RODRIGUES, Fernanda Nascimento. Estabelecimento de cultivo in vitro e estudo proteômico de calos caulinares e foliares de Artocarpus incisa L. 2016. 70 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-03T20:49:55Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_fnrodrigues.pdf: 1058982 bytes, checksum: 85e27505af970a6b39e312b8bc7ac445 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-09T22:36:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_fnrodrigues.pdf: 1058982 bytes, checksum: 85e27505af970a6b39e312b8bc7ac445 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-09T22:36:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_fnrodrigues.pdf: 1058982 bytes, checksum: 85e27505af970a6b39e312b8bc7ac445 (MD5) Previous issue date: 2016 / The species Artocarpus incisa, belonging to the Moraceae family, is a tree-sized plant with multiple applications in folk medicine. As a woody species, several difficulties are reported to its spread, such as the delay in its development and low germination rate. In vitro culture of plant tissue, in particular callus culture, can serve as a tool to overcome these difficulties and to facilitate obtaining the compounds of interest. This work was meant to provide the best conditions of callus formation as well as perform histological analysis and proteomic study of A. incisa calluses. For induction of callus, explants were used arising from leaf and shoot, which have been added to the nutritional formulation Woody Plant Medium (WPM), and applied in treatments containing PVP, activated charcoal, and different growth regulators (2,4-D, BAP, NAA and KIN). The results showed that the cultivation of shoot and leaf explants in medium with 0.1% activated charcoal, supplemented with 4.5 uM of 2,4-D and 4.4 uM BAP treatment was the best callus induction with an 88% percentage production. Quantification of proteins by Protein UV from NanoVue detected 15.97 ug protein / uL shoot extract; 20.07 ug protein / uL leaf extract; 0.75 ug protein / uL of shoot callus extract; and 16.85 ug protein / uL of leaf callus extract. The original tissues showed higher protein concentration than those in produced calluses, which can be explained by the differentiation of tissue. Histological analysis indicated that the cells of calluses were homogeneous and viable, with thin cell wall, and large amount of polysaccharide granules. The proteomic study by mass spectrometry led to the identification of peptides that have relation to previously reported plant proteins. We were able to detect proteins related to the defense (KM+, chitinase, catalase), metabolism (fructose-bisphosphate aldolase, glutamate carboxypeptidase) and cell signaling (calmodulin) in calluses, regardless of the origin of these. The work pioneered the proteomic study of A. incisa calluses, and is an initial step in understanding the biochemistry and physiology of the species under study. / A espécie Artocarpus incisa, pertencente à família Moraceae, é uma planta de porte arbóreo com várias aplicações na medicina popular. Por ser uma espécie lenhosa, várias dificuldades são relatadas para sua propagação, como a demora no seu desenvolvimento e a baixa taxa de germinação. A cultura in vitro de tecidos vegetais, em particular a cultura de calos, pode servir como uma ferramenta para contornar essas dificuldades e facilitar a obtenção dos compostos de interesse. O presente trabalho teve como intuito estabelecer as melhores condições de calogênese, bem como realizar a análise histológica e o estudo proteômico de calos de A. incisa. Para a indução dos calos, utilizou-se explantes advindos de folha e de caule, os quais foram adicionados à formulação nutritiva Woody Plant Medium (WPM), e aplicados em tratamentos contendo PVP, carvão ativado, e diferentes reguladores de crescimento (2,4-D, BAP, ANA e CIN). Os resultados mostraram que o cultivo de explantes foliares e caulinares em meio com carvão ativado 0,1%, suplementado com 4,5 µM de 2,4-D e 4,4 µM de BAP foi o melhor tratamento de indução de calos, com um percentual de produção de 88%. A quantificação de proteínas através do Protein UV do NanoVue detectou 15,97 µg de proteína/µL de extrato de caule; 20,07 µg de proteína/µL de extrato de folha; 0,75 µg de proteína/µL de extrato de calos caulinares; e 16,85 µg de proteína/µL de extrato de calos foliares. Os tecidos originais apresentaram maior concentração de proteínas do que os calos produzidos, o que pode ser explicado pela diferenciação do tecido. A análise histológica indicou que as células de calos se mostraram homogêneas e viáveis, com parede celular fina, e com grande quantidade de polissacarídeos em grânulos. O estudo proteômico, através de espectrometria de massas, levou à identificação de peptídeos que apresentam relação com proteínas vegetais já relatadas. Detectou-se proteínas relacionadas com a defesa (KM+, quitinase, catalase), metabolismo (frutose-bifosfato aldolase, glutamato-carboxipeptidase) e sinalização celular (calmodulina) nos calos, independente da origem destes. O trabalho foi pioneiro no estudo proteômico de calos de A. incisa, e é um passo inicial na compreensão da bioquímica e fisiologia da espécie em estudo.

