No / RATIONALE: 5,6-Dimethylxanthenone-4-acetic acid (DMXAA) is a low molecular weight drug of the flavonoid group, which has an anti-vascular effect in tumours causing endothelial cell apoptosis and activation of cytokines. Flavonoid-based compounds have been reported to lead to an upregulation in the expression of lysophosphatidylcholines (LPC)-type lipids in solid tumours. A study employing TLC/MALDI-MS and MALDI-MS imaging to examine LS174T colorectal adenocarcinoma xenografts following administration of DMXAA has been conducted into this effect. METHODS: LS174T colorectal adenocarcinoma xenografts grown in male immune-deficient mice were treated with 27.5 mg/kg DMXAA. The control (before treatment) and 4 h and 24 h post-treatment tumours were excised and divided into two. MALDI-MS imaging experiments were carried out on 12 microm cryosections sections taken from one half of the tumours and from the other half the lipids were extracted and analysed by TLC/MALDI-MS. These experiments were carried out in triplicate. RESULTS: Statistical analysis of the MALDI-MS imaging data set indicated an increased amount of LPC in the 24 h post-treated sample and a decreased amount of PC in the 24 h post-treated sample, compared with the 4 h post-treated sample and the control. These effects were confirmed by the TLC/MALDI-MS data. The lipid extracts were separated into six spots on the TLC plate. These were identified as arising from different lipids classes, i.e. LPC, sphingomyelins (SM), phosphatidylcholines (PC) and phosphatidylethanolamines (PE). The TLC/MALDI-MS data indicated that LPC were highly expressed in the 4 h and 24 h post-treated tumour samples compared with the control. Examination of the mass spectrometric images confirms this increase and demonstrates additionally that the increase in the signals arising from LPC appears to be localised primarily within the central areas of the xenograft. CONCLUSIONS: An increase in expression of LPC lipids in solid tumours treated with DMXAA has been demonstrated and shown to be localised in the central area of the tumour.

No / Neoadjuvant chemoradiotherapy (neo-CRT) prior to surgery is the standard of care for oesophageal adenocarcinoma (OAC) patients. Unfortunately, most patients fail to respond to treatment. MiR-187 was previously shown to be downregulated in neo-CRT non-responders, whist in vitro miR-187 overexpression enhanced radiosensitivity and upregulated PTEN. This study evaluates the role of miR-187 and downstream PI3K signalling in radiation response in OAC. The effect of miR-187 overexpression on downstream PI3K signalling was evaluated in OAC cell lines by qPCR and Western blotting. PTEN expression was analysed in OAC pre-treatment biopsies of neo-CRT responders and non-responders. Pharmacological inhibition of PI3K using GDC-0941 was evaluated in combination with radiotherapy in two-dimensional and three-dimensional OAC models in vitro and as a single agent in vivo. Radiation response in vitro was assessed via clonogenic assay. PTEN expression was significantly decreased in neo-CRT non-responders. MiR-187 overexpression significantly upregulated PTEN expression and inhibited downstream PI3K signalling in vitro. GDC-0941 significantly reduced viability and enhanced radiation response in vitro and led to tumour growth inhibition as a single agent in vivo. Targeting of PI3K signalling is a promising therapeutic strategy for OAC patients who have repressed miR-187 expression and do not respond to conventional neo-CRT. This is the first study evaluating the effect of PI3K inhibition on radiosensitivity in OAC, with a particular focus on patients that do not respond to neo-CRT. We have shown for the first time that targeting of PI3K signalling is a promising alternative therapeutic strategy for OAC patients who do not respond to conventional neo-CRT.

El adenocarcinoma mucinoso de apéndice es una neoplasia poco frecuente con una tasa de incidencia de 0,08% de todas las neoplasias. El diagnóstico suele hacerse por biopsia ya que por su presentación clínica puede simular otras patologías de estructuras localizadas en cuadrante abdominal inferior derecho. Actualmente el tratamiento aún es controversial siendo la cirugía la mejor opción. El presente reporte describe un paciente con antecedentes de apendicectomía hace 27 años que actualmente acude con una tumoración dolorosa en fosa ilíaca derecha asociada a un antígeno carcinoembrionario de 138 ng/dl. / Mucinous adenocarcinoma of the appendix is a rare neoplasm with an incidence rate of 0.08% of all malignancies. The diagnosis is usually made by biopsy because its clinical presentation may mimic other diseases of structures located in the right lower quadrant. Currently, the treatment is still controversial, being surgery the best option. This report describes a patient with a history of appendectomy 27 years ago that is hospitalized for a painful mass in the lower abdomen associated with carcinoembryonic antigen of 138 ng/dl.

