SOUZA, D. P. Proteínas inibidoras de fitopatógenos em fluidos laticíferos: atividade e mecanismo de ação. 2010. 82 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2010. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-11-27T19:51:27Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_dpsouza.pdf: 1334612 bytes, checksum: 821c6e352d0748426181f7445a3c5d3d (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-02-27T20:20:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_dpsouza.pdf: 1334612 bytes, checksum: 821c6e352d0748426181f7445a3c5d3d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-27T20:20:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_dpsouza.pdf: 1334612 bytes, checksum: 821c6e352d0748426181f7445a3c5d3d (MD5) Previous issue date: 2010 / Canal systems containing secretions, such as latex, are widely disseminated in the plant kingdom. These fluids are chemically complex and exhibit intense metabolism. Despite their origin, latex is the cytoplasm of specialized cells growing intrusively into organized tissues and organs, forming an interconnected network allowing latex exudation immediately after tissue damage. Insecticidal effects of latex proteins have been described, however minor studies were devoted to investigate antifungal activities in latex. In this study proteins extracted from latex of Calotropis procera (Ait.) R.Br (PLCp), Plumeria rubra L.(PLPr), Carica candamarcensis Hook F.(P1 G10), Cryptostegia grandiflora (PLCg), and Euphorbia tirucalli L. (PLEt) were tested for antifungal activity against six phytopathogens (Fusarium solani, F. oxysporium, Aspergilus niger, Rhizoctonia solani, Neurospora sp. and Colletrotricum gloerosporioides). PLCp, PLCg and P1G10 exhibited antifungal activity and PLPr and PLEt were not efetive. Inhibitory activity of the protein fractions correlated with the cysteine-type proteolytic activity found in these fractions. The endogenous proteolytic activity and inhibitory activity on fungal growth were both increased when samples were first activated with DTT, a cysteine proteinase activator. Conversely, pre-treatment of samples with iodoacetamide, an inhibitor of these proteases rendered all samples deficient of both, proteolytic and antifungal activities. Antifungal of activity of cysteine proteinases of latex origin was also confirmed when papain, obtained from latex of Caryca papaya was tested while purified trypsin and chemotrysin, two serine-type proteases were not antifungal. A cysteine proteinase was thus, purified form PLCg by ion exchange chromatography on a Mono-S Sepharose matrix monitored by a FPLC system. The protein, named Cg24-I exhibited molecular mass of 26.118 KDa determined by MALDI spectrometry; maximum of proteolysis at pH 8.0 and inhibited by iodoacetamide and E-64 when assayed with azocazein or BANA as substrates. Cg24-I inhibited germination of F. solani and altered membrane permeability of spores at a minimum concentration of 90 ng/ml. Results present here suggest that cysteine proteinases of laticifer fluids are proteins with antifungal activity capable of damaging spore structure and inhibiting hyphae growth. Reports of antifungal activity of latex proteases are still scarce in literature and this work appears as an important contribution to this field. Furthermore, this work gives important evidence for the multiple defensive role of latex in plants. / Um relevante número de espécies vegetais é descrito como plantas produtoras de um fluido leitoso comumente denominado de látex. Nestas espécies, o látex é sintetizado e armazenado sob pressão em um sistema de canais formados por células altamente especializadas denominadas de laticíferas, em cujos citoplasmas estão presentes todas as estruturas eucariontes em meio à água, borracha e inúmeras moléculas, muitas das quais específicas deste conteúdo. Muitos estudos têm sugerido que moléculas produzidas nestes fluidos participam da defesa vegetal. Neste trabalho, o látex de 5 espécies foi coletado e processado em laboratório para obtenção de suas frações protéicas e estas foram avaliadas quanto a atividade sobre fungos fitopatogênicos através de ensaios de inibição da germinação de esporos e crescimento de hifas. Proteínas do látex de C. procera (PLCp), Cryptostegia grandiflora (PLCg) e Carica candamarcensis (P1 G10) apresentaram atividade antifúngica enquanto que Plumeria rubra (PLPr) e Euphorbia tirucalli (PLEt) não apresentaram atividade sobre qualquer dos fungos avaliados (Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Rhizoctonia solani, Neurospora sp. e Aspergillus niger). A atividade inibitória das frações protéicas se correlacionou diretamente com a presença de atividade proteolítica do tipo cisteínica presente nas amostras de PLCp, PLCg e P1G10. A atividade antifúngica foi aumentada na presença de DTT, um ativador destas proteases e foi diminuída ou eliminada quanto às amostras foram pré-tratadas com iodoacetamida (IAA), um inibidor específico de proteases cisteínicas. Além disso, a atividade antifúngica foi observada quando papaína, uma protease cisteínica purificada do látex de Carica papaya foi avaliada, mas tripsina e quimotripsina, duas proteases serínicas não apresentaram atividade. Através de cromatografia em coluna de Mono-S Sepharose acoplada ao sistema de FPLC, uma protease cisteínica foi isolada de PLCg. A proteína purificada (Cg24-I) apresentou massa molecular de 24,118 KDa. A Cg24-I apresentou atividade proteolítica máxima em pH 8,0 e foi inibida por IAA e E-64, utilizando azocaseína e BANA como substratos, respectivamente. Cg24-I inibiu a germinação de F. solani e foi capaz de alterar a permeabilidade das membranas dos esporos na concentração de 90 ng/ml. Esse conjunto de resultados sugere que proteinases cisteínicas de fluidos laticíferos participam da defesa das plantas contra fungos fitopatogênicos e que o provável mecanismo de ação destas proteínas seja a alteração da permeabilidade da membrana plasmática destes microrganismos. A descrição de atividade antifúngica de proteases cisteínicas oriundas de fluidos laticíferos não é ainda descrita em detalhes na literatura, sendo este um trabalho com caráter original.