VIEIRA NETO, Antonio Eufrásio. Caracterização estrutural da frutalina, uma lectina α-D-Galactose ligante de sementes de Artocarpus incisa e análise das suas bases moleculares de ligação a D-galactose. 2015. 88 f. Dissertação (mestrado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-03-22T17:47:01Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_aevneto.pdf: 1681651 bytes, checksum: 2953060bc810e7a4ab0f8a702a2583f8 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-04-28T20:57:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_aevneto.pdf: 1681651 bytes, checksum: 2953060bc810e7a4ab0f8a702a2583f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T20:57:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_aevneto.pdf: 1681651 bytes, checksum: 2953060bc810e7a4ab0f8a702a2583f8 (MD5) Previous issue date: 2016 / Lectins are proteins containing at least one non-catalytic domain that allows them to recognize and selectively bind a reversible specific glycans. Frutalin is a lectin obtained from Artocarpus incisa seeds, popularly known as breadfruit. The isolation was performed by affinity chromatography on column of Agarose-D-Galactose and their characterization shows that frutalin is a glycoprotein mainly α-D-galactose ligand, because it also recognizes epimers of α-D-mannose. It has 2.1% of carbohydrates and presents, in its SDS-PAGE profile, two protein bands with apparent molecular masses of 12 and 15 kDa, with an oligomeric protein, lying as tetramer only in alkaline pH, with apparent molecular mass of 60 kDa. Several masses around 16 kDa was observed in deconvoluted spectra in Mass Spectrometry, which confirms the presence of isoforms. This work shows the crystallization and analysis of data obtained by x-ray diffraction to determine the three-dimensional structure of this lectin, and that were performed crystallization trials of frutalin isolated from the mature seeds in the presence of ligand (D-galactose) and the way apo (no binders). The frutalin crystals have grown primarily in wells of pH 8.5 containing PEG as precipitant and ethylene glycol and the best crystals appeared after one week of maturation being diffracted to a maximum resolution of 1.81 Å. The best solution, for the space group, considering axes and planes of symmetry, has been obtained for the I2 space group, with the construction of an Rfactor of 38.6% and LLG = 19.9. The structure of frutalin presents in each monomeric unit, a symmetrical β-prism with three groups of four beta strands each. The carbohydrate recognition site is similar to the jacalin, and involves the N-terminus of the α chain, showing, in the region, a characteristic folding of the Moraceae family. The frutalin binding site cavity is near the N-terminus of the α chain formed by four key residues Gly25, Tyr146, Asp149, and Trp147. The bases of interaction with the binder are related to the number of interactions occurring between the C1 hydroxyl and Tyr146 residue, C3 hydroxyl and Gly25 residue, C4 hydroxyl and Asp149/Gly25 residues, and C6 hydroxyl and Tyr146/Trp147/Asp149 residues. Some hydroxyls of α-D-galactose also utilize interactions called structural waters, to seek stability in the carbohydrate recognition site. The large number of interactions agrees with the high affinity that frutalin has with galactose and its great capacity for agglutination, in addition to providing an analysis of the dimensions of the lectin in relation to the binder, which may justify the preference that frutalin tends to present by higher molecular weight glycoconjugates, and that happens due to the most fitting, and the greatest number of chemical interactions among a larger glycoconjugate. / As lectinas são proteínas que contêm pelo menos um domínio não catalítico que lhes permite reconhecer seletivamente e se ligar de uma forma reversível a glicanos específicos. A Frutalina é uma lectina obtida a partir das sementes de Artocarpus incisa, conhecida popularmente como fruta-pão. O isolamento foi realizado por cromatografia de afinidade em coluna de Agarose-D-Galactose e sua caracterização demonstrou que a Frutalina é uma glicoproteína, principalmente α-D-galactose ligante, mas que também reconhece α-D-Manose. Possui 2,1% de carboidratos e apresenta, em seu perfil de SDS-PAGE, duas bandas protéicas com massas moleculares aparentes de 12 e 15 kDa, sendo uma proteína oligomérica, encontrando-se como tetrâmero apenas em pH alcalino, com massa molecular aparente de 60 kDa. Massas diversas em torno de 16 kDa foram observadas nos espectros deconvoluídos em espectrometria de massas, o que corrobora a presença de isoformas. Este trabalho mostra a cristalização e análises dos dados obtidos por difração de raios-x para determinação da estrutura tridimensional desta lectina, e para isso foram realizados ensaios de cristalização da Frutalina isolada a partir das sementes maduras, na presença do ligante (α-D-galactose) e na sua forma apo (sem ligantes). Os cristais de Frutalina cresceram principalmente em poços de pH 8,5 contendo PEG como precipitante e etileno-glicol e os melhores cristais apareceram após uma semana de maturação, sendo difratados a uma resolução máxima de 1,81 Å. A melhor solução para o grupo espacial, considerando eixos e planos de simetria, foi obtida para o grupo espacial I2 com a obtenção de um Rfactor de 38,6% e LLG de 19,9. A estrutura da Frutalina apresenta, em cada unidade monomérica, um β prisma simétrico, com três grupos de 4 folhas beta, cada. O sítio de reconhecimento a carboidratos, é semelhante ao da Jacalina, e envolve o N-terminal da cadeia α, demonstrando, na região, um enovelamento característico de lectinas da família Moraceae. O sítio de ligação da Frutalina consiste numa cavidade próxima ao N-terminal da cadeia α, formada por quatro resíduos-chave: Gly25, Tyr146, Trp147 e Asp149. As bases de interação com o ligante são relacionadas ao número de interações, que ocorrem entre a hidroxila do C1 e o resíduo Tyr146, a hidroxila do C3 e o resíduo Gly25, a hidroxila do C4 e os resíduos de Gly25 e Asp149 e a hidroxila do carbono 6 aos resíduos Tyr146, Trp147 e Asp149. Algumas hidroxilas da α-D-Galactose também utilizam de interações com moléculas de água estruturais, para buscar estabilidade no sítio de reconhecimento a carboidratos. O grande número de interações corrobora com a grande afinidade que a Frutalina têm a galactose e à sua grande capacidade de aglutinação, além de proporcionar uma análise das dimensões da lectina em relação ao ligante, onde se visualiza que o sitio de ligação é muito maior que o açúcar, o que pode justificar a preferência que a Frutalina costuma apresentar por glicoconjugados de maior massa molecular, proporcionando maior encaixe, e maior número de interações químicas entre um glicoconjugado maior.

