Darbo tikslas: atlikti Lietuvoje registruotų mėlynių uogų pasirinktų preparatų sudėčių ir technologijos palyginamąją analizę, įvertinti kiekybiškai ir nustatyti antioksidacinį aktyvumą. Darbo uždaviniai: Ištirti Lietuvoje registruotų mėlynių uogų preparatų pasiūlą. Atlikti šių preparatų palyginamąją analizę vertinant sudėtis. Pasirinktuose preparatuose nustatyti fenolinių junginių ir antocianinų kiekį spektrofotometriniu metodu. Nustatyti pasirinktų preparatų antioksidacinį aktyvumą DPPH metodu. Tyrimo objektai ir metodai: Preparatai su mėlynių uogų ekstraktu ir mėlynių uogų milteliais. Spektrofotometrinis metodas naudotas analizei: bendras fenolinių junginių kiekis – pagal Galo rūgšties kalibracinę kreivę; bendras antocianinų kiekis – pH diferenciniu metodu; antioksidacinis aktyvumas – DPPH laisvojo radikalo inaktyvavimo kreivė. Tyrimo rezultatai ir išvados: Iki 2013 m. birželio mėn. nustatyti 47 Lietuvoje registruoti mėlynių uogų preparatai. Į 97 proc. šių preparatų sudėtį įeinančių mėlynių uogų žaliavos forma – ekstraktas. 19 proc. visų tirtųjų sudaro kompleksiniai ir 9 proc. vienkomponenčiai preparatai. Spektrofotometriškai nustačius fenolinius junginius, didžiausias jų kiekis yra ,,Mėlynių ekstraktas“, kapsulėse (,,Vitaforce“, Jungtinė Karalystė), mažiausias - ,,Visioblue strong“, kapsulėse (,,Hankintatukku Oy“, Suomija). Preparatas ,,Mėlynių uogų ekstrakto tabletės su cinku forte 0,25 g”, („Elit-farm", Ukraina) eksperimentinio tyrimo metu nedavė apčiuopiamo rezultato... [toliau žr. visą tekstą] / Purpose of the work: To make the comparable ingredients and technology analysis of selected blueberry preparations registered in Lithuania, evaluate quantitatively and determine the antioxidant activity. Tasks: to investigate the supply of blueberry preparations registered in Lithuania. To make the comparable ingredients analysis of preparations mentioned above. Determine the phenolic compounds and anthocyanins quantity using the spectrophotometry method. Measure the antioxidant activity of selected preparation using DPPH method. Research objects and methodology: Preparations with blueberry extract and blueberry powder. Spectrophotometric methods were used for analysis: total phenolic content according calibration curve of galic acid; total anthocyanins - pH differential method; antioxidant activity - DPPH free radical inhibition. Results and conclusions: Until June, 2013 y. Lithuania set 47 record Blueberry fruit preparations. There was noticed that in 97 percent composition of the preparation, blueberry raw material shape - extract. 91 percent of explored preparations are multicomponent and just 9 percent - one-component. Determined by spectrophotometry, that the highest levels of the phenolic compounds are in ”Mėlynių ekstraktas“, capsules of (“Vitaforce”, United Kingdom) and the lowest – “Visioblue strong’’, capsules of (”Hankintatukku Oy’’, Finland). The quantity of Anthocyanins per recommended daily dose in the preparation was studied by spectrophotometry method. The... [to full text]

Analytical chemistry has developed throughout time to meet current needs. At present, the interest in biorefinery is growing, due to environmental awareness and the depletion of fossil resources. Biomass from agricultural and forestry industries has proven to be excellent raw material for different processes. Biorefinering valuable species such as bioactive species from biomass, without compromising the primary process of the biomass is highly desirable. Pressurised fluid extraction (PFE) using water and ethanol as a solvent was developed for extracting betulin from birch (Betula pendula) bark. Apart from betulin, stilbene glucosides such as astringin, isorhapontin and picied were also extracted from spruce (Picea abies) using PFE. PFE is an advanced technique that extracts at temperatures above the solvent’s atmospheric boiling point. The applied pressure in PFE is mainly to maintain the liquid state of the extraction solvent. Parameters such as type of solvent, temperature, and time affect the extraction selectivity and efficiency. Therefore it is necessary to comprehend these parameters in order to optimise extraction. The DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) assay was used to determine the antioxidant capacity and activity of the obtained bioactive species. The results showed high antioxidant capacity in bioactive species that were extracted at an elevated temperature, 180°C. Extraction and degradation occur simultaneously during the extraction. Hence, it is crucial to separate these two processes in order to obtain the actual value. An online hyphenated system of chromatographic separation electrochemical mass spectrometric detection was developed (LC-DAD-ECD-MS/MS). The electrochemical detector facilitates real-time monitoring of the antioxidant capacity and activity of each antioxidant and its oxidation products. This developed LC-DAD-ECD-MS/MS method enabled rapid screening of antioxidants and created a fingerprint map for their oxidation products. Characterisation and molecular elucidation of bioactive species were also performed. Degradation of bioactive species was investigated with the said online system and birch bark extract was compared with birch bark extracts that were hydrothermally treated. The obtained results showed some degradation of antioxidants at 180°C. In summary, the aim of this thesis was to develop analytical methods integrated with sustainable chemistry for extraction of bioactive species in biomass from the forestry industry. A novel online system using selective and sensitive detectors such as diode-array, electrochemical, and tandem mass spectrometry was developed to rapidly determine the antioxidant capacity and activity of antioxidants. Furthermore, tandem mass spectrometry enables identification of unknown bioactive species without the need of reference samples. / Felaktigt tryckt som Digital Comprehensive Summaries of Uppsala Dissertations from the Faculty of Science and Technology 719