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-05-13T08:45:06Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3383849 bytes, checksum: 6754c6712bedc54f90b31d434e9c2a28 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-13T08:45:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3383849 bytes, checksum: 6754c6712bedc54f90b31d434e9c2a28 (MD5) Previous issue date: 2011-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho descreve a síntese de dezenove compostos de estanho derivados de sulfonilditiocarbimatos: cinco complexos obtidos a partir de dicloreto de dibutilestanho, cinco a partir de cloreto de tributilestanho e nove a partir de cloreto de trifenilestanho. As sulfonamidas precursoras (RSO 2 NH 2 ), onde R= 4-FC 6 H 4 , -C 2 H 5 , -C 4 H 9 e -C 8 H 17 , foram preparadas a partir dos respectivos cloretos de sulfonila (RSO 2 Cl) em reação com solução de amônia concentrada. As demais sulfonamidas, com R= 4-ClC 6 H 4 , 4-BrC 6 H 4 , 4-IC 6 H 4 , -C 6 H 5 e -CH 3 , foram obtidas comercialmente. Sulfonilditiocarbimatos de potássio diidratados (RSO 2 N=CS 2 K 2 .2H 2 O) foram obtidos a partir das sulfonamidas em reação com quantidade equimolar de dissulfeto de carbono e o dobro de hidróxido de potássio, em N,N-dimetilformamida. Os sulfonilditiocarbimatos foram os intermediários comuns para a preparação dos complexos sintetizados. A reação de dois equivalentes dos sulfonilditiocarbimatos de potássio com um equivalente de dicloreto de dibutilestanho e dois de cloreto de tetrafenilfosfônio, em N,N-dimetilformamida forneceram os complexos de fórmula geral (Ph 4 P) 2 [Sn(Bu) 2 (RSO 2 N=CS 2 ) 2 ], onde R= 4-FC 6 H 4 , 4-ClC 6 H 4 , 4-BrC 6 H 4 , 4-IC 6 H 4 e C 6 H 5 . Complexos de fórmula geral (Ph 4 P)[Sn(Bu) 3 (RSO 2 N=CS 2 )], onde (R= 4-FC 6 H 4 , 4-ClC 6 H 4 , 4-BrC 6 H 4 , 4- IC 6 H 4 e C 6 H 5 ,) foram obtidos pela reação de sulfonilditiocarbimatos de potássio diidratados com cloreto de tributilestanho e cloreto de tetrafenilfosfônio, em metanol. Os complexos de estanho de fórmula geral (Ph 4 P)[Sn(Ph) 3 (RSO 2 N=CS 2 )], onde R= 4-FC 6 H 4 , 4-ClC 6 H 4 , 4-BrC 6 H 4 , 4-IC 6 H 4 , -C 6 H 5 , -CH 3 , -C 2 H 5 , -C 4 H 9 e -C 8 H 17 , foram obtidos pela reação de sulfonilditiocarbimatos de potássio diidratados com cloreto de trifenilestanho e cloreto de tetrafenilfosfônio, em N,N-dimetilformamida. As análises elementares (CHN) e os dados de espectroscopias no infravermelho, de ressonância magnética nuclear de 1 H, 13 C e 119 Sn e de Mössbauer 119 Sn foram consistentes com as fórmulas propostas para os complexos. Estudos de difração de raios-X xido composto (Ph 4 P) 2 [Sn(Bu) 2 (C 6 H 5 SO 2 N=CS 2 ) 2 ] mostram que o estanho(IV) se liga a um dos átomos de enxofre de cada grupo ditiocarbimato e aos dois grupos butila. Porém, interações foram observadas entre o metal e os átomos de nitrogênio dos ligantes, com distâncias intermediárias entre ligações formais Sn-N e interações intramoleculares. O complexo de estanho (Ph 4 P) 2 [Sn(Bu) 2 (4- ClC 6 H 4 SO 2 N=CS 2 ) 2 ] foi ativo in vitro contra Aspergillus flavus e Colletotrichum gloeoesporioides pelo método do Disco de Difusão em uma concentração de 25 mmol/L. Este teste permitiu a seleção de C. gloeoesporioides para estudos de dose-inibição, devido à maior atividade apresentada contra este fungo. A atividade antifúngica dos complexos de ditiocarbimatos com dibutilestanho foi estudada em diferentes concentrações pelo método Poison Food contra C. gloeoesporioides. Todos foram ativos sendo o dibutilbis(N-4- fluorofenilsulfonilditiocarbimato)estanato(IV) de tetrafenilfosfônio o mais ativo, com IC 50 igual a 6,2 μM, e IC 90 igual a 0,96 mM. / This work describes the syntheses of nineteen compounds derived from sulfonyldithiocarbimates: five complexes obtained from dibutyltin dichloride, nine from triphenyltin chloride, and five from tributyltin chloride. The parent sulfonamides (RSO 2 NH 2 ), R= 4-FC 6 H 4 , -C 2 H 5 , -C 4 H 9 and -C 8 H 17 , were prepared from the respective sulfonyl chlorides (RSO 2 Cl) in reaction with concentrated ammonia solution. The other sulfonamides, where R= 4-FC 6 H 4 , -C 2 H 5 , -C 4 H 9 and -C 8 H 17 ), were obtained commercially. Potassium sulfonyldithiocarbimates dihydrate (RSO 2 N=CS 2 K 2 .2H 2 O) were obtained from the sulfonamides in reaction with one equivalent of carbon disulfide and two equivalents of potassium hydroxide in N,N-dimethylformamide. These sulfonyldithiocarbimates were common intermediates for the preparation of the complexes synthesized. The reaction of two equivalents of the potassium sulfonyldithiocarbimates with one equivalent of dibutyltin dichloride and two equivalents of tetraphenylphosphonium chloride yielded the compounds with the general formula (Ph 4 P) 2 [Sn(Bu) 2 (RSO 2 N=CS 2 ) 2 ], where R= 4-FC 6 H 4 , 4-ClC 6 H 4 , 4- BrC 6 H 4 , 4-IC 6 H 4 and C 6 H 5 . Complexes (Ph 4 P)[Sn(Bu) 3 (RSO 2 N=CS 2 )], where of the geral formula R= 4-FC 6 H 4 , 4-ClC 6 H 4 , 4-BrC 6 H 4 , 4- IC 6 H 4 e C 6 H 5 , were prepared from tributyltin chloride in reaction with equimolar amounts of the potassium sulfonyldithiocarbimates and tetraphenylphosphonium chloride, in methanol. The tin complexes of the general formula (Ph 4 P)[Sn(Ph) 3 (RSO 2 N=CS 2 )], where R= 4-FC 6 H 4 , 4-ClC 6 H 4 , 4- BrC 6 H 4 , 4-IC 6 H 4 , C 6 H 5 , CH 3 , C 2 H 5 , C 4 H 9 and C 8 H 17 , were prepared from triphenyltin chloride in reaction with equimolar amounts of the potassium sulfonyldithiocarbimates and tetraphenylphosphonium chloride, dimethylformamide. The elemental analyses (CHN), infrared, H, nuclear magnetic resonance spectra, and Mössbauer 13 in C and N,N- 119 Sn 119 Sn data were consistent with the proposed formulae. X-ray diffraction studies on monocrystals of compound (Ph 4 P) 2 [Sn(Bu) 2 (C 6 H 5 SO 2 N=CS 2 ) 2 ] showed that tin(IV) xiiicoordinates to two butyl groups, and one sulfur and one nitrogen atom of each dithiocarbimate group. However the bond distances of Sn-N are in the limit between a formal chemical bond and an intramolecular interaction. The compound (Ph 4 P) 2 [Sn(Bu) 2 (4-ClC 6 H 4 SO 2 N=CS 2 ) 2 ] was active in vitro against Aspergillus flavus and Colletotrichum gloeoesporioides by the Disc Diffusion method at 25 mmol/L. C. gloeoesporioides was selected for dose-inhibition studies due to the greater activity observed. The antifungal activity of the complexes of dithiocarbimato with dibutyltin(IV) were evaluated by the Poison Food method agaisnt C. gloeoesporioides in different concentrations. All the compounds were active, tetraphenylphosphonium dibutylbis(N-4- fluorophenylsulphonyldithiocarbimato)stannate(IV) being the most active, with IC 50 of 6,2 μM, and IC 90 of 0,96 mM. / Dissertação antiga, não possui ficha catalográfica