Este trabalho trata da purificação em escala preparativa por técnicas cromatográficas, determinação de seqüência primária parcial, caracterização espectroscópica por dicroísmo circular, fluorescência, infravermelho e investigação de atividades biológicas de duas lectinas ligantes de quitina dos extratos salinos de Artocarpus integrifolia, jaca, e Artocarpus incisa, fruta-pão. Nossos resultados revelaram que as lectinas quitina-ligantes das sementes de jaca e fruta-pão, jackina e frutackina respectivamente, são homólogas entre si, constituindo-se por monômeros de cerca de 14 kDa formados por três subunidades, unidas por pontes S-S. Elas possuem 62% de identidade entre si, são ricas em cisteínas, aminoácidos básicos e serinas e não possuem similares identificadas até o momento, podendo constituir um novo grupo de lectinas na superfamília de lectinas quitina-específicas. Os espectros de dicroísmo circular de jackina e frutackina são similares: ambas são proteínas de estrutura toda-beta, com máximo em torno de 230 nm e mínimo em torno de 214 nm, este último, bastante distorcido por estruturas desordenadas. Os espectros de fluorescência de jackina e frutackina apresentaram máximos de emissão acima de 340 nm, sugerindo que os N-terminais de duas das 3 cadeias de jackina e frutackina (onde os triptofanos estão localizados) estão expostos. Frente a condições extremas de pH e temperatura, monitoradas por CD e fluorescência, observou-se que a estrutura de jackina é vulnerável a pH ácido e termicamente estável. Quanto às atividades biológicas, jackina e frutackina mostraram atividade inibitória de crescimento para Saccharomyces cerevisiae; jackina também mostrou promoção de adesão da linhagem de células de eritroleucemia K562, atividade inibitória para Fusarium moniliforme na concentração de 2,25 mg/mL e atividade hemaglutinante frente a células sangüíneas humanas do sistema ABO e de coelhos, que não foi inibida nem por N-acetilglicosamina, indicando sua preferência por quitina ou seus fragmentos. / This work deals with the preparative-scale purification by chromatographic techniques, the partial primary sequence determination, the spectroscopic characterization by circular dichroism, fluorescence, FT-IR and the investigation of biological activities of two novel chitin-binding lectins from the saline extracts of the seeds of Artocarpus integrifolia, jackfruit, and Artocarpus incisa, breadfruit. Our results revealed that the chitin-binding lectins from jackfruit and breadfruit, jackin and frutackin respectively, are homologous to each other, consiting of monomers of 14 kDa, made up of 3 subunits, linked by S-S bridges. They have 62% of identity between each other; they are rich in cysteines, serines and basic amino acids and they are no homologous to any other known protein, probably constituting a new group of lectins in the chitin-binding lectin superfamily. The CD spectra of jackin and frutackin are similar: both present a beta profile spectra, presenting a maximum about 230 nm and a minimum around 214 nm, this later one, distorted by unordered structures. The fluorescence spectra of jackin and frutackin presented maxima above 340 nm, suggesting that the N-terminals of the 2 up 3 chains of jackin and frutackin (where the tryptophans are) are exposed. Regarding the pH and temperature exposure, monitored by CD and fluorescence, it was observed that the structure of jackin is vulnerable to acid pH and thermally stable. When considered the biological activities, jackin and frutackin presented growth inhibition activity towards Saccharomyces cerevisiae; jackin also promoted the adhesion of the erythroleukemic cell line K562, presented growth inhibition activity towards Fusarium moniliforme at 2,25mg/mL and hemaggluting activity towards rabbit and human red cells from the system ABO, that was not inhibited even by N-acetilglucosamine, suggesting itspreference by oligomers of N-acetilglicosamine or chitin.