INTRODUÇÃO: Os adenocarcinomas da ampola de Vater (AAV) são classificados conforme a diferenciação histológica em tipos pancreatobliliar e intestinal, com comportamento biológico e prognóstico diferentes. O objetivo deste estudo foi determinar um painel imuno-histoquímico para a diferenciação do tipo histológico dos AAVs e analisar os fatores relacionados com a sobrevivência desses tumores em uma série de pacientes submetidos à ressecção do tumor com intenção curativa. MÉTODO: Variáveis clínicas e histopatológicas foram analisadas para os tipos intestinal e pancreatobiliar em 97 doentes submetidos à ressecção pancreática por AAV. A expressão de mucinas (MUC1, MUC2, MUC5AC, MUC6), citoqueratinas (CK7, CK17, CK20), CD10, CDX2, p53, p16, Ki67, CEA, CA19-9, hMLH1, hMLH2 e hMSH6 foi avaliada usando técnica de imunoistoquímica. RESULTADOS: Quarenta e três casos foram histologicamente classificados como tipo intestinal, 47 como tipo pancreatobiliar e 7 em outros tipos, de acordo com a classificação de Albores-Saavedra. O tipo intestinal apresentou expressão significativamente maior de MUC2 (74,4% vs 23,4%; p<0,001), CK20 (76,7% vs 29,8%; p <0,001), CDX2 (86% vs 21,3%; p<0,001) e CD10 (81,4% vs 51,1%; p=0,002); enquanto MUC1 (53,5% vs 82,9%; p=0,001) e CK7 (79,1% vs 95,7%; p=0,041) foram mais expressos nos adenocarcinomas pancreatobiliares. Os marcadores imunoistoquímicos com maior acurácia para determinação do tipo histológico foram CDX2, MUC2 e CK20 (82,2%, 75,5% e 73,3% respectivamente). A positividade para p53, p16, Ki67, CEA e CA19-9 foram 36,1%, 30,9%, 37,1%, 79,4% e 88,6%, respectivamente, sem qualquer diferença significativa entre os tipos intestinal e pancreatobiliar. A perda de expressão de pelo menos uma das proteínas hMLH1, hMLH2 e hMSH6 ocorreu em 13,4%, sem diferença entre os tipos histológicos. Em análise univarida, a sobrevivência foi significativamente menor para o tipo histológico pancreaticobiliar (p = 0,021), estadiamentos TNM mais avançados (p <0,001), neoplasias com acometimento linfonodal (p <0,001) e invasão linfática (p=0,004). Em análise multivariada, o acometimento linfonodal (p <0,001) e a invasão linfática (0,013) foram fatores independentes de risco. CONCLUSÃO: A expressão imunoistoquímica de MUC1, MUC2 e CDX2 são úteis para a classificação dos AAVs em tipo intestinal e pancreatobiliar. O tipo intestinal esteve associado a um melhor prognóstico, mas apenas o acometimento linfonodal e a invasão linfática foram fatores independentes de risco / The intestinal and pancreatobliliary types of histological Vaters ampulla adenocarcinoma present different biologic behavior and prognosis. The aim of the present study was to determine the best immunohistochemical panel for tumor classification and analyze the survival of these histological types in a series of patients. Clinical and histopathologal variables were analyzed for each pancreatobiliary and intestinal type differentiation in 97 resected ampullary adenocarcinomas. The expression of mucins (MUC1, MUC2, MUC5AC, MUC6), cytokeratins (CK7, CK17, CK20), CD10, CDX2, p53, p16, Ki67, CEA, CA19-9, hMLH1, hMLH2 and hMSH6 was evaluated by using immunohistochemistry. Forty three Vaters ampulla carcinomas were histologically classified into intestinal type, 47 into pancreatobiliary type and 7 into other types, according to Albores-Saavedra classification. The intestinal type had a significantly higher expression of MUC2 (74.4%vs23.4%. p<0.001), CK20 (76.7%vs29.8%p<0.001), CDX2 (86%vs21. 3%. p<0.001) and CD10 (81.4%vs51.1%. p=0.002); while MUC1 (53.5%vs82.9%. p=0.001) and CK7 (79.1%vs95.7%. p=0.041) were higher in pancreatobiliary adenocarcinomas. The most accurate markers for the immunohistochemical classification were CDX2, MUC2 and CK20 (82.2%. 75.5% and 73.3% respectively). The positivity of p53, p16, Ki67, CEA and CA19-9 were 36.1%, 30.6%, 37.1%, 79% and 88%, respectively without any significant difference between intestinal and pancreatobiliary types. Loss of hMLH1, hMLH2 and hMSH6 proteins expression occurred in 13.4% of Vaters adenocarcinoma, without difference between intestinal and pancreaticobiliary types. Survival was significantly affected by pancreaticobiliary type (p=0.021), tumor grade (p<0.001), nodal status (p<0.001) and lymphatic invasion (p=0.004). Only regional lymph node involvement (p<0.001) and lymphatic invasion (p=0.013) was independent risk factors for survival in a multivariate analysis. In conclusion, the immunohistochemical expression of apomucins MUC1, MUC2 and CDX2 are useful for the classification of ampullary adenocarcinoma in intestinal and pancreaticobiliary types. Intestinal type was associated with a better prognosis, but only lymph node status and lymphatic invasion were independent risk factors