OLIVEIRA, H. P. Purificação, caracterização e atividade antifúngica da Mm-POX, uma peroxidase do látex de Marsdenia megalantha (GOYDER; MORILLO, 1994). 2013. 152 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-22T17:36:17Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_hpoliveira.pdf: 7775368 bytes, checksum: 04af7f6679b25787c9a736c130f5945a (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-01-25T20:21:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_hpoliveira.pdf: 7775368 bytes, checksum: 04af7f6679b25787c9a736c130f5945a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-25T20:21:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_hpoliveira.pdf: 7775368 bytes, checksum: 04af7f6679b25787c9a736c130f5945a (MD5) Previous issue date: 2013 / The peroxidases are present in all living organisms and constitute a group of multifunctional enzymes with several biotechnological applications. In this group, the class III plant peroxidases (POX) (EC 1.11.1.7) are enzymes well characterized, with involvement in lignification, suberization, auxin catabolism, wound healing and plant defense. These enzymes have been detected in different parts of the plant, including the latex. The aim of this work was the purification, characterization and antifungal activity evaluation of a peroxidase from Marsdenia megalantha latex, an endemic species of the Caatinga. The latex was collected from plant grown in Quixadá, Ceará, Brazil, diluted (1:2) in 0.05 M Tris-HCl containing 0.15 M NaCl, pH 8.0, and subjected to centrifugation and dialysis against water. The supernatant was applied to a DEAE-Cellulose matrix previously equilibrated with 0.05 M sodium acetate buffer, pH 5.2 and two protein fractions were obtained. Elution of the non retained proteins (FnRd) was achivied by the equilibrium buffer, whereas the bound proteins (FRd) were eluted with 0.2 M NaCl in the same buffer. FnRd was subjected to a chromatography on Superose 12 HR 10/30 column, yielding two protein fractions (S1 and S2). S1 was shown to be a pure protein with peroxidasic activity, apparent molecular mass of 60 kDa, pI 5.2 and identity with other POXs, being named of M. megalantha peroxidase (Mm-POX). Mm-POX follows the Michaelis-Menten kinetics, with high affinity for guaiacol and H2O2, elevated thermal stability (60 °C, 1 hour) and optimum pH around 6.0. The catalytic activity of Mm-POX was reduced in the presence of classic peroxidases inhibitors, including azide, DTT, EDTA and Na2S2O5 and also in high concentrations of Na+, Mn2+ and salicylic acid. On the other hand, Ca2+ and Mg2+, even at low concentrations, were able to enhance the enzymatic activity of Mm-POX. In addition, Mm-POX was able to inhibit the Fusarium oxysporum and F. solani conidia germination. This action is probably due to changes in the cell membrane as well as induction of oxidative stress. The results reveal that Mm-POX is a class III peroxidase, being the first enzyme isolated from M. megalantha species, with potential use in the control of plant disease caused by fungi, adding biotechnological value to this enzyme. / As peroxidases estão presentes em todos os organismos vivos e constituem um grupo de enzimas multifuncionais com diversas aplicações biotecnológicas. Nesse grupo, as peroxidases de plantas classe III (POX) (EC 1.11.1.7) são enzimas bem caracterizadas, com participação na lignificação, suberização, catabolismo de auxinas, cicatrização e defesa vegetal. Tais enzimas têm sido detectadas em diferentes partes do vegetal, inclusive no látex. Esse trabalho teve como objetivo a purificação, caracterização e avaliação da atividade antifúngica de uma peroxidase presente no látex de Marsdenia megalantha, uma espécie endêmica da Caatinga. O látex foi coletado de plantas nativas da região do Quixadá Ceará, Brasil, diluído (1:2) em Tris-HCl 0,05 M, contendo NaCl 0,15 M, pH 8,0 e submetido à centrifugação e diálise contra água. O sobrenadante foi aplicado em matriz de DEAE-Celulose, equlibrada com tampão acetato de sódio 0,05 M, pH 5,2, resultando nas proteínas não retidas (FnRd) e nas proteínas retidas (FRd), essas últimas eluídas com a adição de NaCl 0,2 M no tampão inicial. A FnRd foi submetida à cromatografia em matriz de Superose 12 HR 10/30, originando duas frações proteicas (S1 e S2). S1 se mostrou como uma proteína pura, com atividade peroxidásica, massa molecular aparente de 60 kDa, pI de 5,2 e identidade com outras POXs, que foi denominado de peroxidase de M. megalantha (Mm-POX). Mm-POX obedece à cinética de Michaelis-Menten, apresenta alta afinidade pelo guaiacol e H2O2, estabilidade térmica elevada (60 ºC, 1 hora) e pH ótimo em torno de 6,0. A atividade catalítica da Mm-POX foi reduzida diante de inibidores clássicos de peroxidases, incluindo azida, DTT, EDTA e Na2S2O5 e de concentrações elevadas Na+, Mn2+ e ácido salicílico. Por outro lado, os íons Ca2+ e Mg2+, mesmo em baixas concentrações, foram capazes de potencializar a atividade enzimática da Mm-POX. Testada contra fungos, Mm-POX (0,2 µg/mL) foi capaz de inibir a germinação de conídios de Fusarium oxysporum e F. solani, ação que provavelmente decorre de alteração na membrana celular e indução de estresse oxidativo. Os dados em conjunto demonstram que a Mm-POX é uma peroxidase classe III, se constituindo na primeira proteína isolada de M. megalantha, com possibilidade de uso no controle de doenças vegetais ocasionadas por fungos, agregando valor biotecnológico a essa enzima.

