravidade da EPA, embora o aumento da pró-MMP-9 não seja muito evidente em graus menos severos da EPA. Estes achados podem ser relevantes para a clínica da EPA. / Making the diagnosis of acute pulmonary thromboembolism (APT) and assessing its severity is very challenging. While cardiac troponin I (CTI) levels are promising in risk stratification, no previous study has examined whether there is a linear relation between CTI levels and the severity of APT. Moreover, matrix metalloproteinases (MMPs) are involved in the pathophysiology of APT. However, it is unknown whether the increases in MMP levels after APT reflect the severity of this condition. We examined whether the circulating levels of these biomarkers increase in proportion to the severity of experimental APT induced in anesthetized dogs. APT was induced with autologous blood clots (saline, 1, 3, or 5 mL/kg) injected into the right atrium. Hemodynamic evaluations were carried out for 120 min. Gelatin zymography of MMP-2 and MMP-9 from plasma samples were performed and serum CTI levels were determined at baseline and 120 min after APT. Our results sugest that while no significant increases in pro-MMP-2 levels were found after APT, pro-MMP-9 levels increased by 80% only after 5 mL/kg of clot embolization. Serum CTI and plasma pro-MMP-9 levels correlated positively with pulmonary vascular resistance (p=0.007 and rs=0.833 for troponin I, and p=0.034 and rs=0.684 for pro-MMP-9) and with pulmonary artery pressure (p=0.005 and rs=0.610 for troponin I, and p=0.022 and rs=0.720 for pro-MMP-9). We conclude that circulating CTI and pro-MMP-9 increase in proportion to the severity of APT, although the increases in plasma pro-MMP-9 are less clear with less severe APT. These findings may be relevant for clinical APT.

Orientador: Jacks Jorge Júnior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-20T03:09:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SenaFilho_Marcondes_M.pdf: 9539347 bytes, checksum: ecd31e3eb890ecb3fcf26cc3dc064e25 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Sabe-se que a transição da mucosa normal para um carcinoma invasivo é um processo complexo, de múltiplas etapas e com etiologia multifatorial, onde as Lesões Potencialmente Malignas (LPMs) são de extrema importância. As LPMs são caracterizadas por uma maior possibilidade de malignização, quando comparadas à mucosa normal. Dentre estas, a Leucoplasia Bucal (LB) é a principal representante. Alguns estudos sugerem que há aumento da atividade de metaloproteinases (MMPs) 2 e 9 em mucosas com displasia epitelial e carcinomas espinocelulares (CECs) bucais, porém isso ainda não está totalmente claro e necessita de mais estudos. Os objetivos deste trabalho foram: 1) Avaliar a expressão imunoistoquímica das metaloproteinases 2 e 9; 2) Mensurar a atividade gelatinolítica total in situ; 3) Avaliar a integridade da lâmina basal através da expressão de colágeno IV; 4) Correlacionar e co-localizar a atividade gelatinolítica total in situ com a imunofluorescência de dupla marcação para colágeno IV e metaloproteinases 2 ou 9; 5) Correlacionar os achados anteriores com os aspectos clínicos e anatomopatológicos;. Foram realizadas 50 coletas (45 lesões e 5 controles) de biópsias oriundas de pacientes com suspeita clínica de lesões potencialmente malignas ou carcinomas bucais. Deste total, 30 (60%) receberam diagnóstico clínico de LB e 15 (30%) de CEC. Histopatologicamente, observou-se que 12 amostras tratavam-se apenas de hiperqueratose e acantose, 08 de displasia epitelial leve/moderada, 08 de displasia epitelial intensa, 10 CEC bem diferenciados e 04 carcinomas pouco diferenciados. Nas analises imunoistoquímicas, observou-se que a MMP-2 é fortemente expressa nos epitélios livres de displasia, diminuindo de acordo com a progressão da displasia epitelial ou indiferenciação da lesão. Ambas as MMPs foram expressas no estroma das lesões com displasia epitelial intensa e CEC's, porém a MMP-9 foi mais acentuada, principalmente nos CEC's indiferenciados. A atividade gelatinolítica in situ foi maior no epitélio dos controles e das hiperqueratoses e acantoses, se co-localizando apenas com a MMP-2. Todos os CEC's e 63% das displasias epiteliais intensas apresentaram descontinuidade da lâmina basal, onde houve co-localização das MMPs com atividade gelatinolítica. Nestas mesmas lesões, houve regiões de co-localização das MMP's, atividade gelatinolítica em lâminas basais ainda íntegras. A baixa expressão gelatinolítica das lesões displásicas e CEC's, correlacionado com as rupturas de lâmina basal e aumento da expressão das MMP's no estroma, além da co-localização das mesmas nas regiões de descontinuidade da lâmina basal, sugerem que as MMP's expressas no estroma das lesões provavelmente estão mais relacionadas com a progressão do tumor do que as expressas pelo parênquima / Abstract: The transition from normal oral mucosa to invasive carcinoma has a