Introdução: O adenocarcinoma ampular é uma neoplasia maligna rara, com frequência de 1% em relação a todos os tumores gastrintestinais e, de 6 a 25% dos casos de neoplasias periampulares. Como distintos epitélios convalescem dentro da ampola de Vater, a origem histológica desses tumores ainda é uma questão desafiadora na prática clínica. As diferenças nas classificações histomorfológicas tornam difícil a avaliação e comparação dos estudos clínicos desses tumores. Por isso, a divisão histológica em dois tipos principais (intestinal e pancreatobiliar) é necessária para comparação terapêutica e prognóstica desta neoplasia. Materiais e métodos: No presente estudo foram incluídos 27 pacientes no período de 2007 a 2013 com diagnóstico de Adenocarcinoma Ampular no HCFMRP-USP. Foi realizada a avaliação histológica e imuno-histoquímica com os anticorpos CK7, CK20, CDX2, MUC1, MUC2, MUC5AC e, em seguida, avaliado a sobrevida global. Resultados: A média de sobrevida global foi de 40,26 meses. 63% eram carcinomas do tipo intestinal e 37% eram do tipo pancreatobiliar. A expressão dos marcadores CK20, MUC 2 e CDX 2 foram mais frequentes nos tumores do tipo intestinal, já os marcadores CK7, MUC 1 e MUC5AC foram expressos com maior frequência no tipo pancreatobiliar. O CDX2 é o marcador com maior sensibilidade e especificidade para o tipo intestinal quando usado de forma isolada (p<0,01). A associação de CK7 e MUC1 apresentou alta sensibilidade (80%) para o subtipo pancreatobiliar, enquanto as associações CK20 e CDX2 ou MUC2 e CDX2 apresentavam especificidade de 100% para o subtipo intestinal. A média global de sobrevida foi de 40,26 meses. Não houve interferência do tipo histológico (p=0,48), estadiamento (p=0,90) ou realização de quimioterapia (p=0.30) na sobrevida global. Conclusão: O presente estudo propõe que a utilização de um painel imuno-histoquímica composto por CDX2, CK7 e MUC1 permite a classificação com maior acurácia dos adenocarcinomas ampulares em tipo intestinal ou pancreatobiliar. Não foi possível afirmar que a realização de quimioterapia, o estadiamento patológico ou o perfil histopatológico influenciou na sobrevida global, porém o grande impacto deste estudo foi a possibilidade de classificar, a partir de um painel imuno-histoquímico reduzido, os dois subtipos histológicos usuais dos adenocarcinoma ampulares e com isso estabelecer um protocolo para direcionar melhor os pacientes. / Background: Ampullary carcinoma is a rare malignant neoplasm, with a frequency of 1% of all gastrointestinal tumors and represents 6 to 25% of the cases of periampullary neoplasms. As distinct epithelia convalesce within the ampulla of Vater, the histological origin of these tumors is still a challenging question in clinical practice. Differences in histomorphological classifications make difficult to evaluate and compare the clinical trials of these tumors. Therefore, the histological division into two main types (intestinal and pancreatobiliary) is necessary for therapeutic and prognostic comparison of this cancer. Methods: 27 patients were included between 2007 and 2013 with diagnosis of ampullary carcinoma from HCFMRP-USP. Histological and immunohistochemical evaluation was performed with the antibodies CK7, CK20, CDX2, MUC1, MUC2, MUC5AC and then was evaluated the overall survival. Results: The overall survival rate was 40.26 months. Sixty three percent were intestinal type carcinomas and 37% were pancreatobiliary type. Expression of the CK20, MUC 2 and CDX 2 were more frequent in intestinal tumors, whereas the CK7, MUC 1 and MUC5AC markers were expressed more frequently in the pancreatobiliary type. The immunostaining of CDX2 presented highest sensitivity and specificity for the intestinal type when used alone (p <0.01). The association of CK7 and MUC1 showed high sensitivity (80%) for the pancreatobiliary type, while CK20 and CDX2 or MUC2 and CDX2 associations had 100% specificity for the intestinal type. The overall survival rate was 40.26 months. There was no significative relation of histological type (p = 0.48), staging (p = 0.90) or chemotherapy (p = 0.30) with the overall survival. Conclusions: This study suggests that the use of an immunohistochemical panel of CDX2, CK7 and MUC1 allows the classification with higher accuracy in the intestinal or pancreatobiliary type. It was not possible to affirm that chemotherapy, pathological staging or histopathological profile influenced the overall survival, but the major impact of this study was the possibility to classify, from a reduced immunohistochemical panel, the two usual histological subtypes of ampullary adenocarcinoma and thus establish a protocol to better target patients.