Los dermatofitos son hongos filamentosos que causan infecciones en la piel, el pelo y las uñas tanto del ser humano como de los animales. Aunque las dermatofitosis suelen estar restringidas a las capas superficiales de la piel y sus apéndices, también pueden afectar la dermis y el tejido subcutáneo y así causar granulomas o pseudomicetomas. Algunos profesionales de las ciencias de la salud consideran las dermatofitosis como un problema meramente estético. Sin embargo, el impacto real que tienen estas infecciones sobre la calidad de vida de los pacientes es considerable. Los pacientes están afectados físicamente (sienten dolor, prurito, molestias), socialmente (sienten vergüenza al ser considerados personas de malos hábitos de higiene o como fuentes de infección) o laboralmente (los manipuladores de alimentos o personas que trabajan de cara al público, etc. pueden ver sus carreras truncadas o condicionadas). Este problema es especialmente importante en pacientes con dermatofitosis crónicas como las onicomicosis o tinea pedis. En el caso de las onicomicosis, el fracaso terapéutico puede llegar al 25% y en el caso de tinea pedis, especialmente el tipo mocasín, la infección puede persistir durante años y las recidivas son frecuentes en un 70% de los pacientes. Como las dermatofitosis tienden a ser crónicas (las pautas de tratamiento suelen ser prolongadas) y la terapia disponible es poco efectiva, el consumo de antifúngicos y por tanto el gasto sanitario se ven incrementados. Por ejemplo, en nuestro país el consumo anual de antifúngicos tópicos genera un gasto aproximado de 36 millones de euros y el de antifúngicos sistémicos genera un gasto que puede superar los 27.000 euros. Con el fin de frenar esta problemática, nuevos antifúngicos están siendo desarrollados, lo que ha generado un gran interés en poder evaluar de forma reproducible la sensibilidad de los dermatofitos a los antifúngicos. Sin embargo, en la actualidad no existen métodos de referencia para éstos hongos. En la presente tesis doctoral, desarrollamos y estandarizamos varios métodos que demuestran ser prácticos y útiles para determinar la sensibilidad de los dermatofitos a los antifúngicos. Estos métodos son: microdilución en caldo, Sensititre Yeast One®, dilución en agar, Etest® y el método de difusión con discos. Dichos métodos han sido evaluados usando un extenso número de cepas de dermatofitos, incluyendo casi todas las especies que conforman este grupo de hongos, y un gran número de antifúngicos, bien ya comercializados o de nueva síntesis experimental. Nuestros resultados aportan a la ciencia la primera base de datos sobre estudios de reproducibilidad intra- e interlaboratorio para evaluar las condiciones óptimas de ensayo del método de microdilución para determinar la sensibilidad de los dermatofitos a los antifúngicos más usados en la clínica como el itraconazol, la terbinafina y el clotrimazol. Estas condiciones son: · inóculo final: 104 ufc/ml · tiempo de incubación: 7 días· temperatura de incubación: 28º C· punto de lectura: 100% de inhibición de crecimiento. Demostramos por primera vez que dos de los métodos disponibles comercialmente para determinar la sensibilidad de las levaduras a los antifúngicos, como el Etest® o el Sensititre Yeast One®, pueden ser adaptados a los dermatofitos. Los métodos demuestran ser reproducibles, simples y rápidos de realizar en un laboratorio clínico asistencial.Demostramos que el tipo de inóculo (macroconidios vs. hifas), el medio de cultivo, la temperatura o el tiempo de incubación afectan significativamente las concentraciones mínimas inhibitorias y que éstas dependen del antifúngico o especie de dermatofito ensayada. En general, los estudios realizados en esta tesis doctoral aportan los primeros datos del proceso de estandarización de las pruebas de sensibilidad de los dermatofitos a los antifúngicos. / Dermatophytes are molds that produce infections in the skin, hair and nails of humans and animals. They are usually restricted to the superficial layers of the skin and appendices but they can also affect the dermis and the subcutaneous tissue, thus causing granulomas or pseudomycetomas.Some health science professionals regard dermatophytes as a merely cosmetic problem. The real impact of these infections on the quality of life of the patients involved, however, is considerable. Patients suffering from dermatophyte infections are affected physically since they feel pain, pruritus and discomfort. They may also be affected socially, being regarded by others as lacking basic personal hygiene or as potential sources of infection. And patients who work in the food industry or in other professions where they come into contact with the public may see their careers conditioned or even truncated. These problems are exacerbated in patients suffering from chronic dermatophytoses such as onychomycosis or tinea pedis. In the case of onychomycosis, treatment failure can be as high as 25%. In the case of tinea pedis, especially moccasin-type tinea pedis, the infection may last for years and the frequency of recurrence is as high as 70%.As the treatment of dermatophytoses tends to be prolonged (since the infection is usually chronic), and as the available treatments are not very effective anyway, antifungal drug consumption and public health expenditure are high. In Spain, for example, the annual consumption of topical antifungals involves a cost of approximately 36 million euros and the consumption of systemic antifungals approximately 27,000 euros.To alleviate this problem, new antifungals are being developed. This has generated interest in testing the susceptibility of dermatophytes to these antifungals in a reproducible way. However, no reference methods for this type of fungus currently exist.In this doctoral thesis we have developed and standardized several useful methods for determining the susceptibility of dermatophytes to various antifungals. The methods tested were broth microdilution, Sensititre Yeast One®, agar dilution, Etest®, and disk diffusion. These methods were evaluated with a high number of strains from almost every species of dermatophyte and a large number of antifungals, some of which are already commercially available and some have only recently been synthesised.Our results provide the first database of intra- and interlaboratory reproducibility studies using the microdilution method to determine the optimal test conditions for testing the susceptibility of dermatophytes to the most commonly prescribed antifungals (itraconazole, terbinafine and clotrimazole). These optimal test conditions are: · a final inoculation of 104 ufc/ml, · an incubation time of 7 days,· an incubation temperature of 28º C, and· an endpoint criterion of 100% growth inhibition.We have demonstrated for the first time that two of the commercially available methods for testing the antifungal susceptibility of yeasts (Etest® and Sensititre Yeast One®) can be adapted to test the antifungal susceptibility of dermatophytes. We have also demonstrated that these methods are simple, quick and reproducible in a clinical laboratory. We have shown that the type of inoculum (macroconidia or hyphae), the culture medium, the incubation temperature and the incubation time significantly affect the minimum inhibitory concentrations (MIC), and that these MIC depend on the antifungal or species of dermatophyte tested.In general, the studies conducted during this doctoral thesis have provided the first information about the standardization process for the antifungal susceptibility testing of dermatophytes.