complex and multifactorial etiology. Oral leukoplakia (OL) is regarded as the most prevalent potentially malignant oral lesion, with a higher tendency for malignant transformation if compared to normal oral mucosa. Although an increased activity of matrix metalloproteinases (MMPs) 2 and 9 in oral mucosa presenting varying degrees of epithelial dysplasia and oral squamous cell carcinomas (OSCCs) has been suggested, but further investigation is necessary for confirming such association. Therefore, the aim of this research is to evaluate the immunohistochemical expression and the total in situ gelatinolytic activity of MMP-2 and MMP-9 in OL and OSCC, as well as to evaluate the integrity of the basal lamina through the expression of collagen IV, correlating the results obtained with clinical and pathological features. Immunohistochemical, immunofluorescent and in situ zymography reactions were carried out in 5 normal oral epithelium, 12 cases presenting hyperkeratosis and acanthosis with no epithelial dysplasia, 8 mild/moderate epithelial dysplasia, 8 severe epithelial dysplasia, 10 well differentiated and 4 poorly differentiated OSCC's. It was found that MMP-2 expression was higher in oral epithelium devoid of dysplasia, if compared to dysplastic and neoplastic oral epitheliums. In addition, despite both MMPs were expressed in the stroma of severe epithelial dysplasia and OSCC's samples, MMP-9 expression revealed to be more pronounced, especially in poorly differentiated OSCCs. in situ gelatinolytic activity was higher in normal epithelium and those presenting only hyperkeratosis and acanthosis, co-localizing only with MMP-2. All cases of OSCC and 63% of lesions with severe epithelial dysplasia showed discontinuity of the basal lamina, revealing co-localization of MMPs with in situ gelatinolytic activity in regions with continuous and discontinuous basal lamina. Taken together, the results obtained revealed that a low gelatinolytic activity in the parenchyma of dysplastic lesions and OSCC correlated with disruption of the basal lamina and with an increased expression of MMPs in the stroma, suggesting that MMP's expressed in the stroma of the lesions would be more related with tumor progression than MMP's expressed in the lesional parenchyma / Mestrado / Estomatologia / Mestre em Estomatopatologia

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Eliana_do_Nascimento_Torre.pdf: 1908566 bytes, checksum: 7f4e5292cab07c5cd5840870b92b0df1 (MD5) Previous issue date: 2011-07-19 / Adhesive fillings are satisfactory on short-term evaluation. However, when the evaluation period of longevity of these fillings is longer, problems with the stability of the polymer formed by the adhesive system and the degradation of collagen forming the hybrid layer provoke a large decrease in the durability of this type of filling. The extracellular matrix metalloproteinases (MMPs) are enzymes, which have been associated with the degradation of collagen present at the hybrid layer. Therefore, the possibility of inhibiting the activity of these enzymes has been considered an important strategy to maintain and increase the longevity of adhesive fillings. Hence, the aim of this work is to evaluate the inhibitory potential of MMPs through the addiction of the monomers with promising characteristics reported in previous studies. These monomers have molecules known as ―kidnappers‖ of bivalent cations. This characteristic is important because the catalytic place of MMPs has zinc and calcium in its constitution. Therefore, the coordination of molecules with the catalytic place of the enzyme would be able to inhibit the activity of the MMPs. Dentine from teeth recently pulled will be used to obtain and purify the MMPs of dentine.. The analysis of MMPs inhibition will be carried out through a zymography. In case of positive results for the inhibition of MMPs, cytotoxicity and genotoxicity tests will be carried out in cellular lineages of human pulp fibroblasts apart from an immortalized lineage of fibroblasts of 3T3/NIH mice. The MTT (bromide 3-(4.5-dimethylthiazol-2-ilo)-2.5-diphenyltetrazolium) colorimetric test will be used to measure the cytotoxicity of the products tested and the test of micronucleus will be used to measure genotoxicity. In all groups the 10mM concentration induced 100% cell death. There was no difference in sensitivity in both strains. Statistically, in relation to the control group/untreated, the monomers were more cytotoxic in HPFs of groups 4 and 5. Similar results were found for the 3T3 lineage, except for group 2, which also showed statistical significance for all concentrations. There was a higher number of micronucleated cells in the groups where the two monomers of intermediate chains longer (PEG200 and PEG400 DMA) were used when compared to control. The results suggest that these two monomers are more cytotoxic and genotoxic. Most of the methacrylate monomers