Made available in DSpace on 2016-04-28T14:56:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Henrique Trevisan.pdf: 1994656 bytes, checksum: b5a115311e3e101d5598cd132ea99a14 (MD5) Previous issue date: 2010-05-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / This study was conducted in two stages, with different experiments and culminating in two chapters. The first focuses on the evaluation of the influence of the complex technology used in transgenic soybean in the biological aspects of Urbanus acawoios (Williams, 1926) (Lepidoptera: Hesperiidae). Four plots of soybeans were grown, three of genetically modified soybean cultivar P98R62 (soybean GMRR) and with a conventional soybean cultivar BRS 232 (Soybean conv.). Only two plots with transgenic herbicide were applied at a concentration of 1200 g ai ha-1, the Roundup Ready ? and Roundup ? WG, both applied twice, 25 and 45 days after emergence. 125 eggs coming from a butterfly rearing in the open air, and from the same female, were used to assembly the five treatments each with 25 larvae, which are made of larvae fed on leaves of Soybean conv., Soy GMRR without herbicide application, soy GMRR treated with glyphosate in Roundup Ready ?, GMRR treated with glyphosate in Roundup ? WG and leaves of C. fairchildiana. The mortality rate of larvae was higher in treatments containing soy GMRR, with or without herbicide, when compared with the mortality of larvae fed with C. fairchildiana and soybean conv. The pupae originated from larvae fed on soy conv. and C. fairchildiana were shown 100% viable, as coming from the GMRR treated with Roundup Ready ?, Roundup ? WG and without herbicide, were shown up 84.6%, 87.5% and 88.2% viable, respectively. The second chapter deals with an assessment of the influence of pollen from transgenic corn resistant to insects on Galleria mellonella (Linnaeus, 1758) (Lepidoptera: Pyralidae). This is a lepidopteran pyralids associated with beehives; their larvae feed on old wax, pollen, exuviae, etc. There are conflicting opinions about its safety to bees, beekeeping and therefore, to consider a pest of apiaries, others to classify as an important organism in the recycling of organic matter inside the hive. This last view may be considered beneficial to bees. Within this context, the adoption of transgenic crops resistant to insects by expressing the Bt protein from Bacillus thuringiensis, may cause disease of the larvae of G. mellonella. Bees to collect pollen and store in the hives can expose this lepidopteran to intoxication by Bt proteins present in pollen. This study aims to evaluate the influence of Bt corn pollen on G. mellonella and then trace a discussion about the possibility of the condition field of Lepidoptera. For this a bioassay was performed, where it was offered to the larvae pollen Bt, conventional and commercial. The duration of the larval stage of G. mellonella was affected by the supply of pollen, and the corn by conventional or transgenic, provided the biggest records. Mortality was higher in individuals fed with transgenic pollen and bee wax, but did not differ from other foods, when pollen from Bt was offered honeycomb of Apis mellifera. The width and length of larvae originated from larvae fed with bee wax added to conventional or transgenic pollen were lower than other treatments. The corn pollen, conventional or GM alone is a less suitable food for the development of G. mellonella, in relation to a diet consisting of pollen from various plants. / O presente trabalho foi realizado em duas etapas, com experimentais distintos, e que resultaram em dois cap?tulos. O primeiro versa sobre a avalia??o da influ?ncia do complexo tecnol?gico empregado na soja transg?nica, em aspectos biol?gicos de Urbanus acawoios (Williams, 1926) (Lepidoptera: Hesperiidae). Quatro canteiros de soja foram cultivados, sendo tr?s com soja geneticamente modificada cultivar P98R62 (soja GMRR) e um com soja convencional, cultivar BRS 232 (soja conv.). Somente em dois canteiros com plantas transg?nicas foi aplicado o herbicida na concentra??o de 1200 g ia ha-1, nas formula??es Roundup Ready? e Roundup WG?, ambos aplicados duas vezes, aos 25 e 45 dias ap?s a emerg?ncia das pl?ntulas. Ovos provindos de uma cria??o em borbolet?rio ao ar livre, e oriundos de uma mesma f?mea, foram utilizados para montagem de cinco tratamentos com 25 lagartas cada, sendo estes constitu?dos por lagartas alimentadas com folhas de soja conv. soja GMRR sem aplica??o do herbicida, soja GMRR tratada com glifosato na formula??o Roundup Ready?, GMRR tratada com glifosato na formula??o Roundup WG? e folhas de C. fairchildiana. A mortalidade de larvas foi superior nos tratamentos que continham soja GMRR, com ou sem aplica??o de herbicida, quando comparada com a mortalidade das larvas alimentadas com C. fairchildiana e soja conv. As pupas provindas de lagartas alimentadas com soja conv. e C. fairchildiana apresentaram-se 100% vi?veis, j? as provindas de GMRR tratada com Roundup Ready?, Roundup WG? e sem aplica??o de herbicida, apresentaram-se 84,6%; 87,5% e 88,2% vi?veis, respectivamente. O segundo cap?tulo versa sobre a avalia??o da influ?ncia do p?len do milho transg?nico resistente a insetos, sobre Galleria mellonella (Linnaeus, 1758) (Lepidoptera: Pyralidae). Esse piral?deo ? um lepid?ptero associado ? colm?ias de abelhas, suas larvas se alimentam de cera velha, p?len, ex?vias etc. Existem opini?es contr?rias quanto a sua inocuidade ?s abelhas, e conseq?entemente a produ??o ap?cola, certos investigadores o consideram pragas de api?rios, j? outros o classificam como um organismo importante na reciclagem de mat?ria org?nica dentro das colm?ias. Nessa ultima vis?o, podem ser considerados ben?ficos ?s abelhas. Dentro desse contexto, a ado??o de cultivos transg?nicos resistentes a insetos pela a express?o da prote?na Bt, de Bacillus thuringiensis, poder? causar afec??o das larvas de G. mellonella. As abelhas ao coletarem p?len e armazenar nas colm?ias podem expor esse lepid?ptero a intoxica??o pela prote?na Bt presente no p?len. O presente trabalho tem o objetivo de avaliar a influ?ncia do p?len do milho Bt sobre G. mellonella e com isso tra?ar uma discuss?o sobre a possibilidade de afec??o ? campo deste lepid?ptero. Para isso foi realizado um ensaio biol?gico, onde foi ofertado ?s larvas p?len Bt, convencional e comercial. A dura??o da fase larval de G. mellonella foi afetada pela oferta de p?len, sendo que o do milho, convencional ou transg?nico, forneceu os maiores registros na dura??o. A mortalidade foi superior nos indiv?duos alimentados com cera virgem e p?len transg?nico, no entanto n?o diferiu dos demais alimentos, quando junto ao p?len Bt, foi ofertado favo de Apis mellifera. A largura e comprimento das pupas provindas de lagartas alimentadas com cera virgem adicionada ao p?len transg?nico ou convencional, foram inferiores aos demais tratamentos. O p?len do milho, convencional ou transg?nico, por si s? ? um alimento menos adequado ao desenvolvimento de G. mellonella, em rela??o a uma dieta composta por p?len de v?rias plantas.