LOPES, Tiago Deiveson Pereira. Potencial antidermatofítico de Mo-CBP4, uma proteína ligante à quitina de sementes de Moringa oleifera. 2016. 104 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-03T20:07:36Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_tdplopes.pdf: 2164027 bytes, checksum: f658448ab9dc0c04c309f8347b4b887d (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-03T20:09:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_tdplopes.pdf: 2164027 bytes, checksum: f658448ab9dc0c04c309f8347b4b887d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-03T20:09:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_tdplopes.pdf: 2164027 bytes, checksum: f658448ab9dc0c04c309f8347b4b887d (MD5) Previous issue date: 2016 / Dermatophytosis constitute an important public health problem, affecting about 25% of world population. Several drugs are available for the dermatophytosis treatment, but they cause many adverse effects, including severe toxicity, drug interactions, low efficacy and resistance. Thus, there is a need for the development of new drugs with improved efficacy and safety. Medicinal plants are a valuable source of natural products that can act as drugs, being an alternative to conventional treatments. Moringa oleifera Lamarck, a plant native from Northeast of India, is widely used for its nutritional, therapeutic and water purification properties. Thus, this study aimed to evaluate the antidermatophytic potential of Mo-CBP4, a chitin-binding protein purified from M. oleifera seeds. By in vitro assays, Mo-CBP4 showed inhibitory activity against the fungus Trichophyton mentagrophytes, with a MIC50 of 500 µg/mL. In contrast, Mo-CBP4 did not inhibit the fungus T. rubrum, even at a higher concentration (1000 µg/mL). Mo-CBP4 (500 μg/mL) was able to inhibit the conidia germination of T. mentagrophytes, but not the mycelial growth. In relation to the mode of action, the antifungal activity of Mo-CBP4 does not seem to involve the carbohydrate interaction site since the protein remained active even when incubated with 0.15 M N-acetyl-D-glucosamine. The antifungal activity of Mo-CBP4 appears to result from the increased permeability of the conidia cell membrane and induction of oxidative stress within the cell, cause by this protein. Mo-CBP4 also showed antifungal activity against T. mentagrophytes by in vivo assays. In dermatophytosis model using albino Swiss female mice the hydrogel containing Mo-CBP4 (5 and 10 mg/g) was effective, reducing the lesion severity and shortening the infection period. The findings indicate that Mo-CBP4 has potential for development of a novel antifungal drug for clinical treatment of dermatophytosis caused by the fungus T. mentagrophytes. / As dermatofitoses são consideradas um problema de saúde pública, afetando cerca de 25% da população mundial. Vários medicamentos estão disponíveis no mercado para tratar dermatofitoses, porém essas drogas trazem muitos efeitos adversos, incluindo elevada toxicidade, interações medicamentosas, pouca eficácia e desenvolvimento de resistência. Assim, a busca por novas drogas mais seguras e eficazes é imperativa. As plantas medicinais constituem uma valiosa fonte de produtos naturais capazes de atuar como fármacos, caracterizando-se como uma alternativa aos tratamentos convencionais. Moringa oleifera Lamarck, uma planta originária do Norte da Índia, é bastante utilizada por suas propriedades nutricionais, purificadora de água e terapêuticas. Diante disso, esse trabalho objetivou avaliar o potencial antidermatofítico de Mo-CBP4, uma proteína ligante à quitina, purificada de sementes de M. oleifera. Através de ensaios in vitro, Mo-CBP4 apresentou atividade inibitória frente ao fungo Trichophyton mentagrophytes, apresentando um CIM50 de 500 μg/mL. Contrariamente, Mo-CBP4 não inibiu o fungo T. rubrum, mesmo em uma concentração mais elevada (1000 μg/mL). Mo-CBP4 (500 μg/mL) foi capaz de inibir a germinação de conídios de T. mentagrophytes, mas não o crescimento micelial. Em relação ao modo de ação, a atividade antifúngica de Mo-CBP4 não parece envolver o sítio de interação a carboidrato desde que mesmo incubada com N-acetil-D-glucosamina 0,15 M permaneceu ativa. A atividade antifúngica de Mo-CBP4 parece resultar do aumento da permeabilidade da membrana dos conídios e indução de estresse oxidativo no interior das células, causado pela proteína. Atividade antifúngica de Mo-CBP4 contra T. mentagrophytes foi também verificada em ensaio in vivo. Em modelo de dermatofitose animal, utilizando camundongos albinos Swiss fêmeas, o hidrogel contendo Mo-CBP4 (5 e 10 mg/g) se mostrou eficaz no tratamento da infecção causada por T. mentagrophytes, diminuindo a gravidade das lesões e abreviando o tempo de infecção. Os dados obtidos indicam que Mo-CBP4 tem potencial para o desenvolvimento de uma nova droga antifúngica a ser utilizada no tratamento de dermatofitose causada por T. mentagrophytes.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4514_1.pdf: 661182 bytes, checksum: 022b50f4e5cd794c4ef3cf92b67504aa (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / O uso de extratos de plantas com propriedades antimicrobianas tem grande significado no tratamento terapêutico. No Brasil, somente 5% das espécies de plantas foram estudadas fitoquimicamente e uma porcentagem ainda menor foi avaliada sob aspectos biológicos. Este trabalho avaliou a atividade antifúngica das folhas e cascas de Avicennia sp., Conocarpus erectus, Laguncularia racemosa e Rhizophora mangle coletadas no estuário do rio Paripe (Vila Velha, Itamaracá, PE), frente a dermatófitos e leveduras. Após a secagem, o material coletado foi reduzido a pó e submetido a extrações sucessivas com metanol. A abordagem fitoquímica foi realizada para detectar os principais grupos químicos presentes nessas plantas. Para determinação da atividade antifúngica dos extratos foram realizados o método de difusão em disco e a determinação da concentração mínima inibitória pelo método de microdiluição e macrodiluição. Os microrganismos utilizados foram às leveduras Candida