Tamarindus indica L. é um componente natural amplamente consumido por humanos, apresentando propriedade antiinflamatória, antidiabética e antihepatotóxica. Além disso, como nós demonstramos previamente, o extrato apresenta atividade hipolipêmica e antioxidante. Neste trabalho, nós demonstramos o efeito do extrato de T. indica sobre mitocôndrias isoladas de fígado de rato. Na presença de Ca2+, o extrato causou um inchamento osmótico mitocondrial concentração-dependente, associado ao aumento da velocidade basal (V4), dissipação do potencial de membrana e liberação do Ca2+ pré-acumulado, os quais foram inibidos por ciclosporina A (CsA) e assim atribuídos a transição de permeabilidade da membrana mitocondrial (TPMM). A indução do inchamento osmótico mitocondrial foi prevenida por EGTA e vermelho de rutênio, indicando a dependência da TPMM de Ca2+. A oxidação de proteínas tiol mitocondrial, um mecanismo bem estabelecido como causador da TPMM, foi detectado. Entretanto, nenhuma alteração significante foi observada no estado redox de GSH. A oxidação de NAD(P)H e o acúmulo de espécies reativas de oxigênio produzidas pela mitocôndria foram observadas, em ambos os casos, foram prevenidas por CsA e/ou EGTA, indicando que são conseqüências da TPMM induzida pelo extrato de T. indica. Portanto, sem aparente envolvimento do estresse oxidativo no processo, sugerindo uma interação direta de compostos do extrato com grupos tiólicos de proteínas da membrana. O extrato de T. indica induziu uma depleção de ATP associada à TPMM, mostrando assim potencial para causar a morte celular por apoptose ou necrose, resultante da indução da TPMM por si ou pela depleção do ATP via TPMM. In vitro, o extrato apresentou capacidade scavenger de radicais livres, verificado pelo ensaio do DPPH, radical superóxido e radical hidroxil; e ainda foi capaz de diminuir a lipoperoxidação mitocondrial. Além disso, em baixas concentrações, o extrato mostrou uma propriedade quelante de Fe2+. / Tamarindus indica L. is a natural dietary component widely consumed by humans, presenting well established anti-inflammatory, anti-diabetic and anti-hepatotoxic properties. In addition, as we have previously demonstrated, extract presents hypolipemic and antioxidant activities. We show here the effects of T. indica extract on isolated rat liver mitochondria. In the presence of Ca2+, the extract caused mitochondrial concentration-dependent swelling, associated to, resting respiration increase (V4), membrane potential dissipation and release of pre-accumulated Ca2+, inhibited by cyclosporine A (CsA) and thus ascribable to mitochondrial permeability transition (MPT). This swelling induction was prevented by EGTA and ruthenium red, indicating strict dependence of MPT on Ca2+. Oxidation of mitochondrial membrane protein thiols, a well established mechanism causing MPT was detected. However, no significant change was observed in the GSH redox state, and the NADPH oxidation and accumulation of mitochondria-generated reactive oxygen species that was observed, were prevented by CsA and/or EGTA, indicating that they are consequence of the MPT induced by T. indica extract. Therefore, no apparent oxidative stress condition is involved as cause of this process suggesting that direct interaction with membrane protein thiol groups of the compounds responsible for MPT induction occurs. T. indica extract led to MPTassociated ATP depletion, thus showing the potential to cause cell death by apoptosis or necrosis resulting from MPT induction per se or from ATP depletion by MPT. In vitro, the extract presented free radical scavenging ability, as assessed by the 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl (DPPH), superoxide radicals and radical hydroxyl assays, and led to decreased lipid peroxidation in mitochondria, as assessed by the thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assay. In addition, the extract showed an iron chelanting property in low concentrations.

Resumo: A família Eriocaulaceae apresenta cerca de 1.200 espécies e 11 gêneros, com distribuição pantropical. Suas espécies são conhecidas popularmente como „sempre viva‟. Leiothrix spiralis Ruhland e Syngonanthus nitens (Bong) Ruhland são espécies de Eriocaulaceae, estudos químicos tem mostrado predominantemente a presença de xantonas e flavonas, principalmente O-glicosídeos e C-glicosídeos derivados da luteolina. Propriedades etnofarmacológicas de Eriocaulaceae são pouco conhecidas. Por esta razão, foi avaliado o potencial biológico dos extratos e compostos isolados das espécies L. spiralis e S. nitens. Os extratos metanólicos de escapos, capítulos e folhas destas espécies e os compostos fenólicos isolados do extrato metanólico de folhas de L. spiralis mostraram significativa atividade antimicrobiana contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas e leveduras, a capacidade antioxidante pelo ensaio de redução do ABTS●+ pode ser observada. Os extratos foram avaliados quanto à capacidade de inibir a formação de hifas de C. albicans, sendo verificado que o extrato de escapos de S. nitens foi capaz de inibir a fase de transição para a forma filamentosa. As atividades citotóxica e hemolítica dos extratos foram investigadas e o extrato metanólico de folhas de L. spiralis apresentou ação citotóxica sobre as células HeLa. O extrato de escapos de S. nitens foi incorporado a um creme vaginal e avaliada a atividade antifúngica e mutagênica em um modelo animal de candidíase vaginal. Os resultados mostraram que o tratamento com este produto foi eficaz neste modelo animal, erradicando a carga fúngica vaginal de ratas infectadas após 8 dias de tratamento. A atividade mutagênica foi avaliada pelo teste do micronúcleo, em tratamento agudo e subagudo, e o produto não apresentou mutagenicidade nessas condições. O presente estudo sugere que estas espécies podem ser uma fonte promissora para aplicação como antifúngico / Abstract: Eriocaulaceae is a pantropical family, comprising around 1200 species in 11 genera. Their species are popularly known as „sempre viva‟. Leiothrix spiralis Ruhland and Syngonanthus nitens (Bong.) Ruhland are two species of Eriocaulaceae, and chemical studies of these species showed predominantly flavones, mainly O-glucosides and C-glucosides derivatives of luteolin. The ethnopharmacological properties of Eriocaulaceae are little known. For this reason we evaluate the biological potential of extracts and isolated compounds from L. spiralis and S. nitens. The methanolic extracts from capitula and flower heads from this species and the phenolics isolated from the methanolic extract of leaves of L. spiralis showed significantly antimicrobial activity against Gram-positive and Gram-negative organisms and yeasts, and the antioxidant capacity by the ABTS●+ reduction assay could be observed. The extracts were evaluated as the ability to inhibit the hyphal formation on C. albicans and the extract of flower heads of S. nitens was able to inhibit the transition stage from budding to hyphal growth. The cytotoxic and hemolytic activities of the extracts were investigated and the extract of leaves of L. spiralis showed cytotoxic action on HeLa cells. A vaginal cream containing the methanolic extract of scapes from S. nitens was tested as antifungal and mutagenic in a vaginal candidiasis animal model. The results showed that treatment with this product was very effective in this animal model, and was able eradicate the vaginal fungal burden of infected rats after 8 days on treatment. The in vivo mutagenic activity of the vaginal cream was assessed by the micronucleus assay, in acute and subacute treatment, and it was not mutagenic in this conditions. The present study suggests that these Eriocaulaceae species could be a promising source of compounds to produce antifungal phytomedicines / Orientador: Taís Maria Bauab / Coorientador: Maria Virginia Costa Scarpa / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Claudia Elena Sotomayor / Banca: Elfriede Marianne Bacchi / Doutor

Made available in DSpace on 2016-08-12T19:18:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PatricioFB_TESE.pdf: 3541324 bytes, checksum: 0dc1f33581900499867155fb060d5564 (MD5) Previous issue date: 2014-05-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Modern society is increasingly searching for foods that can treat and prevent diseases and increase longevity. Among these it stands out the functional foods, including beverages, rich in antioxidants with proven beneficial effects to health, as grapes and their derivatives. In view of this, a study was carried out in order to identify grape varieties suitable for consumption in natura and processing which, besides meeting the requirements of commercial quality, have high contents of compounds with functional properties. In the study it was used grape clusters harvested from the Active Grape Germplasm Bank plants grown at the Mandacaru Experimental Field, Embrapa Semiarid, Juazeiro, state of Bahia, Brazil. It was evaluated 31 grapevine varieties in the crop cycles of the first and second semesters of 2011, that is, A dona, Barbera, Benitaka, Blue Lake, Brasil, Cardinal, Christmas Rose, Estevão Marinho, Frankenthal, Gamay, Grenache, Isabel, Isabel Precoce, Isaura, Liberty, Máximo, Moscato Caillaba, Moscato de Hamburgo, Moscato Noir, Patrícia, Piratininga, Royalty, Saturn, Scarlet, Syrah 1 (a clone from France), Syrah 2 (a clone from the state of Rio Grande do Sul), Tampa, Tannat, Tibouren, Traviú, and Vênus. The traits evaluated in the fruits were skin color, resistance to compression, soluble solids (SS), titratable acidity (TA), SS/TA ratio, tannins (dímeric, oligomeric and polymeric), total extractable polyphenols (TEP), total anthocyanins, yellow flavonoids, condensed tannins, and antioxidant activity by using DPPH and ABTS methods. The generalized Mahalanobis distance was used for quantifying the genetic divergence between the varieties. As strategies of clustering, it was used UPGMA and analysis of canonical variables. The cluster analysis resulted in five groups of varieties. The varieties Cardinal and Royalty showed high genetic diversity between themselves, thus suitable for insertion into breeding programs aiming at exploring the variability of the Active Germplasm Bank of Embrapa Semiarid. The varieties Royalty and Máximo, suitable for processing, stood out by presenting high levels of tannins (dimeric, oligomeric and polymeric), TEP, total anthocyanins, yellow flavonoids and total antioxidant activity. Among the varieties with different aptitudes, Tampa stood out with high contents of total anthocyanins and yellow flavonoids. Contents of TEP and condensed tannins were intimately correlated with the antioxidant activity of the grapes. The results obtained in this study constitute the basis for the formation of a bank of traits related to grape bioactive compounds / A sociedade moderna busca, cada vez mais, o consumo de alimentos que possam tratar e prevenir doenças, bem como aumentar a longevidade. Entre estes, destacam-se os alimentos funcionais, incluindo bebidas, ricos em compostos antioxidantes com ação benéfica à saúde já comprovada, como uvas e os seus derivados. Em vista disto, um estudo foi conduzido com o objetivo de identificar variedades de uvas destinadas ao consumo in natura e ao processamento que, além de atender aos requerimentos de qualidade comercial, apresentem altos teores de compostos com propriedades funcionais. O estudo foi conduzido na Embrapa Semiárido, utilizando cachos colhidos de plantas do Banco Ativo de Germoplasma de Videira, no Campo Experimental de Mandacaru, em Juazeiro-BA. Foram avaliadas, nos ciclos de produção dos primeiro e segundo semestres de 2011, 31 variedades de videira: A dona, Barbera, Benitaka, Blue Lake, Brasil, Cardinal, Christmas Rose, Estevão Marinho, Frankenthal, Gamay, Grenache, Isabel, Isabel