The development of insecticides resistance among many insect species and the ecological damage occasionally caused by the lack of specificity in the toxic effects of insecticides have provided the impetus to seek alternative methods of insect control. This observation led to the development of bioinsecticides based on the insecticidal action Bacillus sphaericus (Bs), Bacillus turingiensis (Bt). The discovery of biolarvicidal actions of Bacillus thuringiensis and Bacillus sphaericus opened a new perspective for insect control. In the first part of the study was initiated to determine a suitable fermentation medium formulation and optimal fermentation conditions for large scale, low cost production of Bs. Bs 2362 was tested in whey and soy flour based media. These media was reformulized form of NYSM (Nutrient Broth Yeast Extract Sporulation Medium). Soy flour based medium, SYSM, gave the promising results in terms of cell yield, sporulation frequency and toxin production. In the second part of the study, fermentation productivity anlaysis of a local isolate Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki 81 was evaluated. In order to compare different C:N ratios (1:1, 2:1, 4:1, 8:1, 10:1 20:1 and 30:1) of YSM medium. Btk 81 were run for 72 h and cell growth, sporulation and toxin protein profile of Btk 81 were determined for each. When all the quantitative toxin data for both glucose and sucrose varying C:N ratios were compared, it was determined that the crystal protein concentrations had the highest value in sucrose based medium when C:N ratio was 10:1. Regulation by C:N ratio of crystal protein biosynthesis was investigated for improving the production of this protein by our third candidate strain Bacillus thuringiensis subsp. israelensis ONR60. The experiments were performed by using TBL medium, at three different C:N ratios, 2:1, 4:1 and 8:1 respectively. In view of the cell growth characteristics and bioassy results, TBL medium designed with 2:1 C:N ratio was chosen as the best for further steps. In addition, running time of the culture determined as 60 hours as was also determined in the previous experiment. As the last step of this study, the pre-determined optimal conditions were applied to a 30L batch type fermentor for toxin production by using Bacillus thuringiensis subsp. israelensis ONR60. Unfortunately, the toxicity was not satisfactory, being much below the level of that expected as based on the results of the laboratory scale studies.

Parmi les méthodes alternatives respectueuses de l'environnement pour la lutte contre les ravageurs et la protection des cultures agricoles, les bioinsecticides à base de Bacillus thuringiensis sont les plus largement utilisés. L’activité insecticide de B.thuringiensis réside dans la production d’inclusions cristallines protéiques appelées δ-endotoxines qui sont formées au cours de la sporulation. En préalable à ces travaux, de nouvelles souches de B.thuringiensis ont été isolées du sol libanais et ont montré un potentiel insecticide élevé, supérieur à des souches classiquement utilisées. Dans le cadre du développement d'une production industrielle, au Liban, de biopesticides à base de ces souches de B.thuringiensis, ce travail a visé à optimiser la production des δ-endotoxines afin d'augmenter les rendements et de réduire les coûts de production. A l'échelle industrielle, le milieu de culture des bactéries représente une part importante du coût de production. Ainsi, l'effet, sur la concentration des δ-endotoxines, de substitution des sources synthétiques coûteuses d'azote, de carbone et de minéraux, par un sous-produit de la minoterie de blé (le son de blé) a été étudié. L’efficacité de ce sous-produit agro-industriel comme source complète de nutriments, disponible localement à faible prix, a été prouvée pour des fermentations submergées de deux souches différentes toxiques contre des diptères ou des lépidoptères. La comparaison du milieu son de blé à d’autres milieux (synthétiques ou non), classiquement utilisés en bibliographie, a montré que ce milieu présente de nombreux avantages en termes de productivité, de rendement relatif des δ-endotoxines et de coût. Parallèlement à ce travail, une méthode simple et rapide de purification des cristaux a été développée de façon à obtenir des cristaux protéiques purs à 99 % nécessaires comme standards pour le dosage des cristaux dans le milieu de fermentation. Un autre objectif du travail a été d’analyser l'effet de l'aération sur la cinétique de croissance et de sporulation d'une nouvelle souche de B.thuringiensis var kurstaki. Les différentes conditions d’aération testées en fermenteurs de 2 L, caractérisées par le coefficient volumétrique de transfert de dioxygène (KLa), ont permis de montrer l’importance de ce paramètre et de l’optimiser pour obtenir la meilleure productivité en biopesticides. Le meilleur rendement en protéines de toxines a été obtenu dans un milieu son de blé 6 % (masse/volume) dans des conditions d’aération correspondant à un KLa de 65,5 h-1 alors que la meilleure productivité des protéines de toxines a été atteinte dans le milieu 9 % pour un KLa de 102 h-1. Sur la base de cette étude, le dimensionnement de la production de B.thuringiensis à l’échelle 1000 L a été réalisé. L’unité de production a été construite et les premiers essais réalisés ont permis de produire de façon satisfaisante des lots de biopesticides. L’ajustement des protocoles industriels reste à faire. / Among the safe and environment friendly methods for the fight against pests and agricultural crops protection, Bacillus thuringiensis based biopesticides are the most widely used. The insecticidal activity of B. thuringiensis resides in the production of protein crystal inclusions called δ-endotoxins, which are formed during sporulation. Preliminary to this work, new B. thuringiensis strains were isolated from Lebanese soil and showed higher insecticidal potential than the conventionally used strains. As part of the development of an industrial production, in Lebanon, of biopesticides based on these strains of B.thuringiensis, this work aimed to optimize the production of δ-endotoxins to increase yields and reduce the cost of mass production. At industrial scale, the bacteria culture medium represents a significant part of the production cost. Thus, the effect on the concentration of the δ-endotoxins, of substituting expensive synthetic sources of nitrogen, carbon, and minerals, with a byproduct of wheat mill (wheat bran) was studied. The effectiveness of this agro-industrial by-product available locally at low prices, as complete source of nutrients, in submerged fermentations of two different strains of B.thuringiensis toxic against Lepidoptera and Diptera, has been proven. The comparison of the wheat bran medium to other mediums (synthetic or not), conventionally used in the bibliography, has shown that this medium this medium has many advantages in terms of productivity, relative yield of δ-endotoxins