O câncer colorretal está entre as principais neoplasias malignas sendo a quarta causa de morte por câncer no mundo e a terceira no Brasil. Mutações nos genes APC, DCC, K-RAS e TP53 foram originalmente associadas com a progressão do câncer colorretal (CCR) esporádico. Entretanto, estudos de genoma completo e exoma têm revelado outros genes relacionados com o CCR. Como consequência dessas mutações, um conjunto de genes alteram sua expressão modulando vias gênicas em cada estágio da progressão tumoral. Nesse sentido, há um grande esforço para definir assinaturas gênicas que auxiliem na classificação dos tumores quanto ao diagnóstico e prognóstico dos pacientes. Portanto, o objetivo deste projeto foi analisar a expressão gênica em escala genômica de amostras de adenoma e adenocarcinoma colorretal visando identificar novos marcadores genéticos ligados a transição adenoma-adenocarcinoma. Para isso, dez amostras pareadas de adenoma e adenocarcinoma do mesmo paciente foram submetidas à análise de expressão gênica pela técnica de microarranjos. Análises de bioinformática, revelaram uma assinatura de 689 genes diferencialmente expressos (fold-change>2, p<0.05), que permitiram a classificação genética entre o adenoma e o adenocarcinoma. Oitos genes (IL6, IL8, OSM, SFRP4, ETV4, ESM1, SIM2 e RETNLB) foram escolhidos para validação com base na sua função e valor de expressão no tecido tumoral. A análise in silico dos genes hiperexpressos realizada no programa MetaCore (análise de dados e vias gênicas) destacou diversas vias gênicas ligadas à tumorigênese, incluindo as de adesão celular e Transição Epitélio-Mesenquimal (TEM), importantes na fase avaçada da progressão tumoral. O gene ETV4 foi selecionado para realização dos ensaios funcionais em virtude de seus altos níveis de expressão nas dez amostras de adenocarcinoma e participação nos mecanismos de proliferação celular e no TEM. Ensaios in vitro de siRNA para o gene ETV4 resultou na diminuição da proliferação celular e no potencial clonogênico da linhagem HT29. Adicionalmente, foram investigadas mutações nos genes APC, K-RAS e TP53, nas amostras pareadas de adenoma, adenocarcinoma, tecido normal e sangue periférico dos dez pacientes. Todos os pacientes apresentaram mutação germinativas nos três genes. No entanto, apenas os genes K-RAS (40%) e TP53 (30%) apresentaram mutações somáticas e patogênicas, exclusivamente nos adenocarcinomas. Esses resultados demonstraram que, na nossa coorte, mutações nos genes TP53 e K-RAS podem estar contribuindo para a progressão em uma parcela do câncer colorretal do tipo esporádico. Em resumo, o presente estudo aponta que o gene ETV4 pode contribuir para ativar o mecanismo de proliferação celular em adenocarcinoma colorretal. Além disso, o estudo demonstra a importância da combinação da análise de mutação com o perfil de expressão para melhor compreensão da base molecular do câncer colorretal. / Colorectal cancer is among the main malignant neoplasia, it is the fourth leading cause of death in the world and the third in Brazil. Mutations in APC, DCC, KRAS and TP53 genes have been originally associated with the progression of sporadic colorectal cancer (CRC). However genome wide and exome studies have revealed other genes related to CRC. As a consequence of these mutations, a set of genes alters their expression modulating gene pathways in every stage of tumor progression. In this regard, there is great effort to define gene signatures that help to classify tumors in relation to patients diagnosis and prognosis. Therefore, the objective of this project was to analyze gene expression in genomic scale of colorectal adenoma and adenocarcinoma samples aiming to identify new genetic markers linked to adenoma- adenocarcinoma transition. For this purpose, ten paired adenoma and adenocarcinoma samples of the same patient were subjected to gene expression analysis by microarrays technique. Bioinformatics analyses revealed a signature of 689 genes differentially expressed (fold-change>2, p<0.05), which allowed the genetic classification between adenoma and adenocarcinoma. Eight genes (IL6, IL8, OSM, SFRP4, ETV4, ESM1, SIM2 and RETNLB) were chosen for validation based on their function and expression value in tumor tissue. In silico analysis of hyperexpressed genes, done in the program MetaCore (data analysis and gene pathways), highlighted diverse gene pathways linked to tumorigenesis, including the ones of cell adhesion and Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT), important in the advanced phase of tumor progression. ETV4 gene was selected for functional assays due to its high expression levels in the ten samples of adenocarcinoma and due to its participation in cell proliferation mechanisms and in EMT. In vitro siRNA assays for ETV4 gene resulted in the decrease of cell proliferation and in the clonogenic potential of HT29 line. In addition, mutations in APC, KRAS and TP53 genes were investigated in paired samples of adenoma, adenocarcinoma, normal tissue, and peripheral blood from ten patients. All patients showed germline mutations in the three genes. However, only KRAS (40%) and TP53 (30%) genes showed somatic and pathogenic mutations, exclusively in adenocarcinomas. These results demonstrated that, in our cohort, mutations in TP53 and KRAS genes might be contributing to progression in a portion of sporadic-type colorectal cancer. In summary, the present study points out that ETV4 gene might contribute to activate cell proliferation mechanism in colorectal adenocarcinoma. Moreover, the study demonstrates the importance of combining the mutation analysis with expression profile in order to better understanding the molecular basis of colorectal cancer.