Precoce, Isaura, Liberty, Máximo, Moscato Caillaba, Moscato de Hamburgo, Moscato Noir, Patrícia, Piratininga, Royalty, Saturn, Scarlet, Syrah 1 (clone procedente da França), Syrah 2 (clone procedente do Rio Grande do Sul), Tampa, Tannat, Tibouren, Traviú e Vênus. As variáveis analisadas nas bagas foram: cor da casca, resistência à força de compressão; sólidos solúveis (SS), acidez titulável (AT), relação SS/AT, taninos (diméricos, oligoméricos e poliméricos), polifenóis extraíveis totais (PET), antocianinas totais, flavonoides amarelos, taninos condensados, e atividade antioxidante pelos métodos DPPH e ABTS. Foi utilizada a distância generalizada de Mahalanobis para quantificar a divergência genética entre as variedades. Como estratégias de agrupamento, foram empregados UPGMA e análise de variáveis canônicas. A análise de agrupamento resultou na formação de cinco grupos de variedades. As variedades Cardinal e Royalty apresentaram grande diversidade genética entre si, podendo, portanto, serem inseridas em programas de melhoramento, a fim de explorar a variabilidade do Banco Ativo de Germoplasma da Embrapa Semiárido. As variedades Royalty e Máximo, indicadas para processamento, caracterizaram-se por altos teores de taninos (diméricos, oligoméricos e poliméricos), PET, antocianinas totais, flavonoides amarelos e atividade antioxidante total. Entre as variedades com diferentes aptidões, Tampa destacou-se com relação aos teores de antocianinas totais e flavonoides amarelos. As variáveis PET e taninos condensados apresentaram estreita correlação com a atividade antioxidante das uvas. Os resultados gerados constituem base para a formação de um banco de caracteres voltado para compostos bioativos em videira

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JardelBS_DISSERT.pdf: 1487162 bytes, checksum: 3c112dba9883bc8ce9ed34012482ca23 (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The study aimed to evaluate the geopropolis bees Plebeia aff. flavocincta produced in Rio Grande Norte- Brazil, through the study of pharmacological activities, sensory characteristics and physical and chemical requirements. Investigated the antioxidant activity by the DPPH (2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl), antibacterial, through the method of diffusion in agar and healing activity, by inducing experimental surgical wounds Rattus norvegicus in Berkenhout, 1769 Wistar. Quantified if the contents of total phenols and flavonoids through the Waterman and Mole methods, Woisky and Salatino, respectively. Samples of geopropolis showed consistency between the soft sticky resinous hard and hydroalcoholic extracts of geopropolis we identified 06 different types of scent, amber color, dark brown, green and colorless. The taste ranged from bitter to sweet and strong characteristic. All samples of the extracts showed up with liquid aspect, clear and smooth. The total phenolic content varied between 0,00 ± 0,00 and 9,4 ± 0,28% (m/m), the total flavonoid content of 0,0005 ± 0,0220 and 0,00003 ± 0,00037% (m/m). The antioxidant capacity of over 90% was observed in 05 samples. The extracts were found to be effective with respect to antimicrobial activity because of the 08 samples tested, 05 promoted inhibition zones ≥9mm front of all the strains tested. In wound healing assay of the experimental group, the base cream 20% geopropolis P. aff. flavocincta decreased the signs of inflammation and stimulate collagen production, accelerating the process of re-epithelialization, with no statistically significant difference in the areas of the wounds from the 9th day and complete healing on the 16th day. It follows that the geopropolis P. aff. flavocincta produced in semiarid RN, can be used as an alternative and natural principle in antibacterial activities, antioxidant and healing, characterized by a source of phenolic compounds / O estudo objetivou avaliar a geoprópolis de abelhas Plebeia aff. flavocincta produzida no Rio Grande do Norte-Brasil , através do estudo das atividades farmacológicas, características sensoriais e requisitos físico-químicos. Investigou-se a atividade antioxidante através do método DPPH (2,2-difenil-1-picril-hidrazilo), antibacteriana, através do método de difusão em ágar e atividades cicatrizantes, através da indução de feridas cirúrgicas experimentais em Rattus norvegicus Berkenhout, 1769, linhagem Wistar. Quantificou-se os teores de fenóis e flavonoides totais através dos métodos Waterman e Mole, Woisky e Salatino, respectivamente. As amostras de geoprópolis apresentaram consistência entre maleável pegajoso a rígido resinoso e nos extratos hidroalcoólicos de geoprópolis identificou-se 06 distintos tipos de aroma, coloração âmbar, marrom escuro, esverdeado e incolor. O sabor variou do amargo ao característico forte e adocicado. Todas as amostras dos extratos apresentaram-se com aspecto líquido, límpido e homogêneo. O teor de fenóis totais variou entre 0,00± 0,00 e 9,4± 0,28% (m/m), o teor de flavonoides totais 0,0005 ± 0,00003 e 0,0220 ± 0,00037% (m/m). A capacidade antioxidante acima de 90% foi observada em 05 amostras. Os extratos foram considerados eficazes no que tange a atividade antimicrobiana, pois das 08 amostras testadas, 05 promoveram halos de inibição ≥9mm frente todas às cepas testadas. No ensaio de cicatrização do grupo experimental, o creme base 20% de geoprópolis de P. aff. flavocincta diminuiu os sinais de inflamação e estimulou a produção de colágeno, acelerando o processo de re-epitelização, apresentando diferença estatística significativa nas áreas das feridas a partir do 9° dia e total cicatrização no 16° dia. Conclui-se que a geoprópolis da P. aff. flavocincta produzidas no semiárido do RN, pode ser usada como princípio alternativo e natural nas atividades antibacteriana, cicatrizante e antioxidante, caracterizando por ser fonte de compostos fenólicos