and cost. In parallel to this work, a simple and quick method of crystal purification was developed to obtain pure protein crystals to 99 % required as standards for the determination of crystals concentration in the fermentation medium. Another objective of the study was to analyze the effect of aeration on growth and sporulation kinetics of a new strain of B.thuringiensis var kurstaki. The different aeration conditions tested in fermenters of 2 L, characterized by the volumetric oxygen transfer coefficient (KLa), permitted to show the importance of this parameter and to optimize it to get the best biopesticides productivity. The best yield of toxin proteins relative to the wheat bran ratio in the culture medium was obtained in the 6 % (weight/volume) medium in aeration conditions corresponding to a KLa of 65.5 h-1, while the highest productivity of toxin proteins has been reached in the 9 % medium for KLa of 102 h-1. On this study basis, the scale up of B. thuringiensis production was performed in a bioreactor of 1000 L. The production unit was built and the first tests carried out have produced satisfactory batches of biopesticides. Industrial protocols are still to be adjusted.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The occurrence of Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae), the Fall armyworm, has led to increased adoption of Bt maize genotypes in Brazil. However, the field impacts on parasitoids of using these genotypes, especially those associated with the larval stage of this insect pest, are little known. The aim of this study was to evaluate two different Bt maize genotypes and its isoline (non-Bt) on Fall armyworm larvae population, its damage to maize plants and its larval parasitoids in early and late cropping season (sowing dates). The experiments were conducted in areas of Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), Santa Maria, Rio Grande do Sul State, which were grown three maize areas in both early an late sowing, with the treatments: control (non-Bt), YieldGard®, expressing the Bt toxin Cry1Ab and Herculex®, which expresses the Bt toxin Cry1F, all comercial hybrids 30F53 and isolines among them. The area of each treatment was divided into 20 points, 36 m2 each, composed by 12 rows of 6 m, where 4 plants per point were randomly sampled, totaling 80 sampled plants per treatment. In early and late season, 14 maize plant surveys were made and afterwards transferred to the laboratory and evaluated for: number of S. frugiperda egg masses, total and percentage of collected larvae, in different size ranges (up to 0.5 , 0.6 to 1.0, 1.1 to 1.5, 1.6 to 2.0 and > 2.0 cm), total and average larvae per plant in different size ranges, percentage of plants without damage, with scratches and leaf holes on the whorl; percentage and mean number of parasitized larvae, number of emerged parasitoids and percentage of parasitism by the main parasitoids found. The results on percentage were compared among evaluation dates by t test between two proportions. For the other results t test for two independent samplings with Bootstrap resampling (10000 simulations). There was a greater number of egg masses in Bt Herculex® and Bt YieldGard® genotypes, in early and late sowing dates, respectively, with a predominance of up to 0.5 cm size larvae, especially in Bt genotypes, and higher larvae mortality by Bt Herculex® than Bt YieldGard®. Undamaged plants in the whorl predominate in Bt Herculex® area, in both sowing seasons, and the low incidence of whorl leaf wholes was predominant in both Bt genotypes in both sowing seasons. The predominance among larval parasiotids was of Campoletis flavicincta (Ashmead, 1890) (Hymenoptera: Ichneumonidae) and Chelonus insularis Cresson, 1865 (Hymenoptera: Braconidae), in early and late sowing seasons, respectively. Parasitized larvae occurred more frequently in late sowing season, for the three genotypes with higher parasitism in non-Bt maize and Bt YieldGard® in early and late seasons, respectively. The low amount of parasitoids found in Bt Herculex® was associated with the low larvae survivorship. / A ocorrência de Spodoptera frugiperda (J. E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae), a lagarta-do-cartucho, levou ao aumento da adoção de genótipos de milho Bt no Brasil. No entanto, são pouco conhecidos os impactos da utilização desses materiais sobre os parasitoides desse inseto-praga, em especial aqueles associados à fase larval. O objetivo deste trabalho foi avaliar dois genótipos de milho Bt e suas isolinhas (não-Bt) sobre populações de larvas de S. frugiperda, além dos danos e parasitoides larvais, em semeadura de safra (do cedo) e safrinha (do tarde). Os experimentos foram realizados em três áreas de milho, situadas em Santa Maria, Rio Grande do Sul, cultivadas em duas épocas (safra e safrinha), com os tratamentos: testemunha (não-Bt), Bt Yieldgard®, com expressão da toxina Cry1Ab, e Bt Herculex®, que expressa a toxina Cry1F, todos híbridos comerciais 30F53 e isolinhas entre si. A área de cada tratamento foi dividida em 20 parcelas, de 36 m2 cada, compostas de 12 linhas de 6 m de comprimento, em que foram amostradas, aleatoriamente, quatro plantas por parcela, totalizando 80 plantas amostradas por área em cada data de amostragem. Em cada época, safra e safrinha, foram realizadas 14 coletas de plantas de milho, sendo que essas foram transferidas para o laboratório e avaliadas quanto ao número de posturas de S. frugiperda encontradas em laboratório, número de larvas coletadas em diferentes faixas de comprimento (até 0,5; 0,6-1,0; 1,1-1,5; 1,6-2,0 e >2,0 cm), de plantas sem danos, com raspagens e com perfurações no cartucho de larvas parasitadas e de parasitoides emergidos. Os resultados percentuais foram comparados entre as datas de avaliação mediante o teste t entre duas proporções. Para os demais resultados foram realizados contrastes por data de avaliação utilizando o teste t para duas amostras independentes, com Reamostragem Bootstrap (10.000 simulações). Houve maior número de posturas nos genótipos Bt Herculex® e Yieldgard®, na safra e na safrinha, respectivamente, um predomínio de larvas com até 0,5 cm, especialmente nos genótipos Bt, e maior mortalidade das mesmas no Bt Herculex® do que no Bt Yieldgard®. As plantas sem danos no cartucho predominaram em área com Bt Herculex®, tanto na safra quanto na safrinha, e a baixa incidência de perfurações no cartucho predominou em ambos os genótipos Bt, nas duas épocas. O predomínio dentre os parasitoides foi de Campoletis flavicincta (Ashmead, 1890) (Hymenoptera: Ichneumonidae) e Chelonus insularis Cresson, 1865 (Hymenoptera: Braconidae), em cultivo de safra e safrinha, respectivamente. As larvas parasitadas ocorrem em maior número nos cultivos de safrinha, com maior parasitismo em milho não-Bt e Bt Yieldgard®, na safra e na safrinha, respectivamente. A menor quantidade de parasitoides encontrada no Bt Herculex® foi associada à baixa sobrevivência de larvas.

