Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-02T11:30:16Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 263639 bytes, checksum: c8acf80af86c5f257deabf3570be9112 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-02T11:30:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 263639 bytes, checksum: c8acf80af86c5f257deabf3570be9112 (MD5) Previous issue date: 2004-03-01 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O gênero Capsicum da família Solanaceae é de grande importância econômica, especialmente em regiões tropicais e temperadas, onde os frutos são utilizados na culinária e pela indústria alimentícia. Entretanto, em relação ao padrão de amadurecimento dos frutos, há pouca informação na literatura. Vários estudos mostraram diferentes resultados quanto à ação do etileno no processo de amadurecimento, o que demonstra claramente a variabilidade genética entre os genótipos estudados. Conseqüentemente, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o comportamento do amadurecimento em frutos de C. annuum, C. chinense, C. baccatum e C. frutescens, relacionado à aplicação de etileno exógeno. Os frutos foram colhidos no estágio verde-maduro, tratados com 1000 mg L -1 de ethephon e deixados para amadurecer a 22 ± 2°C e 80 ± 5% de umidade relativa, até amadurecimento completo. A produção e a concentração interna de etileno e CO 2 foram medidas por cromatografia gasosa em frutos verde-maduros, 25%, 50%, 75% e 100% maduros. Foi avaliado também o efeito do tratamento com etileno na degradação da clorofila, síntese de carotenóides e sólidos solúveis totais. Tratamento com etileno aumentou a produção de CO 2 durante todo o amadurecimento em todos os acessos, comparados ao controle, mas foi encontrada variabilidade intra-específica entre os acessos. viiA produção mais alta de CO 2 ocorreu em estágios posteriores de amadurecimento. Tratamento com ethephon foi efetivo no aumento da concentração interna de CO 2 nos acessos de C. frutescens e C. baccatum, tendeu ao declínio. O tratamento com ethephon aumentou a produção de etileno em todos os acessos; entretanto, houve variabilidade intra e interespecífica. Também, o ethephon provocou aumento na concentração interna de etileno nos frutos. Não foi detectada variabilidade genética na degradação de clorofila e na síntese de carotenóides entre os acessos, quando tratados com ethephon. O amadurecimento do fruto foi caracterizado por decréscimo no conteúdo de clorofila e aumento na síntese de carotenóides. Tratamento com ethephon aumentou o conteúdo de sólidos solúveis totais nos acessos BGH 4366 (C. baccatum) e BGH 4708 (C. frutescens). O uso de ethephon foi capaz de acelerar o amadurecimento nos acessos BGH 4179, BGH 6029 e Ca 6. Os frutos estudados nesse experimento possuíam padrão de amadurecimento não-climatérico. / The genus Capsicum from the family Solanaceae has great economical importance, in particular in tropical and temperate regions where the fruits are used in the culinary and by the food industry. However, there is little information in the literature regarding the pattern of ripening of the fruits. Several studies had shown different results concerning the ethylene action in the ripening process, which clearly demonstrates the genetic variability among the studied genotypes. Thus, the present work had the goal of evaluating the behavior of fruit ripening in C. annuum, C. chinense, C. baccatum and C. frutescens, related to the application of exogenous ethylene. The fruits were harvested at mature-green stage, treated with 1000 mg L -1 ethephon and allowed to ripe at 22 ± 2°C and 80 ± 5% relative humidity until complete ripening. The production and fruit cavity of ethylene and CO 2 concentrations were measured by gas chromatography in mature- green, 25%, 50%, 75% and 100% ripen fruits. It was also evaluated the effect of ethylene treatment on chlorophyll degradation, synthesis of carotenoids and total soluble solids. Ethylene treatment increased the production of CO 2 throughout ripening in all accesses compared to control, but intra-specific variability was found among the accesses. The highest CO 2 production occurred at later stages of ripening. Treatment with ethephon was effective in increasing the internal concentration of CO 2 in the accesses of C. frutescens ixand C. baccatum, but went towards a decrease. Ethephon treatment increased the production of ethylene in all accesses; however, intra and inter- specific variability was observed. Also, ethephon increased the internal concentration of ethylene in the fruit. No variability among the accesses was detected for chlorophyll degradation and synthesis of carotenoids when treated with ethephon. Ripening of the fruit was characterized by decrease in chlorophyll content and synthesis of carotenoids. Treatment with ethephon increased the content of soluble solids in the accesses BGH 4366 (C. baccatum) and BGH 4708 (C. frutescens). The use of ethephon was able to hasten the ripening in the accesses BGH 4179, BGH 6029 and Ca 6. The fruits studied in this experiment had non-climacteric pattern of ripening.