A mitocôndria é a organela citoplasmática responsável pelo maior sistema produtor de energia, a fosforilação oxidativa (OXPHOS). Foi proposto que em células tumorais a hiper-regulação da glicólise em condições normais de oxigênio (Efeito Warburg), está associada a defeitos na OXPHOS e pode regular o fenótipo tumoral, por exemplo, o potencial metastático da célula por meio da indução de vias pseudohipóxicas durante a normóxia. Estudos recentes mostraram que vários tipos de tumores possuem mutações somáticas em seu genoma mitocondrial, o que pode alterar as funções da OXPHOS levando a troca de metabolismo energético nas células tumorais e induzindo a tumorigênese. Diante disto, o presente trabalho avaliou a instabilidade do genoma mitocondrial em etapas bem definidas da progressão do câncer colorretal. O DNA genômico foi extraído de amostras de adenoma, adenocarcinoma, tecido adjacente e sangue periférico de nove pacientes diagnosticados com Câncer colorretal. O genoma mitocondrial foi amplificado e sequenciado para que fossem feitas as buscas por mutações nas amostras de sangue periférico, adenomas e adenocarcinoma. Foi também medido o número de cópias relativas do mtDNA. Foram encontradas um total de 233 mutações, das quais 162 foram em comum entre os três tecidos avaliados. As amostras de adenocarcinoma foram as que apresentaram uma maior média de mutações por amostra (44,6), seguidas dos adenoma (40,2) e do sangue periférico (34). As amostras de adenocarcinoma apresentaram uma maior instabilidade do mtDNA refletidas a partir de um maior número de mutações somáticas (tanto do tipo InDel como mutações de uma única base), mutações não sinônimas com maior patogenicidade, maior número de mutações em heteroplasmia e com taxa de heteroplasmia elevada. Já as amostras de adenoma apresentaram instabilidade dos seus mtDNA intermediários entre o tecido não tumoral e tumoral, refletindo bem a etapa de modificação celular no qual esses tecidos se encontram. Na análise do número de cópias relativas, as amostras de adenocarcinoma tiveram diminuição no número de cópias relativas quando comparadas com tecido adjacente (p= 0,01) e com adenomas (p= 0,04). Em síntese, o presente trabalho sugere que a instabilidade do genoma mitocondrial parece ter um papel importante no desenvolvimento de tumores colorretais. / The mitochondrion is a cytoplasmic organelle responsible for the major energy producing system, which is the oxidative phosphorylation enzyme pathway (OXPHOS). It was proposed that glycolysis up-regulation during normal oxygen conditions (Warburg effect) may induce defects in the mitochondrial respiration and regulate tumoral phenotypes, for example, metastatic potential through the induction of pseudohipoxic pathways during normoxia. Recent studies have shown that many kinds of tumors have mtDNA somatic mutations, which could alter the OXPHOS functions, leading to changes in glucose metabolismo and improvind tumorigenesis. This study analyzed the mitochondrial genome instability of well defined stages of colorectal cancer. Genomic DNA was extracted from adenoma, adenocarcinoma, adjacente tissue and peripheral blood of patients diagnosed with Colorectal cancer. The mitochondrial genome was amplified and sequenced for mutations screening in adenoma, adenocarcinoma e blood samples. It was also analyzed the relative mtDNA copy number. It was find a total of 233 mutations, which 162 were in common among the three analyzed tissues. The adenocarcinoma samples presented a greater mutation mean per sample (44.6) followed by adenomas samples (40.2) and blood samples (34). The adenocarcinoma samples also shown a greater mitochondrial genome instability refleted by increased of somatic mutations (InDels and single nucleotide variation), non sinonimous mutations with higher patogenicity, increased number of heteroplasmatic mutations and higher heteroplasmatic levels. The adenoma samples showed intermadiate instability of its mtDNA, which well reflects the intermediate stage of cellular modifications of this tissue. The mtDN copy number analysis shown that the adenocarcinoma samples presented decreased number of mtDNA content when compared with adjacente tissue (p= 0.01) and adenoma samples (p= 0.04). In summary the presente study suggests that the mitochondrial genomic instability seems to play an importante role in colorectal tumorigenesis.