Este trabalho trata da purificação em escala preparativa por técnicas cromatográficas, determinação de seqüência primária parcial, caracterização espectroscópica por dicroísmo circular, fluorescência, infravermelho e investigação de atividades biológicas de duas lectinas ligantes de quitina dos extratos salinos de Artocarpus integrifolia, jaca, e Artocarpus incisa, fruta-pão. Nossos resultados revelaram que as lectinas quitina-ligantes das sementes de jaca e fruta-pão, jackina e frutackina respectivamente, são homólogas entre si, constituindo-se por monômeros de cerca de 14 kDa formados por três subunidades, unidas por pontes S-S. Elas possuem 62% de identidade entre si, são ricas em cisteínas, aminoácidos básicos e serinas e não possuem similares identificadas até o momento, podendo constituir um novo grupo de lectinas na superfamília de lectinas quitina-específicas. Os espectros de dicroísmo circular de jackina e frutackina são similares: ambas são proteínas de estrutura toda-beta, com máximo em torno de 230 nm e mínimo em torno de 214 nm, este último, bastante distorcido por estruturas desordenadas. Os espectros de fluorescência de jackina e frutackina apresentaram máximos de emissão acima de 340 nm, sugerindo que os N-terminais de duas das 3 cadeias de jackina e frutackina (onde os triptofanos estão localizados) estão expostos. Frente a condições extremas de pH e temperatura, monitoradas por CD e fluorescência, observou-se que a estrutura de jackina é vulnerável a pH ácido e termicamente estável. Quanto às atividades biológicas, jackina e frutackina mostraram atividade inibitória de crescimento para Saccharomyces cerevisiae; jackina também mostrou promoção de adesão da linhagem de células de eritroleucemia K562, atividade inibitória para Fusarium moniliforme na concentração de 2,25 mg/mL e atividade hemaglutinante frente a células sangüíneas humanas do sistema ABO e de coelhos, que não foi inibida nem por N-acetilglicosamina, indicando sua preferência por quitina ou seus fragmentos. / This work deals with the preparative-scale purification by chromatographic techniques, the partial primary sequence determination, the spectroscopic characterization by circular dichroism, fluorescence, FT-IR and the investigation of biological activities of two novel chitin-binding lectins from the saline extracts of the seeds of Artocarpus integrifolia, jackfruit, and Artocarpus incisa, breadfruit. Our results revealed that the chitin-binding lectins from jackfruit and breadfruit, jackin and frutackin respectively, are homologous to each other, consiting of monomers of 14 kDa, made up of 3 subunits, linked by S-S bridges. They have 62% of identity between each other; they are rich in cysteines, serines and basic amino acids and they are no homologous to any other known protein, probably constituting a new group of lectins in the chitin-binding lectin superfamily. The CD spectra of jackin and frutackin are similar: both present a beta profile spectra, presenting a maximum about 230 nm and a minimum around 214 nm, this later one, distorted by unordered structures. The fluorescence spectra of jackin and frutackin presented maxima above 340 nm, suggesting that the N-terminals of the 2 up 3 chains of jackin and frutackin (where the tryptophans are) are exposed. Regarding the pH and temperature exposure, monitored by CD and fluorescence, it was observed that the structure of jackin is vulnerable to acid pH and thermally stable. When considered the biological activities, jackin and frutackin presented growth inhibition activity towards Saccharomyces cerevisiae; jackin also promoted the adhesion of the erythroleukemic cell line K562, presented growth inhibition activity towards Fusarium moniliforme at 2,25mg/mL and hemaggluting activity towards rabbit and human red cells from the system ABO, that was not inhibited even by N-acetilglucosamine, suggesting itspreference by oligomers of N-acetilglicosamine or chitin.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-11-26T08:33:48Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marina alves Coelho Silva - 2015.pdf: 1699881 bytes, checksum: 12e78126a8f1072850d257b422de3155 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-27T07:19:50Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marina alves Coelho Silva - 2015.pdf: 1699881 bytes, checksum: 12e78126a8f1072850d257b422de3155 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-27T07:19:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marina alves Coelho Silva - 2015.pdf: 1699881 bytes, checksum: 12e78126a8f1072850d257b422de3155 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-04-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Was evaluated the hepatoprotective effect of hydro alcoholic