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / A graviola (Annona muricata L.) à uma fruta bastante utilizada na alimentaÃÃo, pois fornece vitaminas, carboidratos, proteÃnas, lipÃdios, fibras e outras molÃculas para nutriÃÃo humana. Nos Ãltimos anos a graviola (fruto tropical exÃtico) tem apresentado uma posiÃÃo de destaque na economia brasileira, principalmente para Estados do Nordeste como CearÃ, Alagoas, Bahia e Pernambuco. A alta produÃÃo do fruto de graviola no Nordeste se dà principalmente pela floraÃÃo ocorrer durante o ano todo, contudo estima-se que a perda pÃs-colheita chega a 50% da produÃÃo, como ocorre com outros frutos nativos ou exÃticos. Tal perda pÃs-colheita do produto se deve à acelerada taxa de desenvolvimento e senescÃncia do fruto. Apesar de haver alguns estudos sobre graviola, o entendimento bioquÃmico e molecular do processo de amadurecimento à muito limitado tornando-se importante avanÃar nesses conhecimentos a fim de desenvolver estratÃgias para o aumento da vida de prateleira desse fruto. No presente trabalho, buscou-se por um melhor protocolo de extraÃÃo de proteÃnas da polpa de graviola para gerar mapas bidimensionais e identificaÃÃo de possÃveis proteÃnas envolvidas no amadurecimento pÃs-colheita do fruto. Os frutos de graviola no estÃdio prÃ-climatÃrico foram colhidos e deixados amadurecer a temperatura de 25 C por atà 8 dias. Amostras da polpa do fruto foram coletadas nos tempos 0, 2, 4, 6 e 8 dias pÃs-colheita e usadas para a extraÃÃo de proteÃnas e estabelecimento de gÃis bidimensionais (2D). Dois diferentes mÃtodos de extraÃÃo de proteÃnas foram testados e o que apresentou melhor rendimento e spots com boa resoluÃÃo em gÃis bidimensionais foi escolhido para anÃlise de proteÃnas. Os gÃis bidimensionais foram analisados atravÃs do programa Image Master para a identificaÃÃo de spots especÃficos e ou diferenciais, bem como determinaÃÃo de seus pontos isoelÃtricos (pIs) e de respectivas massas moleculares (MM). Os dados de pI e MM foram usados para rastrear proteÃnas homÃlogas em angiospermas atravÃs de buscas nos bancos de dados UniProtKB/Swiss-Prot e UniProtKB/TrEMBL dispondo de mais de 16 milhÃes de informaÃÃes depositadas. GÃis 2D inicialmente produzidos na faixa de pH de 3 a 10 revelaram proteÃnas concentradas na regiÃo de pHs mais Ãcidos. Tal fato determinou que a faixa de pH de 4 a 7 fosse usada para melhor separaÃÃo dos spots em anÃlises seguintes. ApÃs anÃlise dos gÃis bidimensionais 21 spots especÃficos e 6 spots diferenciais foram selecionados. As anÃlises em bancos de dados possibilitaram inferir sobre 26 proteÃnas. Entre essas proteÃnas, vÃrias estavam relacionadas com o amadurecimento de frutos em outras espÃcies tais como: proteÃnas com expressÃo regulada pelo etileno, proteÃnas relacionadas com o estabelecimento das caracterÃsticas organolÃpticas do fruto e proteÃnas do metabolismo energÃtico. Com relaÃÃo ao metabolismo enegÃtico proteÃnas da via glicolÃtica, ciclo de Krebs e CTE foram inferidas. Estudos prÃvios sobre a participaÃÃo da via alternativa de elÃtrons no amadurecimento climatÃrico da graviola foram reforÃados. Entretanto, nesse trabalho foi observado que alÃm da oxidase alternativa (AOX), outros componentes podem participar da regulaÃÃo dessa via. Os resultados obtidos revelam possÃveis proteÃnas alvo para o desenvolvimento de estratÃgias bioquÃmicas e ou moleculares no controle do amadurecimento pÃs-colheita da graviola. / The soursop (Annona muricata L.) fruit is widely used in food, because it provides vitamins, carbohydrates, proteins, lipids and other molecules for human nutrition. In recent years, soursop (exotic tropical fruit) has had a prominent position in the Brazilian economy, especially for northeastern states such as, Ceara, Alagoas, Bahia and Pernambuco. The high production of soursop fruit is mainly in the Northeast by flowering occurs throughout the year, however it is estimated that the post-harvest losses reach 50% of production, as with other native or exotic fruits. Such post-harvest losses of the product are due to the accelerated rate of development and senescence of the fruit. Although some studies on Graviola, biochemical and molecular understanding of the maturation process is very limited making it important to move forward on this knowledge to develop strategies for increasing the shelf life of fruit. In this study, we sought a better protocol for protein extraction from soursop pulp to generate two-dimensional maps and identification of potential proteins involved in post-harvest ripening of the fruit. The soursop fruit in pre-climacteric stage were collected and allowed to ripen at 25  C for up to 8 days. Samples of the fruit pulp were collected at 0, 2, 4, 6 and 8 days post-harvest and used for protein extraction and establishment of two-dimensional gels (2D). Two different protein extraction methods were tested and the best one concerning performance and spots with good resolution in two-dimensional gel was chosen for protein analysis. The two-dimensional gels were analyzed using the Image Master for the identification of specific or differential spots, as well as determination of their isoelectric points (IPs) and their molecular masses (MM). The pI and MM data were used to track homologous proteins in angiosperms through searches on databases UniProtKB / Swiss-Prot and UniProtKB / Tremble featuring more than 16 million deposited information. 2D gels initially produced in the pH range 3 to 10 revealed the protein concentrated in the more acidic pHs. This fact determined the pH range 4-7 was used for better separation of spots in the following analysis. After two-dimensional gel analysis of 21 specific spots and 6 differential spots were selected. The analysis in databases allowed inferences about 26 proteins. Among these proteins, several were related to fruit ripening in other species such as proteins with expression regulated by ethylene, protein related to the establishment of the organoleptic characteristics of the fruit and proteins of energy metabolism. With respect to the metabolism of proteins glycolytic pathway, Krebs cycle and ETC were inferred. Previous studies on the participation of the alternative pathway of electrons in the ripening of climacteric graviola have been strengthened. However, this study also showed that in addition to the alternative oxidase (AOX), other components may participate in the regulation of this pathway. The results reveal possible protein targets for the development of strategies and biochemical and molecular control of postharvest ripening of soursop.