albicans, C. parakrusei, C. tropicalis, C. glabrata, C. parapsilosis, Trichosporon beigelii e T. pullulans e os dermatófitos Epidermophyton floccosum, Microsporum gypseum, Trichophyton mentagrophytes e T. rubrum. A abordagem fitoquímica revelou a presença de flavonóides, terpenos e esteróides e taninos nessas plantas. Os taninos representam o principal grupo existente nas plantas testadas e a casca da amostra 1 de Avicennia apresentou terpenos e esteróides com grande intensidade. No teste de atividade pelo método de difusão em disco foram ativos, para as leveduras, os extratos da casca da amostra 1 de Avicennia, da casca de C. erectus, da folha de L. racemosa e da folha e casca de R. mangle e, os dermatófitos, foram sensíveis a todos os extratos, com exceção da amostra 2 de Avicennia. Para o teste de difusão em disco C. albicans foi à espécie mais resistente enquanto T. pullulans foi mais sensível, seguido por C. parakrusei, C. glabrata e C. parapsilosis e para os dermatófitos E. floccosum foi o microrganismo mais sensível, seguido por T. rubrum, T. mentagrophytes e M. gypseum. Na determinação da concentração mínima inibitória das espécies de leveduras T. beigelii, T. pullulans, C. parakrusei e C. parapsilosis foram as mais sensíveis, com CMI de 15,625 mg/mL. Para os fungos dermatofíticos, E. floccosum foi o mais sensível, apresentando CMI de 15,625 mg/mL, enquanto M. gypseum foi o mais resistente com CMI de 1000 mg/mL. O presente trabalho indica que as espécies estudadas, em especial a casca da amostra 1 de Avicennia, possuem relevante potencial antifúngico e estudos posteriores devem ser conduzidos para isolar os compostos ativos

El objetivo del estudio fue evaluar la composición química del extracto acuoso y etanólico de las hojas frescas de Tagetes elliptica Sm. “chincho” y determinar su actividad antibacteriana, antifúngica in vitro y su aplicación en un alimento andino. La especie vegetal fue obtenida en el centro poblado de Molinos de la provincia de Jauja de la Región Junín. El extracto etanólico se obtuvo por maceración con etanol de 96°y la determinación de la composición química se realizó por el método de Cromatografía de Gases/Espectrómetría de Masas (CG/EM), determinándose los siguientes componentes químicos: dianhydrodulcitol, ceanothine c, resorcinol, pirocatecol, 2-(2-butinil)ciclohexanona, z, z-6,24-tritricontadien-2-ona y 5-hexil-2,4-dimetiloxazol, Se evaluó la actividad antibacteriana y antifúngica in vitro del extracto acuoso demostrándose que no tiene actividad antibacteriana frente a las bacterias: Staphylococcus aureus, Bacillus subtillis, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa en ninguna de las concentraciones ensayadas de 100, 50 y 25 mg/mL respectivamente. El extracto etanólico de Tagetes elliptica Sm. “chincho” mostró actividad frente a Staphylococcus aureus ATCC 25933 y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, en las tres concentraciones trabajadas, pero no presenta actividad contra Bacillus subtilis ATCC 6633 y Escherichia coli ATCC 25922. La actividad mostrada frente a Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa no es significativa, ya que a la concentración de 25 mg/mL, el halo de inhibición presentado fue menor de 18 mm. La actividad antifúngica del extracto etanólico frente a Candida albicans ATCC 10231 fue inactivo. El extracto acuoso y etanólico de Tagetes elliptica Smith, debe su fragancia a la composición química que posee su aceite esencial y ejerce actividad antibacteriana debido al resorcinol y pirocatecol; compuestos fenólicos a los que se les atribuiría la actividad antibacteriana, predominando su aroma y sabor en el alimento integrado en el potaje andino denominado pachamanca. / The objective of the study was to evaluate the composition chemistry of aqueous and alcoholic extract and fresh leaves of Tagetes elliptica Sm. ethanolic “chincho” and determine the antibacterial and antifungal activity in vitro and its application in an andean food. The plant species was obtained in the town of mills in the province of Jauja in the Region Junín. The summary was obtained by the method of maceration with ethanol of 96°. The chemical composition is determined by the Mass Spectrometer/gas Chromatograph (GC /MS). The determination of the antibacterial and antifungal activity was determined by the method of diffusion in agar, against the strains of the following microorganisms: Staphylococcus aureus ATCC 25933, Bacillus subtilis ATCC 6633 , Escherichia coli ATCC 25922 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853; also against the yeast Candida albicans ATCC 10231. With the aqueous extract was its application in an andean food. The analysis GC/MS determined the following chemical components: dianthydrodulcitol, ceanothine c, resorcinol, pirocatecol, 2-(2-butynyl)cyclohexanone, -, z, z-6, 24-tritriacontadien-2one, and 5-hexyl-2,4-dimethyl oxazole, Evaluation of antimicrobial and antifungal activity in vitro of the aqueous extract not showed antibacterial activity against S.aureus, B.subtillis, E.coli and P.aeruginosa at any of the concentrations tested of 100, 50 and 25 mg/mL respectively. Ethanolic extract of Tagetes elliptica Sm. "chincho" showed activity against Staphylococcus aureus ATCC 25933, and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 worked three concentrations and not having any activity against Bacillus subtilis and Escherichia coli. The activity shown against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa is not significant, since the concentration of 25 mg/mL, the zone of inhibition presented wasn't more than 18 mm. The antifungal activity of ethanolic and aqueous extract was inactive, the aqueous extract and Tagetes elliptica Sm, ethanolic should its fragrance chemical composition which has its essential oil and antimicrobial activity because of resorcinol and pirocatecol; phenolic compounds that it would endow them antimicrobial activity, dominate aroma and flavor in the andean food integrated into the Andean stew called pachamanca. Key words. Tagetes elliptica Smith, pachamanca, Antibacterial, antifungal.