extract of the agroindustrial waste of jaboticaba-paulista (HEJB (Myrciaria cauliflora O. Berg, Myrtaceae) and ethanolic extract of breadfruit leaves (EEBL) (Artocarpus altilis (Park.) Fosberg, Moraceae) in experimental model of hepatotoxicity carbon tetrachloride (CCl4). The jaboticaba tree is native to Brazil and largely grown. It has a potential antioxidant, with phenolic compounds present primarily in the peel of fruit, which is a waste from the manufacturing process jaboticaba wine. Breadfruit is originating to the Pacific Islands and is distributed throughout the world. Fruits and leaves of this plant species have compounds with pharmacological properties, such as flavonoids. Were used Swiss mice, male, divided in eight groups, with five being the control groups (I: Baseline, received no treatment; II: olive oil, 10 mL/kg, i.p.; III: Propylene glycol 50%, 10 ml/kg, v.o. IV: 0.3% CCl4 in olive oil 10 mL/kg, i.p., negative control; V: Silymarin 200 mg/kg, v.o., positive control) and four treated groups, v.o. (VI: HEJB 250 mg/kg, VII: HEJB 500 mg/kg, VIII: EEBL: 250 mg/kg). Except groups I and II, all others received 0.3% CCl4 in olive oil on the 7th day of treatment, 2 hours after administration v.o. Were monitored the weight gain and no had significant difference between groups. At the end of the treatments, blood and liver of the animals were removed for biochemical analysis, after the animals were submitted to euthanasia and macroscopic evaluation of organs and cavities. The potential hepatoprotective and antioxidant activity of plant extracts were observed through the hepatic enzyme L-alanine aminotransferase (ALT), L-aspartate aminotransferase (AST), glutathione peroxidase (GPx ), glutathione reductase (GR) and catalase (CAT) and the dosage of malondialdehyde (MDA) - which required validation analytical HPLC-PDA. The bioanalytical method has a linear, selective, accurate, precise, and without interfering with LOQ 0.5 nmol/mL and LOD of 0.25 nmol/ml, suitable for the dosage of MDA in plasma and liver. There was a decrease of MDA in liver tissue, for the two extracts, as well as decreased levels of AST / ALT and GR to post-treatment with EHJB. The agroindustrial waste of jaboticaba fruit peel and the ethanolic extract of breadfruit leaves showed antioxidant activity in vivo. / Estudou-se o efeito hepatoprotetor do extrato hidroalcólico do resíduo agroindustrial de Jabuticaba-paulista (EHJB) (Myrciaria cauliflora O. Berg, Myrtaceae) e do extrato etanólico das folhas de fruta-pão (EEFP) (Artocarpus altilis (Park.). Fosberg, Moraceae) em modelo experimental de hepatotoxicidade por tetracloreto de carbono (CCl4). A jabuticabeira é planta frutífera, nativa do Brasil e muito cultivada. Possui um potencial antioxidante, com compostos fenólicos presentes principalmente na casca dos frutos, que é um dos resíduos do processo de fabricação do vinho de jabuticaba. A fruta-pão é originária das Ilhas do Pacífico e se encontra distribuída por todo o mundo. Frutos e folhas, dessa espécie vegetal, possuem compostos com propriedades farmacológicas, tais como flavonóides. Utilizaram-se camundongos Swiss, machos, divididos em 8 grupos, sendo 5 grupos controles (I: Basal, não recebeu tratamento; II: Azeite, 10 mL/kg, i.p.; III: Propilenoglicol 50%, 10 mL/kg,v.o. IV: CCl4 0,3% em azeite, 10 mL/kg,i.p., controle negativo; V: Silimarina 200 mg/kg, v.o., controle positivo) e quatro grupos tratados, v.o. (VI: EHJB 250 mg/kg; VII: EHJB 500 mg/kg; VIII: EEFP: 250 mg/kg). Exceto os grupos I e II, todos os outros receberam CCl4 0,3% em azeite, no 7º dia de tratamento, 2 horas após as administrações, v.o. Monitorou-se a evolução ponderal e não houve diferença significativa entre os grupos. Ao final dos tratamentos, sangue e fígado dos animais foram colhidos para análise bioquímica, posteriormente estes foram submetidos a eutanásia e avaliação macroscópica dos órgãos e cavidades. O potencial hepatoprotetor e a atividade antioxidante dos extratos vegetais foram observados através da dosagem das enzimas hepáticas L-alanina aminotransferase (ALT), L-aspartato aminotransferase (AST), glutationa peroxidase (GPx), glutationa redutase (GR) e catalase (CAT), assim como da dosagem de malondialdeído (MDA) – que necessitou de validação analítica em HPLC-PDA. O método bioanalítico apresentou-se linear, seletivo, exato, preciso e sem interferentes, com LIQ de 0,5 nmol/mL e LD de 0,25 nmol/mL, adequados para a dosagem de MDA no plasma e no fígado. Houve redução de MDA no tecido hepático, para os dois extratos, assim como houve redução dos níveis de AST/ALT e GR para EHJB pós-tratamento. Os resíduos agroindustriais de cascas de frutos de jabuticaba e o extrato etanólico de folhas de fruta-pão apresentaram atividade antioxidante in vivo.