Fruit ripening is a highly coordinated process involving numerous structural, biochemical and physiological changes, many of which are influenced by both endogenous and environmental stimuli. Light signaling and plant hormones such as ethylene and auxins have been identified as important regulators of tomato fruit ripening. However, it is still not fully understood how light and hormonal signaling cascades interact to control the development and physiology of fleshy fruits. By applying a mutant-based approach, this study investigated the potential interconnection among light, auxin and ethylene signaling cascades during tomato fruit ripening and carotenogenesis. Analysis of ethylene and auxin metabolism and signaling in ripening fruits of the light-hyperresponsive high-pigment 2 (hp2) mutant revealed that the loss of HP2 function promotes the transcription of genes encoding key regulators of fruit ripening and increases ethylene signaling along with the increments in carotenoid synthesis and accumulation typically found in this mutant. Compared to the wild type (WT), significant changes in fruit auxin signaling were also observed in the hp2 mutant, including significantly higher activation of the auxin-responsive promoter DR5, severe down-regulation of all AUXIN/INDOLE-3-ACETIC ACID (Aux/IAA) genes more closely associated with fruit ripening as well as disturbed transcript abundance of genes encoding AUXIN RESPONSE FACTOR (ARF) transcription factors. Evidence of increased tissue responsivity to ethylene and auxins in hp2 ripening fruits is also provided. Moreover, comparing the auxin and ethylene metabolism and signaling in fruits of the phytochrome chromophore-deficient mutant aurea (au) in relation to the WT genotype provided new insights into the phytochrome-hormonal signaling crosstalk regulating the timing of fruit ripening. Compared to the WT, fruits of the au mutant exhibited a delayed-ripening phenotype, which was associated with the late induction of genes encoding master controllers of ripening, delayed ethylene climacteric production as well as coordinated changes in the expression of auxin signaling-related genes. Besides the temporal changes in hormonal signaling associated with ripening, the deficiency in functional phytochromes also seems to repress the cyclization of lycopene, leading to reduced levels of ?-carotene and lutein in the fruit tissues. Although the exact molecular mechanisms behind the altered hormonal responses in tomato fruits triggered by changes in light signaling remain to be further elucidated, the data obtained in this study provide clear evidence that an intricate crosstalk among light, ethylene and auxin signaling may be involved in controlling tomato fruit ripening and carotenogenesis. Therefore, these findings open up a window of opportunity for further improvement in the regulation of ripening-associated processes through the combined manipulation of hormonal and light signaling-related genes / O amadurecimento de frutos é um processo altamente regulado que envolve várias mudanças estruturais, bioquímicas e fisiológicas, muitas das quais são influenciadas tanto por fatores endógenos quanto ambientais. O sinal luminoso, bem como os hormônios vegetais etileno e auxina têm se revelado importantes reguladores do amadurecimento de frutos. Porém, ainda não está totalmente esclarecido como as cascatas de sinalização luminosa e hormonal interagem a fim de controlar o desenvolvimento e a fisiologia dos frutos carnosos. O presente estudo teve como objetivo analisar as interações entre as cascatas de sinalização da luz, do etileno e das auxinas durante o amadurecimento e carotenogênese em frutos de tomateiro por meio do uso de mutantes fotomorfogênicos dessa espécie. As análises do metabolismo e sinalização do etileno e das auxinas em frutos do mutante high-pigment 2 (hp2), o qual apresenta respostas exageradas à luz, revelaram que a perda da função do gene HP2 resultou no aumento dos níveis de transcritos de genes que codificam os reguladores-chaves do processo de amadurecimento bem como um incremento na sinalização do etileno, sendo que essas mudanças estiveram atreladas ao maior acúmulo de carotenoides tipicamente encontrados neste mutante. Comparado ao genótipo selvagem, frutos do mutante hp2 também apresentaram uma elevação considerável na sinalização das auxinas, incluindo incrementos na ativação do promotor DR5, regulação negativa da maioria dos genes AUXIN/INDOLE-3-ACETIC ACID (Aux/IAA) envolvidos no amadurecimento do tomate, bem como alterações na abundância de transcritos dos genes que codificam os fatores de transcrição AUXIN RESPONSE FACTOR (ARF). Indícios obtidos também sugerem uma maior responsividade dos frutos de hp2 aos hormônios etileno e auxinas. Além disso, as análises do metabolismo e a sinalização das auxinas e do etileno realizadas em frutos do mutante aurea (au), deficiente na síntese do cromóforo dos fitocromos, indicaram que a interação entre esses fotorreceptores e fitormônios influencia o início do amadurecimento dos frutos de tomateiro. Os frutos deste mutante, quando comparados ao selvagem, exibiram um atraso no amadurecimento, o qual se mostrou temporalmente relacionado à indução tardia dos genes que controlam esse processo, ao atraso na produção climatérica do etileno, bem como associado a alterações nos níveis de transcritos de genes-chaves relacionados com a sinalização das auxinas. Além das mudanças temporais na sinalização hormonal associadas ao amadurecimento, os dados obtidos também sugerem que a deficiência em fitocromos funcionais reprime a ciclização do licopeno, levando a níveis reduzidos de ?-caroteno e luteína nos tecidos dos frutos. Embora os mecanismos moleculares responsáveis pelas alterações nas respostas hormonais desencadeadas pela luz ainda precisem ser melhor elucidados em frutos de tomateiro, os dados obtidos neste estudo forneceram evidências de que uma complexa interação entre a sinalização luminosa, do etileno e das auxinas estaria envolvida no controle do amadurecimento e carotenogênese nessa espécie. Portanto, estas descobertas trazem consigo oportunidades de melhoria na regulação de eventos relacionados ao processo de amadurecimento por meio da manipulação combinada de genes relacionados à sinalização luminosa e hormonal