Orientador: Rosemeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro / Coorientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Taís Maria Bauab / Banca: Suraia Said / Banca: Ana Helena Januário / Resumo: Dermatófitossão um grupo especial de fungos que afetam tecidos queratinizados de humanos e outros vertebrados causando infecções superficiais. O crescimento na incidência dessas infecções tem gerado problemas na terapêutica. A disponibilidade de antifúngicos na prática médica é relativamente pequena, algumas vezes ineficiente e a maioria deles apresenta certa toxicidade. Além do crescimento das infecções fúngicas o problema da resistência microbiana também sofreu um aumento acentuado. Plantas medicinais têm sido usadas por vários propósitos incluindo efeitos antimicrobianos e podem apresentar inibição do crescimento de fungos. Pothomorphe umbellata (L.) Miq., planta própria da flora Brasileira,conhecida popularmente como pariparoba ou caapeba, apresenta entre seus constituintes, sitosterol, estigmasterol. 4-nerolidilcatecol (4-NC) e sesquiterpenos. Neste trabalho estudamos a ação antifúngica dos extratos e óleos essenciais de P. umbellata além de alterações ocorridas no fungo relacionadas à ação do extrato vegetal, frente a linhagens de Trichophyton rubrum (Tr1 e Tr FOC), Trichophyton mentagrophytes e Microsporum canis. Os resultados demonstraram boa ação para a fração hexano (FHex) do extrato etanólico com CIM de 9,76 μg/mL e do 4-nerolidilcatecol com CIM de 31,25 μg/mL frente à linhagem Tr1. O teste de citotoxicidade in vitro demonstrou um IC50 de40,05 μg/mL para a fração hexano e <15,625 μg/mL para o 4-NC frente a linhagem de macrófagos J774. A dosagem do ergosterol fúngico demonstrou diminuição da porcentagem frente a fração FHex para as linhagens Tr1 e Mc, demonstrando um possível mecanismo de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dermatophytesare a special group of fungi that affect keratinized tissues of humans and other vertebrates causing superficial infections. Growth in the incidence of these infections has generated problems in therapy. The availability of antifungal agents in clinical practice is relatively small, sometimes inefficient and most of them have some toxicity. Besides the growth of fungal infections, the problem of microbial resistance has also shown a significant increase. Medicinal plants have been used for several purposes including antimicrobial effects and have shown inhibition of fungal growth. Pothomorphe umbellata (L.) Miq., Brazilian flora plant, known popularly as pariparoba, or caapeba, has among its constituents, sitosterol, stigmasterol, 4- nerolidylcathecol (4-NC) and sesquiterpenes, This work studied the antifungal effect of extracts and essential oils of P. umbellata well as changes in the fungus-related action of plant extract, compared to strains of Trichophyton rubrum (Tr1and Tr FOC), Trichophyton mentagrophytes and Microsporum canis.The results demonstrated the good action for thehexane fraction(FHex)of ethanolic extract of P. umbellata, with an MIC of 9.76 ug/mL and 31.25 ug/mL for 4-NC against Tr1 strain. The in vitro cytotoxicity test showed an IC50 of 40.05 ug/mL for the hexane fraction and <15.625 ug/mL for 4-NC to the strain of macrophages J774. The determination of fungal ergosterol showed a percentage decrease compared to the fraction FHex for Tr1 and Mc strains, demonstrating a possible mechanism of action on lipids. By polyacrylamide gel electrophoresis in SDS-PAGE was demonstrated differences in the profile protein in Tr1 and Mc strains when treated with FHex in comparison with... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O gênero Pterocaulon (Asteraceae) é formado por 18 espécies, a maioria de ocorrência na América do Sul. Grande parte das espécies deste gênero tem aplicação na medicina popular como digestiva, emenagoga, inseticida e também como agente contra picadas de serpentes. No Sul do Brasil, algumas espécies conhecidas como “Quitoco” são utilizadas como antinflamatórios e no tratamento de afecções de pele, tanto de humanos quanto de animais. Neste trabalho foram isolados e identificados cinco diferentes compostos, presentes nos extratos diclorometano das partes aéreas de P. alopecuroides e P. polystachyum. Os compostos isolados são cumarinas simples e caracteristicamente 6,7-dioxigenadas. Da espécie P. alopecuroides foram obtidas 5-metoxi-6,7-metilenodioxicumarina (PA1) e 7(2,3-epoxi-3-metil-3-butiloxi)-6-metoxicumarina (PA2) e da espécie P. polystachyum foram isoladas, além da 5-metoxi-6,7-metilenodioxicumarina (PP1a), iapina (PP1b), preniletina (PP2a) e preniletina-metil-éter (PP2b). Outras espécies de Pterocaulon nativas do Rio Grande do Sul foram analisadas quanto a presença de cumarinas, que podem contribuir para os estudos quimiotaxonômicos do gênero, atuando como marcadores taxonômicos. Os extratos brutos metanólicos e frações hexanólica, diclorometano e metanólica de P. alopecuroides, P. balansae e P. polystachyum foram testados quanto à atividade antimicrobiana e apresentaram um largo espectro de ação contra um painel de fungos patogênicos oportunistas responsáveis pela maioria das infecções sistêmicas e dermatológicas, justificando o uso destas plantas no tratamento de doenças de pele de animais popularmente diagnosticadas como micoses. Os compostos isolados, também testados frente a microrganismos patogênicos, não demonstraram atividade relevante, o que leva a crer que os extratos que foram ativos podem conter outros compostos que ainda não foram isolados ou ainda que poderiam agir de forma sinérgica com os produtos isolados. O método de extração utilizado indica que as cumarinas localizam-se em grande maioria na superfície de folhas e caules, onde poderiam estar atuando como fitoalexinas, protegendo a planta especialmente do ataque de fungos.