ARAUJO, João Ronielly Campelo. Efeito antidepressivo-símile da frutalina, lectina α-d-galactose ligante, isolada de sementes de Artocarpus incisa L., em camundongos. 2016. 79 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-04-03T18:22:06Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_jrcaraújo.pdf: 2086872 bytes, checksum: 3373789680d8de097182e323441225d7 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-04-04T22:36:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_jrcaraújo.pdf: 2086872 bytes, checksum: 3373789680d8de097182e323441225d7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T22:36:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_jrcaraújo.pdf: 2086872 bytes, checksum: 3373789680d8de097182e323441225d7 (MD5) Previous issue date: 2016 / Frutalin (FTL), an α-D-galactose-binding lectin isolated from breadfruit seeds (Artocarpus incisa L.), has a range biological activities, but has not been conclusively shown to act on CNS disorders. In this study we evaluated the effect of FTL on mouse behavior. Mice (n=6/group) were treated with FTL (0.25; 0.5 or 1 mg/kg; i.p.) or vehicle (NaCl 0.9 %;10 mL/kg; i.p.) and submitted to hole-board (HBT), elevated plus maze (PMT), open field (OFT), tail suspension (TST) and forced swimming (FST) tests. In a second set of experiments, yohimbine (1 mg/kg), ketamine (0.1 mg/kg), L-NAME (10 mg/kg) or methylene blue (10 mg/kg) were administered (i.p.) 30 min before FTL (0.5 mg/kg). In order to evaluate the subchronic effect of FTL, animals were injected with FTL (0.5 mg/kg) or vehicle for 7 days and submitted to FST on the first and last day of treatment. A molecular docking was conducted on the NOS enzyme and NMDA receptor. No changes were observed in HBT and OFT results. The smallest dose of FTL (0.25 mg/kg) was associated with an increase in the number of entries into closed arms in PMT (p<0.05). FTL reduced immobility in TST (0.25 and 0.5 mg/kg; p<0.05) and FST (0.25 mg/kg; p<0.05 and 0.5 mg/kg; p<0.01). In FST, the effect of FTL was dependent on carbohydrate interaction and protein structure integrity and it was reduced by ketamine (NMDA antagonist), L-NAME (non-selective NOS inhibitor) and methylene blue (soluble guanylyl cyclase inhibitor). The antidepressant-like effect remained after subchronic treatment. Matching the results of the experiment in vivo, the docking study indicated an interaction between FTL and NOS enzyme and NMDA receptor. In conclusion, FTL was found to have an antidepressant-like effect mediated by the NMDA receptor/NO/cGMP pathway. / Frutalina (FTL), uma lectina α-D-galactose ligante, obtida de sementes de Artocarpus incisa L., tem apresentado várias atividades biológicas, como ação na modulação de alvos moleculares e reversão de neurotoxicidade in vitro, porém, há pouca evidência de seu efeito sobre doenças no Sistema Nervoso Central (SNC). Diante disto, este estudo avaliou os efeitos neurocomportamentais da FTL em camundongos. Os camundongos (n = 6 / grupo) foram tratados com FTL (0,25; 0,5 ou 1 mg/kg; i.p.) ou Veículo (NaCl 0,9 % 10 mL/kg; i.p.; Controle) e submetidos aos testes da placa perfurada, labirinto em cruz elevado, campo aberto, suspensão pela cauda ou natação forçada. Num segundo conjunto de experimentos, a ioimbina (1 mg/kg), cetamina (0,1 mg/kg), L-NAME (10 mg/kg) ou azul de metileno (10 mg/kg) foram administrados (i.p.) 15 min antes da FTL (0,5 mg/kg) e os animais foram submetidos ao teste de natação forçada. Verificou-se também se o efeito de FTL no teste de natação forçada era dependente da integridade estrutural e capacidade de interação a carboidratos. A fim de avaliar o efeito subcrônico da FTL, os camundongos receberam FTL (0,5 mg/kg) ou veículo durante 7 dias e submetidos ao teste de natação forçada no primeiro e último dia de tratamento. Foi realizado docking molecular da FTL com NOS e receptor NMDA. Os resultados mostraram que não houve alterações neurocomportamentais dos camundongos nos testes de placa perfurada e campo aberto. FTL na dose mais baixa (0,25 mg/kg) aumentou o número de entradas nos braços fechados no teste do labirinto em cruz elevado, permitindo sugerir um possível efeito do tipo ansiogênico. FTL reduziu o tempo de imobilidade nos testes de suspensão pela cauda (0,25 e 0,5 mg/kg; p <0,05) e natação forçada (0,25 mg/kg, p <0,05 e 0,5 mg/kg; p <0,01) apresentando um efeito antidepressivo-símile. A redução da imobilidade provocada pela FTL foi prevenida pela