showed considerable but not total inhibition of MMP-2 by zymography. The exception was the PEG200 DMA, which only the concentration of 5 mM inhibited the activity of this gelatinolitic MMP / Restaurações adesivas apresentam desempenho satisfatório em avaliações de curto prazo, porém quando o período de avaliação da longevidade dessas restaurações é maior, problemas com a estabilidade do polímero formado pelo sistema adesivo e com a degradação do colágeno formador da camada híbrida, provocam uma queda expressiva na durabilidade desse tipo de restauração. As metaloproteinases da matriz extracelular (MMPs) são enzimas que têm sido associadas com a degradação do colágeno formador da camada híbrida e, por isso, a possibilidade de inibir a atividade dessas enzimas tem sido considerada uma estratégia importante para a manutenção e aumento da longevidade das restaurações adesivas. O objetivo do presente estudo foi avaliar o potencial inibitório da MMP-2 por monômeros com características promissoras relatadas na literatura relacionadas ao seu potencial inibidor de MMPs, sendo estes, EGDMA (1), TEGDMA (2), T4GDMA (3), PEG200 DMA (4) e PEG400 DMA (5). Dentina humana derivada de dentes recentemente extraídos foi utilizada para a obtenção e purificação das MMPs. O ensaio de inibição da MMP-2 foi realizado por zimografia. Testes de citotoxicidade e genotoxicidade foram realizados com uma linhagem primária de fibroblastos pulpares humanos (FPH), além de uma linhagem imortalizada de fibroblastos de camundongos 3T3/NIH. O teste colorimétrico MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazólio) foi usado para medir a citotoxicidade dos produtos testados, enquanto que o teste de formação de micronúcleos foi usado para avaliar a genotoxicidade. Em todos os grupos a concentração de 10mM induziu a 100% de morte celular. Não houve diferença de sensibilidade nas duas linhagens estudadas. Estatisticamente, em relação ao grupo controle/não tratado, os monômeros foram mais citotóxicos nos FPHs nos grupos 4 e 5. Resultados semelhantes foram encontrados na linhagem 3T3, à exceção do grupo 2, que apresentou diferença estatística em todas as suas concentrações, nesta célula. Houve maior número de células micronucleadas nos grupos onde foram utilizados os dois monômeros de cadeias intermediárias mais longas (PEG200 DMA e PEG400 DMA) quando comparados ao controle, sugerindo os resultados, que estes monômeros são mais citotóxicos e genotóxicos. A maioria dos monômeros metacrilatos apresentou considerável, mas não total inibição da MMP-2 em todas as concentrações através dos ensaios de zimografia. A exceção foi o PEG200DMA, o qual somente a concentração de 5mM inibiu a atividade gelatinolítica da referida MMP

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:16:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DiegoNA_DISSERT.pdf: 3427521 bytes, checksum: 8cca32583d3549111fe36c75cda96e2e (MD5) Previous issue date: 2014-02-04 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Venous wounds cause physical, psychological and financial problems that impact the quality of life of patients. Treatment alternatives are investigated in order to reduce healthcare costs and improve quality of life of people affected by this problem. Physical resources, such as therapeutic ultrasound (US), are being considered in the treatment of ulcers as a potential healing agent. This study aimed to investigate the application of US as a treatment for venous ulcers. Subjects were divided into two groups: US group, where treatment consisted of 5 sessions of pulsed US (3 MHz, 1W/cm?) associated with compression and kinesiotherapy; and sham group, where individuals went through the same procedures, but with sham US therapy. Subjects were evaluated for wound size by planimetry and digital photography, visual analogue scale for pain, quality of life by the questionnaires SF- 36 and VEINES-QoL/Sym and enzymatic activity of metalloproteinases 2 and 9 by zymography. It was observed mean reduction in wound area of 41.58?53.8% for the US group and 63.47?37.2% for the placebo group, maintenance of quality of life scores in the US group and significant improvement (p<0.05) in the placebo group by VEINES questionnaire. It was observed decreased perception of pain in the placebo group. Sample feasibility for analysis of the protein activity of metalloproteinases 2 and 9 by zymography collected by swab method was also confirmed. Our data did not give us evidence to support the theory that the US accelerates healing of venous ulcers in a short-term analysis. However, we observed that standard care associated with compression therapy and kinesiotherapy were able to significantly shorten the progression of chronic venous ulcers / As ?lceras cut?neas de origem venosa causam problemas f?sicos, psicol?gicos e financeiros que impactam a qualidade de vida dos pacientes. Alternativas de tratamento s?o investigadas no