The event TC1507 maize with cry1F gene from the bacterium Bacillus thuringiensis Berliner (Bt) was approved for commercial release in Brazil in 2008. The evolution of pest resistance to Bt plants has been a great concern to preserve the lifetime of this technology. Therefore, in this study we assess the risk of evolution of resistance to Cry1F protein in Spodoptera frugiperda (J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) populations from major maize-growing regions in Brazil. The baseline susceptibility to Cry1F was detemined with diet overlay bioassay for susceptible reference population and four field populations of S. frugiperda. Then, we monitored 43 populations of S. frugiperda sampled in nine different States of Brazil during 2010/2011, 2011/2012 and 2012/2013 crop seasons. Only 4-fold variation in susceptibility to Cry1F was detected among S. frugiperda from field populations in the baseline susceptibility study. Diagnostic concentration of 2,000 ng cm-2 was defined for monitoring the susceptibility to Cry1F in S. frugiperda populations. Survival at 2,000 ng cm-2 of Cry1F protein increased significantly throughout crop seasons in populations from São Paulo, Santa Catarina, Rio Grande do Sul, Bahia, Mato Grosso, Goiás, Mato Grosso do Sul, and Paraná, but not in Minas Gerais. We also sampled a population of S. frugiperda in TC1507 field failures in Bahia in October, 2011. This population was selected in laboratory with Cry1F protein up to 20,000 ng cm-2 and the resistance ratio of the selected resistant population (BA25R) was > 5,000-fold. This resistant population was able to survive in Cry1F maize from neonate till pupa and produce normal adult. The inheritance of S. frugiperda resistance to Cry1F protein was autosomal. To test the functional dominance, neonate larvae obtained from the cross of resistant and susceptible populations were tested in leaf bioassay, and around 8% of heterozygotes were able to survive and complete the larval development and produce normal adults on TC1507 leaves while susceptible larvae could not survive for up to five days after infestation. Dominance was estimated to be 0.15 ± 0.09, suggesting that resistance to Cry1F in TC1507 maize was incompletely recessive. We also conducted resistance selection studies in other seven S. frugiperda populations from six different Brazilian states to test whether the resistance alleles were at same locus or not. The F1 larvae obtained from the cross between resistant population (BA25R) and each of the seven selected resistant populations were able to survive at 2,000 ng cm-2 of Cry1F protein in diet bioassay, and therefore they shared the same locus of resistance to Cry1F protein. We estimated the frequency of resistance allele to Cry1F protein in populations of S. frugiperda of main crop season 2011/2012 from five states. We stablished 517 isofemale lines using F2 screen method. The total frequency of Cry1F resistance allele in Brazil was 0.088 with 95% confidence interval between 0.077 and 0.100. Based on results obtained in this study, the risk of resistance evolution to Cry1F protein by S. frugiperda is high in Brazil. / O evento de milho TC1507 com gene cry1F da bactéria Bacillus thuringiensis Berliner foi aprovado comercialmente no Brasil em 2008. A evolução da resistência de pragas a plantas Bt tem sido uma grande preocupação na preservação desta tecnologia. Portanto, neste estudo foi avaliado o risco de evolução da resistência à proteína Cry1F em populações de Spodoptera frugiperda (J.E. Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) das principais regiões de cultivo de milho no Brasil. A linha-básica de suscetibilidade à proteina Cry1F foi determinada em bioensaio de aplicação superfícial na dieta para a população suscetível de referência e quatro populações de campo de S. frugiperda. Posteriormente, a suscetibilidade a Cry1F foi monitorada em 43 populações de S. frugiperda coletadas em nove Estados do Brasil nas safras agrícolas de 2010/2011, 2011/2012 e 2012/2013. A variação na suscetibilidade foi de apenas quatro vezes para Cry1F entre as populações de campo na linha-básica de suscetibilidade. A concentração diagnóstica de 2.000 ng cm-2 de proteína Cry1F foi definida para o monitoramento da suscetibilidade. A sobrevivência em 2.000 ng cm-2 de proteína Cry1F aumentou significativamente no decorrer das safras em populações de São Paulo, Santa Catarina, Rio Grande do Sul, Bahia, Mato Grosso, Goiás, Mato Grosso do Sul e Paraná, mas não em Minas Gerais. Além disso, uma população de S. frugiperda foi coletada em milho TC1507 com falha de controle na Bahia em outubro de 2011. Esta população foi selecionada no laboratório com a proteína Cry1F até 20.000 ng cm-2, obtendo-se uma população resistente (BA25R) com razão de resistência >5000 vezes. Esta população resistente foi capaz de sobreviver no milho TC1507 desde larva neonata até a fase de pupa e com emergência de adultos normais. O padrão de herança da resistência de S. frugiperda a Cry1F foi autossômica. Para testar a dominância funcional, as larvas neonatas do cruzamento entre a população resistente e suscetível foram testadas em folhas do evento TC1507 e cerca de 8% dos heterozigotos foram capazes de sobreviver, completar o desenvolvimento e produzir adultos normais, enquanto as larvas da linhagem suscetível não sobreviveram por mais de cinco dias após a infestação. A dominância foi estimada em 0,15 ± 0,09; portanto, a resistência à proteína Cry1F no milho TC1507 foi incompletamente recessiva. A resistência foi selecionada para outras sete populações de seis Estados brasileiros para testar se os alelos de resistência estavam no mesmo locus. As larvas F1 obtidas do cruzamento entre a população resistente (BA25R) e cada uma das sete populações selecionadas sobreviveram na concentração de 2,000 ng cm-2 de proteína Cry1F e, portanto, essas populações compartilharam o mesmo locus de resistência à proteína Cry1F. A freqüência do alelo resistente à proteína Cry1F foi estimada em populações de S. frugiperda coletadas em cinco Estados na safra 2011/2012. Foram estabelecidas 517 isolinhas utilizando o método de \"F2 screen\". A freqüência total do alelo de resistência à proteína Cry1F no Brasil foi de 0,088, com intervalo de confiança de 95% entre 0,077 e 0,100. Com base nos resultados, o risco de evolução da resistência à proteína Cry1F por S. frugiperda é elevada no Brasil.