A banana tem grande importância econômica, é a fruta mais produzida no mundo, e o Brasil é o segundo maior produtor. É uma fruta altamente perecível, de rápida maturação, sensível a choques mecânicos, suscetível a descoloração, ao amolecimento excessivo e a patógenos na fase pós-colheita. As mudanças ocorridas durante o amadurecimento levam a uma vida de prateleira muito reduzida e são dependentes da expressão de diversas proteínas. Portanto, a identificação de proteínas associadas com essas modificações pode contribuir para a melhor compreensão da regulação do amadurecimento e auxiliar no aprimoramento das estratégias de conservação pós-colheita e melhoria da qualidade dessa fruta. Através da análise proteômica diferencial podem ser identificadas proteínas com variação de abundância durante o amadurecimento e que estejam envolvidas nesse processo. O presente trabalho teve por objetivo comparar os mapas protéicos de polpa de banana (Musa acuminata cv. nanicão) nas fases pré-climatérica e climatérica, e a identificar spots de proteínas que diferem em abundância nesses dois estádios, através da eletroforese bidimensional acoplada à espectrometria de massas. Neste trabalho foram utilizadas três amostragens distintas de frutas, de modo a minimizar o efeito da variabilidade biológica, não relacionada com o amadurecimento. Para a obtenção dos perfis protéicos foi utilizada a metodologia 2D-DIGE. Os géis obtidos foram analisados com o software PDQuest e para a análise estatística foi utilizado o teste T. Chegou-se a uma lista de 50 spots que foram recortados dos géis, sendo as proteínas digeridas e seqüenciadas por espectrometria de massas. Destas proteínas, 26 tiveram a provável identidade apontada pela comparação com o banco de dados MSDB, empregando o software Mascot. A maioria das proteínas identificadas apresenta provável função durante o amadurecimento da banana e podem estar relacionadas com processos bioquímicos relacionados com a qualidade da fruta. / Banana has great economic importance, is the most widely produced fruit in the world, and Brazil is the second largest producer. It is a highly perishable fruit, ripening fast, sensitive to mechanical shock, susceptible to discoloration, excessive softening and pathogens in the post-harvest. The changes during ripening leads to a very limited shelf life and are dependent on the expression of several proteins. Therefore, the identification of proteins associated with these modifications may contribute to better understanding the regulation of maturation and help to improve strategies for post-harvest preservation and improvement of this fruit. Through differential proteomics analysis could be identified proteins with a range of abundance during ripening and that could be involved in this process. This study aimed to compare the protein maps of banana pulp (Musa acuminata cv. nanicão) in pre-climacteric and climacteric phases, and identify protein spots that differ in abundance in these two stages by two-dimensional electrophoresis coupled to mass spectrometry. In this study we used three different fruits samples, to minimize the effect of biological variability, non-ripening related. To obtain the protein profiles was used 2D-DIGE methodology. The gels were analyzed with the PDQuest software and Student´s t-Test was used to statistical analysis. A list of 50 spots differential acumulated were detected and then were extracted of gels, protein digested and sequenced by mass spectrometry. Of these proteins, 26 had the probable identity indicated by comparison with the MSDB database, using Mascot software. Most of the identified proteins has probable function during banana ripening and may be related to biochemical processes related to fruit quality.

OLIVEIRA, Geórgia Mesquita de. Prospecção de proteínas envolvidas no amadurecimento pós-colheita da graviola (Annona muricata L.), 2011. 83 f. : Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências, Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Fortaleza-CE, 2011. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-05-20T12:45:41Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_gmoliveira.pdf: 22870177 bytes, checksum: 523d913e6270072f06047beb7e1591f1 (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-05-20T13:10:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_gmoliveira.pdf: 22870177 bytes, checksum: 523d913e6270072f06047beb7e1591f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-20T13:10:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_gmoliveira.pdf: 22870177 bytes, checksum: 523d913e6270072f06047beb7e1591f1 (MD5) Previous issue date: 2011 / The soursop (Annona muricata L.) fruit is widely used in food, because it provides vitamins, carbohydrates, proteins, lipids and other molecules for human nutrition. In recent years, soursop (exotic tropical fruit) has had a prominent position in the Brazilian economy, especially for northeastern states such as, Ceara, Alagoas, Bahia and Pernambuco. The high production of soursop fruit is mainly in the Northeast by flowering occurs throughout the year, however it is estimated that the post-harvest losses reach 50% of production, as with other native or exotic fruits. Such post-harvest losses of the product are due to the accelerated rate of development and senescence of the fruit. Although some studies on Graviola, biochemical and molecular understanding of the maturation process is very limited making it important to move forward on this knowledge to develop strategies for increasing the shelf life of fruit. In this study, we sought a better protocol for protein extraction from soursop pulp to generate two-dimensional maps and identification of potential proteins involved in post-harvest ripening of the fruit. The soursop fruit in pre-climacteric stage were collected and allowed to ripen at 25 ° C for up to 8 days. Samples of the fruit pulp were collected at 0, 2, 4, 6 and 8 days post-harvest and used for protein extraction and establishment of two-dimensional gels (2D). Two different protein extraction methods were tested and the best one concerning performance and spots with good resolution in two-dimensional gel was chosen for protein analysis. The two-dimensional gels were analyzed using the Image Master for the identification of specific or differential spots, as well as determination of their isoelectric points (IPs) and their molecular masses (MM). The pI and MM data were used to track homologous proteins in angiosperms through searches on databases UniProtKB / Swiss-Prot and UniProtKB / Tremble featuring more than 16 million deposited information. 