O presente trabalho investiga a aplicação do processo de extração com fluido supercrítico (EFS) para a obtenção de compostos fenólicos a partir de Butia capitata, coletado na Região Sul do Brasil. A planta, chamada popularmente de butiá, é uma espécie nativa da Argentina, Uruguai, Paraguai e Brasil. Os frutos do butiá são comestíveis e bastante apreciados pelas populações locais, que os consomem ao natural ou na forma de licores, geléias ou doces. Estudos recentes revelam que compostos fenólicos estão presentes nos frutos do butiá. Estes compostos merecem atenção por apresentarem atividade antioxidante, por prevenirem doenças cardiovasculares e reduzirem o risco de câncer. Atualmente existem diferentes formas para a obtenção de compostos fenólicos presentes em matrizes vegetais, porém muitas delas utilizam solventes orgânicos a altas temperaturas, o que deprecia o valor comercial dos extratos. Neste estudo, é utilizada uma tecnologia limpa, que tem como solvente o dióxido de carbono (CO2) em condições supercríticas. O CO2 é não-tóxico e não-inflamável, o que faz dele uma opção mais segura, quando comparado a outros solventes. Além disso, no estado supercrítico, o CO2 apresenta condições bastante favoráveis para a extração, como altas difusividades e massas específicas elevadas. Uma característica que deve ser ressaltada é a possibilidade de utilizar baixas temperaturas na extração, comparativamente aos processos que utilizam solventes líquidos, uma vez que os compostos fenólicos são termolábeis. Nos experimentos, foi utilizada apenas a polpa desidratada. O planejamento experimental foi elaborado avaliando a influência de três variáveis de processo em três níveis: pressão (150, 200 e 250 bar), temperatura (40, 50 e 60°C) e teor de cossolvente (1, 3 e 5% de etanol). Os extratos obtidos foram analisados em cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), sendo os rendimentos expressos em mg do composto identificado por CLAE /100g de polpa de butiá desidratada (PBD), e pelo método Folin-Ciocalteau com os rendimentos em compostos fenólicos totais (CFT) expressos em mg de rutina equivalente (RE)/100g PBD. Foram identificados cinco compostos majoritários nos extratos nas análises em CLAE. As maiores concentrações foram encontradas nas condições de 250 bar, 60°C e 5% de etanol. Os compostos identificados foram o ácido clorogênico (0,46mg/100g PBD), o ácido ferúlico (1,45mg/100g PBD), a rutina (3,47mg/100g PBD), a quercetina (0,90mg/100g PBD) e o canferol (1,93mg/100g PBD). Em termos de CFT, a melhor condição de extração foi de 200 bar, 50°C e 5% de etanol, resultando em 23,09mg RE/100g PBD. Os extratos também foram avaliados quanto ao poder de redução do radical DPPH•, pelo método IC50. O método fornece a quantidade necessária de extrato pra varrer 50% do radical. Como esperado, o extrato obtido na corrida experimental de maior rendimento em CFT apresentou maior atividade antioxidante (17,4 mg/mL), seguido da corrida experimental de maior rendimento em compostos fenólicos isolados (56,1 mg/mL) e, com menos atividade, o extrato obtido por solvente orgânico (80,0 mg/mL). / In this work it is investigated the application of supercritical fluid extraction to obtain phenolic compounds from Butia capitata, collected in southern Brazil. This plant, known popularly as butiá, is a native species in Argentina, Uruguay, Paraguay and Brazil. The edible fruits are popular and eaten raw or as liqueurs, jellies or jams. In recent studies, it is shown that phenolic compounds are present in the fruits of butiá. These compounds deserve attention because they have antioxidant activity, preventing cardiovascular disease and reducing the risk of cancer. There are different processes to obtain phenolic compounds from plant matrices, but many of them make use of organic solvents at high temperatures, which depreciates the extract value. In this study, it is used a clean technology, with carbon dioxide (CO2) as solvent in supercritical conditions. The CO2 is nontoxic and nonflammable that makes it a safer option than other solvents. Furthermore, in supercritical conditions the CO2 has favorable conditions for extraction, as high diffusivities and densities. A feature that should be emphasized is the possibility of using low temperatures in the extract, when compared to processes using liquid solvents, since the phenolic compounds are decomposed by high temperature. In the experiments only the dried pulp was used. The experimental design was developed to assess the influence of three process variables at three levels: pressure (150, 200 e 250 bar), temperature (40, 50 e 60°C) and cosolvent content (1, 3 e 5% of ethanol). The extracts were analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC), in which the yields were expressed in terms of mg of the identified phenolic compounds by HPLC/100g of dried pulp and by the Folin-Ciocalteau method, with yields, as total phenolic compounds, expressed in mg of rutin equivalent/100g of dried pulp. It were identified five majority phenolic compounds by HPLC. Its highest concentrations were found in the conditions of 250 bar, 60°C and 5% of cosolvent. The identified compounds were chlorogenic acid (0,46mg/100g of dried pulp), ferulic acid (1,45mg/100g of dried pulp), rutin (3,47mg/100g of dried pulp), quercetin (0,90mg/100g of dried pulp) and kaempferol (1,93mg/100g of dried pulp). In terms of total phenolic compounds, the best conditions were 200 bar, 50°C and 5% of cosolvent, which resulted in 23,09mg of rutin equivalent/100g of dried pulp. Also, the antioxidant activity of the extracts was measured by scavenging of the DPPH• radical, by the IC50 method. The method provides the necessary amount of extract to scavenging 50% of the radial. As expected, the extract obtained in experimental run with the highest yield in CFT showed a higher antioxidant activity (17.4 mg / mL), followed by the experimental run with the highest yield in phenolic compounds isolated (56.1 mg / mL), and, with less activity, the extract obtained by organic solvent (80.0 mg / mL).