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:38:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thalita Marra Rosa.pdf: 2748293 bytes, checksum: 95ff2b3a54c30b8fbcf37e79f185b60f (MD5) Previous issue date: 2014-02-19 / The use of molecular markers has contributed to the identification of genes and chromosomal alterations in different stages of a given disease can result in a huge breakthrough in determining its pathophysiology. The proposed study focuses his attention on becoming more accessible and understandable for doctors and patients to laboratory diagnostic tools for prostate cancer and socialize them in health promotion. The aim of this study was to understand how loss / gain genomic PTEN is associated with prostate cancer. Changes of the PTEN gene were evaluated in 38 cases of patients with prostate cancer and the fluorescent signals for each probe were counted in 100 interphase nuclei per slide, no overlapping and intact. The occurrence of genomic alterations in PTEN were examined and classified as homozygous , hemizigose , monosomy, gain and loss regions of chromosome 10. The study demonstrated a high rate of monosomic alterations, 76.3% of cases, and hemizigose deletions represented 21.1%, while the gain of chromosome 10 was 2.6%. In the group of patients, 5.2% were hereditary, 36.8% were sporadic and 57.9% family and for all these groups we found alterations in the PTEN gene. The results of this study indicate that homozygous, hemizigose, monosomy and gain of PTEN gene can be observed in patients with sporadic, familial or hereditary prostate carcinoma. To evaluate and compare the variable smoking and changes in the PTEN gene, we observed a high rate of change in smokers , and who smoke have up to 5.7 times to acquire monosomic alterations ( p = 0.0495 ) , showing a significant association between smoking and monosomic alterations. There was no statistically significant association when comparing drinkers patients with alterations in PTEN (p = 0.52 ) , PSA levels x PTEN ( p = 0.58 ) and PSA x age ( p = 0.68 ). The FISH tool allowed the analysis clearly and effectively of the alterations, demonstrating the reliability of this technique for reading the fluorescent signs in each cell. / O uso de marcadores moleculares tem contribuído para a identificação de genes e alterações cromossômicas em diferentes estágios de uma dada doença podendo resultar em um enorme avanço na determinação de sua fisiopatologia. A presente proposta de estudo centra sua atenção em tornar mais acessíveis e compreensíveis para os médicos e para os pacientes as ferramentas laboratoriais de diagnóstico do câncer de próstata e socializá-las na promoção da saúde. O objetivo do presente estudo foi compreender como perda/ganho genômico de PTEN se associa com o câncer de próstata. As alterações do gene PTEN foram avaliadas em 38 casos de pacientes com câncer de próstata e os sinais fluorescentes para cada sonda foram contados em 100 núcleos interfásicos por lâmina, não sobrepostos e intactos A ocorrência das alterações genômicas de PTEN foram examinadas e classificadas em homozigose, hemizigose, monossomia, ganho e perda de regiões do cromossomo 10. O estudo demonstrou um alto índice de alterações do tipo monossômica, 76,3% dos casos, e deleções do tipo hemizigose para 21,1% sendo que a porcentagem de ganho do cromossomo 10 foi de 2,6%. No grupo de pacientes avaliados, 5,2% eram do tipo hereditário, 36,8% familiares e 57,9% esporádicos e para todas essas classificações foi possível encontrar alterações no gene PTEN. Os resultados do presente estudo indicam que alterações do gene PTEN do tipo homozigose, hemizigose, monossomia e ganho podem ser observadas em pacientes com carcinoma prostático esporádico, familial ou hereditário. Ao avaliar e comparar a variável tabagismo e as alterações no gene PTEN pode-se obsevar um alto índice de alterações nos pacientes fumantes, sendo que quem fuma tem 5,7 vezes mais chances de sofres alterações do tipo monossômicas (p= 0,0495), evidenciando uma associação significativamente entre fumantes e alterações monossômicas. Não houve associação estatisticamente significativa quando se comparou os pacientes etilistas com alterações no PTEN (p= 0,52), níveis de PSA x PTEN (p= 0,58) e PSA x idade (p= 0,68). A técnica de FISH possibilitou a análise das alterações de forma clara e eficaz, evidenciando a confiabilidade desta técnica quanto à leitura dos sinais de fluorescência em cada célula.