intuito de reduzir gastos com a sa?de e melhorar a qualidade de vida das pessoas acometidas com esse problema. Recursos f?sicos como o ultrassom (US) terap?utico vem sendo considerados no tratamento de ?lceras como potencial agente cicatrizador. O objetivo desse estudo foi investigar a aplica??o de US como terap?utica para a ?lcera venosa. Indiv?duos foram divididos em dois grupos: grupo US, onde o tratamento consistia de 5 sess?es de aplica??o de US pulsado (3 MHz, 1W/cm?) associadas ? terapia compressiva e cinesioterapia; e grupo placebo, onde os indiv?duos passavam pelos mesmos procedimentos, por?m com US placebo. Foram avaliados quanto ao tamanho do ferimento por planimetria e fotografia digital, dor por escala visual anal?gica, qualidade de vida pelos question?rios SF-36 e VEINES-QoL/Sym e atividade enzim?tica de metaloproteinases 2 e 9 por meio de zimografia. Foi observada redu??o m?dia da ?rea da ferida 41,58%?53,8 para o grupo US e 63,47%?37,2 para o grupo placebo, manuten??o dos escores de qualidade de vida no grupo US e melhora significativa (p<0,05) no grupo Placebo pelo question?rio VEINES. Observou-se diminui??o da percep??o de dor no grupo placebo. Confirmou-se viabilidade de amostra para an?lise da atividade proteica de metaloproteinases 2 e 9 por zimografia coletada por m?todo de swab. Diante dos dados, n?o obtivemos evid?ncias suficientes para suportar a teoria que o US acelera a cicatriza??o de ?lceras venosas em curto prazo. No entanto, pudemos observar que o tratamento padr?o associado ? terapia compressiva e ? cinesioterapia foram capazes de abreviar significativamente a progress?o das ?lceras venosas cr?nicas

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Kronisk parodontit orsakar vävnadsdestruktion till följd av matrixmetalloproteinasaktivitet. Dessa enzym härrör från värdcellerna och är en del av det immunologiska svaret på bakteriella virulensfaktorer. Grönt te har studerats för sina hälsofrämjande egenskaper, som omfattar bland annat anti-inflammatoriska effekter. Effekten beror delvis på enzyminhibering av tepolyfenoler. Syftet med denna studie var att ytterligare undersöka den inhiberande effekten av grönt te, med fokus på enzymatisk aktivitet i gingivalvätska från patienter med parodontal sjukdom. Patienter med kronisk parodontit valdes ut för att delta i studien. Gingivalvätska extraherades med mikropipetter från patienternas gingivala sulci. Proverna behandlades med grönt te och jämfördes med obehandlade prover från samma försöksperson. Fluorescens proteasanalys med kasein som substrat utfördes på fjorton prover för att detektera skillnader i kaseinolytisk aktivitet. Zymogramanalys med användning av gelatin som substrat utfördes på fyra prover, för att undersöka skillnader i gelatinolytisk aktivitet och analysera molekylvikter för de olika enzymerna. Den fluorometriska analysen visade en signifikant lägre enzymaktivitet i prover med tillsatt grönt te jämfört med obehandlade prover (p<0.001). Zymogramanalysen visade en skillnad i enzymaktivitet som var mest uttalad i banden för molekylär vikt runt 255 kDa, analogt med komplex av matrixmetalloproteinas-9. Sammanfattningsvis har det i denna studie påvisats att grönt te har en hämmande effekt på kaseinolytisk aktivitet och en mindre, mer specifik, hämmande effekt på gelatinasaktivitet. / Chronic periodontitis involves tissue destruction by matrix metalloproteinase, derived from the host cells, as part of the immunological response to bacterial virulence factors. Green tea has been studied for its health promoting properties, which includes anti-inflammatory effects. The effect is in part due to enzyme inhibition by tea polyphenols. The aim of this study was to further investigate the inhibitory effect of green tea, focusing on enzymatic activity in gingival crevicular fluid from patients with periodontal disease. Patients with chronic periodontitis were selected for participation in the study. Gingival crevicular fluid was extracted with micropipettes from the gingival sulci of the patients. Samples were treated with green tea and compared with untreated samples from the same subject. Fluorescence protease assay with casein as substrate was made using fourteen samples for detecting differences in caseinolytic activity. Zymogram assay using gelatin as substrate was done using four samples to test gelatinolytic activity and analyse molecular weights of the different enzymes. The fluorometric assay showed a significantly lower enzyme activity in samples mixed with green tea than untreated samples (p<0.001). The zymogram assay showed a difference in band strength which was most pronounced in the bands of molecular weight around 255 kDA, analogous to complexes of matrix metalloproteinase-9. In conclusion, green tea has been shown in this study to have a strong inhibitory effect on caseinolytic activity and a lesser, more specific, inhibitory effect on gelatinase activity.