Cetamina (antagonista de receptores NMDA), L-NAME (inibidor não-seletivo da NOS) e azul de metileno (inibidor da cGMP), mas não pela Ioimbina (antagonista α2-adrenérgico). A desnaturação da FTL, bem como a sua associação à galactose, também preveniu o efeito antidepressivo-símile da lectina. O efeito antidepressivo-símile da FTL permaneceu o mesmo após tratamento subcrônico (7 dias) e não houve alteração no peso dos animais. Corroborando com os resultados in vivo, os estudos de docking molecular demonstraram que a FTL interage com a enzima NOS e receptor NMDA. Nossos resultados demonstraram que a FTL possui efeito antidepressivo-símile mediado por receptores NMDA e via L-Arginina/NO/cGMP, além de ser dependente de sua integridade estrutural e capacidade de ligação a α-D-galactose.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-06-14T15:32:34Z No. of bitstreams: 1 Ana Maria da Silva.pdf: 874235 bytes, checksum: 1868e79f340f79e47346b1826fa9728d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-14T15:32:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Maria da Silva.pdf: 874235 bytes, checksum: 1868e79f340f79e47346b1826fa9728d (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The introduction of exotic species it is an extremely important question, since it exotic species has great potential to become invasive causing serious consequences to ecosystems, such as the inhibition of self-regeneration and biodiversity loss. Faced the problem of invasiveness, This study aimed to verify the influence of exotic Artocarpus heterophyllus L. (jackfruit) on the natural regeneration of native species in an area of Atlantic Forest. This was developed in the forest of the Botanical Garden of Recife. For vegetation sampling was selected an excerpt of forest that had a better conservation status (Environment without exotic) and the other with the presence of A. heterophyllus (Environment with exotic). In each environment were plotted 30 permanent plots of 1x1m, interspaced in 1m. In environment with exotic, the plots were plotted below of the treetops matrices of A. heterophyllus. In both environments, we included all individuals of diverse habits with height less than or equal to 100 cm. The results show that the values of birth and mortality were significantly different between environments; the number of regenerating native exotic species in the environment tends to reduce the presence of A. heterophyllus and that this species inhibits the regeneration of native community. It is concluded that A. heterophyllus, by cause restrictions for the establishment of native species, exerts strong interspecific competition in excerpts with the presence of the species, which may contribute to the progressive loss of biodiversity of Atlantic forest of Botanical Garden of Recife. / A introdução de espécies exóticas trata-se de uma questão extremamente importante, uma vez que espécies exóticas possui grande potencial de torna-se invasora acarretando graves consequências aos ecossistemas, a exemplo da inibição da auto-regeneração e perda da biodiversidade. Diante da problemática da invasibilidade, este estudo objetivou verificar a influência da exótica Artocarpus heterophyllus L. (jaqueira) sobre a regeneração natural de espécies nativas em área de floresta atlântica. Este foi desenvolvido na mata do Jardim Botânico do Recife (JBR). Para amostragem da vegetação foi selecionado um trecho de mata que apresentava melhor status de conservação (ambiente sem exótica) e outro com a presença de A. heterophyllus (ambiente com exótica). Em cada ambiente foram plotadas 30 parcelas permanentes de 1x1m, interespaçadas em 1m. No ambiente com exótica, as parcelas foram plotadas abaixo das copas das árvores matrizes de A. heterophyllus. Nos dois ambientes foram incluídos todos os indivíduos dos diversos hábitos com altura menor ou igual a 100 cm. Os resultados mostram que os valores de natalidade e mortalidade foram significativamente diferentes entre os ambientes; que o número de regenerantes de espécies nativas no ambiente com exótica tende a reduzir na presença de A. heterophyllus e que esta espécie atua inibindo a regeneração da comunidade nativa. Conclui-se que A. heterophyllus, por causar restrições ao estabelecimento das espécies nativas, exerce forte competição interespecífica nos trechos com a presença da espécie, o que pode contribuir para a perda progressiva da biodiversidade da floresta atlântica do JBR.