2D gels initially produced in the pH range 3 to 10 revealed the protein concentrated in the more acidic pHs. This fact determined the pH range 4-7 was used for better separation of spots in the following analysis. After two-dimensional gel analysis of 21 specific spots and 6 differential spots were selected. The analysis in databases allowed inferences about 26 proteins. Among these proteins, several were related to fruit ripening in other species such as proteins with expression regulated by ethylene, protein related to the establishment of the organoleptic characteristics of the fruit and proteins of energy metabolism. With respect to the metabolism of proteins glycolytic pathway, Krebs cycle and ETC were inferred. Previous studies on the participation of the alternative pathway of electrons in the ripening of climacteric graviola have been strengthened. However, this study also showed that in addition to the alternative oxidase (AOX), other components may participate in the regulation of this pathway. The results reveal possible protein targets for the development of strategies and biochemical and molecular control of postharvest ripening of soursop. / A graviola (Annona muricata L.) é uma fruta bastante utilizada na alimentação, pois fornece vitaminas, carboidratos, proteínas, lipídios, fibras e outras moléculas para nutrição humana. Nos últimos anos a graviola (fruto tropical exótico) tem apresentado uma posição de destaque na economia brasileira, principalmente para Estados do Nordeste como Ceará, Alagoas, Bahia e Pernambuco. A alta produção do fruto de graviola no Nordeste se dá principalmente pela floração ocorrer durante o ano todo, contudo estima-se que a perda pós-colheita chega a 50% da produção, como ocorre com outros frutos nativos ou exóticos. Tal perda pós-colheita do produto se deve à acelerada taxa de desenvolvimento e senescência do fruto. Apesar de haver alguns estudos sobre graviola, o entendimento bioquímico e molecular do processo de amadurecimento é muito limitado tornando-se importante avançar nesses conhecimentos a fim de desenvolver estratégias para o aumento da vida de prateleira desse fruto. No presente trabalho, buscou-se por um melhor protocolo de extração de proteínas da polpa de graviola para gerar mapas bidimensionais e identificação de possíveis proteínas envolvidas no amadurecimento pós-colheita do fruto. Os frutos de graviola no estádio pré-climatérico foram colhidos e deixados amadurecer a temperatura de 25° C por até 8 dias. Amostras da polpa do fruto foram coletadas nos tempos 0, 2, 4, 6 e 8 dias pós-colheita e usadas para a extração de proteínas e estabelecimento de géis bidimensionais (2D). Dois diferentes métodos de extração de proteínas foram testados e o que apresentou melhor rendimento e spots com boa resolução em géis bidimensionais foi escolhido para análise de proteínas. Os géis bidimensionais foram analisados através do programa Image Master para a identificação de spots específicos e ou diferenciais, bem como determinação de seus pontos isoelétricos (pIs) e de respectivas massas moleculares (MM). Os dados de pI e MM foram usados para rastrear proteínas homólogas em angiospermas através de buscas nos bancos de dados UniProtKB/Swiss-Prot e UniProtKB/TrEMBL dispondo de mais de 16 milhões de informações depositadas. Géis 2D inicialmente produzidos na faixa de pH de 3 a 10 revelaram proteínas concentradas na região de pHs mais ácidos. Tal fato determinou que a faixa de pH de 4 a 7 fosse usada para melhor separação dos spots em análises seguintes. Após análise dos géis bidimensionais 21 spots específicos e 6 spots diferenciais foram selecionados. As análises em bancos de dados possibilitaram inferir sobre 26 proteínas. Entre essas proteínas, várias estavam relacionadas com o amadurecimento de frutos em outras espécies tais como: proteínas com expressão regulada pelo etileno, proteínas relacionadas com o estabelecimento das características organolépticas do fruto e proteínas do metabolismo energético. Com relação ao metabolismo enegético proteínas da via glicolítica, ciclo de Krebs e CTE foram inferidas. Estudos prévios sobre a participação da via alternativa de elétrons no amadurecimento climatérico da graviola foram reforçados. Entretanto, nesse trabalho foi observado que além da oxidase alternativa (AOX), outros componentes podem participar da regulação dessa via. Os resultados obtidos revelam possíveis proteínas alvo para o desenvolvimento de estratégias bioquímicas e ou moleculares no controle do amadurecimento pós-colheita da graviola.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-07-12T12:02:47Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 9092047 bytes, checksum: 974ae7db880ee66c1f42778fd4204373 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-12T12:02:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 9092047 bytes, checksum: 974ae7db880ee66c1f42778fd4204373 (MD5) Previous issue date: 2018-04-16 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O amadurecimento de Ostwald é um processo de crescimento controlado por difusão onde partículas maiores crescem em detrimento da diminuição, e eventualmente do desaparecimento, de partículas menores. Nesse processo ocorre o aumento do raio médio e a diminuição do número total de partículas. A descrição teórica desse fenômeno é dada pela teoria LSW, que descreve o crescimento de partículas em soluções sólidas supersaturadas. Há um grande número de trabalhos teóricos e experimentais sobre o amadurecimento de Ostwald, todavia existe uma carência de trabalhos experimentais com bolhas de gás em escala macroscópica (10-100μm). Com isso, fica evidente a necessidade de realizar um estudo experimental preciso da atuação do amadurecimento de Ostwald em bolhas de gás em líquido. Os resultados foram obtidos a partir do processamento de imagens geradas por videomicroscopia óptica. É apresentado os resultados da evolução temporal do raio médio das bolhas R(t), do número de bolhas N (t), da fração volumétrica ocupado pelas bolhas φ(t) e das distribuições de tamanhos f (R, t) para três frentes de experimento com bolhas de gás em um fluido: fluido em repouso, fluido sob fluxo macroscópico e fluido em repouso com adição de surfactante. Confrontando os resultados com as previsões teóricas verificou-se que o raio médio pode, em algumas condições, se comportar de acordo com a lei de crescimento segundo a teoria LSW (R ∼ t1/3 ), mas que na maioria dos casos a evolução é a mais lenta do que o