A degradação da interface adesiva em dentina pode acometer tanto a porção resinosa como a porção orgânica da camada híbrida. Evidências indicam que a degradação da porção orgânica pode ocorrer em parte devido a atividade enzimática de proteases da própria dentina. As metaloproteinases da matriz (MMPs) constituem a primeira classe de enzimas relacionada com a degradação da matriz orgânica. É possível que as MMPs, possam ser reativadas durante o procedimento adesivo em conseqüência da queda do pH do meio. Objetivo: Esta investigação teve como objetivos avaliar a influência de soluções desmineralizadoras com diferentes concentrações de ácido fosfórico (AF1%, AF10% e AF37%) na atividade proteolítica da dentina humana sadia, na degradação do colágeno exposto pela desmineralização, além de identificar imunologicamente as metaloproteinases. Material e Métodos: Vinte dentes molares permanentes foram triturados para obtenção de um pó de dentina. Alíquotas de 1g do pó foram acondicionadas em tubos plásticos para que a desmineralização do substrato pudesse ser realizada de acordo com as três diferentes concentrações de ácido fosfórico testadas. Após a neutralização do ácido com NaOH, as amostras foram centrifugadas. O sobrenadante foi utilizado para mensuração espectrofotométrica do conteúdo de Cálcio (Ca) liberado pela desmineralização. O precipitado obtido foi incubado com tampão de extração de proteínas por 24h a 4°C sob agitação. Nova centrifugação foi realizada e o sobrenadante utilizado para avaliação da atividade da MMP-2 e MMP-9 por zimografia e para a identificação imunológica das metaloproteinases por western blot. O precipitado obtido pela centrifugação foi liofilizado e separado em alíquotas de 40mg (n=10) de pó de dentina para cada condição experimental. As alíquotas foram incubadas em saliva artificial por 24h a 37°C sob agitação e hidrolisadas em autoclave. Após incubação a 65°C por 40 min, as amostras foram avaliadas por espectrofotometria para que a mensuração da concentração do aminoácido hidroxiprolina (HYP) liberado pela degradação do colágeno exposto pudesse ser obtida. Fatias de 0.3 mm da dentina coronária de outro dente foram obtidas e desmineralizadas, de acordo com as diferentes concentrações de ácido fosfórico para avaliação da atividade enzimática através do método da zimografia in situ. Os resultados foram submetidos à análise de variância de um fator sem vinculação ou teste de Kruskal-Wallis para identificação das diferenças existentes entre os grupos experimentais. Para contraste das médias foi realizado o teste de Student-Newman-Keuls com nível de significância de 5% (=0,05). Resultados: A atividade enzimática de MMP-2 foi estatisticamente maior quando a dentina foi desmineralizada com AF 1% ou 10%. O uso do ácido fosfórico 37% diminuiu consideravelmente a atividade desta enzima, em relação ao AF10% (<0,05). Em nenhuma das amostras desmineralizadas com AF foi detectada a atividade enzimática da MMP-9. A identidade da MMP-2 foi confirmada pelo immunoblotting da enzima com anticorpo específico. A MMP-9 não foi expressa nos extratos analisados. A expressão de MMP-2 foi maior quando utilizado AF 1% ou 10% e menor quando foi utilizado o AF 37%. A utilização do AF 37% liberou valores de Ca, em g/mL, estatisticamente superiores aos valores determinados para os demais grupos (<0,05). A maior concentração de HYP, em g/mL, foi encontrada nos extratos desmineralizados com AF 10%. Em seguida, aparecem os valores encontrados com o uso do AF1%. Os menores valores da concentração de HYP aparecem no grupo em que foi utilizado o AF 37% (<0,05). A concentração de HYP em função do peso de dentina utilizado (40mg) também foi calculada. A maior concentração de HYP por mg de dentina foi obtida com AF 10%, seguida pelos extratos desmineralizados com AF1%. Os menores valores foram detectados com AF 37% (<0,05). O uso do AF10% demonstrou ser responsável pela maior taxa de degradação de colágeno exposto (20,13%). Em seguida, aparecem valores intermediários (11,34%) obtidos com AF1%. Por último, surgem os menores valores (0,68%) com AF37%. A análise das imagens obtidas após a realização da zimografia in situ demonstrou maior atividade enzimática quando a dentina foi desmineralizada com AF10%. Conclusão: O uso do AF37% para o condicionamento da dentina durante a realização do procedimento adesivo pode minimizar os efeitos degradantes das proteases endógenas sobre o colágeno. Em contrapartida, estudos realizados com pó de dentina desmineralizado com AF1% ou 10% podem estar sobreestimando a atividade das MMPs, em relação à prática clínica. / The dentin adhesive interface degradation can occur in resin and in organic portion of the hybrid layer. Evidence indicates that the degradation of organic matrix may partially occur due to the enzymatic activity of proteases own dentin. The matrix metalloproteinases (MMPs) have been described as the first class of enzymes associated with degradation of the organic matrix. It is possible that MMPs may be reactivated during the adhesive procedure as a result of the fall of pH. Purpose: The objectives of the present investigation are to evaluate the influence of different demineralizing phosphoric acid solutions (PA1%, PA10% and PA37%) on the proteolytic activity of human sound dentin, on the collagen degradation that was exposed after demineralization, as well as to identify the metaloproteases immunologically. Material and Methods: Dentin powder was obtained from twenty human molars. One gram aliquots were placed in polyestyrene tubes and the dentin demineralization was performed using the three different phosphoric acid concentrations tested in this study. After neutralization with NaOH, the samples were centrifuged. The supernatant was used for the spectrophotometrically quantification of calcium (Ca) released by the demineralization while the precipitate was re-suspended and incubated with a protein extraction buffer for 24h at 4ºC under agitation. The sample was centrifuged and the supernatant was used for the identification of MMP-2 and MMP-9 by western blot and for the evaluation of gelatinolytic activity by zymography. The pellet was lyophilized and 40 mg aliquots of the dentin powder (n=10) were incubated in artificial saliva for 24h at 37°C under agitation and hydrolysed in autoclave after incubation at 65°C for 40 min. The samples were analyzed spectrophotometrically to measure the hydroxyproline (HYP) released after collagen degradation. Slices of 0.3 mm of the dentine crown of the another tooth were obtained and demineralized in accordance with the concentrations of phosphoric acid used in this study for evaluating the enzymatic activity by the method of in situ zymography.The data were analyzed by ANOVA one-way or Kruskal-Wallis test for the identification of differences between the experimental groups. The means were analyzed by Student-Newmans-Keulss test (=0,05). Results: The MMP-2 enzymatic activity was statistically higher when the dentin was demineralized with 1% or 10% PA. The 37% phosphoric acid decreased the activity of such enzyme relative to PA 10% (<0,05). MMP-9 activity was not detected in any demineralization condition (1%, 10% or 37% PA). MMP-2 identification was confirmed by immunoblotting while MMP-9 was not observed in any condition. MMP-2 identification was higher when 1% or 10% PA were used while 37% PA showed lower MMP-2 identification. The use of 37% PA resulted in higher release of Ca, which was significantly higher when compared to other PA concentrations (<0,05). The highest HYP concentration was observed when 10% PA was used, followed by 1% PA. The lowest values were observed for 37% PA (<0,05). The HYP concentration according to the dentin weight used (40 mg) was also calculated. Highest concentrations of HYP per mg of dentin were observed for 10% and 1% PA, while 37% PA resulted in the lowest HYP concentration (<0,05). The use of 10% PA showed to be responsible for the highest exposed collagen degradation after demineralization (20,13%) when compared to 1% PA (11,34%) and 37% PA (0,68%). The analysis of images obtained after the realization of in situ zymography showed greater enzyme activity when the dentin was demineralized in PA10%. Conclusion: The use of 37% PA for dentin etching during the restorative procedure might minimize collagen degradation by host-derived proteases. On the other hand, studies that have been using 1% or 10% PA might have overestimated MMPs activity when compared to the clinical situation.