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CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As lectinas sÃo proteÃnas que contÃm pelo menos um domÃnio nÃo catalÃtico que lhes permite reconhecer seletivamente e se ligar de uma forma reversÃvel a glicanos especÃficos. A Frutalina à uma lectina obtida a partir das sementes de Artocarpus incisa, conhecida popularmente como fruta-pÃo. O isolamento foi realizado por cromatografia de afinidade em coluna de Agarose-D-Galactose e sua caracterizaÃÃo demonstrou que a Frutalina à uma glicoproteÃna, principalmente &#945;-D-galactose ligante, mas que tambÃm reconhece &#945;-D-Manose. Possui 2,1% de carboidratos e apresenta, em seu perfil de SDS-PAGE, duas bandas protÃicas com massas moleculares aparentes de 12 e 15 kDa, sendo uma proteÃna oligomÃrica, encontrando-se como tetrÃmero apenas em pH alcalino, com massa molecular aparente de 60 kDa. Massas diversas em torno de 16 kDa foram observadas nos espectros deconvoluÃdos em espectrometria de massas, o que corrobora a presenÃa de isoformas. Este trabalho mostra a cristalizaÃÃo e anÃlises dos dados obtidos por difraÃÃo de raios-x para determinaÃÃo da estrutura tridimensional desta lectina, e para isso foram realizados ensaios de cristalizaÃÃo da Frutalina isolada a partir das sementes maduras, na presenÃa do ligante (&#945;-D-galactose) e na sua forma apo (sem ligantes). Os cristais de Frutalina cresceram principalmente em poÃos de pH 8,5 contendo PEG como precipitante e etileno-glicol e os melhores cristais apareceram apÃs uma semana de maturaÃÃo, sendo difratados a uma resoluÃÃo mÃxima de 1,81 Ã. A melhor soluÃÃo para o grupo espacial, considerando eixos e planos de simetria, foi obtida para o grupo espacial I2 com a obtenÃÃo de um Rfactor de 38,6% e LLG de 19,9. A estrutura da Frutalina apresenta, em cada unidade monomÃrica, um &#946; prisma simÃtrico, com trÃs grupos de 4 folhas beta, cada. O sÃtio de reconhecimento a carboidratos, à semelhante ao da Jacalina, e envolve o N-terminal da cadeia &#945;, demonstrando, na regiÃo, um enovelamento caracterÃstico de lectinas da famÃlia Moraceae. O sÃtio de ligaÃÃo da Frutalina consiste numa cavidade prÃxima ao N-terminal da cadeia &#945;, formada por quatro resÃduos-chave: Gly25, Tyr146, Trp147 e Asp149. As bases de interaÃÃo com o ligante sÃo relacionadas ao nÃmero de interaÃÃes, que ocorrem entre a hidroxila do C1 e o resÃduo Tyr146, a hidroxila do C3 e o resÃduo Gly25, a hidroxila do C4 e os resÃduos de Gly25 e Asp149 e a hidroxila do carbono 6 aos resÃduos Tyr146, Trp147 e Asp149. Algumas hidroxilas da &#945;-D-Galactose tambÃm utilizam de interaÃÃes com molÃculas de Ãgua estruturais, para buscar estabilidade no sÃtio de reconhecimento a carboidratos. O grande nÃmero de interaÃÃes corrobora com a grande afinidade que a Frutalina tÃm a galactose e à sua grande capacidade de aglutinaÃÃo, alÃm de proporcionar uma anÃlise das dimensÃes da lectina em relaÃÃo ao ligante, onde se visualiza que o sitio de ligaÃÃo à muito maior que o aÃÃcar, o que pode justificar a preferÃncia que a Frutalina costuma apresentar por glicoconjugados de maior massa molecular, proporcionando maior encaixe, e maior nÃmero de interaÃÃes quÃmicas entre um glicoconjugado maior. / Lectins are proteins containing at least one non-catalytic domain that allows them to recognize and selectively bind a reversible specific glycans. Frutalin is a lectin obtained from Artocarpus incisa seeds, popularly known as breadfruit. The isolation was performed by affinity chromatography on column of Agarose-D-Galactose and their characterization shows that frutalin is a glycoprotein mainly &#945;-D-galactose ligand, because it also recognizes epimers of &#945;-D-mannose. It has 2.1% of carbohydrates and presents, in its SDS-PAGE profile, two protein bands with apparent molecular masses of 12 and 15 kDa, with an oligomeric protein, lying as tetramer only in alkaline pH, with apparent molecular mass of 60 kDa. Several masses around 16 kDa was observed in deconvoluted spectra in Mass Spectrometry, which confirms the presence of isoforms. This work shows the crystallization and analysis of data obtained by x-ray diffraction to determine the three-dimensional structure of this lectin, and that were performed crystallization trials of frutalin isolated from the mature seeds in the presence of ligand (D-galactose) and the way apo (no binders). The frutalin crystals have grown primarily in wells of pH 8.5 containing PEG as precipitant and ethylene glycol and the best crystals appeared after one week of maturation being diffracted to a maximum resolution of 1.81 Ã. The best solution, for the space group, considering axes and planes of symmetry, has been obtained for the I2 space group, with the construction of an Rfactor of 38.6% and LLG = 19.9. The structure of frutalin presents in each monomeric unit, a symmetrical &#946;-prism with three groups of four beta strands each. The carbohydrate recognition site is similar to the jacalin, and involves the N-terminus of the &#945; chain, showing, in the region, a characteristic folding of the Moraceae family. The frutalin binding site cavity is near the N-terminus of the &#945; chain formed by four key residues Gly25, Tyr146, Asp149, and Trp147. The bases of interaction with the binder are related to the number of interactions occurring between the C1 hydroxyl and Tyr146 residue, C3 hydroxyl and Gly25 residue, C4 hydroxyl and Asp149/Gly25 residues, and C6 hydroxyl and Tyr146/Trp147/Asp149 residues. Some hydroxyls of &#945;-D-galactose also utilize interactions called structural waters, to seek stability in the carbohydrate recognition site. The large number of interactions agrees with the high affinity that frutalin has with galactose and its great capacity for agglutination, in addition to providing an analysis of the dimensions of the lectin in relation to the binder, which may justify the preference that frutalin tends to present by higher molecular weight glycoconjugates, and that happens due to the most fitting, and the greatest number of chemical interactions among a larger glycoconjugate.