Observa-se, atualmente, um aumento no interesse por alimentos funcionais e isto tem levado pesquisadores a investigar o potencial antioxidante de diversas frutas e de diversos compostos fenólicos presentes nos alimentos. As pesquisas a cerca da atividade antioxidante de pêssegos e nectarinas são escassas quando comparada às frutas vermelhas, apesar de aqueles frutos conterem importantes compostos fenólicos, como o ácido clorogênico, que apresenta efeitos potencialmente benéficos à saúde derivados de sua ação antioxidante. Entretanto, dados a respeito do seu conteúdo em frutas, vegetais, alimentos processados e sua distribuição em diferentes tecidos de plantas são escassos. O potencial antioxidante reativo total (TRAP) é um dos métodos mais utilizados para estimar a capacidade antioxidante de amostras in vitro. Entretanto, este método apresenta limitações quando a amostra não apresenta a fase lag (ou tempo de indução) necessária para obter o valor do TRAP pelo método original. Esse comportamento é obtido em algumas amostras e em substâncias isoladas, mas não em muitos extratos, os quais possuem diversas substâncias antioxidantes. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi otimizar e validar o método TRAP original e propor outro método de avaliação utilizando a Área Sob a Curva (AUC) e empregar essa ferramenta para avaliar o potencial antioxidante de extratos de pêssego (cascas e polpas) de três cultivares e do ácido clorogênico na mesma concentração encontrada no extrato. Para desenvolver esse trabalho, o primeiro passo foi otimizar e validar o método TRAP alternativo utilizando 2,2'-azo-bis (2- amidinopropano) (AAPH) como fonte de radical livre e um cintilador líquido para monitorar a quimiluminescência amplificada pelo luminol após a adição da amostra antioxidante. O método cromatográfico para quantificar o ácido clorogênico foi realizado usando uma coluna C-18 e sistema gradiente de eluição com acetonitrila-água-ácido trifluoracético. A detecção foi realizada por ultravioleta a 327 nm e a identificação do pico foi baseada no tempo de retenção, por coinjeções com a substância de referência e por LC-MS-MS. A principal condição estabelecida para o método TRAP foi a necessidade de estabilização do sistema (7000 segundos) antes da adição do antioxidante a ser testado. Todos os parâmetros da validação mostraram resultados satisfatórios: especificidade, linearidade (r > 0,99), precisão (intra e inter-dia – desvio padrão relativo menos que 5%), robustez e os limites de detecção (LOD) e quantificação (LOQ) foram baixos e similares para ambos os métodos de avaliação. O método cromatográfico para quantificar o ácido clorogênico apresentou boa linearidade (r > 0,99), repetibilidade (RSD < 2%) e recuperação (96,3%, RSD = 1,96%) e foi robusto para pequenas variações nos parâmetros testados (RSD < 2%). Os resultados obtidos usando a AUC mostraram que os extratos de cascas e polpas das cultivares Maciel, Leonense e Eldorado apresentaram atividade de seqüestro de radicais livres em todas as concentrações testadas, com uma ação concentraçãodependente. A inibição imediata da quimiluminescência e a duração desta inibição foram significativamente maiores no extrato em relação ao composto majoritário (ácido clorogênico) isolado e isto pode ser devido a um efeito sinérgico ou aditivo de outros antioxidantes presentes no extrato. O IC50 para o extrato de pêssego e ácido clorogênico foi 1,19 μg/mL e 8,43 μg/mL, respectivamente, quando o TRAP foi avaliado e um IC50 de 0,41 μg/mL e 1,89 μg/mL foi obtido quando o TAR (Reatividade Antioxidante Total) foi avaliado com o extrato de pêssego e com o ácido clorogênico, respectivamente. O ácido clorogênico apresentou uma importante contribuição ao potencial e à reatividade antioxidantes, mas os extratos do fruto contribuem com uma ação antioxidante mais duradoura. A principal vantagem da utilização da AUC para avaliar a atividade antioxidante é a maior precisão desse método e seu uso em amostras que não apresentam fase lag, como os extratos de pêssego, os quais apresentaram importante atividade antioxidante e, portanto, podem proporcionar vantagens à saúde de consumidores que ingerem essa fruta. / Increasing recent interest in nutraceuticals and functional foods has led researchers to investigate the antioxidant potential of several fruits and of several phenolic compounds. The researches about antioxidant activity of peaches and nectarines are scarce when compared to red fruits despite of they contain important phenolic compounds as chlorogenic acid, which present potential beneficial effect in humans derived from its antioxidant activity. However, data on its content in fruits, vegetables, foods processing, and its distribution in different tissues of plants is scarce. The total reactivity antioxidant potencial (TRAP) method is one of the methods most employed to estimate the antioxidant capacity of samples in vitro. However, this method can presents limitations when the sample does not present a lag phase (or induction time) which is necessary to get TRAP value by original method. This behavior is got in some samples and to isolated substances, but not in many extracts which have several antioxidants. In this context, the aim of this work was to optimize and validate the original TRAP method, and to propose another evaluation method utilizing the area under curve (AUC) and to use this tool to evaluate antioxidant potential and reactivity from peach extracts (peels and fleshes) from three cultivars and from chlorogenic acid in the same concentration founded in extract. To developed this work, the first step was to optimized and to validated the alternative method to get TRAP value using 2,2'-azo-bis (2-amidinopropane) (AAPH) as the free radical source and a liquid scintillator counter to monitored the luminol-enhanced chemiluminescence after addition of the antioxidant sample. The chromatographic method to quantifiy chlorogenic acid was performed using a C-18 column with acetonitrile-watertrifluoracetic acid gradient elution. The detection was carried out by UV at 327 nm and the peak identification was based on the retention times, by cochromatography with reference substances and by LC-MS-MS. The main condition established to TRAP method was the need for the stabilization of the system, at 7000 s, before the addition of the antioxidant to be tested. All validations parameters showed satisfactory results: specificity, linearity (r >0.99), precision (intra- and interassay - relative standard deviation were both less than 5 %), robustness, and the limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) were low and similar to both evaluation methods. The chromatographic method to quantify chlorogenic acid presented good linearity (> 0.99), good repeatability (RSD < 2 %) and accuracy (96.3%, RSD = 1.96% ) and was robust to small variations in parameters tested (RSD < 2 %). The results obtained using AUC showed that the extracts of peels and fleshes of Maciel, Leonense and Eldorado peach cultivars present free radical scavenging activity in all concentrations tested, with a concentration-dependent action. The immediate inhibition of chemiluminescence and the duration of this inhibition were significantly higher in the extracts than in the major compound (chlorogenic acid) alone and it can be due to a synergistic or additive effect of other antioxidants present in the extracts. The IC50 for peach extract and chlorogenic acid were 1.19 μg/mL and 8.43 μg/mL, respectively, when TRAP was evaluated and an IC50 of 0.41 μg/mL and 1.89 μg/mL was found when TAR was evaluated in peach extract and chlorogenic acid, respectively. Chlorogenic acid presented a good contribution to antioxidant reactivity and potential, but the fruit extracts provide better antioxidant action. The main advantage of utilization of AUC to evaluate antioxidant activity is the higher precision of this method and its use in samples that do not present lag phase, as peach extracts which presented important antioxidant activity and therefore, it may provide health-promoting advantages to consumers by intake of this fruit.