Bactérias endofíticas provavelmente desenvolveram uma relação com planta hospedeira através de processos coevolucionários, podendo influenciar de alguma forma na fisiologia da planta. Na literatura, há muitos relatos sobre espécies de Bacillus endofíticos, no entanto, poucos se referem a espécie B. thuringiensis (Bt). Dessa forma, o objetivo desse trabalho foi isolar, identificar e caracterizar Bt de mandioca. Todos os isolados identificados como Bt produziram cristais pontuais e apenas um isolado, IIRAC22, produziu cristais amorfos maiores. Esse isolado apresentou genes cry4A, cry4B e cry10 e toxicidade a larvas de Aedes aegypti e Culex quinquefasciatus, evidenciando ser Bt var. israelensis. Todos os isolados produziram quitinase, sugerindo que elas podem ter ação controladora sobre fungos fitopatogênicos e insetos. Houve também produção de pectinase, enzimas envolvidas na penetração de planta hospedeira e estabelecimento como endófito. Esses Bt endofíticos podem levar ao desenvolvimento de produtos biotecnológicos para controle de insetos. / Endophytic bacteria probably developed a relationship with their plant host through coevoltionary processes what could influence in the physiology of the plant. In the literature, there are many reports about endophytic Bacillus species, however, few reports cite endophytic B. thuringiensis (Bt). Thus, the aim of the present work was to isolate, identify and characterize Bt from cassava. All the isolates identified as Bt were able to produce punctual crystals, but only one isolate, IIRAC22, produced large amorphous crystals. This isolate presented cry4A, cry4B and cry10 genes and toxicity against larvae of Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus, evidencing to be Bt var. israelensis. All the isolates produced quitinase, suggesting that they can control phytopathogeni fungi and insects. There was also pectinase production, enzyme involved in the penetration of plant hosts and establishment as endophytes. These endophytic Bt can take to the development of biotechnological products for the control of insect.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Atualmente sÃo liberadas para comercializaÃÃo no mercado agrobiotecnolÃgico brasileiro, pelo menos, 12 variedades de algodÃo expressando proteÃnas Cry de Bacillus thruringiensis (Bt) para conferir resistÃncia ao ataque de insetos. Contudo, essas proteÃnas sÃo ativas contra lepidÃpteros, enquanto que a principal praga da cotonicultura brasileira à um coleÃptero, o bicudo-do-algodoeiro (Anthonomus grandis). Neste contexto, tÃm-se feito um grande esforÃo na busca por novas molÃculas Cry ativas contra coleÃpteros. Utilizando tÃcnicas de evoluÃÃo molecular dirigida in vitro, foi desenvolvida a proteÃna mutante Cry8Ka5, que à vÃrias vezes mais tÃxica contra o bicudo do que a proteÃna original, Cry8Ka1, inicialmente descoberta. Dada a sua atividade promissora contra coleÃpteros, Cry8Ka5 està sendo utilizada para o desenvolvimento de um novo algodÃo Bt, bem como de outras culturas Bt de importÃncia econÃmica. No entanto, como parte das exigÃncias legais para a liberaÃÃo comercial de uma planta transgÃnica, essa proteÃna recombinante deve ser testada quanto a sua biosseguranÃa alimentar (BA) a fim de detectar potenciais efeitos alergÃnicos, tÃxicos e/ou antimetabÃlicos. Assim, este trabalho objetivou realizar uma ampla avaliaÃÃo de BA da proteÃna mutante Cry8Ka5 e da proteÃna Cry1Ac, jà incorporada em vÃrias culturas Bt comercializadas. A Ãltima foi utilizada como proteÃna controle ou teste dependendo do ineditismo da abordagem empregada em cada seÃÃo do trabalho. Nesse Ãmbito, a avaliaÃÃo de BA proposta cobriu desde as exigÃncias legais atà a execuÃÃo de metodologias, atà entÃo, nunca propostas para avaliaÃÃo de seguranÃa de consumo de produtos de Bt. Para tanto, este trabalho estruturou-se em quatro capÃtulos. O CapÃtulo 1 objetivou realizar uma revisÃo da literatura acerca do estado da arte das plantas Bt e proteÃnas Cry, bem como fornecer um entendimento geral sobre os conceitos e a legislaÃÃo vigente em BA de plantas GM. Jà o CapÃtulo 2 objetivou avaliar a BA da entomotoxina mutante Cry8Ka5 atravÃs do mÃtodo de duas etapas baseado em pesos de evidÃncia que, por sua vez, atende a todas as recomendaÃÃes da CTNBio. Neste caso, a proteÃna Cry1Ac foi utilizada como controle experimental, pois abordagens similares jà foram realizadas com essa molÃcula. Baseando-se nos mÃtodos oficiais, à possÃvel concluir que nÃo à esperado qualquer risco associado ao consumo da proteÃna Cry8Ka5 devido aos seguintes resultados encontrados: 1. Produtos Bt mostraram ter longo histÃrico de uso seguro; 2. A proteÃna Cry8Ka5 nÃo mostrou similaridade significativa de sua sequÃncia de aminoÃcidos primÃria com proteÃnas alergÃnicas, tÃxicas e/ou antinutricionais; 3. As proteÃnas Cry mostraram possuir modo de aÃÃo bastante compreendido e elevada especificidade contra insetos; 4. Cry8Ka5 foi altamente susceptÃvel à digestÃo em fluÃdo gÃstrico simulado; 5. A proteÃna Cry8Ka5 nÃo causou efeitos adversos relevantes em camundongos (5.000 mg de proteÃna/Kg de peso corpÃreo, via oral, dose Ãnica). Por sua vez, o CapÃtulo 3 objetivou avaliar a proteÃna Cry8Ka5 e a Cry1Ac quanto aos seus efeitos cito- e genotÃxicos em uma sÃrie de testes clÃssicos e alternativos, alÃm de pesquisar seus efeitos antimicrobianos. As proteÃnas nÃo causaram efeitos cito- ou genotÃxicos em linfÃcitos humanos (ambas com CI50 > 1.000 Âg/mL em todos os testes), nÃo promoveram hemÃlise em suspensÃes de eritrÃcitos de humanos (tipos A, B, AB e O), de coelho e rato (ambas com CI50 > 1.000 Âg/mL para todas as espÃcies), enquanto somente a Cry8Ka5 causou alteraÃÃes na topografia de membrana celular de eritrÃcitos humanos do tipo O, na concentraÃÃo de 1.000 Âg/mL, detectadas via microscopia de forÃa atÃmica. AlÃm disso, as proteÃnas Cry8Ka5 e Cry1Ac nÃo apresentaram citotoxicidade elevada contra naÃplios de Artemia sp. (CL50 > 700 e > 1000 Âg/mL, respectivamente) e nÃo inibiram o crescimento de quatro cepas de bactÃrias e quatro de leveduras (ambas com CIM > 1.000 Âg/mL para todos os