SILVA NETO, João Xavier da. Purificação, caracterização bioquímica e atividade contra Candida spp. de uma nova proteína ligante à quitina de sementes de Moringa oleifera LAM. 2015. 107 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-03T21:25:00Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_jxsilvaneto.pdf: 2404793 bytes, checksum: 93a0fd622fcab8a18f01b51110307929 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-10T19:09:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_jxsilvaneto.pdf: 2404793 bytes, checksum: 93a0fd622fcab8a18f01b51110307929 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-10T19:09:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_jxsilvaneto.pdf: 2404793 bytes, checksum: 93a0fd622fcab8a18f01b51110307929 (MD5) Previous issue date: 2015 / Candida species encompass a group of yeast that normally lives on the skin and mucous surfaces of human beings, in which the infectious disease candidiasis can occur, with severe consequences particularly for immunocompromised patients. The available antifungal drugs used for the candidiasis treatment are usually toxic and can lead to the development of resistant strains. A promising alternative to the conventional treatments is the use of plant proteins. Moringa oleifera is a plant with valuable nutritional and medicinal properties, including antimicrobial activity. This work aimed to purify a chitin-binding protein from M. oleifera seeds and to evaluate its antifungal properties against Candida species. Mo-CBP2 (Mo: Moringa oleifera; CBP: Chitin Binding Protein) was purified from the albumin fraction of M. oleifera seeds through chitin affinity chromatography followed by cation exchange chromatography. Mo-CBP2 represented about 0.14% of the total seed protein and appeared as a single band on native PAGE. By mass spectrometry, Mo-CBP2 presented 13,160 Da. However, in contrast, after native gel filtration chromatography (pH 7.5) two protein peaks with molecular masses of 33.0 and 66.0 kDa emerged from Mo-CBP2. By SDS-PAGE, Mo-CBP2 migrated as a single band with an apparent molecular mass of 25.0 kDa. Nevertheless, Tricine-SDS-PAGE of Mo-CBP2 under non-reduced conditions revealed two protein bands in the range of 13.0 and 17.0 kDa. After DTT and β-mercaptoethanol treatments, Mo-CBP2 appeared as been composed of masses of 7.0 and 4.0 kDa. Altogether, these results suggest that Mo-CBP2 exists in different oligomeric forms. Moreover, Mo-CBP2 is a basic glycoprotein (pI 10.9) with 4.1% sugar, with did not display hemagglutinating or hemolytical activity upon rabbit erythrocytes. A comparative analysis of the sequence of triptic peptides from Mo-CBP2 in solution, after LC-ESI-MS/MS, revealed similarity with other M. oleifera proteins, as the 2S albumin Mo-CBP3. Mo-CBP2 possesses in vitro antifungal activity against Candida albicans, C. parapsilosis, C. krusei and C. tropicalis, with MIC ranging from 9.45 to 37.9 µM. In addition, Mo-CBP2 (18.9 µM) increased the cell membrane permeabilization and oxigen reactive species production in C. albicans and promoted degradation of circular plasmid DNA (pUC18) from Escherichia coli. The results presented in this work point out the potential of Mo-CBP2 as a new antifungal protein active against Candida spp / Candida ssp. compreendem um grupo de leveduras que normalmente vivem na pele e mucosas do homem, podendo ocasionar candidíase, com consequências graves particularmente para indivíduos imunocomprometidos. Os principais antifúngicos utilizados no tratamento da candidíase são tóxicos e podem levar ao aparecimento de cepas resistentes. Uma alternativa promissora aos tratamentos convencionais é o uso de proteínas vegetais. Moringa oleifera é uma planta de grande valor nutricional e medicinal, com atividade antimicrobiana. Este trabalho objetivou purificar uma proteína ligante à quitina de sementes de M. oleifera e avaliar sua atividade antifúngica contra espécies de Candida. Mo-CBP2 (Mo: Moringa oleifera; CBP: “Chitin Binding Protein”) foi purificada a partir da fração albumina de sementes de M. oleifera por cromatografia de afinidade em matriz de quitina, seguida de cromatografia de troca catiônica. Mo-CBP2 representou em torno de 0,14% da proteína total da semente e se apresentou como uma única banda na eletroforese em condição nativa. Por espectrometria de massas, Mo-CBP2 é uma proteína de 13.160 Da. Em contraste, Mo-CBP2 emergiu em dois picos, com massas moleculares correspondentes a 33,0 e 66,0 kDa, após cromatografia de filtração em gel (pH 7,5). Mo-CBP2 apresentou-se como uma única banda proteica com massa molecular aparente de 25,0 kDa quando analisada por PAGE-SDS. Todavia, em Tricina-SDS-PAGE, Mo-CBP2, em condições não redutoras, resultou em duas bandas proteicas, uma na faixa de 13,0 kDa e outra superior a 17,0 kDa e, após tratamento com DTT e β-mercaptoetanol, mostrou bandas com massas moleculares aparentes de 7,0 e 4,0 kDa. Os dados em conjunto sugerem que Mo-CBP2 existe em diferentes formas oligoméricas. Mo-CBP2 é uma glicoproteína básica (pI 10,9) com 4,1% de carboidratos, não apresentando atividade hemaglutinante ou hemolítica frente a eritrócitos de coelho. A análise comparativa das sequências dos peptídeos trípticos obtidos a partir da Mo-CBP2 em solução, após LC-ESI-MS/MS, revelou similaridade com outras proteínas de M. oleifera, como a albuminas 2S denominada de Mo-CBP3. Mo-CBP2 foi capaz de inibir, in vitro, o crescimento de C. albicans, C. parapsilosis, C. krusei e C. tropicalis, com CIM variando de 9,45 a 37,9 µM. Em adição, Mo-CBP2 (18,9 µM) aumentou a permeabilidade da membrana celular e induziu a produção de espécies reativas de oxigênio em C. albicans, além de ter degradado o DNA do plasmídeo circular (pUC18) de Escherichia coli. Os resultados obtidos apontam para o potencial de uso da Mo-CBP2 como uma nova proteína antifúngica ativa contra Candida spp.