previsto. O número de bolhas N(t) decai mais devagar do que o previsto pela teoria (N (t) ∼ t-¹). Há uma discussão sobre o sistema estar em um regime transiente, migrando para o regime de validade dos modelos teóricos, e sobre a teoria LSW não ser suficiente para descrever um sistema real de bolhas de gás. Todas as etapas foram realizadas no Laboratório de Microfluídica e Fluidos Complexos, coordenado pelo professor Alvaro Vianna N. C. Teixeira, utilizando-se dos recursos do mesmo e do Departamento de Física da UFV, como programas apropriado para processamento de imagens, microscópio óptico, câmera integrada ao computador, mesa de deslocamento dentre outros. / Ostwald ripening is a diffusion-controlled growth process where larger particles grow at the expense of the shrinking, and eventual disappearance, of smaller particles. In this process the mean radius increases and the total number of particles decreases. The theoretical description of this phenomenon is given by the LSW theory, which describes the growth of particles in supersaturated solid solutions. There is a large number of theoretical and experimental works about the of Ostwald ripening, however there is a lack of experimental works with gas bubbles on a macroscopic scale (10-100μm). Thus, it is evident the need to carry out a precise experimental study of the performance of Ostwald ripening of gas bubbles in liquid. The results were obtained by image processing generated by optical videomicroscopy. It is shown the results of the temporal ̄ evolution of the average bubble radius R(t), the number of bubbles N (t), the volume fraction occupied by the bubbles φ(t) and the size distributions f (R, t) for three types of experiment with gas bubbles in a fluid: resting fluid, fluid under macroscopic flow and resting fluid with addition of surfactant. Comparing the results with the theoretical predictions, it has been found that the average radius can, under some conditions, behave according to the growth law predicted ̄ ∼ t 1/3 ), but that in most cases the evolution is slower than expected. by the LSW theory ( R The number of bubbles N (t) decreases more slowly than predicted by the theory (N (t) ∼ t −1 ). There is a discussion about the system being in a transient regime, migrating to the validity regime of the theoretical models, and about the LSW theory not being enough to describe a real system of gas bubbles. All steps were carried out in the Microfluidics and Complex Fluids Laboratory, led by professor Alvaro Vianna N.C. Teixeira, using either the resources or those of and the Department of Physics at UFV, as appropriate softwares for image processing, optical microscope, integrated camera to computer, displacement table etc.

A banana tem grande importância econômica, é a fruta mais produzida no mundo, e o Brasil é o segundo maior produtor. É uma fruta altamente perecível, de rápida maturação, sensível a choques mecânicos, suscetível a descoloração, ao amolecimento excessivo e a patógenos na fase pós-colheita. As mudanças ocorridas durante o amadurecimento levam a uma vida de prateleira muito reduzida e são dependentes da expressão de diversas proteínas. Portanto, a identificação de proteínas associadas com essas modificações pode contribuir para a melhor compreensão da regulação do amadurecimento e auxiliar no aprimoramento das estratégias de conservação pós-colheita e melhoria da qualidade dessa fruta. Através da análise proteômica diferencial podem ser identificadas proteínas com variação de abundância durante o amadurecimento e que estejam envolvidas nesse processo. O presente trabalho teve por objetivo comparar os mapas protéicos de polpa de banana (Musa acuminata cv. nanicão) nas fases pré-climatérica e climatérica, e a identificar spots de proteínas que diferem em abundância nesses dois estádios, através da eletroforese bidimensional acoplada à espectrometria de massas. Neste trabalho foram utilizadas três amostragens distintas de frutas, de modo a minimizar o efeito da variabilidade biológica, não relacionada com o amadurecimento. Para a obtenção dos perfis protéicos foi utilizada a metodologia 2D-DIGE. Os géis obtidos foram analisados com o software PDQuest e para a análise estatística foi utilizado o teste T. Chegou-se a uma lista de 50 spots que foram recortados dos géis, sendo as proteínas digeridas e seqüenciadas por espectrometria de massas. Destas proteínas, 26 tiveram a provável identidade apontada pela comparação com o banco de dados MSDB, empregando o software Mascot. A maioria das proteínas identificadas apresenta provável função durante o amadurecimento da banana e podem estar relacionadas com processos bioquímicos relacionados com a qualidade da fruta. / Banana has great economic importance, is the most widely produced fruit in the world, and Brazil is the second largest producer. It is a highly perishable fruit, ripening fast, sensitive to mechanical shock, susceptible to discoloration, excessive softening and pathogens in the post-harvest. The changes during ripening leads to a very limited shelf life and are dependent on the expression of several proteins. Therefore, the identification of proteins associated with these modifications may contribute to better understanding the regulation of maturation and help to improve strategies for post-harvest preservation and improvement of this fruit. Through differential proteomics analysis could be identified proteins with a range of abundance during ripening and that could be involved in this process. This study aimed to compare the protein maps of banana pulp (Musa acuminata cv. nanicão) in pre-climacteric and climacteric phases, and identify protein spots that differ in abundance in these two stages by two-dimensional electrophoresis coupled to mass spectrometry. In this study we used three different fruits samples, to minimize the effect of biological variability, non-ripening related. To obtain the protein profiles was used 2D-DIGE methodology. The gels were analyzed with the PDQuest software and Student´s t-Test was used to statistical analysis. A list of 50 spots differential acumulated were detected and then were extracted of gels, protein digested and sequenced by mass spectrometry. Of these proteins, 26 had the probable identity indicated by comparison with the MSDB database, using Mascot software. Most of the identified proteins has probable function during banana ripening and may be related to biochemical processes related to fruit quality.