microrganismos testados). Por fim, o CapÃtulo 4 objetivou avaliar os efeitos das proteÃnas Cry8Ka5 e Cry1Ac e de um âpoolâ de peptÃdeos de cada uma (Cry8Ka5-pep e Cry1Ac-pep, respectivamente), obtidos por digestÃo sequencial in vitro, sobre o perfil de expressÃo gÃnica de cÃlulas de carcinoma de mama MCF-7 e de carcinoma de cÃlon Caco-2, ambas de origem humana. Nenhuma das amostras testadas causou alteraÃÃes no perfil de expressÃo gÃnica das cÃlulas Caco-2 diferenciadas (utilizadas como um modelo de epitÃlio intestinal humano), mesmo quando testadas em alta concentraÃÃo (100 Âg/mL). Nos testes de exposiÃÃo com cÃlulas MCF-7 indiferenciadas, apenas a proteÃna Cry1Ac causou alteraÃÃes significativas no padrÃo de expressÃo gÃnica. Contudo, esse efeito nÃo foi detectado apÃs tratamento dessas cÃlulas com a amostra digerida de Cry1Ac (Cry1Ac-pep), que, por sua vez, mimetiza melhor as condiÃÃes reais de exposiÃÃo Ãs molÃculas Cry. As abordagens experimentais utilizadas nos trÃs Ãltimos capÃtulos mostraram-se bastante Ãteis e, apÃs tudo que foi exposto, foi possÃvel confirmar o carÃter inÃcuo da proteÃna Cry1Ac, bem como concluir que a proteÃna Cry8Ka5 à uma ferramenta biotecnolÃgica segura para o desenvolvimento de plantas de algodÃo Bt para conferir resistÃncia ao ataque do bicudo-do-algodoeiro. / Currently at least 12 varieties of cotton expressing Cry proteins from Bacillus thruringiensis (Bt) are released for sale in Brazil to confer resistance to insect attack. However, these proteins are active against lepidopteran, whereas the major pest of Brazilian cotton is a beetle, the cotton boll weevil (Anthonomus grandis). In this context, great efforts have been dedicated in the search for new Cry molecules active against coleopteran. Using techniques of in vitro directed molecular evolution, the Cry8Ka5 mutant protein was developed, which is several times more toxic against the boll weevil than the original protein, Cry8Ka1, initially discovered. Given its promising activity against coleopteran, Cry8Ka5 is being used for the development of a new Bt cotton, as well as of other Bt crops of economic importance. However, as part of legal requirements for the commercial release of a transgenic plant, the recombinant products should be tested for their food safety (FS) in order to detect potential allergenic, toxic and antimetabolic effects. This study aimed to perform a comprehensive FS assessment of the Cry8Ka5 mutant protein and of the Cry1Ac protein, already incorporated in several commercialized Bt crops. The latter was used as a protein control or test depending on the originality of the approach used in each section of this work. The FS evaluation performed covered not only the legal requirements but also the implementation of methodologies hitherto never proposed to assess the safety of consumption of Bt. For that, this study was structured in four chapters. Chapter 1 aimed to conduct a literature review on the state of the art of Bt plants and Cry proteins, as well as provide a general understanding of the concepts and current legislation in GM plants FS. Chapter 2 aimed to evaluate the FS of Cry8Ka5 mutant entomotoxin through the two-step method based on weights of evidence that, in turn, meets the recommendations of CTNBio. In this section, the Cry1Ac protein was used as experimental control, since similar approaches have already been performed with this molecule. Based on official methods, we conclude that it is not expected any risk associated with consumption of protein Cry8Ka5 due to the following results found: 1. Bt products were shown to have a long history of safe use, 2. The protein showed no significant similarity in its primary amino acid sequence with known allergenic, toxic and/or antinutritional proteins; 3. The mode of action and high specificity against insects of Cry proteins are well known; 4. Cry8Ka5 was highly susceptible to digestion in simulated gastric fluid; 5. The protein Cry8Ka5 caused no significant adverse effects in mice (5,000 mg protein/kg body weight, orally, single dose). Chapter 3 aimed to evaluate the Cry8Ka5 and Cry1Ac proteins as to their cyto- and genotoxicity in a serie of conventional and alternative tests as well as antimicrobial effects. The proteins did not cause cyto- or genotoxic effects in human lymphocytes (both with IC50 > 1,000 Âg/mL in all tests), did not cause hemolysis in human (types A, B, AB and O), rabbit and rat (both with IC50 > 1,000 Âg/mL for all species) rythrocytes, but only Cry8Ka5 caused changes in the topography of the cell membrane of human O type erythrocytes at a concentration of 1,000 Âg/mL, detected by atomic force microscopy. Furthermore, the Cry8Ka5 and Cry1Ac proteins showed no cytotoxicity against Artemia sp. nauplii (LC50 > 700 and >1000 Âg/mL, respectively), and did not inhibit the growth of four strains of bacteria and four of yeasts (both with MIC > 1,000 Âg/mL for all microrganisms tested). Finally, Chapter 4 aimed to evaluate the effects of Cry8Ka5 and Cry1Ac proteins and of a "pool" of peptides of each one (Cry8Ka5-pep and Cry1Ac-pep, respectively), obtained by in vitro sequential digestion, on the gene expression profile of MCF-7 breast carcinoma cells and Caco-2 colon carcinoma cells, both human. No sample caused changes in the gene expression profile of differentiated Caco-2 cells (used as a model for human intestinal epithelium), even when tested at high concentration (100 Âg/mL). In the exposure tests with undifferentiated MCF-7 cells, only Cry1Ac (at 100 Âg/mL) caused significant changes in the gene expression pattern. However, this effect was not detected after treatment of these cells with the sample digested of Cry1Ac Cry1Ac-pep), which, in turn, better mimic actual conditions of exposure to Cry molecules. The experimental approaches used in the last three chapters were quite useful and, after all the above, it was possible to confirm the harmless nature of the Cry1Ac protein and conclude that the Cry8Ka5 protein is a safe biotechnological tool for the development of Bt cotton plants to confer resistance against the cotton boll weevil attack.