INTRODUÇÃO: O câncer gástrico precoce que invade a submucosa pode apresentar acometimento linfonodal em torno de 20% dos casos. O tratamento cirúrgico clássico com gastrectomia e linfadenectomia D2 é um procedimento não isento de mortalidade e morbidade. Determinar quais pacientes têm maior risco de acometimento linfonodal permitiria tratamentos com menores complicações. Recentemente diversos autores relatam maior expressão imuno-histoquímica de p53 e p21ras em tumores avançados e com pior prognóstico. Tem sido relatada também perda da expressão de p21waf1, p27kip1 e p16ink4a nos tumores avançados e algumas publicações relatam também relação entre a expressão dos marcadores e acometimento linfonodal. MÉTODOS: Foram estudados retrospectivamente 81 pacientes submetidos à gastrectomia com linfadenectomia D2 no período de 1971 a 2004 no Serviço de Cirurgia do Estômago e Intestino Delgado do Departamento de Gastroenterologia do HC-FM/USP. Os blocos de parafina contendo fragmentos dos tumores foram recuperados e novo exame histopatológico confirmou o diagnóstico. Selecionaram-se áreas representativas de mucosa normal, mucosa metaplásica e tumor para confecção de novos blocos de tissue microarrays. Foi avaliada a expressão imuno-histoquímica de p21ras, p53, p21waf1/cip1, p27kip1 e p16ink4a nos tecidos. Foram investigadas as correlações entre a expressão dos marcadores e as características clínico-patológicas dos pacientes. A análise da associação entre os dados clínicos e a positividade dos marcadores foi realizada pelo teste Qui-quadrado. RESULTADOS: Na mucosa normal, metaplásica e tumoral p53 apresentou positividade em 53%, 87,3% e 87,1% dos casos respectivamente. Nos mesmos tecidos p21ras apresentou positividade de 85,3%, 86% e 96,8%. Para p16ink4a a positividade foi de 46,3%, 91,1% e 86%. Para p27kip1 a positividade foi de 60%, 94,7% e 95,3%. Para p21waf1/cip1 a positividade foi 32,4%, 72,7% e 71,4%. Todos os tumores tiveram alguma positividade para p53. Os tumores com acometimento linfonodal apresentaram hiper-expressão(+4) de p53 em 47% dos casos contra 17% nos pacientes que não tinham acometimento. Nenhum tumor com positividade para p53 baixa(0 e +1) teve linfonodos acometidos. Nenhum tumor com p21ras negativo apresentou linfonodos acometidos. Nos pacientes com acometimento linfonodal p21ras teve positividade intensa(+2 e +3) em 88% dos casos contra 50% dos casos sem acometimento linfonodal. Houve positividade intensa(+2,+3 e +4) de p21waf1/cip1 em 71% dos tumores com acometimento linfonodal contra 28% nos pacientes sem acometimento. Não observamos perda de expressão de p21waf1, p27kip1 e p16ink4a nos tumores com acometimento linfonodal. Na mucosa normal p16ink4a foi hiper-expresso (+4) em 20% dos casos com infiltração perineural contra 0% nos casos sem acometimento. O mesmo marcador foi hiperexpresso em 50% dos casos com infiltração vascular contra 0% dos casos sem infiltração. Os tumores com padrão de infiltração Sm2 tiveram pouca positividade(0 e +1) de p27kip1 na mucosa normal em 89% dos casos contra 55% dos casos Sm1. CONCLUSÕES: Maior expressão de p53, p21ras e p21waf1/cip1 no tumor teve relação estatística significante com acometimento linfonodal. Ocorre aumento da expressão imuno-histoquímica de todos os marcadores da mucosa normal para o tumor. A maior hiper-expressão de p16ink4a na mucosa normal de pacientes tem relação com infiltração perineural e vascular nos tumores. A expressão dos marcadores é diferente nas raças estudadas. As pacientes do sexo feminino apresentam maior positividade de p21waf1 na mucosa normal. Pacientes com história familiar de câncer gástrico apresentam maior positividade de p16ink4a na mucosa normal, menor positividade de p21waf1/cip1 e p21ras na mucosa metaplásica. Maior positividade na mucosa normal de p21waf1/cip1 relaciona-se a sexo feminino e infiltração tipo Sm1 / INTRODUCTION: Early gastric cancer that invades the submucosa might have a lymphonodal involvement in about 20% of the cases. Gastrectomy and D2 linfadenectomy is a procedure that has presented mortality and morbidity. Determining which patients would have a greater risk of lymphonodal involvement would allow treatments with fewer complications. Recently, several authors reported a greater immunohistochemical expression of p53 and p21ras in advanced tumors with worst prognosis. It has also been reported the expression loss of p21wafl, p27kip1, and p16ink4a in advanced tumors, and, some studies also observed the relationship between the markers expression and lymphonodal involvement. METHODS: Eightyone patients who had undergone gastrectomy with D2 linfadenectomy from 1971 to 2004 were retrospectively studied. A new histopathological exam confirmed the diagnosis. Representative areas of both normal and metaplastic mucosa and of the tumor