O trabalho objetiva articular os possíveis sentidos expressos em letras de rap do cenário paulistano e o processo de amadurecimento emocional, a partir da teoria do pediatra e psicanalista Donald Woods Winnicott. Circunscrevemos a reflexão ao contexto da população juvenil das comunidades periféricas, onde o rap está presente fortemente como gênero musical e, mais do que isso, como instrumento simbólico de expressão e representação de experiências e demandas da comunidade. Segundo essa perspectiva, foram selecionados excertos musicais de rap, alocados em três categorias de análise: a) Rap e os Processos Integrativos; b) Rap e a Socialização Juvenil; e c) A Criatividade no Rap. Comumente, as mensagens manifestadas nas canções de rap narram a realidade vivida pelos moradores das comunidades periféricas dos médios e grandes centros urbanos. São relatos críticos que denunciam os problemas das comunidades, a violência, o tráfico de drogas e as desigualdades político-sociais. Diante desse contexto, os rappers não apenas são os delatores de adversidades, mas assumem também o papel de orientadores da comunidade e da juventude desse território, no que diz respeito ao valor da cultura local e a importância da tomada de atitude para a mudança de vida. Para além dessa compreensão, as letras de rap nos proporcionam também um outro olhar sobre tais jovens, sobretudo em relação a aspectos do processo de amadurecimento emocional, segundo a concepção winnicottiana. Verificamos, com efeito, nos excertos musicais que - mesmo diante de conflitos e vivências difíceis, favorecendo um possível futuro atrelado à criminalidade - outras alternativas também podem ser lançadas a tal juventude, por meio da imersão no movimento do rap. As músicas analisadas retrataram possibilidades de se fazer uso de diversos recursos psíquicos, a fim de colocar as angústias sob domínio egoico, o que conduziria o indivíduo a uma posição ativa e transformadora de si. Com isso, tem-se a possibilidade de criar e reescrever a própria existência, acreditando em sua capacidade para desenvolver algo que ofereça um sentido à vida. O rap pode atuar, assim, como facilitador de conquistas em relação ao amadurecimento e à saúde emocional para a juventude periférica. Além de contribuir ao fortalecimento dos aspectos egoicos, ao desenvolvimento da socialização, o diálogo com os elementos culturais, assim como na sustentação da experiência de uma vida criativa e autêntica / The work aims to articulate the possible senses expressed in rap lyrics in the scenario of São Paulo and the emotional maturing process, through the theory of the pediatrician and psychoanalyst Donald Woods Winnicott. We circumscribe the reflection to the context of the peripheral community of youth population, where rap is strongly present as a musical genre and more than that, as a symbolic instrument of expression and representation of experiences and of community demands. According to this perspective, musical excerpts of rap were selected, placed in three categories of analysis: a) Rap and the Integrative Processes; b) Rap and the youth socialization; and c) The Creativity in Rap. Commonly, the messages manifested in the rap songs narrate the reality lived by the residents of the peripheral community in medium and big urban centers. These are critical reports that denounce the community problems, the violence, the drug trafficking and the public social inequalities. In light of this context, the rappers are not only the whistleblowers of adversities, but they also assume the role as mentors of this community and of the youth people of this territory, concerning the local cultural value and the importance for taking action to change the life. Beyond the understanding, the rap lyrics provide us another perspective on these young people, particularly concerning this aspects of the emotional maturing, according to the winnicottian conception. We verified, in fact, on the music excerpts that even in the face of conflicts and hard experiences, favouring a possible future tied to delinquency other alternatives can also be launched to these youth people, through this immersion on the rap movement. The analyzed songs described the possibilities to use the various psychic resources, in order to place the anxieties under the egoic control, what would conduct the individual to an active and transformative position of themselves. With this, theres the possibility to create and rewrite the own existence, believing in their self-ability to develop something that offers a meaning to life. The rap can act, this way, as an enabler of achievements in relation to maturing and the emotional health to the peripheral youth. As well as contributing to the strengthening of egoic aspects, to the socialization development, the dialogue with cultural elements, as well as the support of an authentic and creative life experience

A banana é considerada um bom modelo de estudo para a transformação amido-sacarose, já que acumula um teor alto de amido durante o desenvolvimento, que é degradado durante o amadurecimento. Já foram detectadas em polpa de banana atividade e proteína relativa a várias enzimas supostamente envolvidas no processo de degradação do amido. Entre elas, a α-amilase, a β-amilase, a amido fosforilase e as glucano-água-diquinases (GWD). Estas enzimas estão envolvidas em dois processos distintos de degradação de amido em plantas: o dependente da ação inicial da α-amilase e o dependente da fosforilação do grânulo pela GWD e PWD e posterior ação da β-amilase. A dificuldade do estabelecimento da participação efetiva de cada enzima no processo de degradação do amido está associada a muitos fatores, entre eles a não-correlação entre atividade e real envolvimento em um processo, e a acessibilidade da enzima ao seu substrato. Aliado ao estudo da morfologia do grânulo de amido e suas modificações sofridas durante o processo de degradação que ocorre durante o amadurecimento do fruto, estudos in vitro que simulem a ação da enzima sobre o seu substrato poderiam ser mais efetivos no estabelecimento da real ação de dada enzima sobre o suposto substrato. Tentativas no sentido de obter as proteínas relativa à degradação não foram bem sucedidas. Assim, os ensaios de grânulos de amido isolados versus enzimas foram feitos com α-amilase e β-amilase comerciais. O grau de fosforilação da amilopectina nas posições Glic-6 e Glic-3 foi determinado, condição necessária para o início da degradação do grânulo pela β-amilase. Os resultados mostraram que os grânulos de amido isolados de bananas recém colhidas, ou verdes, já estão fosforilados e as enzimas responsáveis por esta fosforilação estão associadas aos grânulos. Após 72 h de incubação dos grânulos de amido com as enzimas hidrolítica, os grânulos