A soja (Glycine max (L.) Merrill) com o evento DAS-81419-2 (ConkestaTM technology) que expressa as proteínas de Bacillus thuringiensis (Bt) Cry1F e Cry1Ac protege a cultura de danos de alimentação de lepidópteros-praga primários e secundários. Experimentos de campo foram conduzidos de 2011 à 2016 na região sul e central do Brasil para caracterizar a eficácia da soja DAS-81419-2 infestada com Anticarsia gemmatalis (Lepidoptera: Erebidae), Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae), Chloridea virescens (Lepidoptera: Noctuidae), Spodoptera cosmioides (Lepidoptera: Noctuidae), Elasmopalpus lignosellus (Lepidoptera: Pyralidae), Agrotis ipsilon (Lepidoptera: Noctuidae) e Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae) durante os estágios vegetativo (V4) e reprodutivo (R2 e/ou R4) da cultura. A eficácia da soja DAS-81419-2 foi comparada com a variedade isogênica não-Bt manejada com ou sem inseticidas foliares comerciais para controle de lepidópteros. DAS-81419-2 reduziu significantemente o dano de alimentação causado por A. gemmatalis, C. includens, C. virescens, S. cosmioides e H. armigera durante os estágios vegetativo e reprodutivo, bem como, a mortalidade de plântulas causada por E. lignosellus. Entretanto, DAS-81419-2 apresentou moderada atividade em A. ipsilon. Além disto, um estudo de campo de três anos avaliou os potenciais efeitos adversos de DAS-81419-2 por meio da inspeção da diversidade e abundância de artrópodes não-alvos comparado com a isolinha não-Bt com ou sem aplicações convencionais de inseticidas. Estes estudos foram conduzidos em três regiões produtoras de soja onde os artrópodes não-alvos da parte aérea e da superfície do solo foram monitorados. Em geral, a abundância e diversidade total não foram afetadas signifativamente pela soja Bt. Desta maneira, DAS-81419-2 mostrou eficácia consistente ao longo dos anos, localidades e diferente estágios da cultura contra lepidópteros-pragas primários e secundários de importância econômica da cultura da soja e não afetou adversamente os artrópodes não-alvos que ocorrem nos campos de soja. / Soybean (Glycine max (L.) Merrill) event DAS-81419-2 (ConkestaTM technology) expresses Bacillus thuringiensis (Bt) Cry1F and Cry1Ac proteins to provide protection against primary and secondary lepidopteran pest feeding damage. Field experiments were conducted from 2011 to 2016 in southern and central Brazil to characterize the efficacy of DAS-81419-2 soybean infested with Anticarsia gemmatalis (Lepidoptera: Erebidae), Chrysodeixis includens (Lepidoptera: Noctuidae), Chloridea virescens (Lepidoptera: Noctuidae), Spodoptera cosmioides (Lepidoptera: Noctuidae), Elasmopalpus lignosellus (Lepidoptera: Pyralidae), Agrotis ipsilon (Lepidoptera: Noctuidae), and Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae) during vegetative (V4) and reproductive (R2 and/or R4) crop developmental stages. The efficacy of DAS-81419-2 was compared to a non-Bt isogenic variety managed with or without applications of commercial foliar insecticides for lepidopteran control. DAS-81419-2 significantly reduced the feeding damage caused by A. gemmatalis, C. includens, C. virescens, S. cosmioides, and H. armigera during both vegetative and reproductive crop growth stages as well as the seedling stage plant mortality caused by E. lignosellus. However, DAS-81419-2 showed moderate activity on A. ipsilon. In addition, a 3-yr in-field study evaluated the potential adverse effects of DAS-81419-2 by examining the diversity and abundance of non-target arthropods (NTAs) compared to the non-Bt near isoline with and without conventional insecticide applications. These studies were conducted in three Brazilian soybean producing regions where both soil surface and aerial NTA were monitored. Overall, the total abundance and diversity were not significantly affected by Bt soybean. Therefore, DAS-81419-2 showed consistent efficacy across years, locations, and crop stages against the most economically important primary and secondary lepidopteran pests of soybean and did not adversely affect non-target arthropods occurring in soybean field.