were selected for obtaining new blocks of tissue microarrays. The immunohistochemical expression of p21ras, p53, p21waf1/cip1, p27kip1 and p16ink4a in the tissues was evaluated. RESULTS: In normal, metaplastic and tumoral mucosa, p53 showed positivity in 53%, 87.3%, and 87.1% of the cases, respectively. In the same tissues, p21ras showed positivity in 85.3%, 86%, and 96.8%, respectively. The positivity of p16ink4a was 46.3%, 91.1%, and 86%, respectively. p27kip1 showed a positivity of 60%, 94.7%, and 95.3%, respectively. p21wafl/cip1 presented a positivity of 32.4%, 72.7%, and 71.4%, respectively. All tumors showed positivity for p53. Tumors with lymphonodal involvement presented hyperexpression (+4) of p53 in 47% of the cases versus 17% in patients who had not showed any involvement. No tumor with low positivity (0 and +1) of p53 showed lymphonodal involvement. No tumor with negative p21ras showed lymphonodal involvement. In patients with lymphonodal involvement, p21ras presented strong positivity (+2 and +3) in 88% of the cases versus 50% of the cases without lymphonodal involvement. There was a strong positivity (+2,+3, and +4) of p21wafl/cip1 in 71% of the tumors with lymphonodal involvement versus 28% in patients without involvement. It was not observed an expression loss of p21waf1, p27kip1 e p16ink4a in tumors with lymphonodal involvement. In normal mucosa, p16ink4a showed a hyper-expression (+4) in 20% of the cases with perineural invasion versus 0% of the cases without invasion. This same marker showed a hyper-expression in 50% of the cases with vascular invasion versus 0% of the cases without invasion. Tumors with Sm2 invasion pattern showed low positivity (0 and +1) of p27kip1 in normal mucosa in 89% of the cases versus 55% of the cases of Sm1 tumors. CONCLUSIONS: Higher expression of p53, p21ras, and p21wafl/cip1 in tumor showed a significant statistical relationship with lymphonodal involvement. A higher hyper-expression of p16ink4a in patients normal mucosa was related to perineural and vascular invasion of tumors

No câncer gástrico, o foco do tratamento é a sobrevida, entretanto, para tumores avançados nos quais a indicação da cirurgia apresenta controversias, a qualidade de vida após o tratamento tornou-se importante. O pêso dos sintomas influencia a qualidade de vida e a sobrevida. Os sintomas são relacionados a doença de base, ao tratamento realizado, as co-morbidades associadas ou a combinação de fatores. A avalia-se a qualidade de vida no pré e pós-operatório de gastrectomia através dos questionários QLQC30 (qualidade global, escalas funcionais, escalas de sintomas) e STO22 (escalas de sintomas e itens isolados), associado a escalas funcionais de Karnofsky e Zubrod, além das escalas visuais analógicas e numérica para dor no pré e no primeiro e terceiro mês de pós-operatório. As análises de ambos os questionários não mostraram diferença estatística entre o pré-operatório e o primeiro e terceiro mês de pósoperatório. A escala funcional de karnofsky mostrou melhora da função fisica no primeiro mês de pós-operatório sem diferença com o terceiro mês, enquanto a de Zubrod não mostrou diferenças. A avaliação da dor não mostrou difernça com pós-operatório. A gastrectomia no câncer gástrico estádio III e IV não piora a qualidade de vida e pode ser realizada nos pacientes com perspectiva de sobrevida maior que um mês. / The aim of the treatment is survival when concerning gastric cancer. In those advanced gastric tumors whose surgical indications stay controversial, the Quality-oflife after treatment turned out to be very important. Symptoms are related to the disease. The scoring of symptoms has influence on the Quality-of-life and survival itself. Symptoms are related to the previous disease, chosen treatment and to the comorbidity associated with a combination of factors. One can evaluate the Quality-f-life before and after surgery through questionnaire QLQ-C30 (global quality, functional scales, grades of symptoms) and STO22 (grade of symptoms and isolate data) associated with functional gradation of Karnofsky and Zubrod. The visual analogical scales as well as the numeric one for the pain before and one month after surgery may be used too. For the questionnaire QLQ-C30 and STO22 the quality of life presents no differences to the pre operative status comparing with the post operative on first and third month. Karnofsky function after surgery are better on the first month and present no differences to the third month and the Zubrod showed no difference when compared to each other. The evaluation of pain showed no difference after surgery and no statistic significance in this item. The gastrectomy on gastric cancer stage III and IV dont worst the quality of life and perhaps may be have on patients with survive more than a month.