O Rio Grande do Sul se destaca por sua riqueza florística, entretanto, muitas espécies frutíferas permanecem desconhecidas, embora possuam potencial para se tornarem competitivas com as espécies já tradicionais. Neste sentido, este trabalho visa aprofundar a caracterização de alguns frutos nativos da região, estimulando a exploração desta biodiversidade, esclarecendo a potencialidade dos produtos e sua utilização em prol dos benefícios a saúde e o avanço da economia local e nacional. Para isso, foi realizada uma caracterização bromatológica e fitoquímica, como também foi verificado o potencial antioxidante de frutos nativos tais como: araticum (Rollinia sylvatica A. St.-Hil.), araçá (Psidium cattleyanum Sabine), butiá (Butia capitata Mart. (Becc.)), gabiroba (Campomanesia xanthocarpa O. Berg.), uvaia (Eugenia pyriformis Cambes.) e tuna (Cereus hildmannianus K. Schum.). A partir dos resultados, pode-se verificar que entre os frutos da família Myrtaceae, a guabiroba destacou-se por apresentar maior quantidade de compostos fenólicos (1495,27 mg/100g), carotenóides (54,35 μg/g), e vitamina C (5,44 mg/ g) como também um excelente potencial antioxidante (90,26 M eq. trolox/g de fruto fresco e 906,63 g de fruto fresco/g DPPH), indicando ser um fruto bastante promissor tanto para consumo in natura quanto para utilização tecnológica, visto que também obteve melhor relação SST/ATT (45,12). Entretanto, esse mesmo fruto se sobressaiu com os teores mais elevados de Al (31,27 μg/g) e Cr (1,80 μg/g), juntamente com a uvaia (1,56 μg/g), que demonstrou quantidades superiores de Fe (21,27 μg/g) e Zn (60,48 μg/g). A uvaia também se destacou pelo elevado teor de carotenóides (50,09 μg/g). O araçá, apesar de apresentar teores de compostos fenólicos e atividade antioxidantes inferiores à guabiroba, ainda assim apresentou-se superior a muitas frutas tradicionalmente consumidas. Quanto aos minerais analisados, o araçá amarelo se destacou pelo elevado teor de Na (828,78 μg/g) e o vermelho de Co (3,27 μg/g). Em relação ao outro grupo de frutos estudado, de famílias botânicas variadas, o butiá e a tuna apresentaram capacidade antioxidante superior à uvaia e à muitas espécies frutíferas tradicionalmente consumidas. O butiá também se destacou com teor mais elevado em carotenóides (39,6 μg/g) e nos minerais Cd (0,06 μg/g) e Ni (4,99 μg/g). A tuna apresentou maior conteúdo de compostos fenólicos totais (1337,28 mg/100g) e predomínio de Ba (7,97 μg/g), Bi (6,36 μg/g), Ga (6,02 μg/g), Mg (1215,54 μg/g ) e Mn (207,90 μg/g). O araticum se sobressaiu quanto a concentração de vitamina C (0,32 mg/g) e no resultado para SST/ATT (41,92), mostrando-se adequado tanto para o consumo in natura como para o processamento. Para este mesmo fruto ainda foi observada quantidade de Cu (80,38 μg/g) acima do recomendado, assim como também teve destaque com maiores concentrações de Pb (0,10 μg/g), Sr (28,95 μg/g), Ca (2579,50 μg/g) e K (11522,03 μg/g). / The Rio Grande do Sul State (Brazil) stands out for its richness flora, however, many fruit species remain unknown, although they have the potential to become competitive with the traditional species. Thus, this work aimed to deepen the characterization of some native fruits of the region, encouraging the exploitation of our biodiversity, preventing biopiracy, clarifying the potential of our products and their use in support of health benefits and advancement of the local and national economy. For this, we performed a phisicochemical and phytochemical characterization, and also was determined the potential of antioxidant custard apple (araticum) (Rollinia sylvatica A. St .- Hil.), Guava (araçá) (Psidium cattleyanum Sabine) coco palm (butiá) (Butia capitata Mart. (becc.)), gabiroba (Campomanesia xanthocarpa O. Berg.), uvaia (Eugenia pyriformis Cambes.) and tuna cactus (tuna) (Cereus hildmannianus K. Schum.). From the results, one can see that among the fruits of the Myrtaceae, the guabiroba stood out due to its greater quantity of phenolic compounds (1495.27 mg/100g), carotenoids (54.35 μg/g), and vitamin C (5.44 mg/g), as well as, an excellent antioxidant potential (90.26 M trolox/g and 906.63 g/g DPPH) could be a promising fruit for both fresh consumption and for use technology, since they also obtained better TSS/TTA ratio (45.12). However, the guabiroba showed the highest levels of Al (31.27 μg/g) and Cr (1.80 μg/g), together with uvaia (1.56 mg/g), which showed higher amounts Fe (21.27 μg/g) and Zn (60.48 μg/g). The uvaia also stood out for presenting a relevant carotenoid content (50.09 μg/g). Yellow guava, although showing a lower phenolic compound content and antioxidant activity then the guabiroba, nevertheless showed much higher values than many traditionally consumed fruit. Regarding minerals, the yellow guava stood out high concentrations of Na (828.78 μg/g) and the red guava Co (3.27 μg/g). The coco palm (25.96 trolox μM/g and 3847.54 g/g DPPH) and tuna cactus (19.61 trolox μM/g 3249.77 g/g DPPH) showed higher antioxidant capacity than many fruit species traditionally consumed. In the other group of fruits studied, in various plant families, the coco palm fruit stood out due to its elevate carotenoid content (39.6 μg/g) and minerals Cd (0.06 μg/g) and Ni (4.99 μg/g). The tuna cactus fruit showed the highest total phenolic compound content (1337.28 mg/100 g) and predominance of Ba (7.97 μg/g), Bi (6.36 μg/g), Ga (6.02 μg/g) Mg (1215.54 μg/g) and Mn (207.90 μg/g). Although the custard apple showed the highest vitamin C content (0.32 mg/g) showed the best result for the TSS/TTA ratio (41.92), and was thus adequate for both in natura consumption and for processing. This fruit was also observed amounts of Cu (80.38 μg/g) above the recommended, as was also stood out for its high concentrations of Pb (0.10 μg/g), Sr (28.95 μg/g), Ca (2579.50 μg/g) and K (11,522.03 μg/g).