A utilização do glicerol proveniente da fabricação do biodiesel como substrato para a obtenção de produtos biotecnológicos é uma alternativa promissora como forma de disposição adequada deste subproduto. O bioinseticida formulado com toxinas de Bacillus thuringiensis tem sido utilizado para o controle de insetos veiculadores de doenças, como a dengue, que atingem milhões de pessoas em todo o mundo. Para que este bioinseticida seja competitivo com os inseticidas químicos é necessário que o custo de sua produção seja diminuído, o que pode ser feito com a utilização de fontes de carbono alternativas, de forma a diminuir o custo do meio de fermentação. Neste trabalho, empregou-se o glicerol proveniente da fabricação do biodiesel de sebo bovino como componente do meio de fermentação para a produção de bioinseticida por Bacillus thuringiensis var. israelensis. Foram avaliados diferentes tratamentos do resíduo contendo glicerol, baseados em acidificação, decantação e aquecimento, para remoção de impurezas. O ajuste do pH até 7 pela adição de ácido fosfórico, seguido de decantação, aquecimento para remoção de metanol e nova decantação, foi a forma de tratamento escolhida, uma vez que proporcionou a maior atividade tóxica do meio fermentado contra larvas de Aedes aegypti. O meio de fermentação foi formulado determinando-se as concentrações de glicerol, extrato de levedura, sulfato de amônio e cloreto de cálcio que proporcionaram a maior atividade larvicida do meio fermentado, de acordo com planejamento fatorial 24. A toxicidade foi avaliada pela CL50 (concentração do complexo esporo-cristal necessária para matar 50% da população de larvas). O melhor valor de CL50 foi obtido com a utilização de glicerol a 10 g/L, extrato de levedura a 12 g/L, cloreto de cálcio a 0,24 g/L e sem adição de sulfato de amônio. A análise estatística dos dados confirmou a significância das variáveis glicerol, extrato de levedura e cloreto de cálcio sobre a atividade larvicida do meio fermentado. Cloreto de cálcio não influenciou significantemente a produção de esporos pela bactéria, e a taxa de esporulação não foi influenciada por cloreto de cálcio e sulfato de amônio nas concentrações estudadas. Para a otimização da produção de endotoxinas pela bactéria, foi realizado um planejamento fatorial 22, variando-se apenas as concentrações de extrato de levedura e de cloreto de cálcio, fixando-se a concentração de glicerol em 10 g/L e excluindo-se o sulfato de amônio do meio de fermentação. O melhor valor de CL50 (0,295 mg/mL) foi obtido no ensaio com 15 g/L de extrato de levedura e 0,4 g/L de cloreto de cálcio. / The use of glycerol derived from biodiesel production as a substrate for the acquisition of biotechnology products is a promising alternative as an adequate disposal mean of this by-product. The bioinsecticide formulated with toxins from Bacillus thuringiensis has been used to control vectors insects of diseases, such as dengue, which affect millions of people around the world. For this bioinsecticide be competitive with chemical insecticides is necessary a lower cost of its production, which can be achieved by the use of alternative carbon sources in order to reduce the fermentation medium cost. In this work, it was used glycerol from beef tallow biodiesel production as a component of the fermentation medium for the production of bioinsecticide by Bacillus thuringiensis var. israelensis. Different treatments of the residue containing glycerol, based on acidification, sedimentation and heating, to remove impurities, were evaluated. The adjustment of pH to 7 by addition of phosphoric acid, followed by decantation, then heating for removal of methanol, and a new decantation, was the treatment selected, since it provided the highest toxic activity of the fermented broth against Aedes aegypti larvae. The fermentation medium was formulated by determining the concentration of glycerol, yeast extract, ammonium sulfate and calcium chloride that provided the greatest larvicidal activity of the fermented broth according to 24 factorial design. The toxicity was measured by the LC50 (concentration of the spore-crystal complex required to kill 50% of the larvae). The best value of LC50 was obtained using glycerol at 10 g/L, yeast extract at 12 g/L, calcium chloride at 0.24 g/L and without addition of ammonium sulfate. Statistical analysis confirmed the significance of the variables glycerol, yeast extract and calcium chloride on the larvicidal activity of fermented broth. Calcium chloride did not influence significantly the production of spores by the bacteria and the sporulation ratio was not affected by calcium chloride and ammonium sulfate at the studied concentrations. For the endotoxins production optimization, a 22 factorial design was carried out, varying only the concentrations of yeast extract and calcium chloride, maintaining the concentration of glycerol at 10 g/L and excluding ammonium sulfate of the fermentation medium. The best value of LC50 (0,295 mg/mL) was obtained in the assay with 15 g/L of yeast extract and 0.4 g/L of calcium chloride.

Made available in DSpace on 2016-02-26T14:53:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarlaCristinaDutra.pdf: 1092589 bytes, checksum: 04438f8333358adca1827a37834f4d61 (MD5) Previous issue date: 2009-03-30 / Genetic engineering has created genetically modified (GM) varieties of many crops that express the toxin from the bacterium Cry Bacillus thuringiensis Berliner (Bt). The Cry toxin has insecticidal properties, is synthesized during growth of the plant, and can be expressed in any part of it. To evaluate the impact of this technology on the environment, this study aimed to find the effect of GM cotton resistant to insects on the fauna of Formicidae and Coleoptera. The field sample was a commercial area located in the municipality of Maracajú, Mato Grosso do Sul, Brazil. There were two treatments: Bt cotton and non-Bt cotton, and 20 samples were taken in each treatment during the reproductive period of cotton in the 2007/2008 crop season. The samplings were done by interception pitfall traps. It was used the paired t test for each day of collection to compare the occurrence of species in both treatments. Seeking to obtain gradients of community structure of Formicidae and Coleoptera based on species composition, it was used the technique of ordering by hybrid multidimensional scaling (HMDS). The studied Bt cotton area negatively affected the fauna of Formicidae, because of the species richness in Bt cotton was lower when compared to non-Bt cotton, and the species of this family occurred in non-Bt crops were different from those presented in Bt. The fauna of Coleoptera was also affected by Bt crop, as the species that make up the community assessed in Bt crops are different from those that make the non-Bt crop. The fact that negative results were observed regarding the impact on entomofauna in an area with little time under cultivation of Bt cotton, strengthens the possibility of further changes in the long term / A engenharia genética tem criado variedades geneticamente modificadas (GM) de muitos cultivos que expressam a toxina Cry da bactéria Bacillus thuringiensis Berliner (Bt). Essa toxina tem propriedades inseticidas e é sintetizada durante o crescimento da planta, podendo ser expressa em qualquer parte da mesma. Visando avaliar os impactos dessa tecnologia no ambiente, neste trabalho avaliamos o efeito do algodão GM resistente a insetos sobre a fauna de Formicidae e Coleoptera de solo. O experimento foi conduzido em uma área comercial situada no município de Maracajú, Mato Grosso do Sul, Brasil. Sendo avaliados dois tratamentos: algodão Bt e algodão não-Bt. Foram realizadas 20 amostras em cada tratamento, durante o período reprodutivo do algodoeiro na safra de 2007/2008. A amostragem foi realizada através de armadilhas de interceptação do tipo pitfall modificada. Para a análise da riqueza de espécies utilizou-se o teste t pareado por dia de coleta para comparar a ocorrência das espécies nos dois tratamentos. Buscando obter gradientes da estrutura da comunidade de Formicidae e Coleoptera baseada na composição de espécies, foi utilizada a técnica de ordenação por escalonamento multidimensional híbrido (HMDS). O algodão Bt da área estudada afetou negativamente a fauna de Formicidae, pois a riqueza de espécies no algodão Bt foi inferior quando comparada ao algodão não-Bt. As espécies de formigas ocorrentes no cultivo não-Bt foram diferentes daquelas presentes no Bt. A fauna de Coleoptera também foi afetada pelo cultivo Bt, já que as espécies que compõe a comunidade avaliada no cultivo Bt foram diferentes daquelas que compõe a cultura não-Bt. O fato de terem sido observados resultados negativos a respeito do impacto sobre a entomofauna em uma área com pouco tempo de cultivo de algodão Bt, indica a possibilidade de efeitos ainda maiores em longo prazo