foram separados do tampão contendo as enzimas e os produtos de hidrólise. Os sobrenadantes foram analisados por cromatografia líquida acoplada a detector amperométrico e os grânulos por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e microscopia de força atômica (MFA). Os resultados mostraram que a α-amilase hidrolisa preferencialmente regiões amorfas dos grânulos, com predominância de amilose, expondo as regiões mais cristalinas dos anéis de crescimento, enquanto que a β-amilase parece atuar preferencialmente nas regiões cristalinas dos grânulos, degradando os bloquetes, que são formados por amilopectina. Pode-se concluir que ambas as enzimas parecem ser importantes no processo de degradação do amido da banana, com diferentes especificidades. / Banana is considered a good model to study the starch-sucrose metabolism, since it accumulates a high starch content during development, which is degraded during fruit ripening. It have been detected in banana pulp some proteins and activities of several enzymes supposedly involved in starch degradation process. Among them, α-amylase, β-amylase, starch phosphorylase and glucan-water-diquinases (GWD). These enzymes are involved in two separate processes of starch degradation in plants: the initial action of α-amylase dependent, and the starch granule phosphorylation by GWD and PWD enzymes and subsequent action of β-amylase. The difficulty of establishing the effective participation of each enzyme in the starch degradation process is associated with many factors, including the lack of correlation between real activity and involvement in the process, and accessibility of the enzyme to its substrate. Allied to study the morphology of the starch granule and its modifications suffered during the process of degradation, which occurs during the fruit ripening, in vitro studies that simulate the action of the enzyme on its substrate could be more effective in establishing the real action of a given enzyme on the argued substrate. However, attempts to obtain the proteins related to the degradation process were unsuccessful. Thus, assays of isolated starch granules versus enzymes were made with commercial α-amylase and β-amylase enzymes. The degree of phosphorylation of amylopectin in the Gluc-6 and Gluc-3 positions was determined, a necessary condition for the start of degradation by β-amylase enzyme. The results showed that the starch granules isolated from freshly harvested bananas, or green, are already phosphorylated and the enzymes responsible for this phosphorylation is associated with the starch granules surface. After 72 h incubation of the starch granules with the hydrolytic enzymes, the granules were separated from the buffer containing the enzymes and the hydrolysis products. The supernatants were analyzed by liquid chromatography coupled with amperometric detector and the granules were visualized by scanning electron microscopy (SEM) and atomic force microscopy (AFM). The results showed that the α-amylase preferentially hydrolyzes amorphous regions of the granule, especially amylose, exposing more crystalline regions of the growth rings, whereas β-amylase appears to act preferentially on crystalline regions of the granule, degrading blocklets that consist of amylopectin. It can be concluded that both enzymes appear to be important in the banana starch degradation process, with different specificities.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:37:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FELIPE AUGUSTO RIBEIRO PIRES.pdf: 491123 bytes, checksum: 3e37f0829778c0b0a73b8bd0fc893f3f (MD5) Previous issue date: 2010-10-29 / Winnicott s creativity concept is fundamental in his theory and original within psychoanalysis. In this work it s been studied under the maturational process's point of view. A comprehension of creativity s participation in each stage of individual development was chased. Creativity is to Winnicott an innate human potential. The author believes that since intra-uterine stage psyche has its begin on a creative way on what he calls imaginative elaboration . On the firsts relationships with the mother the experience of primary creativity occurs with the omnipotent illusion of the baby of creating what he gets in contact with. Starting from this the process of constitution of the self can initiate, which is only possible through creative experiences. In the following phases and throughout life creative existence is essential and only with it is possible to have pleasure and sense meaning in what you do. Creativity is present on playing, arts, religion and cultural activities in general. It s being possible to conclude that according to winnicottian theory creative living is necessary so there is health, deviations on maturational process resulting in creative deficiency has as consequence a sick personality. To Winnicott creativity is prior to experience and the personal nucleus from where it comes remains forever unaltered allowing the maintenance of the feeling of creating the world throughout life. We think it s important to attempt to social valorization of utility and productivity that opposes to creative experience whose end is in itself / O conceito de criatividade de Winnicott é fundamental em sua teoria e original dentro da psicanálise. Neste trabalho ele foi estudado sob o ponto de vista do amadurecimento pessoal. Buscou-se uma compreensão acerca da participação da criatividade em cada etapa do desenvolvimento do indivíduo. Ela é, para Winnicott, um potencial humano inato. O autor acredita que, desde a fase intra-uterina, a psique tem seu início de forma criativa no que ele chama de elaboração imaginativa . Nos primeiros relacionamentos com a mãe ocorre a experiência da criatividade primária com a ilusão onipotente do bebê de estar criando aquilo com o que entra em contato. A partir disto pode se iniciar o processo de constituição do simesmo, que só é possível por meio de experiências criativas. Nas etapas seguintes e por toda a vida a existência criativa é essencial e somente com ela pode-se ter prazer e perceber sentido no que se faz. A criatividade está presente no brincar, nas artes, religião e atividades culturais em geral. Pôde-se concluir que, de acordo com a teoria winnicottiana, o viver criativo é necessário para que haja saúde, desvios no amadurecimento resultantes na deficiência criativa têm como consequência uma personalidade doente. Para Winnicott a criatividade é anterior à experiência e o núcleo pessoal de onde ela provém permanece para sempre inalterado permitindo a manutenção do sentimento de criar o mundo ao longo da vida. Pensamos ser importante atentar à valorização social da utilidade e produtividade que se opõe à experiência criativa cujo fim está em si mesma