Ilex paraguariensis A. St.-Hil., conhecida como erva-mate, é uma árvore nativa da América do Sul onde as folhas e pequenos ramos secos são usados para preparar o chimarrão. Possui uma composição química complexa, da qual pode-se vislumbrar muitas aplicações potenciais, que poderiam vir a ampliar o emprego da erva-mate e, conseqüentemente, do mercado para esta matériaprima. As folhas de I. paraguariensis contem xantinas, flavonóides, derivados do ácido cafeoilquínico e uma quantidade significativa de saponinas triterpenóides (cerca de 10%). Neste estudo foram investigados quimicamente extratos hidroetanólicos de I. paraguariensis, de suas frações, e de algumas substâncias de referência, como também os efeitos desses na atividade antioxidante, no acúmulo de gordura (TG) e na atividade lipolítica em cultura de células 3T3-L1. Neste sentido obtivemos extratos brutos hidroetanólicos de folhas verdes (EBV) e secas (EBS) maceradas, os quais foram fracionados originando 8 frações. Ácido ursólico, ácido clorogênico e rutina foram quantificados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Também foi realizada a determinação de fenóis por catequinas e pela precipitação por proteínas. A fração fenólicos da folha verde apresentou atividade antioxidante superior às substâncias de referência rutina e ácido clorogênico, enquanto que o ácido ascórbico apresentou a melhor atividade. O ensaio com brometo de 3- (4,5-dimetil)difenil tetrazólio (MTT) demonstrou que os extratos e padrões testados entre 50 μg/mL e 1000 μg/mL não foram citotóxicos para as células 3T3-L1. Dentre as frações testadas para a atividade na adipogênese, a fração resíduo aquoso da folha verde (RAV) apresentou maior inibição (24%) no teor de TG na concentração de 100 μg/mL. Dentre as substâncias de referência testadas, os melhores resultados foram obtidos com o ácido caféico nas concentrações de 300 μg/mL e da rutina na concentração de 100 μg/mL. Em relação à ativividade na lipólise, a fração RAV apresentou o melhor resultado nas concentrações de 50 e 75 μg/mL. Entre as substâncias de referência, o ácido gálico apresentou resultado significativo em relação à atividade antilipolítica nas concentrações de 500 e 1000 μg/mL. Para elucidar em qual estágio da adipogênese e da lipólise os extratos, frações e padrões atuam, são necessários a investigação da avaliação da ação desses extratos e frações através de análise de expressão de genes ligados a adipogênese e a atividade lipolítica. / Ilex paraguariensis A. St.-Hil., known as maté, is a native tree from South América which leaves and twigs are used to prepare the traditional beverage “chimarrão”. It has a complex chemical composition that might have many potential applications in order to increase the use of maté and then, in consequence, increase the market demand of this raw material. Leaves from I. paraguariensis have xanthines, flavonoids, cafeoylquinic acid derivatives and triterpenoid saponins (ca. 10%). Herein, it was investigated, both chemically and biologically, the hydroethanolic extracts of leaves from I. paraguariensis, its fractions, and some reference substances, as the antioxidant activity, the adipogenesis (TG) and lipolytic activities in 3T3-L1 cell culture. So, it was prepared hydroethanolic extracts of fresh (EBV) and dried leaves (EBS) by maceration, which submitted to further fractionation furnished 8 fractions. Ursolic acid, chlorogenic acid and rutin were determined in these samples by liquid chromatography (HPLC) Also, phenolic constituents were determined using catequines and protein precipitation methods. The phenolic fraction from fresh leaves presented better antioxidant activity than the tested reference substances (rutin and chlorogenic acid), while ascorbic acid presented the best activity. The MTT assay showed that the tested extracts and fractions among 50 μg/mL and 1000 μg/mL did not present citotoxicity to 3T3-L1 cells. Among the tested fractions to adipogenesis, the aqueous residue fraction from fresh leaves (RAV) presented best inibition (24%) of TG at 100 μg/mL. Among tested reference substances, cafeic acid at 300 μg/mL, and rutin at 100 μg/mL presented the best results. In relation to the lipolytic activity, the RAV fraction presented best results at 50 e 75 μg/mL and, among the tested reference substances, galic acid presented best results at 500 e 1000 μg/mL. In order to understand the mechanim of action of these fractions and reference substances at the adipogenesis and lipolysis further studies will be performed specially those about the influence on the gene expression.